DE2432393B2 - Arzneipräparat zur Behandlung von bösartigen Neubildungen - Google Patents

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein neues Arzneipräparat zur Behandlung von bösartigen Neubildungen.

Erfindungsgemäß enthält das neue injizierbare oder peroral verabreichbare Arzneipräparat als Wirkstoff das Tris-(2-hydroxyäthy!)-ammonium-ortho-kresoxyazetat folgender Formel

[OCH₃CbH₄OCH₂COO] [HN(CH₂CH₂OH)₃]¹.

Dieses Präparat besitzt eine ausgeprägte geschwulsthemmende Wirkung und wird zur Behandlung von Magen-, Mastdarm-, Mamma-, Lungenkarzinom und Karzinomen anderer Lokalisationen verwendet.

Es übt eine eigenartige Wirkung auf ein Geschwulstgewebe aus, in welchem kollagenöse Fasern entstehen, deren Anzahl schnell anwächst. Diese Proliferation des Bindegewebes in die Geschwulst verschlechtert die Nahrung der Geschwulslzellen, welche aufhören zu teilen und degradieren.

Das erfindungsgemäße Arzneimittel ist praktisch untoxisch und hemmt das Wachstum von Normalgeweben mit einer hohen Proliferationsaktivität nicht, wodurch es sich von den gegenwärtig gebräuchlichen Kanzerostatika, wie sie u. a. aus der DE-OS 22 09 576 bekannt sind, unterscheidet. Es unterscheidet sich von ihnen aber auch vor allem auch durch seine Unschädlichkeit.

Die experimentelle Untersuchung der akuten Toxizität wurde an weißen Mäusen von 17—20 g Gewicht, an weißen Ratten von 150—200 g Gewicht und an 2—2,5 kg schweren Kaninchen durchgeführt. Es wurden Tiere beiderlei Geschlechts zu gleichen Mengen benutzt. Die Tiere wurden unter gewöhnlichen Bedingungen gehalten. Zum letzten Mal wurden die Tiere 24 Stunden vor dem Versuch gefüttert. Nach der Einführung des Präparats wurden Mäuse und Ratten für die ganze Beobachtungszeit im Laboratorium gelassen. Die Kaninchen wurden nach 6 Stunden ins Tierhaus ■"> zurückgebracht, wo sie zweimal täglich beobachtet wurden. Nachfolgend wurden die Tiere 6 Stunden nach der Präparateinführung gefüttert und nachher auf das gewöhnliche Regime übergeführt. Das Präparat wurde peroral, intraperitoneal und intravenös eingeführt. Die

ι» Wirkung wurde bei der einmaligen Präparateinführung an 48 gattungslosen weißen Mäusen nach Behrens untersucht. Es wurde festgestellt, daß LDioo 2800 mg/kg, LD₅₀ 2600 mg/kg betragen. An 50 weißen Mäusen wurde nach der Auswahlmethode die maximal verträgli-

n ehe Dosis (MVD) festgestellt, welche 2400 mg/kg beträgt. Das Präparat wurde 40 weißen Mäusen nach der Kärber-Methode intraperitoneal eingeführt. LDioo beträgt 2400 mg/kg, LD₅₀ 2000 mg/kg, MVD 1500 mg/kg. Das Präparat wurde weißen Mäusen intravenös

.'(ι eingeführt. Bei einer Dosis von 200 mg/kg bis 1250 mg/kg überlebten alle Tiere. LDioo beträgt 1500 mg/kg, LD₅O 1300 mg/kg, MVD 1250 mg/kg. Bei der peroralen Einführung des Präparats den Ratten nach Kärber wurden LD,oo = 5000 mg/kg, LD_M=4500 mg/kg,

r> MVD=4000 mg/kg festgestellt. Bei der intravenösen Einführung den Kaninchen wurden LDioo= 1500 mg/kg, LD₅₀= 1250 mg/kg, MVD = 1000 mg/kg festgestellt.

Das klinische Bild der Präparatwirkung bei der peroralen Anwendung in der maximal verträglichen

ίο Dosierung von 2400 mg/kg entwickelt sich folgendermaßen: die latente Periode nach der Präparateinführung dauert von 5 bis 20 Minuten, was von seiner schnellen Resorption zeugt, weiter geht eine bedeutende Senkung der motorischen Aktivität während 8—20

r> Stunden vor sich. Nach 24 Stunden wird keine Abweichung von der Norm im Benehmen der Tiere nachgewiesen. Die Präparatdosen von 800 mg/kg und niedriger werden ohne deutliche klinische Zeichen vertragen.

-o Die Untersuchung der geschwulsthemmenden Wirksamkeit wurde an induzierten und spontanen Tumoren bei Mäusen, Ratten und Kaninchen durchgeführt. Das Präparat wurde per os eingeführt. Die Versuchsgruppen enthielten von 6 bis 12 Tieren. Die Versuche wurden

"4^r> 2—3 Mal wiederholt. Zur Bestimmung der geschwulsthemmenden Wirkung wurde das Präparat 48 Stunden nach der Transplantation und weiter 10 Tage nacheinander eingeführt. Nach den Ergebnissen der Geschwulstentwicklung bei den Tieren in den Kontrollen und Versuchsgruppen wurde das Hemmungsprozent berechnet. Die erhaltenen Ergebnisse sind in der untenstehenden Tabelle angeführt.

Serien	Tumorstamm	Tierart	Tier	Ver	Hemmungsprozent	300	400	600	800
nummer			menge	suchs-		mg/kg	mg/kg	mg/kg	mg/kg
			in der	menge	100 200
			Gruppe		mg/kg mg/kg

Sarkom-180
Sarkom-37
Sarkom-45
Guerin-Sarkom
LlOl
Walker-Karzino-
sarkom
Leber-Karzinom

Mäuse
Mäuse
Ratten
Ratten
Ratten
Ratten

Ratten

10
10
10
10
10
10

51
43

64
58

86
91
80
51
90
95

92
98
90
60
95
98

95

99

In der Behandlungsperiode verbesserte sich der Allgemeinzustand der Tiere, deren Gewicht vergrößerte sich um 5—7 Gew.-%. Der Prozentsatz der Geschwulsthemmung infolge der Medikation in einer Dosis von 300—400 mg/kg beträgt 80—98%, ausgenommen Guerin-Sarkom, dessen Wachstum um 50—60% gehemmt wird.

Die therapeutische Effektivität des Präparats wurde an folgenden Tumorstämmen untersucht: Sarkom-45, LIO-I, Walker-Karzinosarkom, Lebertumor bei Ratten und Brown-Pearce-Karzinom bei Kaninchen. Die Behandlung der Tiere begann man 10—18 Tage nach der Geschwulsttransplantation, im Moment seiner intensiven Entwicklung. Die Kontrollgruppen der Tiere mit den Transplantaiionstumoren wurden der Behandlung nicht unterzogen. Das Präparat wurde per os in einer Dosis von 400 mg/kg täglich bis zur vollen Rückbildung der Geschwulst bei den meisten Tieren der Gruppe eingeführt. In der Periode der Behandlung wurden einzelne Tiere nach einer bestimmten Zeit getötet. Es wurden die histologischen Untersuchungen der Geschwülste während der Behandlung durchgeführt. Bei den Kaninchen mit Brown-Pearce-Karzinom wurden im Laufe der Behandlung Blutanalysen durchgeführt. In den Kontroligruppen mit den Transplantationstumoren ohne Behandlung sank das Gewicht der Tiere trotz der Entwicklung von großen Geschwülsten. Es wurde keine spontane Rückbildung der Geschwülste nachgewiesen. Nach 20—35 Tagen gingen alle Tiere der Kontrollgruppen zugrunde. Die Ergebnisse der therapeutischen Wirkung des Präparats sind in der untenstehenden Tabelle angeführt.

Serien	Tumorstamm	Tierart	Tiermenge	Behand	Gewicht in g	Gewicht in g	Prozent der
nummer				lungsdauer	vor dem	nach der	Tiere mit
				in Tagen	Beginn der	Behandlung	den rück-
					Behandlung		gebildeten Tumoren
1	Spontantumor	Mäuse	8	35	27	32	75
2	Sarkom-i 80	Mäuse	10	30	25	30	100
3	Sarkom-45	Ratten	10	35	190	210	100
4	LIO-I	Ratten	10	30	230	242	100
5	Brown-Pearce-	Kaninchen	12	45	2550	2620	100
	Karzinom

Eine volle Rückbildung der Geschwülste trat bei allen Tieren nach 30—45 Tagen auf Während 3—4 Monaten wurden keine Rezidive nachgewiesen, was histologisch bestätigt wurde.

Die Angaben der Untersuchung des Blutbildes bei den Kaninchen mit Brown-Pearce-Sarkom bei der Behandlung mit dem Präparat sind in folgender Tabelle dargestellt.

Blutangaben Periode der Untersuchung

vor der Behandlung,
am 18. Tag nach der
Tumortransplantation

nach 30 Tagen
der Medikation
(48 Tage nach der
Tumortransplantation)

Erythrozyte 4 300 000
Laukozyte 20 000

Thrombozyte 330 000

4 900 000

10 000

300 000

Die chronische Wirkung des Präparats wurde an gesunden Kaninchen geprüft, welchen das Präparat täglich in einer Dosis von 150 mg/kg per os eingeführt wurde. Vor dem Beginn des Versuchs sowie am 10., 20., 30., 60. und 90. Tag der Untersuchung wurden die Tiere gewogen und die Blutanalysen gemacht (Hämoglobin, Erythrozyte, Leukozyte, Thrombozyte, Reststickstoff, Zucker, Gesamteiweiß, Eiweißfraktionen, Bilirubin). Im Laufe der ganzen Untersuciiungsfrist wurden im Benehmen der Tiere keine Abweichungen von der Norm nachgewiesen. Die Ergebnisse der Untersuchungen zeigen, daß während 3 Monaten keine wesentlichen Abweichungen von der Norm festgestellt wurden. Das Gewicht der Tiere blieb auf demselben Niveau. Nach 3 Monaten wurden die Tiere getötet. Beim Sezieren wurden keine makroskopischen Abweichungen von der Norm nachgewiesen. Es wurden auch keine Abweichungen von der Norm bei den histologischen Untersuchungen der Gewebe von verschiedenen Organen festgestellt.

Das Präparat ist bei der längeren Anwendung untoxisch.

j) Das Präparat wurde an 32 Kranken an onkologischen Erkrankungen der 4. Stufe (Magen-, Mastdarm-, Mamma-, Uterus-, Lungenkarzinom; Osteosarkom und Sarkom der inneren Organe) mit Metastasen klinisch geprüft. Das Präparat wurde peroral in Dosen von 0,1 bis 0,5 g dreimal täglich eine halbe Stunde vor dem Essen während eines Monats verordnet, dann wurde die Medikation für 5—10 Tage abgesetzt und nachher wurden wiederholte Behandlungskuren verordnet. Trotz des schweren Ausgangszustandes wiesen die

4^ri Kranken nach dem Beginn der Medikation die Verbesserung des Allgemeinzustands, die Linderung und das Verschwinden von Schmerzen auf. Die Kranken verzichteten auf Narkotika, der Schlaf und der Appetit verbesserten sich auch. Bei einigen Kranken wurde eine

to gewisse Rückbildung der Geschwülste nachgewiesen, sie wurden weniger dicht. Es verbesserten sich auch die Blutangaben.

Erfindungsgemäß enthält das Präparat als pharmazeutisches Lösungsmittel für Injektionen vorzugsweise die Ringersche Lösung. Das Präparat für Injektionen enthält vorzugsweise den Wirkstoff in einer Menge von 5—10 Gew.-%. Bei der Anwendung des Präparats in Form von Tabletten beträgt der Gehalt an Wirkstoff pro Tablette 0,1—0,5 g.

to Die Injektionslösung wird langsam einmal pro Tag eingeführt. Die Tabletten werden 3—4 Mal pro Tag eine halbe Stunde vor dem Essen angewendet.

Das Präparat ist untoxisch, ruft keine Nebenwirkung hervor, wird von den Kranken bei der beliebigen

μ Anwendungsform gut vertragen.

Der Wirkstoff des Präparats — Tris-(2-hydroxyäthyl)-ammonium-ortho-kresoxyazetat — wird folgenderweise hergestellt.

Triethanolamin wird mit der c-Kresoxyessigsäure bei einer Temperatur bis 100°C in bekannter Weise umgesetzt.

Es wird im Medium eines mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittels gearbeitet.

Als das mit Wasser mischbare organische Lösungsmittel wird Äthyläther, Azeton oder Dioxan verwendet.

Zur Herstellung des Endproduktes von einem hohen Reinheitsgrad wird im Medium von Äthylalkohol gearbeitet und die Isolierung des Endproduktes durch die Zugabe von Diäthyläther zu dem auf eine Temperatur von 20—30°C abgekühlten Reaktionsgemisch verwirklicht.

Vergleichende Toxizitätsuntersuchungen:

In J. Med. i Pharm Chim., Bd. 2 (1960), S. 633 und 639 werden unter der Überschrift: Potentielle Antikrebs-Substanzen Untersuchungen u. a. iibnr die o-Kresoxyessigsäure berichtet. Dabei wurde von den Autoren lediglich die Inhibierung der Lactatdehydrogenaseaktivität in vitro untersucht. Die o-Kresoxyessigsäure besitzt unter den 24 angeführten Phenoxyessigsäurederivaten eine gewisse, aber beileibe nicht die stärkste inhibierende Wirkung auf Lactatdehydrogenase. Das sind alle wesentlichen, in dieser Arbeit getroffenen Aussagen.

Nun wurde experimentell festgestellt, daß diese Verbindung im Vergleich zu dem erfindungsgemäßen Präparat toxisch ist.

Die Versuche zur Feststellung der akuten Toxizität der o-Kresoxyessigsäure wurde an weißen Mäusen, die keiner bestimmten Rasse angehörten und ein Körpergewicht von 18,0 bis 20,0 g aufwiesen, durchgeführt und zwar bei Dosen von 3000,600,120,24 und 5 mg/kg i. p.

Unmittelbar nach der Verabreichung der höheren Dosen (3000 bis 600 mg/kg) waren die Tiere gehemmt und depressiv.

Die Bauchdecke war eingefallen, an den hinteren Extremitäten wurde Tremor festgestellt und die Tiere legten sich flach auf den Boden der Arena, die Extremitäten von sich streckend, um auf diese Weise den Reiz an der Applikationsstelle zu verringern. Schallend Schmerzreflex waren herabgesetzt, die Atmung oberflächlich und die Atemfrequenz angestiegen. Bei 3000 mg/kg verendeten die Tiere im Verlaufe einer Stunde nach Verabreichung. Bei der Sektion zeigten sich keine makroskopischen Veränderungen der inneren Organe. Nach 24 Stunden waren bei 600 mg/kg alle Tiere und bei 120 mg/kg ein Tier verendet. Der nach Körber berechnete LD₅o-Wert betrug bei intraperitonealer Verabreichung 178 mg/kg.

Außerdem wurde noch die Toxizität des Präparats bei peroraler Verabreichung untersucht, und zwar bei 3000, 2000, 1000 unü 500 mg/kg. 5 bis 7 Minuten nach der Verabreichung wurde bei 3000 und 2000 mg/kg an den Mäusen Akrozyanose sowie krampfartiges Atmen

Tabelle

festgestellt. Sie rannten wie wild in der Arena umher und schlugen sich heftig mit den Pfoten auf den Bauch. 20 bis 30 Minuten später wurde Schlaffheit, eine starke Hemmung, Verringerung des Schmerz- und Schallrefle-". xes, krampfartiges Zittern derMuskulatur der hinteren Extremitäten und gespannte Haltung des Schwanzes (Straubesymptom) festgestellt. Dieselben Symptome gelten auch für 1000 und 500 mg/kg, allerdings treten sie erst nach längerer Zeit ein.

to 2 bis 3 Stunden nach Verabreichung waren die Tiere nur mehr wenig beweglich, in erster Linie lagen sie flach auf dem Boden. Schmerz- und Schallreflex waren vermindert. Nach 24 Stunden waren bei 3000,2000,1000 und 500 mg/kg alle Tiere mit komaartigen Erscheinun-

i.) gen verendet. Die Sektion ergab eine starke Blutansammlung in den inneren Organen und eine schlaffe körnige Leber.

Bei Verabreichung von Kresoxyessigsäure p. o. und i. p. bei 20, 10 und 5 mg/kg verendeten im Laufe von 3 bis 7 Tagen alle mit Tumoren beimpften Tiere. Die nichtbehandelten karzimonbefallenen Tiere hingegen blieben am Leben.

Das Mittel mit einem Gehalt an Kresoxyessigsäure ist, da das erfindungsgemäße Präparat selbst bei p. o.

r> 3 g/kg nicht toxisch ist, eindeutig unterlegen. Das erfindungsgemäße Präparat zeigt eine deutliche Besserung im Zustand von Patienten mit Karzinomen der 3. und 4. Stufe, wirkt appetit- und schlafanregend führt zu einer Verringerung oder überhaupt zum Verschwinden

«ι der Schmerzen und verbessert auch das Blutbild. Bei einigen Patienten wurden die Tumore weicher, kleiner oder verschwanden sogar. Außerdem ist das Präparat den Patienten angenehm.

^r> Gegenüberstellung der Toxizitätswerte

Die Moleküle des Tris(2-hydroxyäthyl)ammoniumsalzes weisen eine bestimmte Form und biologische Wirksamkeit auf, wodurch der Schluß gezogen werden kann, daß, verglichen mit der Säure, ein ganz bestimmter Transport im Organismus, die Passage von Membranen und zielgerichtete Wirkung auf Rezeptoren gewährleistet werden.
Außerdem zeigt das erfindungsgemäß vorgeschlage-

<r> ne Präparat im Gegensatz zum Mittel, enthaltend die reine Säure, deren antitumorale Wirkung nicht belegt ist (die in vitro auf Lactatdehydrogenase festgestellte Wirkung ist sogar geringer als bei anderen »potentiell« antitumoralen Mitteln), eine geringere Toxizität. Ferner

-)0 sind beim Menschen und bei höheren Tieren keine Nebenwirkungen festzustellen, während die Säure stark negativ auf das Nervensystem einwirkt und eine Intoxikation der Leber auslöst. Der starke Unterschied in der biologischen Wirkung zwischen dem erfindungs-

V) gemäß vorgeschlagenen Wirkstoff und der dazugehörigen Säure geht aus der nachfolgenden Tabelle hervor.

Vergleich der o-Kres-oxyessigsäure mit deren Tris(2-oxyäthyl)ammoniumsalz Verbindung

o-Kres-oxyessigsäure

Tris(2-oxyäthyl)ammonium-

o-kresoxyacetat

Hei intraperitonealer Verabreichung an	LD5O	weiße Mäuse	Einfluß der maximal verträglichen Dosis	auf die Leber
max. vertr. Dosis	178 mg/kg 2600 mg/kg	LDioo	auf das Nervensystem	Intoxikation
80 mg/kg 2400 mg/kg	400 mg/kg 2800 mg/kg	Hemmung

Claims (2)

1. Palentansprüche:

   !. Injizierbares oder peroral verabreichbares Arzneipräparat zur Behandlung von bösartigen Neubildungen, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff das Tris-(2-hydroxyäthyl)-ammonium-ortho-kresoxyazetat folgender Formel

   [0-CH₃C₆H₄OCH₂COO] [HN(CH₂CH₂OH)₁]'

   enthält.
2. 2. Arzneipräparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es als pharmazeutisches Lösungsmittel für Injektionen die Ringersche Lösung enthält.