DE1956214A1

DE1956214A1 - Pruefmittel und Verfahren zu deren Herstellung

Info

Publication number: DE1956214A1
Application number: DE19691956214
Authority: DE
Inventors: Gianni Linoli; Mannuci Enzo Sergio
Original assignee: Miles Laboratories Inc
Current assignee: Bayer Corp
Priority date: 1968-11-08
Filing date: 1969-11-07
Publication date: 1970-05-21
Also published as: GB1287785A; FR2022881A1; BR6913869D0; US3616251A; ES373063A1; BE741425A; NL6916834A

Description

Die Erfindung betrifft Prüfmittel, insbesondere Teststreifen, die zum Nachweis einer Komponente in einem flüssigen System geeignet sind, und die einen wasserfesten Träger, wie z.B. einen organoplastischen Streifen, enthalten, der als integralen Bestandteil ein Testsystem zum 'nachweis .einer solchen Komponente enthält. Diese Prüfmittel_werd"en hergestellt, indem man"das Te3tsystem in einen zumindest teilweise gelösten Anteil des Trägermaterials einarbeitet und dieses Trägermaterial, das das Testsystem enthält, dann wieder verfestigt. ·

Teststreifen zum Nachweis und/oder zur Bestimmung von verschiedenen Komponenten in flüssigen. Systemen sind seit vie-.

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CLen Jahren bekannt. Diese Teststreifen bestanden meistens im

jwes ent liehen -_T . - -, . ...-..-,, . ... . .

/aus saugfahigen Materialien,wie Filterpapier, die mit ■den Reagenskoiaponenten des Testsysteme imprägniert waren. Diese Materialien hatten den hauptsächlichen iiaeliteil, dass die Reagensköxiponenten des JDestsystems oft in dem Fluss igke its syst ein, das untersucht werden sollte, löslich waren, Das war besonders für Teststreifen, die zur Messung des pH-V/ertes eines Fluss igke its syst ems verwendet wurden, der Fall. Es wurde vorgeschlagen;, selektiv-durelilässige schützende Trennschichten auf die nit dem !Reagens imprägnierten saugfähigen Träger aufzutragen, indem man diese Träger mit einer Plastikschicht überzog, wie sie z.B. aus Äthyl-Cellulose erhaTfceriwird. Diese bekannten überzogenen Teststreifen hatten den Machteil, dass sie bei Ihrer Herstellung zusätzliche Arbeitsgänge erforderten.

Es hat sich nun gezeigt, dass verbesserte Prüfmittel hergestellt werden können, die die Nachteile der bisher bekannten überwinden. G-emäss der vorliegenden Erfindung wirü ein Prüfmittel zum Nachweis einer Komponente in einem, flüssigen System hergestellt, das einen wasserfesten Träger

enthält und als integralen Bestandteil dieses Trägers ein Testsystem für die erwähnte Komponente. Diese Prüfmittel werden nach dem neuen Verfahren hergestellt, indem man dieses Testsystem in mindestens einen teilweise gelösten Anteil des wasserfesten Trägermaterials" einbaut und dieses Trägermaterial, das nun das Testsystem enthält, wieder verfestigt. Im einzelnen,werden diese neuen Prüfmittel günstigerweise dadurch hergestellt, dass man einen festen Anteil eines wasserfesten Trägermaterials mit einem Gemisch des Testsystems und einem Lösungsmittel für das Trägermaterial zusammenbringt, wobei mindestens ein oberflächlicher Anteil des festen Trägermaterials wenigstens teilweise gelöst ιwird, wodurch das Testsystem in diesen

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BADORKSiNAL

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Anteil gemischt -werden kann, bevor das Trägermaterial durch Eindampfen des Lösungsmittels wieder verfestigt wird. ·-

Die Prüfinittel "bzw. feststreifen der vorliegenden Erfindung können verwendet werden., um verschiedene Komponenten in einen flüssigen System nachzuweisen und/oder zu bestimmen. Beispielhaft für eine derartige Komponente ist ein Enzym, wie eine Phosphatase, das in einer Köperflüssigkeit, wie Serum, enthalten ist. Dieses Enzym kann geeignet sein eine Kopplungsverbindung, wie fl -Naphthol, von einem Substrat, wie ß-llaphthylphosphat, abzulösen.. Die abgelöste Kopplungsverbindung kann dann mit einem Ghromogen ein Seaktionsprodukt bilden. Die Intensität der entstehenden Parbe h§3gt ab von der Konzentration der Kupplungsverbindung und gibt so die Menge des spezifischen Enzyms in der Testprobe an. Die Prüfmittel für ein Enzym können, in dem wasserfesten Träger eingearbeitet, ein Gemisch aus dem Substrat und dem Chromogen enthalten. ¥ahlweise kann das Substrat auch getrennt zuerst verwendet werden, um mit einer enzymhaltigen Probe zu reagieren. Dann wird ein Teststreifen, der ein Chronogen enthält, mit deia entstehendem Reaktionsgemisch, das die Kopplungsverbindung enthält, in Berührung gebracht. Im folgenden ist eine liste von repräsentativen Enzymen angegeben, die mit den Prüfnitteln der vorliegeriien Erfindung gemessen werden können.

-folgt E

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'Enzyme

Phosphatese Phosphatase Lipase

Glutamin-0 xale s s igsäure Transaminase

Leucin-amino-p3ptidase

Esterase

H-Acety1- ßglucosaminidase

Oxytocinase

Substrat FreigeJsetäbeKopp-' ' lungsverbindung

β -Naphthylphos- β -Naphthol phat

QCr-Faphthyl- c-O-Naphthol phosphat

β -Naphthyllau- P-Naphthol

Natrium- asparagat-Oxaless igsäure -ist, -ketoglu&arat

in- J6-

naphthylamin

-Naphthylamin. Naphthol

Naphthyl-ester

Naphthyl- pacetyl-glucosamin Naphthol

Cysteine-m-aniside

m-Anisidine

Ein erfindungsgemässes Prüfmittel, das ein geeignetes Chromogen enthält, kann auch verwendet werden, um andere Verbindungenjwie Bilirubin und S^nztraubensäure, direkt .nachzuweisen und zu bestimmen ohne dass sie vorher mit einem Substrat reagieren müssen.

Chromogene, die zur Reaktion mit den oben angegebenen Verbindungen verwendet werden können, um gefärbte Reaktionsprodukte zu ergeben, sind die bekannten Diazoniumsalze von Farbstoffen, wie die wasserlöslichen, handelsüblichen Echt-Farbstoffsalze.. Typische Beispiele hierfür sind die Diazoniumsalze von 6-Benzamido-4-methoxy-m-toluidin (Scht-Siolett B, Farbinciex 37 165), 5-Nitro-2-aminoanisöl-zinkchlorid (üchtrot B, Farbindex 37 125), 4'-Aminö-2¹,5'-^ ". . diäthoxybenzanilid, (Eciitblau BB, Farbindex 37175), 4-Benzoyl-araino-2,5-diraeibhoxyanilin (üSchtblau RR, Farbindex 37155) und ähnlichen. Obwohl diese Chromogene wasserlöslich _ί4,^>Λο^0.0982171519 '

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sind, werden sie aus dem Prüfmittel der vorliegenden Erfindung nicht ausgelaugt. Die selektiv-durchlässige ITatur des Trägermaterial erlaubt es der Testflüssigkeit in das Prüfmittel einzudringen, hält aber das Ghroinogen oder die entstandene Parbverbindung zurück.

Das bevorzugte Chromogen in den Prüfraitteln zum lachweis und/oder zur Bestimmung von Enzymen ist ein unlösliches polymeres Diazoniumöalz νδΐΓ einem aromatischen Polyamin, das durch eine Amidbindung an ein Kationenaustauscherharz gebunden ist. Dieses Ghromogen wird hergestellt, indem man ein Kationenaustauscherharz, das saure Gruppen, wie Gar-, bonsäuregruppen enthält, mit einem Halogenierungsmittel wie Thionylchlorid zur Reaktion bringt, um mindestens einige der Säuregruppen des Harzes in Acylhalogenid-Gruppen umzuwandeln, ^ie entstehenden Aeylhalogenid-Gruppen werden dann mit einem aromatischen Polyamin wie o-Dianisidin, zur Reaktion gebracht, um ein Harz herzustellen, das Amidbindungen und freie aromatische Aminogruppen enthält. Dieses Produkt wird dann mit; bekannten Verfahren behandelt, um die freien aromatischen Aminogruppen zu diazotieren und das unlösliche polymere Diazoniumsalz herzustellen. Dieses Produkt ist sowohl in wässrigen als auch in nicht-wässrigen Systemen unlöslich.

Die Prüfmittel der vorliegenden Erfindung können -auch"verwendet werden, uia den pH-Wert eines flüssigen Systems zu messen. In diesen Fällen enthält das Testsystem, ein pH-empfindliches Material als Chromogen. Es ist günstig, wenn das pH-Indikator-Material selbst unlöslich ist. Der unlösliche pH-Indikator kann aus dem .Reaktionsprodukt aus einem unlöslichen polymeren Material und einer pH-empfinölichen Verbindung bestehen. Seiche unlöslichen Indikatoren

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tonnen auf. verschiedene V/eise hergestellt werden. Ein unlösliches polymeres Diazoniumsalz eines aromatischen PoIyimins, das durch eine Amidbindung an ein Kationenaustau- _;scherharz gebunden ist, wie oben beschrieben, kann mit einer geeigneten Kopllungsverbindung wie ΪΊ,Ν-Dimethylanilin zur Reaktion gebracht werden. Das-entstehende Reaktionsprodukt , Ι3ΙΖΓ^ΖΘ^-δΐ bei verschiedenen pH-Werten Parb-

umwandlungen in Abhängigkeit von dem spezifischen verwendeten Polyamin in dem polymeren Diazoniumsalz.

Eine andere Poria eines pH-Indikators kann hergestellt werden, indem man ein bekanntes Diazoniumsalz einer p-Aminobenzyl-Cellulose mit einer geeigneten Kopplungsverbindung wie pü~Naphthylamin _zur Reaktion bringt.· Das■entstehende Reaktiörisprodukt ändert seine Parbe im pH-Bereich von 4-6 von violett nach orangerot.

Eine weitere Porm eines pH-Indikators kann hergestellt werden, indem man eine lösliche Verbindung mit mindestens einer freien Amino- oder Phenolgruppe, wie Puchsin, mit einem Polycarbonsäureharz-acylhalogenid zur Reaktion bringt. •Dieses Polycarbonsäureharz-acylhalogenid kann hergestellt werden,, indem man ein Kationenaustauscherharz, das Garbonsäuregruppen enthält, mit einem Halogenierungsmittel, wie Thionylchlorid, zur Reaktion bringt. Das entstehende Reaktionsprodukt ändert seine Parbe, wenn es von sauren in alkalische Bedingungen kommt.

Nooh eine weitere Porm eines pH-Indikators kann durch Reaktion eines geeigneten Diazoniumsalzes, v/ie dem Diazoniumsalz von 6-i3enzamido-4-Biethoxy-in-tolüidin (Eohtviolett B,

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Farbindex 37 165)» mit dein Reaktionsprodukt aus einen Polycarbonsäureharz-acylhalogenid und einer geeigneten aromatischen Verbindung mit mindestens einer freien Aminogruppe, wie 1Τ-( 1-liaphthyl)äthylen-diaiuin hergestellt werden. ·

Die erfindungsgemässen Prüfmittel können auch Testsysteme für andere Komponenten, wie z.B. Harnstoff im Blut.enthalten. Bei dieser Form der Erfindung enthält das Testsystem ein Urease-Enzym, das die Hydrolyse von Harnstoff unter Freisetzung von Ammoniak katalysiert, einen geeigneten Puffer und einen pH-Indikator, der im pH-Bereich von 5-8 die Farbe von gelb nach blau ändert.. Ein geeigneter pH-Indikator ist das Heaktionsprodukt aus einen Ionenaustauscherharz mit freien Aminogruppen und Dibrontliyraolsulfonphthalein (Br ont hy molblau). Andere für den Harnstofftest.geeignete pH-Indikatoren, die die Farbe im Bereich von 6-8 von gelb nach rot ändern, sind 'die Reaktionsprodukte aus- einem Ionenaustauscherharz mit freien Aminogruppen und o-Kresolsulfonphthalein (Kresolrol) oder Phenolsulfonphthalein (Phenolrot) oder m-Kresolsulfonphthalein (Metakresolpurpur). ·

Der in der vorliegenden Erfindung verwendete wasserfeste Träger, der das Sestsystem enthalten soll, ist günstigerweise ein farbloses transparentes organoplastisches I.Iaterial, das zumindest teilweise löslich ist oder das reinem geeigneten lösungsmittel quellen kann. V.-enn ein transparenter Träger verv/endet wird, bildet das entstehende -trüfmittel einen angemessen transparenten Testbereich, der das ChroHiogen enthält. Die von dem Ohromogen in dem Testbereich entwickelten Farben können dann visuell oder instrumenten unter reflektierten oder durchscheinenden Licht beobachtet werden. Das isx- ein Vorteil der erfindungsgemässen ver-

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besserten -früfmittel, verglichen mit den meisten bekannten Prüfmitteln, die nur unter reflektiertem Licht beobachtet werden können. Bei einer Form der Erfindung giesst man ein Gemisch aus dem Trägermaterial, Lösungsmittel und Tests^/stem zu einer Folie aus, und lässt es sich durch Eindampfen des Lösungsmittels verfestigen. Die entstehende Folie kann selbsttragend sein oder sie kann an einen geeigneten Träger gebunden sein. Bei einer bevorzugten-Form der Erfindung wird das Trägermaterial in fester Form mit einem flüssigen Gemisch aus dem Lösungsmittel und Testsystem zusammengebracht. Das Lösungsmittel·, erlaubt es dem Testsystem mindestens in einen Teil der überfläche des Trägers einzudringen. Das Lösungsmittel wird dann verdampft. In folgenden sind illustrative Beisjoiele für geeignete wasserfeste Trägermaterialien und geeignete Lösungmittel hierfür angegeben.

Trägermaterial "Lösuhgsriittel

Celluloid · Aceton·

^; . Methylethylketon

Cellulose-acetat Aceton

• ' Aceton-IJethyläthyl-

keton^ Gemisch

A'thyl-cellulose · Aceton

Benzol

Polymethylmethacrylat Chloroform

Tetrachlorkohlenstoff

Polystyrol Benzol

Toluol

Cellulose-nitrat Aceton

Polyvinyl-chlorici Aceton

Polyäthylen Benzol

Gegebenenfalls können verschiedene Füllstoffe, wie Cellulose, Bariumsulfat, -aluminiumoxid und ähnliches zu den rrüfnittel zugesetzt werden, um die Hasse des

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BAD ORIGINAL

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Testsysteins zu erhöhen und die FarbbeStimmung zu erleichtern. Diese Füllstoffe neigen dazu, die■Trübung des Testbereichs des Prüfmittels zu erhöhen. Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele näher erläutert.

Der in den Beispielen verwendete Ausdruck "Teststreifen" besagt nicht, dass es sich tatsächlich nur um Streifen handeln muss, sondern das verwendete Trägermaterial kann selbstverständlich auch jede beliebige andere Form haben, d.h. es kann z.B. auch viereckig, rund, stab- oder kugelförmig sein, obwohl die Form von Streifen bevorzugt ist.

Beispiel 1 , ·

Ein PolymeEhacryl-kationenaustauscherharz in saurer Form mit reaktionsfähigen Carbqnsäuregruppen (Amberlit IRP 64). wurde zu einem feinen Pulver von einer Teilehengrösse von 20 bis 50/U gemahlen und getrocknet. 50 g dieses Pulvers wurden 6 h in 200 ml Thionylchlorid unter Rühren am Rückfluss erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde dann filtriert und das entstehende chlorierte Harz wurde mit .wasserfreiem Toluol gewaschen und im Vakuum getrocknet. 10 g dieses chlorierten Harzes wurden in eine Lösung von 3,3g o-Dianisidin in 75 ml trockenem Toluol gegossen. Die entstehende Suspension wurde 5 h unter Rühren auf'85⁰C erhitzt. Das P_te&ktionsgemisch wurde filtriert und das Harz mit 100 ml ilthanol gewaschen, aus dem aaa uioiit umgesetzte Amin zurückgewonnen werden konnte. Das Harz wurde dann in eine öhroraatographiersäule gegeben und„.mii..2.0p_m_L2nHBi'^

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und dann mit Wasser gewaschen, 3 g des so hergestellten

acylierten Acyl-Harzes wurden in 10 ml 3nHBF, suspendiert und auf eine Temperatur von 0-5°G abgekühlt. Zu der entstehenden Suspension wurden unter Rühren tropfenweise ' 10 ml 1n HaitfOp zugegeben. Es wurde weiter gerührt und die Temperatur 4 h aufrechterhalten. Das Gemisch wurde dann zentrifugiert und das isolierte Produkt im Vakuum

^ getrocknet. Dieses Produkt hatte die Formel..

ψ' Harz-CO-MH-Ar-li ^N- BF. in der "Harz" das Kationenaustauscherharz und "Ar" den Dianisidinkern bedeuten. Dieses Produkt ist ein unlösliches polymeres Diazoniumsalz eines aromatischen Polyamine das durch eine Amidbindung an ein Kationenaustauscherharz gebunden ist. Dieses Produkt wurde weiter zu einem feinen Pulver mit einer T'eilchengrösse von 1-5 /U gemahlen.

Ein Gemisch von 0,2 g des oben beschriebenen Produktes 0,015 g Cellulose-acetat, 2 ml Aceton und 2 ml Methylethylketon wurde homogenisiert. Ein 0,2 mm dicker Celluloids treif en, der 5 mm breit und 60 mm lang war, wurde " mit -einem Anteil des obigen Flüssigkeitsgemisches behandelt und an der Luft und im Vakuum getrocknet. Der entstehende Streifen bestand aus einem wasserfesten organoplastischen öelluloid-

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träger, der als integralen.Bestandteil das obige unlösliche polymere Dianzoniumsalz eines aromatischen PoIyamins, das durch eine j-imidbindung an ein Kationenaustauscherharz gebunden war* enthi^e It. Dieses ^hromogen ist geeignet, mit verschiedenen Kopplungsverbindungen gefärbte Reaktionsprodukte zu ergeben und so als ein Testsystem zu wirken.

Die wie oben hergestellten Teststreifen waren in dem Bereich, der das Ohromogen enthielt, gelb. Wenn diese Teststreifen in eine wässrige alkalische Lösung, die 350/U g P .-Naphthol pro nil Lösung enthielt, gebracht wurden, änderte sich die Farbe in rot-violett, was eine Reaktion zwischen demji-Naphthol und dem Chromogen anzeigte.

Beispiel 2

Das Verfahren des Beispiels 1 wurde mehrere Male wiederholt, wobei die aromatischen Polyamine, Benzidin, o-Tolidin, 4,4'-Diaminodiphenylamin, m-Phenylendiamin, 1,8-Diaminonaphthalin, 2-01-1 ,4-diaminobenzol, 2-Nitro-1,4-diaminobenzol und 1,4-Diaminobenzol-2-sulfonsäure verv.-endet wurde, um verschiedene Chromogene zu bilden, Diese Ghromogene _x wurden dann jeweils im Gemisch mit Celluloseacetat, Aceton und Methylethylketon wie in Beispiel 1 verwendet, um die Celluloidstreifen auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1 beschrieben zu behandeln. Die. entstehenden Teststreifen wurden dann in wässrige· alkalische Lösungen gebracht, die 350 /U g 0-Naphthol pro ml der Lösung enthielten und es wurden Farbänderungen bemerkt, Die folgende Tabelle aeigt die Farbänderungen, die eine Reaktion zwischen dem p-lTaphthol und dem Ohromogen, das in dem Oelluloidträger enthalten war, anzeigten.

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Aminicomponente

Benzidin

o-Tolidin

4,4'-Diaminodiphenylamin m-Phenylend iamin 1,8-Diaminonaphthalen 2-C1-1,4-Diaminobenzol -1,4-Diaminobenzol .

!- . 1A-37	029
Anfangs färb e eier teststrei fen	Endfarbe der Teststreifen
gelb	rot
gelb	violett
grün	braun
gelb	/Orange-rot
orange	rot-braun
weiss	rot
gelb	rot
weiss	rot

2-S0,H-1,4-Diaminobenzol

Die obigen Beispiele verwenden alle wasserunlösliche Chromogene. Das folgende Beispiel beschreibt die Verwendung eines wasserlöslichen Testsysteme, das in einem wasserfesten Träger enthalten ist. '

Beispiel 3

Ein Gemisch aus 0,025 g des Diazoniumsalzes von 6-Benzaraido-. -4-methoxy-m-toluidin (Echtviolett B, Parbindex 37165), 0^:020 g Celluloseacetat, 0,008 g HBF., 4 ml Aceton und 0,010g TiO₂ wurde homogenisiert. Ein 0,2 mm dicker Streifen Celluloid, '5 mm breit und 60 mm lang wurde mit einem Teil dieses flüssigen Gemisches behandelt und dann an der Luft und unterVakuum getrocknet. Der entstehende Teststreifen, der das Diazoniumsalz in dem Celluloidträger enthielt, wurde dann in eine wässrige alkalische Lösung gebracht, die bis zu 500 /α g £ -Naphthol pro ml Lösung enthielt. Die Farbe des Streifens änderte sich von violett nach rot-violett und zeigt dadurch eine Reaktion zwischen dem Diazoniunsalz und dem β -Naphthol an. Das wasserlösliche Diazoniumtalz wurde nicht aus dem Celluloidstreifen ausgelaugt,woraus ersichtlich ist, dass es in üem Celluloid eingebettet war.

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BAD ORiQINAL

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Be i s ρ i e 1

/Das Verfahren des Beispiels 3 wurde wiederholt, wobei verschiedene wasserlösliche Diazoniumsalze verwendet wurden. Die entstehenden öelluloidstreifen , die die Diazoniumsalze enthielten wurden dann in wässrige alkalische Lösungen von β -Naphthol eingetaucht und es wurden Farbänderungen beobachtet. Die wasserlöslichen Salze wurden aus dem Celluloid nicht ausgelaugt. Die folgende Tabelle zeigt die Farbänderungen für die verv/endeten Diazoniumsalze,.

Diazoniumsalze von Ursprüngliche Endfarbe Farbe -

5-Uitro-2-aminoanisol-ZnCl2

(Echtrot B, Farbindex 37125) rot hellrot

4'-Ämino-2',5'-diäthoxybenzanilid

(Echtblau BB, Farbindex 37 175) blau . rot-violett

anilin
(Echtblau HE, Färbindex 37155) blau . rot-violett

Die in den Beispielen 1 bis 4 hergestellten Teststreifen sind geeignet zum qualitativen Nachweis und/oder zur quantitativen Bestimmung von |6-naphthol. Der Betrag der Farbänderung in dem ßhroiuogen hängt direkt von aer Menge von β -Haphthol ab, das in der Testprobe enthalten ist. Diese Reaktion kann auch verwendet werden, um Phosphatase-Enzyme nachzuweisen und/oder quantitativ zu bestimmen. \7enn eine Testprobe, aie Phosphatase enthält₍ mit einem geeigneten Puffer und einem ji-lTaphthylphosphat behandelt wird, setzt das Enzym-ß-naphthol in Freiheit, das mit den oben genannten Teststreifen nachgewiesen und gemessen werden kann. Es ist auch möglich, dass der Puffer und das ji-Napht hy !phosphat in dem Teststreifen enthalten .aiiäd7 sof dass uie rhosphataseanäferse vereinfacht werden kann. Das wird in dem folgenden Beispiel beschrieben.

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Beispiel 5 , ,

Das Verfahren des Beispiels 1 wurde wiederholt, wobei 20__gt g /^-isTaphthy!phosphat in dem flüssigen Gemisch zur Behandlung des Celluloidstreifens verwendet wurden. Hur eine Seite des Streifens wurde auf eine Länge von ,5 mm mit diesem Gemisch behandelt. Die andere Seite des Streifens wurde mit einem Klebemittel abgedeckt, das nach dem Trocknen des Streifens entfernt wurde. Ein 5 mm breiter Filterpapierstreifen wurde dann in eine wässrige Lösung von 50 G-ew.-fo Tris—(hydroxymethyl)aminomethan-Puffer. getaucht und getrocknet. Er wurde dann in 5 mm lange Abschnitte geschnitten . Ein solcher Abschnitt wurde mit einem Klebemittel auf die Seite des Celluloidstreifens geklebt, die^vorher abgedeckt war. Das entstehende Prüfmittel mit einem 5 mm x 5 mm grossen Testbereich wurde dann in eine 0,5 ml Testprobe serum, das eine bekannte Menge alkalische Phophatase enthielt, 5 min bei 37°C eingetaucht. Der Tris-Chydroxymethyli-aminomethan-Puffer wurde von dem Serum aus dem Filterpapier ausgelaugt und ergab einen pH-Y/ert der Probe von 10 - 12. Diese alkalischen Bedingungen sind notwendig zum Nachweis einer alkalischen Phosphatase. Die alkalische Phosphatase in dem Serum drang in den Teststreifen ein und reagierte mit dem p-Naphthylphosphat. Das durch die alkalische Phosphatase aus dem ß-Naphthylphosphat in Freiheit gesetzte ρ-Naphthol verursachte dann eine Farbänderung des Cnromogens, das, in dem Celluloidstreifen enthalten war. Die entstehende Farbe, wurae mit einer Farbtafel verglichen, die die Beziehung zwischen der Farbe und dem Gehalt an alkalischer, x-'hosphatase angab, um diesen Gehalt der Testprobe au bestimmen. Der so bestimmte Gehalt an alkalischer Phosphatase stimmten mit dem bekannten Gehalt an Phosphatase in dem Serum überein.

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Beispiel

Das Verfahren aes Beispiels 5 wurde wiederholt, wobei ein Pilterpapieratschnitt verwendet wurde, der mit einer wässrigen Lösung von Natriumcitrat anstelle von Tris-(hydroxymelityl)aminomethan imprägniert war. Der entstehende Teststreifen wurde dann.in eine 0,5 ml Testprobe eines Serums, das eine bekannte Menge von saufer Phosphatase enthielt, 10 min bei 37 C eingetaucht. Der liatriumcitrat-Puffer ergab einen pH-Wert der Probe von 4,5· Das durch die saure Phosphatase in Freiheit gesetzte ji -rNa^thol führte- dann zu einer Farbänderung in dem Teststreifen, der mit einer Farbtafel für saure Phosphatase verglichen wurde, um den Gehalt an saure Phosphatase in der Testprobe zu bestimmen. Der so bestimmte Gehalt an Phosphatase stimmte.mit dem bekannten Gehalt in dem Serum überein.

Be i s ρ i e 1 7

Ein Gemisch aus 200 mg eines Chromogens, das aus diazotierten o-Dianisidin , das durch eine Amidbindung an ein carbonsaures Kationenaustauscherharz gebunden war und entsprechend Beispiel 1 hergestellt worden war, 4-0 mg Äthy!cellulose, 100 mg Bariumsulfat, 2 ml Benzol und 2 ml Aceton wurde gründlich gerührt. Ein 5 mm breiter, 7,6 cm langer und 0,2 mm dicker Polystyrolstreifen wurde 5 see in dieses Gemisch eing3taucht und dann bei Zimmertemperatur getrocknet. Die Komponenten des Gemisches waren in eine Plastikmatrix eingebaut, da sie mit einem Plastikfilm überzogen zu sein schienen. Dieser Reagensstreifen wurde dann 10 min in eine gesättigte alkalische (3 -liaphthol lösung eingetaucht. Während dieser Zeit entwickelte sich in dem Streifen eine hellbraune Farbe, die eine Reaktion zwischen dem Chromogen und dem jS-Naphthol anzeigte. *

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Β,' e i s ρ i e 1 8

jtreifen aus Cellulosenitrat und Celluloseacetat wurden in las oben beschriebene Gemisch, des Beispiels 7 3 see eingetaucht und bei Zimmertemperatur getrocknet. Die Komponenten des Gemisches schienen in die Streifen eingebaut worden zu' sein. Diese Streifen wurden dann in eine gesättigte alkalische ß-Naphthollösung eingetaucht und es entwickelte sich eine rot-braune Farbe, die eine Reaktion zwischen dem Chromogen und dem !^-Naphthol anzeigte.

Beispiel 9

Ein Papierstreifen wurde einige see in eine Senzolsuspension von Polyäthylen getaucht und dann 30 min in einem Ofen bei 105°C gehärtet. Der entstehende mit Polyäthylen überzogene Papierstreifen wurde dann 10 see in das oben beschriebene Gemisch des Beispiels 7 eingetaucht und bei Zimmertemperatur getrocknet. Das Chromogengernisch schien einen Überzug auf dem Streifen zu bilden und teilweise in das Polyäthylen eingebettet zu sein. Dieser Reagensstreifen ergab dann eine positive Farbreaktion wenn er mit einer alkalischen jV"" llaphthollösung in Berührung gebracht wurde.

Beispiel- 10

Ein Gemisch aus 200 mg dee öhromogens von Beispiel 7_t 200g Bariumsulfat, 40 mg Celluloseacetat und 4 ml Aceton wurde gründlich gerührt. Sin Polyvinylchloridstreifen wuroe in dieses Gemisch eingetaucht, und bei Zimmertemperatur getrocknet. Der Heagensstreifen der ein Chromogen enthielt, das in eine Plastikmatrix eingebaut war, ergab eine positive Farbreaktion, wenn er mit einer alkalischen ß-Naphthollö'sung in Berührung gebracht wurüe.

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' SAD ORJGiNAL

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in den obigen Beispielen wurden die Teststreifen immer so ergestellt, d^ass man den v/asserfesten Träger mit einem /lösungsnittelhaltigen Chrornogengeniisch behandelte, bei dem das Lösungsmittel auf den Träger einwirkte und ihn teilweise mindestens an der Oberfläche löste, und dazu führte, dass das Ghromogen in den Träger eingebettet wurde. Das folgende Beispiel beschreibt die Bildung eines Fril'fml11eis' mit einem wasserfesten Träger, der ein Chromogen enthält, wobei der Träger einen Film auf einem _Giünd^Öl?^r^_~ ändere Zusammensetzung bildete.

Beispiel 1J[

200 mg des im Beispiel 7 beschriebenen Chromogens wurde mit einer I^igen (Gewicht/Volumen) Lösung von Celluloseacetat in Aceton vermischt, wobei ein Gesamtvolumen von 3»5 ml entstand. Die folgenden Grundmaterialien wurden in aas, obige Gemisch eingetaucht: Filterpapier, Holz, Aluminiumfolie, Glas, rostfreier Stahl und Polytetrafluoräthylen. Die so behandelten Materialien wurden dann bei Zimmertemperatur getrocknet. Es wurde ein wasserfester Celluloseacetat überzu_u', der das Ghroraogen enthielt, auf der Oberfläche jedes der genannten Materialien gebildet. Diese überzogenen Ausgangsmateriaiien wurden dann mit einer.alkalischen /Ϊ-Naphthollösung in Berührung gebracht. Bei allen entwickel te sich innerhalb 50 see eine rote Farbe, die eine Reaktion zwischen aem Chromogen und dem .3 -Naphthol anzeigte.

Die obigen Beispiele beziehen sich alle auf den Nachweis von ß-Naphthol und besonders den Nachweis und/oder die Bestimmung von ß -liapnthol, das uurch Wirkung einer alkalischen ?hophatase oder einer sauren ^hosphatase aus ß -Naphthylphosphat in Freiheit gesetzt worden ist. Die Prüfmittel der vorliegenden Erfindung können auch zum liachv/eij una/oder zur Bestimmung von anderen Substanzen verwendet v/erden, wie in den folgenden Beispielen beschrieben wird. _₁₈„

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Beispiel 12

30 mg Diazoniumsalz von 5-Nitro-2-aininotoluol (Echtrot RL, Farbindex 37100) Chromogen wurden in einem Gemisch aus 2ml Aceton und 10 mg Celluloseacetat' gelöst. Ein Cellu-• loidstrejfen wurde mit dieser Lösung behandelt und· an der Luft und dann im Vakuum getrocknet. Der entstehende · Teststreifen besass. einen wasserfesten Film, der das

• Chromogen enthielt, und in dem Bereich des Chromogens eine gelbe Farne. Dieser Teststreifen wurde dann in

P eine wässrige alkalische Lösung eingetaucht, die 500 /Ug g(, -Naphthol pro ml Lösung enthielt. Diese Lösung enthielt auch 1,5 m Tris-ihydroxymethylJaminomethan-Puffer. Der .reaktionsfähige Anteil des Teststreifens nahm eine orange Farbe ah, die eine Reaktion mit dem ^Naphthol anzeigte.

• Beispiel 13

Ein Celluloidteststreifen, der das unlösliche polymere Diazoniumsalz von 2-Chlor-1,4-diaminobenzol enthielt, das durch Amidbindungen an ein Kationenaustauscherharz

7urae ■ ·■ ·

_ nach dem in Beispiel 2 beschriebenen Verfahren hergestellt worden ist. Dieser Teststreifen war in der reaktionsfähigen Zone weise. 0,1 ml einer wässrigen Lösung von 0,2 m Uatrium-asparagat, Ö,1 m pC-Keto-. glutarat und 0,1 m Phosphat-Puffer von pH 7,4 wurden in ein .Reagensglas gegeben. Hierzu wurden 0,2 ml eines Testserums, das- Glutamin-Oxalessigsäure Transaminase enthielt zugegeben. Dieses Gemisch wurde 20 - 30 min auf 37 C gehalten. Der oben beschriebene Teststreifen wurde dann 2 min in die Reaktionslösung getaucht, Die reaktionsfähige Zone des Teststreifens färbte sich orange-rot und zeigte eine Reaktion zwischen- dein Chromogen in dem Teststreifen und der Oxalessigsaure, die von der Transaminase aus dem QC -Ketoglutarat-Natrium-asparat-Subetrat in 2siheit gesetzt worden war, an.

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BAD ORIGINAL

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Beispiel 14

Ein Celluloidteststreifen der das unlösliche polymere Diazoniumsalz von 2-*itro-1,4-diaminobenzol, das durch eine Amidbindung an ein Kationenaustausclierharz gebunden war, enthielt, wurde entsprechend Beispiel 2 herge-

—4 stellt. 0,5 Eil einer wässrigen Lösung von 6,85 x 10 in o^-Leucin-ri-naphthyiamin-hydrochlorid-Substrat und 0,2 m Phosphat-Puffer von pH 7 wurdenin ein Reagensglas "gegeben. Hierzu wurden0,05 ml eines Testserums, das Leuein-aminopeptidase enthielt,- gegeben. Dieses Gemisch wurde 1 h bei 37 C gehalten. Der oben beschriebene Teststreifen wurde dann 5 min in die Reaktionslösung getaucht« Die reaktionsfähige Zone des Teststreifens wurde rotviolett und zeigte eine Reaktion zwischen dem Ghromogen und dem ρ -Haphthylamin, das von dem Enzym in dem Serum "aus dem Substrat in Freiheit gesetzt wurde, an.

Beispiel 15

In diesem Beispiel wurde ein Celluloidteststreifen von der in Beispiel 1 beschriebenen Art mit einer gelben reaktionsfähigen Zone verwendet. 1 ml einer v/ässrigen Lösung von 0,2 mg k -liaphthyl-laurat-Substrat pro ml Lösung, 0,-1 m Tris-(hydroxymethyl)aminome than- Puff er und 20 (iew.-^i* Hatriumcholat yurdenin ein Reagensglas gegeben. Hierzu wurde 0,1 ml eines Testserums mit Lipaseaktivität gegeben. Dieses Gemisch wurde 30 min auf 37⁰C gehalten. Der oben beschriebene Reaktionsstreifen wurde dann 5 nin in die■Reaktionslösung eingetaucht. Die reaktionsfähige Zone des Teststreifen färbte εΐοίι rot-violett und zeigte eine Reaktion zwischen dem Chronoger und dem p-lfaphthol_f das durch die Lipase aus α em Substrat freigesetzt worden war, an.

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Beispiel 16

einige Ein Celluloseacetatstreifen wurde /min in eines Kupfer-II-chlorid-Acetan-Lösung getaucht. Dann nahm man den so behandelten Streifen aus der Lösung und liess das Aceton verdampfen. Der Streifen wurde dann einige min in"eine Neocuproin-Aceton-Lösung getaucht und daraus entfernt. Nach dem Verdampfen des Acetons entstand ein zart-grün gefärbter Streifen, der quantitativ mit verschiedenen Mengen Ascorbinsäure reagierte, wobei sich die Farbe des Streifens in verschiedene Abstufungen von bernsteinorange veränderte, entsprechend der ^enge der vorhandenen Ascorbinsäure.

obigen Beispiele beschreiben die Verwendung, eines Testsystems in das ein wasserfester Träger eingebaut ist, der mit einem aktiven Bestandteil einer Testflüssigkeit reagiert; um einige Komponenten des flüssigen Systems nachzuweisen, oder zu bestimmen. Die vorliegende Erfindung umfasst auch Teststreifen, die geeignet sind, zur Messung von pH-Werten, wobei die Komponente oder das Charakteristikum des flüssigen Systems, das nachgewiesen oder bestimmt werden soll, die 'Wass'e"rstoff'ionen}:onzentration oder der-pH-Wert, ist. Das wird in den folgenden Beispielen beschrieben.

Beispiel 17

Ein unlösliches polymeres Diazoniumsalz von Benzidin, das durch eine Amidbindung an ein carbonsaures Kationenaustauscherharz gebunden ist, wurde entsprechend den in Beispiel 1 und 2 beschriebenen Verfahren hergestellt. 5 g dieses Produktes wurden dann in 20 ml eines Puffers von pH-5 gelöst, der aus einem Gemisch aus Tris-(-hydroxymethyl)-aminomeftian und 2 m Essigsäure bestand. Zu dieser Suspension wurden bei 2O⁰C unterführen ein 50^iger sto chiometrischer

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Überschuss von ΪΤ,ϊί-Dimethylanilin zugegeben; Es wurde 20 min weitergerührt, wobei ein unlöslicher Indikator entstand, der das Reaktionsprodukt zwischen dem obigen Diazoniumsalz und der Ν,-N-Dimethylanilin Kopplungsverbindung war. Dieser Indikator wurde dann durch Filtration gewonnen, mit Wasser gev/aschen und getrocknet. Nun wurde ein Gemisch aus 400 mg dieses Indikators, 400 mg Cellulosepulver, 80 mg Äthylcellulose, 2 ml Benzol und 2 ml Aceton hergestellt. Ein Celluloidstreifen wurde in dieses Flüssigkeitsgemisch eingetaucht und getrocknet. Das entstehende Produkt war ein Celluloidstreifen, der den oben angegebenen Indikator in dem Streifen enthielt. V/enn man diesenStreifen in ein wässriges Medium von pH-Wert 1 eintauchte, hatte er eine violette Farbe. In einem wässrigen Medium von pH-Wert 2 war die Farbe gelb. Dieser Farbumschlag ist reversibel, wenn sich der pH-V/ert des zu messenden Mediums in diesem Bereich ändert.

Beispiel 18

Unlösliche Polymere Diazoniumsalze von aromatischen Polyaminen, die durch eine Amidbindung an ein carbonsäures Kationenaustauscherharz gebunden sind, wurden mit verschiedenen aromatischen Polyaminen nachdem in Beispl/el 1 beschriebenen Verfahren hergestellt. Diese Diazoniumsalze wurden dann mit verschiedenen Kupplungskomponenten entsprechend Beispiel 17 beschriebenen Verfahren zur Reaktion.lgebracht^un lösliche Indikatoren entstanden. Diese Indikatoren wurden dann nach dem im Beispiel 17 beschriebenen Verfahren in die Celluloidstreifen eingebaut. Die entstehenden Indikatorteststreifen .wurden dann verwendet um pH-Änderungen nachzuweisen. Im folgenden sind 'die^Charak~teristika" so Jierg_e-

stelXter"Teststreifen angegeben;

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	\ 6	-22-	1	95621-4	Partie
	Kopplungsverbin- dung·	1A-37 029	rot gelb
Aromatische Polyamin	Ν,ΪΤ-Dimethylanilin	PH	rot gelb
m-Phenylendianiin	N, Η-Dime thylanilin	1 2	violett gelb
1,4-Diamino-6-benzöl- sulfonsäure	H,N-Dimethyianilin	3 4	braun purpur
2-Chlor-1,4-phenylen- dianiin	8-Hydroxjfchinolin	1 2
2-Chlor-1,4-phenylen- diamin	12 13

Beispiel

Pulverisierte Cellulose wurde gründlich mit verdünnter Säure, verdünntem Alkali und Wasser gewaschen und getrocknet. 4 g dieses Materials wurden dann mit 12g p-Fitrobenzylchlorid und 30 ml einer 40 Gew.-$bigen wässrigen ETatrium-

un§ bei 95°C stark gerührt. Das Reaktions- .

ve hydroxidlösun

gemisch würde während des ersten Teils der exothermen Reaktion gekühlt. Uach 4 h wurde das Gemisch in einen grossen überschuss von kaltem Wasser gegossen und _t filtriert. Der Rückstand wurde dann mit Wasser, mit Äthanol und schliesslich mit Aceton gewaschen. 5 g der so hergestellten p-Nitrobenzyleellulose wurden in 50 ml Äthanol suspendiert und nahe bis an den Siedepunkt erhitzt. Das Gemisch wurde dann stark gerührt und hierzu wurden 5 g Natriumhydrosulfit das in Wasser gelöst war, langsam zugegeben. Fach weiterem 30 min langem. Erhitzen des Gemisches wurde das hellgelbe Produkt ab£iltriert und mit kaltem Wasser gewaschen. 5 "g.. der so hergestellten p-Aminobenzylcellulose wurden in 10 ml 2[jij3alzsäure suspendiert, mit 20 ml Wasser vermischt und in einem Jiiabad gekühlt. Unter ständigem Rühren wurden langsam 0,5 m ftatriumnitritlösung zugegeben» bis ein Test mit -Sfärkepapi'er~~~15 min "nach der letzten Zugabe

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des Nitrits positiv war. Es wurde 15 min- weiter gerührt, und.das Material wurde abfiltriert und mit schwach-saurem Eiswasser .gewaschen. Bas -rrodukt ist das Diazoniumsalz von p-Aminobenzylcellulose. Dieses Diazoniumsalz wurde dann mit verschiedenen Kopplüngsagentien entsprechend dem im Beispiel 17 "beschriebenen Verfahren zur Reaktion gebracht, wobei unlösliche Indikatoren entstanden. Diese Indikatoren wurden dann in Celluloidstreifen eingebaut, indem man das Celluloid mit einem Gemisch aus 800mg des Indikators, 80 mg Äthylcellulose, 2 ml Benzol und 2 ml "Aceton_>behandelte. Die entstehenden Indikatorteststreifen wurden dann verwendet um pH-Änderungen anzuzeigen. Im folgenden sind die Charakteristik^ von so hergestellten Teststreifen angegeben.

Kopplungsverbindung

N-( 1 -llaphthyl )äthylendiamin

Farbe

_v7c-i\Tapifchylamin.

1,8-Diaminonaphthalin 8-Hydroxychinolin

2-3 3-4	violett orange-rot
4-5 5-6	violett orange-rot
5 6	grün-blau violett-rot
12 13	g"elb rot

Beispie'l

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5 g eines Polycarbonsäureharz-acylchlorid^d.as mit_ dem..,_ ._ Verfahren des Beispiels 1 hergestellt worden war, wurden unter Rühren zu einer 80 C warmanToluollösung von basischem i\ichsin zugegeben. 10 ml Triäthylamin vmrden dann tropfenweise zugegeben und es wurde 3 h weiter unter Srhitzen gerührt. Das entstehende Produkt vnirde dann abfiltriert und gewaschen. Es handelt sich um einen unlöslichen Indikator,^ der das..Reaktiionsprodukt-aiisldem-Harz-:.

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₁äcylchiqrid_und_Jfuchsin ist_._ Dieser Indikator^ v/urde dann.__- Mßch__3e±ß-p±el 17_in_einen Cellulosestreifen eingebaut. D entstehende Teststreifen hatte in einer sauren Lösung eine mittelrosa Färbung, während er in alkalischen Lösung eine dunkelrosa-violett Farbe annahm.

Beispiel

21

Bin Polycarbonsaure E¥^z-ab"yl chlor id,,.._ das entsprechend dem im Beispiel 1 angegebenen Verfahren hergestellt v/urde,-wurde mit N-(1-iTaphthyl)äthylendiamin nach dem im Beispiel 20 angegebenen Verfahren zur Reaktion gebracht. 5 g des entstehenden Produktes wurden in 40 ml einer pH 5 Pufferlösung aus Essigsäure und Tris-(hydroxymetiyl)aminomethan dispergiert. Zu dieser Suspension wurden unter Rühren bei Zimmertemperatur 0,1 g eines geeigneten Diazoniumsalzes zugegeben. Es wurde 20 min weiter gerührt und das Reaktionsprodukt wurde abfiltriert und gewaschen. Der entstehende Indikator wurde dann in einen Celluloidstreifen nach dem in Beispiel 17 angegebenen Verfahren eingebaut. Dieses Verfahren wurde für verschiedene Diazoniumsalze wiederholt. Die entstehenden Indikatorteststreifen wurden dann verwendet, um pH-Veränderungen nachzuweisen. Im folgenden sind die Charakteristika für die so hergestellten Teststreifen angegeben.

Diazoniumsalz von 6-Benzamido-4-metho.xy-m-toluidin (Echtviolett, Farbindex 37165) ^:

Sulfanilsäure

ü-Dianieidin

p-Amiao-Ht H^dime thy lönilin

Farbe

1	blau
2	rot
12	violett
13	rot
_t;. .;-...·	blau
2 ■ ..	violett
1	violett
2	gelb

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Beispiel 22

2 g eines schwach basischen Pelystyrolionenaustauscherharses mit freien Aminogruppen (Amberlit IR-45) wurde in einem Gemisch aus 50 ml Äthanol und 50 ml Wasser bei Zimmertemperatur suspendiert. Hierzu wurden 100 mg DibroK^hymolsulfonphthalein (Bromthyinolblau) zugegeben und das ent- . ,. stehende Gemisch 3 h am Rückfluss erhitzt. Der entstehende Harz-Indikatorkomplex wurde mit wasser und mit 0,2 η HCl und 0,2 nNaOH gewaschen und getrocknet. 200 ng dieses Produktes wurden mit 200 mg Cellulosepulver, 20 mg ΚΗρΐΟ^ ■ Puffer, 50 mg Urease und 4 ml einer 250igen Lösung' von Äthylcellulose in Aceton, die noch 0,1 $ PolyoxyäthylenlaurylätherSchaummittel (BRIJ) enthielt, gemischt. Streifen aus Polystyrol, Celluloseacetat und. Celluloid, die 5 mm breit, 60 mm lang und 0,2 mm dick waren, wurden mit dem oben genannten flüssigen Gemisch auf einer länge, von 5 rna behandelt und getrocknet. Der 5 mm χ 5mm grosse Testbereich dieser Streifen wurde dann 2-3 min in verschiedene flüssige 0,5 ml Serumproben, die verschiedene Mengen Harnstoff von 20 ing/i00ml bis 120 mg/100 ml enthielten, eingetaucht. Die Farbe des Indikators in den Teststreifen zeigte für verschiedene Mengen von Harnstoff reproduzierbare Unterschiede und kann so als quantitatives Mass für den Harnstoffgehalt in dem Serum verwendet werden.

Beispiel 23

Jl g der mit Diäthylaminoathyl modifizierten Form eines •Polysacchariddextrans, das in geeigneter Form mit Epichlorhydrin vernetzt ist,'wobei ein hydrophiles festes Gel entstanden ist, das durch einen hohen Grad an Ilikroporosität .gekennzeichnet ist, und reaktive Aminogruppen enthält, (DEAE-cjephadex) v/urde mit 0,08 g "liromthymoTblaiientspre-

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chend dem Verfahren des Beispiels 22 zur Reaktion gebracht, 200 mg des entstehenden Indikatorkomplexes wurden mit 250 mg Cellulosepulver, das 20 Gew.-^c/o adsorbierten Harnstoff, eritKielt, 20'mg KHpPO_A und "4"miTJelner 2^ige_n.

Jidsung" von ÄthyXcellulose" inilcetoh^ai'eO, 2^Ji~jeTnes

Polyoxyalkylen Derivats von Sorbitan-monolaurat (Tween 20) enthielt, gemischt. Polystyrolstreifen wurden mit dem genannten flüssigen Gemiscii behandelt und getrocknet. Sie wurden dann in eine 1 folge xiösung von Äthyleellulose in Aceton getaucht und getrocknet. Die entstehenden Teststreifen wurden dann 2 min in "verschiedene flüssige Serumproben, die verschiedene Mengen von Harnstoff von 20 mg/iOO

JbisT 120 mg/100 ml enthielten getaucht. Die Farbe des Indikators in den Teststreifen zeigte reproduzierbare Unterschiede für verschiedene Mengen an Harnstoff in den Testproben.

Die oben beschriebenen Teststreifen zum Nachweis, von Harnstoff können auch zum nachweis von Harnstoff im Blut verwendet werden. Der Teststreifen wird eine geeignete Zeitlang mit einer Blutprobe in Berührung gebracht und dann, wird das Blut von dem Teststreifen abgewischt, oder abgewaschen. Die entstehende Farbe in dem Reaktionsteil des Teststreifens wird dann mit einer Farbtafel, die die Be-Ziehung zwischen Farbe und Harnstoffgehalt angibt, verglichen, um den Harnstoffgehalt in der Blutprobe, zu bestimmen. Der wasserfeste Träger des Teststreifens wirkt als selektiv-durchlässige Membran und hindert die roten Blutkörperchen und störenden Proteine der Blutprobe daran, in das Testsystem einzudringen und die Farbbildung zu stören. "

-Patentansprüche-

BAD

Claims

Patentansprüche

( 1. ) Prüfmittel zum Nachweis einer Komponente in einem flüssigen System, dadurch gekennzeichnet, aass es '"_ _einen wasserfesten Träger, der als integralen Bestandteil ein 'Testsystem für diese Komponente enthält, besitzt,
2. Prüfiaittel nach Anspruch 1, dadurch g e k e η n<z e i c h.n e t, dass das Testsystem mindestens in einen Teil der Oberfläche dieses Trägers eingebaut ist.
3. Prüfmittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch g e kennzeichne t, dass der Träger ein organoplastisches Material ist* ■
4. Prüfmittel nach Anspruch· 1 bis 3» dadurch gekennzeichnet, dass das Trägermaterial transparent ist.
5. Prüfmittel nach Anspruch 1 bis 4, dadurch g e "-kennze i· c h η e t, dass das Trägermaterial Celluloseacetat, Polystyrol, Äthy!-Cellulose, Cellulosenitrat, Celluloid, Polyvinylchlorid und/oder Polyäthylen ist.
6. Prüfmittel nach Anspruch 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass das Testsystem ein unlösliches polymeres Biazoniumsalz von einem aromatischen PoIyamin, aas durch eine Ainidbinduni
harz gebunden ist, enthält.

g an ein Kationenaustauscher-
7. Prüfmittel nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, aass der aromatische Polyaminanteil des polymeren Biaäoniiunsalzes o-üianisidin ist. - _: '' ■*''·*- ^gJk

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8. Prüfmittel nach Anspruch 1 bis 7» dadurch gekennzeichnet, dass das Testsystem.. das Reaktionsprodukt aus einem unlöslichen polymeren Material und einer pH-empfindlichen Verbindung enthält. ■
9. -Prüfmittel nach Anspruch 1 bis 8, dadurch gekennz e i chne t, dass das Testsystem, das unlösliches Pteaktionsprodukt einer pH-empfindlichen Verbindung und eines polymeren Diazoniumsalzes eines aromatischen Polyamins, das durch eine Amidbindung an ein Kationenaustauscherharz gebunden ist, enthält. ·
10. Prüfmittel-nach Anspruch 1 bis 7, zum Wachweis und/oder zur Bestimmung eines Enzymes, dadurch ge k en η" ζ ei chn e t, dass das Testsystem ein Substrat mit dem das Enzym reagieren kann um eine Kopplungsverbindung in Freiheit zu setzen, und ein Chromogen enthält, das geeignet ist, bei Reaktion mit der freigesetzten Kopplungsverbindung eine Farbänderung hervorzurufen.
11. Prüfmittel nach Anspruch 1 bis 7, zum Nach-· weis und/oder zur Bestimmung von Harnstoff in einer Flüssigkeit, ge k e η η ζ e ich η et durch einen organoplastischen Träger, bei dem mindestens an einem Teil der Oberfläche ein Gemisch aus Urease und dem Ileaktionsprodukt aus einem pH-empfindlichen Material und einem Polymermaterial mit reaktionsfähigen Aminogruppen eingebaut ist.
12. Verfahren zur Herstellung eines -t'rüfmittels nach Anspruch 1 bis 11, dadurch gekennzeichnet, dass man das Teatsystera zumindest in einen

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teilweise gelösten Anteil des wasserfesten Trägermaterials einbaut und dieses wasserfeste Trägermaterial mit dem darin enthaltenen Testsystem wieder verfestigt.

13« Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass man einen festen Anteil des Trägermaterials mit einem Gemisch aus dem Testsystem und einem Lösungsmittel für dieses Trägermaterial zusammenbringt, wobei mindestens ein Teil der Oberfläche des festen Trägermaterials mindestens teilweise gelöst wird, damit das Testsystem eingemischt" weraen kann, bevor das Trägermaterial sich wieder verfestigt. ' · . ■ "

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