DE1936747B2

DE1936747B2 - 1,2-Diphenyl-4-n-butyl-4-hydroxymethyl-S.S-dioxopyrazolidin-halbsuccinat

Info

Publication number: DE1936747B2
Application number: DE1936747A
Authority: DE
Inventors: Antonio Dr. Barcelona Esteve (Spanien)
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1968-07-20
Filing date: 1969-07-18
Publication date: 1975-01-30
Also published as: DE1936747C3; CH507252A; SE382981B; BR6910822D0; FR2013384A1; DE1936747A1; ES356801A1; JPS4928191B1; BE732677A; GB1271584A

Description

Die Erfindung betrifft ferner ein pharmazeutische.« Präparat, das als einzigen Wirkstoff die vorstehend angegebene neue Verbindung mit üblichen pharmazeutisch verträglichen Verdünnungs- oder Trägermaterialien enthält.

Die neue Verbindung der vorstehend angegebenen Formel besitzt eine ausgezeichnete therapeutische Wirksamkeit, d. h., sie weist eine große therapeutische Aktivität auf bei gleichzeitig sehr geringer Toxizität. Sie eignet sich für die Behandlung von solchen Krankheiten, die von Entzündungssymplomen begleitet sind, insbesondere allen Arten von Rheumatismus.

Geeignete Präparate für die orak Verabreichung sind beispielsweise Kapseln, Dragees und Tabletten, die den Wirkstoff in einer Dosis von etwa 150 bis 300 mg enthalten.

Geeignete Präparate für die rektale Verabreichung sind beispielsweise Suppositorien, die den Wirkstoff in einer Dosis von 250 bis 500 mg enthalten.

Geeignete Präparate für die parenteral Verabreichung sind beispielsweise injizierbare Lösungen, die den Wirkstoff in einer Dosis von 250 bis 500 mg enthalten.

Die erfindungsgemäße Verbindung hat die Besonderheit, daß die freie Carbonsäuregruppe durch eine Base neutralisiert werden kann, so daß sie in der Lage ist, Lösungen zu bilden, deren pH-Wert in der Nähe des Neutralpunktes liegt.

Die Herstellung der erfindungsgemsißen Verbindung kann auf an sich bekannte Weise erfolgen, indem man beispielsweise das l,2-Diphenyl*3,5-dioxopyrazolidin mit Formaldehyd in der 4-Stellung monosubstituiert und das dabei erhaltene hydroxylierte Zwischenprodukt mit Bernsteinsäureanhydrid oder Bernsteinsäurechlorid in Gegenwart von Pyridin verestert. Die Zugabe des Bernsteinsäurechlorids oder -anhydrids kann unmittelbar zu der in Pyridin gelösten hydroxymethylierten Verbindung erfolgen, und zwar unter starkem Rühren und Kühlen in einem geeigneten Bad, das beispielsweise durch Eis/Kochsalz auf einer Temperatur von 0⁰C oder darunter gehalten wird. Die Zugabe erfolgt in einer inerten Atmosphäre oder gegebenenfalls in Gegenwart eines Stickstoffstromes. Nach der Zugabe des Bernsteinsäurechlorids oder -anhydrids unter den angegebenen Bedingungen läßt man die Reaktionsmischung 48 Stunden lang stehen. Anschließend wird in üblicher Weise filtriert, das dabei erhaltene Produkt wird umkristallisiert und getrocknet.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindung, die nachfolgend der Einfachheit halber mit »AE-17« bezeichnet wird, wird in dem folgenden Beispiel näher erläutert.

Beispiel

a) Herstellung von I,2-Diphcnyl-4-n-butyl-4-hydroxymethyl-3,5-dioxopyrazölidin

308 g (1 Mol) l^-DiphenyM-n-butyM-hydroxymethyl-3,5-dioxopyrazolidin wurden in einem Gemisch aus 900 ml absolutem Alkohol und 100 ml einer wäßrigen 40%igen Formaldehyd-Lösung 2 Stunden lang unter Rückfluß erhitzt. Man ließ abkühlen und über Nacht im Eisschrank stehen. Es wurden Kristalle 6S erhalten, die abfiltrieft, mit Alkohol gewaschen Und getrocknet wurden. Man erhielt so 305 g des gewünschten Produktes mit einem Schmelzpunkt von 146 bis 147° C. Dies entspricht einer Ausbeute Von 90%.

b) Herstellung des Halb-Succinates von

l^-Diphenyl^n-butyl^bydroxyrnethyl-

3,5-dioxopyrazolidin

In einen 2-1-Dreihalskolben, der mit einem mecha-Tischen Rührer und einem Einleitungsrchr, durch das Stickstoff eingeleitet wurde, ausgestattet war, ' wurden 338 g (1 Mol) des in Stufe a) hergestellten hydroxymethylierten Derivats von Phenylbutazon gegeben. Dieses wurde in einer Mischung aus 200 ml Pyridin und 600 ml Dimethylformamid gelöst. Nachdem die Lösung mit einem Eis/Kochsalz-Bad auf 0⁰C oder darunter abgekühlt worden war, wurden innerhaib eines Zeitraumes von 30 Minuten in kleinen Portionen unter Rühren 100 g (1 Mol) Bernsteinsäureanhydrid i_S zugegeben. Dieses war fein pulverisiert und vor der Zugabe mit einem Stickstoffstrom durchblasen wordea

Nachdem das gesamte Bernsteinsäureanhydrid zugegeben worden war, wurde noch 2 Stunden gerührt, bis sich das ganze Produkt aufgelöst hatte. Dann ließ man 48 Stunden lang bei Zimmertemperatur stehen. Anschließend wurde in Eiswasser gegossen, das mit Salzsäure (1:1) angesäuert worden war. Man ließ 24 Stunden lang stehen. Anschließend wurde filtriert und mehrere Male mit Wasser und anschließend einmal mit kaltem Alkohol gewaschen. Nach zweimaliger Umkristallisation aus Alkohol erhielt man 300 g des gewünschten weißen kristallinen Produktes mit einem Schmelzpunkt von 126 bis 127° C.

Pharmakologische F.igensc\aften der
erfindungsgemäßen Verbindung (AE-17)

Toxizität
a) Akute Toxizität bei Mäusen

Diese Toxizität wurde bei Mäusen nach ora'er Verabreichung bestimmt.

Resultat

Produkt	Dosis	Sterblichkeil	DL₅₀
	(mgkg)
AE-17	796	0/10	± 2489 mg/kg
	996	0/10
	1991	3/10
	2489	5/10
	2987	7/10
Phenyl	1000	5/10	± 1000 mg/kg
butazon

b) Akute Toxizität bei Ratten

Wegen der geringen Toxizität des Produktes AE-17 konnte ein DL₅₀-Wert an Ratten nicht bestimmt werden.

c) Halbchronische Toxizität

Diese Toxizität wurde an Gruppen von jeweils 10 Ratten bestimmt, denen jeweils verschiedene Dosen von AE-17 und Phenylbutazon verabreicht wurden. Eine Gruppe wurde nicht behandelt und diente als

Kpntrollgruppe. Die Dosis wurde täglich auf oralem Wege verabreicht. Jede Woche wurde eine Wägung durchgeführt, und für jede Gruppe wurde eine Mittelwertkurve aufgetragen.

Die Sterblichkeiten der mit AE-17 und mit Phenylbutazon behandelten Tiere ist nachfolgend zusammengestellt:

Resultat

Das Verhältnis zwischen den DL₅₀-WeUcP. beträgt 2489/1000 = 2,49. Dies bedeutet, daß die ToxizüHt der neuen Verbindung AE-17 2,49 mal geringer ist als diejenige von Phenylbutazon.

Produkt	Dosis (mgfkg)	Sterbli 3 Wochen	chkeit 6 Wochen
AE-17	498 249 99	2/10 0/10 0/10	4/10 1/10 0/10
Phenyl butazon	231 100	4/10 0/10	6/10 !'tO
Kontrolle	—	0/10	0/10

Aus diesen Versuchen zur Bestimmung der halbchronischen Toxizität kann entnommen werden, daß die durch AE-17 verursachte Sterblichkeit 2,49mal geringer ist als die durch Phenylbutazon verursachte Sterblichkeit.

d) Teratogonie

1. Trächtige Mäuse

Es wurden 20 Mäuse mit einem Gewicht von 20 bis 22 g ausgewählt. Sie wurden beobachtet, bis ihr Gewicht 24 bis 26 g (nach 1 bis 2 Wochen) betrug. Dann wurden sie gekreuzt, und es wurde mit der Verabreichung des Produktes begonnen. Die Verabreichung auf oralem Wege wurde bis zur Beendigung der Schwangerschaft mit einer Dosis von 99 mg/kg foriaesetzl

Maus
Maus
Maus
Maus
Maus
Maus
Maus
Maus
Maus
Maus

Nr. 1 =

Nr.
Nr.

Nr. 4 =

Nr. 5 =

Nr. 6 =

Nr. 7 =

Nr. 8 =

Nr. 9 =

Nr. 10 =

Resuhat

8 normale
11 normale

6 normale

7 normale
3 normale

11 normale
6 normale

8 normale
11 normale

6 normale

Mäuschen

Foeten

Mittelwert pro Wurf: 7,7
Mittelwert der Kontrollmäuse: 7,5.

Drei trächtige Weibchen wurden 2 bis 3 Tage vor der Beendigung der Schwangerschaft geopfert. Es wurden keine morphologischen Änderungen an den Foeten und keine Rückbildungen festgestellt (Mäuse Nr. 8. 9 und 10).

2. Trächtige Kaninehen

Vom Beginn der zweiten Woche der Schwangerschaft an wurden den trächtigen Kaninchen 99 mg/kg AE-17 auf oralem Wege verabreicht.

Resultat

Kaninchen Nr. 1 = 7 normal aktive Kaninchen Kaninchen Nr. 2 = 5 normal aktive Kaninchen Kaninchen Nr. 3 = 7 normale Foeten

Dieses zuletzt genannte Kaninchen wurde 2 Tage vor der Beendigung der Schwangerschaft geopfert.

Mittelwert: 6,3 Kaninchen pro Wurf,
Mittelwert der Kontrolltiere: 6 Kaninchen pro Wurf.

Zusammenfassung

Zwischen den Mäuschen und Kaninchen, die von mit dem Produkt behandelten Weibchen geworfen wurden, und den nicht behandelten Tieren (Kontrolle) konnte kein Unterschied in den morphologischen Eigenschaften und in der Zahl der geworfenen Tiere festgestellt werden.

Experimentelle Aktivität

I. Antiphlogistische Aktivität

Die antiphlogistische Aktivität des neuen Produktes AE-17 wurde durch Messung der Veränderung der Größe der Pfote einer Ratte bestimmt, die lokal mit verschiedenen Entzündungen hervorrufenden Präparaten behandelt worden war. Die Messung erfolgte mittels des Pletismograph von H i 11 e b r e c h t vor und nach der Verabreichung des untersuchten Produktes.

Material und Methoden

Es werden Albino-Ratten mit einem Gewicht zwischen 100 und 150 g verwendet. Auf einer der Hinterpfoten der Ratte wurde eine Entzündungsrcaktion experimentell hervorgerufen, und zwar durch eine subplantare Injektion von verschiedenen Entzündungen hervorrufenden Präparaten.

IO

In verschiedenen Versuchen, die an einer wechselnden Anzahl von Tieren vorgenommen wurden, wurden die einen mit AE-17 und die anderen mit Phenylbutazon behandelt, das als typisches Antiphlogisticum betrachtet und als Vergleichssubstanz verwendet wird. Die Versuche wurden gleichzeitig durchgeführt. Bei jedem dieser Versuche wurde eine Gruppe von Tieren als Kontrollgruppe nicht mit einem Antiphlogisticum behandelt.

Die Verhinderung der experimentellen Entzündung, die die antiphlogistische Aktivität des Präparates wiedergibt, drückt sich in Prozent des Wertes aus, der bei der Kontrollgruppc erhalten wird. Sowohl das AE-17 als auch das Phenylbutazon werden auf oralem Weg (Sonde) verabreicht.

a) Entzündungsbildendes Mittel

Es werden 0,1 ml 15%ige Eiweißlösung subplaniar verabreicht.

Die Medikamente AE-17 und Phenylbutazon (lci/.-teres dient als Vergleichssubstanz) werden jeweils den einzelnen Gruppen von Ratten auf oralem Wege (Sonde) 2 Stunden vor der subplantaren Injektion der entzündungsbildenden Lösung von Eiweiß verabreicht. Die Messung der Größen der Pfoten der Ratten wird 30, 90 und 150 Minuten nach der entzündungsbildenden Injektion durchgeführt.

Es werden folgende Dosen an Phenylbutazon und AE-17 angewandt: Die Dosen betragen bei Phenylbutazon 46 bzw. 92 und bei AE-17 66 bzw. 132 mg kg (orale Verabreichung).

Zeit

30 Minuten

60 Minuten

150 Minuten

66 mg/kg

18% (2)
26% (2)
32% (2)

Resultat

AE-17

mg/kg

42% (2) 51% (2) 55% (2)

Dosen

Phenylbutazon
46 mg/kg 92 mg-kg

21% (2) 23% (2) 26% (2)

41% (2)
48% (2)
51% (2)

Die in Klammern angegebenen Ziffern bezeichnen die Anzahl von Versuchen, die mit jedem Produkt und jeder Dosis durchgeführt wurden.

b) Enizündungsbildendes Mittel
0,05 ml einer 10%igen Suspension von Kaolin

Die Medikamente werden 1 Stunde vor der Hervorrufur.g der experimentellen Entzündung verabreichtDie Messung der Größe der Pfoten bei dieser Art des entzündungsbildenden Mittels wird 5, 24 und 48 Stunden nach der subplantaren Injektion durchgeführt.

Zeit

5 Stunden
24 Stunder
48 Siunden

Resultat

55% (2)
53% (2)
42% (2)

Phenylbutazon
46 ma'kg

57% (2)
55% (2)
42% (2)

Die in Klammern genannten Zahlen bezeichnen Hie Anzahl der durchgeführten Experimente.

c) Entzündungsbildendes Mittel

0,1 ml einer l%igen Lösung Carraghenin

Die Medikamente.werden I Stunde vor der entzündungsbildenden Injektion verabreicht. Die Messungen werden 3,5 und 24 Stunden nach der entzündungsbildenden Injektion durchgeführt.

Resultat

Zeit

3 Stunden

5 Stunden

24 Stunden

AE-17

66 mg/l:g

93% (2) 73% (2) 92% (2)

Produkt

Aspirin

AE-17

Phenylbutazon.

Resultat
Dosis

90 mg

109 mg

77 mg

Antipyretische Wirkungen

100
85
71

Dosen

mg/kg

80% (2)
73% (2)
85% (2)

Phenylbutazon

46 mg/kg

98% (2) 86% (2) 92% (2)

23 mg/kg

7f% (2)
64% (2)
87% (2)

II. Antipyretische Aktivität

Diese Aktivität wurde an männlichen Ratten mit einem Gewicht von 100 bis 250 g durchgeführt. Den Tieren wird in einer Dosis von I ml/100 g eine fiebertreibende Lösung (entwässerte Bierhefe, 15%; Gummiarabikum 2%; Natriumchlorid 0,9%) injiziert. Nach 15 Stunden wird die Temperatur rektal gemessen, und zwar in Abständen von 1 Stunde. Nach 3 Stunden wird den Tieren das Medikament auf oralem Wege (Sonde) verabreicht. Nach der Verabreichung des Medikaments wird die Temperatur wiederum nach I, 2 und 3 Stunden gemessen. Als Vergleichssubstanz wird Aspirin (Dosis 500Mikromol) verwendet. Die Dosen von AE-17 und Phenylbutazon, die verwendet werden, um das Experiment zum Guten zu führen, sind die Hälfte der Dosis der Vcrgleichssubstanz, d. h. 250 Mikromol.

Der Effekt tritt unmittelbar nach der Injektion ein. Das Medikament wird 2 Stunden vorher auf oralem Weg verabreicht. Der normale Zeitraum zur Feststellung der Gegenwart oder Abwesenheit der Extension beträgt 10 Minuten. Die Extension, die durch die Kontrollgruppe erlitten wird, wird als Bezugsgröße mit 100% festgesetzt.

Ergebnisse

Die Ergebnisse sind in Form der Zahl der Tiere gegeben, bei denen der Effekt der Extension durch die Wirkung des untersuchten Medikaments verhindert wird. Die Ergebnisse sind als Prozentsatz der Inhibierung ausgedrückt.

Produkt	Dosis	Zahl der positiven	Inhibierung	Positive *Tien/iO*
	(mg/kg)	Tiere	(V.)
AE-17	199	14/40	35	3,5/10
	299	16/40	40	4/10
	399	28/40	70	7/10
35 Phenyl	100	14/40	35	3,5/10
but	231	20/40	50	5/10
azon	400	28/40	70	7/10

IH. Schmerzlindernde Wirkung

Diese Wirkung wurde ebenfalls mit Phenylbutazon als Vergleichssubstanz durchgeführt, wobei die durch Eckhardt und Coil modifizierte Methode von Van der W e η d e angewandt wurde.

Diese Methode besteht darin, daß ein schmerzhaftes Syndrom erzeugt wird mit intermittierenden Kontorsionen des Tierkörpers auf den Boden des Käfigs und einer Extension der Hinterpfoten durch intraperitoneale Injektion von verdünnter HGl.

Die Convulsjönen'werden durclü die verabreichten Medikamente verhindert.

Extensionsmittel: HCI m 10%iger wäßriger Lösung in einer Dosis von 0,25 ml pro Maus von 20 g, intraperitoneaf verabreicht.

Zur Bestimmung der DE₅₀ wird die Methode von Reed—Muench angewandt.

Ergebnis

AE-17: DE₅₀ = 299 mg (bei der Maus, oral)
Phenylbutazon: DE₅₀ — 231 mg (bei der Maus,
oral).

Der therapeutische analgetische Index bei Mäusen beträgt für das AE-17 2,489/299 = 8,3, während der analgetische therapeutische Index bei den gleichen Tieren für das Phenylbutazon 1,000/231 = 4Ji ist

Zusammenfassend kann man den verschiedenen

pharmakologischen Vergleichsversuchen entnehmen, daß AE-17 eine dem Phenylbutazon überlegene Vefbindung mit antirheumatischen, antipyretischen, analgetischen sowie antiphlogistischen Wirkung ist

409585/402

Claims

Patentansprüche;

1. l^-Diphenyl-^n-butyl-^hydruxymethyW.S-dioxopyrazoIidin-halbsuccinat, gekennzeichnet

durch die Forme!

/
V-N-C CH₁ — CH, — CH₂ — CH₃

N-C^X CH,-0-CO-(CH₇),-COOH

2. Pharmazeutisches Präparat, dadurch gekennzeichnet, daß es als einzigen Wirkstoff die Verbindung nach Anspruch 1 mit üblichen pharmazeutisch verträglichen Verdünnungs- oder Trägermaterialien enthält.

Die Erfindung betrifft die neue Verbindung 1.2-Diphcnyl-4-n-butyl-4-hydroxymethyl--(.5-dioxopyrazolidinhalbsuccinat der folgenden Forme!

< >— N — C CH, — CH, — CH, — CH₃

C
N-C CH, — O—CO-(CH,)₂ —COOH

I /