CN110779788A - 一种纯化尿蛋白的装置及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种纯化尿蛋白的装置,包括滤芯管、过滤吸附片和收集管,所述滤芯管的出液口处设有所述收集管,所述过滤吸附片设于所述滤芯管内,所述过滤吸附片包括层叠设置的硝酸纤维素膜和玻璃纤维衬垫。滤芯管与收集管之间设有过滤吸附片,过滤吸附片能够过滤沉淀蛋白以及吸附可溶性小分子肽,极大地简化临床生物样本的前处理,便于纯化样本中的蛋白质,减少操作难度。
Description
技术领域
本发明涉及医疗检测技术领域,尤其涉及一种纯化尿蛋白的装置和方法。
背景技术
尿液是血液的一种滤过产物,因其具有许多独特的优势,比如,非侵入性易收集、可以大量获得、性质相对稳定、易于保存等,从而成为理想的临床疾病检测和研究的样本。一些研究已经表明,在正常人体的生理条件下,尿液中的蛋白质约30%是血浆蛋白质,而其它70%是由肾脏和泌尿生殖道衍生蛋白组成。因此,尿液能够直接反应肾脏和泌尿系统的功能状态,在一定程度上可以反映整个机体的功能状态,因此,尿液是寻找疾病生物标志物的一个重要来源。生物标志物是反应机体正常或不正常生物状态的分子,包括蛋白质、核酸、小分子化合物、离子等等,可用于临床疾病的诊断和治疗评估。
目前,临床上尿液中的生物标志物检测方法十分有限,并且方法的灵敏度和特异性都不能满足临床疾病诊断的需求,比如:尿蛋白的检测通常采用化学的方法不能分类,电泳的方法可以分类,但是操作繁琐,干扰因素较多,灵敏度不够;小分子化合物(如多巴胺类、维生素类、氨基酸等)检测多采用毛细管电泳法、免疫学方法等,实验的干扰因素较多,并且数据波动较大。近年随着蛋白质组学技术的发展,尤其是基于质谱、色谱的蛋白组学技术和代谢组学技术的发展,使得越来越多的潜在生物标志物被发现。这些生物标志物有助于辅助诊断,病因分析,评估治疗效果,进而优化治疗。但是基于质谱、色谱的检测技术,对于临床生物样本的检测,样本前处理非常关键,如样本中蛋白质的纯化(或去除)、干扰物质的去除、离子的去除等等,尤其样本中蛋白质的纯化,相关操作都比较繁琐,难度也比较大。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:提供一种便于操作的纯化尿蛋白的装置及方法。
为了解决上述技术问题,本发明采用的技术方案为:一种纯化尿蛋白的装置,包括滤芯管、过滤吸附片和收集管,所述滤芯管的出液口处设有所述收集管,所述过滤吸附片设于所述滤芯管内,所述过滤吸附片包括层叠设置的硝酸纤维素膜和玻璃纤维衬垫。
为了解决上述技术问题,本发明还采用的技术方案为:一种纯化尿蛋白的方法,利用上述的纯化尿蛋白的装置进行纯化,包括以下步骤:
S1、制备尿蛋白沉淀试剂和尿沉淀蛋白复溶液,其中尿蛋白沉淀试剂冷存备用;
S2、将样本与尿蛋白沉淀试剂充分混合形成混合液后静置;
S3、将步骤S2中静置后的混合液添加至滤芯管中并将混合液进行离心处理;
S4、步骤S3中的混合液离心后,取收集管内溶液,形成第一样品;
S5、步骤S4中的第一样品可以进行代谢组学小分子物质检测。
本发明的有益效果在于:滤芯管与收集管之间设有过滤吸附片,过滤吸附片能够过滤沉淀蛋白以及吸附可溶性小分子肽,极大地简化临床生物样本的前处理,便于纯化样本中的蛋白质,减少操作难度。
附图说明
图1为本发明实施例一的纯化尿蛋白的装置的结构示意图;
图2为本发明实施例一的纯化尿蛋白的方法的流程图;
图3为本发明实施例一的蛋白质分子量标准品示例图;
图4为样本尿蛋白SDS-PAGE凝胶电泳处理前后比对效果图;
图5为另一样本尿蛋白SDS-PAGE凝胶电泳处理前后比对效果图。
标号说明:
1、滤芯管;
2、过滤吸附片;
3、收集管;
4、外壳。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果,以下结合实施方式并配合附图予以说明。
本发明最关键的构思在于:过滤吸附片能够过滤沉淀蛋白以及吸附可溶性小分子肽,极大地简化临床生物样本的前处理。
请参照图1至图5,一种纯化尿蛋白的装置,包括滤芯管、过滤吸附片和收集管,所述滤芯管的出液口处设有所述收集管,所述过滤吸附片设于所述滤芯管内,所述过滤吸附片包括层叠设置的硝酸纤维素膜和玻璃纤维衬垫。
本发明的结构原理简述如下:过滤吸附片能够过滤沉淀蛋白以及吸附可溶性小分子肽,将样本中的沉淀蛋白和可溶性小分子肽从样本中分离出来,便于沉淀蛋白和可溶性小分子肽和样本中的其他成分分离开来,单独研究。
从上述描述可知,本发明的有益效果在于:滤芯管与收集管之间设有过滤吸附片,过滤吸附片能够过滤沉淀蛋白以及吸附可溶性小分子肽,极大地简化临床生物样本的前处理,便于纯化样本中的蛋白质,减少操作难度。
进一步的,所述硝酸纤维素膜的孔径为0.45μm,所述玻璃纤维衬垫的厚度为1.5mm。
进一步的,所述过滤吸附片2靠近所述出液口处设置。
由上述描述可知,靠近出液口设置的过滤吸附片可有效区分已过滤样本和未过滤样本,便于收集使用。
进一步的,还包括外壳4,所述滤芯管1和收集管3均设于所述外壳4内。
由上述描述可知,滤芯管和收集管均设于外壳内,外壳对滤芯管和收集管起保护作用。
一种纯化尿蛋白的方法,利用上述的纯化尿蛋白的装置进行纯化,包括以下步骤:
S1、制备尿蛋白沉淀试剂和尿沉淀蛋白复溶液,其中尿蛋白沉淀试剂冷存备用;
S2、将样本与尿蛋白沉淀试剂充分混合形成混合液后静置;
S3、将步骤S2中静置后的混合液添加至滤芯管1中并将混合液进行离心处理;
S4、步骤S3中的混合液离心后,取收集管3内溶液,形成第一样品;
S5、将步骤S4中的第一样品可以进行代谢组学小分子物质检测。
进一步的,还包括步骤S3后的S31,滤芯管1更换另一收集管3,并在该滤芯管1中添加尿沉淀蛋白复溶液充分混均,静止5分钟;
S32、取步骤S31中静置后的滤芯管1离心,离心后收集管3中的溶液为第二样品,可以进行蛋白质组学分析。
进一步的,所述尿蛋白沉淀试剂为90%浓度的丙酮,所述尿沉淀蛋白复溶液由Tris-HCl和甲酸配制而成。
进一步的,步骤S2中样本与尿蛋白沉淀试剂的混合比例为1∶4。
进一步的,步骤S1中冷存温度为-20℃。
由上述描述可知,低温环境下保存有利于尿蛋白沉淀的稳定。
实施例一
请参照图1至图5,本发明的实施例一为:一种纯化尿蛋白的装置,包括滤芯管1、过滤吸附片2和收集管3,所述滤芯管1的出液口处设有所述收集管3,所述过滤吸附片2设于所述滤芯管1内,所述过滤吸附片2包括层叠设置的硝酸纤维素膜和玻璃纤维衬垫。
可选的,所述硝酸纤维素膜的孔径为0.45μm,所述玻璃纤维衬垫的厚度为1.5mm。
请参照图1,所述过滤吸附片2靠近所述出液口处设置。
详细的,还包括外壳4,所述滤芯管1和收集管3均设于所述外壳4内,在本实施例中,所述外壳4的开口处还设有上盖,所述上盖盖合于所述外壳4的顶端开口处。
请参照图2,本实施例还涉及一种纯化尿蛋白的方法,利用上述的纯化尿蛋白的装置进行纯化,包括以下步骤:
S1、制备尿蛋白沉淀试剂和尿沉淀蛋白复溶液,其中尿蛋白沉淀试剂冷存备用,可选的,尿蛋白沉淀试剂的冷存温度为-20℃;
S2、将样本与尿蛋白沉淀试剂充分混合形成混合液后静置;优选的,静置时间为10分钟;
S3、将步骤S2中静置后的混合液添加至滤芯管1中并将混合液进行离心处理,优选的,静置时间为十分钟;
S4、步骤S3中的混合液离心后,取收集管内3溶液,形成第一样品;
S5、将步骤S4中的第一样品可以进行代谢组学小分子物质检测。
可选的还包括步骤S3后的S31,滤芯管1更换另一收集管3,并在该滤芯管1中添加尿沉淀蛋白复溶液充分混均,静止5分钟;S32、取步骤S31中静置后的滤芯管离心,离心后收集管3中的溶液为第二样品,可以进行蛋白质组学分析,通过蛋白质组学分析可以对蛋白质进行进一步的分析和诊断。
在本实施例中,所述尿蛋白沉淀试剂为90%浓度的丙酮,所述尿沉淀蛋白复溶液由Tris-HCl和甲酸配制而成,所述尿蛋白沉淀试剂在-20℃温度下预冷备用,尿沉淀蛋白复溶液室温下保存。
可选的,所述Tris-HCl的规格为0.1M,PH7.4,所述尿沉淀蛋白复溶液中甲酸浓度为30%。
详细的,步骤S2中样本与尿蛋白沉淀试剂的混合比例为1∶4。
详细的,步骤S2和步骤S31中的充分混合均可使用加样枪混合吹打混匀;步骤S3和步骤S32中的离心速度均为12000rpm/min,离心处理时间为五分钟,离心时环境温度为4℃。
请参照图3,图3示例图中由上至下的蛋白质分子量大小依次为:220KD,135KD,90KD,66KD,45KD,35KD,29KD,20KD,14KD。结合图4和图5,图4和图5的左边为样本尿蛋白SDS-PAGE凝胶电泳处理前的效果图,图4的右边为样本尿蛋白SDS-PAGE凝胶电泳处理后的效果图,通过明显的对比可以看到,尿液经过处理后的效果图,清除了大部分的蛋白干扰,样本可以重复处理,进一步清除多余的干扰蛋白质,直到满意,便于后续的分析和研究。
综上所述,本发明提供的纯化尿蛋白的装置,滤芯管与收集管之间设有过滤吸附片,过滤吸附片能够过滤沉淀蛋白以及吸附可溶性小分子肽,极大地简化临床生物样本的前处理,便于纯化样本中的蛋白质,减少操作难度。
以上所述仅为本发明的实施例,并非因此限制本发明的专利范围,凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换,或直接或间接运用在相关的技术领域,均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (9)
1.一种纯化尿蛋白的装置,其特征在于:包括滤芯管、过滤吸附片和收集管,所述滤芯管的出液口处设有所述收集管,所述过滤吸附片设于所述滤芯管内,所述过滤吸附片包括层叠设置的硝酸纤维素膜和玻璃纤维衬垫。
2.根据权利要求1所述的纯化尿蛋白的装置,其特征在于:所述硝酸纤维素膜的孔径为0.45μm,所述玻璃纤维衬垫的厚度为1.5mm。
3.根据权利要求1所述的纯化尿蛋白的装置,其特征在于:所述过滤吸附片靠近所述出液口处设置。
4.根据权利要求1所述的纯化尿蛋白的装置,其特征在于:还包括外壳,所述滤芯管和收集管均设于所述外壳内。
5.一种纯化尿蛋白的方法,利用权利要求1-4任一项所述的纯化尿蛋白的装置进行纯化,其特征在于:包括以下步骤:
S1、制备尿蛋白沉淀试剂和尿沉淀蛋白复溶液,其中尿蛋白沉淀试剂冷存备用;
S2、将样本与尿蛋白沉淀试剂充分混合形成混合液后静置;
S3、将步骤S2中静置后的混合液添加至滤芯管中并将混合液进行离心处理;
S4、步骤S3中的混合液离心后,取收集管内溶液,形成第一样品;
S5、步骤S4中的第一样品可以进行代谢组学小分子物质检测。
6.根据权利要求5所述的纯化尿蛋白的方法,其特征在于:还包括步骤S3后的S31,滤芯管更换另一收集管,并在该滤芯管中添加尿沉淀蛋白复溶液充分混均,静止5分钟;S32、取步骤S31中静置后的滤芯管离心,离心后收集管中的溶液为第二样品,可以进行蛋白质组学分析。
7.根据权利要求5所述的纯化尿蛋白的方法,其特征在于:所述尿蛋白沉淀试剂为90%浓度的丙酮,所述尿沉淀蛋白复溶液由Tris-HCl和甲酸配制而成。
8.根据权利要求5所述的纯化尿蛋白的方法,其特征在于:步骤S2中样本与尿蛋白沉淀试剂的混合比例为1∶4。
9.根据权利要求5所述的纯化尿蛋白的方法,其特征在于:步骤S1中冷存温度为-20℃。
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