DE2145928A1

DE2145928A1 - Antibakteriell Mittel

Info

Publication number: DE2145928A1
Application number: DE19712145928
Authority: DE
Inventors: Leonard Bruce Clay N Y Crast jun (V St A)
Original assignee: Bristol Myers Co
Current assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1970-09-14
Filing date: 1971-09-14
Publication date: 1972-03-23
Also published as: CH564025A5; ES395083A1; GB1366098A; DK138746B; DK138746C; FR2106501A1; FR2106501B1; NL7112483A; BE772592A; JPS523948B1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue synthetische Verbindungen, welche als antibakterielle Mittel, als Beifuttermittel zu ! Tierfutter, als Mittel zur Behandlung von Mastitis beim Rindvieh und als therapeutische Mittel zur Behandlung von . ^ Infektionskrankheiten bei Geflügel und anderen Tieren, sowie beim ,Menschen, welche durch viele grampositive und gramnegative
Bakterien verusacht werden, insbesondere durch orale Verab- | reichung, wertvoll sind. !

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■ Insbesondere betrifft die. vorliegende Erfindung gewisse j 7-[D-(a-Amino-a-phenylacetamido)]-3-subst.-3-cephem-4-

! carbonsäuren, deren nicht-toxische pharmazeutisch verträgliche I Salze und das Verfahren zu deren Herstellung.

j Cephalotin und Cephaloridin sind bekannte antibakterielle Mittel, US-Patentschriften 3 218 318, 3 449 338 und 3 498 979. Die Literatur enthält auch viele Daten über die Aktivität · von Cephaloglycin und Cephalexin, US-Patentschriften 3 303 193 und 3 507 861, britische Patentschriften 985 747 und 1 054 806. Zu den neueren Cephalosporinen gehören Cefazolin und Cephapirin, US-Patentschrift 3 516 997 [und auch niederländische Patentschrift 68/05179 (Farmdoc 34 328) und südafrikanische Patentschrift 68/4513] und US-Patentschrift 3 422 100.

Die Literatur über Cephalosporine wurde von E.P. Abraham, Quart. Rev. (London) 21, 231 (1967), von E. Van Heyningen, Advan. Drug. Res. 4,1-70 (I967) und kurz in Annual Reports in Medicinal Chemistry, Academic Press, Inc. Ill Fifth Avenue, New York, N.Y. 10003, von L.C. Cheney auf Seiten 96 und 97

(1967) und von K. Gerzon und R.B. Morin auf Seiten 90 bis 93, _;

(1968) zusammengefaßt. Über neue Cephalosporine wird häufig j auf der jährlichen Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy berichtet, wie von Sassiver et al. j Antimicrobial Agent and Chemotherapy - I968, American Society j for Microbiology, Bethesda, Maryland, Seiten 101 bis 114 (I969) und von Nishida et al., ibid, 236 bis 243 (1970).

■ *

■ Die Herstellung von verschiedenen 7-[a-Amino-arylacetamido]-cephalosporansäuren und der entsprechenden Desacetoxyverbindungen_P worin Aryl unsubstituiertes oder substituiertes Phenyl, oder 2- oder 3-Thienyl bedeutet, wird beispielsweise in den britischen Patentschriften 985 747, 1 017 624, 1 054 806 und 1 123 333, in der belgischen Patentschrift 696 026 (Farmdoc j 294 494) in den USA-Patentschriften 3 311 621, 3 352 858, j

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3 489 750, 3 489 751, 3 489 752 und 3 518 260, in der ; japanischen Patentschrift 16871/66 (Farmdoc 23 231), von , Spencer et al. J. Med. Chem. 9 (5), 746-750 (1966) und von

Kurita et al. J. Antibiotics (Tokyo) (A) 19, 243-249 (1966) s sowie in der USA Patentschrift 3 485 819 beschrieben.

Die niederländischen Patentschriften 68/11676 (Farmdoc 36 349) und 68/12382 (Farmdoc 36 496) und die USA-Patentschriften 3 489 750 und 3 489 751 beschreiben ringsubstituierte ' | Cephaloglycine. ■

Es wurde über verschiedene 7-[oc-Amino-arylacetamido]-cephalosporine berichtet, worin ein Wasserstoffatom der oc-Aminogruppe j durch eine Carbonylgruppe ersetzt wird, welche wiederum an ' einen anderen Rest gebunden ist. Die ersten waren die Cephaloglycin- und Cephalexin-Vorlaufer, worin eine gemeinsame | Peptidblockierungsgruppe, wie Carbobenzyloxy verwendet wurde, wie in der USA-Patentschrift 3 364 212, der belgischen Patentschrift 675 298 (Farmdoc 22 206), der südafrikanischen i Patentschrift 67/1260 (Farmdoc 28 654) und der belgischen j Patentschrift 696 026 (Farmdoc 29 494) beschrieben. Zu den verwandten Verbindungen gehören die der· USA-Patentschriften 3 303 193, 3 311 621 und 3 518 260. I

Verschiedene Cephalosporine, darunter auch gelegentlich ! Cephalosporin C, aber nicht Cephaloglycin, wurden mit ; nukleophilen aromatischen Mercaptanen umgesetzt, wobei sich Verbindungen der Formel

Acyl - NH - CH—CH CH₂

O=C-N C-CH₉-S-Ar

COOH ergeben. - 3 -

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■ . ■ Λ ■ 2U5928

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In der USA-Patentschrift 3 278 531 bedeutet Ar Phenyl oder gewisse substituierte Phenyle oder gewisse aromatische heterocyclische Ringe, die beispielsweise in Spalte 5 aufge-. führt sind. Ähnliche Nukleophile, zum Beispiel 2-Mercaptopyrimidine, sind in der USA-Patentschrift 3 261 832 und der britischen Patentschrift 1101 422 und in d,en USA-Patentschriften 3 479 350 und 3 502 '665, die alle an Glaxo erteilt sind, beschrieben. Eine parallele Beschreibung findet sich in der britischen Patentschrift 1 109 525 der Ciba, z.B." in der ι Definition "h" für R,. Weitere Nukleophile dieser Art werden j von Fujisawa in'der belgischen Patentschrift 714 518 (Farmdoc 35 307, Niederlande 68/06129 und Süd Afrika 2695/68), in der kanadischen Patentschrift 818 501 (Farmdoc 38 845) in I. der britischen Patentschrift 1 187 323 (Farmdoc 31 936, Niederlande 67/14888) in den USA-Patentschriften 3 530 123 ι und 3 516 997 (Farmdoc 34 328) in der niederländischen Patentschrift 68/05179, welche eine Verbindung mit der Bezeichnung j Cefazolin umfaßt, die eine Tetrazolylacety!-Seitenkette an der 7-Aminogruppe und eine 5-Methyl-thiadiazolylthiomethyl- : gruppe in 3-Stellung trägt und ausführlich in der wissenschaftlichen Literatur, beispielsweise in Antimicrobial Agents and Chemotherapy - 1969> American Society for Microbiology, Bethesda, Maryland, auf Seiten 236 bis 243 und in J. Antibiotics (Japan) 23 (3), 131-148 (1970) beschrieben ist, beschrieben.

Verschiedene Cephalosporine mit der Struktur

Acyl - NH - CH CH CH,

0 = c—-N C - CH₂ - S - Alkyl

COOH

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O = C N C- CH₉. - X

COOH

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worin Acyl verschiedene Seitenketten, einschließlich a-Amino-Phenylacetyl bedeutet, werden in einigen der oben genannten Patentschriften und in der belgischen Patentschrift 734 532 (Farmdoc 41 619) und in der belgischen Patentschrift 734 533 (Farmdoc 41 620) beschrieben. _t

Cephalosporine mit der Struktur

Acyl - NH - CH CH CH₂ j

worin X

Il

-S-C-

It

-S-C-

umfaßt, werden in einigen der oben genannten Patentschriften und in den USA-Patentschriften 3 239 515, 3 239 516, 3 243 435, ! 3 258 461, 3 431 259 und 3 446 803 beschrieben.

Zu den verwandten Veröffentlichungen in der wissenschaftlichen Literatur gehören J. Med. Chem. 8, 174-181 (1965) und J. Chem. Soc. (London) 1595 - 1605 (1965), 5015-5031 (1965) und ■ 1959-1963 (1967).

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Die vorliegende Erfinduiig schafft eine Verbindung der Formel (I)

Il

CH-C-NH-CH — CH

Il

!worin A eine Gruppe der Formel

N-

-C

•C - CH,

oder

CH,

C - CHo - S - A

N N

Il Il

- C C-CH,

oder

N-

- C

C - CH-

CH

bedeutet,

mit der D-Configuration in der Seitenkette, und die nichttoxischen, pharmazeutisch verträglichen Salze davon. Diese Verbindung

liegt vor allem als Zwitterion vor. ;

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Zu den Salzen gehören die nicht-toxischen Carbonsäuresalze davon einschließlich nichttoxischer Metallsalze, wie Natrium-, Kalium-, Kalzium- und Aluminiumsalz, des Ammoniumsalzes und substituierter Ammoniumsalze, beispielsweise Salze, wie nicht-toxische Amine, wie Trialky!amine, einschließlich Triäthylamin, Procain, Dibenzylamin, N-Benzyl-beta-phenäthylamin, 1-Ephenamin, N,N-^!-Diben-zyläthylendiamin,' Dehydroabietylamin, Ν,Ν'-bis-Dehydroabietyläthylendiamin, N-Niedrigalkylpiperidin, beispielsweise N-Äthylpiperidin und andere Amine, die zur Salzbildung mit Benzylpenicillin verwendet wurden, und die nicht-toxischen Säureadditionssalze davon ( d.h. die Aminsalze) einschließlich der anorganischen Säureadditionssalze, wie Hydrochlorid, Hydrobromid, Hydrojodid, Sulfat, SuIfamat und Phosphat und der organischen Säureadditionssalze, wie Maleat, Acetat, Citrat, Oxalat, Succinat, Benzoat, Tartrat, Fumarat, Malat, Mandelat, Ascorbat und ähnlicher.

Die vorliegende Erfindung schafft auch ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I)

0 η

-CH - C - NH - CH

NH,

Il

CH

(D

COOH

C-CHo-S-A

worin A eine Gruppe der Formel

C - CH,

Il

oder N

- C

C - CH,

oder

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2H5928

N C - CH* bedeutet,

Ii Ii

- C CH

mit der D-Configuration in der Seitenkette, und der nicht-' toxischen pharmazeutisch verträglichen Salze davon, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man eine Verbindung der Formel (II)

' H₂N - CH CH CHo

C _N "C-CHo-S-A

O ^ ι

COOH

j worin A die oben angegebenen Bedeutungen besitzt (oder .ein j Salz oder einen leicht hydrolysierbaren Ester davon, einschließjlich der der USA-Patentschrift 3 284 451 und eines beliebigen der Silylester, die in der USA-Patentschrift 3 249 622 zur Ver- *wendüng mit 7-Aminopenicillansäure beschrieben sind und in der britischen Patentschrift 1 073 530 verwendet werden) j mit einer speziellen Säure oder deren funktionellem Äquivalent als Acylierungsmittel für eine primäre Aminogruppe ι iumsetzt. Nach der Umsetzung wird die Blockierungsgruppe ent-¹fernt, wobei sich das gewünschte Produkt ergibt. Die genannte \ ' i

Säure hat die Formel

CH - COOH ί NHB - 8 -

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H/11683 ^{3 2U5928}

worin B eine Blockierungsgruppe der Art bedeutet, wie sie entweder in der Peptidsynthese oder in irgendeiner der zahlreichen Synthesen von α-Aminobenzylpenicillin aus 2-Phenylglycin verwendet wird. Besonders wertvolle Blockierungsgruppen sind ein Proton, wie in der Verbindung der Formel ' . ₍

Il

-CH-C — Cl

NH₂-HCl

oder ein ß-Diketon wie in der britischen Patentschrift 1 123 333, beispielsweise Methylacetoacetat, in welchem Fall die Säure, die die blockierte Aminogruppe enthält, vorzugsweise, beispielsweise mit Äthylchlorformiat, in ein gemischtes Anhydrid umgewandelt wird, bevor sie mit Verbindung II oder einem Salz davon umgesetzt wird, wobei sich nach Säurespaltung das gewünschte Produkt ergibt.

Die während der Umsetzung mit Verbindung II für die freie Aminogruppe der Seitenkettensäure verwendeten Blockierungsgruppen werden dann entfernt, wobei sich die erfindungsgemäßen Produkte ergeben. Beispielsweise werden die t-Butoxy-carbonylj gruppe durch Behandlung mit Ameisensäure, die Carbobenzyloxygruppe durch katalytische Hydrierung, die 2-Hydroxy-lnaphthcarbonylgr.uppe durch saure Hydrolyse und die Trichloräthoxycarbonylgruppe durch Behandlung mit Zinkstaub in Eisessig entfernt. Natürlich können auch andere funktionell äquivalente Blockierungsgruppen für eine Aminogruppe verwendet werden und solche Gruppen sind ebenfalls Teil dieser Erfindung.

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Zu den funktionellen Äquivalenten der Säure, die zur Umsetzung mit Verbindung II verwendet werden, gehören die entsprechenden Säureanhydride, einschließlich gemischter Anhydride und insbesondere die gemischten Anhydride, die aus stärkeren Säuren, wie den niedrigaliphatischen Kohlensäuremonoestern, oder Alkyl- und Arylsulfonsäuren, oder sterisch gehinderteren Säuren, wie Diphenylessigsäure.j hergestellt werden.Außerdem kann ein Säureazid oder ein aktiver Ester oder Thioester j (beispielsweise mit p-Nitrophenol, 2,4-Dinitrophenol, Thioph,enolj Thioessigsäure) oder die freie Säure selbst mit der Verbindung II umgesetzt werden, nachdem man zuerst die genannte freie : Säure mit N,N'-Dimethylchlorformiminiumchlorid umsetzt ' [Britische Patentschrift 1 008 170 und Novak und Weichet, · iExperientia XXI, 6 360, (1965)] oder unter .Verwendung von j Enzymen oder eines Ν,Ν'-Carbonyldiimidazols oder eines Ν,Ν'-Carbonyl-ditriazols (südafrikanische Patentschrift 63/2684) oder eines Carbodiimid Reagens [insbesondere N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid, N,N'-Diisopropylcarbodiimid oder N-cyclohexyl-N'-(2-morpholino-äthyl)-carbodiimid, Sheehan und Hess, J. Amer. Chem. Soc. 77, 1067 (1955)] oder eines Alkylylamin Reagens [R. Buijle und H.G. Viehe, Angew. Chem. International Edition 3, 582 (1964)] oder eines Ketenimin Reagens [C. L. Stevens und M. E. Mond, J. Amer. Chem. Soc, 80, (4065)] oder eines Isoxazoliumsalz Reagens [R.B. Woodwar, R.A. Olofson und H. Mayer, J. Amer. Chem. Soc. 83, 1010 (I96I)]. Ein anderes Äquivalent des Säurechlorids ist ein entsprechendes Azolid, das heißt, ein Amid der entsprechenden Säure,d essen Amidstickstoff ein Glied eines quasi aromatischen fünfgliedrigen R,inges ist, der mindestens zwei Stickstoffatome enthält, das heißt, Imidazol, Pyrazol, die Triazole, Benzimidazol, Benzotriazol und deren substituierte Derivate. Als Beispiel für die allgemeine Methode zur Herstellung eines Azolids, wird Ν,Ν'-Carbonyldiimidazol mit einer Carbonsäure in äquimolarem Verhältnis bei Raumtemperatur in Tetrahydrofuran, Chloroform, Dimethylformamid oder einem ähnlichen inerten Lösungsmittel umgesetzt, wobei sich das

i - 10 -

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Carbonsäureimidazolid in praktisch quantitativer Ausbeute unter Freisetzung von Kohlendioxyd und 1 Mol Imidazol ergibt. Dicarbonsäuren ergeben Diimidazolide. Das Nebenprodukt, Imidazol, fällt aus und kann entfernt werden und das Imidazolid kann isoliert werden, aber dies ist nicht wesentlich. Die Verfahren zur Durchführung dieser Reaktionen zur Herstellung eines Cephalosporins und die Verfahren zur ^! Isolierung des so hergestellten Cephalosporins sind nach dem_j Stand der Technik bekannt.

Bei der Behandlung von bakteriellen Infektionen beim Menschen : werden die erfindungsgemäßen Verbindungen oral oder parenteral nach den üblichen Verfahren zur Verabreichung von Antibiotika in einer Menge von etwa 5 bis 200 mg/kg/Tag und vorzugsweise von etwa 5 bis 20 mg/kg/Tag in mehreren , Dosen, beispielsweise drei- bis viermal täglich, verabreicht. Sie werden in Dosierungseinheiten verabreicht, die beispielsweise 125 oder 250 oder 500 mg aktiven Bestandteil mit geeigneten physiologisch verträglichen Trägern oder Hilfsmitteln enthalten. Die Dosierungseinheiten liegen in Form von flüssigen Präparaten, wie Lösungen oder Suspensionen, oder in fester Form in Tabletten oder Kapseln vor.

Genau 200 g 7-Aminocephalosporansäure (7-ACA) werden in 500 ml Aceton suspendiert und eine Lösung von 240 g p-Toluolsulfonsäure in 500 ml Aceton wird auf einaml zugegeben. Nachdem man j 5 Minuten bei Raumtemperatur gerührt hat wird die Mischung 'durch Diatomeenerde filtriert ("Super CeI") und das Bett wird mit 150 ml Aceton gewaschen (das unlösliche Material wiegt eta 30 g). Dann werden 80 ml Wasser zu dem Filtrat gegeben und unter Rühren kristallisiert das p-Toluolsulfonat aus, nachdem man die Innenwand des Kolben mit einem Glasstab gekratzt hat. Die Suspension wird 30 Minuten in einem Eis-Salz-Bad gerührt und kalt filtriert. Man wäscht mit 2 mal 200 ml • kaltem Aceton (O⁰C) und trocknet an der Luft. Ausbeute 250 g Salz. Dieses p-Toluolsulfonatsalz von 7-ACA

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/ft

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wird in 2 Liter Methanol gerührt und das unlösliche Material wird durch "Super-Cel" abfiltriert. Das Filtrat wird in einen 5 Liter-3-Hals-Kolben gegeben und 2 Liter Wasser werden zugegeben. Dann stellt man den pH durch Zugeben von konzentriertem Ammoniumhydroxyd unter Kühlen auf 4 ein und rührt die Suspension 1 Stunde bei O⁰C. Das Produkt wird durch Filtrieren gesammelt und mit 2 mal 100 ml H₂O (0°C) und 3 mal 1 Liter Aceton (Raumtemperatur) gewaschen. Nach Trocknen an der Luft beträgt die Ausbeute an 7-ACA 145 g.

Literatur: Glaxo, britisches Patent 1 104 938 (1968).

Die nachfolgenden Beispiele sollen die Erfindung näher erläutern, sie jedoch nicht einschränken. Alle Temperaturen sind in ⁰C gemessen. 7-Aminocephalosporansäure wird mit 7-ACA und Methylisobutylketon mit MIBK abgekürzt. "Skellysolve B" ist eine Petrolatherfraktion mit einem Kp 60 bis 68⁰C und besteht im wesentlichen aus n-Hexan.

Beschreibung bevorzugter Ausführungsformen. Beispiel 1

, Natrium-D-α- [Q.-carbomethoxypropen-2-yl)-amino] -phenylacetat

Literatur: E. Dane, F. Oreis, P. Konrad, T. Dockner, Angew. Chem. Intern. Ed. Engl. 1, 658 (I962). E. Dane und T. Dockner Angew. Chem. 76, 342 (1964). Spencer, Flynn, Roeske, Sin und Chauvette, J. Med. Chem. 9, 746-50 (1966). USA-Patentschrift 3 496 171 (Lilly).

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/3 2U5923

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Zu einer gut gerührten Mischung von 40 g (l Mol) NaOH in 40 ml H₂O und 1 Liter Benzol gibt man 151,6 g (l Mol) D-(-)-Phenylglycin. Die Mischung wird 30 Minuten bei etwa ! 55⁰C gehalten und dann gibt man unter heftigem Rühren 1116 g (l Mol) Methylacetoacetat zu und die Mischung wird gerührt und zum Rückfluß erhitzt, bis in der Deän Stark Falle kein Wasser mehr gesammelt wird. Dann wird 1 Liter Aceton zugegeben, nachdem die Wärmequelle entfernt ist und ' ι die Aufschlämmung wird gekühlt und 30 Minuten in einem Eis-Salz-Bad gerührt. Das Produkt wird durch Filtrieren gesammelt, gut mit reichlichen Mengen Aceton gewaschen und Jan der Luft getrocknet. Die Ausbeute beträgt 191 g, Zers.-Punkt 252⁰C

₂₂oC [α] = + 207° (C = 1 96.HpO) 5-Mercapto-3-methyl-l , 2,4-thiadiazol

Literatur: Goerdeler et al. Chem. Ber. 90, 182-87 (1957).

16 g (0,17 Mol) Acetamidinhydrochlorid werden in 165 ml I Methylenchlorid suspendiert und dann werden 27 g (0,15 Mol) j Perchlormethylmercaptan zugegeben. Die Lösung wird unter j Verwendung eines Trockeneis-Aceton-Bades auf -8⁰C gekühlt (und 34 g (0,85 Mol) NaOH in 50ml Wasser werden tropfenweise ί zugegeben, wobei man die Temperatur zwischen -10°C und ! -8°C hält. Nach beendeter Zugabe wird die Lösung filtriert iund die organische Phase wird von dem Wasser getrennt. Die ίWasserschicht wird mit 3 mal 10 ml Methylenchlorid extrahiert und die vereinigten Methylenchloridlösungen werden bis zur -Neutralität mit Wasser gewaschen. Die Methylenchloridlösung ι wird über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum entfernt.

Das Produkt, 5-Chlor-3-methyl-l,2,4-thiadiazol bleibt als '.Öl zurück. Ausbeute 12 g. Dieses Öl wird bei 38°C und 10mm Hg ι destilliert, wobei sich 10 g farbloses Öl ergeben.

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, , ... 2U5928

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10 g- (0,075 Mol) 5-Chlor-3-methyl-l,2,4.-thiadiazol werden in 16 ml 100 %igem Äthanol gelö"st, gefolgt-von 6 g (0,08 Mol) Thioharnstoff und auf einem Dampfbad 1 1/2 Stunden erhitzt. Diese Lösung wird dann zu 4 g (0,1 Mol) NaOH in 100 ml H₂O gegeben und 5 Minuten zum Sieden erhitzt. Nach Abkühlen wird die Lösung filtriert und das Filtrat wird ,durch Zugabe von 6 η HCl auf pH 2 angesäuert. Es wird mit 4 mal 100 ml Äthyläther extrahiert und nachdem der Äther über Natriumsulfat getrocknet ist wird die Lösung im Vakuum zur Trockne eingedampft und das sich ergebende feste 5~Mercapto-3-methyl-l,2,4-thiadiazol wird aus H₂O umkristallisiert. Ausbeute 3 g, F = bis 148⁰C.

Analyse C^Hr₁N₉S₉:

	C	25	3	H	N	20	S	50
berechnet:	27,	60	3	,05	21,	28	48,	78
gefunden:	27,		,40	21,	46,

7-Amino-3-(3-methyl-l,2,4-thiadiazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (II)

7,5 g (0,027 Mol) 7-ACA werden in 150 ml 0,1 molarem Phosphatpuffer mit pH 6,4 gelöst, wonach 4,5 g (0,027 Mol) NaHCO, zugegeben werden. Dann werden 3,9 g (0,03 Mol) 5-Mercapto-3-methyl-l,2,4-thiadiazol zugegeben und unter mäßigem Rühren wird die Lösung auf 60⁰C erhitzt. Bei 60°C wird der pH durch Zugabe von NaHCO-, wieder auf 6,4 eingestellt. Die Lösung wird 4 Stunden bei 60⁰C gehalten. Am Ende der Erwärmungszeit kristallisiert das Produkt aus und nachdem man die Lösung 1 Stunde in einem Eisbad auf O⁰C gekühlt hat, wird es durch Filtrieren gesammelt, mit kaltem Wasser gewaschen und an der Luft getrocknet. Man erhält 7 g, F = 200⁰C (

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i M/11683 Analyse

^J3

2H5928

C	,35	,H	51	N	27
38	,92	3,	71	16,	86
37	3,	15,

berechnet:
gefunden:

7- [ D- (oc-Amino-oc-phenylacetamido) ] -3- (3-methyl-l, 2,4- thiadiazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure

Zu einer gerührten Suspension von 6,25 g (0,023 Mol) Natrium-D-(X-[CL-carbomethoxypropen-2-yl)-amino]-phenylacetat in 70 ml Acetonitril und 2 Tropfen N,N-Dimethylbenzylamin werden bei -10⁰G 3 g (0,027 Mol) Äthylchlorformiat gegeben und man rührt weitere 10 Minuten bei -10⁰C. Dann wird e'ine Lösung von 7,9 g (0,023 Mol) 7-Amino-3-(3-methyl-l,2,4-thiadiazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure in 30 ml Acetonitril und 3,4 ml (0,024 Mol) Triäthylamin, vorgekühlt auf O⁰C, auf einmal zugegeben und man rührt weitere 30 Minuten bei O⁰C. Schließlich wird Salz (NaCl) in Überschuß zugegeben, um die Lösung zu sättigen. Dies dauert 15 Minuten. Die organische Schicht (oben) wird abgetrennt und dazu werden 25 ml HpO gegeben und die Lösung wird unter verringertem Druck auf ein Volumen von etwa 35 ml konzentriert. Dann wird eine Lösung von 75 ml MIBK und 9 ml Ameisensäure zugegeben und die Mischung wird 30 Minuten bei 0⁰C gerührt. Es werden dann 8 g eines halbfesten Stoffes abfiltriert und mit 30 ml Acetonitril gerührt, bis sich ein filtrierbarer Feststoff bildet. Dieser wird durch Filtrieren gesammelt, mit Acetonitril gewaschen und an der Luft getrocknet. Ausbeute 7 g. Dieses Material wird fein gemahlen und in 100 ml Wasser suspendiert, wozu man 10 ml 40 %ige Η,ΡΟ^ gibt, nach 15 Minuten filtriert man die unlöslichen Stoffe ab, rührt das Filtrat 10 Minuten mit 2 g "Darko KB" Aktivkohle und filtriert erneut ab. Der pH des Filtrats wird mit NaHCO, auf 3,5 eingestellt. Das Produkt beginnt zu kristallisieren und nachdem man 1 Stunde auf O⁰C gekühlt hat wird das Material durch Filtrieren gesammelt, mit

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214592?

20 ml kaltem Wasser und dann mit großen Mengen Aceton gewaschen und an der Luft'getrocknet. Nachdem man 12 Stunden im Vakuum über P₂Oc getrocknet hat erhält man 1,75 g , Zers. etwa bei 160⁰C. Das IR-Spektrum steht im Einklang mit der gewünschten Struktur.

Analyse C₁₉H₁₉N₅O₄S₃

	C	36	H	51	N	62	%
berechnet:	44,	57	4,	75	13,	22	%
gefunden:	44,	4,	13,

7-[D-(a-Amino-a-phenylacetamido)]-3-(3-methyl-l,2,4-thiadiazol- j 5-ylthio)-methyl-3-cephem-4-carbonsäure (genannt neue Verbindung!), zeigt nach Lösen in Dimethylsulfoxyd (DMSO) und anschließender Verdünnung mit Nährbrühe die folgenden minimalen Hemmkonzentrationen in γ/ml gegen die angegebenen Mikororganismen, bestimmt durch Inkubation über Nacht bei 37⁰C durch Reihenverdünnung.

Ergebnisse mit 4 bereits bekannten Verbindungen sind gleichzeitig aufgeführt.

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Tabelle

ro ο co co

	A9585	MIC in	γ/ml	% Antibiotika-Testbrühe	(MIC =	minimale	Hemmkon ζ entra	tion
Organismus	A9604	Neue Verbindung	Cephalexin	Cephalo glycin	Cepha lothin	Cephalo ridin
D. pneumoniae + 5 % Serum	A9537	0,4	1,3	0,3	0,08	0,008
Str. pyοgenes + ~5 % Serum*	A9537	. 0,16	0,3	o,16	o,08	0,008
S. aureus Smith	A9606	0,3	1,3	1,3	0,08	0,03.
S. aureus Smith + 50 % Serum	A9606	8	2,5	2,5	0,3	0,03
S. aureus BX1633-2 bei 10"° Verd.	A15097	1,3	4	0,6	0„3	0,3
S. aureus BX1633-2 bei 10"^ Verd.	A9531		8		0,6	10
S. aureus meth.- resistent	A15119	2	32	2	1,3	0,6
Sal. enteritidis	A9675	0,3	4	0,3	0,3	0,6
E. coli Juhl	A9977	8	8	1	4	1
E. coli	A15130	8	16	4	16.	1
K. pneumoniae	A9900	2	4	0,6	1 ·	1,3
K. pneumoniae	A15153	8	8	1	8	2
Pr. mirabilis	A9843A	2	4	0,6	1	2,5
Pr. morganii	A20019	4	>125	16	>250	250	*CTi*
P. aeruginosa	250	>125	250	>250	> 250	KJ 1 co
Ser. marcescens	250	>125	250	>250	250	ro OO
⁺ 50 % Nährbrühe + 45

M/11683

2-Mercapto-5-methyl-l,3,4-oxadiazol

Literatur: E. Hoggarth, J. Chem. Soc. 4811-17 (1952).

14,8 g (0,4 Mol) Acethydrazid_v 45,6 g (0,6 Mol) Schwefelkohlenstoff und 33,6 g (0,6 Mol) KOH in 200 ml 100 #igem Äthanol werden vereinigt und 2,5 Stunden bei 38°C und dann 18 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Produkt wird abfiltriert und aus 100 %igem Äthanol mit einer kleinen Menge Wasser umkristallisiert. Ausbeute 38 g 2-Acetyldithiocarbazinat-Kaliumsalz.

38 g (0,2 Mol) Kalium-2-acetyldithiocarbazinat werden zu 100 ml trockenem Pyridin gegeben und 18 Stunden am Rückfluß gehalten. Dann gibt man 300 ml HoO zu und stellt den pH durch Zugeben konzentrierter HCl auf 2 ein. Nach Abkühlen filtriert man ab und extrahiert das Filtrat 7 Stunden lang kontinuierlich mit Äthyläther. Der Äther wird über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum entfernt, wobei sich das Produkt ergibt. Man kristallisiert aus Benzol-"Skellysolve B" um. Farblose Plättchen, F = 78 bis 79⁰C, Ausbeute 17 g.

Analyse 0,H^N₂OS

	C	02	H	47	N	12	3	,61	%
berechnet:	31,	05	3,	46	£4,	27	27	,94	%
gefunden:	31,	3,	24,	26

7-Amino-3-(5-methyl-l,3,4-oxadiazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (II)

Man löst zuerst 24 g (0,09 Mol) 7-ACA in 450 ml 0,1 molarem Phosphatpuffer mit pH 6,4 und dann 15 g (0,18 Mol) Natriumbicarbonat. Dann gibt man 9,5 g (0,09 Mol) 2-Mercapto-5-methyl-

- 18 -209813/1731

^2U5928

	C	23
berechnet:	40,	60
gefunden:	39,

1,3,4-oxadiazol zu und erhitzt die Lösung unter mäß.igem Rühren auf 60⁰C + 0,5 ⁰C. Bei 60⁰C wird der pH gemessen und man gibt weiteres Natriumbicarbonat zu, um den pH wieder auf 6,4 einzustellen. Die Lösung wird unter Rühren 4 Stunden auf 60⁰C + 0,5⁰C erhitzt. Dann, gibt man 18 g "D,arko KB" zu und rührt 15 Minuten weiter. Die Lösung wird dann heiß filtriert und man erhält eine klare Lösung. Der pH wird durch Zugeben von 3 η HCl auf 4,5 eingestellt. Nachdem man in einem Eisbad 1 Stunde auf O⁰C abgekühlt hat wird das Produkt abfiltriert und mit kaltem Wasser gewaschen. Nach Trocknen an der Luft erhält man 5,1 g, F = 240⁰C (Zers.).

Analyse ⁰IiH₁₂N^S₂

H N

3,70 17,06 96

4,18 15,85 96

j korrigiert für 0,7 % H₂O.

j Die IR- und NMR-Spektren standen im Einklang mit dem Produkt.

! 7- (D-oc-Amino-a-phenylacetamido)-3- (5-methyl-l,3,4- : oxadiazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (I)

Zu einer gerührten Suspension von 6,25 g (0,023 Mol) Natrium- . D-a-Kl-carbomethoxypropen-2-yl)-amino]-phenylacetat in 70 ml Acetonitril und 2 Tropfen N,N-DimethyIbenzylamin von -10°C ; werden 3 g (0,027 Mol) Äthylchlorformiat gegeben und man ! rührt 15 Minuten bei -10°C weiter. Dann wird eine Lösung von 7,54 g (0,023 Mol) 7-Amino-3-(5-methyl-l,3,4-oxadiazol-2- i ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure in 30 ml Acetonitril, 30 ml H₂O und 3,4 ml (0,024 Mol) Triäthylamin auf O⁰C vorge- ! kühlt, auf einmal zugegeben und man rührt weitere 30 Minuten \ bei O⁰C. Salz (NaCl) wird in Überschuß zugegeben, um die

- 19 - .

209813/1731

M/11683

20 2U5928

Lösung zu sättigen (15 Minuten lang), die organische Schicht ;wird abgetrennt und dazu werden 25 ml H₂O gegeben. Die sich ;ergebende Lösung wird im Vakuum bei 22⁰C auf ein Volumen von etwa 35 ml konzentriert. Zu dieser wässrigen Lösung gibt man eine Lösung von 9 ml 90 %lger Ameisensäure in 75 ml MIBK (Methylisobutylketon) und rührt die Mischung 30 Minuten lang. -4g Feststoffe werden abfiltriert und an der Luft getrocknet. Dieses Material wird 15 Minuten in 35 ml HoO und 5 ml 40 %iger Η,ΡΟ^ aufgeschlämmt, filtriert und das Piltrat wird weitere '15 Minuten mit 2 g "Darko KB" Aktivkohle gerührt erneut abfiltriejrt und schließlich wird der pH-Wert mit NaHCO, auf 3,2 einge- W stellt. Eine kleine Menge kristallines Material wird abfiltriert und verworfen. Das Filtrat wird bei vermindertem Druck (22°C) leicht konzentriert und es fällt ein gummiartiger Feststoff aus. Die Mischung wird auf 50⁰C erhitzt, woraufhin das Material (Feststoffe) rasch kristallisiert. Nach langsamem Abkühlen auf Raumtemperatur erhält man 1,24 g kristallines weißes Material, Zersetzungspunkt 165⁰C

7-[D-(a-Amino-a-phenylacetamido)]-3-(5-methyl-l,3,4-oxadiazoli2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (genannt neue Verbindung) hat nach Lösung in 5 %iger NaHCO-* und anschließender Ver- ' I dünnung mit Nährbrühe die folgenden minimalen Hemmkonzentrationen iin γ/ml gegen die angegebenen Mikroorganismen, wie durch j Inkubation über Nacht bei 37⁰C durch Reihenverdünnung festgestellt wird. Die Ergebnisse mit 4 bekannten Verbindungen sind i

ebenfalls angegeben. ' !

- 20 209813/1731

Tabelle I B
MIC in γ/ml

* 50 % Nährbrühe +

% Antibiotika-Testbrühe

Organismus	A9585	Neue Verbindung	Cephalexin	Cephalo glycin	Cepha- lotin	Cephalo ridin
D. pneumoniae + 5 % Serum	A9604	0,13	1,3	0,3	0,08	0,008
Str. pyogenes + 5 % Serum*	A9537	0,25	0,3	0,16	0,08	0,008
S. aureus Smith	A9537	1,3	1,3	1,3	0,08	0,03
¹ S. aureus Smith iv> + 50 % Serum	A9606	>5	2,5	2,5	0,3	0,03
, S. aureus BX1633-2		2,5	4	0,6	0,3	0,3
bei ΙΟ""-* Verd.	A15097
S. aureus meth.- resistent	A9531	5	32	2	1,3	0,6
SaI.enteritidis	A15119	0,6	4	0,3	0·,3	0,6
E. coli Juhl	A9675	4	8	1	4	1
E. coli	A9977	8	16	4	16	1
K. pneumoniae	A15130	1	4	0,6	1	1,3
K. pneumoniae	A9900	8	8	1	8	2
Pr. mirabilis	A15153	2	4	0,6	1	2,5
Pr. morganii	A9843A	16	>125	16	>250	250
P. aeruginosa	A20019	>250	>125	250	>250	>250
Ser. marcescens	>250	>125	250	>250	250

CD K) OO

m 2U5928

M/11683

4-Methyloxazol-2-thiol-(2-mercapto-4-methyl-l,3-oxazol)

ti

CH₃CCH₂OH - KCNS - HCl γ}

74,08 97,18

99,15

Zu einer gerührten Lösung von 87,6 g (0,9 Mol) Kaliuinthio- ! cyanat in absolutem Äthanol ('2 Liter, Erwärmen ist notwendig) j gibt man bei Raumtemperatur 90 ml konzentrierte Chlorwasser- \ stoff säure. Die Mischung wird kurz in Eis gekühlt und dann | unter leichtem Vakuum filtriert. Man gibt 44,4 g (0,6 Mol) Aceton zu dem Filtrat und erhitzt die Lösung 24 Stunden auf Rückflußtemperatur. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der feste Rückstand wird in 500 ml heißes Wasser J aligenommen. Das Produkt, 33,3 g, F = 148 bis 150⁰C kristalli- j siert beim Abkühlen. Eine zweite Fraktion von 6,9 g, F = 147 bis 149⁰C erhält man nach Abkühlen der Mutterlauge auf O⁰C. ; Dampft man das Filtrat im Vakuum zur Trockne ein und kristallisiert den Rückstand aus Wasser-Äthanol (3:1, Aktivkohle) um, so erhält man eine dritte Fraktion von 7,9 g des Produkts, [ F = 146 bis 149°C. Im allgemeinen ist eine weitere Reinigung des Thiols nicht notwendig. Es kann jedoch aus Wasser/Äthanol (3 : 1) umkristallisiert werden, wobei sich ein Material mit '■■ einem Schmelzpunkt von 150 bis 152⁰C ergibt. [Lit.: F = 150 bis 152°, das zur Herstellung dieses Thiols verwendete Verfahren ist mit dem von CK. Bradsher und W. J. Jones jr., J. Org. Chem. £2, 2079 (1967) identisch]. ^:

- 22 -

209813/1731

" Ϊ3 2 H 59

Μ/11683

7-Amino-3-(4-methyl-l,3-oxazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (II)

13 6/10 g (0,05 Mol) 7-ACA werden zu 250 ml 0,1 molarem Phosphatpuffer mit pH 6,4 gegeben, wozu man dann unter Rühren 8,4 g (0,10 Mol) NaHCO^ gibt. Dann werden 5 g (0,055 Mol) ^! 2-Mercapto-4-methyl-l,3-oxazol zugegeben und die Mischung , wird 6 Stunden bei 55°C unter Stickstoffatmosphäre gerührt.

^; Während der Reaktion kristallisiert das Produkt aus und nachdem sie 6 Stunden erwärmt worden ist, wird die Aufschlämmung auf 22⁰C gekühlt und das Produkt, 7-Amino-3-(4-methyl-l,3-ioxazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsaure, wird durch '< Filtrieren gesammelt und mit kaltem Wasser und dann mit Aceton gewaschen und an der Luft getrocknet. Ausbeute 4,8 g, Zersetzung

'bei 210⁰C.

;Die IR- und NMR-Spektren stehen in völligem Einklang mit der gewünschten Struktur.

Analyse

	C	,06	H	05	N	84
berechnet:	44	,71	4,	22	12,	98
gefunden:	43	4,	12,

(korrigiert für 1,6 % H₂O, gefunden durch K.F. Methode)

■7-(D-a-Amino-a-phenylacetamido)-3-(4-methyl-l,3-oxazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure

:Zu einer gerührten Suspension von 4,06 g (0,015 Mol) Natrium- !D-α-[l-carboraethoxypropen-2-yl)-amino]-phenylacetat, fein gemahlen in 40 ml Acetonitril werden 2 Tropfen N,N-Dimethyl-

^: - 23 -

209813/1731

benzylamin gegeben, die Aufschlämmung wird auf -10°C gekühlt, dann werden 1,6 g (0,015 Mol) Athylchlorformiat zugegeben, und nach 15 Minuten wird unter heftigem Rühren auf einmal eine eiskalte Lösung von 4,8 g (0,015 Mol) 7-Amino-3-(4-methyl-l,3-oxazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure in 2,1 ml (0,015 Mol) Triäthylamin,- 20 ml H₂O und 20 ml Acetonitril zugegeben. Man hält die Temperatur 30 Minuten bei 0⁰C und gibt dann das Salz (NaCl) zu, um die Lösung zu · sättigen. Man entfernt die organische Schicht und gibt dazu 20 ml Wasser und den Großteil des im Vakuum bei 20⁰C entfernten Acetonitrils zu. D_Qnn gibt man eine Lösung von ■ 6 ml 90 %iger Ameisensäure in 50 ml Methylisobutylketon zu, j schüttelt die Mischung mehrere Minuten und kühlt sie dann j 2 Stunden unter Rühren auf O⁰C. Der sich ergebende Nieder- ! schlag wird durch Filtrieren gesammelt und durch Suspendieren j in 50 ml 10 $-iger H^PO^ kristallisiert. Die unlöslichen Stoffe ^! werden abfiltriert und das Filtrat wird mit 1 g Aktivkohle ₍ ("Darko KB") 10 Minuten gerührt, erneut filtriert und der i pH wird durch Zugeben von festem NaHCO- auf 3»5 eingestellt. : Ausbeute 540 mg 7-(D-a-Amino-a-phenyl-acetamido)-3-(4-methyl- ' l,3-oxazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure. Zers. Punkt 150⁰C. Das IR-Spektrum steht im Einklang mit der gewünschten

Struktur.	0N₄O₅S₂-H₂O:	C	10	H	45	N	69	H	2°
Analyse C₂qH₂		50,	77	4,	12	11,	41	3	,9
	berechnet:	50,		5,		11,		4	,5
	gefunden:

7- [ D- (α- Amino-oc-phenylace tamido) ] -3- (4-me thyl-1,3-oxazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (neue Verbindung genannt) hat nach Lösen in wässrigem NaHCO, und anschließender Verdünnung mit Nährbrühe die folgenden minimalen Hemmkonzentrationen in γ/ml gegenüber den angegebenen Mikroorganismen, bestimmt durch Inkubation über Nacht bei 37⁰C durch Reihianverdünnung. Die Ergebnisse mit drei bekannten Verbindungen sind ebenfalls angegeben.

- 24 -

209813/1731

Tabelle I C
M.I.C. in γ/ml

Organismus

Neue Cephalexin
Verbindung

Cephalothin Cephaloridin

	rv) Ul	D. pneumoniae + 5 % Serum*	A 9585	0,08	o,	16	0,04	0,004
to		Str. pyogenes + 5 % Serum*	A9604	0,08	o,	16	0,04	0,004
O ίο		S. aureus Smith	A9537	1,3	1,	3	0,08	0,016
CD		S. aureus Smith + 50 % Serum	A9537	2,5	1,	3	0,16	0,016 *
W —i m		S. aureus BX1633-2 · bei 10"·⁵ Verd.	A9606	1,3	2,	5	0,16	0,6
■»«3		S. aureus BX1633-2	A9606	8	8		0,3	16
		bei 10"² Verd.
		S. aureus meth.- resistent	A15097	4	16		0,6	0,6
		SaI. enteritidis	A9531	0,5	4		0,3	0,6
		E. coli Juhl	A15119	8	8		16	2
		E. coli	A9675	16	16		63 .	4
		K. pneumoniae	A9977	4	8		1	1
	K. pneumoniae	A1513O	' 16	16		32	2
	Pr. mirabilis	A9900	4	8		1	1
	Pr. morganii	A15153	63	>125		>125 -	>125
	P. aeruginosa Ser. marcescens	A9843A A20019	>125 >125	>125 >125		>125 >125	>125 >125

* 50 % Nährbrühe + 45 % Antibiotika-Testbrühe

M/11683 .JC 2H5928

Messungen des Blutspiegels bei Mäusen nach oraler Verabreichung haben folgende Ergebnisse:

CH-COiIH

R=

CH₂R

COOH

Blutspiegel in γ/ml

Dosis mg /kg.

0.5 1 2 .5.5

Stunden nach Verabreichung

-S-

N — C

U Ii

C N

- CH

100

55 50 20 20 ²⁸ , 20.3 12.4

14.06

8.18

3.56

- S

N N

CH,

20 5.3

Il

- CH,

(Cephalexin)

Il
- 0 - C - CH.

(Cephaloglycin)

100 12.3

100 50 20 .5 21.5 8.79

13.5

3.4 0.58

0.79 <0.l6

20 1.1

1.0

0.42

0.19

- 26 -

209813/1731

„/ΐζββΓ** 2Η5928

Beispiel 2

Natrium-7-[D-(α-amino-a-phenylacetamido)]-3-(3-methyl-l,2,4-thiadiazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat

Zu einer gerührten wässrigen Suspension der zwi.tterioni sehen Form von 0,8 Mol 7-[D-(a-Amino-a-phenylacetamido)]-3-(3-methyl-1,2,4-thiadiazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure gibt man 1 η wässriges Natriumhydroxyd bei Raumtemperatur, bis eine klare Lösung (pH 10,8) erhalten wird. Diese Lösung wird sofort gefriergetrocknet, wobei sich das unreine, feste Natrium-7-[D-(α-amino-a-phenylacetamido)]-3-(3-methyl-l,2,4-thiadiazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat ergibt.

Beispiel

Natrium-7-[D-(α-amino-a-phenylacetamido)]-3-(5-methyl-l,3,4-

oxadiazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat

- t

Zu einer gerührten wässrigen Suspension der zwitterionischen ■ Form von 7-[D-(α-amino-a-phenylacetamido)]-3-(5-methyl-l,3,4- J oxadiazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäüre (0,8 Mol) ' gibt man 1 η wässriges Natriumhydroxyd bei Raumtemperatur ι bis man eine klare Lösung .(pH 10,8) erhält. Diese Lösung wird sor fort gefriergetrocknet, wobei sich unreines festes 7-[D-(a-Amino-α-phenyl-acetamido) ] -3- (5-methyl-l, 3,4-oxadiazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat ergibt.

- 27 -

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ι . ι

M/11683

Beispiel 4 ,

Natrium-7-[D-(a-amino-a-phenylacetamido)]-3-(4-methyl-l,3-oxazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat

Zu einer gerührten wässrigen Suspension der zwitterionischen Form von 7-[D-(a-Amino-a-phenylacetamido)]-3-(4-methyl-l,3-oxazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-cart> onsäure (0,8 Mol) ' gibt man bei Raumtemperatur 1 η wässriges Natriumhydroxyd bis man eine klare Lösung (pH 10,8) erhält. Diese Lösung wird sofort gefriergetrocknet, wobei sich unreines, festes Natrium-7-[D-(a-amino-a-phenylacetamido)]-3-(4-methyl-l,3-oxazol-2-ylthiomethyl) -3-cephem-4-carboxylat ergibt.

- 28 -

209813/1731

Claims

M/11683 Patentansprüche:

1. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I

- NH CH

Il

•CH CH,

(D

C - CH_n - S - A

COOH

worin A eine Gruppe der Formel

C - CH

Il

3
oder

Il

- C

N oder N

C - CH,

C - CH₃ -C_n

bedeutet, mit der D-Konfiguration in der Seitenkette, und der nicht-toxischen, pharmazeutisch verträglichen Salze davon, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der Formel II

H₂N - CH CH

Il

- CH₂ - S - A

COOH

(II)

- 29 -

209813/1731

2H5928

M/11683

worin A die oben angegebenen Bedeutungen besitzt oder Salze oder Ester davon, wie vorstehend definiert, mit einer Säure oder deren funktionellem Äquivalent als Acylierungsmittel für die primäre Aminogruppe mit der Formel

-CH - COOH ι

HHB

worin B eine Blockierungsgruppe bedeutet, umsetzt und diese Blockierungsgruppe anschließend entfernt.

2. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Blockierungsgruppe die t-Butoxycarbonylgruppe ist und mit

Ameisensäure entfernt wird. '

3. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Blockierungsgruppe die Carbobenzyloxygruppe ist und durch katalytische Hydrierung entfernt wird.

4. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Blockierungsgruppe die 2-Hydroxy-l-naphthcarbonylgruppe i st und durch saure Hydrolyse entfernt wird.

5. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,, daß die Blockierungsgruppe die Trichloräthoxycarbonylgruppe ist und mit Zinkstaub in Eisessig entfernt wird.

- 30 -

209813/1731

M/11683

6.

Verbindung der Formel I

-NH- CH r CH

11

worin A eine Gruppe der Formel

2U5928

CH₂

C - CHo - S - A

C f

COOH

N-

Il

- C

C-CH,

N-

oder N

C - CH,

- C

C-CH

Il

CH

bedeutet, mit der D-Konfiguration in der Seitenkette, und die nicht-toxischen, pharmazeutisch verträglichen Salze i davon.

7. Verbindung gemäß Anspruch 6 mit der D-Konfiguration I in der Seitenkette und der Formel

-CH - C - NH - CH

NH₂

• /\

— CH CHp N

ι Γ H

C N .C - CHa - S - C

COOH - 31 -

209813/1731

M/11683

8. Verbindung gemäß' Anspruch 6 mit der D-Konfiguration in der Seitenkette mit der Formel

ο 's

, »- CH -C - NH - CH CH CH₀ N— N

^7/ I JII Il Il

NH₂ C N C-CHp-S-C C-CH,

COOH

9. Verbindung gemäß Anspruch 6 mit der D-Konfiguration in der Seitenkette mit der Formel

O NH - CH- / S CH₂ N — — c - CH, Il I -CH ' \ I Il 11 j CH - C - I I

^mS ■ jl· ^H _v ,C-CH₂-S-O CH

■° . -ι ■

COOH

20S813/1731

rtß 2H5928

M/11683

10. Die Natrium- oder Kaliumsalze der Verbindungen gemäß Anspruch 6.

11. Die Hydrochloride der Verbindungen gemäß Anspruch 6.

12. Verbindung der Formel

HnN - CH CH ' CHo N C - CHq

I I I , .11 H

C — N C-CHo-S-C N

° γ v

COOH ■

13· Verbindung der Formel

H₂N - CH CH CH₂ N — N

I. I II. l\

^yC ' N C-CH₂-S-C C-CH,

c.

COOH

- 33 -

209813/1731

M/₁₁₆S3

14. Verbindung der Formel

HgN -OH-CH CH₂ N ₀ . _0Η

I I I! Ii ,

Ii - CH₂ - S - C CH

/\/ - CH₂ - S - C

P ■■ ^o

COOH '

15. Verbindung der Formel I gemäß Anspruch 6, hergestellt

nach dem Verfahren gemäß Anspruch 1.

16. Pharmazeutisches Mittel, dadurch gekennzeichnet, daß es

eine Verbindung oder ein Salz gemäß einem der Ansprüche 6 bis und einen Träger oder Hilfsmittel enthält. ■

17. Verwendung einer Verbindung oder eines Salzes

gemäß Anspruch 6 bis 11 oder eines Mittels gemäß Anspruch 16 zur Behandlung von Krankheiten, die durch grampositive oder gramnegative Bakterien verursacht werden, bei Säugetieren, insbesondere·zur Behandlung von Mastitis bei Rindvieh.

- 34 -209813/1731,