CZ74196A3 - Peptides causing antibodies, process of their preparation, their use and an antibody caused thereby against genetically divergent strains hiv-1 - Google Patents

Peptides causing antibodies, process of their preparation, their use and an antibody caused thereby against genetically divergent strains hiv-1 Download PDF

Info

Publication number
CZ74196A3
CZ74196A3 CZ96741A CZ74196A CZ74196A3 CZ 74196 A3 CZ74196 A3 CZ 74196A3 CZ 96741 A CZ96741 A CZ 96741A CZ 74196 A CZ74196 A CZ 74196A CZ 74196 A3 CZ74196 A3 CZ 74196A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
hiv
peptides
amino acid
virus
nucleotide sequence
Prior art date
Application number
CZ96741A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ287808B6 (en
Inventor
Hermann Katinger
Thomas Muster
Original Assignee
Polymun Scient Immunbio Forsch
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Polymun Scient Immunbio Forsch filed Critical Polymun Scient Immunbio Forsch
Publication of CZ74196A3 publication Critical patent/CZ74196A3/cs
Publication of CZ287808B6 publication Critical patent/CZ287808B6/cs

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • A61P31/14Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18Antivirals for RNA viruses for HIV
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • A61P37/04Immunostimulants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011Details
    • C12N2740/10011Retroviridae
    • C12N2740/16011Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16111Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
    • C12N2740/16122New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Vynález se týká peptidů vyvolávajících neutralizující protilátky proti různým kmenům a klinickým izolátům HIV-1 a jimi vyvolaných protilátek a také se týká přípravy kombinací peptid-nosič, které účinně předávají tyto peptidy imunnímu systému. Především se vynález týká vývoji vakcíny proti HIV-1.
Dosavadní stav techniky
Získaný syndrom imunní nedostatečnosti (AIDS) je pokročilý stupeň klinického projevu dlouho setrvávající infekce virem lidské imunitní nedostatečnosti typu 1 (HIV-1). Imunní odezvy směřující na virus a virem infikované buňky v průběhu setrvávající infekce zpravidla selhávají při zneškodňování infekce. Vakciny mohou vyvolávat imunní odezvy, které by mohly předcházet ustavení setrvalé infekce nebo i předcházet postupu k AIDS. Většina vakcinových strategií proti HIV-1 se zaměřuje na jejich povrchový glykoprotein gplSO, který je vytvořen z gpl2O a gp41 a je zodpovědný za vázání viru na buněčný receptor CD4 a za spouštění následující fusní aktivity.
Avšak v souvislosti s gplSO byly pozorovány různé jevy, které svědčí proti použití celých gplSO nebo gp!2O jako imunogenů. Pri zkouškách in vitro se ukázalo, že synergismus mezi gpl2O a gpl20-specifickými protilátkami blokuje aktivaci lidských T-buněk.(Mittler a kol., Sciences, 245, str. 1380, 1989). Kromě toho je známo, že četné antigenové oblasti na gp160 navozují protilátky, které podporují HIV-1 infekci (Jiang a kol., J. Exp. Med., J74, str. 1557, 1991).
Použití syntetických peptidů jakožto imunogenů poskytuje četné výhody. Protilátky, vylučované syntetickými peptidy, mají předem stanovenou spec i f ic i-tu a v případě virů mohou být selektovány ke strukturám na povrchu’ virionů. Syntetické polypeptidy jsou rovněž zajímavé tím,.že mohou navozovat odezvy protilátek neznámé za normálních podmínek. Například je možné navozovat neutralizaci proti 1átek, .která má.širší reaktivitu než protilátky navozené ce. 1 ými přoťe i ny .( Sreen a kol., Cell, 28, 'str. 477, 1982).
Kromě toho peptid, obsahující část V3 vlásenky gpl2O z HIV—1 izolátu HIV-1 lib, navozuje protilátky, které chrání šimpanze proti viru vyvolávajícímu odezvu s týmž HIV—1 izolátem (Emini a kol., Nátuře, 355, str. 728, 1992).
Jelikož syntetické peptidy jako. takové mají špatnou imunogenicitu, mají se kopulovat na molekuly, které vytvářejí adjuvantní efekt, jako toxoid tetanu nebo klíšťatový hemocyanu (Bittle a kol.,. Nátuře, 298, str. 30, 1982). Jinou možností je klonování malých peptidů. jakožto fusních proteinů s glut.athion S-transferaso.u Schistosoma japonicum (Fikrig a kol., Science, 250, str. 553, 1990).
Kromě toho se' mohou používat jako vektory pro imunogeny viry jako například kravských neštovic, obrny nebo chřipky. Králíci naočkovaní rekombinantním virem kravských neštovic, obsahujícím sekvence hepatitis B povrchového antigénu (HBsAg), virového glykoproptei nu D herpes simplex a virového hemagglutini nu chřipky produkovaly protilátky ke všem třem cizím antigenům (Perkus a kol.. Science , 229, str. 981, 1985). Kromě toho chimerní virus obrny, který expresuje epitop z gp41 HIV—1 úspěšně navozuje neutralizaci protilátek proti HIV-1 u králíků (Evans a kol., Nátuře”,'
339, str. 385, 1989 ) .
*
V poslední době je také možné měnit genom viru chřipky mutagenesí in vitro (Enami a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 87, str. 3802, 1990). Tímto způsobem je možné konstruovat stabilní zeslabený virus chřipky A (Muster a kol. Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 88, str. 5177, 1991).
Výhoda viru chřipky v této Souvislosti je dostupnost mnoha variantů, což umožňuje opakovanou vakcínaci. Kromě toho virus chřipky navozuje silné sekreční a buněčné imunitní odezvy, což může být výhodné pro anti-HIV-1 vakcinu.
Podstata vynálezu
Peptid vyvolávající protilátky neutralizující aktivitu různých kmenů a/nebo klinických izolátů a/nebo klinických izolátů HIV-1 a/nebo inhibující fúzi buněk způsobenou HIV-1, epočíyá podle vynálezu v tom, že je tvořen aminokyselinovou sekvencí volenou ze souboru ELDKWAS, LELDKWAS, ELDNWAS, ELNKWAS, LELDNWAS a LELNKWAS.
Vynález se tedy týká peptidových sekvencí, které jsou^pouze minimálně imunogenické v kontextu celé gp16O, přičemž se pep^tidových sekvencí může použít k vyvolávání protilátek, které vykazují ··*$£ neutralizační působení proti různým kmenům a/nebo klinickým izolátům HIV-1 a/nebo které inhibují fusí buněk způsobovanou HíV-l u savců. ' cd
Vynález se také týká strategií vyvolávání sekrečních· protilátek vylučovaných ze sliznicových povrchů a řízených na virus HIV-1 a na virem infikované buňky. Podle vynálezu se předpokládá, že vyvolávání ’ anti-HIV-1 IgA protilátek ve sliznicových tkáních bude účinným nástrojem zvláště v profylaxi a prevenci potenciálně ohrožených jedinců infekcí HIV—1, jelikož četné virální infekce včetně HIV-1 se přenášejí cestou sliznicových povrchů dýchacího, gastro intestiná1 ηího a genitálního traktu.
Úkolů vynálezu se dosahuje přípravou malých peptidů se sedmi až osmi aminokyselinami chemickou syntézou nebo mikrobiálními způsoby, přičemž se peptidy s výhodou odvozují od nukleinových kyselinových sekvencí kódujících Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser (ELDKWAS v jednopísměnovém kódu), Leu Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser (LELDKWAS), Glu Leu Asn Lys Trp Ala Ser (ELNKWAS), Leu Glu Leu Asn- Lys Trp Ala Ser (LELNKWAS), Glu Leu Asp Asn Trp Ala Ser (ELDNWAS) nebo Leu Glu Leu Asp Asn Trp Ala Ser (LELDNWAS).
Alespoň jedna, s výhodou všech šest shora uvedených sekven4 cí aminokyselin (nadále označovaných jakožto uvedených šest AAS) se pak může účinně dodávat imunitnímu systému k navození vytváře'ní a uvolňování protilátek, které vykzují neutralizační účinnost proti kmenům HIV-1 a/nebo které mohou inhibovat fusi buněk, způsobovanou těmito viry.
Hlavním úkolem vynálezu je vyvinoout slibnou antí-HIV-1 vakcí nu na základe prostředku obsahujícího alespoň jeden s výhodou . však..směsi všech šesti shora uvedených peptidů. Speciální význaky a výhody podle vynálezu se nadále popisují.
Podle výhodného provedení vynálezu aminokyselinová sekvence _ _Glu Leji ^Asp JLys Trp Ala_ (ELDKWA) definující epi to povou.sekvenci lidské monoklonální protilátky 2F5 (získané z hybridomové buněčné linie 2F5, PHLS' deposit číslo 90091704, uložený 17. září 199Ό) se spojuje se Ser nebo s Leu a Ser, které jsou umístěny jako přilehlé k ELDKWA.sekvenci na gp41 definující 2F5 epitop. Čímž ustavují peptidové sekvence Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser (ELDKWAS) a Leu Glu Leu Asp Lys- Trp Ala Ser (LELDKWAS). a. jsou včleněny do nosičové molekuly, zvláště do antigenového místa B HA viru chřipky.
Modifikovaný “chi měrový HA f.usní protein, nesoucí cizí aminokysei i novou sekvenci ELDKWAS nebo LELDKWAS velmi účinně vyvolává protilátky zaměřené na dodané sekvence ELDKWAS nebo LELDKWAS ' po podání, zvláště injekční formou ^imunitnímu systému savců a zvláště lidem. Protilátky, získané tímto způsobem, vykazují neutr a 1 i začni akt i v i tu proti různým kmenům a/nebo klinickým izolátům HIV-1.
* Ukázalo se však, že v důsledku známého polymorfismu HIV-1 viru může docházet k mutacím i v rámci vysoce konservované aminokyselinové sekvence (L) ELDKWAS gp4t, což odpovídá aminokyselině 661-668 (LELDKWAS) nebo 662-668 (ELDKWAS) HIV-1 izolátu BH10. Číslování používané zde pro nukleotid a aminokyselinu odpovídá číslování gp160 HIV-1 isolátu BH10, používanému v Los Alamos databázi (Myers á kol., Data Base Human Retrovirus and Aids). Mutace zvláště ovlivňují Asp (D) a/nebo Lys (K) aminokyseliny v centru sekvence, čímž redukují náchylnost viru k neutralizaci protilátkami nesoucími 2F5 epitop. Tomuto nežádoucímu druhu virového únikového mechanismu by však mohlo být úspěšně čeleno použitím těchto peptidů podle vynálezu, přičemž buď Asp (D) nebo přilehlý Lys (K) je nahrazen asparaginem (N).
Alespoň jeden, s výhodou směs všech šesti peptidů se může použít pro výrobu farmaceutického prostředku k vyvolání protilátek, které vykazují neutralizační aktivitu proti různým kmenům a/nebo klinickým izolátům HIV-1 a/nebo ihnibujících fusi buněk způsobovanou HIV—1.
Podle jiného provedení se může stejných peptidů 'používat buď každého zvlášť nebo ve směsi s alespoň jedním jiným uvedeným peptidem pro výrobu farmaceutického prostředku k navození antiHIV—1 IgA protilátek vylučovaných ze sliznicových povrchů po podání savcům s výhodou intranasální cestou. í.
Podle dalšího provedení vynálezu se alespoň jeden z uvedených šesti peptidů váže na nosič. Takovým nosičem může být na- příklad virus, s výhodou ve své zeslabené a/nebo rekombinantní formě. S výhodou se může používat viru chřipky, baculoviru nebo viru kravských neštovic. Vázání malých peptidů na nosič například , na virální protein nebo na kompletní virus podporuje účinno,st na- -....1, vozování protilátky po dodání takových chiměrních kombinací pe ptid-nosič nebo chimerních fusních proteinů do imunitního systému.
Je zvláště výhodné použití shora uvedených peptidů jakožto fusních proteinů s virálním proteinem jakožto nosičem , přičemž alespoň jedna z aminokyselinových sekvencí podle vynálezu nahrazuje alespoň část virálního nosičové ho proteinu nebo je včleněna do alespoň jednoho antigenového místa virálního proteinu. Tato skutečnost proto představuje výhodné provedení. Podle výhodného provedení je tímto virálním proteinem hemaggl ut i n i n (HA) viru chřipky, neuraminidasa (NA) viru chřipky nebo povrchový antigen viru hepatitis B. Podle jiného provedení může být odvozen od s výhodou rekombinantního baculoviru nebo viru kravských neštovic.
Vynález se proto také týká použití kteréhokoliv ze shora identifikovaných peptidů, sestávajících ze sedmi nebo osmi aminokyselin a/nebo kombinací peotid-nosič nebo fusních proteinů k vý6 robě farmaceutiďfcého prostředku k vyvolání nebo k navození protilátek, které vykazují neutralizační aktivitu proti různým kmenům . a/nebo klinickým izolátům HIV-1 a/nebo které inhibují fusi buněk způsobenou HIV-1. Vynález se zvláště zaměřuje na výrobu účinné vakciny na bázi alespoň jednoho s výhodou však směsi všech šesti uvedených peptidů a/nebo všech šesti peptidů vázaných na nosič pro profylaktícké ošetření HIV-1 ohrožovaných jedinců a/nebo pro terapeutické ošetřování HIV-1 infikovaných jedinců, zvláště k předcházení postupu infekce k AIDS.
Podle dalšího výhodného provedení se uvedených šest peptidů a/nebo uvedených šest peptidů vázaných na nosič používá pro výrobu farmaceutických prostředků, které po podání imunitnímu systému savců vedou k navození anti-HIV-1 IgA protilátek vylučovaných ze sliznícových povrchů nemocných, z ví řa.t nebo lidí. V tomto případě je výhodné intranasální podání.
Proto uvedených šest peptidů a/nebo kombinací peptid-nosič podle vynálezu se může. použ í vat také pro. výrobu farmaceutických prostředků pro profylaxi a prevenci v případě, ohrožených jedinců i nť ekcí HIV-1.
Zdá se, že tato,zviáštní skutečnost podle vynálezu může zvyšovat naději, že cestou vyvolání anti-HIV-1 specifických sekrečních IgA protilátek ve sliznícových povrchách podle vynálezu’ je vytvořen medikální prostředek, který účinně napadá virální útoč-, niky ve velice prvním stadiu jejich vniknutí do těla savců. Je doměnka, že způsoby podle známého stavu techniky ošetřování HIV-1 infikovaných jedinců alespoň částečně selhávaly v boji proti onemocnění, jelikož virus byl pronásledován primárně v krevním řečišti a v pozdějším stadiu, to je po široké distribuci v humorá1 ní m systému.
Vynález se rovněž týká protilátky vykazující. HIV-1. neutralizační aktivitu a schopné předcházet fusi buněk způsobovanou HIV-1, která je vyvolávána jedním z uvedených šesti peptidů..
Podle výhodného provedení je touto protilátkou sekreční protilátka, s. výhodou anti-HIV-1 IgA protilátka a s výhodou vylučovaná sliznicovými povrchy.
Vynález se rovněž týká způsobu přípravy kteréhokoliv ze šesti uvedených peptidů buď chemickými nebo mikrobiálními způsoby.
Podle jednoho provedení vynálezu se uvedených.šest peptidů připravuje chemicky o sobě známými biochemickými způsoby, s výhodou za použití peptidového syntetizéru Applied Biosystems 431A Peptide Synthesizer.
Podle jiného provedení vynálezu se aminokyselinové sekvence získají mikrobiálňím způsobem, pří kterém se včleňuje nukleotidová sekvence volená ze souboru zahrnujícího
a) nukleotidovou sekvenci odpovídající jednomu z šesti uvedených peptidů,
b) nukleotidovou sekvenci hybridizujicí k jedné z nuk 1eot i dových sekvencí podle odstavce a)
c) nukleotidovou sekvenci odvozenou od jedné z nuk 1eoti dových sekvencí podle odstavce a) degenerací, i do genomu hostitelského organismu, provádí se exprese genomu běžnými mikrobiálními kultivačními způsoby a izoluje se alespoň jeden, s výhodou několik uvedených peptidů. i
Chimerové fusní proteiny nebo kombinace peptid-nosič se mohou připravovat tak, že se váže aminokyselinová sekvence volená ze souboru zahrnujícího šest uvedených peptidů na nosič, s výhodou na virus nebo na virální protein chemickými nebo mikrobiálními způsoby.
Podle výhodného provedení je způsob přípravy uvedených šesti peptidů vázaných na nosič, s výhodou na virus nebo na virální protein, mikrobiální, přičemž se váže nukleotídová sekvence volená ze souboru zahrnujícího
a) nukleotidovou sekvenci odpovídající jedné z uvedených aminokyselinových sekvencí uvedených šesti peptidů,
b) nukleotidovou sekvenci hybr i d i zu j i c i k jedné z nuk 1-eot i do vých sekvencí podle odstavce a)
c) nukleotidovou sekvenci odvozenou od jedné z nuk 1eoti dových sekvenci podle odstavce a) degeneraci, na nukleotidovou sekvenci odpovídající aminokyselinové sekvenci nosiče, převádí se vážené nukleotidové sekvence do hostitelského organismu, provádí se exprese vázané sekvence běžnými mikrobiálními způsoby a izoluje se alespoň jeden, s výhodou několik peptidů vázaných na nosič.
Podle' dalšího provedení způsobu přípravy uvedených šesti peptídů vázaných na nosič., s výhodou na virus nebo na virální pr.otein se váže alespoň jedna nukleotidová sekvence volená ze souborů zahrnujícího
a) nukleotidovou sekvenci odpovídající jedné z uvedených, aminokyselinových sekvencí, uvedených šesti peptidů,
b) nukleotidovou sekvenci hybridizující k jedné z nukleotidových ^sekvencí, pod l e^odstavce a) _ _ ........... ...., ....
c) nukleotidovou sekvenci odvozenou od jedné z nukleotidových sekvencí podle odstavce a) degenerací, na nukleotidovou sekvenci odpovídající aminokyselinové sekvenci virálního proteinu jakožto nosiče za nahrazování alespoň části aminokyselinové sekvenci vitío alespoň jednoho místa této nukleotidové sekvence odpovídající rálního proteinu nebo se včleňuje sekvence odpovídajícího antigenovému místu virálního prote.inu.
Podle výhodného provedení, se volí používaný virální protein ze souboru zahrnujícího hemagg1utinin víru chřipky, neuraminidasu viru chřipky a povrchový antigen viru hepatitis B a podle jiného charakteristického provedení se používá jako hostitelského organismu viru chřipky, baculoviru nebo viru kravských neštovic, vždy s výhodou v rekombinantní formě.
Včleňování sekvencí uvedených šesti peptidů do antigenových míst B HA kmenů chřipky jiných než WSN, kterýžto kmen je hlavně uváděn v následujících příkladech, vede stejně k fusi proteinů a/nebo chimeřových virů, které vyvolávají neutralizaci anti—HIV—1 protilátek a předcházejí buněčné fuse hnané HIV-1.
Také zavedení těchto sekvencí do jiných míst HA viru chřipky nebo do neuraminidasy (NA) viru chřipky vede k fusi proteinů peptid-nosič a/nebo’chimerických virů, které vyvolávají neutralizaci anti-HIV-1 protilátek a předcházejí buněčné fusi hnané HIV—1.
. Vynález objasňují, nijak však neomezují připojené obrázky a následující příklady praktického provedení.
Na obr. 1 je znázorněna specífíčnost lidské monoklonální protilátky 2 F 5. (viz příklad 1).
Na obr. 2 je znázorněna konstrukce chimerových hemagg1utininů nesoucích sekvenci epitopu 2F5 (víz příklad 2).
Na obr. 3 jsou znázorněny titry ELISA antísera myší imunizovaných chimerovými chřipkovými viry (viz příklad 3). Na ose x je vždy reciproční zředění sera.
Na obr. 4 jsou znázorněny titry myší imunizovaných buňkami infikovaných rekombinantními baculoviry (viz příklad 5). Na ose x je reciproční zředění sera.
Na obr. S jsou Iga nosní výtěry imunizovaných myší imunizovaných PFU intranasá1 ne. Na ose x je zředění.
Na obr. 6 jsou IgA trusu imunizovaných myší intranasá1 né (.;Sa) a intraperi toneá1 ně (6b) PFU. Na ose x je zředění. ;
Příklady provedení_vynálezu
Příklad 1 '
Mapování epi topu
Epitop monoklonální protilátky 2F5 se identifi kuje immunoblottingem způsobem, který popsal Towbin a kol. (Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 76, str.4350, 1979). Peptidy překrývajících se fragmentů gp41 HIV-1 isolátu BH10 se klonují jako fúzované peptidy s glutathiontransferasou. Různé fušované peptidy se získají hybridizací o 1 igonukIeotidů odpovídajících gp41, které se klonují mezi místem Bam HI a Eco Rl plasmidu pGEX-2T (Pharmacia). Rekombinantní plasmidy se transformují do kmene E.colí DH5 a exprese fušovaných proteinů se vyvolá isopropy1thioga1aktosidem (IPTG). Extrakt E.coli se pak čistí sloupci g1utathion-sepharosy 4B umístěnými na gelech dodecy1su1fát-po 1yakryIamidu sodného, oddělených e1ektroforézou a exprese proteinu se analysuje obarvením stříbrem a immunoblottingem (obr. 1). Údaje z immunoblottingu ukazují, že epitop lidské monoklonální protilátky 2F5 zahrnuje aminokyselinovou sekvenci ELDKWA odpovídající aminokyselinám 662-657 gp160.
Obr. 1 ukazuje immunobloty fušovaných peptidů 9 překrývajícími fragmenty gp16O HIV-1 (izolát BH-1O). Na rozdíl od konstrukcí, které zahrnují aminokyseliny 597 až 677 (pruh 2), 634 až 577 (pruh 3) a 648 až 677 (pruh 4), které byly reaktivní s protilátkou 2F5, nevykazuje fušovaný, peptid zahrnující aminokyseliny. 667 až 677 (pruh 5) pozitivní reakci. To je prvním náznakem, že epitop monoklonální protilátky 2F5 je tvořen aminokyselinami uvnitř sekvence gpl6O od místa 648 do 667. Na základě těchto výsledků byly fušovány překrývající 6-mer peptidy této oblasti s glutathion S-transferasou.
___„„„ JaK.v.yp.l ývá ,...z.„p br...w1 bpept i d, obsahuj íc í i no kyj^ selin Glu Leu Asp Lys Trp Ala (aminokyseliny 662 až 667, pruh 2) je vysoce reaktivní s proti 1átkou 2F5, zatímco peptidy obsahující sekvenci aminokyselin Leu Asp Lys Trp Ala Ser (LDKWAS, aminokyseliny 663 až 668, pruh 3) nebo Asp Lys Trp Ala Ser Leu (DKWASL aminokyse1 iny 664 až 669, pruh 4) vykazují sníženou reaktivitu s monoklonální protilátkou. Peptid, obsahující sekvenci aminokyselin Leu Glu Leu Asp Lys Trp (LELDKW, aminokyseliny 661 až 666, pruh 1), nevykazuje významnou reaktivitu. Tyto údaje ukazují, že epitop monoklonální protilátky obsahuje sekvencí aminokyselin Glu Leu Asp Lys Trp Ala (ELDKWA), která odpovídá aminokyselinám 662 až 667 na gplSO izolátu HIV-1 BH1O. V této souvislosti .jsou jak syntetický peptid odpovídající této epitopovó sekvenci, tak fušovaný protein, obsahující tuto sekvenci, schopny inhibovat neutralizaci zprostředkovanou protilátkou 2F5.
Příklad 2
Konstrukce plasmidů a chimerových chřipkových virů
Veškeré genetické manipulace se provádějí postupy, které popsal Sambrook a kol. (příručka Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory Press, New York, 1989). Jak je znázorněno na obr. 2, jsou sekvence.gp41 Leu Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser (LELDKWAS) nebo Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser (ELDKWAS) vloženy do antigenového místa B HA nebo chřipkového viru WSN.
1
Plasmidy pHA-ELDKWAS a pHA-LELDKWAS se konstruují náhradou fragmentu Pst I-Hind III plasmidu pT3/WSN-HAm1, který popsal Li a kol. (Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 90, str. 5214 až 5218; 1993) produktem PCR získaným pomocí pT3/WSN-HAm1 jako matrice a negativních a positivních primerů odvozených z chřipkového viru WSN HAml, přičemž positivní primer dále obsahuje vložení nukleotidu 2Γ nebo 24 odpovídající polohám gp 160 1981 nebo 1984 až 2004. Plasmidy pHA-ELNKWAS, pHA-LELNKWAS, pHA-ELDNWAS a pHA-LELDNWAS se připravují stejným způsobem.
Sekvenci WSN HA poskytuje Hiti a kol. (J .Virol., 41, str. 730 až 734, 1982) a sekvence gp160 je zajišťována vstupem do databáze Swissprot NVSHIV10. Transfekce RNA, odvozené od tohoto plasmidu, do buněk MD8K a selekce a příprava chimerových vi--rů se provádí způsobem, který popsal Enami a kol. (Proč. Natl.řAcad. Sci. 87, str, 3802 až 3805, 1990) s modifikacemi, které popsal Enami a Palese (J. Virol. 65, str. 2711 až 2713, 1991).
j
P ř i k 1 a d 3
Imunizace a protilátková odezva myší imunizovaných chimerovým chřipkovým virem
Myši OF—1 se imunizují chimerovým chřipkovým virem ELDKWAS (myši Ml, M2, M3, M4) nebo chřipkovým virem L ELDKWAS (myš M5) .
Myš.i se napřed imunizují intranasálně (i.n.) 102 TďDso s následující i.n. podpůrnou imunizací 5xl0s TCIDso po 6 týdnech, intraperitoneá 1 ní (i.p.) imunizací 20 pg sacharosou čištěného živého viru po třech měsících a konečnou podporou 20 pg SDS-denaturovaného viru v neúplném Freundově adjuvantu po dalších třítýdenních intervalech. K intranasální imunizaci jsou myši pod etherovou anesthesí. U kontrolního viru divokého typu WSN (wt 1, wt 2) se použije stejného protokolu. Myším se odebere krev 12 dní po poslední podpoře, antisera se inaktivují 1 hodinu při teplotě 56 'C a stanoví se titry ELISA a neutralizační aktivita antisér.
Na obr. 3A je znázorněna vazba chřipkového antisera ELDKWAS na glutationovou S-transferasu (GST) fušovaného peptidu obsahujíV*1· čího sekvenci ELDKWA na jeho C-konci. Sekvence se zjiátí pomocí ELISA. Fušovaným peptidem GST-ELDKWA se povlékají 96-důlkové mikrotitračňí destičky při 4 ůg/ml ( ΪΟΟ μΐ/ďůlek) v tihli č i tánovém pufru, o hodnotě pH 9,6, po dobu čtyř hodin při teplotě místnosti. Destičky se pak promyjí systémem PBS/0,05% Tween. Přidá se antiserum zředěné v systému PBS/1% BSA/0,05% Tween a inkubuje se pó dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Po promytí se protilátky zjišťují inkubací protilátkou kozí- anti-myší IgG s gama-řetězcem spojenou s křenovou peroxidázou. Destičky se obarví pomocí o-feny1endiamindihydrochloridu. Reakce se ukončí 2,5 M kyselinou sírovou„a desd čka se měří ( měř ί cí vl nová délka 492 nm, r ef e renční vlnová délka.620 nm).
Na obr. 3B je znázorněn stejný postup jako na obr. 3A s tou výjimkou, že se k detekci použije protilátek kozí anti-myší IgG s gama-řetězcem spojenou s křenovou peroxidázou. Neutralizační aktivita antiséra se zjišťuje testy inhibice syncicia. Reciproční zředění séra, které inhíbuje tvoření syncycia 50% (ECso) je uvedeno v tabulce I. Antiséra z myší M1 až M3 neutralizují celý zkušební panel při různýchzředěních.séra: Antiséra M4 a M5 neutralizují HIV—1 isoláty MN. a RF, nikoli však IIIB. Antiséra vytvořená virem WSN divokého typu ne neutra 1 i zují žádný z testovaných izolátů HIV-1 při nejnižším zředění séra (1:20).
Tabulka I
Neutralizace HIV—1 séry proti chimerovému chřipkovému viru
antiséra Neutralizační titr (ECso)
MN RF IIIB
M1 53 95 20
M2 2 4 . 40 160
M3 34 160 67
M4 . 29 24 nezkoušeno
M5 20 34 24
K testu inhibice syncycia je použito indikační buněčné linie
AA-2, kterou po psa l Cha f f ee a kol (J. Exp. Med, 168, str. 605,
1988) a jako zmrazených zásob vírových inoculum HIV—1 se. použije kmenů MN, RF a IIIB. Všechny zásoby viru jsou zředěny 101*9 až 102-5 TCIDso na ml. Myší antiséra jsou zředěna dvojnásobně v mediu a rozdělena do mi krotitrových destiček s 96 důlky (4 repliky pro každé zředění). Do SO pl zředěného antiséra se přidá 50 y 1 viru a směs viru a protilátky se předběžně inkubuje po dobu dvou hodin při teplotě 4 “C- K infikování se do každého důlku přidá 100 yl buněk AA-2 (5 x 106 buněk/ml); přítomnost syncycia se 2aznamenává po pěti dnech jako indikace infekce HIV—1. Stanovení 50% inhibiční dávky (ECso) se provádí způsobem, který popsal Reed a Muench (Am. J. Hyg., 27, str. 493 . Jsou patrna reciproční zředění séra, která inhibují vytváření syncycia z 50% (ECso).
P ř í k i a d 4
i. · **
Exprese chiměrových hemagg1utininů neoucích rozšířené epitopy 2F5 rekombinantními baculoviry
Způsobem popsaným v příkladu 1, se připraví chimerové hemagglutininy obsahující šest uvedených peptidů. Kódovací sekvence těchto chiměrových hernagglutinínů je lemována restrikcí enzymové ho místa BamHI a vložena do místa BamHI plasmidu (Bluebac III, In vitrogen, San Diego, CA). Transfekční experimety k získání rekomb i nan t η í c h baculovirů, jež obsahují chimerové hemagg1utininy, se provádějí způsoby, které popsal Groebe a kol. (Nucleic. Acids Res., 18: str. 4033, 1990) a Felgner a kol, (Proč. Nat. Acad. Sci. USA, 84: str. 7413, 1987). Výsledných rekombinantních chimerových baculovirů je možno použít k vyvolání protilátek neutralizujících HIV-1..
P ř i k 1 a d 5
Imunizace a protilátkové odezva myší imunizovaných buňkami infikovanými rekombinantními baculoviry
Buňky Sf9, kterých bylo použito k imunizaci, se infikují rekombi nantními baculoviry a mnohonásobnou infekcí (MOI) 1 až 5 a shromáždí še tři dny.po infikování. Buňky se promyj-í dvakrát PBS a resuspendují se ve sterilním PBS při koncentraci 5 x 106 buněk/ml. Tyto bguňky reagují specificky s monoklonální protilátkou 2F5 ve Western blots, Čímž indikují, že tyto buňky obsahují hemagg1utinin nesoucí sekvence ELDKWAS a LELDKWAS. Myši balb/cA se imunizují čtyřmi . intraperitoneá1 ní mi injekcemi 1 x 10$ infikovaných buněk ve dvaoutýdenních intervalech (Van Wyyke Coelingh a kol., Virology, 160, str. 4465, 1987). Sedm dní po čtvrté imunizaci je myším odebrána krev a stanoví se titry ELISA antiséra. Na obr. 4 je znázorněna vazba antiséra odvozeného z rekombinsntního ba c u 1 o v i ru na _syn t e t i c ký~ pe pt i d se sekvencí' GlyJSly Gly Glu Leu Asp Lys Trp Ala (GGGELDKWA) a- v ELISA provedné podle popisu uvedené ho v příkladu 2.
Indukce sekreční. ch protilátek
Imunizace provedená aplikováním alespoň jednou, s výhodou směsí, šesti uvedených peptidu vede k významné zlešeným titrům ĚLISA specifických pro IgG ELDKWA. Kromě toho, na rozdíl oproti imunizaci provedené pomocí sekvence ELDKWA, vede imunizace provedená ' šestí uvedenými peptidy také k významné odezvě IgA. S překvapením tato imunitní odezva se také spustila na 'sliznicové úrovni.
Příklad 6
Protilátky IgA v respiračních sekretech myší Balb/c imunizovaných chřipkovým virem ELDKWAS
Myši se imunizují 102 PFU intranasálně a podpoří se po čtyřech týdnech 105 PFU stejnou cestou. Třetí imunizace še provede intranasá1 ně (IN) nebo intraperitoneálně (IP) s 107 PFU po čtyřech dalších týdnech. Nosní výtěry se shromáždí osm dní po třetí imunizaci a reaktivita těchto vzorků s peptídem ELDKWA se stanoví zkouškou E.LISA. Jako kontrola se shromáždí a analyzují ( WT pool) nosní výtěry myší imunizovaných chřipkovým virem divokého typu (WT). Použije se stejného imunizačního schéma jako pro skupinu IN (víz obr. 5). Nosní sliznicí se produkují především vyvolané protilátky a lze rozeznat, že protilátkové titry jsou neobvykle vysoké. Z obr. 5 je dále také zřejmé, že intranasální aplikace chřipkového viru ELDKUAS vede k vyšším koncentracím HIV-1 neutralizačních protilátek než intraperitoneá1 ní aplikace.
Příklad 7
Protilátky IgA v intestiná1 ních sekretech myší Balb/c imunizovaných chřipkovým virem ELDKWAS
Myši se imunizují intranasálně 1 O2 PFU a stejnou cestou se podpoří 10s‘ PFU po čtyřech týdnech. Třetí imunizace se provede intranasálně (viz obr. Sa) nebo intraperitoneái né (obr. Sb) 1 O7 PFU po dalších čtyřech týdnech. Trus, obsahující protilátky uvolněné z intestinální sltznice, se shromáždí a extrahuje se osm dní po třetí imunizaci a reaktivita těchto vzorků s peptidem ELDKWA se stanoví zkouškou ELISA. Vzorky IN 0, IN R, IN B a IN S jsou od myší, které dostaly třetí imunizaci intranasálně a vzorky IPiO, IP R, IP RS a IP S jsou shromážděny od myší, jež dostaly třetí imun i zac i.
Průmyslová využitelnost
Peptidy vyvolávající neutralizující protilátky proti různým kmenům a klinickým izolátům HIV—1 a jimi vyvolané protilátky jsou vhodné pro přípravy kombinací peptid-nosič, které účinné předávají tyto peptidy imunnímu systému a jsou vhodné pro výrobu farmaceutické ho prostředku.

Claims (18)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Peptid vyvolávající protilátky neutra I i zuj-j-cí aktivitu různých kmenů a/nebo klinických izolátů a/nebo klinických izolátů HIV-1 a/nebo inhibující fusi buněk způsobenou HIV—1 , vyzná-
    č u j í c í .se t í m, že je tvořen ami nokyse1í novou sekvencí volenou ze souboru ELDKWAS, LELDKWAS, ELDNWAS, ELNKWAS, LELDNWAS a LELNKUAS. 2. Peptid“pod 1e nároku 1, v y z n a č u j í c í se t í m, _vázán^na nos i č . - · - ř •. .kiStfc- «W :,W|| Umí. __ 3. Peptid pod 1e nároku 2,- v y z n a č u j í c í se t í m,
    že je částí s výhodou rekombinantního viru, voleného s výhodou ze souboru zahrnujícího virus chřipky, baculovirus a virus kravských neštovic.
  2. 4. Peptid podle nároku 2 nebo 3, v y.z n a č u j í c í se t í m, že alespoň jedna z. aminokyselinových sekvencí nahrazuje alespoň částečně aminokyselinovou sekvenci virálního proteinu nebo je vložena do alespoň jednoho antigenového místa virálního proteinu.
  3. 5. Peptid podle nároku 4, v y z n a č u j í c í se tím, že virální protein je volen ze souboru zahrnujícího hemagglutinin (HA) viru chřipky, neuraminidasu (NA) viru chřipky a povrchový antigén viru hepatitis B.
  4. 6. Peptid podle nároku 4, v y z n a č u j í c í se tím, že virální protein je odvozen od s výhodou rekombinantního baculoviru nebo od viru kravských neštovic.
  5. 7. Použití alespoň jednoho, s výhodou všech šesti peptidů podle nároku I složených ze sekvence sedmi nebo- osmi aminokyselin, přičemž jsou aminokyse1 i nové sekvence voleny ze souboru ELDKWAS,
    LELDKWAS, ELDNWAS, ELNKWAS, LELDNWAS a LELNKWAS pro výrobu farmaceutického prostředku k vyvolání protilátek vykazujících neutralizační aktivitu proti různým kmenům a/nebo klinickým izolátům HIV—1 a/nebo inhibujícího fusi buněk způsobovanou HIV—1
  6. 8. Použití peptidu podle nároku 1 pro výrobu farmaceutického prostředku k navozování anti-HIV-1 IgA protilátek vylučovaných ze sliznicového povrchu po podání savcům 3 výhodou intranasální cestou.
  7. 9. Použití peptidu podle nároku 2 až 6 pro výrobu farmaceutického prostředku k vyvolání protilátek vykazujících neutralizační aktivitu proti různým kmenům a/nebo klinickým izolátům HIV—1 a/nebo inhibujícího fúzi buněk způsobovanou HIV-1.
  8. 10. Použití peptidu podle nároku 2 až 6 pro výrobu farmaceutického prostředku k navozování anti-HIV-1 IgA protilátek vylučovaných ze sliznicového povrchu po podání savcům s výhodou intranasální cestou.
  9. 11. Použití peptidu podle nároku 1 až 6 pro výrobu farmaceutického prostředku pro profylaxi a prevenci infekce HIV-1 u ohrožených jedinců.
  10. 12. Protilátka vykazující HIV-1 neutra 1 i začni účinnost a schopná předcházet fusi buněk způsobenenou HIV-1, vyznačují c í s e t í m , že je vyvolávaná jedním z peptidu podle nán á r o k u 1 .
  11. 13. Protilátka podle nároku 12, vyznačující se t í m, že je sekreční protilátkou, s výhodou anti-HIV-1 IgA protilátkou a s výhodou je sekretována sliznicovýmí povrchy.
  12. 14. Způsob přípravy peptidu podle nároku 1, vyznačující se tím, že alespoň jedna z aminokyselinových sekvencí je produkována chemickým nebo mikrobiálním způsobem.
  13. 15. Způsob podle nároku 14, vyznačující se tím, že je mikrobiální, přičemž se včleňuje nukleotidové sekvence volená ze souboru zahrnujícího 51
    a) nukleotidovou sekvencí odpovídající alespoň jedné z uvedených aminokyselinových sekvencí,
    b) nukleotidovou sekvenci hybridizující k jedné z nuk 1eoti dových sekvencí podle odstavce a)
    c) nukleotidovou sekvenci odvozenou od jedné z nukléotidových sekvencí podle odstávce a) degenerací, do .ge no mu, host.i te l.ské-ho^or.g.an i smu,,_.pr.o.vád Lse^e.xpxe.9.e„gejion)B. .běž-^— nými mikrobiálními kultivačními způsoby a izoluje se alespoň jeden, s výhodou několik uvedených peptidů.
  14. 16. Způsob přípravy peptidů podle nároku 2 až 6, v y z n ačující se t í m , že se váže aminokyselinová sekvence podle nároku 1 na nosič, s výhodou na virus nebo na virální protein chemickými nebo mikrobiálními způsoby.
  15. 17. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že je mikrobiální, přičemž se váže nukleotidové sekvence volená ze souboru zahrnujícího
    a) nukleotidovou sekvenci odpovídající alespoň jedné z uvedených aminokyselinových sekvencí,
    b) nukleotidovou sekvenci hybridizující k jedné z nuk 1eoti dových sekvencí podle odstavce a) c )_ n.ukl.eotj.d.oyo.u sekvenc i odvozenou od. jedné z nuk 1 eot i dových sekvencí podle odstavce a) degenerací, na nukleotidovou sekvenci nosiče, převádí se vázané odpovídající aminokyselinové sekvenci nukleotidové sekvence do hostitelského organismu, provádí se exprese vázané sekvence běžnými mikrobiálními způsoby a izoluje se alespoň jeden, s výhodou néko1 ik peptidů vázaných na nosič.
  16. 18.
    Způsob podle nároku 17, vyznačující se t t m , že alespoň jedna nukleotidové sekvence podle odstavce a) až c) se váže na nukleotidovou sekvenci odpovídající aminokyselinové sekvenci virálního proteinu jakožto nosiče za nahrazování alespoň nukleotidové sekvence odpovídající aminokyselinové sekvencí virálního proteinu nebo se včleňuje do alespoň jednoho místa této sekvence odpovídající antigenovému místu virálního proteinu.
  17. 19. Způsob podle nároku 18, vyznačující se t í m , že se používá nukleotidové sekvence odpovídající virálnímu proteinu volenému ze souboru zahrnujícího hemagg1uiti η in viru chřipky, neuraminidasu viru chřipky a povrchový antigen viru hepa t i t í s B.
  18. 20. Způsob podle nároku 15 a 17 až 19, vyznačují cí set i m , že se používá jako hostitelský organismus virus ze souboru zahrnujícího s výhodou rekombinantní virus chřipky, baculovirus a virus kravských neštovic.
CZ1996741A 1993-09-11 1994-09-12 Peptides inducing formation of antibodies, process of their preparation, their use and antibody induced thereby and acting against genetically divergent HIV-1 strains CZ287808B6 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP93114631 1993-09-11

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ74196A3 true CZ74196A3 (en) 1996-07-17
CZ287808B6 CZ287808B6 (en) 2001-02-14

Family

ID=8213253

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ1996741A CZ287808B6 (en) 1993-09-11 1994-09-12 Peptides inducing formation of antibodies, process of their preparation, their use and antibody induced thereby and acting against genetically divergent HIV-1 strains

Country Status (15)

Country Link
EP (1) EP0725825B1 (cs)
JP (1) JPH09502348A (cs)
CN (1) CN1135237A (cs)
AT (1) ATE199260T1 (cs)
AU (1) AU682893B2 (cs)
BR (1) BR9407531A (cs)
CA (1) CA2171544C (cs)
CZ (1) CZ287808B6 (cs)
DE (1) DE69426725T2 (cs)
ES (1) ES2156902T3 (cs)
HU (1) HU219507B (cs)
PT (1) PT725825E (cs)
RU (1) RU2181379C2 (cs)
UA (1) UA43350C2 (cs)
WO (1) WO1995007354A1 (cs)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996033219A1 (en) * 1995-04-19 1996-10-24 Polymun Scientific Immunbiologische Forschung Gmbh Monoclonal antibodies against hiv-1 and vaccines made thereof
US6319890B1 (en) 1996-12-30 2001-11-20 Manfred P. Dierich Inhibition of binding of complement Factor H
CA2324348C (en) * 1998-03-23 2006-03-14 Trimeris, Inc. Methods and compositions for peptide synthesis
US6482928B1 (en) 1999-04-13 2002-11-19 Aventis Pasteur Limited And University Of Toronto Fab′-epitope complex from HIV-1 cross-neutralizing monoclonal antibody 2F5
CN1172717C (zh) * 2000-08-18 2004-10-27 清华大学 一种治疗艾滋病的药物及其制备方法
FR2851165A1 (fr) * 2003-02-19 2004-08-20 Aventis Pasteur Antigene derivant de l'helice c de la proteine gp41
CA2604683C (en) 2005-04-12 2019-04-30 Duke University Method of inducing neutralizing antibodies to human immunodeficiency virus
EP1754715A1 (de) 2005-08-19 2007-02-21 Bundesrepublik Deutschland vertreten durch das Bundesminsterium für Gesundheit, dieses vertr. durch das Robert-Koch-Institut Impfstoff auf Basis virusneutralisierender Antikörper
WO2008127651A1 (en) 2007-04-13 2008-10-23 Duke University Method of inducing neutralizing antibodies to human immunodeficiency virus
MX2011007745A (es) * 2009-02-06 2011-12-08 Mymetics Corp Division de gp41.
US10076567B2 (en) 2013-09-27 2018-09-18 Duke University MPER-liposome conjugates and uses thereof

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE69311764T2 (de) * 1992-05-14 1998-02-05 Polymun Scient Immunbio Forsch Peptide, die Antikörper induzieren, die genetisch divergierende HIV-1 Isolationen neutralisieren
US5817767A (en) * 1993-02-24 1998-10-06 Progenics Pharmaceuticals, Inc. Synergistic composition of CD4-based protein and anti-HIV-1 antibody, and methods of using same

Also Published As

Publication number Publication date
UA43350C2 (uk) 2001-12-17
HU219507B (hu) 2001-04-28
CA2171544C (en) 2003-06-24
EP0725825B1 (en) 2001-02-21
EP0725825A1 (en) 1996-08-14
PT725825E (pt) 2001-08-30
JPH09502348A (ja) 1997-03-11
ES2156902T3 (es) 2001-08-01
CZ287808B6 (en) 2001-02-14
CA2171544A1 (en) 1995-03-16
WO1995007354A1 (en) 1995-03-16
ATE199260T1 (de) 2001-03-15
AU7696594A (en) 1995-03-27
AU682893B2 (en) 1997-10-23
DE69426725T2 (de) 2001-09-06
HU9600587D0 (en) 1996-05-28
CN1135237A (zh) 1996-11-06
BR9407531A (pt) 1997-08-26
RU2181379C2 (ru) 2002-04-20
HUT76102A (en) 1997-06-30
DE69426725D1 (de) 2001-03-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3369246B2 (ja) 遺伝的に分岐したhiv−1分離株を中和する抗体誘導能を有するペプチド
McLain et al. Stimulation of neutralizing antibodies to human immunodeficiency virus type 1 in three strains of mice immunized with a 22 amino acid peptide of gp41 expressed on the surface of a plant virus
HU211548A9 (en) Expression of specific immunogens using viral antigens
US8173767B2 (en) Synthetic peptide vaccines for HIV: the CBD epitope as an effective immunogen to elicit broadly neutralizing antibodies against HIV
JP3658690B2 (ja) ウイルスの膜蛋白質の天然ドメインの獲得方法、特にhivに対するワクチンとしてのそれらの使用
JP2006020635A (ja) 抗原的に標識した非感染性レトロウィルス様粒子
US6544752B1 (en) Anigenically-marked non-infectious retrovirus-like particles
JP2003529319A (ja) HIV−1gp41を標的化する広範に中和する抗体を誘発する方法
JP2000515368A (ja) Hivエンベロープポリペプチドおよびワクチン
EP0725825B1 (en) Peptides that elicit neutralizing antibodies against genetically divergent hiv-1 strains
JPH08500244A (ja) 抗−ネコ免疫不全ウィルス(fiv)ワクチン
Kalyan et al. Immunogenicity of recombinant influenza virus haemagglutinin carrying peptides from the envelope protein of human immunodeficiency virus type 1
US5691170A (en) Generation of hybrid genes and proteins by virus-mediated recombination
Weijer et al. Induction of feline leukaemia virus-neutralizing antibodies by immunization with synthetic peptides derived from the FeLV env gene
JPH07505878A (ja) Hivエンベロープ糖タンパク質から誘導された合成ポリペプチド
EP1802332A2 (en) Modified hiv-1 envelope proteins
JP4317912B2 (ja) エイズワクチン
US20100310592A1 (en) A truncated form of the hiv p17 protein
WO1995007099A1 (fr) Vaccin et procede pour sa production
McLain et al. Claudine Portal, George P. LomonossoffS and Nigel J. Dimmock* zyxwvutsrqponmlkjihgfedcbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHG

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20120912