DE2535799C3

DE2535799C3 - N'- [1 -(p-Chlorbenzoyl)-5-methoxy-2-methyl-3indolyl-acetoxy- alkyl] -N-(N-benzoyl- N'JS'-di-npropyl-DL-isoglutaminyloxy- alkyD-piperazine und diese enthaltene Entzündungen und Gelenksaffektionen hemmende Präparate

Info

Publication number: DE2535799C3
Application number: DE2535799A
Authority: DE
Inventors: Francesco Taccona Makovec; Luigi San Fruttuoso Di Monza Rovati; Paolo Monza Senin
Original assignee: Rotta Research Laboratorium SpA
Current assignee: Rottapharm SpA
Priority date: 1974-08-12
Filing date: 1975-08-11
Publication date: 1979-09-13
Also published as: HK38879A; ZA755107B; JPS5416511B2; IT1043937B; AU8371775A; JPS5143773A; DE2535799B2; FR2281755A1; NL180663C; JPS5416512B2; CH618697A5; DE2535799A1; FR2281755B1; ATA623775A; JPS5143774A; US3985878A; CA1053663A; AT345295B; BE830880A; NL7509091A

Description

CH,-CH,

OCH.,

CO

! I

Cl

in der n\ und m für 2 oder 3 stehen, und Salze dieser Verbindungen mit pharmakologisch annehmbaren Säuren.

2. Verbindungen gemäß Anspruch 1 als Salze mit Oxal-, Zitronen-, Malein-, Fumar- oder Salzsäure.

3. N'-2-[l-(p-Chlorbenzoyl)-5-methoxy-2-methyl-3-indolyIacetoxy]-äthyl-N-3-(N-benzoyl-N',N'-di-n- propyl-DL-isoglutaminyloxy)-propyl-piperazin.

4. Verbindung nach Anspruch 3 als Salz mit Maleinsäure.

5. Entzündungen und Gelenksaffektionen hemmendes Präparat, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff eine Verbindung oder ein Salz nach den Ansprüchen 1,2,3 oder 4 enthält.

Die Erfindung betrifft Ester von N'-Hydroxyalkyl-N-(N-benzoyl-N'.N'-di-n-propyl-DL-isoglutaminyloxyalkyl-piperazinen, in denen die Alkylgruppen jeweils geradkettige mit 2 oder 3 Kohlenstoffatomen sind, mit Indometacin, also der l-(p-Chlorbenzoyl)-5-methoxy-2-methyl-3-indolyl-essigsäure mit einer therapeutisch verwertbaren, Entzündungen und Gelenksaffektionen hemmenden Wirkung, deren Salze und pharmakologisch annehmbaren Säuren, sowie pharmazeutische Präparate auf Basis dieser Verbindungen. Bevorzugte Salze sind diejenigen mit Oxal-, Zitronen-, Malein-, Furnar- oder Salzsäure.

Das bekannte Indometacin und andere bekannte entzündungshemmende Verbindungen sind bei akuten Vorgängen wirksam, für die eine Schwellung und starke Schmerzen kennzeichnend sind. Diese entzündungshemmenden Verbindungen besitzen häufig auch eine analgetische Wirkung.

Es treten jedoch Schwierigkeiten in den Fällen auf, bei denen neben einer Rötung und Schwellung eine fortschreitende Läsion des Knorpels und Knochens (Gelenksarthrose) vor sich geht. Alle bisher bekannten entzündungshemmenden Verbindungen haben nämlich eine hemmende Wirkung sowohl auf Knorpeln als auch auf die Knochenmatrix, so daß die kontinuierliche Verwendung dieser Heilmittel bei chronischen Krankheitsfällen die Gelenksarthrose verstärkt und zu einer Osteoporose führt. Hinzu kommt, daß die bekannten entzündungshemmenden Verbindungen die Magenschleimhaut angreifen und sogar Magengeschwüre und einen Magendurchbruch verursachen können; ihre Verabreichung an Patienten, die an Gastroduodenitis und Geschwüren des Magens oder des Duodenums leiden, ist daher nicht möglich oder zumindest sehr gefährlich.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen nun die nachstehenden Eigenschaften:

1) starke Wirkung bei entzündlichen Vorgängen;

2) zufriedenstellende analgetische Wirkung;

3) starke Wirkung bei chronischen Osteoarthritiden und

4) keine irritierenden und UIcera verursachenden Wirkungen auf die Magenschleimhaut.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können nach einem der beiden nachstehenden Verfahren hergestellt werden:

3	-(CH₂I_n-N	\	O	CH₃	799 »a«	4
	COCH,-CH,-CH, I/	CH,—CH,
COONa +CI- I	CH₂-CH,- (I)	N-(CH,)„₃- CH₂-CH₂ HD	OH
CH, I ' CH₂
CH- NH- CO ι
25 35 Verfuhren
/

CH,--CH,

•COO IClU)₁, —Ν Ν— (CH,)„ -OH

CH- CH₁-CH,

CW NIi -CO ^

C^-OCH, CII, CH,

Ch₂ CH, C^-Il₃

(III) + CIi₃O-T '.;

CH, COOII Ml)

CO (IVi

Cl Verfahren »h»

/ j. ,---C^-H₁-C^-OOH + HO (CH,),,

L j H

CH, CH,

N N (CH,)_Π| C

CU, CH,

CH, CH₂

H.,CO ^₁; .r- CH₂-C^-OO-(CH₂I_n, N N (CH₂I_n, Cl

CH, --C^-Il,

N CH,

ι
Il

(Vl) ι Cl CO ''■' Cl

ι Vl Ii

(Vl)

CH₁-Cl

HjCO

CH₂-COO-(CH₂I₁₁₁-N

(VIII)

/
CH₁-CH,

N-(CH₂I_n-CI

COONa +(VIII

CH, ! CH,	-NH	—■	co	-CH,
C! I	CH,-	C	H_:-
CO				CH,
N	CH,	C	"H,

Gemäß dem Verfahren »a« wird N-Benzoyl-N',N -din-propyl-DL-isogliitamin in einem Lösungsmittel, ί Β. Sulfolan.Toluol, X;.loloder Dimethylsulfoxid. mit einem N-iHydroxyalkylJi-N'-fchloralkylJ-piperazin in Gegenwart von Natriumljikarbonat bei einer Temperatur von 70 bis 150⁰C, vorzugsweise bei 11O⁰C, 2 bis 12 Stunden umgesetzt. Die .o erhaltenen Zwischenprodukte. N'-Hydroxyalkyl-N-(N-benzoyl-N',N'-di-n-propyl-DL-isoglutaminyl)-oxyalkyl-piperazine, werden mit l(p-Chlorbenzoyl)-5-müthoxy-2-methyl-3-indoIessigsäure in Gegenwart eines Kondensationsmittels, z. B. N'.N'Dicyclohexylcarbodiimid oder N.N'-Carbonyl-diimidazol, in einem Lösungsmittel, z. B. Tetrahydrofuran, Dioxan, Chloroform Äthyl; cetat oder Aceton, 8 bis 48 Stunden lang bei einer Temperatur von 10 bis 30⁰C umgesetzt, wobei sich die Verbindungen der allgemeinen Formel I bilden.

Gemäß dem Vefahren »b« wird ein S-Methoxy^- methyl-3-indolyles;;igsäure mit N-(Hydroxyalkyl)N'-(chloralkyl)-pipera;'in in Gegenwart eines Kondensationsmittels. z.B. W.N'-Dicyclohexylcarbodiimid oder N.N'-Carbonyl-diiniidazol, in einem Lösungsmittel. ;·:. B. Tetrahydrofuran, Dioxan, Chloroform. Äthylacntat oder Aceton, 8 bis 48 Stunden bei einer Temperatur von 10 bis 30⁰C umgeselzi. Das erhaltene N'-Chloralkyl-N-(5-methoxy-2-methyl- :l-indolacetoxy)-alkylpiperazin wird mit einer Suspension von Natriummetall, Natriumjodid oder Natriumphenat in einem Lösungsmittel, z. B. Benzol oder Toluol, 2 bis 8 Stunden bei 10 bis 40⁰C umgesetzt. Hieraul wird, ohne das organometallische Zwischenprodukt ?:u isolieren, die Reaktionsmasse bei 5 bis 10'C mit einer stöchiometrischen Menge von p-Chlorben/oylchlorid vermischt, und die Reaktion läßt man bei einer Ti.-nperatur von 10 bis 40"C 4 bb, 12 Stunden vor sich gehen. Man erhält ein N'-ChloraUyl-N-[l-(p-chlorb;n;: <)vl)-5-meth()xy-2-mcthyl-3-indc)hiL'cto\y]-alkylpipera/iri. das mit N-Ben/.t;yl-N',N'-di-n-|ropyi-D.I.-isoglutami:. in einem Lösungsmittel. /.. It. Toluol. XvIoI. Siilf'.ilan oder Dimcthvlsulfoxid. in Gegenwart einer stöchiometrischen Menge Natriumbicarbonat bei 60 bis 12O⁰C 2 bis 12 Stunden, umgesetzt wird, wobei sich die Verbindungen der allgemeinen Formel I bilden.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind in an sich bekannter Weise, wie aus nachfolgenden Beispielen ersichtlich ist, in Salze überführbar.

Die bevorzugte Verbindung, die nachstehend mit »CR 604« bezeichnet wird, ist das N'-2-[l-(p Chlorbenzoyl)-5-methoxy-2-methyl-3-indolacetoxy]-äthyl-N-3- (N-benzoyl-N'.N'-di-n-propyl-DL-isoglutaminyl)-oxypropylpiperazin, vorzugsweise in Form des Dimaleats.

Es folgen Beispiele für die Herstellung erfindungsgemäßer Verbindungen.

Beispiel 1

N'-(2-Hydroxyäthyl)-N-3-(N-benzoyl-N',N'-di-n-pro-

pyl-DL-isoglutaminyl)-oxy-propylpiperazin

Liner Lösung von 33,4 g (0,1 Mol) N-Benzoyl-N',N'-di-n-propyl-D,L-isoglutamin in 200 ml Dimethylsulfoxid werden unter Rühren 5,4 g (0,1 Mol) Natriummcthylat i"-.d dann 10.6 g (0,1 Mol) N^-Chlorpropyl-N'^-hydroxyäthylpipetazin zugesetzt. Hierauf wird die Mischung auf 105°C gebracht und bei dieser Temperatur 12 Stunden unter Rühren stehen gelassen. Das Lösungsmittel wird im Vakuum abgedampft und der Rückstand mit Äthylacetat "ersetzt und mit einer verdünnten Salzsäurelösung extrLiiiert; die wässerige saure Phase wird mit einer 4n Natriumhydroxydlösung auf einen pH-Wert von IO gebracht und wieder zweimal mit Äthylacetat extrahiert. Die kombinierten orgLnischen Phasen werden mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, wonach abfiltriert vnd nochmals getrocknet wird. Der so erhaltene ölige Rückstand wird in 150 ml Methanol gelöst; durch Zusatz von einer methanolischen Oxalsäurelösung wird das Dioxalat ausgefällt.

Ausbeute 81%. F= 181 - 184°C.

7
Ii c i s ρ i c I 2

N'-2-f I (p-ChlorbenzoylJ^-methoxy^-methyl- 3-indol ucctox y]-iithyl- N- 3-(N benzoyl-N'.N-di-npropyi

l)l.-isi>glutaminyl)-oxypropylpiperazin (CR 604)

Liner titrierten Lösung von 400 ml Äthylacetat, die 0,1 Mol N (;>-Hydroxyäthyl)-n- 3-(N-bcn/.oyl-N'.N'-di-npropyl-DI.-i<.oglutaminyl) -oxypropylpipcrazin enthüll — letzteres wurde erhalten, indem 71,9 g (0,105 Mol) des entsprechenden Dioxalats in 500 ml Wasser gelöst wurden, wonach diese Lösung auf einen pH-Wert von ¹I bis IO milIeIs Natriumbicarbonal gebracht und die so gebildete öüge Emulsion zweimal nacheinander mit insgesamt 400 ml Äthylacetat extrahiert wurde — werden der Reihe nach 35.8 g (0,1 Mol) I -(p-Chlorben-/OyI)-¹JnKMl oxy-2-niethyl-3-indolcssigsaure und 20.6 g (0,1 Mol) N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid zugesetzt. Dieses Gemisch wird 24 Stunden bei Raumtemperatur stehen gelassen; nach Abfiltrieren des ausgefällten N'-N'-Dicyelohexylharnstoff wird die organische Phase mit verdünnter Salzsäure, einer Lösung von Natriumbicarbonat und einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen und danach mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und wieder getrocknet. Der ölige Rückstaue wird in 600 ml Methanol gelöst; das Dioxalat wird durch Zusatz einer Lösung von Oxalsäure in Methanol ausgefällt.

Ausbeute 85%, I·"= 190-192 C (kristallisiert aus Methanol) Mikrokristalline Substanz, die mattweiß ist. und in Äthaiol. Methanol und Aceton ein wenig löslich und in Wasserunlöslich ist.

Mikroanalyse(CR W)4 - Dioxalat):

Herechnei 58.60'Vh. H 6.10%. N 6,83%;
gefunden C 59,01%, H 6.19%. N 6.79¹¹Zn.

In analoger Weise kann das Dimaleal hergestellt werden.

Ausbeute 8 3"Ί>. L= 146-148'C (kirstallisiert aus Äthanol).

Mikrokristalline Substanz, die mattgclb ist und in

mehr löslich ist. in Wasser hingegen unlöslich ist.

Nach der gleichen Verfahrensweise jedoch mit geringere¹.' Ausbeute kann das Dihydrochiorid erhalten werden.

Ausbeute 70%. F = 107 - III C (unter Zersetzung).

Die Verbindung ist von amorphem Aussehen, leicht gelb gefärbt, in Methanol und Äthanol löslich, in Aceton ziemlich gut und in Wasser (Löslichkeit ungefähr 0.5% bei 25"C) kaum löslich.

Beispiel 3

N'-3-(Chlorpropyl)-;"4-2-(5-rnethoxv-2-methyl-3-indol· ace to\ ν)-ä ι in ipiperaz ι η

Einer Lös-jng von 21.9 g (0.1 Mol) 5-Methoxy-2-methyl-3-indolvlessigsäure in 300ml Äthylacetat werden der Reihe nach 20.6 g (0.1 Mol) N-(2-HydroxyäthyI)-N 3-(chIorpropyl)piperazin und 20.6 g(0.1 Mol) N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid: das Gemisch wird 24 Stunden unter Rühren bei Raumtemperatur stehen gelassen. Nach Abfiltrieren des ausgefällten N.N'-Dicyclohexylharnstoffs wrd die organische Phase mit einer Lösung von Natriunbicarbonat und einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen und anschließend wird mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, abfiltriert und wieder getrocknet. Der ölige Rückstand wird als solcher bei der nächsten VerfahrensMiife eingeset/t. Ausbeute

Beispiel 4

N- 3 (Chlorpropyl)-N-2 [ I (ρ chlnrben/oyl) -5 -meihoxy 2-methyl- J-indolaceioxyl-äthylpipera/in

Liner Lösung von 40.8 g (0.1 Mol) des nach Beispiel i erhaltenen Öls in 400 ml Toluol werden unter Diirchleitung von Stickstoff 1 2 g Natriumiodid (0.1 Mol) in einer Suspension von 20% Vaselin zugesetzt; das Gemisch wird 6 Stunden bei Raumtemperatur unter starkem Rühren reagieren gelassen und dann auf 0 C abgekühlt, wonach 17.5 g (0.1 Mol) p-Chlorbenzoylchlorid hinzugefügt werden. Die Mischung wird dann auf Raumtemperatur gebracht und zumindest 6 Stunden weiter reagieren gelassen.

Die organische Phase wird in einer wässerigen Lösung von Natriumbicarbonat und dann mit Wasser gewaschen; hierauf wird mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, wonach abfiltriert und in Vakuum eingeengt wird. Der so erhaltene ölige Rückstand wird in 200 ml Methanol gelöst; durch Zusatz einer methanolischen Oxalsäurelöstini: wird das Dioxalat ausgefällt Ausbeute 68¹Vn. 1-207 210 C (unter Zersetzung).

Beispiel 5

N'-2-[-l-(p-Chlorbenzoyl)-5-methoxy-2-methyl-3-indolacetoxy]-äthyl-N-3-(N-benzo\TN'.N -di-n-propyl-D,l.-isoglutaminyl)-oxvpropyl-piperazm

(CR 604! vgl. Beispiel 2).

Einer Suspension von 33.4 g (0.1 Mol) N-Renzoyi-N'.N'-di-n-propyl-D.L-isogluiamin in 300 ml wasserfreiem Toluol werden unter Rühren 5.4 g (0.1 Mol) Natriummethylat zugesetzt; das Gemisch wird dann auf 60 C gebracht und unter Rühren 3 Stunden stehen gelassen, wonach 400 ml einer Toluollösung hinzugefügt werden, die 0.1 Mol N' 3-(Chlorpropyl)-N-2-[ 1 -(p-chlor-

njncpji/in enthielt. 'Letztere Verbindung wurde erhalten, indem 76.2 g [0.105 Mol] des entsprechenden Dioxalats in 600 ml Wasser gelöst wurden, wonach diese Lösung durch Zusatz von Natriumcarbonat auf einen pH-Wert von 9 bis 10 gebracht, und schließlich die so gebildete ölige Emulsion zweimal mit insgesamt 400 ml Toluol extrahiert wurde.)

Das Gemisch wird dann auf 100C gebracht und 12 Stunden reagieren gelassen, wonach die organische Phase mit einer wässerigen Lösung von Salzsäure. Natriumbicarbonat und schließlich Natriumchlorid gewaschen wird und mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet wird. Hierauf wird abfiltriert und im Vakuum eingeengt.

Der ölige Rückstand wird in 600 ml Methanoi gelöst, und das Maleat durch Zusatz von einer Lösung von Maleinsäure in Methanol ausgefällt. Ausbeute 80%.

Beispiel 6

N'-(3-Hydroxypropyl)-N-3-(N-benzoyl-N".N'-di-npropyl-DL-isoglutaminyl)-oxypropylpiperazin

Es wird wie in Beispiel 1 verfahren, wobei jedoch 22,0 g (0.1 Mol) N-3-Chlorpropyl-N"-3-hydroxypropylpiperazin anstelle von N-3-Chlorpropyl-Nⁱ-hydroxyäthylpiperazin eingesetzt werden. Ausbeute 74%. F= 173- !76-"C (Dioxalat).

15 c ι s ρ i e I 7

N- J-[ 1 ■(p-Chlcrben/oylJ-'j-methoxy^-mcthyl- 3-indolacetoxy]-propyl-N- !-(n-ben/oyl-N'.N'-di-n-propyl-

Dl.-isoglutaminyl)-oxypr<ipylpipera/.in (CR 613).

I·'·, wird wie in Ucispicl 2 verfahren, wobei jedoch 31.8,: (0.1 Mol) N'-(3-Hydn>xypropyl)-N-3-(N-ben/oyl-N',N'-di-n-propyl-DI.-isoglutaminyl)-oxypropylpipera-/in anstelle von N'-2-(tlydroxyathyl)-N 3-(N-benzoyl-N'.N'-di-n-propyl-DI.-isoglutaminylJ-oxypropylpipcra-/in eingesetzt werden.

Ausbeute 80%, !"=138-141 C (Dimalcat); mikrokristalline mattgclbe Verbindung, die etwas löslieh in Äthanol und Aceton, etwas mehr löslich in Methanol und in Wasser unlöslich ist.

Mikroanalyse (CR 61 3-dimaleat):

Berechnet: C 60,56%, H 6,28%, N 6,42%;
gefunden: C 60.31%. 116.41%, N 6,28%.

Beispiel 8

N'-(2-Hydroxyäthyl)-N-2-(N-benzoyl-N',N'-di-npropyl-DL-isoglutaminylJ-oxyäthylpiperazin

[is wird wie in Beispiel I verfahren, wobei jedoch 19,3 g (0,1 Mol) N-2-Chloräthyl-N'-2-hydroxyäthylpiperazin anstelle von N-(2-Hydroxyäthyl)-N'-3-(chlorpropy'Vpiperazin eingesetzt werden. Ausbeute 78%, F=187-l90°C(Dioxalat).

lungen Ratten von mittlerem Gewicht (200 g) wurden mittels subkutaner Injektion in die rechte Pfote eine wäßrige Suspension von Carrageen (1%) eine Stunde nach der oralen Verabreichung der /n untersuchenden Heilmittel verabreicht.

2 Stunden nach der Verabreichung des Carrageens wurden beide Pfoten abgetrennt, gewogen und die Plote, in welche die Injektion vorgenommen war und die in der Zwischenzeit angeschwollen war, mit der anderen Pfote verglichen.

Der Gewichtsunterschied hängt von dem Grad der entzündungshemmenden Wirkung ab. Die Auswertung erfolgt durch Berechnung des EDw in mg/kg bei oraler Verabreichung, d. h. der Dosis des Heilmittels, welches die Entzündung der behandelten Pfote, verglichen mit der nicht behandelten Pfote um 50% herabsetzen kann.

In Tabelle 1 sind die ED_W-Werte von erfindungsgemaßen Verbindungen aufgezeigt, und mit einigen der besser bekannten entzündungshemmenden Mitteln verglichen. Die Auswertung ist sowohl in mg/kg Tiergewicht als auch in Mikromol/kg Tiergewicht angegeben. Die zweite Auswertung, die verläßlicher ist. weil sie auf je ein Molekül bezogen ist, zeigt, daß unter allen untersuchten Verbindungen die interessanteste Verbindung die mit CR 604 bezeichnete Verbindung ist.

Tabelle I

Akute entzündungshemmende Wirkung (Domenjo/-Tcst)

Beispiel 9

N'-2-[l-(p-Chlorbenzoyl)-5-methoxy-2-methyl-3-

indolacetoxy]-äthyl-N-2-(N-benzoyl-N',N'-di-n-

propyl-D,L-isoglutaminyl)-oxyäthyl-

piperazin(CR 626)

Es wird wie in Beispiel 2 verfahren, wobei jedoch 49,2 g (0,1 Mol) (berechnet auf Grund der Analyse) in -Δ-\ί iyui UAy d uiy l)-Tn-2-(Tn-UCI IiUyI-TN^TN-Ul-H-μι u-

pyl- D.L-isoglutaminyij-oxyäihylpiperazin anstelle von N'-2-Hydroxyäthyl-N-3-(N-benzoyl-N',N'-di-n-propyl-DL-isoglutaminyl)-oxypropylpiperazin eingesetzt werden. Ausbeute 77%, F= 163-164⁰C (Dimalcat), mikrokristalline mattgelbe Verbindung, die in Äthanol und Aceton wenig löslich, in Methanol etwas mehr löslich und in Wasser unlöslich ist.

Mikroanalyse(CR 626-Dimaleat).

Berechnet C 59,90%. H 6,07%, N 6,59%;
gefunden C 59.17%, H 5.91%. N 6.47%.

Die pharmakologischen Eigenschaften der erfindiingsgemäßen Verbindungen sollen nunmehr beschrieben werden, nämlich die Wirksamkeit bei akuten Entzündungsprozessen, die anaigetische und antiarthritische Wirkung und keine Ulcera verursachende oder die Magenschleimhaut irritierende Wirkung.

Es wurden Versuche an Tieren und Menschen ausgeführt.

Tierversuche
la: Akute entzündungshemmende Wirkung

Diese Wirkung wurde mittels des »Pfotentests« nach Domenjoz in folgender Weise ausgeführt:

Verbindungen	Mole	/m/kg	l-I^i
	kular	per os(t )	mg/kg
	gewicht	11,5	per os
CR 604 (Dimalcat)	1076,63	13,6	12,3
CR 613 (Dimalcat)	1090,70	15,0	14,9
CR 626 (Dimalcat)	1062,60	463,7	16,0
Phenylbutazon	308,37	1254,5	143
Acetylsalicylsiiure	180.15	4JV.4	266
M ephcnam insaure	14 I ,JU	436.3	IUt)
Ibuproien	206.27	17^3	90
Indometacin	357,81		6,2
( + ): Mikromol/kg

Ib: Durch Kügelchen (Pellets) bewirkter Granulomtest

Ein weiterer wichtiger Test für die Beurteilung einer entzündungshemmenden Wirkung ist der mit Baumwollkügelchen. Dieser Test besteht darin, ein steriles Baumwollkügelchen unter die Rückenhaut der Ratte einzubringen.

Das Kügelchen wird eine Woche in situ belassen, wobei die Tiere täglich mit verschiedenen Dosen des /u untersuchenden Heilmittels behandelt werden. Die Beurteilung erfolgt durch Abwiegen der zur gegebenen Zeit entnommenen und getrockneten Kügelchen bei Versuchs- und Kontrolltieren. Der EDw-Wert ist die Heilmittel-Dosis, welche die durch Infiltration des umgebenden entzündeten Gewebes bedingte Gewichtserhöhung des Kügelchens, um 50% herabsetzt. In Tabelle 2 sind die mit CR 604 und !ndometarin erhaltenen Resultate angegeben. Auch bei diesem Versuch zeigt die Verbindung CR 604 eine starke entzündungshemmende Wirkung.

ti

Tabelle 2

Akute entzündungshemmende Wirkung (Granulomlesl

Verbindungen	Mole	1.1)	■<„	I Dm,
	kular	■λ in	i/kg	nit/kg
	gewicht	per	os ( ι )	per os
CR 604 (l)imalcat)	1076.63	25.	6	27.6
Indometaein	357 Sl	23	S	8.41

( t): Mikroniol/kg.

2. Analgelisehe Wirkung

Die analgetische Wirkung eines entzündungshem menden Mittels kann in herkömmlicher Weise nach dein Phenylchinon-Verfahren überprüft werden, das darau'' beruht, daß Ratten auf eine intraperitoneale Verabreichung einer irritierenden Substanz, wie Phenylchinon, unter Abgabe von Lauten reagieren.

Aus der Anzahl dieser Reaktionen beurteilt man die Schmerzempfindlichkeit; die Auswertung wird als EDm in mg/kg Tiergewicht angegeben, und entspricht der Dosis, welche die Reaktion auf das irritierende· Stimulans um 50% herabsetzt.

Die in Tabelle 3 zusammengefaßten Resultate, und unter diesen vor allem diejenigen, die sich auf Mikromole beziehen, zeigen, insbesondere in Vergleich zu den entsprechenden Indometacin-Werten, die besonders interessante analgetische Wirkung von CR 604.

Tabelle 3

Analgetische Wirkung bei Ratten. Phenylchinon-Test

Verbindungen

Mole- Kl);,, kular- ;/m/kg

Hl),,, mg/kg

gewicht per os ( ♦) per os

CR 604 (Dimaleat)

indomciiiL'in

Phenylbutazon

1076,63 5.3 357.81 5,6 308.37 324.0

5.72

KX)

J. Wirkung bei chronischen Osteoarthritiden

Die Versuche zur Bestimmung der Wirksamkeit der Verbindungen bei Osteoarthrosis sind in zwei Teile geteilt: in vitro und in vivo.

Diese Versuche bestehen hauptsächlich in der Überprüfung der Möglichkeiten mit diesen Heilmitteln die Wiederherstellung von osteocartilagenem Gewebe bei Gelenken zu beeinflussen, da diese Krankheiten im allgemeinen durch die Zerstörung der Gewebe gekennzeichnet sind, die von der eiweißhaltigen Grundsubstanz ausgeht und sich durch der. anorganischen Teil des Knochens ausbreitet.

a: Versuche in vitro

Diese Versuche werden in einer Kultrr in vitro, d. h. außerhalb des Organismus, von dem Gewebe desgleichen embrionalen Ursprungs wie das Gewebe des ostearticularen Ursprungs vorgenommen. un^f! die Wirkungen der verschiedenen Heilmittel bestimmt. Die Meßeinhei'.-..τι dieser Wirkungen basieren auf der

Bildung von Gluko ?aminglicanen (Mucopolysaccharide gemessen durch Trübungsbcstimmung).

Line Serie von Versuchen dieser Art, die bereits veröffentlicht sind. vgl. Karzel et al — tixcerpta Medica int. Congr. series no. 188(1968. S. 102) zeigt, daß alle bisher bekannten entzündungshemmenden Mittel eine Herabsetzung der Gewebsaktivität verursachen und dies erklärt deren schädigende Wirkung, die nach längerer Verabreichung solcher Heilmittel beobachtet wird.

Erfindungsgemäße Verbindungen werden in dieser Hinsicht mit bekannten entzündungshemmenden Mitteln verglichen.

Die Resultate sind in Tabelle 4 aufgezeigt.

Tabelle 4

Wirkung der Verbindungen auf die Bildung um Mucopolysaccharide!! aus einer Hbroblast-Kulmr in vitro*)

Verbindungen	Dosen.	MiK'opuh vicclurul-
	■ig/ml der	l'rodukle .im
	kuluir-	Kl. l.ig der Inku
	lliissigkeit	bation. Werte in .
		bezogen au! die
		Kontrollen
Indometaein	1	7S
Phenylbutazon	10	5 S
Mephenaminsiiiire	10	5 S
CR 604 (Dimaleat)	6	108

*l Mucopolysaccharide gemessen durch I'rühiingshestim· niung nach K .i r / e I et .ü. I-\cerpu M eil tea Med. Int. Congr. Series no. ISS (1%S). 101

Die in Tabelle 4 angeführten Resultate zeigen, daß die

dieser in vitro-Kultur des Kollagengewebes das Wachsen und die Bildung von Mucopolysaechariden nicht beeinträchtigt.

b: Versuche in vivo

Osteolathyrismus bei Kaninchen. Der Osteolathyrismus besteht darin, daß man bei jungen Kaninchen eine Dystrophie des Knochengelenksystems herbeiführt, indem man jeden Tag introperitoneal 100 mg/kg Körpergewicht Aminoacetonitril verabreicht. Bei dieser Behandlung werden nach ungefähr 30 Tagen folgende Veränderungen in dem Kaninchen beobachtet:

Gewichtsverlust (in Vergleich zu dem physiologisch behandelten Kontrollen). Ptosis der Ohrmuschel. Fellverlust. Deformation der Vorder- und Hinterbeine. Verschlechterung des Allgemeinbefindens.

Alle diese Vorgänge treten auf, weil das Aminoacetonitril mit Bezug auf das kollagene Bindegewebe ein Gift ist, das die biochemische Zusammensetzung der Gelenkknorpel und der Knochen verändert.

Eine Bewertung der therapeutischen Wirkung kann e .weder biochemisch erfolgen, nämlich indem die Menge an Aminozucker in diesen Geweben bestimmt wird, oder dadurch, daß nur die allgemeinen Symtome in Betrach gezogen werden, die der Aminozuckervermin-

dcrung proportional sind. so bewertet wird, daß diesem eine Zahl von 0 bis 4

In Tabelle 5 sind aufgrund letzterer Beiineiliirig zugeteilt wird, und 4 den Maxiinalschadcn und 0 keinen erhaltene F'.rgebnis'i«? aufgezeigt, wobei jedes Symplom Schaden anzeigt.

Tabelle 5

30 bis 35 Tage alte Kaninchen behandelt mit Aniinoacelonitril; Heilmittel intraperitoneal verabreicht

\ erbindunnen

Heli;mcl-

I'tnsr, tier I elherliM Mliiemein- Uelorma- Doforma- dcvv.-Ohrbefinden tion der tion der verlust

miisihel Hinter- Vorder-

l'liysiologische Kontrollen

Aminoacetonitnl
100 mg/kg/1 ag
CR 6(M 'Dimaleati
15 mg/i .-./Tag +
Aminoaeetonitrol
KK) mg/kg/Tag
Indometadin
5 mg/kg/ lag
Aminoacetonitril
KK) mg/kg/Tag

25

0
1.2

1.4

heine

0
2.3

0.6

1.6

beine

0
2.x

3,2

ι)
3.x

3 5

In Tabelle 5 sind die am 25. Tilge ermittelten Resullate aufgezeigt, wobei die Gruppen verglichen werden, die nur mit einer physiologischen Lösung, nur mit Aminoacetonitril. mit Aminoacetonitril und CR 604 sowie mit Aminoacetonitril und Indometacin in vorgeschriebenen Dosierungen behandelt wurden.

Jede Gruppe bestand aus 8 Tieren.

Die erhaltenen Resultate zeigen, daß Aminoacetonitnl sehr starke symptomatische Verschlechterungen hervorruft. Indomciacin allein kann diese Vorgänge nicht verhindern, wogegen CR 604 diesen Vorgängen entgegenwirkt, wobei die toxischen Symptome erheb-

4: Irritierende und geschwürbildende Wirkung
auf die Magenschleimhaut

Die experimentelle Beurteilung dieser Wirksamkeit wurde bei Ratten mittels nachstehender Verfahrensweise ausgeführt:

Die Verbindung wird Ratten, die 12 Stunden fasten gelassen wurden, oral verabreicht. 4 Stunden nachher werden die Tiere getötet.

Als positiv, d. h. als magenschädigend, werden die Fälle bewertet, bei denen zumindest eine Blutungss:elle an der Magenwand auftritt.

Unter dem Wert ED50 soil die Dosis des Heilmittels verstanden werden, die bei 50% der behandelten Tiere die Bildung solrher RI1.1i1jp.gen verhindert

In Tabelle 6 werden die Verbindungen CR 604 und indometacin miteinander verglichen, da letztere Verbindung unter allen Verbindungen dieser Art der entzündungshemmenden Wirkung von CR 604 am nächsten kommt.

Die erhaltenen Resultate zeigen, daß die eine Magenschädigung bewirkende Dosis von Indometacin, selbst wenn diese in Mikromol ausgedrückt wird, sehr niedrig ist. wogegen diejenige von CR 604 so hoch ist. daß sie von keiner praktischen Bedeutung ist, und ungefähr gleich ist der tödlichen Dosis.

κι Tabelle 6

Magenschädigende Wirkung bei Ratten: KlX₁, gemäß obiger Dellnition

ι-, Verbindungen Art der Mole- HUn,, \\1-,,,

Verab- kular- ;im/kg mg/kg reiuhunu ueuichl I ^)

Indometacin	at	Oi al	357.	Xl	33.5	12	h
CR 604-dimale		Oral	1076.	63	330.1	355	.1
CR M 1-1ImViIp	at	flrul	H)QfI	70	977 Λ	IfI?
CR 626-dimale	Oral	1062.	60	341 .'	363

Verträglichkeit bei Tieren

Für diese Verbindungen und insbesondere für die Verbindung CR 604 wurden bei subakuten und chroni sehen Fällen Toleranzversuche bei einer bis zu 6 Monaten währenden Verabreichung an die Tiere gemacht. Die erhaltenen Resultate zeigen, daß das Produkt selbst in Anteilen, die größer sind als diejenigen, die für Menschen empfohlen werden, ohne Auftreten irgendwelcher anatomischer Läsionen oder funktionelier Störungen toleriert wird.

Therapeutische Anwendung bei Menschen

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können Menschen oral in Form von Tabletten oder Kapseln verabreicht werden, welche die Verbindung in einem Anteil von 50 bis 150 mg enthalten.

So können z. B. CR 604-Dimaleat-Kapseln zur oralen Verabreichung erhalten werden, indem 25 mg der Verbindung mit einem pharmazeutisch annehmbaren Trägerstoff, z. B. Stärke. Laktose. Talk oder Magnesi-

umstearat gründlich gemischt werden.

Als tägliche Minimaldosis werden 3 Kapseln pro Tag empfohlen, welche Dosierung jedoch erforderlichenfalls verdoppelt werdet/ kann.

Es können auch Suppositorien hergestellt werden, die 100 bis 120 mg CR 604-Dimaleat in einem pharmazeutisch annehmbaren Trägerstoff dispergiert enthalten.

Pro Tag können je nach Bedarf I bis 3 dieser Suppositorien verabreicht werden.

Selbstverständlich können auch andere, auf oralem oder rektalem Weg verabreichbare Präparate hergestellt werden, welche pharmakologische annehmbare Trägerstoffe enthalten. Die therapeutischen Wirkungen dieser Produkte und insbesondere die Wirkung der Verbindung CR 604 können bei Menschen auch aufgrund von bei wissenschaftlichen Untersuchungen bewährten Verfahrensweisen. z. B. Doppelblindversuchen, demonstriert werden.

So kann z. B. die Wirkung des in 75 mg verabreichten Kapseln von CR 604 (6 täglich) mit 25 mg Indometacin-Kapsein (6 täglich), d. h. in annähernd äquimolekr laren Dosen, bei einer Gruppe von 60 behandelten Personen (30 mit CR 604 und 30 mit Indometacin) folgendes festgestellt werden (vgl. Tabelle 7):

a. Indometacin bewirkt bei 46.6% der behandelten Personen (nach einwöchiger Behandlung) und bei 53,3% d- r behandelten Personen (nach dreiwöchiger Behand-

lc 7

lung) Magenbeschwerden, so daß in einigen Fällen die Unterbrechung der Behandlung ratsam erschien, wogegen CR 604 keine merklichen Beschwerden bei Verabreichung therapeutisch gleich wirksamer Dosen verursachte.

b. Die Uropepsinogen-Bestimmung zeigt, daß sich der Uropepsin Gehalt im Harn bei mit CRMW behandelten Personen verringert, mit Indometacin behandelten Personen hingegen erhöht Hierdurch werden die vorstehenden Ausführungen in objektiver Weise bestätigt, da das Uropepsinogen den Anteil des im Magen sezernierten und durch den Harn ausgeschiedenen Pepsins anzeigt. Die Magensekretion von Pepsin wird durch Mittel erhöht, welche die Magenschleimhaut irritieren und angreifen.

c. Bei den mit CR 604 behandelten Personen tritt eine Herabsetzung der Kalziumausscheidung im Harn auf, wogegen bei mit Indometacin behandelten Personen eine Tendenz zu einer Erhöhung dieses Kalziumgehaltes zu verzeichnen ist.

Die Ausscheidung von Kalzium steht in Beziehung zu der Zerstörung der Fasern der Protein-Knochenmatrix, die auch zum Verlust von in ihr eingelagertem Kalzium führt. Die Verabreichung von bekannten entzündungshemmenden Mitteln führt zur Zerstörung dieser Fasern unter Kalziumverlust. Hingegen verursacht die Verbindung CR 604 diest Zerstörung nicht.

\ erbindungen	Kpigastralgie. ausgedrückt in	Uropepsinogen (ausgedrückt	pro Tag)	Kal/ium	im Harn	nach
	' - Patienten mit Beschwerden	in iiqu. mg Tyrosin	nach	mg/1000	m! Harn	drei
	Vsir der nach nach	Vor der nach	drei	Vor der	nach	Wochen
	Behänd- einer drei	Behänd- einer	Wochen	Behand	einer
	lung Woche Wochen	lung Woche	lung	Woche

CR 604-dimaleat 0 3.3 0 216,3 209,8 153.8 132 107 98

Indometacin 0 46.6 53.3 164.7 208.1 345.7 126 137 148

Es ist somit erwiesen, daß die Verbindung CR 604 auch bei Verabreichung an Menschen die gleichen charakteristischen Eigenschaften zeigt, die bei den in vitro Versuchen und bei den Tierversuchen festgestellt werden konnten. Dank dieser Eigenschaften wird ein wesentlicher Fortschritt von großer therapeutischer Bedeutung erzielt.

Claims

Patentansprüche:

I. N'-[l-(p-Chlorbcnzo>l)-5-methox>-2-methyl-3-indoIyI-accloxy-alkyl]-N-(N-benzo>l-N',N'-cli-n-pmp>l-DL-isogliiiaminyloxy-ulkyll-pipcrazinc der allgemeinen Formel I

CH,-CH,

COO-(CH₂I_n-N

Ν—(CH₂I_n,-Ο —CO —CH₂-