DE19726254C2 - Toleranzinduktion durch Proteasen - Google Patents

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von Trypsin, Chymotrypsin, Bro­ melain, Naurominidase und/oder Ficin für eine Toleranzinduktion gegen Antigene.

Wenn antigene Substanzen einem Tier oder Menschen oral verabreicht werden, können sie eine Immunantwort des Körpers auslösen. Je nach Antigen und Verfas­ sung des Immunsystems des betroffenen Säugetiers fällt diese Immunantwort mehr oder weniger stark aus. In einigen Fällen ist eine solche Immunantwort wünschens­ wert, in anderen Fällen wäre es jedoch vorzuziehen, wenn eine Immunantwort gegen das verabreichte Antigen ausbleibt oder doch zumindest geringer ausfällt, da zum Beispiel das Antigen als Medikament dienen kann und die Reaktion des Immunsy­ stems den Körper unnötig belastet oder sogar per se krank macht.

Es war daher eine Aufgabe gemäß der vorliegenden Erfindung, eine Möglichkeit vorzusehen, eine Toleranz gegen Antigene zu induzieren.

Diese Aufgabe wird durch den Gegenstand des vorliegenden Anspruchs 1 gelöst. Unteransprüche geben vorteilhafte Weiterbildungen der Erfindung an.

Gemäß Anspruch 1 wird die Verwendung von Trypsin, Chymotrypsin, Bromelain, Naurominidase und/oder Ficin zur Toleranzinduktion gegen Antigene vorgeschla­ gen.

Es ist seit längerem bekannt, daß hydrolytische Enzyme in der Lage sind, gegen sich selbst eine Toleranz zu induzieren, das heißt, daß bei der oralen Verabreichung von Enzymen offensichtlich das Immunsystem derartig beeinflußt wird, daß eine Re­ aktion des Immunsystems auf die Enzyme ausbleibt. Es kommt also nicht zu einer Antikörperbildung bzw. einer spezifischen, gegen diese Enzyme gerichteten CD4- Zellaktivierung und daher auch zu keiner Sensibilisierung, obwohl die Enzyme aus dem Darm wahrscheinlich zu mehr als 5% resorbiert werden.

Verabreicht man jedoch gleichzeitig mit den Enzymen auch Enzyminhibitoren, wie z. B. Aprotinin, kommt es zur Antikörperbildung und Sensibilisierung gegen die En­ zyme. Es entstehen allergische Reaktionen gegen die Enzyme.

Die Enzyme sind demnach in der Lage, eine Toleranzinduktion gegen sich selbst zu erzeugen. Die Ursache für diese Toleranzinduktion scheint gemäß den Forschungen der vorliegenden Erfindung in der Enzymwirkung selbst zu liegen. Dies kann man aus der Tatsache ableiten, daß die Enzymwirkung durch Antienzyme, wie z. B. Apro­ tinin, gehemmt wird und das damit verbunden die Toleranzinduktion durch die En­ zyme abnimmt oder beendet wird. Diese Erkenntnis bildet die Grundlage für die vor­ liegende Erfindung, die darauf abzielt, daß zusammen mit dem Antigen ein oder mehrere hydrolytische Enzyme verabreicht werden. Es wurde überraschend festge­ stellt, daß die Enzyme eine Toleranz auch gegen diese Antigene induzieren.

In einer bevorzugten Ausführungsform werden Trypsin, Chymotrypsin, Bromelain und/oder Papain in Kombination mit Rutosid verwendet oder eine Kombination der­ selben.

Die erfindungsgemäß verwendeten Enzyme lassen sich kostengünstig aus den fol­ genden Rohmaterialien isolieren.

Bromelain ist ein proteolytisch wirksames Enzym aus dem Preßsaft der Ananas und kann auch noch aus reifen Früchten isoliert werden.

Papain ist ein proteolytisches Enzym, das aus dem Milchsaft der unreifen, fleischi­ gen Früchte des Melonenbaums Carica Papaya gewonnen wird. Reines Papain ist ein kristalines Polypeptid mit einem MG. von 23350, das aus einer Kette von 212 Aminosäureresten mit 4 Disulfid-Brücken besteht; Sequenz und Raumstruktur sind bekannt. Papain wird vielfältig eingesetzt: Aufgrund seiner Protein-spaltenden Ei­ genschaft als "Fleischzartmacher" oder "Mürbesalz", zum Klären von Bier, zur Brot- und Hartkeksherstellung, in der Lederzubereitung, in der Textil-Industrie zum Ent­ basten von Seide und zur Verhinderung von Wollverfilzung, in der Tabak-Industrie zur Qualitätsverbesserung, zur Rückgewinnung von Silber aus verbrauchtem photo­ graphischem Material, ferner in der Bakteriologie zur Pepton-Gewinnung. In der Medizin dient Papain bereits zur Unterstützung der enzymatischen Verdauung, zur enzymatischen Wundreinigung und als Zusatz zu Zahnprothese-Reinigungsmitteln. Für Spezialzwecke werden Papain-Präparate auch an Kunststoffpolymere oder Aga­ roseträger gebunden angeboten. Papain ist auch als Katalysator zur Synthese von Oligopeptiden verwendet worden.

Trypsin ist ein proteolytisches Enzym, das ebenfalls im Pankreas gebildet wird und in Verbindung mit anderen Enzymen bereits therapeutisch eingesetzt wird. Es gehört zu den Serin-Proteinasen. Kristallines Trypsin hat ein MG von ca. 23300, ist in Was­ ser, nicht aber in Alkohol löslich, besitzt ein Wirkungsoptimum bei pH 7-9 und spal­ tet Peptid-Ketten spezifisch Carboxy-seitig der basischen Aminosäurereste L-Lysin und L-Arginin. Die räumliche Struktur des aus 223 Aminosäuren bestehenden Tryp­ sins ist bekannt.

Chymotrypsin gehört zu den Verdauungsenzymen. Es entsteht im Pankreas aus Zymogenen unter der Einwirkung von Trypsin. Chymotrypsin gehört zur Familie der Serin-Proteasen aufgrund eines Katalysemechanismus, an dem wesentlich ein Se­ rin-Rest beteiligt ist.

Eine besonders gute Wirksamkeit zeigt sich bei der Verwendung einer Kombination der Enzyme Bromelain, Papain und/oder Trypsin. Neben anderen bemerkenswerten und unerwarteten Wirkungen dieser Enzyme hat die kombinierte Verwendung der genannten Enzyme weiterhin den Vorteil, daß auch bei einer Langzeitanwendung keine schädigenden Nebenwirkungen auftreten.

Erfindungsgemäß sind die verabreichten Proteasen Trypsin, Chymotrypsin, Brome­ lain, Papain, Neuraminidase und/oder Ficin. Gegebenenfalls kann zusätzlich auch Rutosid und Superoxiddismutase verwendet werden.

Erfindungsgemäß verabreicht man die Enzyme zusammen mit dem Antigen, gegen das die Toleranz induziert werden soll. Bei dem Antigen, gegen das eine Toleranz erzeugt werden soll, handelt es sich z. B. um das Antigen Basic Myelo Protein (BMP), Colla­ gen, ein Autoantigen oder ein Extrakt aus Dick- und Dünndarm von Morbus Crohn- oder Colitis-Ulcerosa-Erkrankten.

Zusätzlich kann vorteilhaft Rutosid verwendet werden. Möglich ist dabei jeder denkba­ re Verabreichungsweg, wie z. B. oral, parenteral usw. Das Enzym und das Antigen können ebenfalls in getrennten Darreichungsformen verabreicht werden.

Eine besonders gute Wirksamkeit hat die kombinierte Verwendung von 20 bis 100 mg Bromelain, 40 bis 120 mg Papain und 10 bis 50 mg Trypsin pro Dosiseinheit.

Ganz besonders bevorzugt ist eine Kombination von 90 mg Bromelain, 120 mg Pa­ pain und 100 mg Rutosid × 3H₂O.

In einer anderen bevorzugten Ausführungsform wird eine Kombination von 48 mg Trypsin, 90 mg Bromelain und 100 mg Rutosid × 3H₂O verwendet.

In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform werden 10 bis 100 mg, besonders bevorzugt 100 mg Rutosid × 3H₂O pro Dosiseinheit verwendet.

In noch einer bevorzugten Ausführungsform werden 100 mg Papain, 40 mg Trypsin und 40 mg Chymotrypsin verwendet.

Das Medikament kann weiterhin alle üblichen Hilfs- und/oder Trägerstoffe enthalten.

Als Hilfs- und Trägerstoffe kommen z. B. Lactose, Magnesiumstearat, Stearinsäure, Talkum, Methacrylsäure, Copolymerisat Typ A, Shellack, Makrogol 6000, Di­ butylphthalat, Vanillin, Titandioxid, weißer Ton, Polyindon, gelbes Wachs und Carnaubawachs in Frage.

Claims (8)

1. Verwendung von einem oder mehreren proteolytischen Enzymen zusammen mit dem Antigen für die Induktion einer Toleranz gegen Antigene, dadurch gekennzeichnet, daß als Enzym Trypsin, Chymotrypsin, Bromelain, Papain, Neuraminidase und/oder Ficin verwendet wird.

2. Verwendung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Antigen Basic Myelo Protein (BMP), Collagen, ein Autoantigen oder ein Extrakt aus Dick- und Dünndarm von Morbus Crohn- oder Colitis-ulcerosa-Erkrankten ist.

3. Verwendung gemäß einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß zusätzlich Rutosid verabreicht wird.

4. Verwendung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß 10 bis 100 mg, vorzugsweise 100 mg Rutosid × 3H₂O pro Dosiseinheit verwendet werden.

5. Verwendung nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß 90 mg Bromelain, 120 mg Papain und 100 mg Rutosid pro Dosiseinheit verwendet werden.

6. Verwendung nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß 90 mg Bromelain, 48 mg Trypsin und 100 mg Rutosid pro Dosiseinheit verwendet werden.

7. Verwendung gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß zusätzlich Superoxiddismutase verwendet wird.

8. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß 20 bis 100 mg Bromelain, 40 bis 120 mg Papain und 10 bis 50 mg Trypsin pro Dosiseinheit verwendet werden.