DE2508176A1 - Verfahren zur herstellung von lyophilisierte antigene tragenden objekttraegern und dgl. fuer biologische, insbesondere medizinische, vor allem diagnostische zwecke - Google Patents
Verfahren zur herstellung von lyophilisierte antigene tragenden objekttraegern und dgl. fuer biologische, insbesondere medizinische, vor allem diagnostische zweckeInfo
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Description
- Verfahren zur Herstellung von Lyophilisierte Antigene tragenden Objektträgern und dgl. für biologische, insbesondere medizinische, vor allem diagnostische Zwecke In der medizinischen Diagnostik werden zur Bestimmung von Antikörpern gegen Krankheitserreger im Blut vielfach Objektträger benutzt, die einseitig kunststoffbeschichtet, insbesondere polyfluoräthylen-beschichtet sind, wobei in diese Schicht eine oder mehrere im allgemeinen kreisrunde Durchbrechungen angeordnet sind. In diese Durchbrechungen wird eine Suspension des gewünschten Antigens in zweckmäßiger Suspensionsflüssigkeit, im allgemeinen physiologische NyCl in geeigneter Gebrauchsdichte (=0w85*ige NaCl) und in erforderlicher Menge eingetropft.
- Die Suspension auf dem Objektträger wird dann luftgetrocknet und anschließend fixiert, je nach Art des Antigens mit einem entsprechenden Fixiermittel. Die Fixierung dauert im allgemeinen etwa 10 Minuten. Das Fixiermittel, z.B. Aceton, löst Fettsubstanzen aus den Antigenen, die dann die Antigene auf dem Objektträger festkleben. Die so vorbereiteten Objektträger werden bei -20 tiefgefroren und gelagert. Bei Bedarf wird ein solcher Objektträger entnommen, wird dann das Blutserum des Patienten aufgetropft und geprüft, ob im Blut des Patienten Antikörper gegen die betreffenden Antigene, die mit diesen Verbindung eingehen, vorhanden sind. Werden solche Antikörper im Blut des Patienten festgestellt, kann daraus geschlossen werden, daß der Patient die entsprechende Krankheit hat oder hatte.
- Die Antigene und die sonstigen Mittel, die zur Herstellung der gebrauchsfertigen Objektträger erforderlich sind, werden vom Diagnostiker von der pharmazeutischen Industrie bezogen. Die zu benutzenden Objektträger werden 10 Minuten in Aceton oder Äther entfettet.
- Vor dem Auftropfen muß den Antigenen destilliertes Wasser zugefügt werden. Die Rehydratation der Antigene dauert im allgemeinen 5 bis 10 Minuten. Wird diese Zeit nicht abgewartet, besteht die Gefahr, daß die Antigene im Wasser nicht völlig resuspendieren. Die Flüssigkeit mit den rehydratisierten Antigenen wird dann homogenisiert und in eine Suspension überführt. Durch Vorversuche muß dann der Diagnostiker feststellen, ob die Suspension die von ihm gewünschte Gebrauchsdichte an Antigen aufweist.
- Die Herstellung der Objektträger mit den Antigenen ist also sehr zeitraubend. Das Entfetten der benutzten Objektträger mit Aceton oder Äther ist gefährlich0 Die Lagerung muß bei Temperaturen von etwa -200C erfolgen.
- Dessen ungeacht, sind die Objektträger mit den Antigenen maximal 6 Monate lagerfähig.
- Aufgabe vorliegender Erfindung ist es, ein Verfahren zu schaffen, welches es ermöglicht, die Objektträger mit den lyophilisierten Antigene industriell zu fertigen und bei Normaltemperatur über einen Zeitraum von 6 Monaten und mehr zu lagern.
- Diese Aufgabe wird im wesentlichen dadurch gelöst, daß eine Suspension der Antigene in zweckmäßiger Suspensionsflüssigkeit und in geeigneter Gebrauchsdichte hergestellt und in erforderlicher Menge auf Objektträger aufgetragen wird, die Suspension auf den Objektträgern dann luftgetrocknet und fixiert wird, die Objektträger mit der luftgetrockneten Suspension anschließend für eine ausreichende Zeitdauer einer Temperatur von etwa -180C oder tiefer unter Vakuum bis zur vollständigen Gefriertrocknung ausgesetzt werden und die Objektträger mit der gefriergetrockneten Suspension nachfolgend in eine Hülle aus gasdichter Folie eingelegt werden, die Hülle nachfolgend evakuiert und anschließend verwohweißt wird.
- Als Zweckmäßige SuspenBionsflüssigkeit wird eine solche verwandt, die keinen schädigenden Einfluß auf das Jeweilige Antigen ausübt und in der dieses Antigen suspendiert werden kann. Geeignet ist insbesondere eine Kochsalzlösung, aber auch eine zOBo l«/oige Zuckerlölösung, eine z.B. 5 bis 10C/óige Glycerinlösung und dgl.
- Die geeignete Gebrauchsdichte bestimmt derzeit jeder Diagnostiker für sich selbst. Bei industrieller Fertigung wird aus den bekannten Gebrauchsdichten eine mittlere gewählt werden müssen, bei der eine ausreicehnde, aber nicht zu große Menge Antigene bei der mikroskopischen Betrachtung im Blickfeld des Diagnostikers ist. Eine solche Gebrauchsdichte kann von jedem Durchschnittsfachmann ohne Schwierigkeiten bestimmt werden0 Die Objektträger mit der gefriergetrockneten Suspension werden dem Vakuum entnommen und sofort in die Hülle aus geeichter Folie eingelegt, aus der damm mittels entsprechender, an sich bekannter Gerätschaften die Luft abgesaugt wird, wobei die Folien sich allseitig dicht auf den Objektträger legen, Sofort nach dem Absaugen der Luft wird dann die Hülle allseitig mittels an sich bekannter Schweißgeräte verschweiBt, Dabei ist es möglich, in einer Folienhülle mehrere Objektträger in Abstand nebeneinander einzulegen und die einzelnen Objektträger durch Schweißnähte voneinander zu trennen.
- Als Folie kann nur eine solche verwandt werden, an der die Antigene nicht kleben. Eine solche Folie ist z.B.
- eine Metall-, insbesondere Aluminiumfolie, die beidseitig mit Kunststoff, insbesondere Polyvinylchlorid beschichtet ist. Die einseitige Beschichtung der Objektträger erfolgt zweckmäßig mit Poly-fluoräthylen. In diese Kunststoffschicht werden zweckmäßig bis zu zehn Durchbrechungen in zwei Reihen nebeneinander angeordnet.
- Die Lufttrocknung im Vakuum soll etwa 2 Stunden betragen Das Vakuum soll dabei möglichst niedrig sein und vorzugsweise unter lmm Quecksilbersäule betragen. Auch in den verschweißten Hüllen soll ein so niedriges Vakuum vorhanden sein.
- Das erfindungsgemäße Verfahren ermöglicht die jndustrielle Fertigung von lyophilisierte Antigene tragenden Objektträgern, die auch bei Normaltemperatur über Monate lagerfähig sind. Die industrielle Fertigung stellt sicher, daß auf allen Objektträgern, die von Diagnosti kern benutzt werden, immer die gleiche Menge an Antigene vorhanden ist. Diagnose und vergleichende Untersuchungen werden dadurch erheblich vereinfacht und vereinheitlicltund werden vor allem nicht mehr durch Zufälligkeiten im Labor und durch Unaufmerksamkeiten des Personals beeinflußt. Darüberhinaus wird die Laborarbeit erheblich vereinfacht. Die präparierten Objektträger können vom Diagnostiker aus der Folie entnommen und sofort verwandt werden0 Die teuren Antigene können maximal ausgenutzt werden. Ein Abfall durch Verderb, Verschütten usw. scheidet praktisch aus. Die fertig präparierten Objektträger können über 6 Monate und mehr bei Normaltemperatur gelagert werden, während nach bisheriger Methode präparierte Objektträger bisher nur im Kühlschrank und im allgemeinen nicht länger als 14 Tage gelagert werden konnten. Die Möglichkeit der entsprechenden Diagnose wird durch das erfindungsgemäße Verfahren praktisch allen Ärzten eröffnet, während diese Diagnosen bisher nur in wenigen Spezialinstituten möglich waren.
- In den Fig. 1 bis 3 ist ein erfindungsgemä hergestellter, präparierter Objektträger beispielsweise dargestellt, ohne daß die Brfindig auf die Herstellung dieser Ausführungsform beschränkt ist.
- Fig. 1 zeigt einen in einer Kunststoffhülle verpackten Objektträger in perspektivi scher Ansicht, Fig. 2 einen unverpackten ObjektWåger in perspektivischer Ansicht und Fig. 3 einen senkrechten Schnitt durch einen verpackten Objektträger nach Fig. 1.
- Der Objektträger 1 ist mit einer Schicht 2 aus Polyfluoräthylen versehen, in die Durchbrechungen 3 angeordnet sind, in denen sich die Antigene 4 befinden.
- Der Objektträger 1 ist von einer Hülle 5 aus gasdichter Kunststoff-Folie, insbesondere beidseitig polyvinylchlorid-beschichteter Metallfolie umschlossen. Der Innenraum ist evakuiert. Diese Kunststoff-Folie 5 ist allseitig durch eine Schweißnaht 6 verschlossen.
Claims (5)
- Patentansprüche9 Verfahren zur Herstellung von über Monate bei Normaltemperatur lagerfähigen lyophilisierte Antigene tragenden Objektträgern und dgl. für biologische, insbesondere medizinische, vor allem diagnostische Zwecke, dadurch gekennzeichnet, daß eine Suspension der Antigene in zweckmäßiger Suspensionsflüssigkeit und in geeigneter Gebrauchsdichte hergestellt und in erforderlich<rMenge auf Objektträger aufgetragen wird, die Suspension auf den Objektträgern luftgetrocknet und fixiert wird, die Objektträger mit der luftgetrockneten Suspension für eine ausreichende Zeitdauer eine Tempera-0 tur von etwa -18 C oder tiefer unter Vakuum bis zur vollständigen Gefriertrocknung ausgesetzt werden und die Objektträger mit der gefriergetrockneten Suspension dann in eine Hülle aus gasdichter Folie eingelegt, die Hülle nachfolgend evakuiert und anschließend verschweißt wird.
- 2.) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Objektträger mit der luft getrockneten Suspension für etwa 2 Stunden bei etwa -180C oder teer verbleiben.
- 3.) Verfahren nach Anspruch 1 und/oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Vakuum beim Gefriertrocknen und in der Hülle unter lmm Quecksilbersäule beträgt.
- 4.) Verfahren nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Objektträger mit der gefriergetrockneten Suspension in beidseitig kunststoffbeschichtete, insbesondere polyvinylchlorid-beschichteten Metallfolien, insbesondere Aluminiumfolien eingeschweißt werden.
- 5.) Verfahren nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß die Objektträger einseitig kunststoffbeschichtet, insbesondere polyfluoräthylen-beschichtet sind und in die Beschichtung eine oder mehrere Durchbrechungen angeordnet sind, in die die Suspension der Antigene eingetropft wird.
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