DE186833T1 - Zytotoxisches protein, verfahren zum isolieren desselben, monoklonaler antikoerper ct-1 und denselben erzeugendes hybridoma. - Google Patents

Zytotoxisches protein, verfahren zum isolieren desselben, monoklonaler antikoerper ct-1 und denselben erzeugendes hybridoma.

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DE186833T1 DE198585115918T DE85115918T DE186833T1 DE 186833 T1 DE186833 T1 DE 186833T1 DE 198585115918 T DE198585115918 T DE 198585115918T DE 85115918 T DE85115918 T DE 85115918T DE 186833 T1 DE186833 T1 DE 186833T1
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  1. 0186839
    002/MW
    EP 2717
    115 918.6-2103
    Yeda Research and Development Co.Ltd.
    ιυ Patentansprüche
    1. Verfahren zum Reinigen eines Cytotoxins, wobei das Verfahren die folgenden Schritte enthält:
    a. Zur-Verfügung-stellen einer Präparation, die 15
    Cytotoxin enthält;
    b. Absorbieren des Cytotoxins der genannten Präparation an Glaskörper mit kontrollierten Poren;
    c. Desorbieren des Cytotoxins in einem Stadium
    angereicherter Reinheit von den genannten Glas-20
    körpern mit kontrollierten Poren; und
    d. Kontaktieren des desorbierten Cytotoxins mit einem Immunosorbens, wobei das genannte Immunosorbens einen monoklonalen Antikörper
    gegen das Cytotoxin enthält. 25
    2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei das Cytotoxin
    in dem Schritt c. mittels eines Desorptionspuffers, der 0,5 M Tetramethylammoniumchlorid enthält, desorbiert wird.
    3. Verfahren nach Anspruch 1, wobei das Cytotoxin aus dem Immunosorbens unter mild dissoziierenden Bedingungen eluiert wird.
    4. Verfahren nach Anspruch 3, wobei das Cytotoxin
    aus dem Immunosorbens mittels etwa O,2 M NH OH eluiert wird.
    -2-
    5. Verfahren nach Anspruch 1, wobei der monoklonale Antikörper CT-1 ist.
    6. Verfahren nach Anspruch 1, wobei das Cytotoxin ein menschliches Cytotoxin ist.
    7. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Präparation des Schritts a. aus imunisierten peripheralen, mononuklearen Blutzellen hergestellt ist.
    8. Verfahren nach Anspruch 7, wobei die Zellen nach der Inkubation mit Phytohämagglutinin stimuliert werden.
    9. Verfahren nach Anspruch 7, wobei die Zellen nach Inkubation mit einer Konzentration von Concanavalin-A, die nicht selbst eine signifikante Sekretion des Cytotoxins induziert^durch Con-
    canavalin-A stimuliert werden. 20
    10. Verfahren nach Anspruch 7, wobei die Zellen mit dem Sendaivirus stimuliert werden.
    11. Ein Festphasenimmunoassay, durch den multiple Hybridoma-Kulturen auf die Produktion von Antikörpern, die an Cytotoxine binden, gescreened werden, wobei der Immunoassay enthält:
    a. Umschichtai van proteinbindenden Trägermitteln mit gereinigten Affinitätsantikörpern gegen
    ow Mauseimmunoglobine;
    b. Inkubieren des zu testenden Hybridomawachstumsmediums mit den umschichteten Trägermitteln, gefolgt durch Waschen;
    c. Inkubieren von Proben des Cytotoxins mit den ^° Trägermitteln, gefolgt durch Waschen;
    d. Dissoziieren der Cytotoxine, die an die Trägermittel gebunden haben und Mengenbestimmung in einem Bioassay.
    12. Immunoassay nach Anspruch 11,in dem der genannte Bioassay das Zur-Verfügung-stellen von Zellen enthält, die gegen die cytotoxische Wirkung eines Cytotoxins mittels eines metabolischen Blockers sensitiviert wurden, sowie das Zugeben des Cytotoxins und Messen des Ausmaßes des Zelltodes.
    Immunoassay nach Anspruch 12, wobei der metabolische Blocker Cycloheximid ist.
    14. Immunoassay nach Anspruch 12, wobei der metabolische Blocker Actinomycin D ist.
    15. Immunoassay nach Anspruch 13, wobei der metabolische Blocker Mitomycin C ist.
    16. Verfahren zum Herstellen monoklonaler Antikörper gegen ein Cytotoxin, das die folgenden Schritte enthält:
    a. Immunisieren von Mäusen mit reinen oder unreinen Präparationen eines derartigen Proteins ;
    b. Feststellen von Hybridomas, die derartige Antikörper herstellen mittels eines Immunoassays nach Anspruch 11,
    c. Kultivieren derartiger Hybridomas und d. Erhalten der gewünschten Antikörper.
    1'?. Verfahren nach Anspruch 16, wobei der genannte Bioassay das Zur-Verfügung-stellen von Zellen enthält, die gegen die cytotoxische Wirkung eines Cytotoxins mittels eines metabolischen Blockers
    sensitiviert wurden, das Aussetzen der Zellen gegen das Cytotoxin und Messen des Ausmaßes des Zelltods.
    18. Verfahren nach Anspruch 17, wobei die Zellen, die in dem Bioassay verwendet werden, Cyloheximid-sensitivierte SV8O Zellen sind.
    19. Monoklonaler Antikörper, der für Cytotoxin spezifisch ist.
    20. Monoklonaler Antikörper CT-1, der insbesondere menschliches Cytotoxin erkennt und bindet, wobei das genannte Cytotoxin durch peripherale, mononukleare Blutzellen hergestellt wird.
    21. Verfahren zum Isolieren eines Cytotoxins, das enthält:
    a. Entwickeln von monoklonalen Antikörpern
    gegen das genannte Cytotoxin, folgend auf die
    Immunisierung mit unreinen Präparationen dieser Cytotoxine;
    b. Herstellen eines Immunoadsorbens aus diesen Antikörpern und Verwendung derselben für die Reinigung des Cytotoxins aus rohen Prä
    parationen von Cytotoxinen.
    22. Pharmazeutische Zusammensetzung für die selektive Behandlung von virusinfizierten und Tumor-Ziel-Zellen im Menschen, die eine therapeutisch wirksame Menge von mindestens einem Cytotoxin, oder das Salz des Cytotoxins in im wesentlichen homogener Form, oder in Kombination mit Interferon und/oder einem metabolischen Blocker in einer Menge, die ausreicht, um die genannten Zellen gegen das Cytotoxin zu sensitivieren, jedoch
    nicht normale Zellen zu sensitivieren, enthält.
    23. Zusammensetzung nach Anspruch 22, wobei der Blokker Cycloheximid ist.
    24. Zusammensetzung nach Anspruch 22, wobei der Blokker Mitomycin C ist.
    25. Zusammensetzung nach Anspruch 22, wobei der Blocker Actinomycin D ist.
    26. Eine Hybridoma-Zellinie, die einen monoklonalen Antikörper gegen ein Cytotoxin exprimiert.
    27. Hybridoma-Zellinie nach Anspruch 26, die die Identifizierungscharakteristika der Zellinie CT, CNCM 1-472 hat.
    28. Monoklonaler Antikörper, der für ein Cytotoxin
    spezifisch ist und durch das Verfahren nach An- <
    spruch 16 erhalten wurde. ,
    29. Monoklonaler Antikörper, der für ein Cytotoxin spezifisch ist und nach dem Verfahren gemäß Anspruch 17 erhalten worden ist.
    30. Verfahren zum Reinigen eines Cytotoxins, das enthält das Kontaktieren einer Präparation, die ein Cytotoxin enthält mit einem Immunosorbens, wobei das genannte Immunosorbens einen monoklonalen Antikörper gegen das Cytotoxin enthält.
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