DE2106213A1 - Befestigung von Enzymen an silicium haltigen Materialien unter Verwendung von Vernetzungsmitteln - Google Patents
Befestigung von Enzymen an silicium haltigen Materialien unter Verwendung von VernetzungsmittelnInfo
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Description
21Ö6213
PATENTANWÄLTE 8 MÜNCHEN 2, H ILBLESTRASSE 2O
Dr. Berg Dipl.-Ing. Stapf, 8 München 2, Hllblestroße 20
Ihr Zeichen Unser Zeldien Datum
Anwaltsakte 20 600
Be/rich
Be/rich
Monsanto Gompany St. Louis, Missouri / UBA
"Befestigung von Enzymen an silxciuinhaltigen Materialien
unter Verwendung von Vernetzungsmittel^'
1 0. Feb. 1971
Die verschiedenen Wirksamkeiten und Verwendungen der Enzyme sind außerordentlich gut erforscht und dargelegt.
Die Enzyme sind ihrer Art nach Proteine und wasserlöslich, sodaß ihre Verwendung ebenso durch Verlust oder
"Aufbrauchen" des Enzyms begleitet ist. In letzter Zeit
11-21-0135 -2-
109834/1205
wurden Versuche unternommen, die Aktivität der Enzyme
dadurch zu verringern und sie unlöslich und damit für eine Wiedergewinnung und erneute Verwendung geeignet zu
machen, daß man die Enzyme an verschiedene organische Polymerisate befestigt. .Derartige Versuche hatten mehr
oder weniger Erfolg, weil sie ernsthaft durch die hohen Kosten der organischen Materialien, die zur Kombination
mit den Enzymen unter Bildung eines unlöslichen Produkts vorgesehen sind, beeinträchtigt werden. Es wäre daher besonders
wünschenswert, unlösliche lang-wirkende und erneut verwendbare Formen von Enzymen zur Verfügung zu haben,
die nicht den Nachteil haben, daß sie hohe Kosten verursachen. Es wäre weiterhin vorteilhaft, solche enzymatisch
wirksame Materialien in einar Teilchenform zur Verfügung
zu haben, die ihrerseits einen schnellen Kontakt des öubstrats mit dem unlöslich gemachten Enzym ermöglichen wurden.
Enzymatisch wirksame Materialien mit den vorausgehend aufgezählten Vorteilen werden durch die vorliegende Erfindung
geschaffen.
Es ist demgemäß ein Gegenstand dieser Erfindung, unlösliche, enzymatisch wirksame zusammengesetzte ötoffe zur Verfügung
zu stellen. Ein weiterer Gegenstand dieser Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung solcher Produkte.
Die vorliegende Erfindung schafft unlösliche, enzymatisch wirksame Produkte hoher Leistungsfähigkeit, worin ein
-3-109834/1205
Enzymanteil mit einem siliciumhaltigen Träger mittels
einem Vernetzungsmittel, v/ie einem Aldehyd, einem Disulfonylhalogenid oder einem Bispropiolat,und einem Organosilar.
verbunden ist. Die so erhaltenen Produkte sind unlösliche, erneut verwendbare, lang wirkende enzymatisch
wirksame Produkte, in denen das Enzym eine kovalente Bindung aufweist. Derartige enzymatisch wirksame Materialien
können in geeigneter Weise in Partikoiform gebildet werden,
um den schnellen und vollständigen Kontakt des wirksamen Enzyms mit dem Substrat, auf dem die enzymatische
Wirkung erwünscht ist, zu erleichtern.
tJiliciumhaltige Materialien, die zur Herstellung der Produkte
dieser Erfindung verwendet werden können, sind granuliertes oder fasriges siliciumdioxid und bilikate wie Sand,
Glasgewebe, -fasern, -matten und dergleichen, Asbest, Diatomeenerde, wollastonit, Fosterit, Feldspat, Mullit,
verschiedene Tonarten, einschließlich ßentonit, Kaolin, usw. Me Hauptforderung an das siliciumhaltige Material
besteht darin, daß Oberflächenhydroxylgruppen vorhanden sind, die mit den hydrolysierbaren Gruppen eines Organosilans,
das als Kupplungsmittel dient, reaktionsfähig sind.
Das siliciumhaltige Material kann mit dem Organosilan zweckmäßigerweise dadurch umgesetzt werden, daß man es mit
dem Organosilan unter Bildung der gewünschten Bindung durch die hydrolysierbaren Gruppen des Organosilans in Kontakt
109834/1205
-zubringt. Gewöhnlich, wird das Organosilan in einem inerten
Lösungsmittel wie Toluol, Xylol oder dergleichen gelöst und die erhaltene Lösung wird dann auf das siliciumhaltige
Material aufgebracht. Wäßrige oüanlösungen können ebenso
verwendet werden.
Die Menge des verwendeten Organosilan-Kupplungsmittels
ist abhängig von der Beschaffenheit und der Oberfläche des siliciumhaltigen Materials. Gewöhnlich sind wenigstens ungefähr
0,01 Gew.% Organosilan, bezogen auf das Gewicht des
siliciumhaltigen Materials, erwünscht. Mengen im Bereich von ungefähr 0,25 bis ungefähr 2,01 Gew.% werden bevorzugt.
Geeignete Organosilane sind substituierte Organosilane der folgenden allgemeinen Formel
-27 0
worin X eine hydroIysierbare, zur Umsetzung mit einer
Hydroxylgruppe geeignete Gruppe ist, Y Wasserstoff oder eine einwertige Kohlenwasserstoffgruppe, R eine Alkylengruppe
mit 1 bis ungefähr 20 Kohlenstoffatomen, Z eine zur Umsetzung mit einem Vernetzungsmittel geeignete funktionelle
Gruppe, η eine ganze Zahl von O oder 1, a eine ganze Zahl von 1 bis 3? b eine ganze Zahl von 0 bis 2, c eine ganze
Zahl von 1 bis J un<i die bumme von a + b + c gleich 4- ist.
-5-109834/1205
- Zu geeigneten X-Gruppen gehören beispielsweise Halogen-, Hydroxy-, Alkoxy-, üycloalkoxy-, Aryloxy-, Alkoxy-subst,-alkoxywie
ß-Methoxy-Äthoxy- oder dergleichen, Alkoxycarbonyl-, Aryloxycarbonyl-, Älkylcarboxylat- und Arylcarboxylatgruppen,
vorzugsweise mit 8 oder weniger Kohlenstoffatomen.
Zu geeigneten Y-Gruppen in der obigen Formel gehören beispielsweise
Wasserstoff, Methyl-, Äthyl-, Vinyl-, Isobutyl-; und andere Hydrocarbylgruppen, vorzugsweise mit 10 oder ™
weniger Kohlenstoffatomen.
Die R-Gruppe in der vorausgehenden Formel kann jede Alkylengruppe
mit bis zu 20 Kohlenstoffatomen sein und enthält vorzugsweise von ungefähr 2 bis ungefähr 18 Kohlenstoffatome.
Zu solchen Gruppen gehören beispielsweise Äthylen, die .Propylene, die Butylene, die Decylene, die Undecylene,
die Octadecylene und dergleichen.
Die Z-Gruppe kann Jede funktioneile Gruppe sein, die zur Umsetzung mit demnachfolgend definierten Vernetzungsmittel
geeignet ist. Zu solchen Gruppen gehören beispielsweise Amino-, primäre und sekundäre Amido-, Epoxy-, Isocyanat-,
Hydroxy-, Alkoxycarbonyl-, Aryloxycarbonyl-, Vinyl-, Allyl-,
Halogen- wie Chlor- oder Bromgruppen und dergleichen.
Besonders bevorzugt als solche funktioneile Gruppen sind Am in ο grupp en.
-6-109 834/1205
Zu besonders, fümiie Zwecke dieser Erfindung bevorzugten
Organosilanen gehören otnega-Aminoalkyl- und Aminoaryltriaikoxysilane
wie gamnja-Aminopropyltriraethoxysilan, Aminophenyltriäthoxysilan
und dergleichen.
Das aktive Enzym kann aus jeder geeigneten quelle, sei es
pflanzlich, tierisch oder mikrobischen Ursprungs sein. Viele derartige Enzyme sind im Handel erhältlich. Als typisch
können Proteasen, zum Beispiel saure und/oder neutrale und/ oder alkalische Protease erwähnt werden. In manchen Fällen
kann ein weiteres, unterschiedlich aktives Enzym wie beispielsweise Araylase damit gemischt werden, um die arbeitsfähige
Enzyawirksaakeit des Produkts zu erbihen. Es können
ebenso noch weitere Enzyme wie Lipase oder Oellulase anstelle
oder zusätzlich zu der Araylaee verwendet werden»
Zusätzlich geeignete Enzyme sind Oarbohydrase, Lipase*
Esterase, ITuklease oder andere Arten der Hydrase. Eine Hydrase, Oxidreduktase oder Demolase oder eine Transferase
oder Isomerase kann ebenso, abhängig von der vorgesehenen Endwirksamkeit und Anwendung verwendet werden.
Viele derartiger Enzyme können zweckmäßigerweise von Mikroorganismen,
wozu Bakterien, Hefen, Pilze und dergleichen mittels bekannter Fermentationsverfahren erhalten werden,
wie sie generell in Kirk-Othmer, Encyclopedia of Chemical
Technology 8, 173-204 beschrieben sind, und es sind ebenso eine große Zahl mikrobiell gebildeter Enzyme im Handel er-
—7— 109834/1205
— Π —
hältlich.
Die genaue Wirksamkeit des verwendeten Enzyms oder der Enzyme als Ausgangsmaterial hängt von dem exakten Herstellungsverfahren
ab und ist für die vorliegende Erfindung nicht kritisch, allerdings vorausgesetzt, daß das enzymatisch
wirksame dadurch gebildete Produkt die gewünschte enzymatische Wirksamkeit aufweist. Es stehen verschiedene
analytische Verfahren zur Bestimmung der Wirksamkeit des enzymatisch wirksamen Materials aur Verfugung und es kann
beispielsweise die Proteasewirksamkeit von proteolytischen Enzymen mittels der allgemein bekannten Caseindigestionsverfahren
bestimmt werden. Bei derartigen Untersuchungen katalysiert eine Protease die Hydrolyse von Casein während
einer bestimmten Zeitdauer und Temperatur und bei einem bestimmten
pH-Wert; die Reaktion wird durch Zugabe von !frichloressigsäure
angehalten und die Lösung filtriert. Die i'arbe des Filtrats wird durch ein Folin-Phenolreagens gebildet
und die Höhe der enzymatischen Wirksamkeit spektrophotometrisch
in Einheiten von Oaseintyrosin gemessen. Dieses Verfahren ist eingehender in Journal of General Physiology
30, 291 OW) und in Methods of Enzymology 2, 33,
Academic Press N.Y. (1955) beschrieben. Die Amylasewirksamkeit wird im allgemeinen nach dem allgemein bekannten
Dinitrosalicylsäureverfahren von Bernfeld bestimmt. Weitere Untersuchungsverfahren sind dem Fachmann bekannt und nachfolgend
noch erörtert.
-8-109834/1205
Eine besonders wirksame Quelle für gemischte Enzyme, die als Ausgangsmaterial in der vorliegenden Erfindung verwendet
werden können, ist ein mutatierter Bacillus subtilis-Organismus. Das Verfahren zur Bildung dieses Organismus
und seiner Enzyme ist in der U.S.-Patentschrift 3 051 380
beschrieben. Eine Kultur dieses Bacillus subtilis (tstamm AM>
Organismus ist. bei dem United btates Department of Agriculture, Agricultural Research oervice, Worth Utilization
Research and Development Division, Peoria, Illinois deponiert und hat die Bezugsnummer NRRL B-34-11. Das durch diesen
Organismus gebildete enzymatisch wirksame Material besteht im allgemeinen aus zwei Proteasen, ungefähr 65 bis
75$ neutraler Protease (Wirksamkeit bei einem pH von 7»0
bis 7,5) und ungefähr 25 bis 35# alkalischer Protease (Wirksamkeit
bei einem pH-Wert von 9 bis 10). Eine bedeutende Menge Amylase ist ebenso vorhanden. Im allgemeinen hat dieses
Material ungefähr 700 000 bis ungefähr 1,2 Millionen Einheiten neutrale Proteaseaktivitat pro g der isolierten
Feststoffe und ungefähr 250 000 bis ungefähr 400 000 Einheiten
alkalische Proteaseaktivitat pro g, bestimmt mittels der Ansonschen Variation des Kunitz "Casein"-Verfahrens.
Es enthält im allgemeinen ungefähr 300 000 bis 350 000 Einheiten
Amylaseaktivität pro g, bestimmt nach dem Bernfeld-Verfahren. Wie in der oben angegebenen Patentschrift näher
. ausgeführt, können die relativen Verhältnisse der Protease zu Amylase sich in Abhängigkeit von den genauen Wuchsbedingungen
des Mikroorganismus ändern, wobei jedoch festge-
-9-
109834/1 205
stellt wurde, daß die neutrale und alkalische Protease und die Amylase in wenigstens bestimmten Mengen, meist
ohne Rücksicht auf Änderungen des Kulturmediums und andere Wuchsbedingungen des Mikroorganismus gebildet werden.
Eine weitere Quelle für gemischte Enzyme, die als Ausgangsmaterial
nach der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, ist der B. subtilis-Stamm NRRL 64-4-, B. subtilisütamm
NRHL. 94-1 und B-subtilis-Stamm IAM 1523 (Japanische
Kultursammlung), a stehen noch weitere B. subtilis-Mikro- ™
Organismen zur Verfügung, die Protease, ein Gemisch von Proteasen oder Protease und Amylase,wenigstens in einem
eingeschränkten, nicht optimalen Ausmaß liefern. Die so bezeichnete btrptomyces griseus Neutral-protease hat einen
breiten pH-Aktivitätsbereich und kann als ein Ausgangsenzym zur Einverleibung in die Produkte dieser Erfindung
dienen.
Weitere typische Enzyme sind Trypsin, Chymotrypsin, Pepsin, i Papain, Garboxypeptidase, Rennin und dergleichen.
Die gewünschte Bindung zwischen dem Enzym und dem Organosilan
zustande zu bringen, wird ein Vernetzungsmittel verwendet, das eine kovalente Bindung mit einer reaktionsfähigen
Gruppe an dem Enzymmolekül·, die für die Enzymwirksamkeit nicht wesentlich ist, bildet und die weiterhin eine
kovalente Bindung mit einer funktionellen Gruppe des Organo-
-10-109834/1205
- ίο -
silans bildet.
Für die Zwecke dieser Erfindung sind geeignete Vernetzungsmittel
Formaldehyd, ungesättigte Monoaldehyde, vorzugsweise mit bis zu ungefähr 4- Kohlenstoff atomen, und üialdehyde,
ßispropiolate und Disulfonylhalogenide.
Hier verwendbare ungesättigte Monoaldehyde sind beispielsweise die a-ii-ungesättigten Aldehyde wie Acrolein, Crotonaldehyd,
Vinylacetaldehyd und dergleichen.
Geeignete Dialdehyde sind beispielsweise Glyoxal, Glutaraldehyd, Malonsäurealdehyd, Bernsteinsäuredialdehyd und
dergleichen, vorzugsweise mit 2 bis B Kohlenstoffatomen.
Geeignete Bispropiolate sind beispielsweise die Diolpropiolate
wie Äthyienglykolbispropiolat, Propylenglykolbispropiolat, Butylenglykolbispropiolat, Hexametiiylenglykolbispropiolat,
Decamethylengylkolbispropiolat, Gyclohexylenglykolbispropiolat,
Methylolpropandiolbispropiolat und dergleichen, sowie Bisphenol-A-propiolat, Pentaerythriteibispropiolat
und dergleichen.
Geeignete Disulfonylhalogenide sind beispielsweise ßenzol-1, 3-Disulfonylchlorid, Naphthalin-1, 5-Disulfonylchlorid,
Naphthalin-1T 6-Msulfonyichlorid, iiaphthalin-2, 5-Disulfonylchlorid
und dergleichen.
-11-
109834/1205
Die Menge des erforderlichen Vernetzungsmittels ist abhängig in erster Linie von der Menge des Enzyms oder der
Enzyme, die man dem Material einzuverleiben wünscht. Gewöhnlich wird ein Enzym-Vernetzungsmittel molares Verhältnis
von ungefähr 1:1 oder weniger verwendet, wobei ein Verhältnis von ungefähr 0,01 bis 0,0001:1,0 bevorzugt wird.
Die Bindung des Enzyms, des Vernetzungsmittels und des Organosilans, das zusammen mit dem siliciumhaltigen Material
vorhanden ist, kann in jedem geeigneten inerten " Ί
Medium, gewöhnlich in einem wäßrigen Medium bei pH-Bedingungen und '.Temperaturen durchgeführt werden, die nicht
zur Inaktivierung des Enzyms führen. Temperaturen über ungefähr 600C■sollten im allgemeinen vermieden werden. Das
vorliegende Verfahren wird schnell bei Umgebungstemperatur durchgeführt. Die Wahl der Temperatur hängt jedoch hauptsächlich
von dem jeweilig verwendeten Enzym oder Enzymgemisch ab. Gewöhnlich kann die Temperatur im Bereich von
ungefähr -5°C bis ungefähr 300C liegen, wobei ein Bereich
von ungefähr 0 C bis ungefähr 10 C bevorzugt wird. f
Die .Produkte der vorliegenden Erfindung und ein Verfahren
zur Herstellung dieser Produkte werden weiterhin durch die folgenden Beispiele erläutert;, worin ein im Handel erhältliches
B. subtilis-Enzymgemisch, das neutrale Protease (1,27 x 106 Einheiten/g), alkalische Protease (0,50 χ 106
Einheiten/g) und Amylaee (0,31 x 10 Einheiten/g) enthält,
-12-
109834/1205 .
zur Herstellung unläslicher enzymatisch wirksamer Produkte
verwendet wurde.
Partikelförmiges /Siliciumdioxid (2,5 g) wurde in destilliertem
Wasser (100 ml) aufgeschlämmt und gamma-Aminopropyltrimethoxysilan
(0,050 g) wurden hierzu zugegeben. Die Schlämme wurde dann 25 Minuten bei ungefähr Zimmertemperatur
gerührt.
Ein B. subtilis-Enzymgeraisch (0,25 g) wurde dann der Schlämme
unter ftühren zugegeben und danach wurde eine 35 Gew.#-
ige wäßrige Formaldehydlösung (2,0 ml) zugegeben und das Rühren eine halbe Stunde bei ungefähr Zimmertemperatur
fortgesetzt. Es wurde darauf geachtet, daß der pH-Wert des sich ergebenden Gemischs auf 6,75 gehalten wurde. Bas Gemisch
wurde dann filtriert und mit 300 ml gleichen Teilen einer wäßrigen 0,1 Gew.#igen Galciumacetatlösung gewaschen
und dann wurden die gewonnenen Feststoffe in einen Kolben überführt und lyophilisiert.
Die Proteaseaktivität der lyophilisierten Feststoffe betrug
ungefähr 500 bis 1000 Einheiten pro g.
Enzymbindung auf Wollastonit - In ähnlicher Weise wie in
-13-10983A/1205
.Beispiel 1 wurde Wollastonif (5»O3 s) j das mit gamma-Aminopropyltrimethoxysilan
(0,25 Gew.^, bezogen auf das Wollastonit)
behandelt wurde, in destilliertem Wasser (100 ml) angeschlämmt. Der erhaltenen Schlämme wurde ein B. subtilis-Enzymgemisch
(2,03 g) und ein Tropfen Athylenglykolbispropiolat zugegeben und das erhaltene Gemisch wurde 24
Stunden bei ungefähr 40C gerührt. Es wurde darauf geachtet,
daß der pH-Wert dieses Gemische 6,0 bis 6,5 betrug.
Danach wurde das Gemisch zentrifugiert, die gewonnenen Feststoffe
mit Wasser (100 ml) 48 Stunden gewaschen und dann erneut
zentrifugiert und lyophilisiert.
Durch zwei Versuche wurde festgestellt,dass die Protease-^
aktivität der lyophilisierten Feststoffe 405 bzw. 420 Einheiten
pro g betrug.
Enzymbindung auf Calciumsilikat (j
Calciumsilikat (5,0 g), trocken gekuppelt mit 0,25 Gew.%
gamma-Aminopropyltrimethoxysilan, wurde in Wasser (50 ml)
angeschlämmt und B. subtilis-Enzymgemisch (1,5 g) wurde der ochlämme zugegeben. Der pH-Wert der Schlämme wurde auf 8,0
eingestellt und eine 25 Gew.^ige wäßrige Glutaraldehydlösung
(5»0 ml) wurde hierzu zugegeben.
Das erhaltene Gemisch wurde bei 40O ungefähr 16 Stunden ge-
-14-
1098 34/1205
rührt und der pH-V/ert wurde häiafig geprüft und bei 8,0 bis
8,5 gehalten. Danach wurde das Gemisch zentrifugiert und
die gewonnenen Feststoffe in 100 ml Wasser 6 stunden bei
40C gewaschen. Die gewaschenen Feststoffe wurden dann durch
Zentrifugieren gewonnen und lyophilisiert.
Es wurde festgestellt, daß die Proteaseaktivität der lyophilisierten
Feststoffe 1000 bis 2000 Einheiten pro g betrug.
Oalciumsilikat (5>36 g)» trocken gekuppelt ^it 0,25 Gew.%
gamraa-Aminopropyltrimethoxysilan, wurde in n-Propanol
(100 ml) angeschlämmt. Eine Lösung, die ii. suotilis-Enzy»-
Gemisch (5»0 g) in Wasser (15 ml) enthielt, wurde dann hergestellt
und mit der Schlämme gemischt. Danach wurde GIutaraldehyd
(25 Gew.^ige wäßrige Lösung, 2,0 ml) zugegeben. Der pH-Wert des erhaltenen Gemischs wurde auf 6,0 bis 7,0
eingestellt.
Das erhaltene Produkt war eine harzige Masse, der 50 ml
Wasser nach 2 Stunden zugegeben wurden, um das suspendierte Material "partikelförmig" zu machen. Mach 5 Stünden wurde
die Flüssigkeit von den harzigen Feststoffen dekantiert und 150 ml Wasser wurden zugeführt. Der pH-Wert wurde bei
6,0 bis 7»0 gehalten, das erhaltene Gemisch 72 Stunden bei
-15-109834/1 205
40C gerührt und dann zentrifugiert. Die gewonnenen Feststoffe
wurden dann lyophilisiert. Es wurden 5|1 S Produkt
mit einer Proteaseaktivitat von 8,820 Einheiten pro g erhalten.
Es ist darauf hinzuweisen, daß die Erfindung durch die
aufgezeigten und beschriebenen genauen Einzelheiten des Arbeitsverfahrens oder die angegebenen Verbindungen, Zubereitungen,
Verfahren nicht eingeschränkt wird und daß es dem Fachmann möglich ist, offensichtliche Modifikationen f
und Äquivalente zu entwickeln.
-16-109834/1205
Claims (9)
1. Unlösliche, enzymatisch wirksame Zusammensetzung gekennzeichnet
durch ein siliciumhaltiges Material, ein auf dessen Oberfläche gehaltenes Organosilan und ein Enzym,
das kovalent mit einem Vernetzungsmittel verbunden ist, das seinerseits kovalent mit dem Organosilan verbunden
ist, wobei das Vernetzungsmittel Formaldehyd, ungesättigter Monoaldehyd mit 1 bis 4· Kohlenstoffatomen, Maldehyd,
ein ßispropiolat oder ein Disulfonylhalogenid ist.
2. Zusammensetzung gemäß Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, daß das Organosilan omega-Aminoalkyltrialkoxysilan, besonders
gamma-Aminopropyltrimethoxysilan ist.
3. Zusammensetzung gemäß Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, daß das Vernetzungsmittel Formaldehyd, das Enzym eine Protease
und das siliciumhaltige Material öiliciumdioxid oder Calciumsilikat ist.
4. Zusammensetzung gemäß Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, daß das Enzym ein Gemisch von neutraler Protease, alkalischer
Protease und Amylase, besonders ein Amylasegemisch, das durch einen Bacillus subtilis-öpezies gebildet ist,
ist.
109834/1205
5. Produkt gemäß Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, daß das Vernetzungsmittel Athylenglykolbispropiolat oder GIutaraldehyd
ist.
6. Verfahren zur Herstellung eines unlöslichen, enzymatisch wirksamen Produkts dadurch gekennzeichnet, daß man ein siliciumhaltiges
Material mit einer hydrolysierbaren Gruppe eines Organosilans, das eine funktionelle Gruppe aufweist,
umsetzt und ein Enzym mit einer reaktionsfähigen, für die enzymatische Wirksamkeit nicht wesentlichen Gruppe an dem
umgesetzten Organosilan befestigt, wozu man die reaktionsfähige Gruppe mit einem Vernetzungsmittel und das Vernetzungsmittel
mit der funktioneilen Gruppe des Organosilans umsetzt.
7. Verfahren gemäß Anspruch 6 dadurch gekennzeichnet, daß man als siliciumhaltiges Material Siliciumdioxid verwendet.
8. Verfahren gemäß Anspruch 6 dadurch gekennzeichnet, daß man als Organosilan omega-Aminoalkyltrialkoxysxlan, besonders
gamma-Aminopropyltrimethoxysilan verwendet.
9. Verfahren gemäß Anspruch 6 dadurch gekennzeichnet, daß man als Vernetzungsmittel Formaldehyd, Athylenglykolbispropiolat
oder Glutaraldehyd verwendet.
-18-
10983 U/1205
10, Verfahren gemäß Anspruch 6 dadurch gekennzeicnnet,
daß man als Enzym eine Protease, wie ein Gemisch von neutraler Protease, alkalischer Protease und Amylase, verwendet,
wobei die Aiaylase ein Arnylasegemisch sein kann, das
durch eine Bacillus siibtiiis-^pezies gebildet ist.
10983A/1205
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