DE2005543B - Objektträger - Google Patents

Description

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Die Ei findung betrifft einen Objektträger aus einer Vertiefungen an einer Seite einer Langskante der

rechteckigen, planparallelen Platte transparenten Platte eine Öffnung haben, die sich von der oberen

Matenals mit mehreren Vertiefungen fur Gewebe- Seite bis zum Boden der Vertiefung erstreckt, gekenn-

kulturen zeichnet

Die Entdeckung und Identifizierung von Viren 5 Nach einer bevorzugten Ausführungsform der Er-

und Bakterien mittels der fluoreszierenden Anti- findung sind die Boden der Vertiefungen eben und

korpertechnik ist zwar äußerst zuverlässig, erfordert verlaufen parallel zur Unter-/Oberseite des Objekt-

aber beträchtliche Zeit und Muhen, um die fur den tragers

Test benotigten Reagenzien und Gewebe vorzu- Nach einer weiteren bevorzugten Ausfuhrungsform

bereiten Solche Tests werden in etwa wie folgt io der Erfindung smd Rippen vorgesehen, die auf der

durchgeführt Zellen von Gewebekulturen der er- Oberfläche der Platte nach oben vorspringen und

forderlichen Art und Spezies werden auf eine Kultur- einteilig mit der Platte ausgebildet sind,

flache oder -gefäß, wie ζ B eine Petrischale, einen Schließlich smd nach einer weiteren bevorzugten

Objektträger oder ein Deckglas aufgebracht Nach Ausfuhrungsfonn der Erfindung getrennte Reihen

emer ausreichenden Inkubationspenode, m welcher 15 von Vertiefungen m der Oberflache der Platte entlang

die Zellen auf der Kulturflache anwachsen, werden der Langskanten vorgesehen

die Zellen nut einem bestimmten Virustrager infiziert. Durch Anwendung der Erfindung sind auf emem

Nach emer zweiten Inkubationspenode, in der sich einzigen Objektti agei alle grundlegenden Materialien

der Virustrager vervielfacht, wird das Kulturgefaß vorhanden, die benotigt werden, um die fluoreszie-

aus dem Inkubator entnommen, die Zellen werden 20 rende Antikörper-Technik durchzufuhren Durch

mit emem geeigneten Fixativ fixiert und dann ge- diese Erfindung kann die zur Durchfuhrung solcher

trocknet Diese Zellen dienen dann als Unterlage fur diagnostischer Versuche benotigte Gesamtzeit, lnklu-

den Test mittels der fluoreszierenden Antikörper- sive Vorbereitungsarbeit, von 7 bis 14 Tagen auf

technik, wie er nach dem Stand der Technik all- höchstens 2 Stunden reduziert werden Mit dem er-

gemein durchgeführt wird Die Gefäße mit fixierten, 25 findungsgemaßen Objekttragei fur Gewebekulturen

infizierten Gewebekulturen werden in emer Vielzahl mit mehreren Vertiefungen, kann em vollständig«

vorbereitet Wenn Serumverdunnungen angewendet Test, der 6 oder auch mehr Verdünnungen erfordert,

werden sollen, muß fur jede Verdünnung je eine auf emem einzigen Trager durchgefühlt werden Da-

Kultur in emer Petnschale, einem Objektträger oder durch entfallt das Bearbeiten von emer Vielzahl von

emem Deckglas vorbereitet werden Wenn mehr als 30 Kulturen und die Notwendigkeit einer Individuellen

eine Serumprobe verwendet werden soll, erfordert mikroskopischen Untersuchung vieler Kulturen Der

dies eine Vielzahl von Kulturen. Jede Kultur wird Objektträger mit vielen Vertiefungen kann in einem

dann mit emer Verdünnung des Serums des Patienten mikroskopischen Arbeitsgang geprüft werden

oder des Tieres behandelt Das Serum muß dann Jeder in einer Gewebekultur zuchtbare Virustrager

15 bis 30 Minuten in Kontakt mit der Kultur ver- 35 kann mit dieser Erfindung verwendet werden Durch

bleiben Diese wird dann m emem geeigneten Ver- Vorbereitung eines Gestells, auf dem sich Objekt-

dunnungsmittel gespult, um das überflüssige Serum trager mit einer Reihe fixierter, mit emem Virus oder

zu entfernen Die Kultur wird dann 15 bis 30 Mi- einer Gruppe von Viren infizierter Zellen befinden,

nuten mit emem mit Fluorescein konjugierten homo- steht dem Ai zt, dem Laboratorium oder Institut em

logen Anüserum behandelt Dieses Anüserum ist 40 rasches und spezielles Mittel zur Anwendung fur die

gewöhnlich Gammaglobuhn. Jede Kultur ward ge- Diagnose von Virus-Krankheiten zur Verfugung

spult, um den überflüssigen, mit Fluorescein konju- Weitere Einzelheiten der Erfindung sollen an Hand

gierten Stoff zu entfernen, und wird dann getrocknet eines Beispiels naher erläutert und beschrieben wer-

Nach dem Trocknen wird die Kultur mikroskopisch den, wobei auf die Zeichnungen Bezug genommen ist

untersucht, und zwar nut emem Fluoieszenz-Mikro- 45 F1 g 1 ist eine perspektivische Ansicht des Objekt-

skop. Eine positive Diagnose wird duich das Auf- tragers von oben und von den Seiten,

treten emer bestimmten Fluoreszenz m der behan- F1 g 2 ist eine perspektivische Ansicht des Objekt-

delten Kultur angezeigt tragers der F1 g 1 von oben und von den Seiten, mit

Die Anwendung der oben beschriebenen Fluores- einer zusammenhangenden Schicht virusinfizierter

zenztechmk ist gut bekannt. Sie ist beschrieben durch 50 Gewebekulturzellen in jeder Vertiefung, und

(a) A H Coons, International Rev Cytol, 5 1-23, Fig 3 ist eine perspektivische Ansicht des Bodens

1956, (b) A H Coons, In Geneial Cytological und der Seiten des Objektträgers von F1 g 1.

Methods, New York Academic Press, 1958, Volumel, Der Objektträger 10 ist eine rechteckige Platte, die

(c) C Liu, Ergebn. Mikrob Immunforsch, 33/242, aus einem flachen Stuck Glas oder anderem trans-

1960; und (d) Fluorescent Antibody Techniques, 55 parenten Material, wie ζ B Kunstharz, ζ Β PoIy-

Public Health Service Publication No 729 (1966), styrol, besteht Der Objektträger 10 hat zwei lange,

U S Gov Printing Office. parallel zueinander laufende Seiten oder Kanten

Obwohl die fluoieszierenden Antikörper verwen- 12-12 und im rechten Winkel zu den langen Seiten

dende Technik viele Vorteile hat, kann sie eine zeit- 12-12 stehende kurze Seiten oder Kanten 14-14 Jede

raubende und mühsame Arbeit sein So erfordert em 60 Seite 12 ist 90 mm lang Jede kurze Seite 14 hat eine

Test, bei dem 6 Serumverdunnungen notig smd, eine Breite von 25 mm Eine Langsnppe 16 mit einer

Gesamtzahl von 12 verschiedenen Kulturen in Petri- Breite von 5 mm und Quernppen 18 mit emer Breite

schalen, Deckglasern odei Objektträgern Jede em- von 2 mm begrenzen im Verein mit Erhebungen längs

zelne muß vorbereitet, behandelt, gespult, getrocknet der kurzen Seiten 14-14 dazwischenliegende quadra-

und geprüft werden 65 tische Vertiefungen 20 Die Oberflachen der Rippen

Demgegenüber ist der ei findungsgemaße Objekt- 16 und 18 und die Erhebungen an den kurzen Seiten

trager durch eine Vielzahl voneinander getrennter 14-14 liegen alle in der gleichen Ebene und parallel

Vertiefungen in der Oberflache der Platte, wobei die zur Unterseite des Objektträgers 26 Die Dicke des

Objektträgers, gerechnet von den Oberflachen der Rippen bis zur Objekttragerunterseite 26, betragt mm. Die Wände umschließen drei Seiten jeder Vertiefung 20 Diese Vertiefungen sind 0,5 mm tief, und jede Wand 24 einer Vertiefung hat eine Lange von mm Die Vertiefungen smd in der Nahe der Kante von oben bis zum Boden der Vertiefungen durchgehend offen Die Unterseite 26 des Objektträgers 10 ist eben und erstreckt sich parallel zum Boden 22 der Vertiefungen 20 In F ι g 2 enthalt jede der Vertiefungen 20 eine fixierte, zusammenhangende virusinfizierte Gewebekultur 28, die an der Bodenflache 22 der Vertiefungen angewachsen ist Die kurzen Seiten 14-14 bilden an jedem Ende des Objektträgers Wände von mm Breite fur eine Seite der Vertiefungen Auf dem Objektträger sind fur jede Reihe von Vertiefuagen die Bezeichnungen A und B und zusatzlich auf den Rippen 16 zwischen den sich gegenüberliegenden Vertiefungen die Nummern 1 bis 6 angebracht, so daß durch Angabe eines Buchstabens und einer Nummer jede Vertiefung bezeichnet werden kann.

Die folgenden Beispiele dienen dazu, die Erfindung weiterhin zu erläutern

Beispiel 1

Dieses Beispiel zeigt die Anwendung des Objekttragers nut mehreren Vertiefungen fur Gewebekulturen gemäß F ι g 1

(A) Ein einziger Objektträger mit mehreren Vertiefungen, wie er in F ι g 1 gezeigt ist, wird fur das zu untersuchende Serum des Patienten vorbereitet Der Objektträger wird in ein Kulturgefaß, daß eine Nährlösung fur die zu verwendenden Zellen enthalt, vollständig eingetaucht In diesem Falle wurden menschliche diploide Wi-38-Zellen verwendet Wi-38-Zellen werden der Nährlösung zugesetzt, die den Objektträger bedeckt Nach einer stationären Inkubationszeit von 4 bis 5 Tagen bei 35 bis 37° C wird die Kultur durch Einimpfung von Adenovirus Typ 3 in den Kulturträger infiziert

(B) Der mit einem Virus infizierte Objekttragei mit mehieren Vertiefungen wird aus der Nährlösung entnommen, 10 Minuten lang mit Aceton fixiert und dann getrocknet Die Kultui befindet sich auf allen Flachen der Platte Die Kultur wird von der Platte gewischt, aber nicht vom Boden der Vertiefungen 22, wie bei 28 in F ι g 2 gezeigt Jetzt enthalt jede Vertiefung eine zusammenhangende Schicht fixierter Wi-38-Zellen, die mit Adenovirus Typ 3 infiziert ist

(C) Dem Patienten, bei dem der Adenovii us Typ 3 als Krankheitsursache vermutet wird, wird Serum entnommen Es werden Verdünnungen des Serums des Patienten vorbereitet, und jede Vertiefung wird nut ungefähr 0,1 ml einer der Verdünnungen bedeckt Eine Reihe von Vertiefungen, ζ B Reihev4 der Fig 2, die Verdünnungen des Kontrollserums (des normalen Serums) enthalt, und eine andere Reihe, ζ B die Reihe B der F ι g 2, die Vertiefungen mit dem Serum des Patienten enthalt, werden voi bereitet, verdoppelte Veidunnungen im Verhältnis von 1 2, 4, 8, 16 und 32 werden vorbereitet

(D) Die in mehreren Vertiefungen befindliche Kultur wird dann fur 15 bis 30 Minuten bei 35 bis 37⁰Cm eme Befeuchtungskammer eingefühlt, und dann bei pH 7,2 nut einer mit 0,02 molaren phosphatgepufferten Salzlosung gespult, um das überschüssige Serum zu entfernen

(E) Dann wird jede Vertiefung mit einem nut Fluorescein markierten konjugierten Antiserum fur das im Serum des Patienten enthaltene Gammaglobulm uberschichtet Dieses markierte konjugierte Antiserum ist im Handel erhaltlich Es wird auf der zusammenhangenden Schicht in einer Befeuchtungskammer 30 Minuten lang bei 35 bis 37° C adsorbiert und wie oben mit dem Phosphatpuffer gespult

(F) Die in mehreren Vertiefungen befindliche Kultur wird dann in einem Fluoreszenzmikroskop

auf das Vorhandensein einer bestimmten Fluoreszenz mikroskopisch untei sucht Im positiven Falle fluoresziert das Präparat grün, im negativen Falle tritt kerne Fluoreszenz auf, wie im Falle des normalen Serums

Der obige Test wird mit einem einzigen Objekttrager durchgeführt und m einem einzigen Vorgang mikroskopisch beobachtet Das normale Serum und das verdachtige Serum befinden sich Seite an Seite und gestatten eme gleichzeitige Beobachtung

Beispiel 2

Dieses Beispiel zeigt einen Test zur Bestimmung des Vorhandenseins des Adenovirus-Antikorpeis im Serum eines Patienten

Ein Gestell mit 8 Objektträgern, wie sie in F ι g 2 gezeigt sind, wird dem Arzt oder Laboiatonum übergeben Auf jedem Objektträger befindet sich eine Gewebekultur zusammenhangender Zellen, die nut einem anderen Adenovirus-Typ infiziert ist, welcher, wie in Beispiel 1, Absatz (A) und (B) beschrieben, fixiert ist In diesem Falle jedoch handelt es sich um den Adenovirus der Typen 1, 2, 5, 3, 4, 7, 14 und 21 Dei Arzt behandelt jeden Objektträger mit dem verdachtigen menschlichen Serum und nut normalem Serum, wie in Abschnitt (C) des Beispiels 1 beschrieben Durch Wiederholung des ubiigen Verfahrens des Beispiels 1 kann innerhalb von ungefähr 2 Stunden bestimmt werden, ob einer der untei das Mikroskop gebrachten Adenovirus-Typen bei der Krankheit des Patienten eine Rolle spielt

Der erfindungsgemaße, neuartige Objektträger kann anstatt fur eine Diagnose von Virus-Antikorpern auch fur andere diagnostische Tests mit einem Fluoreszenz-Mikroskop Verwendung finden, ζ Β zur Diagnose von Bakterienkrankheiten

Claims (4)

1. Patentansprüche

   1 Objektträger aus einer 1 echteckigen, planparallelen Platte transpaienten Materials mit mehl ei en Vertiefungen fur Gewebekultuien, gekennzeichnet durch eme Vielzahl voneinander getrennter Vertiefungen (20) in der Obei flache der Platte, wobei die Vertiefungen an einer Seite einer Langskante (12) der Platte eine Öffnung haben, die sich von der oberen Seite bis zum Boden (22) der Vertiefung erstreckt
2. 2 Objektträger nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Boden (22) der Vertiefungen (20) eben sind und parallel zur Unter-/Oberseite des Objektträgers verlaufen
3. 3 Objektträger nach Anspruch 1 oder 2, gekennzeichnet durch Rippen (16), die auf der

   Oberflache der Platte nach oben vorspringen und einteilig mit der Platte ausgebildet sind
4. 4 Objektträger nach Anspruch 1, 2 oder 3, gekennzeichnet durch getrennte Reihen von Vertiefungen in der Oberflache der Platte entlang der Langskanten (12)

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