DE1767343C3 - Verfahren zur Gewinnung von Anti biotika vom Tetracyclin Typ - Google Patents

Description

Ketonextrakt von der wäßrigen Phase abdekantiert und zurückbehalten. Zu dem den Komplex aus Tetracyclin und quaternärem Ammoniumsalz ent-

25 haltenden Ketonextrakt wird Wasser vom pH 1.2

zugesetzt, um den Komplex zu zersetzen und das Tetracyclin zu lösen. Durch Abtrennen der wäßrigen Phase und Neutralisation auf 3,6 pH-Wert wird eine

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung unreine Tetracyclin-Ausfällung erhalten, auf welche von durch Fermentation gebildeten Antibiotika vom 3° das erfindungsgemäße Reinigungsverfahren angewen-Tetracyclin-Typ aus einem Calzium-, Magnesium- det werden kann.

und/oder Eisen(IH)-ionen enthaltenden Gemisch, wo- Die Temperatur, welche bei dem erfindungsgemäßen

bei eine Lösung des unreinen Antibiotikagemisches mit Verfahren angewendet wird, ist nicht kritisch, solange einem pH-Wert von etwa 0,5 bis 2,5 mit einem Na- sie unter etwa 90 C, der Temperatur, bei welcher trium-. Kalium- oder Ammoniumsalz von Ortho- 35 Tetracyclin-Antibiotika abgebaut werden, liegt. Jedoch phosphorsäure. Melaphosphorsäure, Pyrophosphor- wird das Verfahren vorzugsweise unter etwa 10 C säure oder Polyphosphorsäure in einer Menge von durchgeführt, weil dann nur ein geringer Abbau mindestens 2 Millimol Phosphatsalz pro 1 Million erfolgt.

Einheiten Tetracyclin-Antibiotika-Aktivitätzusammen- Beispiel 1

gebracht und das Tetracyclin-Antibiotikum bei einem 4°

pH-Wert von 2,5 bis 7 ausgefällt wird, das dadurch 250 g eines rohen, Tetracyclin-Grundstoffs mit einer

gekennzeichnet ist, daß man das unreine Antibiotika- antibiotischen Aktivität von 100 Million^-. Einheiten, gemisch in einem Gemisch aus etwa 0,2 bis 3,0 Volum- der durch Ansäuern und Filtrieren einer Fermentationsteilen Methanol und 1 Volumteil Wasser löst. brühe und Wiederausfällen des Tetracycline durch Das erfindungsgemäße Verfahren ermöglicht eine 45 Einstellen des pH-Wertes des Filtrats auf etwa 4,5 wirksamere und billigere Gewinnung und Reinigung erhalten worden ist, werden mit 700 ml Methanol von und macht weniger Verfahrensschritte erforderlich, 8 bis 10° C gemischt, und 50 ml 45";„iger Schwefelsäure als es bisher möglich war. werden zugesetzt, um einen pH-Wert von 1,0 bis 1,1 Mit dem Ausdruck Tetracyclin-Antibiotikum sollen zu erzielen; dabei löst sich das Tetracyclin. Der Lösung durch Fermentation gebildete Tetracycline, wie Tetra- 50 werden 10 g Aktivkohle und 10 g Diatomeenerde als cyclin, Oxytctracyclin, Chlortetracyclin, 7-Chlor-6-de- Filtrierhilfe zugesetzt. Das Gemisch wird 1 Stunde bei methyltetracyelin, 7-Brom-6-demethy!tetracycIin, 8 bis 10⁰C gerührt und filtriert. Der Filterkuchen Bromtetracyclin und 6-Demelhyltetracyclin bezeichnet wird mit 70 ml Methanol gewaschen, und das mit dem werden. Waschwasser vereinigte Filtrat wird bei 8 bis 10" C Unreine Gemische aus Tetracyclin-Antibiotika und 55 abgestellt. Eine Lösung aus 110 g (0,3 Mol) Natrium-Metallkalionen treten als Endprodukte oder Zwischen- tripolyphosphat und 15 g (0,25 Mol) Harnstoff in produkte in mehreren der bekannten Gewinnungs- 1100 ml Wasser wird zubereitet und zur Verbesserung verfahren auf. Diese Gemische sind eine Quelle für der Lösung gerührt. Die Lösung wird durch einen ein rohes Antibiotikum, und auf sie kann das er- Glaswollestöpsel filtriert und der Stöpsel mit einer findungsgcmäßc Verfahren angewendet werden. Zum 60 minimalen Menge an Wasser gewaschen. Die klare Beispiel wird gemäß USA.-Patentschrift 3 013 074 Lösung wird bei 10 bis 15°C in einem Kristallisationseine Tetracyclin enthaltende Fermentationsbrühe auf tank gehalten. Die gefilterte und angesäuerte Tetraeinen pH-Wert von etwa 8 eingestellt und filtriert. Die cyclinlösung wird der Phosphatlösung langsam zuge-Teststoffe werden abfiltriert und wieder in Wasser setzt, wobei die Temperatur des Kristallisationstanks suspendiert. Nach Einstellen des pH-Wertes auf etwa P-, bei 15 bis 1O⁰C gehalten wird. Das Tetracyclin 1,2 und Behandeln mit Aktivkohle wird die Auf- kristallisiert augenblicklich. Nachdem die Zugabe abschlämmung filtriert und das Antibiotikum gelöst geschlossen ist, wird die Flüssigkeit unter schwachem erhalten. Die Lösung wird auf einen pH-Wert von Rühren granuliert, wobei die Temperatur während

etwa 1 Stunde auf 15 bis 20^cC angehoben wird. Die _R · - , ,

Kristalle werden abfiltriert und mit 400 bis 500 ml ^P

Wasser gewaschen und im Vakuum bei 50 bis 60 C Werden in dem Verfahren von Beispiel 2 statt der

getrocknet. Die Ausbeute beträgt 93 Millionen Ein- HOg Natriumtripolyphosphat nur 75 g (0,2 Mol)

heiten oder93°/„. 5 verwendet, dann wird eine Ausbeute von über 90ⁿ/₀

Ähnliche Ergebnisse werden erhalten, wenn kein Tetracyclin erhalten. Harnstoff bei dem Verfahren verwendet wird und

auch dann, wenn Natriumtripolyphosphat durch Beispiel 4

eines eier folgenden Phosphate in einer Konzentration Wenn in dem Verfahren von Beispiel 2 die 770 ml

von 0,3 Mol ersetzt wird: io wäßrige Methanollösung zu einer filtrierten Lösung

.. _t. uu. von HOg Natriumtripolyphosphat und 15 g Harnstoff

Mononatnumphosphat, · ,,„ , ,,, ι j ι ι \r e u

j ■ , ■ u u _t ^ln 640 ml Wasser gegeben werden und das Verfahren

_KI , · Li' w'ie beschrieben fortgesetzt wird, dann wird reines

Natriumpyrophosphat, -,. ,· - ^c- , . , _r.._n.

Dikaliumphosphat, Tetracyclin in ausgezeichneter Ausbeute ausgefallt.

Kaliumpyrophosphat, '⁵ Beispiels

r^. . Ii 250 ε eines rohen, unreinen Tetracyclin-Grundstoffs Dinatnumphosphat _mit ^_{n antibiotischen Akt}ivität von 100 Millionen Natrium:i etaphosphat, Einheiten, der durch Ansäuern und Filtrieren einer Monokahurnphosphat, _{2o Ferrne}ntationsbrühe und Ausfällen des Tetracyclin . rikaiiumpnospnat _{durch Einste]Ien des pH}-Wertes des Filtrats auf etwa Monoammon.umphosphat, _{4 5 h} , _den £ _{rfen mit lQQQ m}, _Mcthan0, Ammon.ummetaphosphat. ^ _{g bis 1{rc vermischt> und 50 m}, ₄₅._/oige Schwefel-Ähnliche Ergebnisse werden auch erhalten, wenn säure werden zugesetzt, um einen pH-Wert von 1,0 0.2 Mol eines der obengenannten Phosphatsalze ver- 25 bis 1,1 zu erhal'en; hierbei löst sich das Tetracyclin, wendet werden, und ebenso, wenn 0,4 Mol eines Zu der Lösung werden 10 g Aktivkohle und 10 g Diadieser Phosphatsalze eingesetzt werden. tomeenerde als Filterhilfe gegeben. Der Filterkuchen _R . . wird mit 440 ml Methanol gewaschen, und das mit ^e ' ^s P ' dem Waschwasser vereinigte Filtrat wird bei 8 bis Ein roher Tetracyclinerundstoff mit einer Aktivität 30 10°C abgestellt. Eine Lösung aus 75 g (0,2 Mol) von 100 Millionen Einheiten wird in 700 ml Methanol Natriumtripolyphosphat und 15 g (0,25 Mol) Harngelöst und mit 45°/₀iger Schwefelsäure auf pH 1,0 bis stoff in 480 ml Wasser wird zubereitet und zur ιοί,2 eingestellt. Der Lösung werden 10 g Aktivkohle sungsverbesserung gerührt. Die Lösung wird durch und 5 g Diatomeenerde als Filtrierhilfe zugesetzt. Die einen Glaswollestöpsel filtriert und der Stöpsel mit Aufschlämmung wird 1 Stunde bei 8 bis 10¹C gerührt 35 einer minimalen Wassermenge gewaschen. Die klare und filtriert. Der Filterkuchen wird mit 70 ml Metha- Lösung wird bei 10 bis 15 "C in einem Kristallisationsnol gewaschen. Die wäßrige Methanollösung wird tank gehalten. Die filtrierte und angesäuerte Tetraschnell zu einer filtrierten Lösung von 110 g Natrium- cycünlösung wird langsam der Phosphatlösung zutripolyphosphat und 15 g Harnstoff in 1100 ml Wasser gesetzt, wobei die Temperatur des Krislallisationsgegeben. Die entstandene klare Lösung wird onne 40 tanks bei 10 bis 15"C gehalten wird. Das Tetracyclin Impfen bei 18 bis 20^JC langsam gerührt, bis Aus- kristallisiert augenblicklich. Nach beendeter Zugabe fällung eintritt. Nach 2,5 Stunden wird die Auf- wird das Gemisch granuliert, wobei unter schwachem schlämmung filtriert und der Filterkuchen mit 300 bis Rühren die Temperatur während 1 Stunde auf 15 bis 400 ml Wasser gewaschen. Nach Trocknen im Vakuum 20¹C angehoben wird. Die Kristalle werden filtriert wiegt das Produkt 84,5 g. Die Asche beträgt 0,01 Ge- 45 und mit 400 bis 500 ml Wasser gewaschen und im wichtsprozent. Die Lösung in angesäuertem Methanol Vakuum bei 50 bis 60 C getrocknet. Es wird kristalzeigt eine ganz leichte Schleierbildung. Der Wasser- lines Tetracyclin in reiner Form 'erhalten, gehalt nach Fischer ist 0,7^u/₀, die Ausbeute an . . Tetracyclin 90,5 Millionen Einheiten oder 90,5°/₀. Beispiel ö Die Mutterlauge enthält 5,9 Millionen Einheiten 50 Wenn in dem Verfahren von Beispiel 2 die 770 ml (5,9 °/₀), woraus sich eine Bilanz von 96,4°/₀ ergibt. wäßrige Methanollösung zu einer filtrierten Lösung Ähnliche Ergebnisse werden erhalten, wenn statt des von 10 g Natriumtripolyphosphat und 15 g Harnrohen Tetracyclins rohes Oxytetracyclin, Chlortetra-. stoff in 3850 ml Wasser gegeben werden und das cyclin, 7-ChIor-6-demethyltetracyclin, 7-Brom-6-de- Verfahren wie beschrieben fortgesetzt wird, dann methyltetracyclin, Bromtetracyclin oder 6-Demethyl- 55 wird reines Tetracyclin in ausgezeichneter Ausbeute tetracyclin verwendet wird. erhalten.

Claims (1)

1. etwa 4.5 eingestellt, und das die verunreinigenden Metallkationen enthaltend, rohe Antibiotikum wird

   Patentanspruch: ausgefällt. Ein anderes, in der USA.-Patentschrift

   2 871 264 beschriebenes Verfahren besteht dann, daß

   Verfahren zur Gewinnung von durch Fermenta- S man ein quaternäres Ammoniumsalz zu dem in Lötion gebildeten Antibiotika vom Tetracyclin-Typ sung befindlichen Antibiotikum zusetzt und dann aus "einem Calzium-, Magnesium- und/oder den pH-Wert auf etwa 8,5 einstellt und filtriert. Der Eisen(IIl)-ionen enthaltenden Gemisch, wobeileine Filterkuchen, der einen Komplex aus Antibiotikum Lösung des unreinen Antibiotikagemisches mit und quaternärem Ammoniumsalz enthält, wird^ mit einem pH-Wert von etwa 0,5 bis 2,5 mit einem io Wasser aufgeschlämmt und angesäuert, um den Korn-Natrium-, Kalium- oder ^imoniumsaiz von plex zu zersetzen und das Antibiotikum zu lösen. Die Orthophosphorsäure, Metaphosphorsäure. Pyro- wäßrige Lösung wird dann auf pH-Wert 3,8 cingephosphorsäure oder Polyphosphorsäure in einer stellt und das Antibiotikum ausgefällt. Bei einer Menge von mindestens 2 Millimol Phosphatsalz anderen Methode gemäß USA.-Patentschrift 2 875 247 pro 1 Million Einheiten Tetracyclin-Antibiolika- 15 wird ein qu crnäres Ammoniumsalz einer Tcira-Aktivität zusammengebracht und das Tetracyclin- eyclin-Fermeii.ationsmaische zugesetzt. 7.x·. dem entAntibiotikum bei einem pH-Wert von 2,5 bis 7 aus- standcnen Komplex wird ein Methyialkylketon gegefällt wird, dadurch gekennzeichnet, geben und der pH-Wert auf 9,5 eingestellt. Ein Filtrierdaß man das unreine Antibiotikagemisch in einem hilfsmittel wird zugesetzt und der Lösungsmittelextrakt Gemisch aus etwa 0,2 bis 3,0 Volumteilen Methanol ao durch Filtrieren abgetrennt. Zu dem Meihylalkyiketon- und 1 Volumteil Wasser löst. Extrakt wird Wasser vom pH 9,5 gegeben und der