Die
Tatsache, daß Krebsgewebe
im extrazellulären
Milieu einen erniedrigten pH von etwa 6.5 – 7.0 aufweist (der pH kann
an der Krebszell-Oberfläche
bis auf 5.0 abfallen), während
der pH im Normalgewebe und im Blut etwa 7.2 – 7.5 beträgt, ist bekannt und beschrieben,
z.B. in DE-A 4407 484 und in Tumor Biolog., 1994, 15, 104-310. Jeder
Tumortyp zeigt einen intrinsischen mittleren interzellulären pH,
der z.B. im Falle des Brust-Tumors etwa 6.7 und im Falle des Colon-Tumors
6.9 beträgt.
In
den oben erwähnten
Publikationen wird ausgeführt,
daß auf
Grund des abgesenkten extrazellulären pH Milieus in Tumoren die
natürliche
Immunabwehr blockiert wird, da die natürlichen Abwehrzellen ihre volle Cytotoxizität nur im
basischen Milieu, d.h. bei > pH
7 entfalten. In DE-A 4407 484 wird daher vorgeschlagen, das saure
extrazelluläre
Milieu von Krebszellen auf den normalen physiologischen pH von 7 – 7.5 zu
bringen und dadurch die Krebszellen durch die natürliche Immunabwehr
zu kontrollieren. Zu diesem Zweck wird das extrazelluläre Krebszellmilieu
entweder durch künstliche
Alkalisierung oder durch Verhinderung der Ansäuerung auf den physiologischen
pH gebracht.
Die
Medikamente, die in DE-A 4407 484 beschrieben werden, bedeuten einen
Fortschritt in der Krebstherapie, aber es wäre wünschenswert, Medikamente zur
Verfügung
zu haben, die neben der körpereigenen Immunabwehr
selektiv Tumorzellen angreifen, und auf diese Weise Chemotherapeutika
zu besitzen mit wenig Nebenwirkungen.
In
WO 96/30003 wird vorgeschlagen, solche Verbindungen für die Tumorbekämpfung einzusetzen,
die bei einem pH niedriger als 7 protoniert werden oder eine Substanz
freisetzen, die protoniert wird. Die protonierte Verbindung oder
freigesetzte protonierte Substanz soll einen stärkeren destruktiven Effekt
auf die Krebszellen haben als die unprotonierten. WO 96/30003 schließt auch
Kombinationen von 2 oder mehreren Verbindungen ein. Diese Verbindungen zeigen
schon einen guten anti-Tumoreffekt, aber es sind Medikamente erforderlich
mit exzellenter anti-Tumorwirkung bei pH Werten niedriger als 7,
insbesondere im Bereich 6.5 bis 7.0.
In
WO 98/58639 werden synergistische Kombinationen für die selektive
Bekämpfung
von Tumorgewebe vorgeschlagen. Die synergistischen Mischungen umfassen
zumindest 2 verschiedene Benzoesäure
Derivate einer Liste, zu der auch Diflunisal = 5-(2,4-Difluorophenyl) salicylsäure gehört, bekannt
als Diflunisal. Gemäß WO 98/58639
wird Diflunisal nur wirksam, wenn es mit einer anderen Verbindung
eine synergistische Wirkmischung bildet.
Trotz
der hohen anti-Tumorwirkung der synergistischen Kombinationen, die
in WO 98/58639 vorgestellt werden, besteht doch der Bedarf für andere
Medikamente mit exzellenter anti-Tumor
Wirkung, besonders bei pH-Werten unter 7.0, insbesondere im pH-Bereich
6.5 – 7.0.
Unerwartenderweise
zeigt Diflunisal auch allein eine sehr gute anti-Krebswirkung ohne
die Mitwirkung einer zweiten aktiven Substanz wie z.B. Benzoesäure Derivate,
wie in WO 98/58639 dargelegt. Die vorliegende Erfindung stellt daher
Diflunisal zur Herstellung eines Krebs-Medikamentes zur Verfügung, wobei
Diflunisal nicht als Bestandteil eines Mittels vorliegt, das aus
Diflunisal und einer zweiten aktiven Komponente besteht. Überraschenderweise
kann Diflunisal als alleiniger Wirkstoff in der Krebstherapie verwendet
werden, und es ist nicht notwendig es als Teil einer Kombinationstherapie
mit anderen Wirkstoffen, wie anderen Benzoesäurederivaten, einzusetzen,
wie es in der WO 98/58633 beschrieben ist.
Obwohl
Diflunisal für
sich allein schon genügende
Aktivität
zeigt, ohne Co-Verabreichung anderer pharmazeutisch aktiver Substanzen,
ist es natürlich
auch möglich,
Diflunisal mit anderen aktiven Substanzen zu kombinieren, wenn Diflunisal
in einer Art und Weise verabreicht wird, daß eine bestimmte interstitielle
Konzentration erreicht wird, und daher stellt die vorgelegte Erfindung
ebenfalls die Verwendung von Diflunisal zur Herstellung eines Arzneimittels
zur Behandlung von Krebs zur Verfügung, wobei das Medikament
für die
Verabreichung so angepaßt
wird, daß ein
interstitielles molekulares Verhältnis
von Diflunisal zu Albumin von 4:1 bis 6:1 eingestellt wird.
Diflunisal
(5-[2,4-difluorophenyl] salicylsäure)
weist zwei außergewöhnliche
Eigenschaften auf, die für die
Krebstherapie von grundsätzlichem
Interesse sind:
- 1. induziert es pH-abhängig Apoptose
in Laktat-transportierenden Zellen und
- 2. verursacht es pH-abhängige
Porenbildung in Krebszellen.
Porenbildung
bedeutet, daß die
Krebszellmembran „durchlässig" wird, was zum Kollaps
von Konzentrationsgradienten führt
und dadurch konsequenterweise zum Zelltod.
Es
wurde gefunden, daß der
pH-Bereich, in dem Apoptose durch Diflunisal induziert wird, abhängig ist von
der eingesetzten Diflunisal-Konzentration. Außerdem konnte gezeigt werden,
daß der
Diflunisal-Influx in die Krebszellen durch Albumin vermittelt wird
und an den Laktat-Efflux gekoppelt ist, was bedeutet, daß Diflunisal-Influx
als Antiport an Laktat-Efflux
gekoppelt ist. Der Diflunisal-Antiport ist Konzentration- und pH-abhängig und
wird durch die Albumin-Affinitätsstufen
reguliert. Der Diflunisal-Antiport kann als akzellerierter Laktat-Efflux
gemessen werden, wie es in den Beispielen gezeigt wird (3). Daher ist die Diflunisal-Konzentration,
die für
die Auslösung
von Apoptose erforderlich ist, abhängig von der Albumin-Konzentration,
die im interstitiellen Milieu vorliegt.
Normalerweise
zeigt das interstitielle Milieu eine Albumin-Konzentration von 0.17
mM. Bis jetzt existieren in der medizinischen Literatur nur Schätzungen über interstitielle
Albumin-Konzentrationen.
Sie variieren von 25% bis 35% der Blut-Albumin-Konzentration, die
0.63 mM beträgt.
Es wird daher vermutet, daß die
interstitielle Albumin-Konzentration zwischen 0.16 bis 0.22 mM beträgt. Genaue
Messungen sind nicht bekannt. Auf der Grundlage unserer experimentellen
Ergebnisse sind wir jetzt in der Lage, eine genaue Bestimmung durchzuführen.
Wenn
Diflunisal oral verabreicht wird, erfolgt die Resorption nicht beliebig
sondern nur bis zu einem maximalen Betrag, der im Blut genau gemessen
werden kann, nämlich
bis zu einer maximalen Blutkonzentration von 250 μg/ml. Dies
bedeutet, daß die
Resorption Sättigungsverhalten
zeigt. 250 μg/ml
entspricht einer 1.00 mM Diflunisal-Lösung. Diese Sättigungskonzentration
wird mit einer 50 mg/kg Diflunisal Dosis erreicht. Auch wenn 100
mg/kg Diflunisal verabreicht wird, wird 1.00 mM nicht überschritten.
Da Diflunisal ein relativ kleines Molekül darstellt, ist zu erwarten,
daß bei
der Resorption von Diflunisal sich eine Gleichverteilung mit den
flüssigen
Systemen der Organe (Interstitium) und dem Blut einstellt, da keine
nennenswerten Diffusionsbarrieren existieren. Dies bedeutet, daß im interstitiellen
Milieu sich wie im Blut eine Konzentration von 1.00 mM Diflunisal
einstellt.
Bindungsstudien
von Diflunisal an Albumin haben ergeben, daß Albumin für Diflunisal 4 Affinitätsstufen
aufweist, wobei jede Affinitätsstufe
3 Diflunisal-Moleküle
binden kann. Experimente zur Reaktivität der 4 Affinitätsstufen
zeigen, daß die
niedrigste Affinitätsstufe
mit 3 gebundenen Diflunisal keine Aktivität zeigt (vergl. 4), dagegen die zweite Affinitätsstufe
mit insgesamt 6 gebundenen Diflunisal hohe Aktivität.
Um
das Sättigungsverhalten
von Diflunisal zu erklären,
muß Albumin
mit 6 Diflunisal ausgestattet sein. Wenn 6 Diflunisal gebunden sind,
bedeutet dies bei einer Sättigungskonzentration
von 1.00 mM Diflunisal, daß die
Albumin-Konzentration 1.00/6 = 0.17 mM beträgt.
Dieser
Wert liegt im Rahmen der Abschätzungen,
die in der Vergangenheit gemacht wurden. Es ist ein großer Vorteil,
daß die
vorliegende Erfindung die Bestimmung der Albumin-Konzentration erlaubt, ohne das genaue
Verteilungsvolumen zu kennen.
Es
konnte ermittelt werden, daß maximal
12 Moleküle
Diflunisal an 1 Molekül
Albumin gebunden werden können.
Dieser Bindungszustand wird durch 4 Affinitätsstufen realisiert (offensichtlich
bedingt durch 12 verschiedene pK-Werte), jede von ihnen besetzt
mit 3 Diflunisal und ausgestattet mit ähnlichen Affinitäten.
Überraschenderweise
erfolgt aus der ersten Affinitätsstufe
mit nur 3 gebundenen Diflunisal-Molekülen kein
Antiport, jedoch wird mit 4 – 6
gebundenen Diflunisal, d.h. aus der zweiten Affinitätsstufe,
effektiv Apoptose ausgelöst
und zwar bei pH 6.0 – 7.2.
Wenn 7 – 9
Moleküle
Diflunisal an Albumin gebunden sind (3. Affinitätsstufe) wird Apoptose bei
pH 7.0 – 7.4
ausgelöst
mit einem exakten Start-pH bei 7.0. Dies wurde an Beispielen dieser
Erfindung gezeigt und kann z.B. aus 1 entnommen
werden.
Für Therapiezwecke
ist Apoptose-Induktion bei pH 7.0–7.4 nicht akzeptabel. In diesem
pH-Bereich könnte auch
Normalgewebe, das auch Laktat-Transport auf einem niedrigeren Level durchführen kann,
geschädigt
werden. Um diese nicht tolerierbare Nebenwirkungen zu vermeiden,
muß bei
Diflunisal-Therapien garantiert sein, daß Diflunisal nur aus der 2.
Affinitätsstufe,
d.h. mit 4 – 6
gebundenen Diflunisal pro Albumin wirkt.
Bei
oraler Verabreichung ist das Risiko, daß die interstitielle Diflunisal-Konzentration
1.0 mM übersteigt,
bei den meisten Patienten sehr gering. Bei größeren Diflunisal-Dosierungen
können
aber Probleme im gastro-intestinalen Trakt auftreten, so daß ein Interesse
besteht, die orale Dosis von Diflunisal so niedrig wie möglich zu
halten, ohne Wirkung einzubüßen.
Es
ist jedoch herausragendes und bemerkenswertes Merkmal von Diflunisal,
daß bei
ausschließlich oraler
Verabreichung aufgrund des vorstehend erläuterten Resorptionsverhaltens
keine Überdosierung
auftreten kann. Daher könnte
die Therapie im Prinzip selbst mit einer einzelnen hohen Depotdosis
erfolgen, was für die
meisten Patienten allerdings nicht akzeptabel ist.
Ferner
ist die Aktivität
der Atmungskette der Krebszellen von Bedeutung für die Effektivität der Therapie.
Die Aktivität
der mitochondrialen Atmungskette ist ein sensitiver Indikator für Zell-Tod
oder Zell-Vitalität. Bei
einer Diflunisal-Konzentration, die 3 gebundenen Diflunisal pro
Albumin entspricht, wird keine substantielle Blockierung der Atmungskette
beobachtet. Die Abweichung vom Verlauf der Atmungs-Kontrollmessung
(die die pH-Abhängigkeit
der Atmungskette ohne Diflunisal-Einwirkung darstellt) ist vernachlässigbar.
Wenn jedoch die Diflunisal-Konzentration geändert wird, so daß sie 4
gebundene Diflunisal pro Albumin bewirkt (Übergang von der 1. zur 2. Affinitätsstufe),
wird der Einfluß auf
die Atmungskette signifikant. Wenn die Diflunisal-Konzentration
weiter angehoben wird, so daß 6
Diflunisal pro Albumin gebunden werden, erreicht die Atmungskette-Blockade
ein Optimum bis pH 6.9. Die Wirkung nimmt dann ab und verschwindet
bei pH 7.2. Bei einer weiteren Erhöhung von Diflunisal, die 7 – 9 gebundenen
Diflunisal entspricht, überlagert
die 3. Affinitätsstufe
einen Apoptose-Effekt zwischen pH 7.0 – 7.4. Auch aus der 4. Affinitätsstufe
treten in diesem Bereich Apoptose-Effekte auf mit bis zu 11 gebundenen
Diflunisal Molekülen
pro Albumin. Dies wurde in den Beispielen dieser Erfindung gezeigt
und kann z.B. aus 4 entnommen
werden.
Außerdem wurden
Experimente zu den Porenbildungs-Eigenschaften von Diflunisal durchgeführt. Es wurde
gefunden, daß die
Porenbildung erst bei hohen Konzentrationen einsetzt, bei denen
Diflunisal Apoptose im pH-Bereich 7.0 – 7.4 verursacht, so daß Porenbildung
ohne Nebenwirkungen nicht erzielt werden kann. Dieses Problem kann
gelöst
werden, wenn Diflunisal in Form einer synergistischen Mischung mit
anderen Benzoesäurederivaten
verwendet wird, wie es in der WO 98/58639 offenbart ist.
Die
vorliegende Erfindung stellt daher eine effektive, hoch selektive,
pH-abhängige
Krebstherapie dar, wie vorstehend beschrieben. Ein besonderer Vorteil
dieser Erfindung ist, daß sie
nicht eingeschränkt
ist auf die Behandlung gewisser Tumore, sondern auf alle Arten von
Tumoren und Metastasen anwendbar ist.
Diflunisal
sollte bei Patienten in einer derartigen Menge verabreicht werden,
daß die
Zahl der Diflunisal -Moleküle,
die an Albumin gebunden sind, 4 – 6 beträgt, was bedeutet, daß im interstitiellen
Milieu das molekulare Verhältnis
von Diflunisal zu Albumin von 4:1 bis 6:1 reicht. (Es wird voraus-gesetzt,
daß sich
eine statistische Verteilung der Diflunisal-Moleküle am interstitiellen
Albumin einstellt, was aber die Aktivität des Diflunisals nicht beeinträchtigt).
Es sollte daher ein Medikament so angepaßt werden, daß es dieses
Verhältnis
Diflunisal zu Albumin zur Verfügung
stellt.
Die
normale interstitielle Albumin-Konzentration beträgt 0.17
mM und kann von Organ zu Organ leicht variieren. Daraus folgt, daß die interstitielle
Diflunisal-Konzentration nicht 1.1 mM überschreiten sollte, bzw. besser
nicht höher
als 1.0 mM sein sollte.
Die
interstitielle Diflunisal-Konzentration sollte jedoch nicht unter
0.55 mM abfallen, besser nicht unter 0.7 mM, noch besser nicht unter
0.8 oder 0.9 mM. Daher sollte gemäß der vorliegenden Erfindung
einem Patienten soviel Diflunisal verabreicht werden, daß die interstitielle
Diflunisal-Konzentration von 0.55 mM – 1.1 mM reicht, besser von
0.7 mM bis 1.1 mM oder noch besser von 0.7 – 1.0 mM, z.B. 0.8 mM oder
1.0 mM. Die vorliegende Erfindung liefert auch Medikamente, die
die oben angeführten
Diflunisal-Konzentration zur Verfügung stellen.
Eine
interstitielle Diflunisal-Konzentration von 1.1 mM entspricht einer
oralen Dosis (basierend auf dem Gewicht des Patienten) von ca. 55
mg/kg, eine interstitielle Diflunisal-Konzentration von 1.0 mM entspricht einer
oralen Dosis von ca. 50 mg/kg, eine interstitielle Diflunisal-Konzentration
von 0.55 mM entspricht einer oralen Dosis von ca. 27.5 mg/kg, eine
interstitielle Diflunisal-Konzentration von 0.7 mM entspricht einer
oralen Dosis von ca. 35 mg/kg, eine interstitielle Diflunisal-Konzentration
von 0.8 mM entspricht einer oralen Dosis von ca. 40 mg/kg und eine
interstitielle Diflunisal-Konzentration von 0.9 mM entspricht einer
oralen Dosis von ca. 45 mg/kg. Die angegebenen Werte basieren auf
einem weiblichen Patienten mit 65 ml Blut/kg Körpergewicht, im Falle von männlichen
Patienten mit 77 ml Blut/kg Körpergewicht
muß die
Dosis um ca. 18% erhöht werden.
Ein Fachmann kann leicht die passende individuelle Dosis für einen
Patienten auf Grund der oben gegebenen Information ermitteln.
Es
ist wichtig, daß während einer
Behandlung das Verhältnis
von interstitieller Diflunisal-Konzentration zu
interstitieller Albumin-Konzentration von 6:1 nicht überschritten
wird. Diflunisal sollte daher nur in solchen Mengen verabreicht
werden, die erforderlich sind, um Diflunisal zu ersetzen, das aus
dem interstitiellen Milieu verschwunden ist z.B. durch Metabolisierung
oder durch Ausscheidung und durch Wirkung.
Die
Diflunisal-Verabreichung sollte sicherstellen, daß die gewünschte interstitielle
Diflunisal-Konzentration
während
der Behandlung aufrechterhalten wird, und entsprechend sollte das
Medikament angepaßt sein.
Bei einem angemessenem Behandlungsschema sollte zu Beginn eine hohe
Dosis verabreicht werden, gefolgt von niedrigen Dosen, um ein steady-state
Niveau von interstitiellem Diflunisal aufrechtzuerhalten. Eine angemessene
Anfangsdosis ist vorzugsweise 30 mg/kg p.o. bis 40 mg/kg p.o., z.B.
ca. 35 mg/kg p.o. und nach 12 Stunden kann eine weitere Dosis von
vorzugsweise 25 mg/kg p.o. bis 35 mg/kg p.o., z.B. ca. 30 mg/kg
p.o. verabreicht werden und dann alle 12 Stunden 20 mg/kg p.o. bis
30 mg/kg p.o., z.B. ca. 25 mg/kg p.o.
Bevorzugt
wird folgendes Dosierungsschema:
- a. Einem Patienten
wird eine Initialdosis von 25 bis 45 mg/kg Körpergewicht verabreicht
- b. Einem Patienten wird 12 Stunden nach der Initialdosis eine
weitere Dosis Diflunisal von 20 bis 40 mg/kg verabreicht
- c. Etwa 3 Stunden nach der zweiten Dosis wird eine dritte Dosis
Difunisal von 4 mg/kg bis 8 mg/kg Körpergewicht verabreicht
- d. Etwa 3 Stunden nach der dritten Dosis wird eine vierte Dosis
Diflunisal von 4 mg/kg bis 8 mg/kg Körpergewicht verabreicht
- e. Etwa 3 Stunden nach der vierten Dosis wird dem Patienten
eine fünfte
Dosis Diflunisal von 4 mg/kg bis 8 mg/kg verabreicht
- f. Etwa 3 Stunden nach der fünften
Dosis wird dem Patienten eine sechste Dosis Diflunisal von 4 mg/kg
bis 8 mg/kg verabreicht
- g. 12 Stunden nach der sechsten Dosierung wird der Zyklus bei
Stufe b von neuem begonnen.
Eine
Variante dieses Schemas könnte
sein, daß bei
Stufe d. die Dosierung auf 8 bis 16 mg/kg angehoben wird und dafür Stufe
f. gestrichen wird.
Das
meist bevorzugte Dosierungsschema ist folgendes (für einen
weiblichen Patienten mit 65 ml Blut pro kg Körpergewicht, für andere
Patienten kann dieses Dosierungsschema, wenn erforderlich, angepaßt werden):
Natürlich sind
auch andere Dosierungsschemata möglich,
wenn sichergestellt ist, daß die
interstitielle Diflunisal Konzentration der oben angeführten entspricht.
Mit der Information, die durch dieses Therapie-Schema gegeben wird,
kann ein Fachmann leicht entsprechend geänderte Dosierungs-Schemata
finden, die eine erforderliche Diflunisal-Konzentration sicherstellen.
Anstelle der oben angeführten
3 Stunden-Intervalle können
auch 4 Stunden, 5 Stunden oder 6 Stunden Intervalle eingesetzt werden,
oder auch 12 Stunden Intervalle sind möglich, wobei die Dosierung
an die vorgegebene Intervalle angepaßt werden muß. Die Dosierung
für jedes
Intervall kann bezogen auf jeden Patienten und insbesondere auf
die Blutmenge pro Körpergewicht
jedes Patienten angepaßt
werden, wie oben dargelegt wurde. Solche Variationen und Anpassungen
liegen im Bereich des Kenntnisstandes eines Fachmanns.
Die
Art des oralen Medikaments, das gemäß der Erfindung verwendet wird,
wird nicht besonders eingeschränkt,
solange es an das oben angeführte
Dosierungsschema angepaßt
ist.
Eine
bevorzugte Möglichkeit
der Diflunisal Verabreichung ist oral wie oben ausgeführt. Eine
weitere bevorzugte Möglichkeit
der Diflunisal-Verabreichung ist parenteral, insbesondere intravenös. Wie bei
der oralen Verabreichung erfolgt auch die parenterale Verabreichung
bevorzugt in Intervallen. Angemessene Dosen von Diflunisal sind
solche, die oben erwähnte
Diflunisal-Konzentrationen gewährleisten
und die durch einen Fachmann auf der Grundlage der gegebenen Informationen
und seines allgemeinen technischen Wissens bestimmt werden können.
Eine
angemessene initiale parenterale Dosis, insbesondere intravenöse Dosis,
für die
Verabreichung ist 30 mg/kg i.v. bis 40 mg/kg i.v., z.B. 35 mg/kg
i.v., gefolgt nach 12 Stunden von einer Dosis von 25 mg/kg i.v. bis
35 mg/kg i.v., z.B. 30 mg/kg i.v., gefolgt nach 12 Stunden von einer
Dosis von 25 mg/kg i.v. bis 35 mg/kg i.v., z.B. 30 mg/kg i.v.. Diese
Dosis wird alle 12 Stunden verabreicht.
Nach
der vorliegenden Erfindung kann eine bevorzugte Behandlung mit Diflunisal
auch als Kombination von oraler und parenteraler Anwendung erfolgen.
Ein
angemessenes kombiniertes Dosierungsschema mit oraler und parenteraler
Anwendung ist eine initiale Dosis von 30 bis 40 mg/kg p.o., z.B.
35 mg/kg p.o., gefolgt nach 12 Stunden von einer Dosis von 25 bis 35
mg/kg p.o., z.B. ca. 30 mg/kg p.o., und zusätzlich einer Dosis von 25 bis
35 mg/kg i.v., z.B. ca. 30 mg/kg i.v., und dann alle 24 Stunden
einer Dosis von 25 bis 35 mg/kg p.o., z.B. 30 mg/kg p.o., und zusätzlich einer Dosis
von 20 bis 30 mg/kg i.v., z.B. 25 mg/kg i.v.
Andere
angemessene Dosierungsschemata können
auf der Basis der vorstehend gegebenen Information durch einen Fachmann
leicht gefunden werden, wenn berücksichtigt
wird, daß gemäß der vorliegenden Erfindung
die interstitiale Diflunisal-Konzentration im Verhältnis zu
Albumin ein molekulares Verhältnis
von 4:1 bis 6:1 aufweisen muß.
Die
Zusammensetzungen gemäß der Erfindung
können
in bekannter Weise für
Medikamente für
Säugetiere,
bevorzugt Menschen, formuliert werden. Im Medikament sind gemäß der Erfindung
die Zusammensetzungen als Mischung mit einem oder mehreren pharmazeutisch
akzeptablen organischen oder anorganischen Exzipienten vorhanden,
die für
die enterale oder parenterale Verabreichung geeignet sind. Gemäß der Erfindung
werden für
die orale Verabreichung der Mittel Tabletten, Kapseln, Pulver oder
in flüssiger
Form, z.B. als Suspension, Lösung,
Emulsion oder Sirup bevorzugt.
Für die Formulierung
von Tabletten werden übliche
pharmazeutische Exzipienten wie Natrium-Citrat, Lactose, mikrokristalline
Cellulose und Stärke,
Schmiermittel wie unhydratisiertes Siliziumdioxyd, hydrogeniertes
Castoröl,
Magnesium Stearat, Natrium-Laurylsulfat
und Talcum, ferner Bindungsmittel wie Stärke, Glukose, Lactose, Gummi
arabicum, Mannitol, Magnesium Trisilikat und ähnliches benutzt. Wenn die
Zusammensetzung in flüssiger
Form verabreicht werden soll, können
die üblichen
Exzipienten für
Flüssig-Formulierungen benutzt
werden.
Eine
Formulierung für
Injektionen und Infusionen ist ebenfalls bevorzugt und kann gemäß der Anleitungen
in relevanten Textbüchern
hergestellt werden.
Das
Medikament kann bevorzugt auch als Depot-Formulierungen hergestellt
werden, die die aktive Komponente d.h. das Diflunisal freisetzen
und zwar gemäß dem vorstehenden
Dosis-Schema. Die
Herstellung solcher Depot-Formulierungen oder Präparate mit hinhaltender oder
verzögernder
Freisetzung sind einem Fachmann gut bekannt.
Wenn
diese Art der Therapie über
mehrere Tage fortgesetzt wird, werden die Lactattransportierenden Krebszellen
nach und nach getötet
und das extrazelluläre
Tumor-Milieu wird mehr und mehr basisch. Jene Krebszellen, die überleben,
werden dann in einem basischen Milieu atmen. In diesem Zusammenhang
ist eine Arbeit von Möller,
B., Fischer, B., Kreutz, W.: Immunology, 2000, 99, 375–384, interessant,
in der gezeigt wird, daß nur
Krebszellen, die in einem basischen Milieu proliferieren vom natürlichen
Immunsystem angegriffen werden können,
und daß diejenigen
Krebszellen, die im sauren Milieu proliferieren, überleben.
Dies bedeutet, wenn die vorgeschlagene Therapie über mehrere Tage fortgesetzt
wird, sollte nach mehr als 6 Tage der Immuninduktionszeit das natürliche Immunsystem
beginnen, die alkalische Tumorfraktion zu töten. Bei Fortsetzung der Therapie
sollte im Endeffekt der Tumor in Totalremission gehen.
Die
Erfindung wird ferner durch die folgenden Experimente erklärt, die
jedoch nicht den Umfang der Erfindung einschränken sollen.
Die
Ergebnisse der Experimente sind in den Figuren dargestellt.
1: 1 stellt Apoptose Messungen mit einer
Harnblasen-Krebszell-Linie RT 112 dar. Aufgetragen ist das Ausmaß der produzierten
DNA-Fragmente (Nukleosomen und Oligonukleosomen) von getöteten Krebszellen
in Abhängigkeit
von pH und der Diflunisal-Konzentration. Die Albumin-Konzentration beträgt bei allen Messungen
0.06 mM. Neben der Kontroll-Messung
ohne Diflunisal wurde eine „Positiv-Kontrolle"(CAM) mit einem kalibrierten
definierten System gemessen.
2: 2 stellt die Porenbildung unter interstitiellen
Albumin-Bedingungen von 0.2 mM dar. Aufgetragen ist der Prozentsatz
PJ-gefärbter
toter Zellen in Abhängigkeit
von pH und Diflunisal-Konzentration. Die Fraktion toter Zellen im
Vergleich zu der Gesamtzahl der Zellen wird in einem Fluß-Cytometer
gemessen. Die Experimente wurden mit der Leukämie-Zell-Linie K-562 durchgeführt. Von
besonderem Interesse ist die Porenbildung, die aus der 3. Affinitätsstufe
von Albumin induziert wird und bei pH 5 7.0 erfolgt, wenn 1.25 mM
bis 1.5 mM Diflunisal eingesetzt wird. Von geringerem Interesse
ist die zweite Porenbildung, die bei pH 6.4 einsetzt und die jenseits
des Säuremilieus
der meisten Tumore liegt. Bei einer Konzentration von 1.0 mM Diflunisal
besteht eine Übergangssituation,
wo beide Transportsysteme überlagert
sind. Nicht gezeigt in dieser Abbildung ist ein drittes Porenbildungssystem,
das bei pH 7.2 – 7.3
einsetzt und aus der vierten Affinitätsstufe von Albumin transferiert
wird.
3: 3 zeigt die Messung des Lactat-Transports
an einer Harnblasen-Krebszell-Linie
RT 112. Aufgetragen ist eine Kontroll-Messung, die die pH-Abhängigkeit
des Lactat-Effluxes ohne Diflunisal Einwirkung zeigt. Durch die
Diflunisal Einwirkung wird der Lactat-Efflux bemerkenswert verstärkt zwischen
pH 6.0 und 7.2. Dies weist auf einen Diflunisal-Influx (Antiport)
in die Krebszellen hin, der als Konsequenz zur Auslösung von
Apoptose in diesem pH-Bereich führt.
4: 4 zeigt den indirekten Nachweis von Apoptose-Wirkung
anhand der Messung der Aktivität
der mitochondrialen Atmungskette. Bei interstitiellen Albumin-Bedingungen
von 0.2 mM wird demonstriert, daß bei 1.0 mM Diflunisal ab
pH 7.2 eine Abweichung von der normalen Atmungsketten-Aktivität (Kontrolle)
einsetzt und eine maximale Abweichung bei pH 6.9 erreicht. Dies
bedeutet, daß die
Inhibition der Atmungsketten-Aktivität bei pH 7.2 beginnt und total
eliminiert ist bei pH ≤ 6.9.
Dieses Verhalten spiegelt die Apoptose-Induktion wieder, die durch
die zweite Affinitätsstufe
von Albumin vermittelt wird. Wird die Diflunisal-Konzentration über 1.0
mM erhöht,
so wird auch Atmungsaktivität
zwischen pH 7.0 bis 7.4 reduziert und verschwindet ganz bei 1.5 mM
Diflunisal. Derselbe Effekt erfolgt auch, wenn die Konzentration
bis 2.0 mM erhöht
wird. Dieser Effekt wird durch Apoptose-Auslösung
bei pH 7.0–7.4
bewirkt, die durch die 3. und 4. Affinitätsstufe des Albumins vermittelt
wird. Die Kontroll-Messung stellt die Atmungsketten-Aktivität in Abhängigkeit
vom pH ohne Diflunisal-Einwirkung dar.