DE2222951C3 - Vorrichtung zum Bestimmen der Enzymaktivität in Vollblut - Google Patents
Vorrichtung zum Bestimmen der Enzymaktivität in VollblutInfo
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Description
Die Erfindung bezieht sich auf eine Vorrichtung turn Bestimmen der Enzymaktivität in Vollblut, in
welcher auf einem mit Löchern versehenen Träger jeweils im Bereich der Löcher getrennte und abgegrenzte
Testzonenbereiche in einer festen Anordnung vorgesehen sind, in welcher in jedem dieser Testzonenbereiche
mehrere mit Testreagenzien und einer optischen Indikatorsubstanz getränkte poröse Scheiben
übereinander angeordnet sind, aus denen die Testreagenzien durch aufgebrachte flüssige Testmedien
eluierbar und zusammen mit diesen in Kontakt mit der Indikatorsubstanz zu bringen sind, und in welcher
mindestens eine der porösen Schichten aus einem Membranfilter zum Zurückhalten störender
Substanzen besteht.
Die Heranziehung von Blutenzymen zur Diagnose pathologischer Zustände genört zur üblichen klini-S
sehen Praxis. So läßt sich ein Herzinfarkt durch die Messung der Aktivität verschiedener Enzyme feststellen,
die bei der Beschädigung des Myokardiums in den Blutstrom gelangen. Hierfür kommen folgende
fünf Enzyme in Frage:
Kreatin-Phosphokinase (CPK), Laktat-Dehydrogenase (LDH), Λ-Hydrotybutyrat-Dehydrogenase (HBD),
GIutamat-Oxalessigsäure-Transaminase (GOT), Glutamat-Pyruvat-Transaminase (GPT),
bei denen erhöhte Werte auf einen Herzinfarkt hindeuten.
Aus der US-PS 3 526 480 ist nun eine Vorrichtung der eingangs genannten Art bekannt, die an sich für
solche Untersuchungen geeignet ist. Sie erfordert lediglich den Zusatz einer kleinen Menge Blutserum
und eine kurze Präinkubation; die Enzymaktivität wird dann auf spektral-photometrischem Wege bestimmt.
Während diese Vorrichtung für die Verwendung in klinischen Laboratorien sehr gut geeignet ist, erfordert
sie doch eine relativ genaue Temperatursteuerung sowie die Verwendung von Serum oder Plasma
an Stelle von Vollblut und benötigt schließlich ein Spektro-Photometer zur Auswertung. Eine solche
Vorrichtung ist daher für Notsituationen ungeeignet, wo die erforderlichen Instrumente und geschultes
Personal oft nicht schnell genug zur Stelle sind. Der Erfindung liegt nun die Aufgabe zugrunde, eine Vorrichtung
der eingangs genannten Art zu schaffen, die für eine Verwendung in einem Schnelltest zur raschen
Durchführung orientierender Untersuchungen geeignet ist, also mit normalem Vollblut ohne genaue
Dosierung arbeiten und rein visuell ausge\verti_*. werden
kann.
Dies wird erfindungsgemäß dadurch erreicht, daß die porösen Scheiben in fallender Reihenfolge aus
einer oberen Glasfaserscheibe, einer unteren Glasfaserscheibe, einer Membranfilterscheibe und einer
Scheibe aus Zelluloseazetat bestehen, daß die Glasfaserscheiben als Vorfilter ausgebildet sind, um
amorphe Gegenstände, einschließlich weißer Blutzellen, zurückzuhalten, daß die Membranfilterscheibe
zum Zurückhalten der roten Blutzellen ausgebildet ist und daß die Scheiben übereinander gestapelt und
durch einen starren Rahmen zusammengehallen sind. Vorteilhafterweise besteht hierbei der starre Rahmen
aus zwei übereinander angeordneten Platten und einem auf einer der Platten befestigten Haltering.
Dies hat den Vorteil einer sehr handlichen und kostensparenden Ausbildung.
Die Vorrichtung nach der Erfindung läßt sich nach einer Ausgestaltung dadurch sehr günstig zu
einem auch durch ungeschultes Personal verwendbaren Schnellteststreifen ausgestalten, daß der Träger
neben einem Testzonenbereich zum Bestimmen von Kreatin-Phosphokinase (CPK) in Vollblut einen weiteren
mit Vollblut zu beaufschlagenden Blind-Testzonenbereich aufweist, der alle erforderlichen Testreagenzien
mit Ausnahme von Kreatin-Phosphat (CP) enthält, und drei mit Wasser zu beaufschlagende
Standardwert-Testzonenbereiche besitzt, die vorbestimmte, abgestufte Mengen an CPK für den
Vergleich mit normaler, erhöhter und überhöhter Enzymaktivität enthalten.
Im folgenden wird die Erfindung an Hand eines in der Zeichnung dargestellten Ausführungsbeispieles
näher erläutert.
Dabei zeigt die einzige Figur tinen solchen Schnellteststreifen in auseinandergebogener perspektivischer
Darstellung.
Der Schnellteststreifen hat ein Plattenformat, wie es in der Zeichnung dargestellt, und ist ausgebildet
zum Messen der Aktivität von Kreatin-Phosphokinase (CPk), die ein bevorzugtes Indikatorenzym für
die Frühdiagnose von myokardialen Infarkten ist. Der Test benutzt ein bekanntes Reaktionsschema
und ist mit der Reduktion von Nitrotetrazolblau durch den Elektronenträger N-Methylphenazon-Methosulfat
verbunden, wobei das Ausmaß der Enzym-Reaktion in einem gegebenen Zeitintervall durch eine Farbreaktion sichtbar gemacht wird. Alle
Reagenzien sind entsprechend den Nnrmwcrten für CPK in Scheiben bzw. Tabletten aus absorbierendem
Material gefriergetrocknet, und diese Scheiben sind zwischen zwei abgestimmten Poiyesterolplatten gehalten,
wie in der Zeichnung dargestellt ist.
Die Konzentrationen der Reagenzien weiden eingestellt, so daß sich die optimalen Reaktionsbedingungen
ergeben, wenn die gefriergetrockneten Komponenten durch Befeuchten der Scheiben aufbereitet
werden. Die folgenden Reagenzien und Konzentrationen wurden als geeignet ausgewählt und sind
beschrieben von L. N i e 1 s e η und B. L u d ν i p. s e n,
J. Lab & Clin. Med., 1962, 195-168 (1963), und S. B. Rosalki, »Nature«, S. 207, 414. Jahrgang
1965.
Konzentration (mg, ml)
. 1,0
. 1,0
. 1,0
Reagenzien
Cystein-Hydrochlorid
Adenosin-Diphosphat (ADP) . ..
Nicotinamid-Adenin-Dinucleotid-
Nicotinamid-Adenin-Dinucleotid-
phosphat (NADP) 1,0
Glucose 3,0
Adenosin-5'-Monophosphat (AMP) .. 4,0
Nitrotetrazolblau (NBT) 1,0
Kreatin-Phosphat (CP) 5,0
Magnesiumazetat 2,0
N-Methylphenazon-Methosulfat (PMS) 0,1
Hexokinase (Hex) 0,1 IU
Glucose-6-Phosphat, Dehydrogenase
(G-6-P deH) 5,0 IU
Kretin-Phosphokinase (CPK) wie
erforderlich
Diese Reagenzien sind mit der Ausnahme von Cystein Hydrochlorid in Glycyl-glycin gelöst, daß auf
einem pH-Wert von 6,8 eingestellt und in geeigneter Weise auf Scheiben verteilt ist, die zur Ausführung
des Tests in der Testvorrichtung enthalten sind.
Eine Vorrichtung zur Untersuchung der Enzyme besteht aus einer oberen Platte 10 und einer unteren
Platte 12 aus geeignetem Material, beispielsweise herkömmlichem Labor-Polysterol. Jede der Platten
hat mehrere Öffnungen oder Löcher 14, und zwar sind in dem dargestellten Ausführungsbeispiel fünf
Löcher für noch zu beschreibende Zwecke vorgesehen. Glasfaserscheiben 16 und 18 sind dazu geeignet,
über den Öffnungen aufgebracht und durch einen Haltering 20 aus geeignetem Material und in geeigneter
Weise gehalten zu werden. Die relativen Größen der Glasfaserscheiber. 16 und 18 und des Halteringes
20 gegenüber dem Loch 14 sind durch strichpunktierte Linien 22 angedeutet. Zwischen den Platten
10 und 12 und entsprechend unter der öffnung 14 in der oberen Platte 10 und über dem Loch 14 in
der unteren Platte 12, die für einen Einsatz geeignet sind, sind ein Membranfilter 24 und eine Scheibe 26
aus Celluloseazetat angeordnet, deren Größe bezüglich der Löcher 14 durch unterbrochene Linien 28
angedeutet ist. Die relativen Größen erlauben die Anordnung und Halterung dieser verschiedenen
Scheiben in Verbindung mit dem Haltering 20.
Die Verteilung der Reagenzien auf den verschiedenen Scheiben ist wie folgt:
Obere Glasfaser 16 Cysteinhydrochlorid
Unterer Glasfaser 18 Zusammensetzung
allerBestandteileaußer PMS und Enzymen
Membranfilter 24 PMS
Celluloseazetat 26 CPK,Hex.,G-6-PDeH
Diese Trennung von gegenseitig inkompatiblen Reagenzien ergibt eine maximale Speicherstabilität
und Test Verläßlichkeit.
Die Glasfaserscheiben dienen nicht nur als ein Reservoir für Reagenzien, sondern entfernen auch die
weißen Blutzellen, um ein Verstopfen des Membranfilters zu verhindern, welches die roten Zellen und
andere Teilchen entfernt. Daher nimmt ein Tropfen Blut, der auf die obere Glasfaserscheibe 16 aufgebracht
wird, das Cysteinhydrochlorid, die Reagenzien von der unteren Scheibe 18 und das PMS vom
Membranfilter 24 auf und Hefen sowohl das gefilterte
Plasma als auch die Reagenzien an die Enzyme auf dem Celluloseacetat 26, wo die Reaktion stattfindet.
In der Praxis werden die Reagenzien in der angegebenen Weise zugeführt und im Gefrierverfahren
getrocknet. Die beiden Platten werden dann miteinander versiegelt, verpackt und gespeichert. In der bevorzugten
Ausführungsform werden fünf Sätze von Scheiben verwendet, um fünf Testflecken zu erhalten.
Die Flecken A, B und C enthalten genormte CPK-Proben, welche jeweils die normalen, erhöhten
und hohen Enzymkegel darstellen. Der Fleck D enthält alle Reagenzien ohne Kreatinphospat. Der Fleck
E ist für die Untersuchung von CPK und enthält Reagenzien für die gesamte Reaktionsfolge. Jede gewünschte
Auswahl von Flecken kann verwendet weiden.
Bei der Verwendung wird die Platte mit dem Haltering und den Glasfaserscheiben oben angeordnet.
Den Flecken A, B und C wird ein Tropfen Wasser zugeführt, und jedem der Flecken D und E wird ein
Tropfen Blut zugeführt. Da die Flüssigkeitsaufnahme durch die Absorbtion der Scheiben gesteuert wird, ist
das jedem Fleck zugeführte Volumen ohne Bedeutung. Die Platte wird dann umgedreht und die Entwicklung
der blauen Farbe beobachtet. Nach einigen Minuten wird die Intensität der Farbe im Fleck E
mit den Normalwerten an den Flecken A, B und C zur direkten Ablesung der Aktivität von CPK vergliechen.
Die in der angegebenen Weise präparierten Platten ermöglichen die Unterscheidung zwischen normalen
and erhöhten CPK-Werten im Blut und haben die
folgenden Vorveile:
1. Geschicklichkeit der Bedienungsperson ist nicht erforderlich.
2. Das Blut kann direkt verwendet werden.
3. Der Test unterscheidet klar zwischen normalen und erhöhten CPK-Werten.
4. Keinerlei zusätzliche Instrumentation ist erforderlich.
5. Die Messung von Flüssigkeitsvolumina ist nicht erforderlich.
6. Interne Normale machen Temperatursteuerung und Messung der Reaktionszeit überflüssig.
Der Fleckentcst nach der Erfindung ist somit ein nützliches Werkzeug zur Überprüfung von Patienten
bezüglich myokardialcr Infarkte in Notsituationen.
Dieses System kann auch zur Untersuchung des Blutes bezüglich erhöhter Werte anderer Enzyme
verwendet werden, die während eines myokardialen Infarktes in das Blut entlassen werden: Lactat-dehydrogenase,
α-hydroxybutyrat-dehydrogenase, Glutaminat-Oxalessigsäure-transaminase
und Glutamat-ίο pyruvaltransaminase, wobei geeignete Abwandlungen
des in der Plattenanordnung enthaltenen Reagenzsystems in diesen Fällen erforderlich sein können.
Hierzu 1 Blatt Zeichnungen
Claims (3)
1. Vorrichtung zum Bestimmen der Enzymaktivität in Vollblut, in welcher auf einem mit Löchern
versehenen Träger jeweils im Bereich der Löcher getrennte und abgegrenzte Testzonenbereiche
in einer festen Anordnung vorgesehen -sind, in welcher in jedem dieser Testzonenbereiche
mehrere mit Testreagenzien und einer optischen Indikatorsubstanz getränkte poröse Scheiben
übereinander angeordnet sind, aus denen die Testreagenzien durch aufgebrachte flüssige Testmedien
eluierbar und zusammen mit diesen in Kontakt mit der Indikatorsubstanz zu bringen
sind, und in welcher mindestens eine der porösen Schichten aus einem Membranfilter zum Zurückhalten
störender Substanzen besteht, dadurch gekennzeichnet, daß die porösen Scheiben
in fallender Reihenfolge aus einer oberen Glasfaserscheibe (16), einer unteren Glasfaserscheibe
(18), einer Membranfilterscheibe (24) und einer Scheibe (26) aus Zelluloseazetat bestehen, daß
die Glasfaserscheiben (16, 18) als Vorfilter ausgebildet sind, um amorphe Gegenstände einschließlich
weißer Blutzellen, zurückzuhalten, daß die Membranfilterscheibe (24) zum Zurückhalten
der roten Blutzellen ausgebildet ist und daß die Scheiben (16, 18, 24, 26) übereinandergestapelt
und durch einen starren Rahmen (10, 12, 20) zusammengehalten sind.
2. Vorrichtung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der starr·: Rahmen aus zwei
übereinander angeordneten Platten (10, 12) und einem auf einer (10) der Platten befestigten Haltering
(20) besteht.
3. Vorrichtung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß cbr Träger (10, 12)
neben einem Testzonenbereich (E) zum Bestimmen von Kreatin-Phosphokinase (CPK) in Vollblut
einen weiteren mit Vollblut zu beaufschlagenden Blind-Testzonenbereich (D) aufweist, der
alle erforderlichen Testreagerizien mit Ausnahme von Kreatin-Phosphat (CP) enthält, und drei mit
Wasser zu beaufschlagende Standardwert-Testzonenbereiche (A, B, C) besitzt, die vorbestimmte,
abgestufte Mengen an CPK für den Vergleich mit normaler, erhöhter und überhöhter Enzymaktivität
enthalten.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19722222951 DE2222951C3 (de) | 1972-05-10 | 1972-05-10 | Vorrichtung zum Bestimmen der Enzymaktivität in Vollblut |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19722222951 DE2222951C3 (de) | 1972-05-10 | 1972-05-10 | Vorrichtung zum Bestimmen der Enzymaktivität in Vollblut |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2222951A1 DE2222951A1 (de) | 1973-11-22 |
| DE2222951B2 DE2222951B2 (de) | 1974-07-18 |
| DE2222951C3 true DE2222951C3 (de) | 1975-03-06 |
Family
ID=5844617
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19722222951 Expired DE2222951C3 (de) | 1972-05-10 | 1972-05-10 | Vorrichtung zum Bestimmen der Enzymaktivität in Vollblut |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE2222951C3 (de) |
Families Citing this family (9)
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|---|---|---|---|---|
| DE3029579C2 (de) * | 1980-08-05 | 1985-12-12 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Mittel zur Abtrennung von Plasma oder Serum aus Vollblut |
| US4987085A (en) * | 1987-06-22 | 1991-01-22 | Chemtrak Inc. | Blood filtering metering device |
| US4959324A (en) * | 1989-03-16 | 1990-09-25 | Chemtrak, Inc. | Sample pad assay initiation device and method of making |
| US4925572A (en) * | 1987-10-20 | 1990-05-15 | Pall Corporation | Device and method for depletion of the leukocyte content of blood and blood components |
| US4923620A (en) * | 1987-10-20 | 1990-05-08 | Pall Corporation | Device for depletion of the leukocyte content of blood and blood components |
| US4880548A (en) * | 1988-02-17 | 1989-11-14 | Pall Corporation | Device and method for separating leucocytes from platelet concentrate |
| US5344561A (en) * | 1989-05-09 | 1994-09-06 | Pall Corporation | Device for depletion of the leucocyte content of blood and blood components |
| US5229012A (en) * | 1989-05-09 | 1993-07-20 | Pall Corporation | Method for depletion of the leucocyte content of blood and blood components |
| FR2923151B1 (fr) * | 2007-11-02 | 2010-09-03 | Commissariat Energie Atomique | Dispositif de prelevement sanguin comportant au moins un filtre . |
-
1972
- 1972-05-10 DE DE19722222951 patent/DE2222951C3/de not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE2222951A1 (de) | 1973-11-22 |
| DE2222951B2 (de) | 1974-07-18 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
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