DE1203909B

DE1203909B - Verfahren zum Stabilisieren waessriger Dispersionen von Lipoid-Thromboplastin

Info

Publication number: DE1203909B
Application number: DEC31695A
Authority: DE
Inventors: Takao Anraku; Renpei Nagashima; Toshio Kobayashi
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1962-12-20
Filing date: 1963-12-17
Publication date: 1965-10-28
Also published as: BE641559A; FR3104M; GB1018647A; CH465139A; NL302091A; US3279993A

Description

BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND DEUTSCHES Ä·^ PATENTAMT Int. α.:

A61k

AUSLEGESCHRIFT

Deutsche Kl.: 30 h-2/30

Nummer: 1203 909

Aktenzeichen: C 31695IV a/30 h

Anmeldetag: 17. Dezember 1963

^uslegetag: 28. Oktober 1965

Die vorliegende Erfindung betrifft eine Methode zum Stabilisieren von wäßrigen Dispersionen von Lipoid-Thromboplastin, die blutstillende Wirkung haben.

Bisher wurde zur Verhütung des Ranzigwerdens von fetthaltigen Substanzen wie Phospholipoid ein lipoidlösliches Antioxydans wie beispielsweise Butylhydroxyanisol (BHA), Nordihydroguaiaretinsäure (NDGA), Äthylprotocatechuat, a-Tocopherol, zu den fetthaltigen Substanzen hinzugegeben. Jedoch bringt die Zugabe solcher Antioxydantien zu der wäßrigen Dispersion von Phospholipoid, Schwierigkeiten mit sich, weil diese Antioxydantien lipoidlöslich, jedoch wasserunlöslich sind. Ferner sind die meisten dieser Antioxydantien nicht gut geeignet, weil sie die Neigung haben, beim Stehen am Licht eine rötliche Färbung zu entwickeln, sogar in den wäßrigen Lösungen, in denen nur ganz geringe Mengen gelöst enthalten sind.

Es ist auch bekannt, hämostatische Zubereitungen dadurch zu stabilisieren, daß man ihnen Ascorbinsäure zufügt. Die hämostatische Wirksamkeit der Zubereitungen nimmt nicht so sehr ab, selbst dann nicht, wenn diese bei Zimmertemperatur stehengelassen werden. Jedoch kann es geschehen, daß die Ascorbinsäure ihrerseits oxydiert und dann eine gelbliche Substanz bildet, wodurch die Dispersion ebenfalls gelblich wird. Es wurde festgestellt, daß insbesondere dann, wenn verschiedene Substanzen wie Aminosäuren in der Dispersion mitenthalten sind, die Verfärbung nicht verhütet werden kann.

Der vorliegenden Erfindung liegt demgemäß die Aufgabe zugrunde, eine stabile wäßrige Dispersion von hämostatischen Phospholipoiden zu schaffen, die lange Zeit bei Zimmertemperaturen gehalten werden kann, ohne daß ihre hämostatische Wirksamkeit abnimmt und ohne daß Verfärbung auftritt, auch dann nicht, wenn — falls gewünscht — verschiedene andere Substanzen, wie beispielsweise Aminosäuren, anwesend sind, und die sowohl intravenös als auch intramuskulär angewendet werden können.

Diese Aufgabe wurde erfindungsgemäß gelöst durch ein Verfahren zum Stabilisieren von Phospholipoiden, die hämostatische Wirkung haben, das dadurch gekennzeichnet ist, daß als Stabilisierungsmittel zu einer wäßrigen Dispersion von Phospholipoid eines oder mehrere wasserlösliche reduzierend wirkende Mittel, die ein oder mehrere Schwefelatome im Molekül enthalten, zugegeben werden.

Als solche reduzierend wirkenden- Mittel können beispielsweise Sulfite, Bisulfite, Meta-bisulfite, Thiosulfate, Sulfoxylate, a-Monothioglycerin verwendet werden.

Als wäßrige Dispersion von Phospholipoid mit Verfahren zum Stabilisieren wäßriger
Dispersionen von Lipoid-Thromboplastin

Anmelder:

Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha, Tokio

Vertreter:

Dipl.-Ing. R. H. Bahr und Dipl.-Phys. E. Betzier, Patentanwälte, Herne, Freiligrathstr. 19

Als Erfinder benannt:
Takao Anraku, Saitamaken;
Renpei Nagashima, Chiba-ken;
Toshio Kobayashi, Tokio (Japan)

Beanspruchte Priorität:

Japan vom 20. Dezember 1962 (56 118)

hämostatischer Wirkung im Sinne der vorliegenden Erfindung ist eine solche zu verstehen, wie sie durch Dispergieren von Phospholipoid mit hämostatischer Wirkung, repräsentiert durch Lipoid-Thromboplastin in Wasser oder Natriumchlorid, Aminosäure, Vitamin od. dgl. enthaltendem Wasser erhalten wird.

Die erfindungsgemäß als Stabilisierungsmittel verwendeten, in Wasser löslichen reduzierenden Mittel mit einem oder mehreren Schwefelatomen im Molekül und deren stabilisierende Wirkung werden nachstehend genauer beschrieben. Zunächst seien als speziell verwendbare Beispiele eines solchen Stabilisierungsmittels folgende genannt: Natriumsulfit (Na₂SO₃), Natriumbisulfit (NaHSO₃), Kaliummetabisulfit (K₂S₂O₅), Natriumthiosulfat (Na₂S₂O₃), Rongalit (HOH₂C · SO₂Na-2 H₂O), «-Monothioglycerin

(HSCH₂ · CH(OH) — CH₂OH).

Alle diese Stabilisierungsmittel nehmen, wenn man eines oder mehrere von ihnen zu der wäßrigen Dispersion von Phospholipoid mit hämostatischer Wirkung hinzugibt, den im Wasser gelösten Sauerstoff auf und werden ihrerseits oxydiert, wobei die hämostatischen Substanzen vor Autooxydation und durch Sauerstoff verursachte Polymerisation bewahrt werden.

Es ist beim erfindungsgemäßen Verfahren besonders vorteilhaft, ein inertes Gas, wie Stickstoff, in das

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Wasser einzuführen, wenn die hämostatische Substanz im Wasser dispergiert wird. Dadurch ist es möglich, den im Wasser enthaltenen Sauerstoff durch inertes Gas zu ersetzen, wodurch man verhütet, daß die hämostatische Substanz in Kontakt kommt mit Sauerstoff. Man erreicht dadurch, daß die Menge an Stabilisierungsmittel, die man verwenden muß, gering gehalten wird.

Das erfindungsgemäße Verfahren macht es möglich, ein hämostatisches Mittel zu erhalten, dessen Wirksamkeit nicht erniedrigt ist, das keine Verfärbung zeigt und das lange Zeit bei Zimmertemperatur aufbewahrt werden kann, auch dann, wenn verschiedene Substanzen, wie eingebaute Aminosäure, anwesend sind.

Als Aminosäure kann beispielsweise ε-Aminocapronsäure, die bekannterweise gebräuchlich ist als antifibrinolytisch.es Mittel, in der hämostatischen Substanz eingebaut sein. Ferner kann, falls gewünscht, die erfindungsgemäß hergestellte hämostatische Zubereitung auf einen pH-Wert von 6 bis 8 eingestellt werden, so daß sie intravenös und intramuskulär angewendet werden kann.

Der Verfärbungsgrad von erfindungsgemäß stabilisierten hämostatischen Zubereitungen, in frisch bereitetem Zustand und nach Stehenlassen unter verschiedenen ungünstigen Bedingungen, wird nachstehend veranschaulicht und mit bisher bekannten Zubereitungen verglichen.

Vergleich des Grades der Verfärbung auf Grund des relativen Weißwertes

Aufbewahrungsbedingungen

Stabilisierungsarten
C I D

Frisch zubereitet

Nach Stehenlassen bei 100°C/10 Stunden

Nach Stehenlassen bei 100°C/l Woche

Nach Stehenlassen über 1 Woche unter Einwirkung von ultravioletten Strahlen

80,5
39,4
38,9

63,3

82,3
45,7
46,2

68,9

100,0

108,3

87,7

105,0

88,9
61,6
67,7

99,2
96,7
82,3

87,7 I 94,1

99,8

102,3

90,6

95,4

Bemerkungen

A. Kein Zusatz, \

B. Zusatz von Ascorbinsäure J

C. Zusatz von Kaliummetabisulfit

D. Zusatz von Alphamonothioglycerin

E. Zusatz von Bisulfit

F. Zusatz von Rongalit

bisher bekannte
Verfahren

Verfahren gemäß der vorliegenden Erfindung

peratur vorliegen, während im letzteren Fall die Aktivitäten bei jeder Temperatur schnell abfallen.

Ähnliche Ergebnisse konnten mit anderen der obenerwähnten Stabilisierungsmittel erhalten werden.

Eine Probe von frisch zubereitetem Präparat C diente als Kontrollprobe.

Es geht aus der vorstehenden Tabelle klar hervor, daß die hämostatische Zubereitung, die gemäß dem Verfahren der Erfindung stabilisiert wurde, einen außerordentlich hohen relativen Weißwert hält und daß die erfindungsgemäß verwendeten Stabilisierungsmittel eine sehr gute Wirkung zur Verhütung von Verfärbungen besitzen.

Die Änderung des Stabilisierungseffektes in Abhängigkeit der Dauer der hämostatischen Wirkung ist für den Fall veranschaulicht, in dem Kaliummetabisulfit in Lipoidthromboplastin eingebaut ist. Die Ergebnisse, die erhalten wurden, wenn Kaliummetabisulfit in einer Konzentration von 0,5% zugegeben wurde, sind in der Zeichnung wiedergegeben.

Die Blutplättchenaktivität der Probe wurde mittels des Thromboplastinbildungstestes, wie er in B i g g s und Douglas: J. Clin. Path., 23. Juni 1953, beschrieben ist, nach Stehenlassen über 3 bis 20 Tage bei verschiedenen Temperaturbedingungen gemessen. In der Zeichnung ist der Prozentgehalt gegenüber der Anfangsaktivität wiedergegeben, und zwar gelten die ausgezogenen Linien für den Fall, daß Kaliummetabisulfit eingebaut ist, und die durchbrochenen Linien für den Fall, daß Kaliummetabisulfit nicht eingebaut ist. Man erkennt, daß im ersteren Fall hervorragende Stabilisierungseffekte beim Stehenlassen bei jeder Tem-

Beispiel 1

Zu 44 ml einer physiologischen Lösung, die 35,2 mg eines nichtionischen oberflächenwirksamen Stoffes, Polyoxyäthylensorbitanmonolaurat (Handelsname:

TWEEN-20, hergestellt von der Firma Atlas Powder Co.) enthielt, wurden unter Rühren und unter Einleiten von Stickstoffgas 220 mg von Lipoid-Thromboplastin hinzugegeben. Nachdem das Lipoid-Thromboplastin fein dispergiert worden war, wurden 44 mg Kaliummetabisulfit zugefügt. Die Dispersion wurde dann auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt und filtriert. Je 5 ecm der so erhaltenen Dispersion wurden in eine Ampulle brauner Färbung eingeschmolzen, jede dieser Ampullen war vor dem Zuschmelzen mit Stickstoff ausgespült worden. Danach wurde 40 Minuten lang bei 100⁰C sterilisiert, um das Produkt zu erhalten.

Beispiel 2

24 mg des nichtionischen oberflächenwirksamen Mittels Polyoxyäthylensorbitanmonolaurat (Handelsname: TWEEN-20) und 2 g ε-Aminocapronsäure wurden in destilliertem Wasser zu einer 40 ml Lösung aufgelöst. Unter Rühren und unter Zuleitung von Stickstoffgas wurde eine Lösung von 500 mg Lipoid-Thromboplastin in 6 ecm Äther zu dieser Lösung hinzugegeben und fein dispergiert, wobei der Äther durch Erwärmen auf 50⁰C auf einem Wasserbad abgedampft wurde. Nach Abkühlen auf Zimmertemperatur wurden 100 mg Kaliummetabisulfit hinzugegeben und gelöst, und die Dispersion wurde auf einen pH-Wert von 7,5 eingestellt und filtriert. Je 2 ecm der so erhaltenen Dispersion wurden in braune Ampullen eingeschmol-

Claims

5 6

zen, jede Ampulle war vorher mit Stickstoff ausgespült Beispiel 8

worden, und dann wurde sterilisiert.

An Stelle der 100 mg Kaliummetabisulfit wurden Beispiel 3 100 mg an «-Monothioglycerin zu der Mischung des

5 Beispiels 2 hinzugefügt.

An Stelle von 44 mg Kaliummetabisulfit wurden _ . -in

44 mg Natriumbisulfit zu der Mischung des Beispiels 1 eispiey

hinzugefügt. An Stelle der 100 mg Kaliummetabisulfit wurden

. . 100 mg an Natriumthiosulfat zu der Mischung des

^ΰ ^{e x s} P ¹ ^e ^l ⁴ ίο Beispiels 2 hinzugegeben.

An Stelle der 100 mg Kaliummetabisulfit wurden Die Zubereitungen, die wie oben ausgeführt erhalten

100 mg Natriumbisulfit zu der Mischung des Beispiels 2 wurden, zeigten keinerlei unerwünschte Veränderungen zugefügt. wie Verfärbung, und keine Abnahme der hämo-

. · ι e statischen Aktivität, waren jedoch sehr stabil und

Beispiels ₁₅ konnten sowohl intravenös als auch intramuskulär

An Stelle der 44 mg Kaliummetabisulfit wurden angewendet werden.
44 mg Natriumsulfit zu der Mischung des Beispiels 1 „

zugefügt. Patentansprüche:

„ . . . , 1. Verfahren zur Stabilisierung einer wäßrigen

^eisP^ie 20 Dispersion von Lipoid-Thromboplastin, da-

An Stelle von 100mg Kaliummetabisulfit wurden durch gekennzeichnet, daß man als

100 mg Natriumsuhlt zu der Mischung des Beispiels 2 Stabilisierungsmittel Rongalit, a-Monothioglyce-

hinzugefügt. rin, Natriumsulfit, Natriumbisulfit, Kaliummeta-

_R . -17 bisulfit oder Natriumthiosulfat zugibt.

^e *^s P *^e 25 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekenn-

An Stelle der 100 mg Kaliummetabisulfit wurden zeichnet, daß die wäßrige Dispersion nach der Zu-

100 mg Rongalit zu der Mischung des Beispiels 2 hin- gäbe des Stabilisierungsmittels auf einen pH-Wert

zugefügt. von 6,0 bis 8,0 eingestellt wird.

Hierzu 1 Blatt Zeichnungen

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