DE102007043186A1

DE102007043186A1 - Cyclohexenonverbidungen aus Antrodia camphorata zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen

Info

Publication number: DE102007043186A1
Application number: DE102007043186A
Authority: DE
Inventors: Shen-Yun Liu; Mao-Tien Kuo; Wu-Che Wen
Original assignee: Golden Biotechnology Corp
Current assignee: Golden Biotechnology Corp
Priority date: 2007-06-12
Filing date: 2007-09-11
Publication date: 2008-12-18
Also published as: KR20080109583A; GB2450190B; GB0724750D0; TW200848065A; US7501454B2; BRPI0704904A2; GB2450190A; FR2917408A1; TWI394572B; US20080312334A1; KR101150046B1

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verbindung aus Antrodia camphorata, die zur Inhibierung von Autoimmunerkrankungen verwendet wird, insbesondere einen Extrakt, 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10- trienyl)-cyclohex-2-enon, der aus Antrodia camphorata isoliert wird, und dessen Verwendung bei der Verminderung von Symptomen von Autoimmunerkrankungen, wie z. B. von systemischem Lupus erythematodes (SLE). Die erfindugnsgemäße Cyclohexenonverbindung unterstützt bei der Verminderung von Proteinurieniveaus und des Titem eine Nierenentzündung und -erkrankung sowie eine Selbstschädigung, die durch antinukleare Antikörper verursacht wird, zu vermindern. Der Zweck der Prävention und Behandlung von Autoimmunerkrankungen und Nierenschädigungen durch die natürliche, nebenwirkungsfreie Substanz kann dann erfüllt werden.

Description

Hintergrund der Erfindung
1. Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft Verbindungen zur Behandlung von Immunerkrankungen, insbesondere Cyclohexenonverbindungen, die aus Antrodia camphorata-Extrakten isoliert und gereinigt worden sind und zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen, wie z. B. von systemischem Lupus erythematodes (SLE), eingesetzt werden können.
2. Stand der Technik
Es gibt viele Arten von Autoimmunerkrankungen, die auf eine anomale Immunreaktion des Körpers zurückzuführen sind und eine Selbstzerstörung verursachen. Bekannte Beispiele umfassen systemischen Lupus erythematodes (SLE), rheumatoide Arthritis (RA), Skleroderm, Polymyositis, Dermatomyositis, allergische Purpurs, Sjögren-Syndrom und dergleichen. Andere Erkrankungen, wie z. B. primär biliäre Zirrhose (PBC), chronisch-aktive Hepatitis und Hashimoto-Thyreoiditis, hängen mit Autoimmunerkrankungen zusammen. Von diesen Erkrankungen ist systemischer Lupus erythematodes (SLE) die schwerste Erkrankung, die häufig bei Frauen im gebärfähigen Alter auftritt. SLE-Patienten erzeugen Autoantikörper, die als antinukleäre Antikörper (ANA) bezeichnet werden und gegen Autoantigene innerhalb des Zellkerns gerichtet sind. Diese Autoantikörper können vielfache Schädigungen in Geweben und Organen, wie z. B. der Haut, den Gelenken, dem Skelett, der Niere, dem kardiovaskulären System, dem Gerinnungssystem, dem Darm und dem Magen, der Serosa (Perikard, Pleura und Peritoneum), dem Nervensystem und dergleichen verursachen. Einige der Antikörper bilden Immunkomplexe, wenn sie mit Antigenen binden, die in Zellen von verschiedenen Geweben während des Umlaufs abgeschieden werden können. Klinische Manifestationen umfassen Schmetterlingshautausschlag, hämolytische Anämie, Arthritis, Blutgefäßentzündung, Nephritis, usw. Eine Standardbehandlung für Autoimmunerkrankungen ist die Verabreichung von Steroiden oder anderen chemischen Arzneistoffen. Patienten, bei denen eine Langzeitbehandlung durchgeführt wird, zeigten jedoch unangenehme Komplikationen oder Nebenwirkungen. Daher wird es für die Patienten vorteilhaft sein, wenn zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen natürliche und nebenwirkungsfreie traditionelle, chinesische pflanzliche Medikamente verwendet werden.
Antrodia camphorata wird auch als Chang-Zhi, Niu Chang-zhi, roter Kampferpilz und dergleichen bezeichnet und ist ein mehrjähriger Pilz, der zur Ordnung Aphyllophorales, Familie Polyporaceae, gehört. Es handelt sich um eine in Taiwan endemische Art, die auf der inneren, morschen Kernholzwand von Cinnamomum kanehirae Hay wächst. Cinnamomum kanehirae Hay kommt selten vor und wird illegal übermäßig abgeerntet, wodurch Antrodia camphorata, der wild innerhalb des Baums wächst, sogar selten geworden ist. Da die Wachstumsgeschwindigkeit von natürlichem Antrodia camphorata, der nur von Juni bis Oktober wächst, extrem gering ist, ist der Preis von Antrodia camphorata sehr hoch.
Die Fruchtkörper von Antrodia camphorata sind mehrjährig, ungestielt, hart und holzig und geben einen starken Geruch von Sassafras (Kampferaroma) ab. Das Aussehen ist verschiedenartig und weist plattenartige, glockenartige, hufartige oder turmartige Formen auf. Sie weisen eine rötliche Farbe auf und liegen, wenn sie jung sind, flach auf der Oberfläche von Holz vor. Dann werden die Ränder des vorderen Endes geringfügig gewellt und neigen sich und erstrecken sich in die Umgebung. Die Farbe wandelt sich in ein blasses rot-braun oder ein cremefarbenes gelb-braun um, wobei überall Ostiolen vorliegen. Auf dieser Stufe weisen sie einen sehr hohen medizinischen Wert auf.
In der traditionellen taiwanesischen Medizin wird Antrodia camphorata gebräuchlich als Gegengift, Leberschutzmittel und Antikrebsmittel verwendet. Antrodia camphorata ist wie allgemein essbare und medizinische Pilze reich an zahlreichen Nährstoffen, einschließlich Polysacchariden (wie z. B. β-Glukosan), Triterpenoiden, Superoxiddismutase (SOD), Adenosin, Proteinen (Immunglobulinen), Vitaminen (wie z. B. Vitamin B, Nikotinsäure), Spurenelementen (wie z. B. Calcium, Phosphor und Germanium, usw.), Nukleinsäuren, Agglutinin, Aminosäuren, Steroiden, Ligninen und Blutdruckstabilisatoren (wie z. B. Antodia-Säure) und dergleichen. Es wird davon ausgegangen, dass diese physiologisch aktiven Bestandteile z. B. die folgenden Effekte aufweisen: Antitumoraktivitäten, eine Erhöhung von immunmodulierenden Aktivitäten, antiallergische Effekte, antibakterielle Effekte, eine Blutdrucksenkung, eine Blutzuckersenkung, eine Cholesterinsenkung und dergleichen.
Bei den Triterpenoiden handelt es sich um die am intensivsten untersuchte Komponente von den zahlreichen Zusammensetzungen von Antrodia camphorata. Triterpenoide ist der Sammelbegriff für natürliche Verbindungen, die 30 Kohlenstoffatome mit pentacyclischen oder hexacyclischen Strukturen enthalten. Der bittere Geschmack von Antrodia camphorata ist auf die Triterpenoidkomponente zurückzuführen. Drei neue Triterpenoide des Ergostan-Typs (Antcin A, Antcin B, Antcin C) wurden von Cherng et al. aus den Fruchtkörpern von Antrodia camphorata isoliert (I. H. Cherng und H. C. Chiang, 1995, Three new triterpenoids from Antrodia cinnamomea, J. Nat. Prod., 58, 365–371). Drei neue Verbindungen, die als „Zhankuic”-Säure A, „Zhankuic"-Säure B und „Zhankuic"-Säure bezeichnet werden, wurden von Chen et al. aus den Fruchtkörpern von Antrodia camphorata mit Ethanol extrahiert (C. H. Chen und S.W. Yang, 1995, New steroid acids from Antrodia cinnamomea – a fungus parasitic an Cinnamomum micranthum, J. Nat. Prod. 58, 1655–1661). Darüber hinaus haben Cherng et al. auch drei andere neue Triterpenoide aus den Fruchtkörpern von Antrodia camphorata gefunden, bei denen es sich um von Sesquiterpenlacton und 2-Biphenyl abgeleitete Verbindungen handelt, 4,7-Dimethoxy-5-methyl-1,3-benzodioxol und 2,2',5,5'-Tetramethoxy-3,4,3',4'-bi-methylendioxy-6,6'-dimethylbiphenyl (H. C. Chiang, D. P. Wu, I. W. Cherng und C. H. Ueng, 1995, A sesquiterpene lactone, phenyl and biphenyl compounds from Antrodia cinnamomea, Phytochemistry, 39, 613-616). 1996 wurden vier neue Triterpenoide des Ergostan-Typs (Antcine E und F und Methylantcinate G und H) von Cherng et al. mit den gleichen analytischen Verfahren isoliert (I. H. Cherng, D. P. Wu und H.C. Chiang, 1996, Triterpenoids from Antrodia cinnamomea, Phytochemistry 41, 263–267). Zwei mit Ergostan verwandte Steroide, „Zhankuic"-Säuren D und E wurden zusammen mit drei mit Lanostan verwandten Triterpenen, 15-alpha-Acetyldehydrosulfurensäure, Dehydroeburicosäure, Dehydrosulfurensäure, von Yang et al. isoliert (S. W. Yang, Y. C. Shen und C. H. Chen, 1996, Steroids and triterpenoids of Antrodia cinnamomea – a fungus parasitic an Cinnamomum micranthum, Phytochemistry 41, 1389–1392).
Aufgrund der vorangegangenen Experimente ist berichtet worden, dass Antrodia camphorata-Extrakte die vorstehend genannten Effekte aufweisen, und die Komponenten wurden nachfolgend analysiert. Die potenzielle Anwendung von Antrodia camphorata-Extrakten zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen wurde jedoch nicht beschrieben. Weitere Experimente sind erforderlich, um die wirksame Zusammensetzung zu identifizieren, so dass die Behandlung von Autoimmunzuständen verbessert werden kann. Die natürlichen Komponenten von Antrodia camphorata-Extrakten werden stark zu vorteilhaften Effekten bei der Prävention oder Behandlung von systemischem Lupus erythematodus beitragen, wenn die tatsächlich wirksame Zusammensetzung gefunden wird. Darüber hinaus wird dies zur Verhinderung der Nebenwirkungen oder Komplikationen beitragen, die durch chemisch-pharmazeutische Arzneistoffe, wie z. B. Steroide, bei der Behandlung einer Autoimmunerkrankung verursacht werden.
Zusammenfassung der Erfindung
Um die Verbindungen zur Prävention oder Behandlung von Autoimmunerkrankungen, wie z. B. SLE, in den Extrakten von Antrodia camphorata zu identifizieren, wurde die Verbindung der Formel (1)
worin X und Y Sauerstoff oder Schwefel sein können, R₁, R₂ und R₃ jeweils ein Wasserstoffatom, Methyl oder (CH₂)_m-CH₃ ist und m = 1–12; n = 1–12, in der vorliegenden Erfindung isoliert und gereinigt.
Eine bevorzugte Verbindung der allgemeinen Formel (1) ist 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon gemäß der Formel (2) mit der Molekülformel C₂₄H₃₈O₄, das als blassgelbes Pulver vorliegt und ein Molekulargewicht von 390 aufweist.
Cyclohexenonverbindungen mit den Strukturen der Formel (1) und der Formel (2) werden durch eine wässrige Extraktion oder eine organische Lösungsmittel- Extraktion von Antrodia camphorata gereinigt. Die verwendeten organischen Lösungsmittel umfassen unter anderem Alkohole, wie z. B. Methanol, Ethanol oder Propanol, Ester, wie z. B. Ethylacetat, Alkane, wie z. B. Hexan, oder halogenierte Alkane, wie z. B. Chlormethan, Chlorethan. Von diesen Lösungsmitteln ist ein Alkohol bevorzugt und Ethanol ist besonders bevorzugt.
Gemäß der vorliegenden Erfindung werden Cyclohexenonverbindungen der Formel (1) und der Formel (2) zur Prävention oder Behandlung von Autoimmunerkrankungen, wie z. B. SLE, eingesetzt. Die Proteinurie-Niveaus von Säugern mit SLE nahmen ab, was auf einen langsamen Nephritis-Krankheitsfortschritt zurückzuführen sein könnte, und die Titer antinuklearer Antikörper im Blut nahmen ebenfalls effektiv ab, so dass die Selbstschädigung, die durch antinukleäre Antikörper verursacht wird, weiter vermindert wurde, wenn Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata an Säuger mit einer SLE-Erkrankung verabreicht wurden. Darüber hinaus kann die natürliche Substanz, die aus Antrodia camphorata extrahiert worden ist, zur Verminderung von Komplikationen und Nebenwirkungen verwendet werden, die durch chemische Arzneistoffe, wie z. B. Steroide, verursacht werden, und die unangenehmen Symptome vermindern.
Andererseits können die Verbindungen der Formel (1) und/oder der Formel (2) in der vorliegenden Erfindung in pharmazeutische Zusammensetzungen zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen, wie z. B. SLE, einbezogen werden, um die Symptome einer Autoimmunerkrankung in Säugern, wie z. B. dem Menschen, zu lindern. Die pharmazeutischen Zusammensetzungen umfassen nicht nur die Verbindungen der Formel (1) und/oder der Formel (2), sondern auch pharmazeutisch verträgliche Träger. Beispiele für solche Träger umfassen unter anderem Vehikel, wie z. B. Wasser, Füllstoffe, wie z. B. Saccharose oder Stärke, Bindemittel, wie z. B. Cellulosederivate, Verdünnungsmittel, Sprengmittel, Absorptionsverstärker oder Süßungsmittel. Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können durch Mischen der Verbindungen der Formel (1) und/oder der Formel (2) mit mindestens einem der Träger mittels herkömmlicher Verfahren, die in dem technischen Gebiet der Pharmazie bekannt sind, hergestellt werden, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung unter anderem in der Form von Pulvern, Tabletten, Kapseln, Pellets, eines Granulats oder einer anderen, flüssigen Formulierung formuliert werden kann.
Die vorliegende Erfindung wird in der folgenden veranschaulichten Ausführungsform und in Beispielen weiter erläutert. Die nachstehenden Beispiele sollen den Schutzbereich der Erfindung jedoch nicht beschränken und für den Fachmann sind Modifizierungen offensichtlich, wobei die Modifizierungen dem Wesen der Erfindung entsprechen und vom Schutzbereich der beigefügten Ansprüche umfasst sind.
Kurze Beschreibung der Zeichnungen
1 zeigt die Effekte von Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata auf Veränderungen bei der Proteinurie in weiblichen NZB/WF1 SLE-Mäusen.
2 zeigt die Effekte von Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata auf Veränderungen der Titer von antinukleären anti-dsDNA-Antikörpern in weiblichen NZB/WF1 SLE-Mäusen zu verschiedenen Zeitpunkten. Graphik (A): Woche 0, Graphik (B): Woche 4, Graphik (C): Woche B.
Detaillierte Beschreibung der bevorzugten Ausführungsform
Die Myzelien, Fruchtkörper oder ein Gemisch von beiden von Antrodia camphorata werden zuerst mit Wasser oder organischen Lösungsmitteln extrahiert, um den wässrigen Extrakt oder den organischen Lösungsmittel-Extrakt von Antrodia camphorata unter Verwendung bekannter Verfahren zu erhalten. Die organischen Lösungsmittel umfassen unter anderem Alkohole, wie z. B. Methanol, Ethanol oder Propanol, Ester, wie z. B. Ethylacetat, Alkane, wie z. B. Hexan, oder halogenierte Alkane, wie z. B. Chlormethan und Chlorethan. Von diesen Lösungsmitteln ist ein Alkohol bevorzugt und Ethanol ist besonders bevorzugt.
Die wässrigen oder organischen Lösungsmittel-Extrakte von Antrodia camphorata wurden zur Isolierung und Reinigung einer Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) unterzogen. Jede Fraktion wurde gewonnen und in einem Test bezüglich der Proteinurie-Niveaus, der Titer an antinukleären Antikörpern und dergleichen nach der Behandlung einer Autoimmunerkrankung, wie z. B. SLE, eingesetzt. Die wirksamen Fraktionen mit einer symptomlindernden Funktion wurden bezüglich der Zusammensetzung analysiert und mit entsprechenden biochemischen Tests weiter getestet. Der vorstehend beschriebene Ansatz führte dann zur Identifizierung von Verbindungen mit der Formel (1) und/oder der Formel (2) zur Verminderung der Konzentration an Harnprotein und antinukleären Antikörpern, und zu Wirkungen bei der Behandlung von Autoimmunerkrankungen, wie z. B. SLE und mit der Niere zusammenhängenden Erkrankungen. Darüber hinaus können die Verbindungen der Formel (1) und/oder der Formel (2) in pharmazeutische Zusammensetzungen zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen, wie z. B. SLE, eingesetzt werden, so dass diese natürliche Substanz die Symptome einer Autoimmunerkrankung wirksam lindern kann, ohne Nebenwirkungen und Komplikationen zu erzeugen.
Die Verbindung 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon gemäß der Formel (2) wird nachstehend als ein Beispiel für die vorliegende Erfindung erläutert. Die Wirkungen bei der Behandlung einer Autoimmunerkrankung, wie z. B. SLE, wurden dadurch bewertet, dass weiblichen NZB/WF1-Lupus-Modellmäusen die vorstehend beschriebene Cyclohexenonverbindung aus Antrodia camphorata verabreicht wurde und die Proteinurie-Niveaus und die antinukleären Antikörper getestet wurden. Die vorstehend genannten Tests haben bewiesen, dass 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon aus Antrodia camphorata verwendet werden kann, um eine Nephritis und Nierenschädigung zu verzögern, um das Proteinurie-Niveau zu vermindern und die Synthese von antinuklearen Antikörpern in Säugern, wie z. B. dem Menschen, wirksam zu inhibieren oder zu verzögern, um die Selbstschädigungen zu lindern, die durch antinukleare Antikörper verursacht werden, und ferner SLE zu behandeln. Die Details der Beispiele sind nachstehend beschrieben.
Beispiel 1
Isolierung von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon
100 g Myzelien, Fruchtkörper oder ein Gemisch von beiden von Antrodia camphorata wurden in einen Kolben eingebracht. Eine geeignete Menge Wasser und Alkohol (70 bis 100%ige Alkohollösung) wurde dem Kolben zugesetzt und es wurde mindestens 1 Stunde bei 20 bis 25°C gerührt. Die Lösung wurde durch einen Filter und eine 0,45 μm-Membran filtriert und das Filtrat wurde als Extrakt gesammelt.
Das Filtrat von Antrodia camphorata wurde einer Hochleistungsflüssigkeitschromatographie(HPLC)-Analyse unterzogen. Die Trennung wurde auf einer RP18-Säule durchgeführt, wobei die mobile Phase aus Methanol (A) und 0,1 bis 0,5% Essigsäure (B) bestand, wobei die Gradientenbedingungen 0 bis 10 min in 95% bis 20% B, 10 bis 20 min in 20% bis 10% B, 20 bis 35 min in 10% bis 10% B, 35 bis 40 min in 10% bis 95% B bei einer Flussrate von 1 ml/min betrugen. Der Säulenausfluss wurde mit einem UV-VIS-Detektor verfolgt.
Die bei 25 bis 30 min gesammelten Fraktionen wurden gesammelt und konzentriert, wobei 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon erhalten wurde, ein Produkt, das als blassgelbes Pulver vorlag. Die Analyse von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon zeigte die Molekülformel C₂₄H₃₈O₄, ein Molekulargewicht von 390 und einen Schmelzpunkt von 48°C bis 52°C. Die Untersuchung der NMR-Spektren zeigte, dass ¹H-NMR (CDCl₃) δ (ppm) = 1,51, 1,67, 1,71, 1,75, 1,94, 2,03, 2,07, 2,22, 2,25, 3,68, 4,05, 5,07 und 5,14, ¹³C-NMR (CDCl₃) δ (ppm) = 12,31, 16,1, 16,12, 17,67, 25,67, 26,44, 26,74, 27,00, 39,71, 39,81, 40,27, 43,34, 59,22, 60,59, 120,97, 123,84, 124,30, 131,32, 135,35, 135,92, 138,05, 160,45 und 197,12.
Beispiel 2
Bewertung von Wirkungen zur Prävention oder Behandlung von Autoimmunerkrankungen, wie z. B. SLE, mit Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata
Autoimmunpatienten zeigen klinische Manifestationen einer offensichtlichen Zunahme von Autoantikörpern und Immunkomplexen, deren Antigene normale Proteine sind, die im Zellkern, dem Cytoplasma oder der Zellmembran weit verbreitet sind. Die Gegenwart von antinuklearen Antikörpern (ANA) wird daher mit einer diagnostischen Bedeutung für das Autoimmunerkrankungsscreening verwendet. Antinukleäre Antikörper von systemischem Lupus erythematodes (SLE) sind auf dsDNA (doppelsträngige DNA), mit RNA zusammenhängendes Ribonukleoprotein, wie z. B. Sm, Ro, La, RNP, Phospholipide und ribosomalen P, usw., gerichtet. Von diesen zeigen anti-deDNA, anti-Sm und aPL (Antiphospholipid) die größte pathologische Signifikanz. Anti-dsDNA-Antikörper sind für SLE hoch spezifisch und korrelieren mit einer Nierenschädigung. Daher werden in der vorliegenden Erfindung die Wirkungen von Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata bei der SLE-Prävention oder -Be-handlung durch die Bereitstellung eines Tiermodells für SLE bewertet, wobei der Titer antinuklearer anti-dsDNA-Antikörper im Blut und das Proteinurie-Niveau von Modelltieren erfasst werden. Die Details der Schritte sind nachstehend beschrieben:
(1) Bereitstellung eines Tiermodells für SLE
Weibliche NZB/WF1-Mäuse entwickeln spontan menschliche SLE-artige Syndrome, wie z. B. die Erzeugung antinuklearer Autoantikörper, eine Proteinurie und eine Nierentoxizität, so dass der Tod verursacht wird. Die Erkrankung ist in weiblichen Mäusen schwerer als in männlichen Mäusen; die Morbidität weiblicher Mäuse ist ebenfalls höher als diejenige von männlichen Mäusen. Daher wurden für das Screening von anti-SLE-Arzneistoffen in dieser Studie weibliche NZB/WF1-Mäuse verwendet.
Dreißig weibliche NZB/WF1-Mäuse (von Jackson Lab, USA, erworben) mit einem Alter von 12 bis 24 Wochen wurden alle zwei Wochen analysiert, um Proteinurie-Niveaus zu bewerten, und monatlich analysiert, um die Titer antinuklearer Autoantikörper (ANA) zu bewerten. Die erhöhten Titer von ANA und eine positive Reaktion implizierten, dass weibliche NZB/WF1-Mäuse einen SLE bildeten und zur Gruppenbildung bereit waren. Mit einem Alter von 22 Wochen wurden die Tiere, welche die vorstehend genannten Syndrome zeigten, statistisch auf 3 Gruppen aufgeteilt (10 Mäuse pro Gruppe, Wasser wurde der negativen Kontrollgruppe verabreicht, Steroid wurde der positiven Kontrollgruppe verabreicht und Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata wurden der Experimentgruppe verabreicht), und die Startzeit für das Experiment wurde als Woche Null angesetzt.

Darüber hinaus waren zehn B6-Mäuse (vom National Laboratory Animal Center, Taiwan, erworben) ohne SLE-Syndrome normale Mäuse, die als Blindgruppe dienten. Alle Gruppen werden gemäß der Tabelle 1 behandelt. Tabelle 1: Behandlung von Tiergruppen

		Orale Verabreichung
Mausstamm	Gruppe	Wasser	Prednisolon 1,25 mg/kg	Cyc 50 mg/kg
B6	Blind	-	-	-
weibliche NZB/WF1-Mäuse (SLE)	Negativkontrolle	+	-	-
	Positivkontrolle	-	+	-
	Experiment	-	-	+

Die Blindgruppe in der Tabelle 1 bestand aus B6-Mäusen ohne SLE-Syndrom, die keine Behandlung und normale Nahrung für ein natürliches Wachstum erhielten. Weibliche NZB/WF1-Mäuse, die SLE-Syndrome aufweisen konnten, wurden in Negativkontroll- und Positivkontrollgruppen eingesetzt. Die Mäuse in der erstgenannten Gruppe erhielten normales Wasser; Mäusen in der letztgenannten Gruppe wurden oral 1,25 mg/kg Prednisolon, wobei es sich um einen SLE-Arzneistoff handelt, verabreicht. Mäusen in der Experimentgruppe wurden oral 50 mg/kg Cyclohexenonverbindungen von Beispiel 1 verabreicht. Den Mäusen wurden die vorstehend genannten Substanzen einmal pro Tag beginnend mit einem Alter von 23 Wochen verabreicht und dieser Zeitraum wurde als die erste Woche dieses Experiments bezeichnet. Die Experimentzeit betrug 48 Wochen; Blut- und Urinproben wurden routinemäßig genommen, um die Wirkung von Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata auf die SLE-Erkrankung zu bewerten.
(2) Wirkungen von Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata auf Veränderungen der Proteinurie in weiblichen NZBM/F1-SLE-Mäusen
SLE-Patienten entwickeln eine Nierenentzündung und -schädigung, die ein Austreten von Protein aus der Niere in das Fluid verursachen. Dies führt zu einer Zunahme der Proteinurie. Die Veränderungen der Proteinurie können verwendet werden, um die Wirkungen von Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata auf SLE zu bewerten. Die Urinproben von den Mäusen wurden zweimal wöchentlich genommen. 10 μl Urin wurden mit dem Bio-Rad Proteintestfarbstoffreagenzkonzentrat (Bio-Rad Laboratories, USA) getestet und bei 450 nm mit einem ELISA-Analysegerät gemessen, um die Proteinkonzentration mit einer Standardkurve zu messen. Die Ergebnisse sind in der 1 gezeigt.
Die 1 zeigt die Veränderungen der Proteinurie in weiblichen NZB/WF1-SLE-Mäusen nach der Verwendung von Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata in verschiedenen Gruppen. Die Urinproteinkonzentrationen von Mäusen in der Blindgruppe in der Woche 6 waren denjenigen in der Woche 0 (in einem Alter von 28 Wochen) ähnlich und lagen innerhalb normaler Bereiche von 65 mg/dl bis 75 mg/dl, während Mäuse in der Negativkontrollgruppe nach 6 Wochen des Experiments eine 2,76-fache Zunahme der Proteinurieniveaus aufwiesen (89,16 mg/dl verglichen mit 246 mg/dl). Es trat das typische SLE-Symptom einer starken Zunahme der Proteinexkretion aufgrund einer Nierenschädigung auf. Ein niedriges Proteinurieniveau von 32,6 mg/dl zeigte sich bei Mäusen der Positivkontrollgruppe, denen Prednisolon verabreicht worden ist. Das Proteinurieniveau erreichte bei Mäusen in der Experimentgruppe, denen oral 50 mg/kg Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata verabreicht worden sind, nach 6 Wochen des Experiments 118,2 mg/dl, wobei es sich um eine 1,3-fache Zunahme verglichen mit vor dem Experiment handelte. Daher konnten Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata eine Nierenschädigung und -entzündung, die durch SLE verursacht wird, wirksam inhibieren, und linderten ferner Proteinuriesymptome in SLE-Mäusen nach 6 Wochen Nahrungsaufnahme. Darüber hinaus konnte das Cyclohexenon aus Antrodia camphorata auch bei der Behandlung einer übermäßigen Proteinurie verwendet werden, die durch ähnliche Nierenerkrankungen verursacht wird, ist jedoch nicht darauf beschränkt.
(3) Wirkungen von Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata auf Veränderungen antinukleärer Antikörper in weiblichen NZB/WF1-SLE-Mäusen
Die Titer von antinukleären dsDNA-Antikörpern wurden in dieser Studie bestimmt, um die Wirkungen von Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata auf SLE-Mäuse zu bewerten. Blutproben von den Mäusen wurden alle 4 Wochen von den Augenhöhlen genommen. Blutzellen und -plasma wurden nach der Zentrifugation getrennt. 10 μl Plasma wurden mit dem Maus-anti-dsDNA-IgG-ELISA-Kit (adi Alpha Diagnostic, USA) getestet, um die Antikörpertiter zu bestimmen. Die Ergebnisse sind in der 2 gezeigt.
Die 2 zeigt die Titer von antinukleären anti-dsDNA-Antikörpern während der Woche 0, der Woche 4 und der Woche 8 in verschiedenen Gruppen weiblicher NZB/WF1-SLE-Mäuse nach der Verwendung von Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata. Die Mäuse in der Blindgruppe, die kein SLE-Symptom aufwiesen, zeigten von der Woche 0 bis zur Woche 8 des Experiments (in einem Alter von 22 bis 30 Wochen) keine antinukleären anti-dsDNA-Antikörper, während die Titer von antinukleären anti-dsDNA-Antikörpern bei Mäusen in der Negativkontrollgruppe von weniger als 10 mg/dl innerhalb von 8 Wochen auf mehr als 150 mg/dl anstiegen. Die Titer von antinukleären anti-dsDNA-Antikörpern bei Mäusen in der Positivgruppe, denen Prednisolon verabreicht worden ist, hatten in der Woche 8 auf etwa 50% abgenommen, während Mäuse in der Experimentgruppe, denen Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata verabreicht worden sind, während 8 Wochen des Experiments signifikant niedrigere Titer von antinuklearen anti-dsDNA-Antikörpern zeigten als diejenigen in der Negativgruppe. Die Titer von antinukleären Antikörpern hatten in der Woche 8 bei Mäusen in der Experimentgruppe auf 34% abgenommen. Daher konnten Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata die Synthese von antinuklearen Antikörpern in SLE-Säugern wirksam inhibieren oder verzögern und die Selbstschädigungen durch antinukleäre Antikörper bei der Behandlung einer SLE-Erkrankung weiter vermindern.
Da andererseits Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata zur Inhibierung oder Verzögerung der massiven Synthese von antinukleären Antikörpern, die durch Autoimmunerkrankungen, wie z. B. SLE, verursacht wird, sowie zur Verminderung des Proteinurieniveaus aufgrund einer Nierenschädigung verwendet werden können, können sie daher bei Erkrankungen eingesetzt werden, bei denen antinukleare Antikörper gebildet werden und die eine Nierenschädigung verursachen, wie z. B. Skleroderm, Sjögren-Syndrom, allergische Purpurs, rheumatoide Nephritis, oder andere Autoimmunerkrankungen, welche die Schädigung von Geweben und Organen verursachen, einschließlich unter anderem der Haut, den Gelenken, dem Skelett, der Niere, dem kardiovaskulären System, dem Gerinnungssystem, dem Darm und Magen, der Serosa (Perikard, Pleura und Peritoneum) und des Nervensystems.
Darüber hinaus können Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata zur Verminderung von anti-dsDNA-Antikörpern verwendet werden, um die weitere Schädigung der Niere wirksam zu vermindern und die Niere zu schützen.
Die Verbindung 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon, die aus Antrodia camphorata gemäß der Erfindung isoliert worden ist, kann verwendet werden, um die Symptome von Autoimmunerkrankungen, wie z. B. hohe Proteinurieniveaus und hohe Konzentrationen antinukleärer Antikörper, wirksam zu behandeln, und ferner die Selbstschädigungen in Geweben und Organen durch diese Erkrankungen in Säugern, wie z. B. dem Menschen, zu vermindern. Darüber hinaus kann die Verbindung die Schäden für den Körper aufgrund einer Nierenerkrankung auf der Basis von Schutzeffekten verzögern. Andererseits handelt es sich bei den Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata um einen natürlichen Extrakt, der keine unangenehmen Nebenwirkungen, Toxizität oder Komplikationen verursacht. Sie können mit chemischen Arzneistoffen kombiniert werden, so dass niedrigere Dosierungen von Steroiden mit weniger toxischen Nebenwirkungen vorliegen. Darüber hinaus können sie in pharmazeutische Zusammensetzungen einbezogen werden. Die pharmazeutischen Zusammensetzungen umfassen nicht nur die Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata, sondern auch pharmazeutisch verträgliche Träger. Beispiele für solche Träger umfassen unter anderem Vehikel, wie z. B. Wasser, Füllstoffe, wie z. B. Saccharose oder Stärke, Bindemittel, wie z. B. Cellulosederivate, Verdünnungsmittel, Sprengmittel, Absorptionsverstärker oder Süßungsmittel. Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können durch Mischen von Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata mit mindestens einem der Träger mittels herkömmlicher Verfahren, die in dem technischen Gebiet der Pharmazie bekannt sind, hergestellt werden, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung unter anderem in der Form von Pulvern, Tabletten, Kapseln, Pellets, eines Granulats oder einer anderen, flüssigen Formulierung formuliert werden kann. Der Zweck der Prävention und Behandlung von Autoimmunerkrankungen, wie z. B. SLE, und von Nierenerkrankungen in Säugern, wie z. B. Menschen, kann dann erfüllt werden.
ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
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Zitierte Nicht-Patentliteratur

- I. H. Cherng und H. C. Chiang, 1995, Three new triterpenoids from Antrodia cinnamomea, J. Nat. Prod., 58, 365–371 [0006]
- C. H. Chen und S.W. Yang, 1995, New steroid acids from Antrodia cinnamomea – a fungus parasitic an Cinnamomum micranthum, J. Nat. Prod. 58, 1655–1661 [0006]
- C. H. Ueng, 1995, A sesquiterpene lactone, phenyl and biphenyl compounds from Antrodia cinnamomea, Phytochemistry, 39, 613-616 [0006]
- I. H. Cherng, D. P. Wu und H.C. Chiang, 1996, Triterpenoids from Antrodia cinnamomea, Phytochemistry 41, 263–267 [0006]
- S. W. Yang, Y. C. Shen und C. H. Chen, 1996, Steroids and triterpenoids of Antrodia cinnamomea – a fungus parasitic an Cinnamomum micranthum, Phytochemistry 41, 1389–1392 [0006]

Claims

Cyclohexenonverbindung aus Antrodia camphorata, die zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen verwendet wird, der folgenden Formel
worin X und Y Sauerstoff oder Schwefel sind, R₁, R₂ und R₃ jeweils ein Wasserstoffatom, Methyl oder (CH₂)_m-CH₃ ist und m = 1–12; n = 1–12.
Cyclohexenonverbindung nach Anspruch 1, wobei die Verbindung aus den organischen Lösungsmittel-Extrakten von Antrodia camphorata isoliert worden ist.
Cyclohexenonverbindung nach Anspruch 2, wobei die organischen Lösungsmittel aus der Gruppe, bestehend aus Alkoholen, Estern, Alkanen oder halogenierten Alkanen, ausgewählt sind.
Cyclohexenonverbindung nach Anspruch 3, wobei der Alkohol Ethanol ist.
Cyclohexenonverbindung nach Anspruch 1, wobei die Verbindung aus wässrigen Extrakten von Antrodia camphorata isoliert worden ist.
Cyclohexenonverbindung nach Anspruch 1, wobei die Verbindung 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon ist.
Cyclohexenonverbindung nach Anspruch 6, wobei die Verbindung die Nierenschädigung, die durch Autoimmunerkrankungen in Säugern verursacht wird, und die Schäden in Organen und Geweben, die durch antinukleare Antikörper verursacht werden, vermindern kann.
Cyclohexenonverbindung nach Anspruch 7, wobei der Säuger ein Mensch ist.
Cyclohexenonverbindung nach Anspruch 8, wobei die Autoimmunerkrankung systemischer Lupus erythematodes (SLE) ist.
Cyclohexenonverbindung nach Anspruch 9, wobei die Verbindung die Nierenschädigung, die durch SLE verursacht wird, auf der Basis einer verminderten Pro-teinurie in Säugern vermindern kann.
Cyclohexenonverbindung nach Anspruch 9, wobei die Verbindung die Schäden von Organen und Geweben, die durch SLE verursacht werden, auf der Basis der Verminderung des Titers von antinukleären Antikörpern (ANA) in Säugern vermindern kann.
Cyclohexenonverbindung nach Anspruch 11, wobei es sich bei den antinukleären Antikörpern um antinukleäre anti-dsDNA-Antikörper handelt.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen verwendet wird, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung mindestens einen Wirkstoff der Verbindung gemäß Anspruch 1 und einen pharmazeutisch verträglichen Träger umfasst.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 13, wobei die Autoimmunerkrankung systemischer Lupus erythematodes (SLE) ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen verwendet wird, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung mindestens einen Wirkstoff der Verbindung gemäß Anspruch 6 und einen pharmazeutisch verträglichen Träger umfasst.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 15, wobei die Autoimmunerkrankung systemischer Lupus erythematodes (SLE) ist.