DE1643504B2 - Dekapeptid l-pyroglutamyl-lglutaminyl-l-aspartyl-l-tyrosyl-l-threonylglycyl-l-tryptophanyl-l-methionyl-laspartyl-l-phenylalanylamid, und seine salze sowie verfahren zu deren herstellung - Google Patents

Description

NH₂ OH OAc

I Il

2. H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr-Gly-Try-Met-Asp-PheNHa

NH₂ OSO₃H OAc

I Il

3. H-Pyr-Glu-Asp-Tyr Thr-Gly-Try-Met-Asp-PheNH₂

NH₂ OSO₃H OH

j 1 I

4. H-Pyr-Glu-Asp-Tyr Thr-Gh Tn Met Asp-Phe NH,

5. Verfahren zur Herstellung des neuen Dekapeptids L- Pyroglutamyl-L-glutaminyl-L-aspartyl - L - tyrosyl - L - threonyl -glycy 1 - L - tryptophanyl-L - methionyl - L - aspartyl - L - phenylalanyiamid, wobei die Phenolgruppe des Tyrosylrestes frei oder durch einen Schwefelsäurerest blockiert und die Alkoholgruppe des Threonylrestes frei oder durch einen aliphatischen Acylrest blockiert ist, mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und dessen pharmazeutisch verwendbare Salze, dadurch gekennzeichnet, daß das Polypeptid der obigen Formel gemäß an sich in der Polypeptidchemie bekannten Verfahren hergestellt wird.

Die Erfindung bezieht sich auf ein neues, therapeutisch verwendbares Dekapeptid 1. - Pyroglutamyl-L - glutaminyl - l - aspartyl - l - tyrosyl -1. - threonyl - glycyl -L- tryptophanyl - L - methionyl -1. - aspartyl -1. - phenylalanyiamid, worin die Phenolgruppe des Tyrosylrestes frei oder durch einen Schwefelsäurerest blockiert ist und die Alkoholgruppe des TLreonylrestes frei oder durch einen aliphatischen Acylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen blockiert ist, und seine pharmazeutisch verwendbaren Salze.

Das erfindungsgemäß erhältliche Dekapeptid und seine Derivate zeigen eine hohe mehrfache biologische Aktivität und können bei der Therapie verschiedener Affektionen sowohl bei Menschen als auch bei Tieren angewendet werden.

Es gibt zahlreiche Möglichkeiten der Synthese des erfindungsgemäßen Dekapeptids, die im wesentlichen darin bestehen, daß man nach bekannten Verfahren der Polypeptidchemie die geschützten Aminosäuren oder Polypeptide in geeigneter Reihenfolge kondensiert, wobei diese Kondensation so durchgeführt wird, daß das erhaltene Dekapeptid die gewünschte Folge von zehn Aminosäuren aufweist.

Die Amino- und Carboxylgruppen der stufenweise kondensierten Aminosäuren und Polypeptide, die an der Bildung der PeptidkeUe nicht teilnehmen sollen, werden durch eine Schutzgruppe blockiert, welche auf an sich bekannte Art durch Acidohse oder Hydrolyse wieder entfernt werden Lann.

Zum Schutz der Aminogruppe können die folgenden Schutzgruppen verwendet werden: Tosyl. Carbo

benzoxy. Carbo-t.butoxy, Trityl, Formyl. Trifluoracetyl und andere gewöhnlich in der Polypeptidchemie angewendete Gruppen.

Zum Schutz der Carboxylgruppe können beispielsweise die folgenden Schutzgruppen angewendet

werden: Methyl, Äthyl, t.-Butyl, Benzyl, p-Nitrophenyl und andere auf diesem Gebiet gewöhnlich angewendete Gruppen.

Die Kondensation zwischen der Aminogruppe eines Moleküls und der Carboxylgruppe eines anderen Moleküls zur Bildung der Peptidkette kann gemäß in der Peptidchemie bekannten Verfahren durchgeführt werden, beispielsweise durch ein geeignetes aktiviertes Acylderivat, wie ein gemischtes Anhydrid, ein Azid, einen p-Nitrophenylester und 2,4,5-Trichlor phenylester, oder durch direkte Kondensation zwi schen der freien Aminogruppe und der freien Carboxylgruppe in Anwesenheit eines geeigneten Kondensationsmittels, wie eines Carbodiimide z. B. Dizyklohexylcarbodiimid oder l-Zyklohexyl-3-morpholinyl- carbodiimid sowie andere in der Literatur bekannte. Die Kondensation kann in einem geeigne ;n Lösungsmittel durchgeführt werden, z. B. N.N-Dialkylformamide, n.edrige aliphatische Nitrile und Pyridine, beispielsweise Dimethylformamid, Acetonitril und Pyridin; die Reaktion beginnt bei -20⁰C bis Raumtemperatur und kann bei Raumtemperatur bis 35 C während eines Zeitraumes von 12 bis 120 Stunden vollendet werden. Typische Salze des erfindungsgemäß erhältlichen Dekapeptids sind das Natriumsalz, Kaliumsalz, Magnesiumsalz, Kalziumsalz, Glukonat, Tartrat, Malat, Äthylendiaminsalz und andere pharmazeutisch verwendbare Salze. Wie oben erwähnt, gibt es viele mögliche Synthesen für das erfindungsgemäß erhältliche Dekapeptid.

Zur näheren Erläuterung der Erfindung werden im nachstehenden einige Beispiele zu dessen Herstellung angegeben.

Das Tetrapeptid L - Pyroglutamyl - L - glutaminyl-

L-asfartyl-L-tyrosin-azid (I) wird mit dem Hexapeptid L- Threonyl - glycyl - L - tryptophanyl - l - methionyl-L-aspartyl-L-phenylalanyiamid (II), dessen Hydroxylgruppe des Threonylrestes durch einen Acylrest

blockiert ist, in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Dimethylformamid, kondensiert, wobei das Dekapeptid L - Pyroglutamyl - L - glutaminyl -L- aspartyl-L - tyrosyl - L - threonyl - glycyl - L - tryptophanyl· L - methionyl - l - aspartyl - L - phenylalanylamid (III) erhalten wird, dessen Hydroxygruppe des Threonyirestes durch einen Acylrest blockiert ist. Das Dekapeptid (III) wird bei niedriger Temperatur mit dem komplexen wasserfreien Pyridin-Schwefelsäureanhydrid behandelt, wobei schließlich das Dekapeptid L - Pyroglutamyl - L - glutaminyl - L - aspartyl - l - tyrosyl - L - threonyl - glycyl -L- tryptopharyl -L- methionyl - L - aspartyl - L - phenylalanylamid (IV) erhalten wird, dessen Phenolgruppe des Tyrosylrestes durch einen Schwefelsäurerest und die Hydroxylgruppe des Threonylrestes durch einen Acylrest geschützt ist.

NH, Schließlich wird durch milde alkalische Hydrolyse des Dekapeptids (IV) das Dekapeptid

OSO₃H

L-Pyroglutamyl-L-glutaminyl-L-aspartyl-L-tyrosyl-L-ihreonyl-glycyl-L-tryptophanyl-L-methionyl-

L-aspartyl-L-phenylalanylamid (V)

10 erhalten, worin die Hydroxygruppe des Threonylrestes frei ist.

Die obige Kondensation kann durch das folgende Formelschema dargestellt werden, wobei die Symbole den gewöhnlich in der Polypeptidchemie angewendeten Symbolen entsprechen:

OAc

H-PyrGlu-Asp-Tyr-N₃ + H-Thr Gly-Try-Met-Asp-Phe-NH; I II

NH,

OAc

Pyndin-SO₃

OH

H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr-Gly-Try-Met-Asp-Phe NH₂

IH

NH₂ OSO₃H OAc

H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr-Gly-Try-Met Asp-PheNH₂

IV

NH₂

OSO₃H OH

H-Pyr-Glu-Asp-Tyr Thr-Gly-Try-Met-Asp-PheNH.

worin Ac einen aliphatischen Acylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeutet.

Wie oben angeführt, gibt es verschiedene Möglichkeiten zur Herstellung des Dekapeptids (III, IV, V) gemäß den in der Polypeptidchemie bekannten und zur Bildung einer Polypeptidkette verwendeten Verfahren. Ein Beispiel dafür ist folgendes:

NH,

OAc

H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr-N, + H-Gly-Try-Met-Asp-PheNHi VI VII

NH₂

OAc

► H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr-Gly-Try-Met-Asp-PheNHj

III

Aus dem Dekapeptid (III) wird, wie oben beschrie- schiedenen Sekretionen der damit verbundenen Drüben, das Dekapeptid (V) erhalten. sen.

Analoge Ergebnisse werden' erzielt, wenn eine Die folgenden Beispiele sollen die vorliegende Erfin-

andere Kondensation durch p-Nitrophenylester oder dung näher erläutern. 2,4,5-Trichlorphenylester an Stelle derjenigen durch 6o
das Azid angewendet wird.

Das erfindungsgemäß erhältliche Dekapeptid mit einem Schwefelsäurerest ergibt Salze mit organischen und anorganischen Basen; sowohl dieses Produkt als auch dessen Derivate besitzen eine starke vielseitige biologische Wirksamkeit: tatsächlich zeigen sie eine hypotensive Wirksamkeit und stimulieren die Bewe-EunssfähiEkeit des Magen-Darm-Kanals und die ver-Beispiel 1 .

Herstellung des ersten Zwischenproduktes NH,

H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-NH-NH₂ (I)

7,5g Carbo-t.butoxy-L-tyrosin (J. Am. Chem. Soc, 75,1953, S. 950) werden durch das gemischte Äthoxy-Amerensäureanhydrid gemäß dem von Greenst ei η eta! in Aminoacid Chemistry, 1961, S. 978, beschriebenen Verfahren mit 4,150 g Carbobenzoxyhydrazin (Ber., 47, 1914, S. 2183) kondensiert. Nach Stehenlassen über Nacht bei Raumtemperatur wird die Mischung im Vakuum /ur Trockne eingedampft: der in Äthylacetat gelöste ölige Rückstand wird in der Kälte mit 0,5 η-Salzsäure, mit einer wäßrigen Lösung von Natriumbicarbonat und mit Wasser bis zur Neutralität gewaschen.

Die Mischung wird im Vakuum zur Trockne eingedampft und der Rückstand aus Äther-Petroläther kristallisiert. Durch aufeinanderfolgende Umkristallisierung aus Äthylacetat-Petroläther werden 7,700 g

CTB - Tyr — NH — NH — CBO

erhalten, Fp. 118 bis 120 C; [„] - = -1.7 ' · = 1 in Dimethylformamid). 2,2 g dieses Produktes werden bei Raumtemperatur 40 Minuten lang in einer Lösung von wasserfreier Salzsäure in Eisessig (l,33n) stehengelassen Die Mischung wird im Vakuum zur Trockne eingedampft: der ölige Rückstand wird aufgenommen und mit wasserfreiem Äther verrieben. Das so erhaltene feste Produkt wird nitriert, mit wasserfreiem Äther gewaschen und getrocknet. Es werden 1.89 g

H — Tyr — NH — NH - CBO ■ HCl

OBz

CTB-Asp-Tyr-NH-NH-CBO

15

20

25

einem Fp. von 125 bis 128 C (Zers.) erhalten; [<.]o = 38,.^r (c =-- 1 in 95%iger Essigsäure), E₁₂ = 0,75GIu. Einer Lösung dieses Produktes in Dimethylformamid in Anwesenheit eines Äquivalents an Triäthylamin wird in der Kälte ein Äquivalent des gemischten A^- hydrids, hergestellt in wasserfreiem Tetrahydrofuran aus 1,616 g

40

erhalten, Fp. 138 bis 140⁰C; [a]2" = - 20,7° (c = 1 in Dimethylformamid). 1,100 g dieses.Produktes werden 40 Minuten lang bei Raumtemperatur in einer Lösung von wasserfreier Salzsäure (1,33 n) in Eisessig stehengelassen. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt, der weiße zurückbleibende Schaum in wasserfreiem Äther verrieben und der so erhaltene Feststoff nitriert und getrocknet. Es werden 1,03 g

OBz

H-Asp-Tyr-NH-NH-CBO-HCl (VIII)

(E₁₂ = 0,65 GIu) erhalten. Einer Lösung dieses Produktes in Dimethylformamid in Anwesenheit eine» Äquivalents an Triäthylamin werden 0,624 g

NH₂

I

CT3-G1U-ONP

OBz
I
CTB-Asp-OH

(J. Am. Chem. Soc., 81,1965, S. 620) und 0,542 gÄthylchloroformiat nach Greenstemetal (oben zitiert), zugesetzt. Nach Stehenlassen über Nacht bei Raumtemperatur wird die Mischung im Vakuum zur Trockne eingedampft, der ölige Rückstand mit Äthylacetat aufgenommen, mit 0,5 η-Salzsäure, einer wäßrigen Lösung von Natriumbicarbonat und mit Wasser bis zur Neutralität gewaschen. Nach Entfernung des Lösungsmittels wird der ölige Rückstand aus Chloroform-Petroläther kristallisiert, und es werden 2,8 g

zugesetzt (dieses Produkt mit einem Fp. von 150 bis 153° C kinn aus

NH₂
CTB GIuOH

und p-Nitrophenyl in Anvesenheit eines Kondensationsmittel*. wie Dizyklohexylcarbodiimid, hergestellt werden). Die Mischung wird 2 Tage la.:g unter Rührer» bei 35 C gehalten. Sie wird im Vakuum zur Trockne eingedampft, und der ölige Rückstand wird mit Äthylacetat aufgenommen. Nach saurem und alkalischem Waschen wird er aus Methanol-Benzol und danach aus Aceton-Petroläther kristallisiert.

NH₂ OBz

j I

CTB-Glu-Asp-Tyr-NH-NH-CBO

mit einem Fp. von 173 bis 175 C wird erhalten; [_(i]5 = —22,2 (c = 1 in Dimethylformamid). 2.55 g dieses Produktes werden 40 Minuten lang bei Raumtemperatur in einer Lösung von Salzsäure in Eisessig (1,33 η) stehengelassen. Das Lösungsmittel wird entfernt, der verbleibende Schaum aufgenommen und mit wasserfreiem Äther verrieben. Er wird filtriert, getrocknet, und es werden 2,08 g

NH, OBz

55

60 H-Glu-Asp-Tyr-NH-NH-CBO-HCl

erhalten; E₁₂ = 0.59 GIu.

Der Lösung dieses Produktes in Dimethylformamid in Anwesenheit eines Äquivalents an Triäthylamin werden 1,114 g CBO-- Pyi — ONP, hergestellt nach Ann. ö40, 1961, S. 145, zugesetzt und bei 35 C 2Tage lan;.' gehalten und sodann zur Trockne eingedampft; der Rückstand wird mit Äthylacetat und Wasser aufgenommen. Das unlösliche Filtrat wird am gleichen Filter mit 1 normaler wäßriger Salzsäure in der Kälte, mit Natri"mbicarbonatlösung und mit Wasser bis zur Neutralität gewaschen. Die Mischung wird getrocknet und aus Methanol kristallisiert. Es werden 1,7 g

NH₂ OBz
CBO-Pyr-Glu-Äsp-Tyr-NH-NH-CBO

mit einem Fp. von 200 bis 205⁰C erhalten; [a] ¹S — —28,3° (c = 1 in Dimethylformamid). 2 g dieses Produktes werden in 30 ml Dimethylformamid gelöst und in Anwesenheit von 10% Palladium-auf-Kohle hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert, stark mit

Dimethylformamid gewaschen und das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit wasserfreiem Äther aufgenommen, filtriert und getrocknet. Es werden 1,00 g

NH₂
H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-NH-NH₂

E_1-2 = 0,54Glu.

Herstellung des zweiten Zwischenproduktes
OAc
H-Thr-Gly-Try-Met-Asp-Phe-NH₂HC1(I1)

Einer Lösung von 1,04 g H — Try — Met — Asp — Phe —NH₂ (hergestellt gemäß J. Chem. Soc. 1966, S. 555) in 7 ml Dimethylformamid werden 0,46 ml Triäthylamin und 0,563 g CTB- GIy — ONP (hergestellt gemäß HeIv. Chim. Acta, 45, 1963, S. 1637) zugesetzt und 4 Tage lang bei Raumtemperatur stehengelassen. Das Lösungsmittel wird im Vakuum eingedampft, der Rückstand mit Wasser und Äthylacetat aufgenommen, die organische Schicht mit verdünnter Salzsäure und sodann mit einer 5%igen wäßrigen Lösung von Natriumbicarbonat gewaschen, die Mischung zur Trockne eingedampft und aus Methanol-Äther kristallisiert. Es werden 0,95 g

CTB-Gly—Try—Met—Asp— Phe—NH₂ (XI)

erhalten, Fp. 190⁰C. In der Zwischenzeit wird der Trichlorphenylester von Carbo-t.butoxy-O-acetyl-L-threonin der folgenden Formel

OAc

CTB-Thr-OCP
auf folgende Art hergestellt: 8 g

OAc
H-Thr-OH

ab; Fp. 180⁰C, [α]? = +18°(c = 1 in Dimethylformamid); 13,2 g dieses Salzes werden bei 0⁰C mit einer Lösung von phosphoriger Säure gegen Kongorot angesäuert; es scheidet sich ein öl ab, das mit Äthylacetat extrahiert wird. Nach Abdampfen des Lösungsmittels werden 7,3 g

mit einem Fp. von 198 bis 200⁰C (Zers.) erhalten; OAc

CTB-Thr-OH

in Form eines Schaums erhalten. Diesem in 60 ml Äthylacetat gelöstem Produkt werden 5,9 g 2,4,5-Trichlorphenol und 6,2 g Dizyklohexylcarbodiimid zugesetzt. Nach 2 Tagen wird die Mischung filtriert und zur Trockne eingedampft. Es werden 13,2 g .

OAc
CTB-Thr-OCP

20 in Form eines Öls erhalten, das als solches verwendet wird.
0,9 g

H-Gly-Try-Met-Asp-Phe-NH₂

werden in 10 ml Dimethylformamid gelpst, und es werden 0,95 g

OAc

CTB-Thr-OCP

und 0,2 ml triäthylamin zugesetzt. Die Mischung wird 5 Tage lang bei 32° C gehalten, das Lösungsmittel im Vakuum abgedampft, der Rückstand mit Wasser aufgenommen und aus Dimethylformamid-Äthylacetat kristallisiert, wobei ein Produkt mit einem Fp. von 183 bis 185°C erhalten wird, [α]? = - 17° (c = 1 in Dimethylformamid).
0,6 g des so erhaltenen

40

45

(hergestellt gemäß J. Org. Chem., 29, 1964, S. 1629), gelöst in 100 ml Dimethylformamid, werden mit 11,9 g p-Nitrophenyl-t.butylcarbonat und mit 14 ml Triäthylamin behandelt. Nach 4 Tagen werden weitere 2,4 g Nitrophenyl-t.butylcarbonat zugesetzt, und die Lösung wird weitere 2 Tage stehengelassen. Die Losung wird zur Trockne eingedampft und mit einer 5%igen wäßrigen Lösung von Natriumbicarbonat und Äther aufgenommen. Die wäßrige Lösung wird angesäuert und mit Äther extrahiert. Nach Ent- · femung des Äthers werden 3,7 g eines öligen Rück-Standes erhalten, der mit 30 ml Äthylacetat verdünnt wird, worauf 3,14 g Dizyklohexylamin (DCEA) zugesetzt werden. Nach Zusatz von Äther scheiden sich

OAc

CTB-Thr-OH-DCEA

OAc

CTB-Thr-Gly-Try-Met-Asp-Phe-NHj

werden 30 Minuten lang bei Raumtemperatur in einer Lösung von wasserfreier Salzsäure in Eisessig (1,5 n) stehengelassen. Nach Zusatz von Äther wird

OAc

H-Thr-Gly-Try-Met-Asp-Phe-NH^HCl

ausgefällt; E₁^ = 0,51 Leu; Fp. 155°C (Zers.); [a]S - -8° (c = 1 in 95%iger Essigsäure).

Herstellung der Dekapeptide (IH). (IV) und (V)

0,41g H-Pyr-GIu-Asp-TyT-NH-NH₂, gelöst ii. 7 ml Dimethylformamid, werden bei —20° C mit 0,75 ml einer Lösung von 2nonnaler wasserfreier Salzsäure in Tetrahydrofuran und danach mit 0,09 ml t-Butylnitrit behandelt. Nach 6 Minuten wenden 03SmI Triäthylamin und eine auf -20° C gekühlte Lösung von 0,41 g

OAc

H -Thr-Gly-Try- Met-Asp- Phe-NH₂ · HQ

209585/5»

in 2,5 ml Dimethylformamid zugesetzt. Nach 5 Minuten wird 0,1 ml Triethylamin zugesetzt und 1 Stunde lang bei -15°C und 5Tage lang bet 0⁰C gehalten. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand in einer Lösung von Zitronensäure verrieben, w Mach er zur Trockne eingedampft und sodann mit Äther und dann wiederholt mit Athylacetat gewaschen wird. Es werden 0,42 g

NH₂

OAc

H- Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr

Gly-Try-Met-Asp-Phe-NH₂ (III)

erhalten; Fp. 215 bis 217"C (Zers.); [a]₀ = -2Γ (c = 1,1 in Dimethylformamid); E₅₈ = 0,33 GIu.

0,42 g dieses Produktes in 6 ml wasserfreiem Pyridin werden bei einer Temperatur von — 10^cC zu 2 g des Komplexes Pyridin — SO₃, suspendiert in 10 ml wasserfreiem Pyridin, zugesetzt. Die Mischung wird eine Nacht lang bei Raumtemperatur gehalten. Sie wird in Wasser gegossen und der Rückstand mit einer 1 normalen wäßrigen Lösung von Natriumhydroxyd bis zum dauernden Umschlag von Thymolphthalein behandelt, worauf er im Gegenstrom mit dem System Butan. »1-Athanol-Essigsäure-Wasser (80:16 -16:128) (80 übergänge K = 4,3) gereinigt wird. Es werden 0,15 g " " Zitronensäure, mit einer 5%igen Lösung von Nat riumbicarbonat und sodann mit einer 30%igen Lösung von Natriumchlorid gewaschen. Nach Trocknen über Natriumsulfat wird das Lösungsmittel im Vakuum abgedampft und der Rückstand mit Äther verrieben. Die Mischung wird filtriert und das Lösungsmittel zur Trockne eingedampft. Es werden 6,68 g

NH, OBz
I " I
CTB-Glu-Asp-Tyr-NH-NH-CBO

erhalten, Fp. 173 bis 175°C. Nach Umkristallisieren aus Aceton-Petroläther verändert sich der Fp. nicht; '5 Md = -22,5" (r = 1 in Dimethylformamid).
0,526 g

OH

NH₂ OSO₃H

I I

H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr

Gly-Try-Met-Asp-Phe-NHj (V)

erhalten; E_1-9 = 0,54 Cys (SO₃H); E_5-8 = 0,41 GIu.

Das so erhaltene Produkt kann leicht mit einer organischen oder anorganischen Base in die entsprechenden Salze verwandelt werden.

Beispiel 2

Die Herstellung des Dekapeptids (V) wird wie im Beispiel 1 beschrieben durchgeführt, jedoch erfolgt an Stelle der Herstellung des Zwischenproduktes Tetrapeptid (Di) aus dem Dipeptid (VIII) folgende:

2,465 g

NH₂
CTB-GIu-OH

werden kondensiert, und zwar durch das gemischte Athoxyameisensäureanhydrid (obiges Zitat) mit 5,71 g

OBz
H-Asp-Tyr-NH-NH-CBOHCl

(hergestellt wie im Beispiel 1 beschrieben). Die Reaktionsmischung wird bei Raumtemperatur über Nacht stehengelassen. Das Lösungsmittel wird im Vakuum 6s abgedampft and der Rückstand in Wasser und Äthylacetat gelöst. Die organische Schicht wird abgetrennt und in der Kälte mit einer 3%igen Lösung von CBO-Pyr
werden durch das gemischte Anhydrid mit 1,418 g

NH₂ OBz

H-Glu-Asp-Tyr-NH-NH-CBOHCl
erhalten durch Behandlung von
NH₂ OBz

I I

CTB-Glu-Asp-Tyr-NH-NH-CBO

mit einer 1,33 normalen Lösung von Salzsäure in Eisessig, kondensiert.

Die Reaktionsmischung wird über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Das Lösungsmittel wird im Vakuum abgedampft und der feste Rückstand in der Kälte mit einer 3%igen Lösung von Zitronensäure verrieben, fest mit Wasser gewaschen und sodann wiederum mit Äthylacetat und Äther verrieben. Die Mischung wird nitrieri und das Lösungsmittel zur Trockne eingedampft. Nach Umkristallisieren aus Methanol werden 1,35 g

45. NH₂ OBz

CBO-Pyr-Glu-Asp-Tyr-NH-NH-CBO

erhalten; Fp. 200 bis 205C. Ein analytisches Mustei hat einen Fp. von 205 bis 207⁰C; [α]? = -28,3' (c = 1 in Dimethylformamid).

Beispiel 3

Die Herstellung des Dekapeptids (V) wird wie in Beispiel 1 beschrieben durchgeführt, jedoch erfolgt ar Stelle der Herstellung des Zwischenproduktes Penta peptid (XI) aus dem Tetrapeptid (X) folgende: Ein< Lösung von 8,47 g CTB- GIy — ONP, 12,08 g,

H —Try —Met —Asp—Phe —NH₂ HCI(X)

5,32 ml Triethylamin, 1,34 g 1,2,4-TriazoI und 0,2 m Eisessig in 60 ml Dimethylformamid wird 1 Wochi lang bei 28° C stehengelassen.

Die Lösung wird filtriert, im Vakuum konzentriert in der Kälte mit einer gesättigten Losung voi Zitronensäure angesäuert und mit Wasser verdünnt Der so erhaltene Niederschlag *vird gewaschen und mi

Äther verrieben; die Mischung wird filtriert und abwechselnd mit Äther und Wasser gewaschen. Nach ' Umkristallisieren aus Methanol-Äthylacetat-Äther werden 11,10 g

CTB- GIy — Try — Met—Asp— Phe — NH₂P(I)

erhalten, Fp. 192° C (Zers.). Ein aus Dimethylformamid-Äthylacetat-Äther umkristallisiertes analytisches Muster hat einen Fp. von 196°C (Zers.); [α]»' = -27,3° (c = 1 in Dimethylformamid). Eine Suspension von 10,00 g

CTB — GIy — Try — Met — Asp — Phc — NH₂

'5

in 120 ml einer 1,33 normalen Lösung von Chlorwasserstoffin Eisessig wird 35 Minuten lang bei 25⁰C gerührt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum eingedampft und der Rückstand mit wasserfreiem Äther aufgenommen, filtriert und aus Methanol-Isopropanol umkristallisiert. Es werden 8,43 g

H — GIy — Try — Met — Asp — Phe — NH₂ · HCl tion mit der oberen Schicht des obengenannten Lösungsmittelsystems, werden 700 mg des rohen Dekapeptids (V) erhalten; Fp. 224 bis 226°C (Zers.). Das so erhaltene Produkt kann durch Chromatographie gereinigt werden.

Pharmakologie

Die biologische Wirksamkeit der erfindungsgemäß erhältlichen Produkte und in erster Linie die Wirksamkeit auf die gastrische Sekretion, die Gallenblasenbeweglichkeit, die Pankreassekretionen, die Gallensekretion und die Strömung des arteriellen Blutes wurde bestimmt. Die bei diesen Versuchen erzielten Ergebnisse werden in den folgenden Tabellen angegeben, wobei die Wirksamkeit eines der erfindungsgemäß erhältlichen Produkte

Pyr—GIu(NH₂)-Asp—Tyr(SO₃H)—Thr—GIy

Try — Met — Asp — Phe — NH₂ (V)

erhalten; Fp. 182 bis 183°C (Zers.); [α]" = -17° 25 gleich 100 gesetzt und gewichtsmäßig mit der Wirk-(c = 1 in 95%iger Essigsäure); E_{1 2} = 0,59 GIu, samkeit des entsprechenden blockierten Dekapeptids 0,55 Leu.

Beispiel 4 Pyr-GIu(NH₂)-Asp-Tyr(SO₃H)-Thr-

Die Herstellung des Dekapeptids V wird wie im Beispiel 1 beschrieben durchgeführt, jedoch wird der Schritt der Herstellung von V aus III durch den folgenden ersetzt: 1 g

NH₂

OAc

(OAc)-Gly — Tra —Met—Asp—Phe —NH₂(IV)

ferner mit der Wirksamkeit des menschlichen Gastrins, das aus dem Polypeptid

35

H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr

I '

L-Gly-Try-Met-Asp-Phe-NH₂ (III) _4<J

in 30 ml wasserfreiem Dimethylformamid wird bei -10⁰C zu 15,9 g des Pyridin — SO₃ — Komplexes, suspendiert in 80 ml wasserfreiem Pyridin, zugesetzt. Die Mischung wird über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen und sodann im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der feste Rückstand wird in 150 ml der unteren Schicht einer Mischung von n-Butanol-Äthanol-Wasser (5:1:8) gelöst und der pH-Wert mit 1 n-Natriumhydroxyd auf 3,2 eingestellt.

Die Mischung wird fünfmal mit 100 ml der oberen Schicht der obengenannten Mischung extrahiert. Die Extrakte werden im Vakuum eingedampft, der Rückstand wird mit Chloroform aufgenommen. Die Mischung wird filtriert, das Filtrat mit Chloroform und Diäthyläther gewaschen und sodann zur Trockne eingedampft. Es werden 900 mg

NH₂ OSO₃H OAc H-Pyr-Glu-Asp-Tyr Thr-η

Pyr — GIy — Pro — Try — Leu — (GIu)₅ — AIa —.

ι

"- Tyr — GIy — Try — Met — Asp — Phe — NH₂

besteht, und mit der des gastrinähnlichen synthetischen Pentapeptids (I.C.I. 50,123)

CTB — β — Ala — Try — Met — Asp — Phe — NH₂

Gly-Try-Met-Asp-Phe-NH_:(IV) _6$

erhalten. Nach schwacher alkalischer Hydrolyse dieses Produktes, gefolgt von einer Ansäueruns und E'trak-

45 verglichen wird. Dieses gastrinähnliche synthetische Pentapeptid wird von der britischen Firma I.C.I, hergestellt.
Seine internationale Bezeichnung (Englisch »generic name«) ist »Pentagastrhv<. I.C.I, hat Pentagastrin mil dem Warenzeichen Peptavlon® auf den Markt gebracht (vgl. »Merck Index« 8. Auflage, S. 793).

Insbesondere zeigt die Tabelle 1 die Werte entrpre chend den folgenden pharmakologischen Wirksam keiten.

Spalte I: Wirksamkeit auf die Sa'zsäuresekretion

Sie wurde in vivo nach dem Volumszuwachs de Magensaftes und nach der Stärke der Säure de ausgeschiedenen Saftes berechnet. Die zu prü fenden Produkte wurden bei Hunden und Ratten subkutan verabreicht.

Spalte II: Wirksamkeit auf die Galienblasenbewej lichkeit:

Sie wurde in situ auf die Gallenblase von Meei schweinchen bei intravenöser Verabreichung de Produkte berechnet.

.902

Spalte 111. Wirksamkeit auf die Gallensekretion:

Spalte IV: Wirksamkeit auf die Strömung des arteriellen Blutes:

Sie wurde bestimmt durch den Zuwachs des Gallenflusses und der Cholesterinkonzentration der Galle bei Ratten nach intravenöser Verabreichung der Produkte.

Tabelle I

Sie wurde durch einen Strömungsmesser bestimmt, der in der Pankreasduodenalarterie angebracht war, nach intravenöser Verabreichung des Produktes an Hunde.

Verbindungen	Salzsäure Hund	Sekretion Ratte	II Gallenblasen beweglichkeit (Meer schweinchen)	UI Gallensekretion (Ratte)	IV Strömung des arteriellen Biutes (Hund)
Pyr — GIu(NH-,)—Asp — Tyr(SO3H) — Thr —ι	100 95 30 3	100 115 2 2	100 HO 0,03 0.005	100 90 2 0.2
L-Gly — Trv — Mat — Asp — Phe ■ NH2 (V) ... Pyr —GIu(NH2)-Asp —Tyr(SO3H) —Thr—ι	100
1— (OAc) — GIy — Try — Met — Asp —ι
L- Phe · NH2 (IV) Vergleichsstoffe: menschliches Gastrin CTB-ß—Ala—Try—Met— Asn— Phe · NH2	85 3

In die Tabelle II ist die kleinste aktive Dosis (MD) des Dekapeptids

Pyr— GIu(NH₂)-Asp — Tyr(SO₃H) — Thr — Gly — Try — Met— Asp— Phe — NH₂(V)
und die des Dekopeptids

Pyr — GIu(NH₂) — Asp — Tyr(SO₃H) — Thr — (OAc) — GIy — Try — Met — Asp — Phe — NH₂ (IV)
— bestimmt bei verschiedenen Versuchen — angegeben.

Tabelle II

Versuche .

	Dekapeptid (IV)	Art der
Dekapeptid (V)	'85 ng/kg	Verabreichung
100 ng/kg	12 ng/kg	subkutan
15ng/kg	nicht bestimmt	intravenös
0,0025 ng/ml	2 ng/kg	in vitro
3 ng/kg	10 ng/kg	intravenös
10 ng/kg	0,15 ng/kg	intravenös
0,2 ng/kg	870 ng/kg	intravenös
1000 ng/kg	nicht bestimmt	intravenös
4 ng/kg.	110 ng/kg	intravenös
100 ng/kg	intravenös

Salzsäuresekretion des Magens (Hund)

Salzsäuresekretion des Magens (Ratte)

Magensekretion (Frosch) Externe Pankreassekretion (Hund) Externe Pankreassekretion (Katze) Gallenblasenbeweglichkeit (Meerschweinchen) Gallensekretion (Ratte) Va§odilatation des pankrealen Duodenalteiles (Hund)

Verminderung des arteriellen Blutdruckes (Hund)

1 ng = 0.001 (ig.

Die erfindungsgemäß erhäküchen Produkte können insbesondere in der Cholsocystographie, zur Stimulation der Pankreas- und Magensekretion, bei der arteriellen Hypertension und zum Alkalischmachen des Duodenalinhaltes im Falle von Zwölffingerdarmgeschwüren klinisch angewendet werden.

Die Produkte können oral oder parenteral in Form der therapeutisch gewöhnlich verwendeten Zusammensetzungen verabreicht werden.

2902

Claims (1)

Patentansprüche:

1. Dekapeptid L-Pyroglutamyl-L-glutaminyl-L-aspartyl-L-tyrosyl-L-threonyl-glycyl-L-trypto- phanyl - l - methionyl - L - aspartyl - L - phenylalanyl amid, wobei die Phenolgruppe des Tyrosylrestes frei oder durch einen Schwefelsäurerest blockiert und die Alkoholgruppe des Threonylrestes frei oder durch einen aliphatischen Acyhrest blockiert ist, mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und dessen pharmazeutisch verwendbare Sl