DE1643504A1

DE1643504A1 - Ein neuer Dekapeptid L-Pyroglutamyl-L-glutaminyl-L-aspartyl-L-tyrosyl-L-threonyl-glycyl-L-tryptophanyl-L-methionyl-L-aspartyl-L-phenylalanylamid,und seine Salze,sowie Verfahren zu deren Herstellung

Info

Publication number: DE1643504A1
Application number: DE19671643504
Authority: DE
Inventors: Luigi Bernardi; Germano Bosisio; Castiglione Roberto De; Onofrio Goffredo
Original assignee: Farmaceutici Italia SpA
Current assignee: Pfizer Italia SRL
Priority date: 1966-08-09
Filing date: 1967-08-04
Publication date: 1972-04-06
Also published as: FR7044M; SE347504B; DE1643504B2; DK118344B; IL28451A; BE702405A; US3472832A; NO119479B; GR36624B; AT279816B; CH570972A5; NL6710472A; GB1146800A

Description

PKOF. SR, DFL J„ RBITSTÖTTER >

B et MÜNCHEN SS. HAYDNSTRASSE 8, FERNRUF COSH) S347 12

Münzen, 3 M/8824

Bin iwutr Dekapeptid L-Pyroglutamyl-L-'^lutaminyl-·

pixanyl~L-w0thiQnyl-L-aapartyl-»L-ptfnylalanylaiBid, und seine Sal ge. sowie Verfahren asu deren H«r at aliting

Die Erfindung bezieht eioh auf ein neues» therapeutisch verwendbares Dekapeptid L-Pyroglutamyl-L-glutamiiiyl-L-aspartyl-L-tyrosyl-L-threonyl-flflyoyl-L-tryptophanyl-L« methionyl-L~aep»rtyl-L-phenylalanylaraid worin die Phenolgruppe dee Tyroeylrestes frei oder durch einem Schwefel» säurereat blockiert ist und die Alkoholgruppe des Threonylrestes frei oder durch eine aliphatischen Acylrest mit

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1 bis 4 Kohlenstoffatomen-blockiert ist, und seine pharmazeutisch verwendbaren Salze mit einer* organischen oder anorganischen Base.

Das erfindungsgeraäß erhält liehe. Dekapeptld und seine Derivate zeigen eine hohe mehrfache biologische Aktivität und können bei der Therapie verschiedener Affektionen sowohl bei Menschen als auch bei Tieren angewendet werden.

Es gibt zahlreiche Möglichkeiten der Synthese des erfindungsgeaäjßen Dekapeptids, die im wesentlichen darin bestehen, daß man nach bekannten Verfahren der Polypeptid-* chemie die geschützten Aminosäuren oder Polypeptide in geeigneter Reihenfolge kondensiert, wobei diese Kondensation so durchgeführt wird, daß das erhaltene Bekapeptiö die gewünschte Folge von zehn Aminosäuren aufweist.

Die Amino- und Carboxylgruppen der stufenweise kondensierten Aminosäuren und Polypeptide₈ die an der Bildung · der Peptidkette nicht teilnehmen sollen, werden durch eine Schutzgruppe blockiert, welche auf an sich bekannte Art durch Acidctlyae oder Hydrolyse wieder entfernt werden kann*

Zum Seliutz der Aminogruppe können die folgenden Schutsgruppeii verwendet werden: Tosyl Cp-Toluoleulfonyl),

CCasfbobenajrloxy), Carbo-t^butoxy, Trltyl "=■;',

- ' (Trtp^enyl*-methyl·)

BAD oniGJNAL

(Tripheny !-methyl)«, Pormgrl";»- frifluor acetyl vna andere ■ gewöhnlich in- der Polypeptidchemie angewendete Gruppen*

Ζΐαη Schütz der Carboy !gruppe können beispielsweise die folgenden Schatzgruppen angewendet. werdens Methyl, lijhyl, t»Butyl, Benzyl, p-Ni trophenyl "und andere auf dies em Gebiet gewöhnlich angewendete Gruppen*

Die Kondensation zwischen der ÄÄinogruppe eines Molelcüls und der Carboxylgruppe eines anderen Moleküls gnir Bildung der Peptidkette kann gemäß in.der-Poly~ peptidshemie "bakannten Verfahren durchgeführt werden« beispielsweise durch ein geeignetes aktiviertes Acylderi-vafe_f wie ein geaischtes Anhydrid» ein AzId^ ©inen p-Kitropheny lest er irad 2_f4₉5-Trichlorplienylester_s oder starch direkte Kondensation zwischen der freien.Msogruppö xmß. de'r freien Carboxy!gruppe in Anwesenheit einss geeignetes Kondensationsmittels'»'^ wie eines Carbodiiaids g^BoDisyklohesylcarbodiifflid oder 1 -2Syklohe3jyl-3-siorpholinyΙο arbsdiimid sowie andere in der liiteratur bekannte«. (| Die Kondensation kann in einem geeigneten Losrungsmi%teei durchgeführt werden, Z₁-B, H,^DiaikyIfor3iamide_s niedrige aliphatische Hitrile und I^ridine, beispielsweiseBirnefehylformanid, Acetonitril und l^yri din $ die -.'Reaktion beginnt bei ~20°0 bis Ra-umtemperatiir und kann bei Sauatemperafcur bis 35°C ivährend eines Zeitrauffies von 12 Ms 120 Stunden •«rcllendei; werden^ ■

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Typische Salze des erfin&u-ngsgemaS er-hält liehen Bekapepfcids sind das Ifafcriumsalz., Kairamsalζ, Magne3rura~ salz-, Kalziumsalz, Glukonat* Tartrafc, Malat, Äthylendiarainsalz und andere pharmazeutisch verwendbare Salseo

Wie oben erwähnt- gibfc es viele mögliche Synthesen für das örfindungsgemaß erhältliche Dekepeptid«

Zur näheren Erläuterung der Erfindung werden iia nachstehenden einige Beispiele zu dessen Herstellung angegebenο ·

Das !Tefcrapepfcid L-Syroglutanyl-L-glutaminyl-L- ~aspartyl~L-"fcxroBin~a2id (I) wird mit dem Eexapeptrld

(II)» dessen ifydroacylgruppe des Threonylrestas durch einen Äcylrest blockiert ist,- in einem geeigneten Lösungsmittel, wie DimethyIformamid, kondensiert, wobei das Dekapeptid

--fcryp tophar^yl-Ir-me thi ony!l-L-aspartyl-L-phenylalanyl- -amid (III) erhalten wird, dessen Hydroxygruppe des Threonylrestes durch einen Acylrest blockiert ist» Bas Dekäpepfeid (III) wird bei niedriger Temperatur mit dem komplexen wasserfreien ?yridin-Schwefelsäureanhydrid behandelt, wobei schließlich das Dekapeptid L-I^rog.lutaiBffl~ -L--glubaminyl-L--aspartyl--L--tyrosyl-L~threonyl~glycyl~L" -tryptopharyl-L~methiony 1-L-aspartyl-L~phenylalanylamid (IV)

erhalten Λ 209815/ "

'-.,ν. ■ -V ;«4;35Ο4

einen Scnwef elsäur-eBeö k rand ε& restes durch eifraii Aeytossfc geschützt ist«,

Schließlich, mitä daxrck Milde alkalische des Dekapepfcids (IV) das Befcaj>epfeici

- ■- i

(?) erhalten» worin die ^droi^gi^ps des T

J5i« öbig^ Kondensation -käöm #a5?eli das ioriiieleclieiaä da£goetre!*Ui üsrej>de2i₁t wobei die den gewöhnlich in det
Symbolen

1 ^d '■■■■■ ^?i . :■·.■ - - ■"■.■.■-

^ QSQM

itt

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worin ic---®iiiea-aii|>itafelsek©a äsylraet. mit 1 stoff atomen bedeutet»

Wie ol>en angefahrt, gibt? es verschiedene 'ketten aar Herstellung idea De&apepfci&s (ΪΪΙ* Ι1Γ, ÜT) gemäß den in ä&r !»ol^peptMcltemi« 1be1cannfc®2ä und zor Biläang eimer Bo337p©pti€fcefcfee irerweaäetea W&jtfEähTBn« Ein ist

I²I

WX ' - ' ■ - HJX

Aas dem Dekapepfcid (III) wird wie o"ben l>eBclirie"bea D^apaptiid (W) erhalten.

Analoge ISrgelmieBe werden erzielfc, wenn eine andere Kondensation durch p-Nitrophenyiester öder 2:»*_S5*· ^Trichlorphenylester anstelle derjenigen durch das Azää angiewsndeit wird.

Das erfindungsgemaB erhfiltliche Dekapeptid mit einem Schwefeleäurerest ergibt Balze mit organischen -and anorganischen Basen; sowohl dieses Produkt als auch dessen Derirate besitzen eine starke irielseitige

zeigen sie

wxxcL

BAß ORlGiNAi

und stimulieren die Beweguagsfäfeigkeit; dee Magea-Darm-Kanals tsnd die-verschiedenen *Sekr@tionen--d<3r damit Trertaadenea Srüsezu * ,.v". ..

Die folgenden Beispiele sollen die vorliegende Erfindtrag näher erläutern _f ohne daß diese jedoch hierauf beschränkt sein soll·

BEISPIEL 1 ζ IH₂

Herstellung; des ersten Zwischenproduktes s H~Pyr*-GlO>-Aj3p^

7,5 g Carbo-tpbiitoxy-Ii-tyrosin^ 1953» Seife© 950) werden diuxh das gemischte Ifehoay-Ameisenii&ar-eafiliydsld g©s^B dem tob ^ceenstein et al» la Iminoasid CJhemiefery 1961, Seifee 978* "beschriebenen ferfaSireia. lalt 4,150 g Garbobenaoay-hydrasin (Ber. 4£, 1914, Söife© 2183) Mondes®i©a?feΌ Mach Stehenlassen über Nacht bei Sgöm&emperaiair wird di© liseteag im Vaköutii zor Trockene eingedampf fe ? der in Itlsyls&ebafc geloste ölige Ruckst and wird in der Kälte mit 0,5xi SaIzSaOTe₉ mit ainer wässerigen Losttögvon - Äateiusa« bicarbo3äat tuad mit Wasser bis arar Seutralitäfe gewaschen*

Me Misehnng wird Im Vakuma srar Trockeaö einge«· dampffe und der Hockstand aus Xther-Petroläther siert. Dorch aufeinanderfolgend· Tttkria|taliisiei®^ itbyiace t;at-Pe troltther Werden 7,700 g #Ä

erhalten, Jp* 118 — 12O°C>

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■■: -.. BAß

j(e ~ 1 in Dimethylformamid), 2,2 g dieses Produktes werden bei Raumtemperatur 4-0 Minuten lang in. einer Losung von wasserfreier Salzsäure in Eisessig (1 stehen gelassen« Die Mischung wird im Vakuum zur Trockene eingedampft: der ölige Rückstand wird auf genommen, und mit wasserfreiem Xther verrieben. Das so erhaltene feste Produkt wird filtriertV mit wasserfreiern Äther gewaschen und getrocknete Es werden 1₉89 g H-ü^rr-irH-KH-CBO»HCl alt einem ϊρ. von 125 - 128⁰C (Zers.) erhalten? W V =38,3° Cc;* 1 in 95 /tiger Essigsaur·), E_{1 2} ~ 0,75. Glu· Einer Loetxzig dieses Produktes in Dimethylformamid in Anwesenheit eines Äquivalents an TriSthylamin wird in der Kälte ein Äquivalent des gemischten Anhydrids» hergestellt in wasserfreiem Tetrahydrofuran au« 1,616 g CTB-Aap--OH (J.Am_eChem.Soe» 84, 1965» Seite 620) und 0,5*2 g Äthylchloroformiat nach Greenstein et al. (oben zitiert), eugesetzt· Fach Stehenlassen über BTacht bei Baumteuperatur wird die Mischung im Yakoum zur Trockene eingedampft „ der Ölige Rückstand mit Äthylacetat aufgenommen, Bit; 0,5a Salzsäure, einer wässerigen Lösung von Vatrlumbicarbonat und mit Wasser bis sor Neutralität gewaschen» Hach EntfemooBg des Lösungsmittels wird der ölige Hockstajid

aus Chloroform-Petroläther kristallisiert und es werden OBe

2,8 g CTB-iep-l^r-IIH-liH-GBO erhalten, Fp. 138 - 140°C_;

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§ « -20,?° (c e'.1 In I)ifliefchylformamicl>_u ijlOO g diesea Produktes werden 40 Mimten lang bei "HaumfcemperatEu?. in einer Losung von wasserfreier Salzsäure (1,33n) in Eisessig stehen gelassen. Das kosungaiaifctel wird im, Yafciium".entfernt;.-der weiß© zuriicKbl eibende Schaum iii wasserfreieai Äfchsr verrieben und der ao erhaltene· Peststoff filtriert und getrocknet;» Es werden 1 #03 g H-lsp-iEyE-KH-IiE-GBO^HGl (VTH) (IS^ - ·" 0..65 GIu) eraalfeeiic Einer I^smig dieses Prodiilcfces in öimebnylförmaaid in ÄnwesöMieit eines ÄqaiVaisÄta ■ äa" Triafchylamin werden 0,624 g CTB-Gln-OFI» zogesefezt; (dieses

Produkt mit einem Pp» von 150 - 153 0 kaxm aus CTB-^Qlu-OH •and ]HSit2?opiiengfl in Äiiy/eseiiheit; eines Kondensationsmitfeelsj, wie DizyklohesylcarToodiimid; hergestellt werden). Die

Misclmng wird 2 Tage lang unter Bohren bei 55°C gehalten· :

Sie wird im Vakuum sw* Trockene eingedaBrpftxmd dar ölige Röckafcand wird mife Äthylacetat^Tfcfgenommen» Wacli saurem und alkalischem Waschen wird er ims Methanol~Benzol und danach

aus Aceton~PefcrolSther kris&allisiert* . i

OBa

mit einem Pp* von

173 - 175⁰C wird erhalteni M|° = -22,2° (c ~ 1 in Dimethylformamid)· 2,55 S· dteaee Produktes werden 40 Minuten lang bei Eaomtemperatrur in einer Itosung τοη Salzsäure in (1,33n) stehen gelassen. Das !lösungsmittel wird

entfernt«

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"^ : BAD

entfernt j der verbleibende Schaum aufgenommen und mit wasserfreiem Äther verrieben. Er wird filtriert, ge-

SH₂ OBz

trocknet und es werden 2*08 g H-Glu-isp-Tyr-rrH-lJH-CBG-HCl erhalten! B^ ^ ~ 0*59

Der Lösung dieses Produktes in Dimethylformamid in Anwesenheit eines Äquivalents an Triäthylamin werden 15,114· g CB0~Pyr«0HP₅ hergestellt nach Ann. €&0₉ 1961-, Seite 145» zugesetzt und bei 35°C 2 Tage lang gehalten u&d sodann zur Trockene eingedampft; der Rückstand wird mit Äthylacetafc und Wasser aufgenommen. Das unlösliche Filtrat wird am gleichen Filter mife 1n wässeriger SalziSäure in der Kälte» Mt Hatriumbicarbonatlösung und mit Wasserbia zur Keutralifeät gewaeehen* Die Mischung wird getrocknet

tmd aus Methanol kristallisiert;. Es werden 1,7 g CBO-Pyr- Ψ 9^B

raife einem Pp. τοη 200 - 205 C-. er-

halten, [*]Jp β -28.3° (c - 1 in Dimethylformamid). 2 g dieses Produktes werden in 50 ml Dimethylformamid gelöst üad in Anwesenheit von 10 % Palladium-auf-Kohle hydriert _o Der Katalysator wird abfiltriert, stark mit Dimethylformamid gewaschen und das iilfcrat im Vakuum zur Trockene eingedampffc_β Der Rückstand wird mit wasserfreiem Äther aufgenommen, f11-triert und getrocknet. Ss werden 1,00 g H^ mit einem Pp. von 198 - 200⁰C (Zers.) erhalten;

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- ..-Herstellung des zweiten Zwischenproduktes i

(XI)

Einer Lösung von 1 «QA- g H-Try-Met-^ (hergestelltgemäß J*Chem.Soe. 1966- Seite 555) in 7 ml Dimethylformamid werden 0^6. ml Triäthylamin land 0,565 CTB-Gly-ΟϊΠ? (hergestellt gemäß HeIv. Chia*Acfea *5* 1963· Seite 1637) zugesetzt Tind-"4 Tage lang hei Eatuatemperatrar stellen;gelassen» Das Lösungsmittel wird im Vakuum eingedampft, der Rückstand mit Wasser und Äthylacetac aufge nommen, die organische Schicht mit verdünnter Salzsäure ■und sodann mit einer 5 %igen wässerigen Losung von Natriumbicarbonafe gewaschen, die Mischung zur Trockeneeingedampft und aus Mefchanol-lfcher kristallisiert« Es werden 0,95 g CTB-Gly-Try-Met-Asp-Phe-HHg (XI) erhalten, Fp■«-190⁰C. In der Zwischenzeit wird der Trichlorphenylester von

CaTbo-t.butoxy-O-aee ty1~L-threonin, der folgenden Formel OAe OAc

CTB-Thr-OCP auf folgende Art hergestellt: 8 g H-Thr-OH (hergestellt gemäß J«0rg*Chem, 2£, Ί964, Seite 1629): gelost in 100 ml Dimethylformamid, werden mit 11,9 g · p-Ritrophenyl-fc.butylcarbOflafc und mit 14 ml Triathylamin behandelt. Fach t- Tagen werden weitere 2»4 g Hitrophenyltobutylcarbonat zugesetst und die Lösung wird weitere 2 Tage stehen: gelassen. Die Losung wird zur Trockene erIngedampft und mit einer 5 %igen wässerigen Lösung von Natriumbicarbonafc und Äther aufgenommen. Die wasserige Lösung

wird 20$8i5/1585

. BAß ORIGINAL

wird angesäuert und mit Äther exfr.rahieru. Nach Entfernung, des Äthers werden 3-7 g eines öligen Rückstandes erhalten,, der mit 50 ml Äthylacetat verdünnt xvird;.worauf 3 Dizyklohexylamln (DCEA) zugesetzt werden. Nach Zusatz

OAc

von Äther scheiden sich 4,9 g CTB-Thr-OH. DCEA ab* Fp, 180⁰C, Mp⁰ = +18° (c =1 in Birnefchylfomamid), 13*2 & dieses Salzejs werden bei O⁰C mit Giner Lösung von phosphor·!gor

Säure gegen Kongorot angesäuert; _s

es scheidet; sich ein öl ab» das mit Äthylacetat extraaierß

wird. Nach Abdampfen des Lösungsmittels werden 7₅3 g OAc

CTB-Thr-OH in Form eines Schaums erhalten» Diesem in 60 ml Äthylacetat geloεben]Produkt. werden 5₃9 g.-2,4·₅.5-ϊϊ?1~ ehlorphenol und 6,2 g Di2?yk3.ohe3cylcarbodiimid zugesetzt*.

Haeh 2 Tagen wird die Mischung filtriert und zur Trockene

OAc

eingedampft. Es werden 13,2 g CTB-Thr-OCP in Form eines Öls erhalten* das als solches verwendet wird» 0»9 Z H-Gly-Try-Met-Asp-Phe-KH-, werden in 10 ml

^ , . OAc dimethylformamid gelosfe und es werden O_v95 g CTB-Thr-OCP und 0,2 ml Triäthylamin zugesetzt. Die Mischung wird 5 Tage lang bei 32⁰C gehalten} das Lösungsmittel im Vakuum abgedampft, der Rückstand mit Wasser aufgenommen und aus DimethyIformamid~ithylacetat kristallisiert} wobei ein Produkt mit einem Fp. von 183 - 185°C erhalten wird,

W20 - ~17°(c a 1 in Dimethylformamid).

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ORIGINAL

OAc 0|6 g des so erhaltenen GTB^Tnr-Gly^Try^Mefe^Aap*"

<~Phe-NH₂ werden 30 Minuten lang bei BatMtsmperatrTtit" in einer Lösung von wasserfreier Salzsäure in Eisessig (1₅5n)stehen

VAC · ;.

gelassen«. Fach Zusatz von Äther wird H^Thr^Gly-Tr -ASp-PlIe-IiHg-HCl ausgefällt; ^g" ^ο>51 Leti| ip. (Zers*); W^* «=—0° (c « 1 in 95 %iger Essigsaure)*

Hera teilung der Dekapeutide ΪΙΧ, IV und Y;

0,4-1 g H-Iyr-Glu-Asp-lyr-NH-NHgif gelöst in 7 Dimethylformamid werden bei ~20°C mit O₉75 ml einer Lösung Ton 2n waeeerfreier Salzsäure in Tetrahydrofliran und danach mit 0,09 ml t.Butylnitrife behandelte Nach 6 Minuten werden O_e35 ml Triethylamin und eine^ auf -20°0 gekühlte Lösung

kc
Tön Öi*1 g H-ihr-Gly-Try<-Met-A^p--Phe~ira2»HCl in 2,5 ml Dimethylformamid zugesetzt »Nach 5 Minuten wird O₉I ml Triäthylamin zugesetzt und 1 Stunde lang bei -15⁰C und 5 Tage lang bei O⁰C gehalten. Das Losungsmittel wird im Takuum entfernt und der Rückstand in einer Lösung τοη Zitronensäure verrieben, wonach er tür Trockene ein- (|

gedampft und sodann mit Äfcher und dann wiederholt mit Äthyl-

acetat gewaschen wird. Bb werden 0,42 g H- -Tyr-Tllr-Gly·-Try-^ίβfc-Asρ-·Hιe-HH« (III) erhalten, i^. bis 217°C (Zere.) ι M₀ β-21? (e « 1,1 in DiÄethylformamid) ι

0,42 g dieses Produktes in 6 ml wasserfreiem

Pyridin 209815/1S85

I^rridin werden bei einer Temperatur -von -iO°G su 2 g de?» Komplexes I^ridin-SO, _r suspendiert in 10 ml wasserfreiem ?yridin₅ zugesetzt. Die Mischung 7/ird eine Nacht lang bei Raumtemperatur gehalten-. Sie wird in Wassei- gegossen und der Ruckstand mie einer 1n wässerigen. Lösung τοη TJatriumhydrosyd bis zum dauernden Umschlag von₌Thymolphthalein behandelt, worauf er im Gegenstrom mifc dem Metern Batanol-Atlianol-Eoslgsaure-Wasser (80ji6il6:'i28)

(80 Übergänge E = ^»3) gereinigt wird· Es werden O«'I5 g NH2 .9SO₅H
&lAT2ThG2TMfcAPbHH (V) erhalten?

9 - 0i54 Qya (SO₃H); B₅^₈ - 0,41 GIu.

Das so erhaltene Produkt kann leicht mit einer organischen oder anorganischen Base in die entsprechenden. Salze Terwandelt werden.

BEISPIEL 2t ·

Die Herstellung des Dekapeptids (V) wird wie in Beispiel 1 beschrieben durchgeführty jedoch erfolgt anstelle der Herstellung dee Zwischenproduktes Tetrapeptid (TX) ans dem Dipeptid (VIIIl folgende:

g CTB-GIu-OH werden kondensiert ₍ und zwar

durch das gemischte Xthoiyaaeißensäureajihydrid (obiges

OB» Zitat) alt 5»71 g Ä-lep-55n?-HB-»H-CBO.HCl (hergestellt wie in Beispiel 1 beschrieben). Die Reaktionamischung wird bei Haxmtemperatur über Nacht stehen gelassen· Das Lösungsmittel

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BADORiGlNAL

wird im Vakuum abgedampft und der Rückstand in Wasser und Äthylacetafc gelöst. Die organische Schicht wird abgetrennt und in der Kälte mit einer 3 %igen Losung von Zitronensäure, mifc einer 5 ^igen Lösung von Natriumbic&j?bonat und sodann mit einer 30 %igen Lösung von Natriumchlorid gewaschen* Hach Trocknen über Natriumsulfat wird das Lösungsmittel im Vakuum abgedampft und der Buckstand mit Äther verrieben. Die Mischung wird filtriert und das Lösungsmittel

. HH2 OBz

zur Trockene eingedampft« Es werden 6,68 g Tal -NH-KH-CBO erhalten, ϊ£._ 173 - 175°C· Nach Iftakristallisierea aus lceton~Petroläther verändert sich der Fp. nicht; [*L = -22,5° (c = 1 in Diaethylformemld).

OH

0_e526 κ CBQ-iyr werden durch das gemischte Anhydrid

aib 1,^-18 g H^Glu-le^^i^liH-BHrCBO.HCl, erhalten durch

»Hg OBz
Behandlung von CTB-Glu-Asp-Tyr-HH-HH-CBO mit einer 1 Lösung von Salzsäure in Eisessig» kondensierte

Die Reakfcionsmischung wird Über Nacht bei Raumtemperatur stehen gelassen. Das Lösungsmittel wird im Vakuum abgedampft und der feste Bücket and in der Kalte mit einer 3 %igen Lösung von Zitronensäure verrieben, fest mit Waeeer gewaschen und sodann wiederum mit Xthy lace tat und Ither verrieben. Die Mischung^ wird filtriert und das Lösungemittel zur Trockene eingedampft. Hach TMkritfcallieieren ans Methanol werden 1,35 g

"NH-CBO 209B15/1585

1S43S04

-Stö-CBO erhalten* Jp₉ 200 - 2Ö5°C» Ein analytisches Masfcer hat einen !$« -von 205 - 207°0· M|° « -28>3° <e = 1 In Dimethylformamid),

BEISPIEL 5t

Die Herstellung dee Dekapeptids (7) wird wie in Beispiel 1 beschrieben durchgeführt;, jedoch erfolgt anstelle der Hers teilung des Zwischenproduktes Pentapeptid (XI) aas dem Tetrapepcid (I) folgendet

Eine LSeiüig von 8,4? g CTB-GIy-OKP, 12,08 g Aep-Hie-lSHg-HOl (X)» 5,32 ml Trigthylaiaiii» g 1,2,4-Triaiol und 0,2 nl Msessig in 60 ml Dimebhylformasid wird eine Woche lang bei 28⁰C stehen gelassen»

BIe Lösung wird filtriert, im VaJcmm konzentrierte in der Kfilte mit einer geslttlgfcen Lösung von Zitronensfitire angesSuerfe mnd mit Wässer verdünnt· Der so erhaltene Niederschlag wird gewaschen und sit Äther verrieben; die Mischung wird filtriert and abwechselnd mit Äther und Wasser gewaschen* Haeh Dinfcrietallisieren aus Methanol-Äfchylacetat-Ither werden 11^0 g CTfrⁱG3y~Try-llet-Asp«i^lhe-HH₂ (U) erhaltent Fp* 192°C (2er··). Ein ass Dimethylföraamid-Äthylacefeat-Äfeher trakrlstallisiertes analytisches Master hat; einen Ifc. won 196⁰C (Zerp.). W|⁵ «= -27,3° (c = 1 in Dime thyIforaamid)·

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BAD ORIGINAL Bine Suspension yog 10,00 g

g in 120 ml einer 1,33η lasting von Chlorwasserstoff ix* Bisessig wird 35 iiiim ten läng "bei 25°G gerührt« Daß Lösungsmittel wird im Tafcsrapeingedäapf te und der^ Bucks feöttd mit wasserfreiem Xther scufgeaöjiaien^ £lltnaerfiivTHi& aus ^; Methanol-Ieopropanol uaicris tallinxert. Sa werden &&$■ g

Cc *'1 ta 95 |

2 "* öj.59 aiü, 0_f55 XieH* "'-V

BEISPIEL· ^{: v}

Die Herstellung de· Deiapeptids V wird wie in Beispiel 1 beschrieben durchgeführt, jedoch wird der Schritt; der Herstellung von T aus III durch den folgenden ersetzt!

1 g H^P|yrMSltt~itep^^^

(III) in 30 ill waeserfreiem Dimethylformamid wird bei -10^0 ze 15 #9 g des Pyriditt-SOx-toBrplexee, sTaspendierfc in 80 ml waeserfreiem Pyridin, sugesetztr. Die Mischung wird über Sacht bei Raxxmtemperatmr stehen gelassen und sodann Is YaJnrasi zur Trockene eingedampft. Der feste Rücket and wird in 150 ml der unteren Schicht einer Mischung von n-Bntanol-Ithanol-Wasser (5 * 1 t 8) gelöst und der pH-Wert mit 1n Hatriamhydro^yd auf 3,2 eingestellt ο

Die

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^ri ^-BAD OfflGlNM.

Die Mfiäehung wird fünfmal mit 100 ml der oberen Schicht der obgenannten Mischung extrahiert* Die Extrakte werden im Vakuum eingedarapffeι der Rückstand wird mit; Cfeloro~ form aufgenommen. Die Eischting wird filtrierfe,. das FiItrat mit Chloroform und DiSfchyliither gewaschen xaii sodann zor

Jrcckijne eingedampft?» Es werden 900 ag H-ftrr-Gln-Asp-QSO₃H 01t? ■ . ./.

-!!yi*"*-*"*^!^^ erhalten_o Nach echwacher

alkaliacner Hydrolyse diesee Produitee, gefolgt m»n einer Aasaueraag unu Ertrafcfcion mit der oberen Schicht des obgenannten Löetmgemifcteleya fcema» werden 700 rag des rohen Dekapeptids (V) erhalten, Wp_c 224 - 226°C (Zers.)» Das ao erhaltene I¹TQdIDlCt kann durch Chromatographie gereinigt werden.

Pharmakologie

Di· biologische Wirksamkeit der erfindnn^agemäß erhältlichen Produkte und in erster Linie die Wirksamkeit auf die gastrieche Sekretion, die Gallenblaaenbewegliehkeifc, die Pankreaasetretionen, die GaIleneekretion und die Strömung dee arteriellen Blutes wurde bestimm to Die bei diesen Verfluchen erhielten Ergebnisse werden in den folgenden Tabellen angegeben, wobei die dem erfindungegemfiß erhältlichen Produkt Ρ7Γ^01ϋ(ΗΗ₂)-ΑΑρ~Ί^Γ(5Ο,Η)-Τητ~αΐ7- -Try-IIet-lep-Phe-llE^ (1) entsprechende Wirksamkeit gleich 100 gesetzt; und gewichteiiäßig alt dem menschlichen Gsstrin,

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>i"9 -

dem Pol^eptid £p^^

&&-ν&ϊ~&Έ~^*~^2 gebellt, und mit; deiü

altalichen synthetischen Penfcapeptid (1,0.I <3TB-J$^la"-TryHHtet'^

Insbesondere zeigt die Tabelle i die iferfee enfe->

eprechend den folgenden^^ pfcarmaäöiogischen WiiifcifäinlEöIfcen*

Spalte I: Wirtrsaakeit ainf die SalzaSuiteseto?gfcit3nl si% wurde **in vivo" nach dem Volums Zuwachs des Ilagensaftes und nach der SS&rfce der Säure des ausgeschiedenen Saftes berechnet. Die zu prüfenden Produkte wurden bei Hunden und Batten subkutan rerabreichfc.

Spalte II« Vj^rfceajikeit aof die

sie wurde in ei tu auf die Gallen"blase von Meerschweinchen bei intravenöser Verabreichung der Produkte berechnete

Spalte Uli Wirkeamkeit auf die Gallensekretion» sie wurde bestimmt lurch den Zuwachs des Gallenflusses und der Choleeterinkonzentration der Galle bei Batten nach intravenöser Yerabreiehung der Produkte.

Spalte IVt Wirksamkeit; auf die Strömung des arteriellen Blut«: sie wurde durch einen Strömungsmesser bestimmt, der in der Pankreasduodonalarterie angebracht war_f nach intravenöser Verabreichung dtß Produktes an Hunde«

Tabelle I

T a b e 1 1 e I

Verbindungen	ϊ sefcretioii	Ratfee	Ir Gallenblasen- beweglichkeifc	III' Gailen- selcre-	-	IT dea
	Hund		Meerschwein chen	fciois Eat fee	0,2	len EIuts. Hund
3 ThP-GIy-Try·-
. Met-Asp-Phe»		100		. ·. ■■
HH₂	100	2	100	100	100
menschliches Gastrin	30		0,03	2	—. ■
GTB- β -AIa-		2
Phe.HHg	3	0_ft005	. 3

In Tabelle II iefc die kleinste aktive Dosis (MD)

des Bekapeptids Pp?"Glu(IiBU)-Afip-TjrCS03H)-a?hr-^l7-i|iij^T~ⁱ·

■" ■■ ■ ' ■ '-τ,

Met-Asp-Phe-NHot "bestimmt "bei verschiedenen Versucheni angegeben*

Tabelle II

209815/1585

T SL b e 12 e IT

■ Versuche	' - - - MD	Art der !er-- abreichiinp
Salzßäurssekrefeion des Magerte CH&nd)	100 ng Ag	subkutan
SaI zsäiireE ekretion des Magens (Eatte)	15 ng Ag	intravenös
Magensekretion (Frosch)	Q-OO25 ng/ffil	in id tro
Externe Pankreas·*· sekrefcion (Hund)	3 ngAg	intravenös
Erterne Pankreas- Sekretion (Katze)	10 ngAg	intravenös·
Gallenblasenbe- weglichkeife (Meerschweinchen)		_intoaT(!a8s.
Gallensekretion	iOOO ngAg	intravenös
Vasodilatation äss pankrealen Baodenaiteiles (Hund)	■4. ngAg	intravenös
Venttinderung des arteriellen Blut- .- druckes (Hund>	100 ngAg	intravenps

s ο»οσι

Die erfindiangsgemäß erhältlicnen Pi'odukte können insbesondere in dor CholBocyatographie, zur StimOlation der Pankreas- und Magensekretion, bei der arterielleB.

Bjpertenaioxi

209815/1585

lfypertenslon und zum Alkaliechmachen des Duodenalinhalt es im Falle von ZwolffingerdarmgeschwÜren klinisch angewendet werden.

Die Produkte können oral oder parenteral in Form der therapeutisch gewohnlich verwendeten Zusammensetzungen verabreicht werden*

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BAD ORIGINAL

Claims

München, 31. fry 11 I967

/84 'pl

München, 31. fry 11 I967 M/8824 'peleg xempla

„.rl nich' dert 1,-.-.Me

Patentansprüche

1· Ein neues Dekapeptid L-Pyroglutamyl-L-glutaminyl-L-aspartyl-L-tyrosyl-L-threonyl-glycyl-L-tryptophanyl-L-methionyl-L-aspartyl-L-phenylalanylamid, wobei die Phenolgruppe des Tyrosylrestes frei oder durch einen ^chwefelsäurerest blockiert und die Alkoholgruppe des Threonylrestes frei oder durch einen aliphatischen Aoylreafc blockiert ißt, mit 1 bis k Kohlenstoffatomen und dessen pharmazeutisch verwendbaren Salzen mit organischen und anorganischen Basen*
2. Verfaliron zur Herstellung des neuen Dekapeptids L-Pyroglutamyl-L-glutaminyl-L-aspartyl-L-tyrosyl-L-threonyl-glyoyl-L-tryRtophanyl-L-methionyl-L-aepartyl-L-phenylalanylamid, wobei die Phenolgruppe des Tyrosylrestes frei oder durch einen Schwefelsaurerest blockiert und die Alkoholgruppe des Threonylrestes frei oder durch einen aliphatischen AcyIreet blockiert ist, mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und dessen pharmazeutisch verwendbaren Salzen mit organischen und anorganischen Basen, dadurch gekennzeichnet, daß das Polypeptid der obigen Formel gemäß an sich in der Polypeptidchemie bekannten Verfahren hergestellt wird.

209815/15*5

OH OAc

3 · H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr-Gly-Try-Met-Asp-Phe.

OSO„Η OAc k. H-Pyr-Glu-Asp-Tyr Thr-Gly-Try-Met-Asp-Phe,

NH₂ OSO₃H OH

5· H-Pyr-Glu-Asp-Tyr——Thr-Gly-Try-Met-Asp-Phe,

209815/1^8 F