DE2435160B2 - Fortimicin A und dessen pharmakologisch verträgliche Säureadditionssalze sowie Arzneimittel mit einem Gehalt dieser Verbindungen - Google Patents

Fortimicin A und dessen pharmakologisch verträgliche Säureadditionssalze sowie Arzneimittel mit einem Gehalt dieser Verbindungen

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DE2435160B2
DE2435160B2 DE2435160A DE2435160A DE2435160B2 DE 2435160 B2 DE2435160 B2 DE 2435160B2 DE 2435160 A DE2435160 A DE 2435160A DE 2435160 A DE2435160 A DE 2435160A DE 2435160 B2 DE2435160 B2 DE 2435160B2
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    • Y10S435/863—Mycobacterium

Description

O <^ ^)-OCH3
NH2 HO N-CH3
CO
CH2NH2
und das folgende Kenndaten aufweist:
Molekulargewicht 405;
spezifischer Drehwert [a] J5= +26° (c=0,2 n, H2O); UV-Absorptionsspektrum (in wäßriger Lösung) gemäß F ig. 1;
IR-Absorptionsspektrum (bestimmt als Kaliumbromid-Preßling) gemäß F i g. 2, sowie dessen phannakologisch verträgliche Säureadditionssalze.
2. Arzneimittel, enthaltend Fortimicin A oder ein pharmakologisch verträgliches Säureadditionssalz gemäß Anspruch 1 neben üblichen inerten Trägerstoffen.
Tabelle I
Testkeim
MHK-Wert y/ml
20
25
30
Die Erfindung betrifft den in den Patentansprüchen 1 J5 und 2 gekennzeichneten Gegenstand.
Es wurde gefunden, daß das Antibioticum Frotimicin A antibakterielle Aktivität gegenüber den verschiedensten gram-positiven und gram-negativen Bakterien sowie auch gegenüber Staphylococcus aureus und Escherichia coli besitzt, die gegenüber den verschiedensten bekannten Antibiotika resistent sind. Fortimicin A zeichnet sich durch starke antibakterielle Aktivität gegenüber Escherichia coli und Staphylococcus aureus aus, die normalerweise resistent sind gegenüber v> Kanamycin, Gentamycin und Tobramycin. Ferner hat Fortimicin A eine befriedigende antibakterielle Aktivität gegenüber Bakterien der Gattung Proteus. Es eignet sich daher zur Therapie von verschiedenen Infektionskrankheiten, die durch die vorgenannten Bakterien hervorgerufen werden. Außerdem ist es auch als Infektionsmittel geeignet.
In Tabelle I ist die minimale Hemmkonzentratior. (MHK) von Fortimicin A, bestimmt nach der Agar-Verdünnungsmethode (pH 8,0; vgl. Nihon Kagaku Ryoho Gakkai Hyajunho-Antibiotika-Grundlagen, Herausg. Nanzando, Japan [1975], S. 88 - 91) gegenüber verschiedenen pathogenen Keimen zusammengefaßt.
Streptococcus faecalis ATCC 10541 10
Bacillus subtilis Nr. 10707 0,02
b5
Testkeim MHK-Wert
y/ml
Bacillus cereus ATCC 9634 0,6
Bacillus cereus var. mycoides 0,6
ATCC 9463
Staphylococcus aureus ATCC 6538 P 0,04
Staphylococcus aureus KY 8942 10
(resistent gegenüber Kanamycin
Paromomycin, Streptomycin,
Gentamicin und Nebramicin)
Staphylococcus aureus KY8950 1,3
(resistent gegenüber Streptomycin,
Tetracyclin, Penicillin und Sulfon-
amiden)
Staphylococcus aureus KY8953 1,3
(resistent gegenüber Streptomycin,
Kanamycin, Paromomycin, Tetracyclin,
Neomycin, Kanamycin B und
Erythromycin)
Staphylococcus aureus KY89S6 0,32
(resistent gegenüber Streptomycin,
Paromomycin, Tetracyclin,
Erythromycin und Oleandomycin)
Staphylococcus aureus KY 8957 0,32
(resistent gegenüber Chloramphenicol,
Streptomycin, Kanamycin B,
Tetracyclin und Paromomycin)
Klebsieila pneumoniae ATCC10031 0,08
Escherichia coli ATCC 26 0,16
Escherichia coli KY83O2 0,26
(resistent gegenüber Chloramphenicol, Streptomycin, Kanamycin, Paromomycin, Tetracyclin und Spectinomycin)
Escherichia coli KY8310 0,13
(resistent gegenüber Chloramphenicol, Streptomycin, Kanamycin, Gentamicin, Kanamycine, Paromomycin, Tetracyclin und Spectinomycin)
Escherichia coli KY8314 0,26
(resistent gegenüber Streptomycin) Escherichia coli KY8315 0,13
(resistent gegenüber Streptomycin, Kanamycin, Paromomycin und Neomycin)
Escherichia coli KY8327 0,13
(resistent gegenüber Kanamycin, Gentamicin, Sisomicin und Tobramycin)
Escherichia coli KY8331 0,3
(resistent gegenüber Kanamycin, Ribostamycin, Neomycin, Paromomycin und Lividomycin)
Escherichia coli KY8332 0,3
(resistent gegenüber Kanamycin und Tobramycin)
Pseudomonas aeruginosa BMH Nr. 1 5
I 24 35 3 Fortsetzung 160 4 Booth KY4288 der folgenden Tabelle II MHK-Wert A-sulfat Fortimicin
I Hambrook KY4289 y/ml A-hydrochlorid
M Testkeira MHK-Wert ATCC 9290 0,8 >10
I y/ml 5 Testkeim 1,6 0,04
I Pseudomonas aeruginosa KY8510 5 Proteus mirabilis No 39 KY4290 Salmonella typhosa ATCC 9992 0,8 0,6
I (resistent gegenüber Kanamycin, Proteus morganii Jenkins KY4298 0,41 1,2
I Kanamycin B, Tobramycin, ι ο Proteus rettgeri Ferner ist in 0,3 0,08
GentamyclcC], und Ribostamycin) Proteus rettgeri obengenannten >10
\ Proteus vularis ATCC 6897 0,16 Shigella sonnei 0,08 1,3
2,6
Proteus vulgaris KY4296 0,41 die nach der 0,64
(resistent gegenüber Nalidixinsäure) )5 Methode ermittelte minimale Hemm- 0,64
i Proteus vulgaris Abbott JJ, KY4295 0,8 konzentration des Sulfats und des Hydrochlorids von
Fortimicin A gegenüber den verschiedenen Mikroorga 		0,08
Proteus mirabilis Finland 9 KY4293 0,8 nismen angegeben. 0,16
f Proteus mirabUis No. 825 KY4292 0,41 0,26
Tabelle II 0,13
Testkeim MHK-Wert, y/ml 0,26
Fortimicin 0,26
0,13
Streptococcus faecalis ATCC10541 >10 0,3
Bacillus subtilis Nr. 10707 0,04 0,3
Bacillus cereus ATCC 9634 0,6 10
Bacillus cereus var. mycoides ATCC 9463 1,2 5
Staphylococcus aureus ATCC 6538 P 0,08 0,16
Staphylococcus aureus KY8942 >10 0,8
Staphylococcus aureus KY8950 1,3 0,8
Staphylococcus aureus KY8953 1,3 0,8
Staphylococcus aureus KY8956 0,64 0,8
Staphylococcus aureus KY8957 0,32 0,8
Kiebsiella pneumoniae ATCC10031 0,08 1,6
Escherichia coli ATCC26 0,16 0,8
Escherichia coli KY8302 0,52 0,41
Escherichia coli KY8310 0,13 0,3
Escherichia coli KY8314 0,26 0,16
Escherichia coli KY8315 0,26
Escherichia coli KY8327 0,13
Escherichia coli KY8331 0,3
Escherichia coli KY8332 0,3
Pseudomonas aeruginosa BMH Nr. 1 10
Pseudomonas aeruginosa KY8510 5
Proteus vulgaris ATCC 6897 0,16
Proteus vulgaris KY4296 0,8
Proteus vulgaris Abbott JJ, KY4295 0,8
Proteus mirabilis Finland 9, KY4293 0,8
Proteus mirabilis Nr. 825, KY4292 0,8
Proteus mirabilis Nr. 39, KY4290 0,8
Proteus morgana Jenkins KY4298 1,6
Proteus rettgeri Booth KY4288 0,8
Proteus rettgeri Hambrock KY4289 0,41
Shigella sonnei ATCC 9290 0,3
Salmonella typhosa ATCC 9992 0,16
Weiterhin wurden in vivo-Untersuchungen an Mäusen durchgeführt, die intraperitoneal mit Escherichia coli Juhl KY 4286 infiziert wurden. Den infizierten Mäusen wurde das Fortimicin A in unterschiedlicher Dosis subkutan injiziert. Die EDm für Fortimicin A beträgt 6 mg/kg.
Geeignete Salze des Fortimicins A sind solche mit entsprechenden anorganischen Säuren, wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Jodwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Sulfaminsäure und Phosphorsäure, oder organisehen Säuren, wie Maleinsäure, Essigsäure, Citronensäure, Oxalsäure, Bernsteinsäure, Benzoesäure, Weinsäure, Fumarsäure, Apfelsäure, Mandelsäure oder Ascorbinsäure.
Das Fortimicin A der im Anspruch 1 angegebenen Formel und dessen pharmakologisch verträgliche Säureadditionssalze werden dadurch hergestellt, daß man den Stamm Micromonospora olivoasterospora ATCC 21819 oder Micromonospora olivoasterospora ATCC 31009 oder Micromonospora olivoasterospora ATCC 31010 in üblicher Weise in einem Nährmedium, das assimilierbare Kohlenstoff- und Stickstoffquellen enthält unter aeroben Bedingungen bei einer Temperatur von 25° bis 400C züchtet und anschließend das gebildete Antibioticum nach üblichen Methoden aus der Gärflüssigkeit abtrennt und dann gegebenenfalls das erhaltene Fortimicin A in üblicher Weise in ein pharmakologisch verträgliches Säureadditionssalz überführt.
Der betreffende Mikroorganismus ist aus einer Bodenprobe isoliert worden, die einem Reisfeld bei einer Vorstandt von Hiroshima, Japan, entnommen wurde.
Der bei der American Type Culture Collection, Rockville, Maryland USA unter der ATCC nr. 21819 uneingeschränkt hinterlegte Mikroorganismus, der auch als Stamm MK-70 bezeichnet wurde, und bei dem Fermentation Research Institute, Tokyo, Japan, unter der Nr. FERM P-Nr. 1560 hinterlegt wurde, besitzt folgende biologischen Eigenschaften:
I. Morphologie
Der Stamm ATCC 21819 ist gram-positiv. Auf üblichem Agar-Nährboden bildet er kein echtes Luftmycel, wie dies bei Streptomyces beobachtet wird. Bei guter Sporenbildung beobachtet man auf der Oberfläche eines Agarnährbodens eine olivgrüne, wachsähnliche, glänzende Schicht von Sporen. Beim Züchten des Stamms in einem flüssigen Nährmedium zeigt die Kulturflüssigkeit während der Anfangsstufen der Züchtung eine hellbraune Farbe, in den Endstufen der Züchtung eine dunkel-olivgrüne Farbe. In der Kulturflüssigkeit kann eine große Zahl von Sporen beobachtet werden. Die mikroskopische Untersuchung der Zellen des Stammes ATCC 21819, der in einem flüssigen Nährmedium gezüchtet wurde, hat ergeben, daß das Mycel einen Durchmesser von etwa 0,5 Mikron aufweist, gut entwickelt und nicht septiert ist. Eine einzige Spore wird am Ende jedes Sporophoren (etwa 0,3 bis 1,0 Mikron lang) gebildet, die vom Substratmycel abzweigt. Die Sporen werden über das gesamte, verhältnismäßig lange Substratmycel gebildet. Die reifen Sporen sind kugelförmig und haben einen Durchmesser von etwa 1,0 Mikron. Unter dem Elektronenmikroskop erscheinen die Spiren wie ein Stern, da aus ihnen eine große Zahl von Vorsprüngen herausragen, deren Enden abgerundet sind.
II. Wuchsformen
In der folgenden Tabelle III sind die Wuchsformen des Mikroorganismus ATCC 21819 auf verschiedenen Standard-Nährböden zusammengefaßt Die Angaben über die Farbe werden nach der Einteilung in Color Harmony Manual (Container Corporation of America) gegeben. Der Tyrosin-Agar ist von Gordon&Smith in J. Bact., Bd. 69 [1955} S. 147 beschrieben.
Tabelle IM Wachstum und Koloniegestalt Farbe des Substratmycels Bildung von
löslichem Pigment
Nährboden mäßig; flach staubig olivgrün (1 Ig) keines
Czapek's Agar mäßig, flach, wachsartig olivgrün (1 pl) keines
Glucose-Asparagin-Agar gut; erhaben, gefurcht olivgrün (1 pl) keines
Nähragar mäßig; flach, wachsartig hell olivgrün
gelbbraun (1 Ii)		 keines
Eialbumin-Agar gut; flach schwach olivgrün (1 po) keines
Stärke-Agar gut; erhaben, gefurcht dunkel olivgrün (1 pn) dunkel olivgrün
(1-1/2 pn)
Malzextrakt-Hefeextrakt-
Agar		 gut; faltig, wachsartig bernstein-karamelfarben
(31c)
dunkelbraun (2 pn)		 staubig, olivgrün
(lpg)
Hafermehl-Agar mäßig, flach, wachsartig hell weizenfarben (2 ea) keines
Dextrose (1%) - NZ-Amin
(3%)-Agar		 gut; erhaben, gefurcht dunkel olivgrün (lpn) keines
Bennet's Agar mäßig; erhaben, gefurcht,
wachsartig		 olivfarben (1 ni) keines
Emerson's Agar
Fortsetzung
Nährboden
Wachstum und Koloniegestalt Farbe des Substratmycels
Bildung von
löslichem Pigment
Glucose-Hefeextrakt-Agar
Pepton-Eisen-Agar
Tyrosin-Agar
gut; erhaben, gefurcht, wachsartig
mäßig; flach, wachsartig mäßig; flach, wachsartig
dunkel olivgrün (1 pn) keines
dunkel olivgrün (1 nl) keines
olivgrün (1 ni) keines
III. Physiologische Eigenschaften
15
Die physiologischen Eigenschaften des Stammes ATCC 21819 sind in der Tabelle IV zusammengefaßt. In den Versuchen, ausgenommen den Versuchen zur Bestimmung des Temperaturoptimums und der Einwirkung gegenüber Milch und Cellulose, wird der Stamm 2 Wochen bei 27°C gezüchtet. Das Temperaturoptimum wird nach 5tägiger Züchtung bestimmt. Die Einwirkung auf Milch und Cellulose wird nach 1 monatiger Züchung bestimmt.
Tabelle IV
(1) Verwertung von KohlenstofTquellen:
25
JCohl enstoffquell e
Verwertung
D-Arabinose
D-GaI jctose
D-Glucose
Glycerin
D-Lactose
D-Fructose
L-Inosit
D-Mannit
D-käffinose
L-Rhamnose
Sucrose
Stärke
D-Xylose
(2) Verflüssigung von Gelatine
(3) Einwirkung auf Milch
(4) Cellulosezersetzung
(5) Stärkehydrolyse
schwach Peptonisierung schwach positiv positiv
35
40
45
50
(6) pH-Optimum des Wachstums 6,8 bis 7,5
(7) Temperaturoptimum des 30 bis 38 C Wachstums
(8) Nitrat-Reduktion positiv
(9) Tyrosinase-Reaktion negativ
(10) Bildung von melanoiden negativ Pigmenten
60
Der Stamm ATCC 21819 ist ein mesophiler Mikroorganismus, der bei der Züchtung auf einem Agar-Nährboden kein echtes Luftmycel bildet, sondern auf dem Substratmycel eine einzige Spore bildet Die Analyse der Zellwand dieses Stammes hat ergeben, daß sie Mesodiaminopimelinsäure enthält Dementsprechend gehört der Stamm ATCC 21819 zu einem Stamm der Gattung Micromonospora.
Zuverlässige Grundlagen für die systematische Klassifizierung von Arten der Gattung Micromonospora fehlen bislang. Deshalb wurde die Klassifizierung der Mikroorganismen dieser Gattung bis jetzt durch einen Gesamtvergleich der morphologischen und physiologischen Eigenschaften durchgeführt. Entsprechend dieser Klassifizierungsmethode wurde von drei Stämmen berichtet, die zur Gattung Micromonospora gehören, nämlich Micromonospora echinospora subsp. echinospora NRRL-2985 (ATCC 15837), Micromonospora echinospora subsp. pallida NRRL-2996 (ATCC 15838) und Micromonospora echinospora subsp. ferruginea N RRL-2995 (ATCC 15836). Diese besitzen runde Vorsprünge auf der Oberfläche der Sporen. Diese drei Stämme von M. echinospora bilden Sporen von dunkelbrauner bis schwarzer Farbe, wenn sie auf einem üblichen Agar-Nährboden gezüchtet werden. Sie zeigen jedoch nicht eine olivgrüne Farbe, wie der Stamm ATCC 21819. Die drei Stämme von M. echinospora können im Gegensatz zum Stamm ATCC 21819 L-Rhamnose verwerten. Ferner können diese drei bekannten Stämme zwei antibiotisch aktive Verbindungen bilden, von denen eine nur gegenüber gram-positiven Bakterien wirkt und einen Rf-Wert von 0,4 bis 0,5 bei der Papierchromatographie mit Wasser gesättigtem n-Butanol als Entwicklungslösungsmittel hat, sowie das Antibiotikum Gentamicin, das einen Rf-Wert von 0,00 besitzt. Der Stamm ATCC 21819 kann dagegen vier antibiotisch aktive Verbindungen bilden, nämlich eine Substanz, die nur gegenüber gram-positiven Bakterien wirksam und einen Rf-Wert von 0,05 bis 0,1 bei der Papierchromatographie mit dem vorgenannten Entwicklungslösungsmittel hat, eine Verbindung, die nur gegenüber gram-positiven Bakterien wirksam ist und einen Rf-Wert von 0,00 hat, sowie die Verbindungen Fortimicin A und B, die sowohl gegenüber gram-positiven als auch gram-negativen Bakterien wirken und einen Rf-Wert von 0,00 haben. Aus dem Vorstehenden ist ersichtlich, daß der Stamm ATCC 21819 sich von den drei bekannten Stämmen von M. echinospora unterscheidet
Der Stamm ATCC 21819 zeigt eine olivgrüne bis dunkel olivgrüne Farbe bei der Züchtung auf einem Nährbonden, der zur Sporenbildung geeignet ist und er bildet ein lösliches, olivgrünes Pigment in anderen Nährmedien. Unter den Stämmen der Gattung Micromonospora gibt es einige Stämme, die olivgrüne Sporen bilden können, nämlich Micromonospora chalcea und Micromonospora fusca. Diese Stämme unterscheiden sich jedoch im Aussehen der Sporenoberfläche und der Farbe der löslichen Pigmente.
• Andere Arten von Micromonospora, nämlich Micromonospora coerulea zeigen gewöhnlich eine grün-blaue Farbe und bilden blaugrüne lösliche Pigmente. Die Pigmente wirken als Säure-Base-lndficatoren und sind
daher verschieden von dem Pigment des Stammes ATCC 21819. Die Sporen von M. coerulea liegen traubenförmig vor und die Sporenoberfläche ist glatt. Somit ist M. coerulea verschieden vom Stamm ATCC 21819.
Wie vorstehend beschrieben, gibt es keine Stämme unter den bis jetzt bekannten Stämmen der Gattung Micromonospora, die dem Stamm ATCC 21819 entsprechen. Deshalb wird dieser Stamm als ein neuer Stamm angesehen, der zur Gattung Micromonospora gehört. Er wurde deshalb als Micromonospora olivoasterospora bezeichnet. Der Name dieser Art leitet sich von der Bildung olivgrüner kugelförmiger Sporen mit Vorsprüngen ab.
Es wurden ferner zwei Variantenstämme von Micromonospora olivoasterospora isoliert, die ebenfalls Fortimicin A bilden können und bei der American Type Culture Collection unter der ATCC Nr. 31009 und ATCC Nr. 31010 uneingeschränkt hinterlegt worden sind. Diese Varianten unterscheiden sich vom Stamm ATCC 21819 dadurch, daß sie D-Galactose, D-Fructose und D-Xylose verwerten können. Bei der Züchtung dieser Varianten auf den verschiedensten Nährböden zeigen sie eine helle Weizenfarbe, da sie nicht die Fähigkeit haben, auf dem Mycel Sporen zu bilden.
Die Herstellung des Fortimicins A erfolgt nach üblichen, zur Züchtung von Actinomyceten angewendeten Verfahren. Für das Nährmedium können die verschiedensten Nährstoffe eingesetzt werden. Geeignete Kohlenstoffquellen sind beispielsweise Glucose, Stärke, Mannose, Fructose, Sucrose und Melassen und deren Gemische. Ferner können z. B. Kohlenwasserstoffe, Alkohole und organische Säuren verwendet werden, je nach der Verwertungsfähigkejt des eingesetzten Mikroorganismus. Anorganische und organische Stickstoffquellen, wie Ammoniumchlorid, Ammoniumsulfat, Harnstoff, Ammoniumnitrat und Natriumnitrat, sowie natürliche Stickstoffquellen, wie Pepton, Fleischextrakt, Hefeextrakt, Trockenhefe, Maisquellwasser, Sojabohnenmehl, Casaminosäure, und lösliche pflanzliche Proteine können entweder allein oder im Gemisch verwendet werden. Ferner können anorganische Salze, wie Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Calciumcarbonat und Phosphate dem Nährmedium zugesetzt werden. Schließlich können organische oder anorganische Verbindungen dem Nährmedium zugesetzt werden, welche das Wachstum des Mikroorganismus und die Bildung von Fortimicin A fördern. Wenn die Bildung von Fortimicin A durch Änderung der Zusammensetzung des Nährmediums verbessert wird, nimmt die Bildung an anderen aktiven Substanzen ab.
Vorzugsweise wird ein flüssiger Nährboden eingesetzt und das Verfahren als Submersverfahren und unter Rühren durchgeführt. Die Züchtung wird bei Temperatur von 25 bis 400C und bei annähernd neutralem pH-Wert durchgeführt Nach etwa 4 bis 15tägiger Züchtung hat sich in der Kulturbrühe eine ausreichende Menge des Antibiotikums gebildet Sobald die Ausbeute an Fortimicin A in der Kulturbrühe ein Maximum erreicht hat, wird die Züchtung abgebrochen, die Zellmasse von der Kulturflüssigkeit abgetrennt und das Antibiotikum aus dem Filtrat isoliert und gereinigt Die Isolierung und Reinigung von Fortimicin A aus dem Filtrat wird nach üblichen Methoden zur Isolierung und Reinigung von mikrowellen Stoffwechselprodukten aus Kulturflüssigkeiten durchgeführt Da Fortimicin A eine Base darstellt und in Wasser löslich, jedoch in üblichen organischen Lösungsmitteln schlecht löslich ist, kann das Antibiotikum nach üblichen Methoden zur Reinigung sogenannter wasserlöslicher basischer Antibiotika gereinigt werden.
Die Reinigung von Fortimicin A kann insbesondere durch Kombination von Adsorption und Desorption an Kationenharzaustauschern, Säulenchromatographie an Cellulose, Adsorption und Desorption an dem Dextrangel Sephadex LH-20 und Chromatographie an Kieselgel durchgeführt werden.
ίο Beispielsweise wird das zellfreie Kulturfiltrat zunächst auf einen pH-Wert von 7,5 eingestellt und hierauf an einem Kationenharzaustauscher in der Ammoniumform adsorbiert. Nach dem Waschen mit Wasser wird mit 1 η wäßriger Ammoniaklösung eluiert. Die gegenüber z. B. Bacillus subtilis Nr. 10707 antibiotisch aktive Fraktion wird unter vermindertem Druck eingedampft und hierauf eine Säule eines Anionenharzaustauschers in der OH--Form gegeben. Die adsorbierten Substanzen werden mit Wasser eluiert und die eluierten antibiotisch aktiven Fraktionen vereinigt und unter vermindertem Druck eingedampft. Man erhält ein pulverförmiges Rohprodukt, das Fortimicin A und noch andere antibiotisch aktive Komponenten enthält.
Das Rohprodukt wird in Wasser gelöst, die wäßrige Lösung mit 2 η-Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 5,0 eingestellt und auf eine mit Aktivkohle gefüllte Säule gegeben. Die antibiotisch aktiven Substanzen werden an Aktivkohle adsorbiert. Danach wird die Säule zur Abtrennung von Verunreinigungen mit Wasser gewasehen und hierauf mit 0,2 η-Schwefelsäure eluiert. Die eluierten antibiotisch aktiven Fraktionen werden gesammelt und auf eine Säule eines Anionenharzaustauschers in der OH--Form zur Neutralisation gegeben. Das Eluat wird gefriergetrocknet. Man erhält dann ein pulverförmiges Rohprodukt, das Fortimicin A als freie Base enthält.
Zur Isolierung des Fortimicins A wird das Rohprodukt z. B. an Kieselgel Chromatographien. Als Entwicklungslösungsmittel wird die untere Schicht eines Gemisches aus Chloroform, Isopropanol und wäßriger Ammoniaklösung (2:1:1) verwendet Zu diesem Zweck wird das pulverförmige Rohprodukt im Entwicklungslösungsmittel gelöst und auf eine mit Kieselgel gefüllte Säule gegeben. Sodann wird mit dem gleichen Lösungsmittel entwickelt. Die erste antibiotisch aktive Fraktion enthält Fortimicin B. Spuren an anderen Komponenten werden in anschließenden Fraktionen eluiert Fortimicin A wird in Fraktionen eluiert die breiter sind als die Fortimicin B oder Spuren an anderen
so Komponenten enthaltenden Fraktionen. Die das Fortimicin A enthaltenden Fraktionen werden gesammelt und unter vermindertem Druck eingedampft Nach dem Gefriertrocknen des Konzentrats wird ein weißes Pulver erhalten, das die Base des Antibiotikums enthält Das erhaltene Fortimicin A ist von verhältnismäßig hoher Reinheit, es enthält jodoch bisweilen noch Verunreinigungen. In diesem Fall wird es an einer mit Cellulose gefüllten Säule unter Verwendung eines Gemisches aus n-ButanoI, Pyridin, Essigsäure und Wasser (6 :4 :2 :4) als Entwicklungslösungsmittel chromatographiert Die erhaltenen antibiotisch aktiven Fraktionen werden gesammelt und unter vermindertem Druck eingedampft, wobei ein reines Fortimicin A-Präparat erhalten wird.
Sofern-die Verunreinigung eine Substanz darstellt, die einen positiven Ninhydrin-Test liefert, kann diese Substanz durch Chromatographie an einer mit Carboxymethylcellulose gefüllten Säule abgetrennt werden. In
1]
diesem Fall wird eine Lösung des Rohproduktpulvers von Fortimicin A auf eine mit Carboxymethylcellulose in der Ammoniumform gefüllte Säule gegeben. Die antibiotisch aktiven Substanzen werden an der Carboxymethylcellulose adsorbiert. Nach gründlichem Waschen der Säule mit Wasser zur Abtrennung der meisten Pigmente und anorganischen Salze wird mit 0,2 n-Ammoniumbicarbonatlösung eluiert. Die erhaltenen gereinigten Fraktionen von Fortimicin A werden gesammelt und gefriergetrocknet.
Die das Fortimicin A enthaltenden Fraktionen werden durch aufsteigende Papierchromatographie mit Filterpapier Whatman Nr. 1 bestimmt. Die Entwicklung wird bei Raumtemperatur während 10 bis 15 Stunden unter Verwendung der unteren Schicht eines Gemisches aus Chloroform, Methanol und 17prozentiger wäßriger Ammoniaklösung (2:1:1) durchgeführt. Der R(-Wert von Fortimicin A auf dem Papierchromatogramm beträgt etwa 0,37.
Das erhaltene Fortimicin A stellt eine weiß gefärbte Substanz mit einem Molekulargewicht von 405 (berechnet auf Grund des Massenspektrogramms) und einem Schmelzpunkt von oberhalb 200° C (Zers.) dar.
Gewichtsanalyse in %
Ber.: C 50,4, H 8,71, N 17,3, O 23,7%,
gef.: C 50,2, H 8,67, N 17,5, 0 23,6%.
In Fig. 1 ist das UV-Absorptionsspektrum von Fortimicin A in wäßriger Lösung wiedergegeben. Das Spektrum zeigt keine charakteristischen Maxima im Spektralbereich von 220 bis 360 ιτιμ und lediglich eine Endabsorption.
In Fig.2 ist das 1R-Absorptionsspektrum von Fortimicin A dargestellt. Dieses zeigt Absorptionsmaxima bei folgenden Wellenzahlen (cm-1): 1030,1100,1340, 1390,1480,1570,1625,2900 und 3400.
Das Fortimicin A hat folgenden spezifischen Drehwert [α]» = + 26° (C= OZ H2O).
Fortimicin A ist in Wasser gut löslich, in Methanol löslich, in Äthanol mäßig löslich und in organischen Lösungsmitteln, wie Chloroform, Benzol, Äthylacetat, Butylacetat, Diäthyläther, Butanol, Petroläther und η-Hexan unlöslich.
Fortimicin A ergibt eine positive Ninhydrin-Reaktion und Kaliumpermanganat-Reaktion, sowie eine negative Elson-Morgan- und Biuret-Reaktion.
Die Rf-Werte von Fortimicin A bei der Papierchromatographie und Dünnschichtchromatographie mit den verschiedensten Entwicklungslösungsmitteln sind in den folgenden Tabellen V, VI und VlI zusammengefaßt. Diese Werte wurden mit den Rf-Werten verschiedener ähnlicher Antibiotika verglichen, die in gleicher Weise entwickelt wurden.
Tabelle V
RrWerte von Fortimicin A im aufsteigenden
Papierchromatogramm bei 28°C
Entwicklungslösungsmittel
Rr-Wert Entwicklungsdauer
Std.
20gewichtsprozentige 0,96 3
Ammoniumchloridlösung
Wassergesättigtes n-Butanol 0,00 15
Entwicklungslösungsmittel
Rp-Wert Entwicklungsdauer
SId.
ίο
n-Butanol-Essigsäure-Wasser 0,06 15 (3:1:1)
Wassergesättigtes Äthylacetat 0,00 4 Wassergesättigtes n-Butanol 0,04 15 mit 2 Gewichtsprozent
p-Toluolsulfonsäure und
2 Volumprozent Piperidin
Tabelle VI
RrWerte von Fortimicin A und Gentamicin C Komplex bei der Dünnschichtchromatographie an Kieselgel; entwickelt bei Raumtemperatur während 3 Stunden
Entwicklungs
lösungsmittel*)		 Antibiotikum Rr-Wert
I Fortimicin A 0,74
I Gentamicin C
Komplex		 0,71
I Gentamicin C2 0,71
II Fortimicin A 0,37
II Gentamicin C
Komplex		 0,06 bis 0,16
II Gentamicin C2 0,08 bis 0,14
*) Entwicklungslösungsmittel I:
Die obere Schicht eines Gemisches von Chloroform, Methanol und 17prozentiger wäßriger Ammoniaklösung (Volumverhältnis 2:1:1).
Entwicklungslösungsmittel H:
lOprozentige Ammoniumacetatlösung und Methanol (Volumverhältnis ! : 1).
Tabelle VII
Rf-Werte bekannter Antibiotika bei der aufsteigenden Papierchromatographie unter Verwendung der unteren Schicht des Gemisches von Chloroform, Methanol und 17prozentiger wäßriger Ammoniaklösung (Volumverhältnis 2:1:1) als Entwicklungslösungsmittel, entwickelt bei Raumtemperatur während 12 Stunden
Antibiotikum
Rr-Wert
Streptomycin A
Streptomycin B
Bluensomycin
Ribostamycin
Lividomycin A
Lividomycin B
Lividomycin D
Spectinomycin
Kasugamycin
Butirosine A
0,02 0,00 0,01 0,00 0,00 0,03 0,02 0,45 0,01 0,00
Fortsetzung
Antibiotikum
Rf-Wert
Butirosine B
Hygromycin B
Destomycin A
Gentamicin A
Gentamicin B
Gentamicin Ci11
Gentamicin Ci
Gentamicin C2
Sisomicin
Neomycin A
Neomycin B
Neomycin C
Antibiotikum Nr. 460
Kanamycin A
Kanamycin B
Kanamycin C
Paromomycin
Nebramycin Komplex
Tobramycin
Apramycin
XK-62-2
Fortimicin B
Fortimicin A
0,01 0,02 0,03 0,00 0,00 0,18 0,59 0,38 0,18 0,00 0,03 0,00 0,01 0,02 0,01 0,02 0,00 0,01 0,02 0,02 0,49 0,65 0,37
Beispiel 1
Micromonospora olivoasterospora ATCC 21819 wird als Einsaatstamm in einem ersten Vorkulturmedium gezüchtet, das 2% Glucose, 0,5% Pepton, 0,5% Hefeextrakt und 0,1% Calciumcarbonat enthält. Das Nährmedium wurde vor der Sterilisation auf einen pH-Wert von 7,2 eingestellt. Eine Platinöse des Einsaatstammes wird in 10 ml des Vorkulturmediums in einem 50 ml fassenden großen Reagensglas überimpft. Die Züchtung wird 5 Tage unter Schütteln bei 30° C durchgeführt. Sodann werden 10 ml der ersten Vorkultur in 30 ml eines zweiten Vorkulturmediums in einem 250 ml Erlenmeyerkolben überimpft. Die Zusammensetzung des zweiten Vorkulturmediums ist die gleiche v-'ie die des ersten Vorkulturmediums. Die Züchtung wird 2 Tage unter Schütteln bei 3O0C durchgeführt. Sodann werden 30 ml des zweiten Vorkulturmediums in 300 ml eines dritten Vorkulturmediums in einem 2 Liter fassenden Erlenmeyerkolben überimpft, der mit Prallplatten ausgerüstet ist. Die Zusammensetzung des dritten Vorkulturmediums ist die gleiche wie die des ersten Vorkulturmediums. Die Züchtung im dritten Vorkulturmedium wird 2 Tage unter Schütteln bei 30° C durchgeführt. Sodann werden 1,5 Liter der dritten Vorkulturbrühe — entsprechend dem Inhalt von 5 Kolben — in 15 Liter eines vierten Vorkulturmediums in einem 30 Liter fassenden Fermenter überimpft. Die Zusammensetzung des vierten Vorkulturmediums ist die gleiche wie die des ersten Vorkulturmediums. Die Züchtung in dem Fermenter wird 2 Tage unter Belüftung und Rühren (350 U/min; Belüftung 15 Liter/min) bei 30°C durchgeführt. Schließlich werden 15 Liter der vierten Vorkulturbrühe in 150 Liter eines Mediums in einem 300 Liter fassenden Fermenter aus Edelstahl überimpft. Dieses Nährmedium enthält 4% Stärke, 2% Sojabohnenmehl, 1% M aisquell wasser, 0,05% K2HPO4,0,05% MgSO4 · 7 H20,0,03% KCl und 0,1 % CaCO3. Vor der Sterilisation wurde das Nährmedium mittels 2 η-Natronlauge auf einen pH-Wert von 7,5 eingestellt Die Züchtung in dem Fermenter wird 4 Tage unter Belüftung und Rühren (150 U/min; Belüftung 80 Liter/min) bei 300C durchgeführt Die dann erhaltene Gärmaische wird mit konzentrierter Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 2,5 eingestellt und 30 Minuten gerührt Sodann werden etwa 7 kg Diatomeenerde als Filtrierhilfe eingetragen und die Zellen abfiltriert Das Filtrat wird mit 6 η-Natronlauge auf einen pH-Wert von 7,5 eingestellt und auf eine mit etwa 20 Liter eines Kationenharzaustauschers in der Ammoniumform gefüllte Säule gegeben. Die durch das Austauscherbett abfließende Flüssigkeit wird verworfen. Antibiotisch aktive Verbindungen sind am Austauscher adsorbiert.
Nach dem Waschen des Austauscherbetts mit Wasser werden die adsorbierten aktiven Verbindungen mit 60 Liter 1 η wäßriger Ammoniaklösung eluiert. Die Aktivität des Eluats wird durch ein Antibiogramm nach der Testplätt .henmethode auf einer Agarplatte und mit Bacillus subtilis Nr. 10707 bestimmt Die antibiotisch aktiven Fraktionen (etwa 20 Liter) werden gesammelt, und das Gemisch wird unter vermindertem Druck auf etwa 1 Liter eingedampft. Das Konzentrat wird auf eine mit 500 ml eines Anionenharzaustauschers in der OH--Form gefüllte Säule gegeben. Die Verunreinigungen werden am Austauscher adsorbiert. Das Austauscherbett wird mit etwa 2 Liter Wasser eluiert. Die antibiotisch aktiven Fraktionen (etwa 200 ml) werden gesammelt und unter vermindertem Druck auf etwa 100 ml eingedampft. Sodann wird das Konzentrat auf eine mit etwa 50 ml pulverisierte Aktivkohle gefüllte Säule gegeben, wobei die antibiotisch aktiven Verbindungen an der Aktivkohle adsorbiert werden. Die Säule wird mit Wasser gewaschen, und das abfließende Wasser und das Waschwasser wird verworfen. Sodann werden die adsorbierten aktiven Verbindungen mit 0,2 η-Schwefelsäure eluiert. Die Aktivität des Eluats wird nach der Testplättchenmethode an Bacillus subtilis Nr. 10707 bestimmt. Die aktiven Fraktionen (etwa 200 ml)
4·) werden gesammelt. Die erhaltenen Fraktionen werden auf eine mit einem Anionenharzaustauscher in der OH--Form gefüllte Säule gegeben. Die aktiven Verbindungen werden sodann mit Wasser eluiert, die aktiven Fraktionen (etwa 300 ml) gesammelt und auf etwa 50 ml eingedampft. Das erhaltene Konzentrat wird gefriergetrocknet. Es wird ein pulveriges Rohprodukt erhalten, das Fortimicin A enthält. Die Ausbeute beträgt etwa 32 g. Das Rohprodukt besitzt eine Aktivität von 575 Einheiten/mg (die Aktivität von 1 mg reiner Verbindung entspricht 1000 Einheiten).
Zur weiteren Reinigung wird das Rohprodukt an Kieselgel chromatographiert.
500 ml Kieselgel werden in eine Säule aus Glas eingefüllt. Die Säule wird folgendermaßen gefüllt: Das Kieselgel wird in der unteren Schicht eines Lösungsmittelgemisches aus Chloroform, Isopropanol und 17prozentiger wäßriger Ammoniaklösung (Volumenverhältnis 2 :1 :1) suspendiert. Sodann wird die Kieselgel-Suspension in die Säule als gleichmäßige Schicht eingefüllt.
Anschließend wird sie mit dem gleichen Lösungsmittelgemisch gewaschen. Danach werden 10 g des pulverigen Rohprodukts in dünner und gleichmäßiger Schicht auf den Kopf der Säule gegeben. Hierauf wird mit dem
vorgenannten Lösungsmittel eluiert, das vorsichtig in den Kopf der Kolonne gegossen wird. Anschließend wird mit einer Strömungsgeschwindigkeit von 50 ml/ Stunde eluiert Es werden Fraktionen von jeweils 20 ml gesammelt und die Aktivität jeder Fraktion wird nach der Testplättchenmethode an Bacillus subtilis Nr. 10707 bestimmt Die ersten antibiotisch aktiven Fraktionen enthalten Fortimicin B, danach folgen antibiotisch aktive Fraktionen, die Fortimicin A enthalten. Die antibiotisch aktiven Fraktionen mit Fortimicin A werden der Papierchromatographie unterworfen, wobei der Rr-Wert des Fortimicins A durch Bioautographie mit Bacillus subtilis Nr. 10707 bestimmt wird. Die Fortimicin A enthaltenden Fraktionen werden gesammelt und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft Der Rückstand wird in wenig Wasser gelöst und die wäßrige Lösung gefriergetrocknet Man erhält 1,8 g gereinigtes Fortimicin A als freie Base. Die Aktivität des Präparats beträgt 970 Einheiten/mg. Die Konstanten für das Fortimicin A sind bereits weiter oben in der Beschreibung angegeben worden.
Beispiel 2
Wie im Beispiel 1 wird Micromonospora olivoasterospora ATCC 21819 als Einsaatstamm verwendet und wie dort in vier Stufen der Vorkultur gezüchtet. Dann wird gemäß Beispiel 1 die Vorkulturbrühe in einem Fermenter, der als Hauptfermentationsmedium ein Nährmedium bestehend aus 4% lösliche Stärke, 3% gepulverte Trockenhefe (Ebios), 0,05% K2HPO4, 0,05% MgSO4 · 7 H2O, 0,03% KCl und 0,1% CaCO3 enthält, gezüchtet. Die Fermentation wird 4 Tage unter Belüftung und Rühren bei 37°C durchgeführt. Nach beendeter' Züchtung wird die Gärmaische gemäß Beispiel 1 aufgearbeitet. Es werden 63 g eines pulverförmigen Rohprodukts mit einer Aktivität von 650 Einheiten/mg erhalten. Das Rohprodukt wird gemäß Beispiel 1 gereinigt. Man erhält 18 g gereinigtes Fortimicin A mit einer Aktivität von 850 Einheiten/mg. Diese gereinigte Substanz wird durch Chromatographie an Cellulose weiter gereinigt. 500 ml Cellulosepulver werden in eine Glassäule fogendermaßen gefüllt: Das Cellulosepulver wird in einem Lösungsmittelgemisch aus n-Butanol, Essigsäure, Pyridin und Wasser (6:2:4:4) suspendiert. Sodann wird die Suspension gleichmäßig in die Kolonne gefüllt und anschließend mit dem gleichen Lösungsmittelgemisch gewaschen. Hierauf wird die Substanz in dünner und gleichmäßiger Schicht auf den Kopf der Cellulosesäure gegeben. Die Eluierung wird mit dem gleichen Lösungsmittelgemisch so durchgeführt. Das Lösungsmittelgemisch wird vorsichtig in den Kopf der Säule gegossen und sodann wird bei einer Strömungsgeschwindigkeit von etwa 1 ml/Minute eluiert. Das Eluat wird in Fraktionen von 10 ml aufgefangen und die antibiotische Aktivität jeder Fraktion wird nach der Testplättchenmethode an Bacillus subtilis Nr. 10707 bestimmt. Die aktiven Fraktionen werden gesammelt (500 ml) und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in wenig Wasser gelöst und gefrierge- ω trocknet. Man erhält 9 g gereinigtes Fortimicin A-Base einer Aktivität von 980 Einheiten/mg. Die Verbindung entspricht der des Beispiels 1.
Beispiel 3 b5
Wie im Beispiel 1 wird unter Verwendung von Micromonospora olivoasterospora ATCC 21819 als Einsaatstamm in vier Stufen einer Vorkulturbrühe gezücütet Diese wird dann gemäß Beispiel 1 in einem Fermenter unter Verwendung eines Hauptfermentationsmediums, das 4% lösliche Stärke, 3% Casaminosäure (ein Säurehydrolysat von Casein), 0,05% K2HPO4, 0,05% MgSO4 · 7 H2O, 0,03% KCl und 0,1% CaCO3 enthält, gezüchtet Die Züchtung, Isolierung und Reinigung des Fortimicin A wird gemäß Beispiel 1 durchgeführt Es werden 18,5 g gereinigtes Fortimicin A mit einer Aktivität von 965 Einheiten/mg erhalten. Die Verbindung entspricht der des Beispiels 1.
Beispiel 4
Die Fermentation wird gemäß Beispiel 1 unter Verwendung von Micromonospora olivoasterospora ATCC 21819 durchgeführt und die dabei erhaltene Gärmaische wird gemäß Beispiel aufgearbeitet Es wird ein pulverförmiges Rohprodukt erhalten, das Fortimicin A enthält 3 g des Rohprodukts werden in 5 ml Wasser gelöst Die Lösung wird auf eine mit 200 ml Carboxymethylcellulose in der Ammoniumform gefüllte Säule gegossen. Danach wird die Säule mit 1000 ml Wasser gewaschen. Antibiotisch aktive Substanzen werden an der Carboxymethylcellulose adsorbiert, während der größte Teil der Pigmente und anorganischen Salze abgetrennt wird. Hierauf wird mit einer wäßrigen Lösung eines 0,2 molaren Citronensäure-Phosphorsäure-Puffergemisches (pH-Wert 3,0) mit einer Strömungsgeschwindigkeit von etwa 50 ml/Std. eluiert. Das Eluat wird in 10 ml Fraktionen gesammelt. Die antibiotische Aktivität jeder Fraktion wird nach der Testplättchenmethode bestimmt. Die Fortimicin A enthaltenden Fraktionen werden gesammelt (200 ml). Die das Fortimicin A enthaltenden vereinigten Fraktionen werden dann auf eine mit einem Kationenharzaustauscher in der H+-Form gefüllten Säule gegeben, wobei das Antibiotikum am Kationenharzaustauscher adsorbiert wird. Nach dem Waschen der Säule mit Wasser wird mit 0,5 η-Salzsäure eluiert. Die antibiotisch aktiven Fraktionen werden gesammelt, vereinigt und mit einem Anionenharzaustauscher in der OH--Form neutralisiert. Die erhaltene Lösung wird gefriergetrocknet. Man erhält 560 g Fortimicin Α-Base mit einer Aktivität von 985 Einheiten/mg. Die Verbindung entspricht der des Beispiels 1.
Beispiel 5
Ais Einsaatstamm wird Micromonospora livoasterospora ATCC 31009 verwendet. Als Einsaatmedium für die erste bis vierte Vorkultur wird das in Beispiel 1 verwendete Nährmedium eingesetzt, das 2% Glucose, 0,5% Pepton, 0,3% Hefeextrakt und 0,1 % Calciumcarbonat enthält, und die Züchtung gemäß Beispiel 1 durchgeführt. Vor der Sterilisation wurde das Nährmedium mit 2 η-Natronlauge auf einen pH-Wert 7,2 eingestellt. Sodann werden 15 Liter der vierten Vorkulturbrühe in 150 Liter eines Nährmediums in einen 300 Liter fassenden Edelstahlfermenter überimpft. Dieses Nährmedium enthält 2% lösliche Stärke, 0,05% Sojabohnenmehl, 2% Glucose, 1% Maisquellwasser, 1% Hefeextrakt, 0,05% K2HPO4, 0,05% MgSO4 · 7 H20,0,03% KCI und 0,1% CaCO3.
Vor der Sterilisation wurde das Nährmedium mit 2 η-Natronlauge auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt. Die Züchtung wird 4 Tage unter Belüftung und Rühren (150 U/min; Belüftungsgeschwindigkdit 80 Liter/min) bei 300C durchgeführt. Nach beendeter Züchtung wird die Gärmaische gemäß Beispiel 1 aufgearbeitet und das Fortimicin A wie dort beschrieben, isoliert und
ί7
gereinigt. Die Aktivität des erhaltenen pulverförmigen Rohprodukts beträgt 560 Einheiten/mg. Das Rohprodukt wird gemäß Beispiel 1 weiter gereinigt Man erhält 6,8 g Fortimicin A mit einer Aktivität von 975 Einheiten/mg. Die Verbindung entspricht der des Beispiels 1.
Beispiel 6
Als Einsaatstamm wird Micromonospora olivoasterospora ATCC 31010 verwendet Als Einsaatmedium für die erste bis vierte Vorkultur wird ein Nährmedium verwendet, das 1% Glucose, 1% lösliche Stärke, 0,5% Hefeextrakt, 0,5% Pepton und 0,1% Calciumcarbonat enthält, und die Züchtung wird gemäß Beispiel 1 durchgeführt Der pH-Wert des Nährmediums wurde vor der Sterilisation mit 2 η-Natronlauge auf 7,0 eingestellt. Die Einsaatkultur der vierten Vorkultur wird sodann <*emäß Beispiel 1 in einem Fermenter, der ein Hauptfermentationsmedium mit der in Beispiel 5 angegebenen Zusammensetzung enthält, überimpft und gemäß Beispiel 1 gezüchtet und weiter aufgearbeitet Aus der Gärmaische des Hauptfermentationsmediums werden 52 g eines pulverförmigen Rohprodukts erhalten, das Fortimicin A enthält Die Aktivität des Rohprodukts beträgt 530 Einheiten/mg. Das Rohprodukt wird gemäß Beispiel 1 gereinigt Man erhält 9 g Fortimicin A mit einer Aktivität von 980 Einheiten/mg. Die Verbindung entspricht der des Beispiels 1.
Beispiel 7
1 g gemäß Beispiel 1 hergestelltes Fortimicin A wird in 50 ml Wasser gelöst Die Lösung wird mit 6 ίο η-Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 4,5 eingestellt und gefriergetrocknet Es werden 1,6 g des Sulfats von Fortimicin A als weißes Pulver erhalten. F. >200°C (Zers.). [<x] £ =+74,2° (c=0,5 in H2O). Spezifische Aktivität: 585 Einheiten/mg.
Beispiel 8
1 g gemäß Beispiel 1 hergestelltes Fortimicin Λ wird in 5OmI Wasser gelöst Die Lösung wird mit 6 η-Salzsäure auf einen pH-Wert von 4,5 eingestellt und gefriergetrocknet Ausbeute 1,5 g des Hydrochlorids von Fortimicin A als weißes Pulver. F. 180° C (Zers.). [κ]?= +77,5° (c=0,l in H2O).Spezifische Aktivität:645 Einheiten/mg.
Hierzu 2 Blatt Zeichnungen

Claims (1)

  1. Patentansprüche:
    1. Fortimicin A der Formel
    CH,
    CH-NH2 H2N
    O
    OH
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