DE1212528B - Verfahren zur Herstellung von delta 1,4,6-16-Methylen-3, 20-diketo-steroiden - Google Patents

Description

BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND

DEUTSCHES

PATENTAMT

AUSLEGESCHRIFT

Int. α.:

C07c

Deutsche Kl.: 12 ο-25/05

Nummer: 1212 528

Aktenzeichen: M 50922IV b/12 ο

Anmeldetag: 18. November 1961

Auslegetag: 17. März 1966

Es wurde gefunden, daß ungesättigte 16-Methylen-3,20-diketo-steroide der allgemeinen Formel IV

CH₂Y

W = H oder CH₃,
X = αϋ,βΟΈΙ oder = O,
Y = eine freie oder veresterte Hydroxygruppe,

hervorragende corticoide Eigenschaften besitzen. Diese Substanzen wirken überraschenderweise stärker antiphlogistisch als die entsprechenden, nur in 4(5)- bzw. in 1(2)- und 4(5)-Stellung ungesättigten 16-Methylensteroide und besitzen nicht oder nur in untergeordnetem Maße die unerwünschten Nebenwirkungen (z. B. verstärkte metabole Einwirkungen, stärkere Natriumretention) des als antiphlogistisch hochwirksam bekannten Dexamethasons.

Nach der Erfindung werden die neuen A ^1>4>e-16-Methylen~3,20-diketo-steroide der allgemeinen Formel IV nach dem im Reaktionsschema dargestellten Verfahren hergestellt.

Gegenstand der Erfindung ist dementsprechend ein Verfahren zur Herstellung von Zl¹'^4>e-16-Methylen-3-keto-steroiden der allgemeinen Formel IV, welches darin besteht, daß man in an sich bekannter Weise a) ein ^-^-lo^lTa-Oxido-lo/^methyl-steroid der allgemeinen Formel I mit mindestens katalytischen Mengen einer Säure in Gegenwart eines inerten, praktisch wasserfreien organischen Lösungsmittels zweckmäßig in der Siedehitze behandelt oder b) in 21-Stellung eines Zl¹-⁴'⁶-21-Desoxysteroids der allgemeinen Formel II eine O-Acylgruppe einführt oder c) ein in 1(2)-Stellung gesättigtes Λ⁴-"-Steroid der allgemeinen Formel III mit 2,3-Dichlor-5,6-dicyanp-benzochinon oder mit in 1(2)-Stellung dehydrierend wirkenden Mikroorganismen behandelt und daß man gegebenenfalls nach an sich bekannten Methoden eine in 21-Stellung der so erhaltenen Produkte der FormellV vorhandene Estergruppe alkalisch verseift oder einen Verfahren zur Herstellung von
^i,4,6_i6-Methylen-3,20-diketo-steroiden

Anmelder:

E. Merck Aktiengesellschaft,

Darmstadt, Frankfurter Str. 250

Als Erfinder benannt:
Dipl.-Chem. Dr. Fritz von Werder,
Dipl.-Chem. Dr. Klaus Brückner,
Dr. Harald Metz, Darmstadt

etwa erhaltenen 21-Alkohol in einen entsprechenden

ao Ester bzw. in ein Salz eines solchen überführt.

Für die Aufspaltung des Epoxyds der Formel I werden nach dem Verfahren der Erfindung mindestens katalytische Mengen einer Säure verwendet. Als Säure kommen vorzugsweise Mineralsäuren, wie Schwefelsäure, Salzsäure, Bromwasserstoffsäure oder Jodwasserstoffsäure, in Frage. Sehr gut geeignet sind auch Alkyl- oder Arylsulfonsäuren, insbesondere p-Toluolsulfonsäure. Die Säuren können sowohl in sehr geringen, z. B. katalytisch wirkenden Mengen als auch in molaren oder überschüssigen Mengen angewendet werden. Die Umsetzung wird in Gegenwart eines inerten, praktisch wasserfreien organischen Lösungsmittels, zweckmäßig bei dessen Rückflußtemperatur, durchgeführt. Als Lösungsmittel sind

z. B. verwendbar: Alkohole, wie Methanol, Äthanol, Propanol, Isopropanol, Butanol, tert.Butanol oder Amylalkohol; Kohlenwasserstoffe, wie Benzol oder Toluol; chlorierte Kohlenwasserstoffe, wie Tetrachlorkohlenstoff, Chloroform, Methylenchlorid oder Dichloräthan; ferner Äther, wie Dimethyläther oder Diäthyläther; Ester, wie Essigsäuremethyl- oder -äthylester; Ketone, wie Aceton oder Methyläthylketon; aber auch Eisessig und Acetanhydrid. Grundsätzlich sind alle diejenigen Lösungsmittel verwendbar, die mit dem als Ausgangsmaterial eingesetzten 16«,17(x-Oxido-16j9-methyl-steroid sowie dem entstehenden 16-Metnylen-17«-hydroxy-steroid nicht reagieren und das Ausgangssteroid wenigstens in geringem Maße lösen.

Nach dem Verfahren der Erfindung ist es ferner möglich, in ein 21-Desoxy-steroid der Formel II nach bekannten und üblichen Methoden in 21-Stellung

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eine O-Acylgruppe einzuführen. Diese Umsetzung Derivate die 21-Hydroxygruppe mit Dicarbonsäuren,

kann beispielsweise so vorgenommen werden, daß Amino- oder Alkylaminocarbonsäuren oder mit

man das Ausgangssteroid der Formel II zunächst mit Phosphor- oder Schwefelsäure verestern. Auf diese

einer alkalischen Jodlösung behandelt und danach Art lassen sich z. B. herstellen: Succinate, Oxalate

das erhaltene 21-Jodsteroid mit einem Alkaliacylat, 5 oder die Säureadditionssalze von Aminocarbonsaure-

vorzugsweise mit Kaliumacetat, umsetzt. Als Lösungs- estern,, wie z. B. von Asparaginsäure- oder Diäthyl··

mittel für die Jodierungsreaktion wird bevorzugt aminoessigsäureestern.

Tetrahydrofuran—Methanol benutzt, die Acylierungs- Ferner kann nach dem Verfahren der Erfindung

reaktion wird bevorzugt in Aceton ausgeführt. ' eine in 21-Stellung . der Pr'odukte der Formel IV

Für die 1(2)-Dehydrierung eines Steroids der io vorhandene Estergruppe nach bekannten und üblichen Formel III können Mikroorganismen verwendet wer- Methoden alkalisch verseift werden. Als Verseifungsden, die z. B. den folgenden Gattungen angehören: mittel kommen z. B. wäßrige Lösungen von Natrium-Alternaria, Didymella, Calonectria, Colletotrichum, hydrogencarbonat, Natriumcarbonat oder Natrium-Cylindrocarpon, Fusarium, Ophiobolus, Septomyxa, hydroxyd in Frage. Vorteilhaft arbeitet man dabei Vermicularia; Acetobacter, Aerobacter, Alcaligenes, 15 unter Ausschluß von Sauerstoff.
Bacillus (besonders Bacillus sphaericus),. .Coryne- Als Endprodukte werden dementsprechend die bacterium (besonders - Carynebacterium simplex), folgenden erhalten: lö-Methylen-l^o-pregnatrien-ErysipelothrixV Listeria, Micromonospora, Myco- ll^,17a,21-triol-3,20-dion; 16-Methylen-l,4,6-pregnabacterium, Nocardia, Protaminobacter, Pseudomonas, trien-17a,21-diol-3,ll,20-trion; 6-Methyl-16-methylen-Streptomyces. Die Fermentation benötigt etwa 4 bis 20 l,4,6-pregnatrien-ll/^7«,21-triol-3,20-.dion;6-Methyl-40 Stunden, je nachdem welcher Mikroorganismus lo-methylen-lAo-pregnatrien-na^l-diol^ll^O-triverwendet wird. Besonders geeignet sind Kulturen on sowie 21-Ester derselben.

von Bacillus sphaericus var. fusiformis und Coryne- In der USA.-Patentschrift 2 865 808 werden bereits

bacterium simplex. Zur Dehydrierung wird das Aus- Endprodukte der Formel IV, worin W Wasserstoff

gangsmaterial einer Submerskultur des betreffenden 25 bedeutet, formelmäßig beschrieben. Nach der ge-

Mirkroorganismus zugesetzt, die in einer geeigneten - nannten USA.-Patentschrift wird die l(2)-ständige

Nährlösung bei optimaler Temperatur und starker Doppelbindung der dort beschriebenen 16-Methylen-

Belüftung nach den üblichen Methoden der Fermen- steroide durch Behandlung der zugrunde liegenden in

tationstechnik wäscht. Statt wachsender Kulturen 1,2-Stellung gesättigten 16-Methylen-steroide mit

sind bei sonst gleicher Technik auch Aufschwem- 30 Selendioxyd eingeführt. Nacharbeitungen haben er-

mungen der Mikroorganismen in Pufferlösung brauch- geben, daß dieses Herstellungsverfahren nicht repro-

bar. Die Umsetzung wird chromatographisch verfolgt duzierbar ist. Man erhält bei der Behandlung der

und die Fermentationslösung nach restloser Umsetzung betreffenden 16-Methylen-steroide mit Selendioxyd

des Ausgangsmaterials, z. B. mit Chloroform, extra- lediglich Zersetzungsprodukte. Ferner sind die in der

hiert. 35 USA.-Patentschrift aufgeführten Endprodukte nicht

Nach dem Verfahren der Erfindung kann die durch physikalische Kennzeichen charakterisiert. Die

1(2)-Dehydrierung eines Steroids der Formel III dort beschriebenen, in 1(2)-Stellung dehydrierten

ferner auf chemischem Wege durch" Behandlung mit 16-Methylen-steroide sind daher nicht als bekannte

2,3-Dichlor-5,6-dicyan-p-benzochinon durchgeführt Verbindungen anzusehen.

werden. Dabei arbeitet man zweckmäßigen Gegenwart 40 Die Ausgangssteroide der Formeln I bis III können

eines Lösungsmittels mit einem Siedepunkt von etwa wie folgt hergestellt werden:
30 bis 15O⁰C. Als Lösungsmittel sind z. B. geeignet:

Äthanol, Butanol, tert.Butanol, tertButylessigsäure- _A Verbindungen der Formel I
methylester, Essigsäurebutylester, Dioxan, Eisessig,

Benzol, Tetrahydrofuran oder Aceton. Es ist vorteil- 45 16/? - Methyl - 16a,17« - oxido -1,4,6 - pregnatrien-

haft, dem Reaktionsgemisch geringe Mengen Nitro- ll/3,21-diol-3,20-dion-21-acetat und dessen 6-Methyl-

benzol zuzumischen. Die Reaktionszeiten liegen derivat sind erhältlich aus Hydrocortison-21-acetat

zwischen 5 und 48 Stunden, je nachdem welches bzw. 6«-Methyl-hydrocortison-21-acetat, herstellbar

Lösungsmittel und welches Ausgangssteroid verwendet durch mikrobiologische 11/S-Hydroxylierung von

wird. Zweckmäßigerweise wird die Umsetzung bei der 50 6a-Methyl-cortexolon-acetat (vgl. J. Am. Chem. Soc,

Siedetemperatur des verwendeten Lösungsmittels 81 [1959], S. 3712) durch Überführung in das 3,20-Di-

durchgeführt. semicarbahon, Dehydratisierung in 16,17-Stellung mit

Nach dem Verfahren der Erfindung ist es ferner Eisessig oder Trifluoressigsäure, Abspaltung der möglich, eine in 21-Stellung der Produkte der Formel Schutzgruppen mit Hilfe von Brenztraubensäure zu rV vorhandene Hydroxygruppe nach bekannten und 55 4,16-Pregnadien-ll/?,21-diol-3,20-dion-21-acetat (bzw. üblichen Methoden zu verestern. Als Veresterungs- dessen 6«-Methylderivat),^nachfolgende Dehydrierung mittel sind alle diejenigen Säuren bzw. deren zur in 6(7)-Stellung mit CJilöranil und in 1(2)-Stellung mit Veresterung geeignete Derivate verwendbar, die 2,3-Dichlor-5,6-dicyänbenzochinon oder auf mikrophysiologisch verträgliche Ester ergeben. Zum Beispiel biologischem Wege, Anlagerung von Diazomethan können die folgenden Säuren oder deren zur Ver- 60 in 16,17-Stellüng, Pyrolyse zur 16-Methyl-16-dehydroesterung geeignete Derivate verwendet werden: verbindung und Epoxydierung der 16,17-Doppel-Carbonsäuren, wie Essigsäure, Propionsäure, Butter- bindung mit Wasserstoffperoxid in schwach alkalischer säure, Trimethylessigsäure, Cyclopentylpropionsäure, " "Lösung. Die übrigen Verbindungen der Formell sind Phenylpropionsäure, Phenylessigsäure, Capronsäure, aus den oben genannten erhältlich: Chromsäure-Caprylsäure, Palmitinsäure, Undecylsäure, aber 65 Oxydation führt zu den 11-Keto-, alkalische Verauch Benzoesäure oder Hexahydrobenzoesäure, sowie seifung zu den 21-Hydroxyverbindungen; die übrigen IT alogencarbonsäuren, wie Chloressigsäure. Gegebe- 21-Acylate sind durch Veresterung der letztgenannten nenfalls kann man zwecks Herstellung wasserlöslicher zugänglich.

B. Verbindungen der Formel II

16-Methylen-l,4,6-pregnatrien-llß,17«-diol-3,20-dion und dessen 6-Methylderivat sind herstellbar aus lö-Methylen-lVoc-hydroxy-progesteron (bekannt aus Tetrahedron Letters, Nr. 16, S. 21 [I960]) bzw. aus 6«-Methyl-16-methylen-17«-hydroxy-progesteron (bekannt aus J. Chem. Soc, 1961, S. 2821) durch aufeinanderfolgende Dehydrierungen in 6(7)- und 1(2)-Stellung nach den unter (A.) angegebenen Methoden und mikrobiologische 11/J-Hydroxylierung, z. B. mit Curvularia lunata. Die entsprechenden 11-Ketoverbindungen sind durch anschließende Chromsäureoxydation zugänglich.

C. "Verbindungen der Formel III

16 - Methylen - 4,6 - pregnadien - ΙΙβ,Πα-,21 - triol-3,20-dion-acetat und die entsprechende 11-Ketoverbindung können erhalten werden aus 16-Methylenhydrocortison bzw. -cortison (Tetrahedron Letters, a.a.O.) durch Acetylierung der 21-Hydroxygruppe und 6(7)-Dehydrierung mit Chloranil. Ihre 6-Methylderivate sind herstellbar aus 6«-Methyl~16-methylen-17«-hydroxy-progesteron durch 6(7)-Dehydrierung, 21-Acetoxylierung mit Calciumoxid—Jod sowie Kaliumacetat, mikorbiologische ll/?-Hydroxylierung wie oben und gegebenenfalls Chromsäureoxydation der 11/3-Hydroxy- zur 11-Ketogruppe. Die übrigen Verbindungen der Formel III sind aus den vorstehend genannten erhältlich durch Verseifung zu den 21-Hydroxyverbindungen und gegebenenfalls anschließende Veresterung zu den übrigen 21-Acylaten.

Für die Herstellung der Ausgangssteroide wird im Rahmen der vorliegenden Erfindung kein Schutz begehrt.

Die neuen, verfahrensgemäß erhältichen Verbindungen können im Gemisch mit üblichen Arzneimittelträgern in der Human- oder Veterinärmedizin eingesetzt werden. Als Trägersubstanzen kommen solche organische oder anorganische Stoffe in Frage, die für die parenterale, enterale oder topikale Applikation geeignet sind und die mit den neuen Verbindungen nicht in Reaktion treten, wie beispielsweise Wasser, pflanzliche öle, Polyäthylenglykole, Gelatine, Milchzucker, Stärke, Magnesiumstearat, Talk, Vaseline, Cholesterin usw. Zur parenteralen Applikation dienen insbesondere Lösungen, vorzugsweise ölige oder wäßrige Lösungen, sowie Suspensionen, Emulsionen oder Implantate. Für die enterale Applikation können ferner Tabletten oder Dragees, für die topikale Anwendung Salben oder Cremes, die gegebenenfalls sterilisiert oder mit Hilfsstoffen, wie Konservierungs-, Stabilisierungs- oder Netzmitteln oder Salzen zur Beeinflussung des osmotischen Druckes, oder mit Puffersubstanzen versetzt sind, angewendet werden.

Falls die Verfahrensprodukte in festen Zubereitungsformen appliziert werden, liegt die Einzeldosis zwischen 0,5 und 3 mg. Bei der Verabreichung von Injektionslösungen wendet man Einzeldosen zwischen 5 und 20 mg an.

Beispiel 1

Ein 10-1-Fermeter mit einer Nährlösung aus 0,1 °/₀ Hefeextrakt, die mit Sörensen-Phosphatpuffer auf pH 6,8 gepuffert ist, wird mit 500 ml einer Schüttelkultur von Corynebacterium simplex beimpft. Die Kultur wird bei 28 ⁰C wachsen gelassen. Nach 16 Stunden erhält die Fermentationslösung einen Zusatz von 5 g 16-Methylen-4,6-pregnadien-ll^,17«, 21-triol-3,20-dion in 200 ml Methanol. Dünnschichtchromatographisch ist nach 14 Stunden neben dem Umsetzungsprodukt kein Ausgangsmaterial mehr nachzuweisen. Die Kulturlösung wird dreimal mit je 101 Chloroform ausgeschüttelt. Die vereinigten Extrakte werden eingeengt und der Rückstand aus Essigester umkristallisiert. Man erhält reines 16-Methylen-1,4,6-ρ^η3ίπβη-11β,17«,21-ίπο1~3,20-αΐοη. /1,^220,5 253, 298 πιμ, ε = 13600, 10400, 13400; F. 223° C; [a]_D = —4° (Dipxan).

Beispiel 2

Ein 10-1-Fermenter mit einer Nährlösung aus l^D/„ Hefeextrakt, pH 6,5, wird mit 500 ml einer Schüttelkultur von Bacillus sphaericus beimpft. Die Kultur wird bei 28° C wachsen gelassen. Nach 8 Stunden erhält die Fermentationslösung einen Zusatz von 5 g

oder dessen 21-Acetat in 200 ml Methanol. Die Umsetzung wird dünnschichtchromatographisch überwacht und ist nach 22 Stunden beendet. Die Kulturlösung wird dreimal mit je 8 1 Chloroform ausgeschüttelt und der aus dem eingeengten Extrakt erhaltene Rückstand aus Essigester umkristallisiert. Man erhält reines 16-Methylen-l,4,6-pregnatrien-17oc,21-diol-3,ll, 20-trion. X_max 221, 254, 298 πιμ, ε = 11500, 10500, 13400; F. 219 bis 223⁰C; [<x]_D = +163° (Chloroform).

Beispiel 3

In einem Kleinfermenter werden 151 einer Nährlösung aus 1 °/₀ Hefeextrakt, pH 6,8, mit 0,51 Schüttelkultur von Bacillus sphaericus (Sammlung E. Merck Nr. 1001) beimpft. Die Kultur wäscht unter ständigem Rühren und starker Belüftung bei 28° C und erhält nach etwa 10 Stunden einen Zusatz von in 300 ml Methanol gelöstem 7,5 g 6-Methyl-16-methylen-4,6-pregnadien-17a,21-diol-3,ll,20-trion-21-acetat. Die Dehydrierung wird papierchromatographisch verfolgt (Lösungsmittelsystem B₄ nach Bush, aufsteigend) und ist nach 28 bis 36 Stunden vollständig. Die Kulturlösung wird derimal mit dem gleichen Volumen Chloroform extrahiert, die vereinigten Chloroformlösungen werden eingedampft. Aus Aceton kristallisiert das 6-Me&yl-16-methylen-l,4,6-pregnatrien-17«,21-diol-3,ll,20-trion. X_max 227, 254, 304 χημ.

Beispiel4

In einem Kleinfermenter von 201 Inhalt werden 151 einer Nährlösung aus 0,1 °/₀ Hefeextrakt, pH 6,8, mit 1,51 Schüttelkultur von Corynebacterium simplex (Sammlung E. Merck Nr. 1002) beimpft. Die Kultur wächst unter ständigem Rühren und starker Belüftung bei 28° C und erhält nach etwa 4 bis 8 Stunden einen Zusatz von in 300 ml Methanol gelösten 7,5 g

3,20-dion. Die Dehydrierung wird papierchromatographisch verfolgt und ist im allgemeinen nach 14 Stunden beendet. Die Kulturlösung wird dreimal mit dem gleichen Volumen Chloroform extrahiert, die vereinigten Chloroformlösungen werden eingedampft. Aus Aceton kristallisiert das 6-Methyl-lo-methylenl,4,6-pregnatrien-ll/U7a,21-triol-3,20-dion. l_max 227, 254, 304 πιμ, ε = 14580, 9840,11940; F. 235bis 236°C; [<x]d = —6,6° (Dioxan).

7 8

Beispiel5 die vereinigten Ätherauszüge werden mit Wasser

gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und bei

5 g lö-Methylen-^o-pregnadien-ll/SjlTa^l-triol- Raumtemperatur im Vakuum abgezogen. Die rohe 3,20-dion-21-acetat werden zusammen mit 4,8 g 21-Jod-Verbindung wird in 300 ml Aceton mit 13,5.g 2,3-Dichlor-5,6-dicyan-p-benzochinon in 75 ml Dioxan ,^5 wasserfreiem Kaliumacetat 24 Stunden am Rückfluß 20 Stunden unter Rückfluß gekocht Danach wird das erhitzt. Anschließend wird die Reaktionslösung auf Reaktionsgemisch mit Chloroform verdünnt, nach- ein kleines Volumen eingedampft und mit Wasser eiander mit Wasser, verdünnter Natriumhydroxyd- versetzt. Das ausgeschiedene 6-Methyl-16-methylenlösung und wieder mit Wasser ausgeschüttelt, die lAo-pregnatrien-U&na^l-triol-S^O-dion^l-acetat Chloroformlösung getrocknet und eingeengt. Aus dem 10 wird abgesaugt und aus Aceton oder Methanol umRückstand kristallisiert das 16-Methylen-l,4,6-pre- kristallisiert. l_max 227, 254,. 304 ηιμ, ε = 14600, 9800, ■gnatrien-ll^na^l-triol-S^O-dion^l-acetat, das sich 12000; F. 226 bis 229°C; [<x]_D = +21,3° (Dioxan).;
durch Umkristallisieren aus Methanol reinigen läßt.

λιηαχ 221, 254, 298πιμ, ε = 15820, 11550, 14750; Beispiel9

F. 223°C; [α]_ΰ = +33° (Dioxan). 15

Eine Lösung von 2 g 16jfi-Methyl7l6«,17a-oxido-

Beispiel6 lAo-pregnatrien-ll^l-diol-S^O-dion^l-acetat in

45 ml wasserfreiem Essigester, die 28 mg Salzsäure

3,5 g o-Methyl-lo-methylen^o-pregnadien-ll/U?«, enthalten, wird 2 Stunden am Rückfluß erhitzt und 21-triol-3,20-dion-21-acetat werden in 70 ml Dioxan 20 dann zur Trockne eingedampft. Der Rückstand von gelöst und mit 3,5 g 2,3-Dichlor-5,6-dicyan-p-benzo- rohem lo-Methylen-lAö-pregnatrien-llß^a^l-triolchinon versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 6 Stunden 3,20-dion-21-acetat wird aus Methanol unikristallisiert, unter Rückfluß gekocht, dann mit Chloroform ver- X_max 221, 254, 298 ηιμ, ε = 21820, 11550, 14750; dünnt und nacheinander mit 30 ml ln-Natrium- F. 223° C; [<x]_D = +33° (Dioxan).
hydroxydlösung und mehrfach mit Wasser gewaschen. 25
Die Lösung wird über Natriumsulfat getrocknet und

eingedampft. Der aus 6-Methyl-16-methylen-l,4,6-pre- B e i s ρ i e 1 10

gnatrien-llßna^l-triol-S^O-dion^l-acetat bestehende Rückstand wird aus Aceton—Äther um- Eine Lösung von 9,3 g Ιόβ-ΜβίΙ^Ι-Ιόα,Πα-οχίαο-kristallisiert. l_max 227, 254, 304 πιμ, ε = 14600, 9800, ₃₀ lAo-pregnatrien^l-ol-Sjll^O-trion-acetat in 350 ml 12000; F. 226 bis 229⁰C; [<x]d = +21,3° (Dioxan). wasserfreiem Benzol wird nach Zusatz von 640 mg

p-Toluolsulf onsäure 4 Stunden unter Rückfluß ge-

Beispiel7 kocht. Nach dem Abkühlen wird die benzolische

Lösung zuerst mit 5°/_oiger Natriumhydrogencarbonat-

Eine Suspension von 6,5 g 16-Methylen-l,4,6-pre- 35 lösung, dann mit Wasser gewaschen, getrocknet und gnatrien-ll/?,17«-diol-3,20-dion in 98 ml Tetrahydro- eingedampft. Das 16-Methylen-1,4,6-pregnatrienfuran und 59 ml Methanol wird innerhalb 3 Stunden 17«,21-diol-3,ll,20-trion-21-acetat wird aus Methanol portionsweise mit 9,8 g Jod und 9,8 g Calciumoxxd umkristallisiert. X_max 221, 254, 293 ηιμ, ε = 10830, versetzt. Danach wird das Reaktionsgemisch in 21 10500; 13950; [α]_ΰ =+184° (Chloroform); F. 226 Eiswasser, das 32 ml Eisessig enthält, eingegossen, 40 bis 227° C, ■

der Niederschlag abgesaugt und getrocknet.

Die so erhaltenen 11 g rohes 21-Jodid weredn in Beispiel 11

550 ml Aceton gelöst und zusammen mit 33 g Kaliumacetat 20 Stunden unter Rückfluß" gekocht. Danach 1 g des nach Beispiel 1 erhaltenen 16-Methylenwird das Aceton zum Teil unter vermindertem Druck 45 l,4,6-pregnatrien-lljS,17a,21-triol-3,20-dion wird in abgezogen, das Gemisch mit Wasser verdünnt, der 5 ml Pyridin und 5 ml Essigsäureanhydrid eine Nacht Niederschlag abgesaugt. Er wird noch feucht in einem bei Raumtemperatur stehengelassen. Danach wird das Gemisch aus 130 ml Methanol, 3,25 g Natrium- Reaktionsgemisch in Wasser eingegossen, der Niederpyrosulfit und 48,5 ml Wasser 2 Stunden unter schalg abgesaugt, mit Wasser gewaschen und geRückfluß gekocht. Nach Abkühlen wird das Re- 50 trocknet. Das erhaltene rohe 16-Methylen-l,4,6-preaktionsgemisch mit Wasser verdünnt, der entstandene -gnatrien-ll_J8,17«,21-triol-3,20-dion-21-acetät wird Niederschlag abgesaugt und getrocknet. Durch Um- durch Umkristallisation aus Methanol gereinigt. λ_ΜαΆί kristallisieren aus Aceton—Äther erhält man das 221, 254, 298 ηιμ, ε = 15820,11550,14750; F. 223°C; 16 - Methylen -1,4,6 - pregnatrien - 1I₁S₃IT'«,21 - triol- [<x\_D = +33° (Dioxan).
3,20-dion-21-acetat. l_max 221, 254, 298 ηιμ, ε = 15820, 55
11550, 14750; F.223°C; [a.]_D = +33° (Dioxan).,-"-" Beispiel 12

B e i s ρ i e 1 8 "2g des nach Beispiel 1 erhaltenen 16-Methylen-

l,4,6-pregnatrien-ll/3,17Ä,21-triol-3,20-dions werden

. Zu einer Lösung von 4,6g o-Methyl-lo-methylen- 60 zusammen mit 2g Bernsteinsäureanhydrid in 20ml l,4,6-pregnatrien-ll/3,17a-diol-3,20-dion in einem Ge- trocknem Pyridin über Nacht stehengelassen. Damisch aus 10 ml Tetrahydrofuran und 12 ml Methanol nach läßt man das Reaktionsgemisch in verdünnte werden bei 0⁰C unter Rühren 7,3 g Jod gegeben. Schwefelsäure einlaufen, der Niederschlag wird ab-Dann wird innerhalb einer Stunde tropfenweise eine gesaugt und gut mit Wasser gewaschen. Nach dem 10%ige wäßrige Natriumhydroxydlösung zugegeben, 65 Trocknen wir durch Kristallisation aus Essigester das bis die Jodfarbe verschwunden ist. Nach einer weiteren reine 16-Methylen-l,4,6-pregnatrien-ll/?,17a:,21-triol-Stunde wird in Wasser eingegossen, der harzig aus- 3,20-dion-21-hemisuccinat erhalten. Ä_max 221, 254, fallende Niederschalg wird in Äther aufgenommen, 298 πιμ. '

ι 212 528
9 10

Beispiel 13 das 16-Methylen-lA6«pregöatrien-llj8,17«,21-triol··

3,20-dion in farblosen Kristallen vom Schmelzpunkt

5 g des nach Beispiel 1 erhaltenen 16-Methylen- 222 bis 223°C und [oc]_D in Dioxan = —4° anfällt;

l,4,6-pregnatrien-ll/3,17oi,21-triol-3,20-diöns werden X_mhx 220,5, 253, 298 πιμ, ε = 13600, 10400,13400.

in 120 ml absolutem Dioxan gelöst, mit 1,55 ml 5 . ■ \ -xc,

Chloracetylchlorid und 1,5ml Pyridin versetzt und Beispiel 10

über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. 8,4 g des nach Beispiel 10 erhaltenen 16-Methylen-

Danach wird das Reaktionsgemisch in Wasser ein- l,4,6-pregriatrien-17a,21-diol-3,ll,20-trion-21-acetats

gegossen, der Niederschlag abgesaugt, mit Wasser werden in 230 ml Methanol gelöst. Dazu werden 2,2 g

gewaschen und getrocknet. Das so erhaltene rohe io Natriumhydrogencarbonat in 17 ml Wasser zugefügt

16 - Methylen -1,4,6 - pregnatrien -11/?,17«,21 - triol- und das Gemisch 10 Minuten unter Rückfluß gekocht. 3,20-dion-21-chloracetat wird in 400 ml Aceton gelöst Danach wird es in Wasser eingegossen und 5mal mit je und mit 55 ml Diäthylamin und 4 ml Wasser über 500 ml Chloroform ausgeschüttelt. Die Chloroform-Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Das lösung wird mit Wasser gewaschen, mit Natriumsulfat Reaktionsgemisch wird danach im Vakuum bei 20° C 15 getrocknet, filtriert und eingeengt. Aus Scetoü kristallieingeengt. Dabei kristallisiert das 16-Methylen-1,4, siert das 16-Methylen-l,4,6-pregnatrien-17a,21-diol-6-pregnatrien-ll^,17a,21-triol-3,20-dion-21-diäthyl-3,11,20-trion. X_max 221, 254, 298 ηιμ, ε = 11500, aminoacetat aus. l_max 221, 253, 298 ηιμ. 10500, 13400; F. 219 bis 223°C; [ot]_D = +163°

0,7 g dieses lo-Methylen-lAo-pregnatrien-ll/?,!?«, (Chloroform).

21-triol-3,20-dion-21-diäthylaminoacetats werden in 20 Zum Nachweis der Überlegenheit der Verfahrens-

17 ml absolutem Tetrahydrofuran gelöst und mit 15 ml produkte wurde deren antiphlogistische Wirkung nach einer Chlorwasserstofflösung in Chloroform versetzt. der weiter unten beschriebenen Methodik im Vergleich Dabei fällt das lo-Methylen-lAo-pregnatrien-ll/?,!?«;, zu Prednisolon und 16-Methylen-prednisolon unter-21-triol-3,20-dion-21-diäthylaminoacetat-hydrochlorid sucht. Dabei wurden folgende Ergebnisse erhalten: aus, das mit Tetrahydrofuran gewaschen und an- 25

schließend getrocknet wird. Antiphlogistische

Wirkung bezogen auf Verbindung Prednisolon = 1

Beispiel 14 Prednisolon 1

10 g des nach Beispiel 1 erhaltenen 16-Methylen- 3° 16-Methylen-prednisolon 4,5

l,4,6-pregnatrien-ll/?,17«,21-triol-3,20-dions werden 6-Dehydro-16-methylen-predmsolon 8,5

in 20 ecm absolutem Pyridin mit 9,3 g Phosphoryl- 6-Dehydro-6-methyl-16-methylen-

dimorpholidchlorid 10 Tage verschlossen stehen- prednisolon 37

gelassen. Man gießt dann den Ansatz in die berechnete

Menge verdünnte Schwefelsäure und extrahiert das 35 Es zeigt sich also, daß die erfindungsgemäß er-

21-Dimorpholidphosphat mit Chloroform. haltenen Verbindungen 8,5- bzw. 37mal so wirksam

Der Chloroformrückstand wird in 40 ml Äthanol sind wie Prednisolon und 2- bzw. 8mal so wirksam

gelöst, mit Wasser bis zur ersten bleibenden Trübung wie 16-Methylen-prednisolon.

versetzt und nach Zusatz von 110 g Kationen- Die antiphlogistische Wirkung wurde im Granulom-

austauscherharz, bekannt unter dem Handelsnamen 40 beuteltest an Ratten nach der in Archives Inter-

Amberlite IR-120, 36 Stunden gerührt. Man filtriert nationales de Pharmacodynamie et de Therapie,

ab, wäscht den Austauscher mit Äthanol, neutralisiert Bd. Ill, S. 420 bis 436 (1957), beschriebenen Methode

das Filtrat mit Natronlauge und engt unter ver- bestimmt.

mindertem Druck stark ein. Man läßt abkühlen, Für die Versuche wurden je Präparat und Dosis

extrahiert mit Chloroform alle Neutralteile, säuert 45 Gruppen von je zehn Tieren mit einem Körpergewicht

dann die wäßrige Phase mit verdünnterSchwefelsäure zwischen 100 und 160 g eingesetzt. Die Tiere wurden

an und extrahiert mit n-Butanol. Der Extrakt wird mit am Rücken mit einer Haarschneidemaschine geschoren.

Natriumsulfat getrocknet, mit Natriummethylat neu- Dann wurde durch subkutane Injektion von 25 ml

tralisiert und etwas eingeengt. Beim Abkühlen Luft eine Luftblase gesetzt und in diese, ohne die

kristallisiert das Natriumsalz aus. Es wird abfiltriert, 5° Injektionskanüle herauszuziehen, 0,5 ml einer 0,5⁰/₀igen

heiß mit Methanol extrahiert, der Extrakt mit Butanol Lösung von Krotonöl in Sesamöl injiziert. Am 4. Tage

versetzt und stark eingeengt, wobei das reine 16-Me- nach dem Setzen der Luftblase wurden nochmals

thylen-lAö-pregnatrien-ll^na^l-triol-S^O-dion- 0,5 ml einer 3°/_oigen Lösung von Krotonöl in Sesamöl

21-orthophosphat-Natrium ausfällt. injiziert. Die Füllungsgrade der Beutel an Exsudat

55 wurden durch Transillumination mit einer Mikro-

Beispiel 15 skopierleuchte erfaßt. Am 10. Tage nach der zweiten

Krotonölinjektion wurden die Tiere getötet.

5,8 g des nach Beispiel 5 erhaltenen 16-Methylen- Die Versuchspräparate wurden oral verabreicht,

l,4,6-pregnatrien-ll^,17a,21-triol-3,20-dion-21-acetats beginnend mit dem Tage der zweiten Injektion von

werden in 160 ml Methanol gelöst und nach Zusatz 60 Krotonöl. Bei oraler Applikation erhielten die Ratten

einer heißen Lösung von 1,28 g Natriumhydrogen- die Versuchspräparate 10 Tage lang in Form einer

carbonat in 19 ml Wasser 14 Minuten am Rückfluß 2,5⁹/₀igen Suspension in Sesamöl.

gekocht. Das abgekühlte Gemisch wird in 900 ml Die prozentuale Abschwächung der Exsudatmengen

Wasser, dem 3 ml Eisessig zugesetzt sind, eingerührt gegenüber den Kontrollen wurde statistisch nach dem

und mit Chloroform extrahiert. Die vereinigten 65 von Llaurado in Acta Endocrinologica, Bd. 38,

Chloroformauszüge werden mit Wasser gewaschen S. 151 (1961), beschriebenen Verfahren ausgewertet,

und unter vermindertem Druck eingeengt. Der wobei sich die angegebenen Wirkungsrelationen

Rückstand wird aus Methanol umkristallisiert, wobei ergaben.

: 609 538/430

Claims (1)

1. Patentanspruch:

   Verfahren zur Herstellung von z!¹-⁴'⁶-16-Methylen-3,20-diketo-steroiden der allgemeinenFormel

   CH₂Y

   W = H oder CH₃,
   X = κΉ,,βΟΉ. oder = 0,
   Y = eine freie oder veresterte Hydroxygruppe,

   .dadurch gekennzeichnet, daß man in ■an sich bekannter Weise a) ein entsprechend

   20

   substituiertes A *· *■⁶ -16«,17«- Oxido -16/3-methylsteroid mit mindestens katalytischen Mengen einer Säure in Gegenwart eines inerten, praktisch wasserfreien organischen Lösungsmittels, zweckmäßig in der Siedehitze, behandelt oder b) in 21-Stellung des zugrunde hegenden Zl¹'^4>6-21-Desoxy-steroids eine O-Acylgruppe einführt oder c) ein entsprechend substituiertes in 1(2)-Stellung gesättigtes /I⁴·'-Steroid mit 2,3-Dichlor-5,6-dicyan-p-benzochinon , oder mit in 1(2)-Stellung dehydrierend wirkenden Mikroorganismen behandelt und daß man. gegebenenfalls nach an sich bekannten Methoden eine in 21-Stellung der so. erhaltenen Produkte, vorhandene Estergruppe alkalisch verseift oder einen.etwa erhaltenen 21-Alkohol in einen entsprechenden Ester bzw. in ein Salz eines solchen überführt. , ■ :

   . In Betracht gezogene Druckschriften:
   Tetrahedron, Letters, 1960, Nr. 16, S. 21 bis 32;
   Journ. Am. Chem. Soc, Bd. 80 (1958), S. 250;
   Proc. Chem. Soc, 1960, S. 14. . ,

   Hierzu 1 Blatt Zeichnungen

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