DE2208269C3 - Verfahren und Vorrichtung zum Schwangerschaftsnachweis - Google Patents
Verfahren und Vorrichtung zum SchwangerschaftsnachweisInfo
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Description
ZO
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren und eine Vorrichtung zum Filtrieren einer Harnprobe
zum Schwangerschaftsnachweis durch immunologisehen Nachweis von menschlichem Choriongonadotropin
im Harn.
Es ist bekannt, daß der Harn einer Schwangeren ausgeschiedenes menschliches Choriongonadotropin
(im folgenden mit HCG bezeichnet) enthält. Eine Schwangerschaft wurde bisher biologisch durch Feststellung
der HCG-Reaktion unter Verwendung von Versuchstieren, wie Mäusen, Ratten, Kaninchen und
Kröten, nachgewiesen. Vor kurzem wurde jedoch der sogenannte immunologische Schwangerschaftsnachweis
bekannter, bei welchem HCG einfach in einem Reagenzglas oder auf einem Objekttäger durch
eine immunologische Reaktion festgestellt wird. Dieser Nachweis beruht auf dem Prinzip, daß da? Anti-HCG,
das im Blut eines Kaninchens oder eines Meerschweinchens, dem HCG injiziert wurde, gebildet wird, empfindlich
und spezifisch mit dem in dem Harn einer Schwangeren enthaltenen HCG reagiert.
Im spezielleren findet eine Agglutinationsreaktion eines mit Anti-HCG sensibilisierten Latex (im nachfolgenden
mit Latex-Agglutinationsreaktion bezeichnet) statt, wenn die Harnprobe mit einem Polystyrollatex,
an dem Anti-HCG adsorbiert wurde, vermischt wird. Wenn HCG iii der Harnprobe vorhanden ist,
so bricht die Emulsion von feinen Latexteilchen und agglomeriert zu einer sichtbaren Masse. Wird diese
Veränderung auf einem Objektträger festgestellt, so ist »Schwangerschaft« nachgewiesen.
Die Latex-Agglutinationsinhibierungsreaktion, die
eine indirekte Reaktion gegenüber der Latex-Aggiuiinationsreaktion
isi, wird cbeniaiis zum Nachweis
verwendet. Der Latex, der HCG adsorbier! hat, agglomeriert nämlich, wenn Anti-HCG zugegeben
wird, doch findet, wenn mit einer HCG enthaltender« Harnprobe gemischtes Anti-HCG zu diesem Latex
zugegeben wird, keine Agglutination des Latex statt, da das Anti-HCG sich bereits mit dem HCG in dem
Harn verbunden hat. Bei Anwendung der Latex-Agglutirtationsinhibieningsreaktion
zeigt daher das Fehlen einer Agglutination Schwangerschaft an.
Eine Agglutinationsinhibierungsreaktion unter Verwendung
von sensitivieren Erythrozyten (im folgenden
mit Härnagglutinationsinhibierungsreaktion bezeichnet)
wird ebenfalls zum Schwangerschaftsnaehwcis verwendet, Dies^Methode beruht auf dem gleichen
^Prinzip wie'die obengenannte Latex-Agglutinations-%hibierungsreaktion,
doch werden an Stelle des ^obengenannten Latex menschliche oder tierische
■Erythrozyten, an die HCG adsorbiert ist, verwendet ' Wie oben beschrieben, ist dieser immunologische
Nachweis in seinem Durchführungsprinzip einfach, doch hat sich in der Praxis herausgestellt, daß diesei
Nachweis verschiedentlich in einem sehr frühen Stadium der Schwangerschaft, die eine klinische Feststellung
nicht ermöglicht, fehlerhaft sein kann, da in" diesem Stadium die Menge an in dem Harn ausgeschiedenem
HCG sehr klein und demzufolge die Agglutinaiionsreaktion oder deren Inhibierungsreaktion
schwach ist. Es ist daher erforderlich, den Latex oder die Erythrozyten so zu präparieren, daß sie
auf die geringste Kombination von HCG und Anti HCG hin agglomerieren können. Feine Teilchen
von Latex oder Erythrozyten werden durch die geringste Änderung in ihrem Dispersionss/stem leicln
beeinflußt. Werden beispielsweise verschiedene Elektrolytionen, Säuren, Alkalien, oberflächenaktive Mittel
oder wasserlösliche Hochpolymere zugegeben, s..
kann die Agglomerierung unabhängig von der HCCi und Anti-HCG-Reaktion induziert werden oder \w
kann überhaupt nicht auftreten.
So kann bei der obengenannten immunologischen Methode der Prrfung von Harn mit einer komplexe:)
Zusammensetzung die Reaktion durch die anderen Bestandteile des Harns als dem HCG gestört werden,
und der Nachweis ist oft schwierig. Es wurden noch nicht alle die Reaktion störenden Bestandteile des
Harns identifiziert, doch bestehen weite individuelle Unterschiede in ihrer Konzentration. Insbesondere
im Sommer, wenn der Harn dazu neigt, konzentrier! zu sein, ist die Quote an fehlerhaften Nachweisen sehr
hoch.
Abgesehen von diesen Störungen kann der Harn aus anderen Gründen trüb sein. Ein solcher trüber
Harn führt, wenn er als solcher umgesetzt wird, zu einer falschen Diagnose. Es ist daher «bliche Praxis,
den Harn Tür einen Reaktionstest nur nach Filtrieren durch ein Papierfilter oder Watte (absorbierende
Baumwolle) zu verwenden.
Wie im folgenden noch erläutert wird, kann übliches Cellulosefilterpapier oder Watte die Trübung entfernen,
doch adsorbieren sie gleichzeitig auch HCG. In den frühen Stadien der Schwangerschaft, wenn die
Sekietion an HCG gering ist, wird daher die vorhandene
Spur an HCG weiter durch das Filtrieren herabgesetzt, und es kann »keine Schwangerschaft«
irrtümlich festgestellt werden.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist daher die Schaffung eines einfachen Verfahrens und eintf Vorrichtung
zur Entfernung der Trübung und der die Reaktion störenden Substanzen ohne Verlust der in
dem Harn vorhandenen Spur an HCG.
Es wurde nun gefunden, daß sich sowohl die Trübung als auch die reaktionsstörenden Substanzen
in dem Harn in ausreichender Weise entfernen lassen und somit die Fehlbestimmungsquote außerordentlich
gesenkt werden kann, und zwar mit einem extrem kleinen Verlust an HCG, wenn als Filtermittel CeIIuloseacetatfaser
und/oder synthetische Polyacrylnitrilfaser verwendet wird.
Somit besteht die Lösung der erfindungsgernäßen Aufgabe darin, daß bei dem Verfahren der eingangs-
genannten Art eine Fasermasse aus synthetischer Ipiyacryinitrilfaser und/oder Celluloseacetatfaser als
Filtermaterial verwendet wird,
*,. Die Erfindung betrifft auch eine Vorrichtung zur ^Durchführung des obengenannten Verfahrens, die Tins einem Rohr besteht, daa an die Spitze, einer Pipette •'angesetzt werden kann und mit einer Fasermasse •Tius Celluloseacetatfaser und/oder synthetischer PoIyacrylnitrilfascr gefüllt ist. Vorzugsweise besteht dieses Rohr aus einem Kunststoffmaterial.
*,. Die Erfindung betrifft auch eine Vorrichtung zur ^Durchführung des obengenannten Verfahrens, die Tins einem Rohr besteht, daa an die Spitze, einer Pipette •'angesetzt werden kann und mit einer Fasermasse •Tius Celluloseacetatfaser und/oder synthetischer PoIyacrylnitrilfascr gefüllt ist. Vorzugsweise besteht dieses Rohr aus einem Kunststoffmaterial.
Die vorliegende Erfindung bietet den großen Vorteil,
daß selbst bei Verwendung einer Harnprobe, die nur iine Spur HCG im frühen Stadium einer Schwangerschaft
enthält, eine Schwangerschaft zuverlässig festgestellt werden kann. Selbst im Falle von konzentriertem
Harr im Sommer ist der Nabhweis außerordentlich zuverlässig.
Im folgenden soll die Erfindung an Hand einer bevorzugten Ausführungsform. unter Bezugnahme auf
die Figuren der Zeichnung näher erläutert werden. Es zeigt
F i p. 1 eine Pipette mit daran angesetztem PoIyhyldiröhrchen,
das Fasern enthält, F i g. 2 die Pipette und das Röhrchen gemäß Fig. I,
wobei diese in eine Harnprobe eingetaucht sind, und F i j» 3 das Röhrchen und die Pipette, die anschließend
getrennt sind.
Bei der in F i g. 1 gezeigten Darstellung ist ein Polyüthylenröhrchen 2, das mit einer Fasermasse 1
aus entweder Celluloseacetatfaser oder synthetischer
Polyakrylnitrilfaser oder beiden Fasern gefüllt ist, an der Spitze einer Pipette 3 angesetzt. Wie in F i g. 2
gezeigt ist, ist diese Pipette mit dem daran angesetzten
Röhrchen in die Harnprobe 4 eingetaucht, um eine gewisse Menge Harn in die Pipette 3 aufzusaugen.
So kann ein klarer filtrierter Harn 5 leicht erhalten
werden. Dann wird, v/ie in F i g. 3 dargestellt, das Röhrchen 2 von der Pipette abgenommen, und der
filtrierte Harn 5 in der Pipette 3 kann unmittelbar für die Testreaktion verwendet werden.
Die Schwangerschaft kann durch die Latex-Aggluünatiüttsreaktion
oder die Latex-Agglutinationsinhibierungsreaktion unter Verwendung eines Tropfens
dieses Harns aif einem Objektträger oder durch die Hämagglutionationsinhibierungsreaktion unter Verwendung
von 0,1 ml Harn in einem Reagenzglas vorgenommen werden.
■ Es seien nun Ttstbeispielc gegeben, bei denen die
Wirksamkeit des Schwangerschaftsnachweises mit dem
erfindungsgemäßen Filtrierverfahren unter Verwendung von Celluloseacetatfaser und/oder synthetischer
Polyacrylnitrilfaser und der üblichen Filtriermclhode
unter Verwendung eines Filterpapiers oder einer Walte verglichen wird.
Testbeispiel 1
Ein Polyäthylenrohr mit einem Innendurchmesser von 4,5 mm wurde mit 50 mg von jeweils Cellulos'?-
acetallaser, synthetischer Polyacrylnitrilfaser und Watte gefüllt. Nach dem oben beschriebenen Vcrfahren
wurden 0,3 ml gefilterter Harn erhalten, Das verwendete Filterpapier war Toyo-Filterpapier Nr. 5 B
(5,5 cm Durchmesser, 220 mg Gewicht). Nach vierfachem Falten wurde dieses Filterpapier auf einen
kleinen Trichter aufgebracht, und 2 ml Harn wurden durch das Papier filtriert.
In einem Vorversuch wurden 10 Proben mit beträchtlich starker Störung für die Reaktion von nichtschwangeren Frauen verwendet, während 10 Proben
mit einer Spur von HCG (weniger als 31. E./ml) von
Schwangeren verwendet wurden. Gemäß der oben beschriebenen Arbeitsweisen wurden diese Proben
filtriert und der Latex-Agglutinationsreaktion und der Hämagglutinationsinhibierungf.reaktion unterzogen,
und die Ergebnisse wurden verglichen. Gleichzeitig wurde ein nicht filtrierter Harn als Kontrolle geprüft.
Die Ergebnisse sind in den Tabellen I und 11 zusammengestellt.
Im Falle des Harns der nichtschwangeren Frauen ergaben bei Umsetzung ohne Filtrieren zwei Fälle
von 10 definitiv »positive« Ergebnisse, während fünf Fälle »zweifelhaft-positive« Ergebnisse, das heißt
Ergebnisse zwischen »negativen« und »positiven« Ergebnissen zeigten.
Bei der Hämagglutinationsinhibierungsreaktion ergaben
zwei Fälle »zweifelhaft-positiv«. Der Einfluß der reaktionsstörenden Substanzen, die zu Fehldiagnosen
führen, ist daher bei der Latex-Agglutinationsreaktion merklich stärker, doch sind bei Verwendung von filtriertem Harn diese Substanzen entferni,
und die Beurteilung ergibt richtig »negativ«, gleichgültig, welches Verfahren zum Filtrieren verwendet
wird.
Tabelle I
Vergleich der Filtrierverfahren bei Anwendung auf H^rn von Nichtschwangeren
Vergleich der Filtrierverfahren bei Anwendung auf H^rn von Nichtschwangeren
KiTfiproben von Nichtschwangeren
Latex-Agglutinationsreaktion
nicht filtriert
durch Watte filtriert
durch Filterpapier filtriert
durch Polyacrylnitrilfaser filtriert...
durch Ceiluloseacetatfaser filtriert ., HämagglutinatJonsinhibitionsreaktion
nicht filtriert
durch Watte filtriert
durch Filterpapier filtriert
•durch Polyacrylnitrilfaser filtriert..,
durch Celluloseacetatfaser filtriert .
208 269
Vergleich der Filtrierverfahren bei Verwendung von'Harn von Schwangeren \'"' „ ,'*,
, ,Harnproben von Schwangeren ,
6'»' 7/ '8
-, Latex-Aggl utinationsreaktion
nicht filtriert
durch Watte filtriert
durch Filterpapier filtriert
durch Polyacrylnitrilfaser filtriert
durch Celluloseacetatfaser filtriert
Hämagglutinationsinhibitionsreaktion
nicht filtriert -
durch Watte filtriert
durch Filterpapier filtriert
durch Polyacrylnitrilfaser filtriert
durch Celluioseacetatfaser filtriert
Im Falle von Harn von Schwangeren, der ein wenig HCG enthielt, ergaben alle Fälle »positiv« sowohl
bei der Latex-Agglutinationsreaktion als auch bei der Hämagglutinationsinhibierungsreaktion, wenn,
wie in Tabelle II gezeigt, der Harn nicht filtriert war. Wenn der Harn jedoch durch ein Filterpapier und
Watte filtriert war, war die Reaktion sehr abgeschwächt, und die Latex-Agglutinationsreaktion
war in fünf Fällen von zehn »negativ«, während die Hämagglutinationsinhibierungsreaktion in vier Fällen
von zehn das Ergebnis »negativ« lieferte, was zeigt, daß anstatt Schwangerschaft in fehlerhafter Weise
»NichtSchwangerschaft« nachgewiesen wurde.
Im Gegensatz hierzu ergab, wenn der Harn durch synthetische Polyacrylnitrilfaser oder Celluloseacetatfaser
erfindungsgemäß filtriert wufde, kein Fall die
Bewertung »negativ«, und nur in einem Fall trat die Bewertung »zweifelhaft-positiv« auf.
So können die Reaktionen von unfiltriertem Harn das Ergebnis »positiv« liefern, selbst wenn der Harn
tatsächlich »negativ« ist. was die Möglichkeit, keine Schwangerschaft für eine Schwangerschaft zu halten,
mit sich bringt. Wenn übliches Filterpapier oder Watte verwendet wird, so kann ein solcher Fehler vermieden
werden, doch besteht dann in hohem Grade die Möglichkeit, eine Schwangerschaft für eine Nichlschwangerschaft
zu halten, wenn der HCG-Gchalt im Harn sehr klein ist. Die Verwendung von PoIy-.-acrylnilrilfaser
oder Celluloseacetatfaser als Filtermittel ermöglicht sowohl eine ausreichende Entfernung
der die Reaktion störenden Substanzen als auch eine geringe Adsorption von HCG und somit
eine erhebliche Herabsetzung der Fchlbcwcrtungs-C]UOtC.
Der folgende Test wurde zum quantitativen Vergleich der HCG-Adsorplion durch verschiedene Mittel
zum Filtrieren durchgerührt.
Tcslbeispicl 2
In fünf Harnproben von gesunden, nichtschwangcidi
Frauen wurde HCG in einer Menge von 41. E./ml gelöst. Diese Proben wurden unter absolut gleichen
Bedingungen wie im Teslbcispicl I filtriert. Das restliche HCG im Filtrat wurde nach der quanli-
■r
tativen Hämagglutinationsinhibierungsmethoile von
L. Wi d e (Acta Endoc. Suppl. 70 [1962]) gemessen.
Wie Tabelle III zeigt, variieren die HCG-Adsorp-
tioncn durch verschiedene Filtermittel etwas von Probe
zu Probe, doch werden die ursprünglich 4 I. E./ml
vor dem Filtrieren auf 1,0 bis 2,5 I. E./ml nach FH-
3" frieren Jurch Waiie und auf 2,0 bis 2,51. E./ml nach
Filtrieren durch Papier herabgesetzt, im Gegensatz hierzu findet beim Filtrieren durch Polyacrylnitril-
und Celluloseacetatfaser gemäß der Erfindung eine Herabsetzung auf 3,5 bis 3,75 I. E./ml steu, was eine
sehr geringe HCG-Adsorption klar zeigt. Diese Teste zeigen, daß in den 10 Fällen von Harnprüfungen von
Schwangeren bei der Verminderung an HCG auf etwa 31. E./ml die Wirksamkeit des erfindungsgemäßen
Verfahrens so groß ist, daß selbst die Proben
mit einer Spur HCG richtig als »positiv«
werden können.
werden können.
Restliches HCG im Filtrat von Harn mit
einem Gehalt von 4 LE.HCG/ml (internationale
Einheiten/ml)
Filter
Walte
Papier
Polyacrylnitril
Celluloseacetat
Harn probe | 2 | 3 | Λ | |
I | 2,5 | 1,5 | i,o | |
1,0 | 2,5 | 2,0 | 2,0 | |
2,0 | 3,75 | 3,5 | 3,75 | |
3.5 | 3,75 | 3,5 | 3,5 | |
3,75 |
Testbeispiel 3
fto Der folgende Versuch würde durchgeführt, um die
Beziehung zwischen dem Volumen des Filtermaterial und der Ausbeute an filtriertem Harn zu untersuchen.
Unter Verwendung von 50, 75 und 100 ιημ synlhetiscncr
Polyacrylnitrilfaser und Cclluloscaceliitlascr
<i5 und unter Anwendung des ohm beschriebe.
<
fahrcns sowie unter Verwendung von 0,1. ο ■
1,0 ml Filtrat wurden 20 Proben von Harn von Schwangeren und 20 Proben von Harn von Nicht-
fahrcns sowie unter Verwendung von 0,1. ο ■
1,0 ml Filtrat wurden 20 Proben von Harn von Schwangeren und 20 Proben von Harn von Nicht-
^S^gKjhwangersn einem Reaktivitätstest bei der Latex-
^^ppl^gfelutiriationsreaktiön uijd der Harnagglutinatiohs-
^fep§0nhibieningsreaktiön unterzogen.·In allen Fäljen waren
|fe|&|Su||äeni Harn von Nichtschwahgeren^Hie reaktions-
M^^Mörmäea Substanzen yollständig^.entfernt, ^nd ;das
im^iiA^.i-Mn'si'-^.iii^. ...„i, ^„tin-i'Hv/i linffti·*1. iiehl20 Fällen von
|5 'von ft
^K^SnWwriräigati^/^^^^Fäflfen *
1?MSiiiHaftilvhn SchwaneÄergab bei Verwendung von
cfylnitrilfaser und »·"*-··'·-
ifdas^ Ergebnis »
schriebjensn Arbeitsweise J*# Harnprobeivvon Frauen,
(die auf Schwangerschaft Mter&c|if werden sollten,
$itriert,i^i&y(w^
|wurdcn. Dieseif|n^ner^H|ini wuiräe ^em'ilätex-
Agglutinationstest und liem; Härnagglutinationsinhi-
^ierüngsföst^ üri^rzo^ri^Ejtspi^hende jReaktipnen
?wurilenGünter Verwehdimg^eines vFiltarrörirchens,
h^p Dies
" de a
Harrl
zur
l^ml nur ein
"^positiv« und
fzeigt, daß in der Praxis
,binationsn rwischcn
«und der Ausbeute an
(der erforderlichen 1
immunologische Schwan
E)feg folgenden Beispiele dienen zur weiteren Erläuterung der Erfindung.
78 Harnproben von Nichtschwangeren wurden gemäß dem schematisch erläuterten Verfahren unter
Verwendung eines Polyäthylenfilterrohrchens mit
einem Innendurchmesser von 4,5 nun, das mit 50 mg
triert, wobei jeweils 0,3 ml .— "-,"«>«« Λ,™*
wurden. Unter Verwendung eines Tropfens dieses flirierten Harns wurde ein Latex-Agglutinationstest
auf eulem Objektträger und unter Verwendung von
0,1 ml dieses filtrierten Harns in einem Reagenzglas ein Hämagglutinatipnsinhibierungstest durchaelu
3QCn UUICMgClUIlIl. VJlIlWl ivilryiiuuiij, .u>~»-·
a,«.-.. irteniiiVbnlEi!termäteriaiiwurden;yieiErgebnisse
der Bewertung des nitrierten Harns verglichen.
In Tabelle IV sind diese Ergebnisse zusammengestellt. In 182 Fällen v/ar die richtige Bewertung
»schwanger«, und in 11 Fällen war sie »nicht schwanger«. Bei Filtrieren durch Watte ergaben 18FaIIe
bei Anwendung der Hämagglutinationsinhibierung und 21 Fälle bei Anwendung der Latex-Agglutination die Bewertung »nicht schwanger«. Dagegen
ergaben bei Filtrieren durch die zwei erfindungsgemäßen Filtriermittel 11 Fälle bei beiden Reaktionen
. die Bewertung »nicht schwanger«, was mit der Anzahl
der richtigen Bewertungen übereinstimmt. Bei Verwendung des Filtermaterials gsm&S der Erfindung
ergaben nur 2 oder 3 Fälle dar Ergebnis »zweifelhaft-positiv« bei dem Harn im frühen Stadium einer
Schwangerschaft. Dies ist weniger als die 7 Fälle von »zweifelhaft-positiv«, die bei Filtrieren durch
Watte erhalten wurden.
Ergebnis der Bewertung von I93 Frauen, die auf Schwangerschaft untersucht wurden
Filter
r- „
2S3» Ä
,,.Jl„i«.„ nhne Filtrieren umgesetzt,
Watte
2 Fälle »zweifelhaft-positiv«.
. , Celluloseacetat
richtig »negativ«. Bei ....
lieferten 45 Latex-Agghitinatiomreaklion
Watte
Polyacrylnitril Unter Verwendung ein*.s polyäthylenröhrchens mit Celluloseacetat
positiv
Beweriung
pseudo» positiv
168 180 179
165 179 180
.-.if. H^x,
7 2 3
7 3 2
negativ
18 11 11
2! 11 Π
Hierzu 1 Blatt Zeichnungen
■ ΐ·,
,ff,
* 409 «16/429..,
ί ^1- V ·'-
Claims (1)
- 2 208 26SPatentansprüche;1, Verfahren zum Filtrieren einer ,Harnprobe zum Sehwangerschafi^nabhweis durch immuno* Mi .,jogisehen Nachweis von meflsOhlichem Cliorion- ; gonadotropin im Harn, d a d u r c h g e k e η η - '^'zeichnet, daß eine Fasermasse aus syntheti-' scher Polyakrylnitrilfaser und/oder Celluloseacetät- - faser als Filtermaterial verwendet wird. ι ο< 2, Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens nach Anspjruejvi', gekennzeichnet durch ejn.Rohr,.r \ das an die Spit?» einer; Pipette angesetzt werden V. kann und mit einer Fasermasse aus Cellulose-. acetatfaser und/oder synthetischer Polyacrylnitrilfaser gefüllt ist,3. Vorrichtung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Rohr aus Kunststoff besteht.
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DE2208269B2 DE2208269B2 (de) | 1973-09-27 |
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