CZ287808B6 - Peptides inducing formation of antibodies, process of their preparation, their use and antibody induced thereby and acting against genetically divergent HIV-1 strains - Google Patents
Peptides inducing formation of antibodies, process of their preparation, their use and antibody induced thereby and acting against genetically divergent HIV-1 strains Download PDFInfo
- Publication number
- CZ287808B6 CZ287808B6 CZ1996741A CZ74196A CZ287808B6 CZ 287808 B6 CZ287808 B6 CZ 287808B6 CZ 1996741 A CZ1996741 A CZ 1996741A CZ 74196 A CZ74196 A CZ 74196A CZ 287808 B6 CZ287808 B6 CZ 287808B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- hiv
- peptide
- virus
- nucleotide sequence
- peptides
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 85
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 50
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 title claims abstract description 46
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 30
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 claims abstract description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 claims abstract description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 6
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims description 39
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 30
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 27
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 27
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 claims description 20
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims description 17
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 15
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims description 14
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims description 12
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims description 12
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims description 12
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 7
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 7
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 claims description 6
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 claims description 6
- 229940033332 HIV-1 vaccine Drugs 0.000 claims description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 5
- 241000700626 Cowpox virus Species 0.000 claims description 4
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims description 3
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 32
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 abstract description 9
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 abstract description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 abstract description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 abstract description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 abstract 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 17
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 17
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 14
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- CNXOBMMOYZPPGS-NUTKFTJISA-N Lys-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CNXOBMMOYZPPGS-NUTKFTJISA-N 0.000 description 8
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 8
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 8
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 6
- QVFGXCVIXXBFHO-AVGNSLFASA-N Leu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QVFGXCVIXXBFHO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 6
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 6
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 6
- ZXRQJQCXPSMNMR-XIRDDKMYSA-N Asp-Lys-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N ZXRQJQCXPSMNMR-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 5
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 5
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 5
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 5
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 3
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N Ala-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)N HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- XFJKRRCWLTZIQA-XIRDDKMYSA-N Asn-Lys-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N XFJKRRCWLTZIQA-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- ICTXFVKYAGQURS-UBHSHLNASA-N Asp-Asn-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O ICTXFVKYAGQURS-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022717 Atypical chemokine receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N Glu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- VMKCPNBBPGGQBJ-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N VMKCPNBBPGGQBJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000678879 Homo sapiens Atypical chemokine receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- MYGQXVYRZMKRDB-SRVKXCTJSA-N Leu-Asp-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN MYGQXVYRZMKRDB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108091002531 OF-1 protein Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 241000242677 Schistosoma japonicum Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- AVYVKJMBNLPWRX-WFBYXXMGSA-N Trp-Ala-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 AVYVKJMBNLPWRX-WFBYXXMGSA-N 0.000 description 1
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 108010006886 Vitrogen Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001895 acrylonitrile-acrylic-styrene Polymers 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000001479 atomic absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2-diamine;hydron;dichloride Chemical compound Cl.Cl.NC1=CC=CC=C1N RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000002011 intestinal secretion Anatomy 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 208000010648 susceptibility to HIV infection Diseases 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Oblast techniky
Vynález se týká peptidů vyvolávajících neutralizující protilátky proti různým kmenům a klinickým izolátům HIV-1 a jimi vyvolaných protilátek a také se týká přípravy kombinací peptid-nosič, které účinně předávají tyto peptidy imunitnímu systému. Především se vynález týká vývoji vakcíny proti HIV-1.
Dosavadní stav techniky
Syndrom získané imunitní nedostatečnosti (AIDS) je pokročilý stupeň klinického projevu dlouho setrvávající infekce virem lidské imunitní nedostatečnosti typu 1 (HIV-1). Imunitní odezvy na virus a na virem infikované buňky v průběhu setrvávající infekce zpravidla selhávají při zneškodňování infekce. Vakcíny mohou vyvolávat imunitní odezvy, které by mohly předcházet ustavení setrvalé infekce nebo i předcházet postupu k AIDS. Většina vakcínových strategií proti HIV-1 se zaměřuje na jeho povrchový glykoprotein gpl60, který je vytvořen z gpl20 a gp41 a je zodpovědný za vázání viru na buněčný receptor CD4 a za spouštění následující fúzní aktivity.
Avšak v souvislosti s gpl60 byly pozorovány různé jevy, které svědčí proti použití celých gpl60 nebo gpl20 jako imunogenů. Při zkouškách in vitro se ukázalo, že synergismus mezi gpl20 a gpl20-specifickými protilátkami blokuje aktivaci lidských T-buněk (Mittler a kol., Sciences, 245, str. 1380, 1989). Kromě toho je známo, že četné antigenové oblasti na gpl60 navozují protilátky, které podporují HIV-1 infekci (Jiang a kol., J. Exp. med., 174, str. 1557, 1991).
Použití syntetických peptidů jakožto imunogenů poskytuje četné výhody. Protilátky, vylučované syntetickými peptidy, mají předem stanovenou specificitu a v případě virů mohou být selektovány ke strukturám na povrchu virionů. Syntetické polypeptidy jsou rovněž zajímavé tím, že mohou navozovat odezvy protilátek neznámé za normálních podmínek. Například je možné navozovat neutralizaci protilátek, která má širší reaktivitu než protilátky navozené celými proteiny (Green a kol., Cell, 28, str. 477, 1982).
Kromě toho peptid, obsahující část V3 vlásenky gpl20 z HIV 1 izolátu HIV-1 lib, vyvolává protilátky, které chrání šimpanze proti viru vyvolávajícímu odezvu s týmž HIV-1 izolátem (Emini a kol., Nátuře, 355, str. 728, 1992).
Jelikož syntetické peptidy jako takové mají špatnou imunogenicitu, mají se kopulovat na molekuly, které vytvářejí adjuvantní efekt, jako toxoid tetanu nebo klíšťatový hemocyan (Bittle a kol., Nátuře, 298, str. 30, 1982). Jinou možností je klonování malých peptidů jakož fuzních proteinů s glutathion S-transferasou Schistosoma japonicum (Fikrig a kol., Science, 250, str. 53, 1990).
Kromě toho se mohou používat jako vektory pro imunogeny viry jako například kravský neštovic, obrny nebo chřipky. Králíci naočkovaní rekombinantním virem kravských neštovic, obsahujícím sekvence hepatitis B povrchového antigenu (HBsAg), virového glykopropteinu D herpes simples a virového hemagllutininu chřipky produkovaly protilátky ke všem třem cizím antigenům (Perkus a kol., Science, 229, str. 981, 1985). Kromě toho chimámí virus obrny, který vytlačuje epitom zgp41 HIV-1, úspěšně navozuje neutralizaci protilátek proti HIV-1 u králíků (Evans a kol., Nátuře, 339, str. 385,1989).
-1 CZ 287808 B6
V poslední době je také možné měnit genom viru chřipky mutagenezí in vitro (Enami a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 87, str. 3802, 1990). Tímto způsobem je možné konstatovat stabilní zeslabený virus chřipky A (Muster a kol. Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 88, str. 5177, 1991).
Výhoda viru chřipky v této souvislosti je dostupnost mnoha variant, což umožňuje opakovanou vakcinaci. Kromě toho virus chřipky vyvolává silné sekvenční a buněčné imunitní odezvy, což může být výhodné pro anti-HIV-1 vakcínu.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je peptid vyvolávající protilátky, které vykazují neutralizující aktivitu proti různým kmenům a/nebo klinickým izolátům HIV-1 a/nebo inhibují fúzi buněk způsobenou HIV1, tvořený aminokyselinovou sekvencí volenou ze souboru ELDWAS, LELDKWAS, ELDNWAS, ELNKWAS, LELDNWAS a LELNKWAS.
Vynález se tedy týká peptidových sekvencí, které jsou pouze minimálně imunogenické v kontextu celé gpl60, přičemž se peptidových sekvencí může použít k vyvolávání protilátek, které vykazují neutralizační působení proti různým kmenům a/nebo klinickým izolátům HIV-1 a/nebo které inhibují fúzi buněk způsobenou HIV-1 u savců.
Vynález se také týká strategií vyvolávání sekvenčních protilátek vylučovaných ze sliznicových povrchů a řízených na virus HIV-1 a na virem infikované buňky. Podle vynálezu se předpokládá, že vyvolávání anti-HIV-1 IgA protilátek ve sliznicových tkáních bude účinným nástrojem zvláště v profylaxi a prevenci potenciálně ohrožených jedinců infekcí HIV-1, jelikož četné virové infekce včetně HIV-1 se přenášejí cestou sliznicových povrchů dýchacího gastrointestinálního a genitálního traktu.
Úkolů vynálezu se dosahuje přípravou malých peptidů se sedmi až osmi aminokyselinami chemickou přípravou nebo mikrobiálními způsoby, přičemž se peptidy s výhodou odvozují od nukleonových kyselinových sekvencí kódující Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser (ELDKWAS v jednopísmenovém kódu), Leu Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser (LELDWAS), Glu Leu Asn Lys Trp Ala Ser (ELNKWAS), Leu Glu Leu Asn Lys Trp Ala Ser (LELNKWAS), Glu Leu Asp Asn Trp Ala Ser (ELDNWAS) nebo Leu Glu Leu Asp Asn Trp Ala Ser (LELDNWAS).
Alespoň jedna, s výhodou všech šest shora uvedených sekvencí aminokyselin (nadále označovaných jakožto „uvedených šest AAS“) se pak může účinně dodávat imunitnímu systému k vyvolání vytváření a uvolňování protilátek, které vykazují neutralizační účinnost proti kmenům HIV-1 a/nebo které mohou inhibovat fúzi buněk, způsobovanou těmito viry.
Hlavním úkolem vynálezu je vyvinout slibnou anti-HIV-1 vakcínu na základě prostředku obsahujícího alespoň jeden, s výhodou však směsi všech šesti shora uvedených peptidů. Vynález blíže objasňuje následující popis.
Podle výhodného provedení vynálezu aminokyselinová sekvence Glu Leu Asp Lys Trp Ala (ELDKWA) definující epitopovou sekvenci lidské monoklonální protilátky 2F5 (získané zhybridomové buněčné linie 2F5, PHLS deposit číslo 90091704, uložený 17. září 1990) se spojuje se Ser nebo s Leu a Ser, které jsou umístěny jako přilehlé k ELDKWA sekvenci na gp41 definující 2F5 epitop, čímž ustavují peptidové sekvence Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser (ELDKWAS) a Leu Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser (LELDKWAS) a jsou včleněny do nosičové molekuly, zvláště do antigenového místa B HA viru chřipky.
Modifikovaný „chimemí“ HA fúzní protein, nesoucí cizí aminokyselinovou sekvenci ELDKWAS nebo LELDKWAS velmi účinně vyvolává protilátky zaměřené na dodané sekvence ELDKWAS nebo LELDKWAS po podání, zvláště injekční formou imunitnímu systému savců a
-2CZ 287808 B6 zvláště lidem. Protilátky, získané tímto způsobem, vykazují neutralizační aktivitu proti různým kmenům a/nebo klinickým izolátům HIV-1.
Ukázalo se však, že v důsledku známého polymorfismu HIV-1 viru může docházet k mutacím i v rámci vysoce konservované aminokyselinové sekvence (L) ELDKWAS gp41, což odpovídá aminokyselině 661-668 (LELDKWAS) nebo 662-668 (ELDKWAS) HIV-1 izolátu BH10. Číslování používané zde pro nukleotid a aminokyselinu odpovídá číslování gpl60 HIV-1 izolátu BH10, používanému v Los Alamos databázi (Myers a kol., Data Base Human Retrovirus and Aids). Mutace zvláště ovlivňují Asp (D) a/nebo Lys (K) aminokyseliny v centru sekvence, čímž redukují náchylnost viru k neutralizaci protilátkami nesoucími 2F5 epitop. Tomuto nežádoucímu druhu virového únikového mechanismu by však mohlo být úspěšně čeleno použitím těchto peptidů podle vynálezu, přičemž buď Asp (D), nebo přilehlv Lys (K) je nahrazen asparaginem (N).
Alespoň jeden, s výhodou směs všech šesti peptidů se může použít pro výrobu farmaceutického prostředku k vyvolání protilátek, které vykazují neutralizační aktivitu proti různým kmenům a/nebo klinickým izolátům HIV-1 a/nebo inhibujících fúzí buněk způsobovanou HIV-1.
Podle jiného provedení se může stejných peptidů používat buď každého zvlášť, nebo ve směsi s alespoň jedním jiným uvedeným peptidem pro výrobu farmaceutického prostředku k vyvolání anti-HIV-1 IgA protilátek vylučovaných ze sliznicových povrchů po podání savcům s výhodou intranasální cestou.
Podle dalšího provedení vynálezu se alespoň jeden z uvedených šesti peptidů váže na nosič. Takovým nosičem může být například virus, s výhodou ve své zeslabené a/nebo rekombinantní formě. S výhodou se může používat viru chřipky, baculoviru nebo viru kravských neštovic. Vázání malých peptidů na nosič například na virový protein nebo na kompletní virus podporuje účinnost navozování protilátky po dodání takových chimemích kombinací peptid-nosič nebo chimemích fúzních proteinů do imunitního systému.
Je zvláště výhodné použití shora uvedených peptidů jakožto fuzních proteinů s virovým proteinem jakožto nosičem, přičemž alespoň jedna z aminokyselinových sekvencí podle vynálezu nahrazuje alespoň část virového nosičového proteinu nebo je včleněna do alespoň jednoho antigenového místa virového proteinu. Tato skutečnost proto představuje výhodné provedení. Podle výhodného provedení je tímto virovým proteinem hemagglutinin (HA) viru chřipky, neuraminidasa (NA) viru chřipky nebo povrchový antigen viru hepatitis B. Podle jiného provedení může být odvozen od s výhodou rekombinantního baculoviru nebo viru kravských neštovic.
Vynález se proto také týká použití kteréhokoliv ze shora identifikovaných peptidů, sestávajících ze sedmi nebo osmi aminokyselin a/nebo kombinací peptid-nosič nebo fuzních proteinů k výrobě farmaceutického prostředku k vyvolání nebo k navození tvorby protilátek, které vykazují neutralizační aktivitu proti různým kmenům a/nebo klinickým izolátům HIV-1 a/nebo které inhibují fúzi buněk způsobenou HIV-1. Vynález se zvláště zaměřuje na výrobu účinné vakcíny na bázi alespoň jednoho s výhodou však směsi všech šesti uvedených peptidů a/nebo všech šesti peptidů vázaných na nosič pro profylaktické ošetření HIV-1 ohrožovaných jedinců a/nebo pro terapeutické ošetřování HIV-1 infikovaných jedinců, zvláště k předcházení postupu infekce k AIDS.
Podle dalšího výhodného provedení se uvedených šest peptidů a/nebo uvedených šest peptidů, vázaných na nosič, používá pro výrobu farmaceutických prostředků, které po podání imunitnímu systému savců vedou k vytváření anti-HIV-1 IgA protilátek vylučovaných ze sliznicových povrchů nemocných zvířat nebo lidí. V tomto případě je výhodné intranasální podání.
-3CZ 287808 B6
Proto uvedených šest peptidu a/nebo kombinací peptid-nosič podle vynálezu se může používat také pro výrobu farmaceutických prostředků pro profylaxi a prevenci v případě ohrožených jedinců infekcí HIV-1.
Zdá se, že tato zvláštní skutečnost podle vynálezu může zvyšovat naději, že cestou vyvolání antiHIV-1 specifických sekvenčních IgA protilátek ve sliznicovém povrhu podle vynálezu je vytvořen medikální prostředek, který účinně napadá viiy hned po jejich vniknutí do těla savců. Je domněnka, že známé způsoby ošetřování jedinců infikovaných HIV-1 alespoň částečně selhávaly v boji proti onemocnění, jelikož virus byl ničen primárně v krevním řečišti a v pozdějším stadiu, to je po široké distribuci v humorálním systému.
Vynález se rovněž týká protilátky vykazující HIV-1 neutralizační aktivitu a schopné předcházet fúzi buněk způsobovanou HIV-1, která je vyvolávána jedním z uvedených šesti peptidů.
Podle výhodného provedení je touto protilátkou sekreční protilátka, s výhodou anti-HIV-1 IgA protilátka a s výhodou vylučovaná sliznicovými povrchy.
Způsob přípravy peptidu, vázaného na virový nosič podle vynálezu spočívá v tom, že se váže nukleotidová sekvence volená ze souboru zahrnujícího
a) nukleotidovou sekvenci odpovídající jedné z aminokyselinových sekvencí ELDKWAS, LELDKWAS, ELDNWAS, ELNKWAS, LELDNWAS a LELNKWAS,
b) nukleotidovou sekvenci hybridizující na jednu z nukleotidových sekvencí podle odstavce a) v takové míře, že kóduje peptid, který je reaktivní s monoklonální protilátkou 2F5,
c) nukleotidovou sekvenci odvozenou od jedné z nukleotidových sekvencí podle odstavce a) degenerace v takové míře, že kóduje peptid, který je reaktivní s monoklonální protilátkou 2F5, na nukleotidovou sekvenci viru, s výhodou viru chřipky, baculoviru a virus kravských neštovic, se vázaná nukleotidová sekvence se transfektuje do hostitelského organismu, kterým je živá buňka, například buňka MCBK, provádí se exprese vázané sekvence a izoluje se alespoň jeden, s výhodou několik získaných peptidů, vázaných na virové proteiny.
Vynález se rovněž týká způsobu přípravy kteréhokoliv ze šesti uvedených peptidů buď chemickými nebo mikrobiálními způsoby.
Podle jednoho provedení vynálezu se uvedených šest peptidů připravuje chemicky o sobě známými biochemickými způsoby, s výhodou za použití peptidového syntetizéru Applied Biosystems 431S Peptide Synthesizer.
Chimémí fúzní proteiny nebo kombinace peptid-nosič se mohou připravovat tak, že se váže aminokyselinová sekvence volená ze souboru zahrnujícího šest uvedených peptidů na nosič, s výhodou na virus nebo na virový protein chemickými nebo mikrobiálními způsoby.
Podle výhodného provedení je způsob přípravy uvedených šesti peptidů vázaných na nosič, s výhodou na virus nebo na virový protein, mikrobiální, přičemž se váže nukleotidová sekvence volená ze souboru zahrnujícího
a) nukleotidovou sekvenci odpovídající jedné z uvedených aminokyselinových sekvencí uvedených šesti peptidů,
b) nukleotidovou sekvenci hybridizující k jedné z nukleotidových sekvencí podle odstavce a)
c) nukleotidovou sekvenci odvozenou od jedné z nukleotidových sekvencí podle odstavce a) degenerací,
-4CZ 287808 B6 na nukleotidovou sekvenci odpovídající aminokyselinové sekvenci nosiče, převádí se vázané nukleotidové sekvence do hostitelského organismu, provádí se exprese vázané sekvence běžnými mikrobiálními způsoby a izoluje se alespoň jeden, s výhodou několik peptidů vázaných na nosič.
Podle dalšího provedení způsobu přípravy uvedených šesti peptidů vázaných na nosič, s výhodou na virus nebo na virový protein se váže alespoň jedna nukleotidová sekvence volená ze souboru zahrnujícího
a) nukleotidovou sekvenci odpovídající jedné z uvedených aminokyselinových sekvencí uvedených šesti peptidů,
b) nukleotidovou sekvenci hybridizující k jedné z nukleotidových sekvencí podle odstavce a)
c) nukleotidovou sekvenci odvozenou od jedné z nukleotidových sekvencí podle odstavce a) degenerací, na nukleotidovou sekvenci odpovídající aminokyselinové sekvenci virového proteinu jakožto nosiče za nahrazování alespoň části nukleotidové sekvence odpovídající aminokyselinové sekvenci virového proteinu nebo se včleňuje do alespoň jednoho místa této sekvence odpovídajícího antigenovému místu virového proteinu.
Podle výhodného provedení se volí používaný virový protein ze souboru zahrnujícího hemagglutinin viru chřipky, neuraminidasu viru chřipky a povrchový antigen viru hepatitis B a podle jiného charakteristického provedení se používá jako hostitelského organismu viru chřipky, baculoviru nebo viru kravských neštovic, vždy s výhodou v rekombinantní formě.
Včleňování sekvencí uvedených šesti peptidů do antigenových míst B HA kmenů chřipky jiných než WSN, přičemž tento kmen je hlavně uváděn v následujících příkladech, vede stejně k fúzi proteinů a/nebo chimemích virů, které vyvolávají neutralizaci anti-HIV-1 protilátek a předcházejí buněčné fuze způsobované HIV-1.
Také zavedení těchto sekvencí do jiných míst HA viru chřipky nebo do nauraminidasy (NA) viru chřipky vede k fúzi proteinů peptid-nosič a/nebo chimemích virů, které vyvolávají neutralizaci anti-HIV-1 protilátek a předcházejí buněčné fůzi způsobované HIV-1.
Přehled obrázků na výkresech
Vynález objasňují, nijak však neomezují připojené obrázky a následující příklady praktického provedení.
Na obr. 1 je znázorněna specifičnost lidské monoklonální protilátky 2F5 (viz příklad 1).
Na obr. 2 je znázorněna konstrukce chimemích hemagglutininů nesoucích sekvenci epitopu 2F5 (viz příklad 2).
Na obr. 3 jsou znázorněny titry ELISA antiséra myší imunizovaných chimémími chřipkovými viry (viz příklad 3). Na ose x je vždy reciproční zředění sera.
Na obr. 4 jsou znázorněny titry myší imunizovaných buňkami infikovaných rekombinantními baculoviry (viz příklad 5). Na ose x je reciproční zředění sera.
Na obr. 5 jsou Iga nosní výtěry myší imunizovaných PFU intranasálně. Na ose x je zředění.
Na obr. 6 jsou IgA trusu imunizovaných myší intranasálně (6a) a intraperitoneálně (6b) PFU. Na ose x je zředění.
-5CZ 287808 B6
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Mapování epitopu
Epitop monoklonální protilátky 2F5 se identifikuje immunoblottingem způsobem, který popsal 10 Towbin a kol. (Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 76, str. 4350, 1979). Peptidy překrývajících se fragmentů gp41 HIV-1 izolátu BH10 se klonují jako fúzované peptidy s glutathiontransferázou. Různé fúzované peptidy se získají hybridizací oligonukleotidů odpovídajících gp41, které se klonují mezi místem Bam HI a Eco Rl plazmidu pGEX-2T (Pharmacia). Rekombinantní plazmidy se transformují do kmene E.coli DH5 a exprese fúzovaných proteinů se vyvolá 15 isopropylthiogalaktosidem (IPIG). Extrakt E. coli se pak čistí sloupci glutathion-sepharosy 4B umístěnými na gelech dodecylsulfát-polyakrylamidu sodného, oddělených elektroforézou a exprese proteinu se analyzuje obarvením stříbrem a immunoblottingem. Údaje z immunoblottingu ukazují, že epitop lidské monoklonální protilátky 2F5 zahrnuje aminokyselinovou sekvenci ELDKWA odpovídající aminokyselinám 662-667 gpl60.
Obr. la ukazuje immunobloty fúzovaných peptidů s překrývajícími fragmenty gpl60 HIV-1 (izolát BH10). Na rozdíl od konstrukcí, které zahrnují aminokyseliny 597 až 677 (pruh 2), 634 až 677 (pruh 3) a 648 až 677 (pruh 4), které byly reaktivní s protilátkou 2F5, nevykazuje fúzovaný peptid zahrnující aminokyseliny 667 až 677 (pruh 5) pozitivní reakci. To je prvním náznakem, že 25 epitop monoklonální protilátky 2F5 je tvořen aminokyselinami uvnitř sekvence gpl60 od místa
648 do 667. Na základě těchto výsledků byly fúzovány překrývající 6-mer peptidy této oblasti s glutathion S-transferasou.
Jak vyplývá z obr. lb, peptid obsahující sekvenci aminokyselin Glu Leu Asp Lys Trp Ala 30 (aminokyseliny 662 až 667, pruh 2) je vysoce reaktivní s protilátkou 2F5, zatímco peptidy obsahující sekvenci aminokyselin Leu Asp Lys Trp Ala Ser (LDKWAS, aminokyseliny 663 až 668, pruh 3) nebo Asp Lys Trp Ala Ser Leu (DKWASL aminokyseliny 664 až 669, pruh 4) vykazují sníženou reaktivitu s monoklonální protilátkou. Peptid, obsahující sekvenci aminokyselin Leu Glu leu Asp lys Trp (LELDKW, aminokyseliny 661 až 666, pruh 1), 35 nevykazuje významnou reaktivit. Tyto údaje ukazují, že epitop monoklonální protilátky obsahuje sekvenci aminokyselin Glu Leu Asp Lys Trp Ala (ELDKWA), která odpovídá aminokyselinám 662 až 667 na gpl60 izolátu HIV-1 BH10. V této souvislosti jsou jak syntetický peptid odpovídající této epitopové sekvenci, tak fúzovaný protein, obsahující tuto sekvenci, schopny inhibovat neutralizaci zprostředkovanou protilátkou 2F5.
Příklad 2
Konstrukce plazmidů a chimemích chřipkových virů
Veškeré genetické manipulace se provádějí postupy, které popsal Sambrook a kol. (příručka „Molecular Cloning“ A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory Press, New York, 1989). Jak je znázorněno na obr. 2, jsou sekvence gp41 Leu Glu Leu Apd Lys Trp Ala Ser (LELDKWAS) nebo Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser (ELDKWAS) vloženy do antigenového místa 50 B HA nebo chřipkového viru WSN. Plazmidy pHA-ELDKWAS a pHA-LELDKWAS se konstruují náhradou fragmentu Pst I-Hind III Plazmidu pT3/WSN-HAml, který popsal Li a kol. (Proč. nati. Acad. Sci. USA, 90, str. 5214 až 5218; 1993) produktem PCR získaným pomocí PT3/WSN-HAml jako matrice a negativních a positivních primerů odvozených z chřipkového viru WSN HAml, přičemž positivní primer dále obsahuje vložení nukleotidu 21 nebo 24
-6CZ 287808 B6 odpovídající polohám gp 160 1981 nebo 1984 až 2004. Plazmidy pHA-ELNKWAS, pHALELNKWAS, pHA-ELDNWAS a pHA-LELDNWAS se připravují stejným způsobem.
Sekvenci WSN HA poskytuje Hiti a kol. (J. Virol., 41, str. 730 až 734, 1982) a sekvence gpl60 je zajišťována vstupem do databáze Swissprot NVSHIV10. Transfekce RNA, odvozené do tohoto plazmidu, do buněk MDBK a selekce a příprava chimemích virů se provádí způsobem, kteiý popsal Enami a kol. (Proč. Nati. Acad. Sci. 87, str. 3802 až 3805, 1990) s modifikacemi, které popsal Enami a Palese (J. Virol. 65, str. 2711 až 2713, 1991).
Příklad 3
Imunizace a protilátková odezva myší imunizovaných chimémím chřipkovým virem
Myši OF-1 se imunizují chimémím chřipkovým virem ELDKWAS (myši Ml, M2, M3, M4) nebo chřipkovým virem L ELDKWAS (myš M5). Myši se napřed imunizují intranasálně (i.n.) 102 TCID50 s následující i.n. podpůrnou imunizací 5x105 TCID50 po 6 týdnech, intraperitoneální (i.p.) imunizací 20 pg sacharosou čištěného živého viru po třech měsících a konečnou podporou 20 pg SDS-denaturovaného viru v neúplném Freundově adjuvantu po dalších třítýdenních intervalech. K intranasální imunizaci jsou myši pod etherovou anestézí. U kontrolního viru divokého typu WSN (wt 1, wt 2) se použije stejného protokolu. Myším se odebere krev 12 dní po poslední podpoře, antiséra se inaktivují 1 hodinu při teplotě 56 °C a stanoví se titry ELISA a neutr alizační aktivita antisér.
Na obr. 3A je znázorněna vazba chřipkového antiséra ELDWAS na glutationovou S-transferázu (GST) fúzovaného peptidu obsahujícího sekvenci ELDKWA na jeho C-konci. Sekvence se zajistí pomocí ELISA. Fúzovaným peptidem GST-ELDKWA se povlékají 96-důlkové mikrotitrační destičky při 4 pg/ml (100 pl/důlek) v uhličitanovém pufru, o hodnotě pH 9,6, po dobu čtyř hodin při teplotě místnosti. Destičky se pak promyjí systémem PBS/0,05% Tween. přidá se antisérum zředěné v systému PBS/1% BSA/0,05 Tween. Přidá se antisérum zředěné v systému PBS/1% BSA/0,05% Tween a inkubuje se po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Po promytí se protilátka zjišťují inkubací protilátkou kozí anti-myší IgG s gama-řetězcem spojenou s křenovou peroxidázou. Destičky se obarví pomocí o-fenylendiamindihydrochloridu. Reakce se ukončí 2,5 M kyselinou sírovou a destička se měří (měřicí vlnová délka 492 nm, referenční vlnová délka 620 nm).
Na obr. 3B je znázorněn stejný postup jako na obr. 3A s tou výjimkou, že se k detekci použije protilátek kozí anti-myší IgG s gama-řetězcem spojenou s křenovou peroxidázou. Neutralizační aktivita antiséra se zjišťuje testy inhibice syncicia. Reciproční zředění séra, které inhibuje tvoření syncycia 50% (EC50) je uvedeno v tabulce I. Antiséra z myší Ml až M3 neutralizují celý zkušební panel při různých zředěních séra. Antiséra M4 a M5 neutralizují HIV-1 izoláty MN a RF, nikoli však IIIB. Antiséra vytvořená virem WSN divokého typu neneutralizují žádný z testovaných izolátů HIV-1 při nejnižším zředění séra (1:20).
Tabulka 1
Neutralizace HIV-1 séry proti chimémímu chřipkovému viru
Neutralizační titr (EC50)
| antiséra | MN | RF | IIIB |
| Ml | 53 | 95 | 20 |
| M2 | 24 | 40 | 160 |
| M3 | 34 | 160 | 67 |
| M4 | 29 | 24 | nezkoušeno |
| M5 | 20 | 34 | 24 |
K testu inhibice syncycia je použito indikační buněčné linie AA-2, kterou popsal Chaffee a kol (J. Exp. Med. 168, str. 605, 1988) a jako zmrazených zásob virových inocolum HIV-1 se použije kmenů MN, Rf a IIIB. Všechny zásoby viru jsou zředěny 101,9 až 102’5 TCID50 na ml. Myší 5 antiséra jsou zředěna dvojnásobně v médiu a rozdělena do mikrotitrových destiček s 96 důlky (4 repliky pro každé zředění). DO 50 μΐ zředěného antiséra se přidá 50 μΐ viru a směs viru a protilátky se předběžně inkubují po dobu dvou hodin při teplotě 4 °C. K infikování se do každého důlku přidá 100 μΙ buněk AA-2 (5 x 105 buněk/ml); přítomnost syncycia se zaznamenává po pěti dnech jako indikace infekce HIV-1. Stanovení 50% inhibiční dávky (EC50) se provádí způsobem, 10 který popsal Reed a Muench (Am. J. Hyg., 27, str. 493. Jsou patrna reciproční zředění séra, která inhibují vytváření syncycia z 50 % (EC50).
Příklad 4
Exprese chimemích hemagglutininů nesoucích rozšířené epitopy 2F5 rekombinantními baculoviry
Způsobem popsaným v příkladu 1, se připraví chimerové hemagglutininy obsahující šest 20 uvedených peptidů. Kódovací sekvence těchto chimemích hemagglutininů je lemována restrikcí enzymového místa BamHI a vložena do místa BamHI plazmidu (Bluebac III, In Vitrogen, San Diego, CA). Transfekční experimenty k získání rekombinantních baculovirů, jež obsahují chimémí hemagglutininy, se provádějí způsoby, které popsal Groebe a kol. (Nucleic. Acid. Sci.
USA, 84: str. 7413, 1987). Výsledných rekombinantních chimemích baculovirů je možno použít 25 k vyvolání protilátek neutralizujících HIV-1.
Příklad 5
Imunizace a protilátková odezva myší imunizovaných buňkami infikovanými rekombinantními baculoviry
Buňky SÍ9, kterých bylo použito k imunizaci, se infikují rekombinantními baculoviry a mnohonásobnou infekcí (MOI) 1 až 5 a shromáždí se tři dny po infikování. Buňky se promyjí 35 dvakrát PBS a resuspendují se ve sterilním PBS při koncentraci 5 x 106 buněk/ml. Tyto buňky reagují specificky s monoklonální protilátkou 2F5 ve Western blots, čímž indikují, že tyto buňky obsahují hemagglutinin nesoucí sekvence ELDKWAS a LELDKWAS. Myši balb/cA se imunizují čtyřmi intraperitoneálními injekcemi 1 x 106 infikovaných buněk ve dvoutýdenních intervalech (Van Wyyke Coelingh a kol., Virology, 160. str. 4465, 1987). Sedm dní po čtvrté 40 imunizaci je myším odebrána krev a stanoví se titry ELISA antiséra. Na obr. 4 je znázorněna vazba antiséra odvozeného z rekombinantního baculovirů na syntetický peptid se sekvencí Gly Gly Gly Glu Leu Asp Lys Trp Ala (GGGELDKWA) a v ELISA provedené podle popisu uvedeného v příkladu 2.
Indukce sekrečních protilátek
Imunizace provedená aplikováním alespoň jednou, s výhodou směsí, šesti uvedených peptidů vede k významně zlepšeným titrům ELISA specifických pro IgG ELDKWA. Kromě toho, na rozdíl oproti imunizaci, provedené pomocí sekvence ELDKWA, vede imunizace provedená šesti 50 uvedenými peptidy také k významné odezvě IgA. S překvapením tato imunitní odezva se také spustila na sliznicové úrovni.
-8CZ 287808 B6
Příklad 6
Protilátky IgA v respiračních sekretech myší Balb/c imunizovaných chřipkovým virem ELDKWAS
Myši se imunizují 10 PFU intranasálně a podpoří se po čtyřech týdnech 10 PFU stejnou cestou. Třetí imunizace se provede intranasálně (IN) nebo intraperitoneálně (IP) s 107 PFU po čtyřech dalších týdnech. Nosní výtěry se shromáždí osm dní po třetí imunizaci a reaktivita těchto vzorků s peptidem ELDKWA se stanoví zkouškou ELISA. Jako kontrola se shromáždí a analyzují (WT pool) nosní výtěry myší imunizovaných chřipkovým virem divokého typu (WT). Použije se stejného imunizačního schémat jako pro skupinu IN (viz obr. 5). Nosní sliznicí se produkují především vyvolané protilátky a lze rozeznat, že protilátkové titry jsou neobvykle vysoké. Z obr. 5 je dále také zřejmé, že intranasální aplikace chřipkového viru ELDKWAS vede k vyšším koncentracím HIV-1 neutralizačních protilátek než intraperitoneální aplikace.
Příklad 7
Protilátky IgA v intestinálních sekretech myší Balb/c imunizovaných chřipkovým virem ELDKWAS
Myši se imunizují intranasálně 102 PFU a stejnou cestou se podpoří 105 PFU po čtyřech týdnech. Třetí imunizace se provede intranasálně (viz obr. 6a) nebo intraperitoneálně (obr. 6b) 107 PFU po dalších čtyřech týdnech. Trus, obsahující protilátky uvolněné z intestinální sliznice, se shromáždí a extrahuje se osm dní po třetí imunizaci a reaktivita těchto vzorků s peptidem ELDKWA se stanoví zkouškou ELISA. Vzorky IN O, IN R, IN B a IN Sjsou od myší, které dostaly třetí imunizaci intranasálně a vzorky IP O, IP R, IP RS a IP Sjsou shromážděny od myší, jež dostaly třetí imunizaci.
Průmyslová využitelnost
Peptidy vyvolávající neutralizující protilátky proti různým kmenům a klinickým izolátům HIV-1 a jimi vyvolané protilátky jsou vhodné pro přípravu kombinací peptid-nosič, které účinně předávají tyto peptidy imunitnímu systému a jsou vhodné pro výrobu farmaceutického prostředku.
Claims (5)
1. Peptid vyvolávající tvorbu protilátek, které vykazují neutralizující aktivitu proti různým kmenům a/nebo klinickým izolátům HIV-1 a/nebo inhibují fúzi buněk způsobenou HIV-1, tvořený aminokyselinovou sekvencí volenou ze souboru ELDKWAS, LELDKWAS, ELDNWAS, ELNKWAS, LELDNWAS a LELNKWAS.
2. Peptid podle nároku 1 vázaný na nosič, kterým je s výhodou virový protein nebo vir jako celek.
3. Peptid podle nároku 2, který je částí rekombinantního viru, voleného s výhodou ze souboru zahrnujícího virus chřipky, baculovirus a virus kravských neštovic.
-9CZ 287808 B6
4. Peptid podle nároku 2 nebo 3, kde alespoň jedna aminokyselinová sekvence nahrazuje alespoň část aminokyselinové sekvence virového proteinu nebo je vložena do alespoň jednoho antigenového místa virového proteinu.
5 5. Peptid podle nároku 4, kde virový protein je volen ze souboru zahrnujícího hemagglutinin viru chřipky, neuraminidasu viru chřipky a povrchový antigen viru hepatitis B.
6. Peptid podle nároku 4, kde virový protein je odvozen od viru chřipky, baculoviru nebo od viru kravských neštovic, s výhodou od rekombinantního viru chřipky, viru kravských neštovic
10 nebo baculoviru.
7. Peptid podle nároků 1 až 6 pro použití jakožto léčiva.
8. Použití peptidu podle nároků 1 až 6 pro výrobu farmaceutického prostředku, zvláště vakcíny 15 pro profylaxi a prevenci infekce HIV-1 u ohrožených jedinců.
9. Použití peptidu podle nároků 1 až 6 pro výrobu farmaceutického prostředku, zvláště vakcíny k navozování anti-HIV-1 IgA protilátek.
20
10. Použití podle nároku 9 pro výrobu vakcíny vhodné pro podání intranasální cestou, přičemž navozené anti-HIV-1 IgA protilátky jsou vylučovány ze sliznicového povrchu.
11. Protilátka vykazující HIV-1 neutralizační aktivitu a schopná prevence fůze buněk způsobené HIV-1 vyvolaná peptidem podle nároků 1 až 6.
12. Protilátka podle nároku 11, která je sekreční protilátkou, s výhodou anti-HIV-1 IgA protilátkou a s výhodou sekretovaná sliznicovým povrchem.
13. Peptid podle nároků 1 až 6, jehož sekvence 7 nebo 8 aminokyselin jsou získány chemickou 30 syntézou.
14. Způsob přípravy peptidu, vázaného na virový nosič podle nároků 2 až 6, vyznačující se tím, že se váže nukleotidová sekvence volená ze souboru zahrnujícího
35 a) nukleotidovou sekvenci odpovídající alespoň jedné z aminokyselinových sekvencí ELDKWAS, LELDKWAS, ELDNWAS, ELNKWAS, LELDNWAS a LELNKWAS,
b) nukleotidovou sekvenci hybridizující na jednu z nukleotidových sekvencí podle odstavce a) v takové míře, že kóduje peptid, který je reaktivní s monoklonální protilátkou 2F5,
c) nukleotidovou sekvenci odvozenou od jedné z nukleotidových sekvencí podle odstavce a) degenerací v takové míře, že kóduje peptid, který je reaktivní s monoklonální protilátkou 2F5, na nukleotidovou sekvenci viru, s výhodou viru chřipky, baculloviru a viru kravských neštovic, vázaná nukleotidová sekvence se transfektuje do hostitelského organismu, kterým je živá buňka, 45 například buňka MCBK, provádí se exprese vázané sekvence a izoluje se alespoň jeden, s výhodou několik získaných peptidů, vázaných na virové proteiny.
15. Způsob podle nároku 14, vyznačující se tím, že se váže alespoň jedna nukleotidová sekvence podle odstavce a) až c) na nukleotidovou sekvenci, která kóduje virový
50 protein tak, že nahrazuje alespoň část nukleotidové sekvence kódující virový protein nebo je včleňována do alespoň jednoho místa takové sekvence odpovídající antigenovému místu virového proteinu.
-10CZ 287808 B6
16. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že se používá nukleotidová sekvence odpovídající virovému proteinu volenému ze souboru zahrnujícího hemagglutínín viru chřipky, neuraminidasu viru chřipky a povrchový antigen viru hepatitis B.
5 17. Anti-HIV-1 vakcína obsahující alespoň jeden peptid, s výhodou směs alespoň dvou peptidů podle nároků 1 až 6.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP93114631 | 1993-09-11 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ74196A3 CZ74196A3 (en) | 1996-07-17 |
| CZ287808B6 true CZ287808B6 (en) | 2001-02-14 |
Family
ID=8213253
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ1996741A CZ287808B6 (en) | 1993-09-11 | 1994-09-12 | Peptides inducing formation of antibodies, process of their preparation, their use and antibody induced thereby and acting against genetically divergent HIV-1 strains |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0725825B1 (cs) |
| JP (1) | JPH09502348A (cs) |
| CN (1) | CN1135237A (cs) |
| AT (1) | ATE199260T1 (cs) |
| AU (1) | AU682893B2 (cs) |
| BR (1) | BR9407531A (cs) |
| CA (1) | CA2171544C (cs) |
| CZ (1) | CZ287808B6 (cs) |
| DE (1) | DE69426725T2 (cs) |
| ES (1) | ES2156902T3 (cs) |
| HU (1) | HU219507B (cs) |
| PT (1) | PT725825E (cs) |
| RU (1) | RU2181379C2 (cs) |
| UA (1) | UA43350C2 (cs) |
| WO (1) | WO1995007354A1 (cs) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MX9708008A (es) * | 1995-04-19 | 1998-03-31 | Polymun Scient Immunbio Forsch | Anticuerpos monoclonales contra vih-1 y vacunas hechas de los mismos. |
| US6319890B1 (en) | 1996-12-30 | 2001-11-20 | Manfred P. Dierich | Inhibition of binding of complement Factor H |
| WO1999048513A1 (en) * | 1998-03-23 | 1999-09-30 | Trimeris, Inc. | Methods and compositions for peptide synthesis |
| US6482928B1 (en) | 1999-04-13 | 2002-11-19 | Aventis Pasteur Limited And University Of Toronto | Fab′-epitope complex from HIV-1 cross-neutralizing monoclonal antibody 2F5 |
| CN1172717C (zh) * | 2000-08-18 | 2004-10-27 | 清华大学 | 一种治疗艾滋病的药物及其制备方法 |
| FR2851165A1 (fr) * | 2003-02-19 | 2004-08-20 | Aventis Pasteur | Antigene derivant de l'helice c de la proteine gp41 |
| AU2006235507B2 (en) | 2005-04-12 | 2012-08-30 | Duke University | Method of inducing neutralizing antibodies to human immunodeficiency virus |
| EP1754715A1 (de) | 2005-08-19 | 2007-02-21 | Bundesrepublik Deutschland vertreten durch das Bundesminsterium für Gesundheit, dieses vertr. durch das Robert-Koch-Institut | Impfstoff auf Basis virusneutralisierender Antikörper |
| WO2008127651A1 (en) | 2007-04-13 | 2008-10-23 | Duke University | Method of inducing neutralizing antibodies to human immunodeficiency virus |
| CN102365095B (zh) * | 2009-02-06 | 2015-11-25 | 麦米提斯公司 | 分裂gp41 |
| WO2015048635A1 (en) | 2013-09-27 | 2015-04-02 | Duke University | Mper-liposome conjugates and uses thereof |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2053413T3 (es) * | 1992-05-14 | 1997-11-16 | Polymun Scient Immunbio Forsch | Peptidos que inducen anticuerpos que neutralizan aislados de vih-1 geneticamente divergentes. |
| US5817767A (en) * | 1993-02-24 | 1998-10-06 | Progenics Pharmaceuticals, Inc. | Synergistic composition of CD4-based protein and anti-HIV-1 antibody, and methods of using same |
-
1994
- 1994-09-12 RU RU96108781/13A patent/RU2181379C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1994-09-12 DE DE69426725T patent/DE69426725T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-12 BR BR9407531A patent/BR9407531A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-09-12 AT AT94927602T patent/ATE199260T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-09-12 UA UA96030897A patent/UA43350C2/uk unknown
- 1994-09-12 CZ CZ1996741A patent/CZ287808B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-09-12 CN CN94194035A patent/CN1135237A/zh active Pending
- 1994-09-12 PT PT94927602T patent/PT725825E/pt unknown
- 1994-09-12 JP JP7508473A patent/JPH09502348A/ja not_active Ceased
- 1994-09-12 EP EP94927602A patent/EP0725825B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-12 CA CA002171544A patent/CA2171544C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-12 HU HU9600587A patent/HU219507B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-09-12 ES ES94927602T patent/ES2156902T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-12 WO PCT/EP1994/003039 patent/WO1995007354A1/en active IP Right Grant
- 1994-09-12 AU AU76965/94A patent/AU682893B2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU682893B2 (en) | 1997-10-23 |
| CA2171544C (en) | 2003-06-24 |
| DE69426725T2 (de) | 2001-09-06 |
| HU219507B (hu) | 2001-04-28 |
| EP0725825B1 (en) | 2001-02-21 |
| CN1135237A (zh) | 1996-11-06 |
| RU2181379C2 (ru) | 2002-04-20 |
| HUT76102A (en) | 1997-06-30 |
| PT725825E (pt) | 2001-08-30 |
| JPH09502348A (ja) | 1997-03-11 |
| WO1995007354A1 (en) | 1995-03-16 |
| HU9600587D0 (en) | 1996-05-28 |
| CA2171544A1 (en) | 1995-03-16 |
| EP0725825A1 (en) | 1996-08-14 |
| ES2156902T3 (es) | 2001-08-01 |
| UA43350C2 (uk) | 2001-12-17 |
| DE69426725D1 (de) | 2001-03-29 |
| AU7696594A (en) | 1995-03-27 |
| ATE199260T1 (de) | 2001-03-15 |
| CZ74196A3 (en) | 1996-07-17 |
| BR9407531A (pt) | 1997-08-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3369246B2 (ja) | 遺伝的に分岐したｈｉｖ−１分離株を中和する抗体誘導能を有するペプチド | |
| McLain et al. | Stimulation of neutralizing antibodies to human immunodeficiency virus type 1 in three strains of mice immunized with a 22 amino acid peptide of gp41 expressed on the surface of a plant virus | |
| JP3871708B2 (ja) | 抗原的に標識した非感染性レトロウィルス様粒子 | |
| Vogel et al. | The majority of neutralizing Abs in HIV-1-infected patients recognize linear V3 loop sequences. Studies using HIV-1MN multiple antigenic peptides. | |
| HU211548A9 (en) | Expression of specific immunogens using viral antigens | |
| JP2003529319A (ja) | ＨＩＶ−１ｇｐ４１を標的化する広範に中和する抗体を誘発する方法 | |
| JPH08505769A (ja) | ウイルスの膜蛋白質の天然ドメインの獲得方法、特にｈｉｖに対するワクチンとしてのそれらの使用 | |
| JP2743164B2 (ja) | Ａｉｄｓの原因ウィルスの糖蛋白質をコードするウィルスベクター及び組換えｄｎａ、該ベクターにより感染された細胞培養物、並びに抗体 | |
| EP0725825B1 (en) | Peptides that elicit neutralizing antibodies against genetically divergent hiv-1 strains | |
| EP1466924B1 (en) | Synthetic peptide vaccines for HIV: the CBD epitope as an effective immunogen to elicit broadly neutralizing antibodies against HIV | |
| US5876724A (en) | Induction of neutralizing antibody against viral infection by synergy between virus envelope glycoprotein and peptides corresponding to neutralization epitopes of the glycoprotein | |
| WO1998041536A1 (en) | Glycosylation deficient siv and hiv envelope glycoproteins | |
| WO1998041536A9 (en) | Glycosylation deficient siv and hiv envelope glycoproteins | |
| US20030219452A1 (en) | HIV envelope V3-CCR5 binding site immunogen | |
| Kalyan et al. | Immunogenicity of recombinant influenza virus haemagglutinin carrying peptides from the envelope protein of human immunodeficiency virus type 1 | |
| US5691170A (en) | Generation of hybrid genes and proteins by virus-mediated recombination | |
| Weijer et al. | Induction of feline leukaemia virus-neutralizing antibodies by immunization with synthetic peptides derived from the FeLV env gene | |
| AU651816B2 (en) | Induction of protection against viral infection | |
| JPH07505878A (ja) | Ｈｉｖエンベロープ糖タンパク質から誘導された合成ポリペプチド | |
| AU604791B2 (en) | Viral vector and recombinant DNA coding, in particular, for the p25 protein of the virus that is a causal agent of aids, infected cell culture, protein obtained, vaccine and antibodies obtained | |
| EA025275B1 (ru) | Способ, терапевтическая композиция, вакцинная комбинация и набор для терапевтического или профилактического лечения вич | |
| EP0421626A1 (en) | Vaccine for aids and hepatitis B | |
| US20100310592A1 (en) | A truncated form of the hiv p17 protein | |
| JP4317912B2 (ja) | エイズワクチン | |
| EA021191B1 (ru) | НОВЫЕ АНТИГЕНЫ gp41 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20120912 |