DE2128249C3

DE2128249C3 - Verfahren zur Herstellung eines gegen Staphylococcus aureus hämolvtkus in der Mund und Nasenhöhle wirksamen, per os einzunehmenden Arzneimittels

Info

Publication number: DE2128249C3
Application number: DE19712128249
Authority: DE
Inventors: Elena Dr. Andronache; Manole Dr. Cucu; Vasile Dr. Gheorghe; Marioara Manea
Original assignee: INSTITUTUL DE IGIENA SI SANATATE PUPLICA BUKAREST
Current assignee: INSTITUTUL DE IGIENA SI SANATATE PUPLICA BUKAREST
Priority date: 1970-06-09
Filing date: 1971-06-07
Publication date: 1978-06-08
Also published as: DE2128249A1; FR2100739A1; DE2128249B2; FR2100739B1

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung eines gegen Staphylococcus aureus hämolyticus in der Mund- und Nasenhöhe wirksamen, per os einzunehmenden Arzneimittels.

Das erhaltene Arzneimittel ist tierischen Ursprungs mit antibakteriellen und insbesondere gegen Staphylokokken gerichteten Eigenschaften, welches auf die Bakterienflora in der Nasenhöhle wirkt

Es sind zahlreiche chemische Stoffe, wie verschiedene Sulfamide sowie auch auf dem Fermentationswege erhaltene Substanzen, die Antibiotica, insbesondere Penicillin, bekannt, weiche eine bakteriostatische Wirkung auf den Staphylococcus aureus ausüben.

Es sind desgleichen Arzneimittel tierischen Ursprungs mit antibiotischer Wirkung bekannt, wie zum Beispiel das gegenüber Hemophilus pertussis wirksame Antibioticum, Helizidin benannt, welches aus den tierischen Ausscheidungen vom Molluskentyp gewonnen wird, der aus Rinderhirn oder anderen tierischen Geweben gewonnene Staphylokokken-Abwehrstoff.
Dies geht auch aus folgendem Schrifttum hervor:
Britische Patentschrift 6 68 131.
Kroenberg, B,Cook, E. S, Coutinho, C. B, N u t i η i, LG.: The antistaphylococcic factors from ox brain, Nature, 198, June 1,910-911 (1963). N u t i η i, L G, L y η c h, E. M.: Effect of tissue extract in controlling staphylococcus aureus infections, Nature, 156,419-420(1945).
Cook, E.S,Tanaka, K.:Gegen den Staphylococcus aureus wirksame Extrakte tierischer Gewebe, Drug Trade News, 9. Sept 1968, Zusammenfassung in La Presse Medicale, 76, Nr. 49 (1968), S. 2316.

Lassen, Sven: Fish solubles, aus »Fish as Food«, Vol.3, 1965, Academic Press, New York and London.

G ο η t e a, I.: Alimentatia si lupta antiinfectioasa, 1968, Ed. Medicala, Bucuresti.

Die Erfindung besteht nun darin, daß die zerkleinerte Rumpfmuskulatur von frischen oder gefrorenen Makrelen (Scomber acombrus) mit Wasser stufenweise 30 Minuten lang bis zu 90°C extrahiert wird und der gefilterte Extrakt bei 100⁰C nach Abfüllung in Ampullen sterilisiert wird.

Die vorliegende Erfindung erweitert den Bereich der antibakteriellen und gegen Staphylokokken wirksamen Arzneimittel, wobei ein neues Arzneimittel eiweißartiger Natur gefunden wurde, welches 3,75% Trockensubstanz, 0,542% Gesamtstickstoff und 337% Proteide enthält, ein pH von 6,2 und eine Azidität von 0,4 ml NaOH 0,1 N/l ml besitzt und durch wäßrige Extraktion aus der Rumpfmuskulatur der frischen oder gefrorenen Makrele» Scomber scombrus, gewonnen wird.

Es wird im folgenden ein Ausführungsbeispiel der Erfindung angegeben: Man nimmt einige altlantische

ίο Makrelen (Scomber scombrus), welche ein Mittelgewicht von Je 450 g besitzen, und befreit sie von den Gräten. Die erhaltene Muskulatur wird in einer Fleischhackmaschine zerkleinert, sodann in ein gleiches Volumen Wasser einverleibt und bis zur Homogenisierung vermischt Das Gemisch wird stufenweise 30 Minuten lang erwärmt so daß es am Ende dieser Zeitspanne eine Temperatur von 90⁰C erreicht Das Material wird filtriert Die durch leichten Druck erhaltene Flüssigkeit wird in 10-ml- und 25-ml-Glasampullen eingefüllt Nach dem Verschließen werden die Ampullen in einem Autoklav bei I0O°C 20 Minuten lang sterilisiert und im Kühlschrank aufbewahrt

Der auf diesem Wege erhaltene Fischextrakt weist folgende chemische Eigenschaften auf:

Trockensubstanz (g/100 ml)	3,45
Gesamtstickstoff (g/100 ml)	0,542
Proteide (g/100 ml)	3,37
Aminstickstoff (mg/100 ml)	7,07
Ammoniak (bestimmt durch Destillation
in Gegenwart von MgO) (mg/100 ml)	22,1
Histamin	negativ
pH	6,2

Das Produkt wurde in zwei Versuchsserien an 62 Meerschweinchen untersucht. Der Grundnahrung der Tiere wurde per os nach je zwei Tagen je 2 ml Makrelenextrakt hinzugefügt. Der Futterverbrauch wurde täglich kontrolliert und die Tiere periodisch gewogen. Am Beginn und am Ende jeder dreiwöchigen Versuchsperiode wurdr die bakteriologische Analyse des Nasenausflusses vorgenommen, wobei die Anwesenheit und die Intensität der Gesamtflora, des Streptococcus cc- und /?-haemolyticus des Staphylococcus albus und des Staphylococcus aureus haemolyticus bestimmt wurden.

Die Variationen der Anwesenheit und der Intensität

so des Staphylococcus aureus haemolyticus sind in der Tabelle 1 wiedergegeben.

Gegenüber der verhältnismäßig konstanten Frequenz und Intensität des Staphylococcus aureus bei den Vergleichsgruppen hat man bei den Versuchsgruppen mit Makrelenextrakt eine bedeutsame Verringerung der Zahl der Staphylococcus aureus-Träger sowie auch der Intensität dieser Bakterien beobachtet. So ist die Zahl der Tiere ohne Staphylokokken-Anwesenheit bei den Versuchsgruppen mit Extrakt von 2 auf 18 (bzw. von 5% auf 51% gestiegen, während die Zahl der Tiere, deren Nasenausfluß diesen Keim in großer Menge enthält (praktisch reine Kultur), von 16 auf 4 (bzw. von 46% auf 11%) gesunken ist. Wenn man alle Träger des Staphylococcus aureus haemolyticus (mäßige und

fi.s intensive Dichte) in Betracht zieht und sie auf die Zahl der Tiere bezieht, bei welchen man diesen Keim nicht gefunden hat (siehe Tabelle 2), so ergibt sich, daß durch die Verabreichung des Extraktes die Zahl der Träger

des Staphylococcus aureus im Vergleich zum Versuchsbeginn urn 50% gesunken ist

Was die Oesamtflora betrifft, so wird eine bedeutsame Verringerung der Zah! der Tiere mit intensiver Kontamination (von 47% auf 21%) bei den Versuchsgruppen mit Extrakt gegenüber den Vergleichsgruppen, bei denen die Lage beinahe konstant geblieben war, festgestellt (Tabelle 3).

Tabelle 1	Nasenhöhle	Tier zahl	Zweiter Versuch	17	: mit dem ί	staphylococcus	aureus	iiaemolyticus'	beim	%	Versuchs	%	27	4	14	8	29	: mit dem	Staphylococcus	%	aureus	%	(Frequenz	der Tiere)	o/o	Versuchs	%
	Nasenausfluß der Meerschweinchen	pro	Vergleich	16	nach dem				Verabreichen des Makrelen-Extraktes		ende		35	2	5	18	51	mäßig					intensiv			ende
Kontaminationsgrad der	Tiergruppe	Gruppe	Versuch				Kontamination der Nasenhöhk		Tier										Tier
				fehlend	10	zahl	12	Versuchs	60	Versuchs	20		Versuchs	30	zahl	40
				5		63	beginn	57	ende	31		beginn	31		5
				4		Tier		Tier			Tier		4
			17	12	23	zahl	41	zahl	41		zahl	41	1	35
		Versuchs	-		37		37		37			62		18
	10	beginn		4	Erster und zweiter Versuch zusammengenommen	6		2			3		6
Erster Versuch	19	Tier		6	Vergleich	11	48	6	33	6	37	3	37
Vergleich	zahl			Versuch		48		34		45		11
Versuch			7		7	7		10
1	6		6	10		4
2
	13	9	10
3	17	12	16
0

Tabelle 2

Verhältnis der Staphylococcus aureus hämolyticus-Träger (Meerschweinchen) vor und nach der Verabreichung des Makrelenextraktes

Gruppen

Zahl der untersuchten Tiere

Untersuchungsmoment

Träger	0/0
tiere	85
23	70
19	94
33	44
15

Differenz

Vergleichsgruppe 27

Versuchsgruppe 35

Versuchsbeginn Versuchsende

-15 -50

Der Kontaminierungsgrad der Nasenhöhlen beim Staphylococcus albus, welcher bei den Vergleichsgruppen unverändert bleibt, zeigt bei den Versuchsgruppen mit Extrakt eine Neigung zum Ansteigen der Fälle mit mäßiger Kontamination (von 42% auf 63%) und zur Verminderung der Zahl der mit diesem Keim nicht angesteckten Tiere (von 57% auf 37%) an, was möglicherweise mit dem gänzlichen oder teilweisen Verschwinden des Staphylococcus aureus im besonderen und der Gesamtflora im allgemeinen in Verbindung zu bringen ist (Tabelle 4).

Als Anwendungsvariante kann man für den angeführten Zweck die Flüssigkeit verwenden, welche beim Aufarbeiten der Fische zu Fischmehl auf Fischtrawlern anfällt und ins Meer geschüttet oder durch Konzentrierung aufgearbeitet wird, wobei sie im letzteren Fall als Zusatz für Wachstumszwecke im Tierfutter verwendet wird. Zur Prüfung der antibakteriellen Wirksamkeit sind zusätzliche Versuche mit dieser Flüssigkeit notwendig.

Das erfindungsgemäße Produkt weist folgende Vorteile auf:

Es trägt zur Verminderung der Kontamination der Nasen und Mundhöhle bezüglich der gesamten Bakterienflora und des Staphylococcus aureus haemolyticus bei, welche gegenüber den pharmazeutischen Antibiotica widerstandsfähig geworden sind;

es kann zur Bekämpfung des Staphylococcus

aureus haemolyticus, welcher auch in anderen Körpergegenden lokalisiert ist, verwendet werden;

ft5 einfache und billige Extraktion aus im Überfluß

vorhandenem natürlichem Ausgangsmaterial;

das Produkt weist auch in einem weiteren Konzentrationsbereich keine toxische Wirkune auf.

	5	21	28 249	Tier	Zweiter Versuch	17	ies Makrelen-Extraktes	Versuchs	27	1 4	Tier	Zweiter Versuch	17	0 -	mäßig	Versuchs	6	Versuchs	27	10 37	9 33	mäßig	Versuchs	%	%	Versuchs	%	%
				pro	Vergleich	16	Kontamination der Nasenhöhle mit der Gesamtflora (Frequenz	ende	35	— —	pro	Vergleich	16	0 -		ende		ende	35	20 57	13 37		ende			ende
rabelle 3	Nasenhöhle mit			Gruppe	Versuch	fehlend	Tier- %			Gruppe	Versuch		Versuchs	Tier- %		Tier- %	Versuchs	Tier- %			Tier
				zahl	Kontaminationsgi ad der	Nasenhöhle mit		beginn	zahl		zahl	beginn	zahl	30	—	zahl	40	—
			Versuchs		der Meerschweinchen vor und nach dem		Tier- %		der Ti..-re)		Tier- %		45	-		19	-
			beginn	0 -	Tiergruppe		zahl	6 60	intensiv	4 40	zahl	6 60			4
Koniaminationsgrad der	der Gesamtflora beim Nasenausfluß der		Tier- %	0 -				15 81		6 30		14 70	36	5	4	36	—
	Meerschweinchen vor und nach der Verabreichung \		zahl				6 60				2 20		54	—		20	6
Tiergruppe	10		0 -		10	10 51	11 64		5 29	3 15	12 71			6
	19	1 10	0 -		19		12 80		7 43		8 51	33	3	3	37	—
	1 4	Erster und zweiter Versuch zusammengenommen		11 64			Erster und zweiter Versuch zusammengenommen	14 82		47			21	1
		Vergleich		7 46	17 63		Vergleich	12 75	18 66			10
	0 —	Versuch	Erster Versuch		27 79		Versuch		22 63			7
	0 -	Tabelle 4	Vergleich	17 63			16 60
		Versuch	17 50			15 42		⁷rcquenz der Tiere)
Erster Versuch			Versuchs		intensiv
Vergleich	dem Staphylococcus albus I	beginn
Versuch		Tier				Versuchs
	zahl				ende
	Versuchs			Tier
3	beginn		zahl
8	Tier
	zahl		0
6			0
8	0
	0		0
9			1
16	1
	0	0
>eim Nasenausfluß		1
\ jrabreichen des Makrelen-Extraktes	1
Kontamination der Nasenhöhle mit dem Staphylococcus albus (!	0
fehlend

Versuchs
beginn
Tier- %
zahl

0 80
17 85

2 13
4 25

Claims

Patentanspruch:

Verfahren zur Herstellung eines gegen Staphylococcus aureus hämolyticus in der Mund- und Nasenhöle wirksam, per as einzunehmenden Arzneimittels, dadurch gekennzeichnet, daß die zerkleinerte Rumpfmuskulatur von frischen oder gefrorenen Makrelen (Scomber scombrus) mit Wasser stufenweise 30 Minuten lang bis zu 90⁰C extrahiert wird und der gefilterte Extrakt bei 100⁰C, nach Abfüllung in Ampullen sterilisiert wird.