JPS5933228B2 - 妊娠診断反応用被検液の前処理方法ならびに前処理剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は妊娠診断反応用被検液の前処理方法ならびに前
処理剤に関する。

妊婦の尿中および体液（血清、血漿など）に含まれる人
胎盤性性腺刺戟ホルモン（以下ＨＣＧと略称する）を検
出し、妊娠の有無を診断する免疫学的手法が用いられる
。

すなわち抗ＨＣＧ抗体感 。作ラテックス凝集反応（以
下ＬＤＡＲと略称する）では、表面に抗ＨＣＧ抗体を吸
着させたラテックスと、検波としての尿、血清または血
漿を混合すると、検波中にＨＣＧが存在しておれば、ラ
テックス粒子同志の凝集が生じるので、この凝集塊が認
められたとき妊娠していると判定する。また逆にＨＣＧ
感作ラテックス凝集阻止反応（以下ＬＡＩＲと略称する
）では、表面にＨＣＧを吸着させたラテックスと一定量
の抗ＨＣＧ抗体を混合するとラテックス粒子同志の凝集
が生じるが、あらかじめＨＣＧを含む検波と一定量の抗
ＨＣＧ抗体とを混合した後、ラテックスを加えると抗Ｈ
ＣＧ抗体は既に検波中のＨＣＧと結合しているため、ラ
テックスはもはや凝集しなくなる。したがつてＬＡＩＲ
ではラテックス粒子の凝集塊が認められないとき妊娠し
ていると判定する。さらにラテックスの代りにヒトまた
は動物の赤血球にＨＣＧを付着させた感作赤血球を用い
て妊娠診断する赤血球凝集阻止反応（以下ＨＡＩＲと略
称する）も行なわれている。これらの免疫学的反応によ
る妊娠診断法にあつては、妊娠の初期では分泌されるＨ
ＣＧの量が少ないため、凝集（阻止）反応が弱く、判定
を誤まることがある。

また、感作ラテックスや感作赤血球は、ＨＣＧと抗ＨＣ
Ｇ抗体との免疫学的な反応と無関係に、非特異的な反応
を示すことがある。したがつて多数の成分を含む尿また
は血清を上記の方法で判定する場合、検波中のＨＣＧ以
外の成分によつて、凝集（阻止）反応が妨害を受け、妊
娠診断を誤まらせることがある。また、検波は濁りを有
する場合があり、そのまま反応させると誤まつた判定結
果を与えることがあるので、通常は検波をろ過した後、
凝集（阻止）反応を行なわせている。

従来、濾過材として、濾紙、脱脂綿、酢酸セルロース、
ポリアクリロニトリル、カルボキシメチルセルロース繊
維などが用いられているが、これらのいずれも満足すべ
きものではない。

たとえばセルロース濾紙、脱脂綿を用いる濾過では、濁
りは除去されるが、ＨＣＧそのものも吸着されるという
欠点を有する。また酢酸セルロース、ポリアクリロニト
リル系合成繊維では妨害成分の除去が不完全であり、繊
維性カルボキシメーチルセルロースによる淵過において
も、濁りや妨害成分の除去はすぐれているが、ＨＣＧの
吸着を伴なうという欠点を有する。本発明者らはかかる
技術的背景の下に上記した欠点を克服した前処理方法を
確立すべく鋭意研究した結果、被検液中のＨＣＧを実質
的に失うことなく妨害成分および混濁成分を特異的に除
去しうる本発明の前処理方法ならぴに前処理剤を完成し
たＯすなわち、本発明は、 （１） ＨＣＧを免疫学的に検出する妊娠診断反応用の
被検液を、カルボン酸型カチオン交換樹脂繊維もしくは
シリコン処理ガラス繊維と接触させることを特徴とする
妊娠診断反応用用被検液の前処理方法、ならびに、（２
）カルボン酸型オチオン交換樹脂繊維もしくはシリコン
処理ガラス繊維からなる妊娠診断反応用被検液の前処理
剤である。

本発明において使用されるカルボン酸型カチオン交換樹
脂繊維は、約１．５ｍｅｑ／ｇ以上とりわけ約５ｍｅｑ
／ｇ以上のカチオン交換容量を有するものが好ましい。

たとえば、アクリロニトリルを４０重量％以上含有する
重合体成型物をヒドラジンまたはヒドラジン同族体と反
応せしめ、０．０１〜３．０ｍｅｑ／ｇのアニオン交換
容量を付与した後、アルカリまたは鉱酸による残存二ト
リル基の加水分解によりカチオン交換基を導入したもの
（特開昭４９−１４３８９号公報参照）などが好都合に
用いられる。シリコン処理ガラス繊維としては、通常の
ガラス繊維をケイ素化合物もしくはその含有物たとえば
シランカツプリング剤（オルガノフアンクシヨンシラン
）、シリコンオイル、シリコンオイルエマルジヨン、シ
リコンワニス、シリコンワニスエマルジヨンなどで処理
したものが用いられる。

このシリコン処理は、一般にガラス繊維に上記したケイ
素化合物もしくは｛の含有物の溶液（水溶液、有機溶剤
溶液など）を含浸させ、加熱（通常約１００〜３０『Ｃ
）することにより行なわれる。上記したカルボン酸型カ
チオン交換樹脂繊維およびシリコン処理ガラス繊維はい
ずれか１種を用いてもよく、併用してもよい。一般に、
カルボン酸型カチオン交換樹脂繊維は約５〜１５デニー
ルの長繊維、シリコン処理ガラス繊維は直径約５〜１５
ｐｍ１の長繊維を使用するのが好ましい。被検液たとえ
ば婦人の尿、血清、血漿などを上記した樹脂と接触させ
るにさいしては、たとえば繊維の層で被検液を淵過して
もよく、被検液と当該繊維を混合したのち被検液を分離
（Ｐ別処理、遠心沈澱処理など）してもよい。一般に被
検液を繊維層で済過するのが好ましく、たとえば上記繊
維２０〜１００ｍｇとりわけ５０ｍｇ程度を充填したポ
リエチレン製チユーブを、頭部にゴムキヤツプを付した
ポリエチレン製スポイトの下端に嵌着し、これを被検液
中に差込んで適量（通常約０．３ｍ１）の被検液をスポ
イト中に吸い上げることによつて済過し、チユーブを取
り外して、スポイト中の淵過検液を直ちに妊娠診断反応
に供することができる。たとえば、上記淵過検液の２滴
を清浄なガラス板上に滴下し、ＬＤＡＲあるいはＬＡＩ
Ｒを行なうか、または０．１ｍ１を用いて試験管内で１
ＩＡＩＲを行うことにより妊娠を診断することができる
。

本発明の前処理方法を行なうことにより、被検液中のＨ
ＣＧの実質的損失を招くことなく、反応妨害成分および
混濁成分を除去することができ、これにより妊娠診断反
応における感度と信頼度を顕著に向上させることができ
る。以下に、本発明の効果を試験例および実施例により
さらに具体的に説明する。

なお、以下の試験例および実施例で使用したカルボン酸
型カチオン交換樹脂繊維およびシリコン処理ガラス繊維
は、それぞれ下記のものである。

カルボン酸型カチオン交換樹脂繊維は、特開昭４９−１
４３８９号（特公昭５４−３８５９６号、特許第１，０
０２，４３０号の実施例１に従つて製造されたもので、
トリアジンないしテトラジンによる架橋構造を有し、６
．４ｍ０ｑ／ｇの交換容量を有する淡紅色の太さ６デニ
ールの長繊維体である。赤外吸収スペクトルにおいて１
６００〜１７００儂−１に強いカルボニルの吸収が認め
られたが、ニトリルの吸収（２２５０ｃｍ−１）は全く
認められなかつた。シリコン処理ガラス繊維は、直径約
１０μｍのガラス繊維をアセトンおよびジエチルエーテ
ルで脱脂処理したものを、１％ジメチルポリシロキサン
トリクレン溶液に１分間浸したのち、２０００Ｃで１時
間加熱処理し、ついで２０％エタノールで洗滌して得た
。

試験例 １ 内径５能のポリエチレンチユーブに上記の繊維をそれぞ
れ５０η充填し、上記の方法で０．３ｍ１のろ過尿ある
いは淵過血清を得た。

またセルロース戸紙は東洋戸紙７ｆ６５Ｃ（直径５．５
礪、重量２３７Ｔ１！９）を用い、ひだ折にした後、淵
斗上にのせ１．５ｄの尿あるいは血清を通過させた。被
検液は非妊娠婦人尿より、とくに反応妨害の程度が大き
な１０例、非妊娠婦人血清５例を選択し、上記の方法で
済過し、常法によりＬＤＡＲ，ＨＡＩＲを行なつて結果
を比較した。

尚、対照として全く沢過しない検液についても同時にテ
ストした。結果を後記表１，２に示す。このテストで用
いた非妊娠婦人尿は、淵過操作を行なわない場合、ＬＤ
ＡＲで１０例中５例に明らかな陽性、残りの５例が陰性
と陽性の中間である疑陽性を示した。

またＨＡＩＲでは１例が陽性、３例が疑陽性を示した。
このように誤判定を生じる成分の影響はＬＤＡＲの場合
、特に顕著であるが、済過操作により誤判定を生じる頻
度は減少する。疑陽性も陽性の内に加えた各種済過材で
の誤判定例はセルロース沢紙５／１０１脱脂綿５／１０
、羊毛３／１０、未処理ガラス繊維３／１０１ビスコー
スレーシヨン５／１０１ナイロン５／１０、ポリエステ
ル５／１０１ポリプロピレン５／１０、ポリ塩化ビニル
５／１０、ポリアクリロニトリル３／１０、ポリウレタ
ン４／１０、酢酸セルロース２／１０、カルボキシメチ
ルセルロース１／１０、であつたが、本発明のカルボン
酸型カチオン交換樹脂繊維またはシリコン処理ガラス繊
維を用いた場合、全例が陰性であると判定された。ＨＡ
ＩＲでは済過尿の使用でいずれも全例陰性と判定された
。非妊娠血清の淵過法の違いによるＬＤＡＲの結果を後
記表３に示したが、淵過操作のない場合、２／５の誤判
定例を認めたが、済過血清を用いることにより、いずれ
の済過法を用いても正しく陰性であると判定された。上
記のごとく、尿あるいは血清検液を済過せずにテストに
用いた場合、陰性と判定されるべき検体が陽性を示すこ
とがしばしばあり、誤判定する危険がある。

さらに淵過材として、セルロースＦ紙や脱脂綿、羊毛、
未処理ガラス、ビスコースレーヨン、ナイロン、ポリエ
ステル、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリアクリ
ロニトリル、ポリウレタン、酢酸セルロース、カルボキ
シメチルセルロースの各繊維を用いても陰性と判定され
るべき検体が陽性を呈する場合があるたみやはり誤判定
の危険がある。つぎにＨＣＧ含量の少ない妊娠初期婦人
尿１０例についてＬＤＡＲでテストし（表４）、非淵過
尿を用いた場合、全例が陽性と判定された。

しかし淵紙、脱脂綿で済過した場合、反応は著じるしく
弱くなり、済紙４／１０、脱脂綿５／１０で妊娠してい
るにもかかわらず非妊娠と判定された。ビスコースレー
ヨン、カルボキシメチルセルｂ−スにおいては２／１０
の誤判定例を示した。羊毛、未処理ガラス繊維、ナイロ
ン、ポリエステル、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、
ポリウレタンにおいても反応はやや弱くなりそれぞれ１
／１０の誤判定例を示した。これに比して、本発明のカ
ルボン酸型カチオン交換樹脂繊維およびシリコン処理ガ
ラス繊維、ならびにポリアクリロニトリル、酢酸セルロ
ースでは全て陽性を示した。このように、被検液をろ過
することは、検液中の濁りや妨害成分を除去するために
必要であるが、使用した淵過材の種類により検液中に存
在するＨＣＧの吸着が生じ、妊娠を非妊娠と誤認する危
険がある。本発明のカルボン酸型カチオン交換樹脂繊維
またはシリコン処理ガラス繊維を淵過材に用いた場合、
他の済過材に比べて、ＨＣＧの吸着はほとんどなく、し
かも反応に妨害を与える成分を充分に除去するというす
ぐれた性質を有しており、妊娠を非妊娠に、非妊娠を妊
娠にと誤判定する率を著しく低下させることが可能であ
る。

試験例 ２ 健康非妊娠婦人尿３例にそれぞれ１国際単位／ｍｌにな
るようにＨＣＧを加え上記の方法でそれぞれろ過操作し
、放射免疫測定法で各淵過済尿中に残存するＨＣＧ量（
％）を測定した。

後記表５に示したように、セルロース淵紙、脱脂綿、羊
毛、未処理ガラス繊維、ビスコースレ一ヨン、ナイロン
、ポリエステル、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポ
リウレタン、カルボキシメチルセルロースにおいて、最
大６５％の吸着が認められた。

本発明のカルボン酸型カチオン交換樹脂繊維およびシリ
コン処理ガラス繊維、ならびに酢酸セルロース、ポリア
クリロニトリルではほとんどＨＣＧの吸着は認められな
かつた。実施例 １ 非妊娠婦人尿４００例につき本発明のカルボン酸型カチ
オン交換樹脂繊維、シリコン処理ガラス繊維あるいは脱
脂綿、酢酸セルロース、ポリアクリロニトリル、カルボ
キシメチルセルロース繊維をそれぞれ内径５．０ｍｍの
ポリエチレンチユーズに５０ｍｇ充填した淵過管を用い
、前記した方法で淵過し、各０．３７ＩＬ１（７）済過
尿を得た。

この２滴を用いてＬＤＡＲを行なつた。後記表６に示し
たように、４００例中、脱脂綿ろ過では陽性１０例、疑
陽性３５例、酢酸セルロースでは７例が陽性、８例が疑
陽性、ポリアクリロニトリルでは７例が陽性、１３例が
疑陽性であつた。

またカルボキシメチルセルロースにおいても陽性１例、
疑陽性２例を示した。これに比ベ本発明によりカルボン
酸型カチオン交換樹脂繊維またはシリコン処理ガラス繊
維を用いた場合は、全例（４００検体）が陰性を示し、
本発明方法による反応妨害成分の除去率は極めて高い。
実施例 ２ 妊娠診断を受診して臨床診断の結果、妊娠と確定された
２００例の婦人尿について、本発明のカルボン酸型カチ
オン交換樹脂繊維、シリコン処理ガラス繊維あるいは脱
脂綿、酢酸セルロース、ポリアクリロニトリル、カルボ
キシメチルセルロース繊維を用いて実施例１と同一条件
で淵過処理し、ＬＤＡＲを行なつた。

後記表７に示したように、脱脂綿では１０例、酢酸セル
ロースでは３例、ポリアクリロニトリルでは３例、カル
ボキシメチルセルロースでは５例が非妊娠であると誤判
定された。

本発明によりカルボン酸型カチオン交換樹脂繊維をろ過
材に用いたときは、全例が確定診断の結果と一致して陽
性を示した。またシリコン処理ガラス繊維を用いた場合
も疑陽性１例のみで他は全て陽性を示した。実施例 ３
非妊娠婦人血清５０例および妊娠と診断された婦人血清
５０例について本発明のカルボン酸型カチオン交換樹脂
繊維またはシリコン処理ガラス繊維を済過材に用いて、
実施例１と同一条件で済過処理し、それぞれの淵過血清
の２滴を用いてＬＤＡＲを行なつたところ、非妊娠婦人
血清では全例とも陰性、妊婦血清では全例とも陽性を示
した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 人胎盤性性腺刺戟ホルモンを免疫学的に検出する妊
   娠診断反応用の被検液を、カルボン酸型カチオン交換樹
   脂繊維もしくはシリコン処理ガラス繊維と接触させるこ
   とを特徴とする妊娠診断反応用被検液の前処理方法。 ２ カルボン酸型カチオン交換樹脂繊維もしくはシリコ
   ン処理ガラス繊維からなる妊娠診断反応用被検液の前処
   理剤。