JP3369246B2 - 遺伝的に分岐したｈｉｖ−１分離株を中和する抗体誘導能を有するペプチド - Google Patents
遺伝的に分岐したｈｉｖ−１分離株を中和する抗体誘導能を有するペプチドInfo
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は遺伝的に分岐したＨＩＶ
−１分離株を中和する抗体誘導能を有するペプチドに関
する。これらのペプチドはアジュバントと共に、抗体分
子に化学的に結合した組換え融合タンパクとして、組換
えキメラウイルスとして、あるいは組換え抗体として利
用される。更に加えると、これらのペプチドで感染の状
態が決定され、感染の進行を予測することができる。
−１分離株を中和する抗体誘導能を有するペプチドに関
する。これらのペプチドはアジュバントと共に、抗体分
子に化学的に結合した組換え融合タンパクとして、組換
えキメラウイルスとして、あるいは組換え抗体として利
用される。更に加えると、これらのペプチドで感染の状
態が決定され、感染の進行を予測することができる。
【０００２】
【従来の技術】後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）は、
ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ−１）の長期永続型
感染の末期の臨床症状である。永続感染の間のウイルス
およびウイルス感染細胞に対して向けられた免疫応答は
通常感染について解決の仲介をし損なうことになる。永
続的感染の成立を予防することができ、あるいはＡＩＤ
Ｓの進行を防止することができる免疫応答を引き出す可
能性はワクチンである。ＨＩＶ−１に対する殆どのワク
チン戦略は、ｇｐ１２０およびｇｐ４１からなり、細胞
レセプターＣＤ４に結合するウイルスならびに融合活性
を有する表面グリコプロテインｇｐ１６０に対するもの
を目指している。
ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ−１）の長期永続型
感染の末期の臨床症状である。永続感染の間のウイルス
およびウイルス感染細胞に対して向けられた免疫応答は
通常感染について解決の仲介をし損なうことになる。永
続的感染の成立を予防することができ、あるいはＡＩＤ
Ｓの進行を防止することができる免疫応答を引き出す可
能性はワクチンである。ＨＩＶ−１に対する殆どのワク
チン戦略は、ｇｐ１２０およびｇｐ４１からなり、細胞
レセプターＣＤ４に結合するウイルスならびに融合活性
を有する表面グリコプロテインｇｐ１６０に対するもの
を目指している。
【０００３】しかし、ｇｐ１６０に関しては、免疫原と
してｇｐ１６０またはｇｐ１２０の全体を使用すること
に対し論難するいくつかの現象も観察されていた。ｉｎ
ｖｉｔｒｏの実験によると、ＨＩＶ−１ｇｐ１２０と
ｇｐ１２０特異的抗体の間の相乗作用によりヒトＴ細胞
の活性化を遮断することが示された（１）。この結果は
ｉｎ ｖｉｔｒｏでＨＩＶ−１のｇｐ１２０に対する体
液性免疫応答が、Ｔ細胞活性を抑制し、それが免疫不全
の一つの原因であろうという仮説を支持している。この
現象に提案された機構はｇｐ１２０と抗ｇｐ１２０を通
じたＣＤ４０分子の架橋とモジュレーションである。Ｋ
ｉｏｎら（２）の実験によると、ｇｐ１６０とクラスＩ
ＩＭＨＣ分子の間の配列相同性が免疫不全を導くことを
示している。加えるに、多くのｇｐ１６０の抗原領域が
ＨＩＶ−１感染を増強する抗体を誘導することが知られ
ている（３）。
してｇｐ１６０またはｇｐ１２０の全体を使用すること
に対し論難するいくつかの現象も観察されていた。ｉｎ
ｖｉｔｒｏの実験によると、ＨＩＶ−１ｇｐ１２０と
ｇｐ１２０特異的抗体の間の相乗作用によりヒトＴ細胞
の活性化を遮断することが示された（１）。この結果は
ｉｎ ｖｉｔｒｏでＨＩＶ−１のｇｐ１２０に対する体
液性免疫応答が、Ｔ細胞活性を抑制し、それが免疫不全
の一つの原因であろうという仮説を支持している。この
現象に提案された機構はｇｐ１２０と抗ｇｐ１２０を通
じたＣＤ４０分子の架橋とモジュレーションである。Ｋ
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ＩＭＨＣ分子の間の配列相同性が免疫不全を導くことを
示している。加えるに、多くのｇｐ１６０の抗原領域が
ＨＩＶ−１感染を増強する抗体を誘導することが知られ
ている（３）。
【０００４】 このようなｇｐ１６０に関連して知られ
ている効果は、免疫原としての免疫原性および中和エピ
トープを含むだけの合成ペプチドまたは他のサブユニッ
トワクチンの使用により避けることができた。異なった
ウイルスタンパクの部分に相当する免疫原生ペプチドは
既に成功した免疫感作として使用されている（４、５、
６）。免疫原としての合成ペプチドの使用は多くの利点
がある。生成された抗体は前以って決定された特異性を
有しているし、ウイルスの場合にはビリオンの表面上の
構造を示すように選択することができる。
ている効果は、免疫原としての免疫原性および中和エピ
トープを含むだけの合成ペプチドまたは他のサブユニッ
トワクチンの使用により避けることができた。異なった
ウイルスタンパクの部分に相当する免疫原生ペプチドは
既に成功した免疫感作として使用されている（４、５、
６）。免疫原としての合成ペプチドの使用は多くの利点
がある。生成された抗体は前以って決定された特異性を
有しているし、ウイルスの場合にはビリオンの表面上の
構造を示すように選択することができる。
【０００５】 また合成ペプチドは通常の条件ではみる
ことができない抗体応答を誘導することができる。例え
ば、インフルエンザウイルスの血球凝集素には５つの主
な抗原領域があり、そして自然の感染の条件下では免疫
応答はそれらの領域のみの抗体を含むということが見出
されている。合成ポリペプチドと共に、血液凝集素ポリ
ペプチドの他の領域に対する免疫応答を発生させること
ができ、そしてそれらの抗体はウイルスを中和し得るこ
とが見出されている。それゆえに、全タンパクにより誘
導される抗体よりも広い反応性を有する中和抗体を誘導
することが可能である（４）。
ことができない抗体応答を誘導することができる。例え
ば、インフルエンザウイルスの血球凝集素には５つの主
な抗原領域があり、そして自然の感染の条件下では免疫
応答はそれらの領域のみの抗体を含むということが見出
されている。合成ポリペプチドと共に、血液凝集素ポリ
ペプチドの他の領域に対する免疫応答を発生させること
ができ、そしてそれらの抗体はウイルスを中和し得るこ
とが見出されている。それゆえに、全タンパクにより誘
導される抗体よりも広い反応性を有する中和抗体を誘導
することが可能である（４）。
【０００６】加えるに、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）の
ヌクレオチド配列から誘導されたペプチドでの免疫が記
載されている。相当するＦＭＤＶの全タンパクでの免疫
とは対照的に、これらのペプチドによる免疫はまた防御
的な中和抗体を導く。更に、ＨＩＶ−１分離株ＨＩＶ−
１III ｂからのｇｐ１２０のＶ３ループの部分を含むペ
プチドは同じＨＩＶ−１分離株と共にウイルス抗体に対
して防御免疫応答を誘導することが示された（７、
８）。合成ペプチド自体は貧弱な免疫原性を有するがゆ
えに、破傷風トキソイドあるいはキーホール・リンペッ
ト・ヘモシアニンのようなアジュバント効果を出すよう
な分子と共役させねばならない（５）。
ヌクレオチド配列から誘導されたペプチドでの免疫が記
載されている。相当するＦＭＤＶの全タンパクでの免疫
とは対照的に、これらのペプチドによる免疫はまた防御
的な中和抗体を導く。更に、ＨＩＶ−１分離株ＨＩＶ−
１III ｂからのｇｐ１２０のＶ３ループの部分を含むペ
プチドは同じＨＩＶ−１分離株と共にウイルス抗体に対
して防御免疫応答を誘導することが示された（７、
８）。合成ペプチド自体は貧弱な免疫原性を有するがゆ
えに、破傷風トキソイドあるいはキーホール・リンペッ
ト・ヘモシアニンのようなアジュバント効果を出すよう
な分子と共役させねばならない（５）。
【０００７】別の可能性としては、融合ペプチドとして
の小さなペプチドを日本住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｔ
ｏｍａ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）のグルタチオンＳ−トラ
ンスフェラーゼと共にクローン化することである（９、
１０）。更に、ワクチニア、ポリオセービン型１または
インフルエンザＮＡ／Ｂ−ＮＳのような弱毒化ウイルス
を免疫原のためベクターとして使用することができる。
の小さなペプチドを日本住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｔ
ｏｍａ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）のグルタチオンＳ−トラ
ンスフェラーゼと共にクローン化することである（９、
１０）。更に、ワクチニア、ポリオセービン型１または
インフルエンザＮＡ／Ｂ−ＮＳのような弱毒化ウイルス
を免疫原のためベクターとして使用することができる。
【０００８】ワクチニアウイルスはしばしば多数の病原
体の外来遺伝子のベクターとして使用される。例えば、
Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、単純ヘルペスウイル
スグリコプロテインＤ、およびインフルエンザウイルス
血球凝集素からの配列を含む組換えワクチニアウイルス
を接種されたウサギはこれら全ての３つの外来抗原に対
する抗体を産生する（１１）。さらに、ＨＩＶ−１のｇ
ｐ４１からのエピトープを発現したキメラポリオウイル
スはウサギにｇｐ４１に対する中和抗体を誘導する。近
年になって、インフルエンザウイルスのゲノムをｉｎ
ｖｉｔｒｏ変異誘発によって変えることが可能である
（１３）。この技術によって、安定な弱毒インフルエン
ザＡウイルスを作成することが可能となった（１４）。
体の外来遺伝子のベクターとして使用される。例えば、
Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、単純ヘルペスウイル
スグリコプロテインＤ、およびインフルエンザウイルス
血球凝集素からの配列を含む組換えワクチニアウイルス
を接種されたウサギはこれら全ての３つの外来抗原に対
する抗体を産生する（１１）。さらに、ＨＩＶ−１のｇ
ｐ４１からのエピトープを発現したキメラポリオウイル
スはウサギにｇｐ４１に対する中和抗体を誘導する。近
年になって、インフルエンザウイルスのゲノムをｉｎ
ｖｉｔｒｏ変異誘発によって変えることが可能である
（１３）。この技術によって、安定な弱毒インフルエン
ザＡウイルスを作成することが可能となった（１４）。
【０００９】更に、この技術を使うことによって、Ｈ１
サブタイプの血球凝集素の抗原部位Ｂに含まれる６つの
アミノ酸ループがサブタイプＨ２およびＨ３の相当する
構造によって置換された、相互代表的(intertypic)キメ
ラウイルスを構築することが可能となった（１５）。こ
れに関連するインフルエンザウイルスの利点は多くの変
異株が用立てできることであり、従って繰り返して予防
接種が可能となることである。その上更にインフルエン
ザウイルスは強い分泌および細胞免疫応答を誘導するの
で、これは抗ＨＩＶ−１ワクチンの手掛りの利点とな
る。加えるに、インフルエンザウイルスは悪性の展開に
関与していそうにない。インフルエンザウイルスの複製
に含まれるＤＮＡフェーズはない、このことはウイルス
インフルエンザ遺伝子の染色体組み込みの可能性を排除
する。
サブタイプの血球凝集素の抗原部位Ｂに含まれる６つの
アミノ酸ループがサブタイプＨ２およびＨ３の相当する
構造によって置換された、相互代表的(intertypic)キメ
ラウイルスを構築することが可能となった（１５）。こ
れに関連するインフルエンザウイルスの利点は多くの変
異株が用立てできることであり、従って繰り返して予防
接種が可能となることである。その上更にインフルエン
ザウイルスは強い分泌および細胞免疫応答を誘導するの
で、これは抗ＨＩＶ−１ワクチンの手掛りの利点とな
る。加えるに、インフルエンザウイルスは悪性の展開に
関与していそうにない。インフルエンザウイルスの複製
に含まれるＤＮＡフェーズはない、このことはウイルス
インフルエンザ遺伝子の染色体組み込みの可能性を排除
する。
【００１０】抗イディオタイプ抗体の使用は特異的免疫
反応を達成する別の可能性である。抗イディオタイプ抗
体は別の抗体の抗原結合部位を特異的に認識し結合する
抗体である。抗体の結合部位は構造的には結合するエピ
トープの鏡像としてみることができるので、抗イディオ
タイプ抗体はこの最初の鏡像の鏡像に相当する。このこ
とは、抗イディオタイプ抗体はイディオタイプ抗体によ
り結合されるエピトープの内部像の役割を果たしている
ことを意味する。
反応を達成する別の可能性である。抗イディオタイプ抗
体は別の抗体の抗原結合部位を特異的に認識し結合する
抗体である。抗体の結合部位は構造的には結合するエピ
トープの鏡像としてみることができるので、抗イディオ
タイプ抗体はこの最初の鏡像の鏡像に相当する。このこ
とは、抗イディオタイプ抗体はイディオタイプ抗体によ
り結合されるエピトープの内部像の役割を果たしている
ことを意味する。
【００１１】 抗イディオタイプ抗体のそれぞれの構造
あるいはアミノ酸配列とエピトープのそれとの間の完全
な同一性を見出すことは必ずしも期待できるとは限らな
いが、しかし抗イディオタイプ抗体とそれぞれのエピト
ープの間には構造的な、配列的なあるいは機能的な類似
性があるという結論に達してもよい実際的な効果を見る
ことができるのである。ワクチンとして抗イディオタイ
プ抗体の使用ははじめてＮｉｓｏｎｏｆｆおよびＬａｍ
ｏｙｉによって提案された（１６）。
あるいはアミノ酸配列とエピトープのそれとの間の完全
な同一性を見出すことは必ずしも期待できるとは限らな
いが、しかし抗イディオタイプ抗体とそれぞれのエピト
ープの間には構造的な、配列的なあるいは機能的な類似
性があるという結論に達してもよい実際的な効果を見る
ことができるのである。ワクチンとして抗イディオタイ
プ抗体の使用ははじめてＮｉｓｏｎｏｆｆおよびＬａｍ
ｏｙｉによって提案された（１６）。
【００１２】アフリカ眠り病の場合では、病原体、トリ
パノソーマ・ブルーセイ（Tripanosoma brucei) に対す
る防御免疫反応が抗イディオタイプ抗体でマウスに予防
接種することによりＢＡＬＢ／ｃマウスに引き出すこと
ができた（１７）。ウイルス抗原の場合では、レオウイ
ルスIII 型の血球凝集素分子における中和エピトープに
対する抗イディオタイプ抗体の生成が探究された。これ
らの抗イディオタイプ抗体は、細胞溶解性Ｔ細胞および
神経細胞の両者におけるレトロウイルス−血球凝集素の
細胞レセプターを認識し、そして、レオウイルス血球凝
集素に特異的な液性ならびに細胞性免疫応答をマウスに
誘導することができる（１８、１９、２０）。
パノソーマ・ブルーセイ（Tripanosoma brucei) に対す
る防御免疫反応が抗イディオタイプ抗体でマウスに予防
接種することによりＢＡＬＢ／ｃマウスに引き出すこと
ができた（１７）。ウイルス抗原の場合では、レオウイ
ルスIII 型の血球凝集素分子における中和エピトープに
対する抗イディオタイプ抗体の生成が探究された。これ
らの抗イディオタイプ抗体は、細胞溶解性Ｔ細胞および
神経細胞の両者におけるレトロウイルス−血球凝集素の
細胞レセプターを認識し、そして、レオウイルス血球凝
集素に特異的な液性ならびに細胞性免疫応答をマウスに
誘導することができる（１８、１９、２０）。
【００１３】モノクローナル抗体２Ｆ５に特異的に結合
する６アミノ酸残基（ａａ）からなるペプチドをＨＩＶ
−１に対して中和抗体を誘導する免疫原として使用し
た。これらのペプチドを同定するために、ｇｐ４１の重
複するフラグメント（ＨＩＶ−１分離株ＢＨ１０）をグ
ルタチオントランスフェラーゼと融合ペプチドとしてク
ローン化した。異なった融合ペプチドが、プラスミドｐ
ＧＥＸ−２Ｔ（ファルマシア製）のＢａｍＨＩとＥｃｏ
ＲＩサイトの間にクローン化されたｇｐ４１に相当する
オリゴヌクレオチドのハイブリッド形成により得られ
た。
する６アミノ酸残基（ａａ）からなるペプチドをＨＩＶ
−１に対して中和抗体を誘導する免疫原として使用し
た。これらのペプチドを同定するために、ｇｐ４１の重
複するフラグメント（ＨＩＶ−１分離株ＢＨ１０）をグ
ルタチオントランスフェラーゼと融合ペプチドとしてク
ローン化した。異なった融合ペプチドが、プラスミドｐ
ＧＥＸ−２Ｔ（ファルマシア製）のＢａｍＨＩとＥｃｏ
ＲＩサイトの間にクローン化されたｇｐ４１に相当する
オリゴヌクレオチドのハイブリッド形成により得られ
た。
【００１４】組換えプラスミドをＥ．ｃｏｌｉＤＨ５α
株に形質転換し、融合タンパクの発現をイソプロピルチ
オガラクトシド（ＩＰＴＧ）で誘導した。Ｅ．ｃｏｌｉ
抽出物をドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲ
ルにローディングしたグルタチオン セファロース４Ｂ
カラムで精製し、電気泳動で分離し、タンパク発現を銀
染色で分析した。モノクローナル抗体２Ｆ５と反応性の
ある融合ペプチドは免疫ブロッティングにより同定し
た。この方法を使用してモノクローナル抗体２Ｆ５に結
合するペプチドが同定された。
株に形質転換し、融合タンパクの発現をイソプロピルチ
オガラクトシド（ＩＰＴＧ）で誘導した。Ｅ．ｃｏｌｉ
抽出物をドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲ
ルにローディングしたグルタチオン セファロース４Ｂ
カラムで精製し、電気泳動で分離し、タンパク発現を銀
染色で分析した。モノクローナル抗体２Ｆ５と反応性の
ある融合ペプチドは免疫ブロッティングにより同定し
た。この方法を使用してモノクローナル抗体２Ｆ５に結
合するペプチドが同定された。
【００１５】図１はＨＩＶ−１のｇｐ１６０（分離株Ｂ
Ｈ１０）の重複フラグメントと共に融合ペプチドのウエ
スタンブロットを示す。抗体２Ｆ５と反応性のあるＡＡ
５９７−６７７、６３４−６７７および６４８−６７７
（Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔデータベース受入ＥＮＶ＄ＨＩＶ
１０記載されているようにアミノ酸残基の番号付けはＨ
ＩＶ−１分離株ＢＨ１０のｇｐ１６０に相当する）から
なる構成物と対照的にａａ６６７−６７７からなる融合
ペプチドは陽性反応を示さなかった。これはモノクロー
ナル抗体２Ｆ５のエピトープがｇｐ１６０の位置６４８
から６６７までの配列内でａａにより生成するという初
めての同定であった。
Ｈ１０）の重複フラグメントと共に融合ペプチドのウエ
スタンブロットを示す。抗体２Ｆ５と反応性のあるＡＡ
５９７−６７７、６３４−６７７および６４８−６７７
（Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔデータベース受入ＥＮＶ＄ＨＩＶ
１０記載されているようにアミノ酸残基の番号付けはＨ
ＩＶ−１分離株ＢＨ１０のｇｐ１６０に相当する）から
なる構成物と対照的にａａ６６７−６７７からなる融合
ペプチドは陽性反応を示さなかった。これはモノクロー
ナル抗体２Ｆ５のエピトープがｇｐ１６０の位置６４８
から６６７までの配列内でａａにより生成するという初
めての同定であった。
【００１６】このような結果を基礎として、この領域の
重複する重合度６（６−ｍｅｒ）のペプチドをグルタチ
オンＳ−トランスフェラーゼと融合した。図１の（ｂ）
に示すように、ＧＬＵ ＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲ
Ｐ ＡＬＡ（ａａ６６２−６６７）（配列番号：１）の
アミノ酸配列を含むペプチドは抗体２Ｆ５と高度に反応
性に富み、これに対し、アミノ酸配列ＬＥＵ ＡＳＰ
ＬＹＳ ＴＲＰ ＡＬＡ ＳＥＲ（ａａ６６３−６６
８）またはＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ ＡＬＡ ＳＥＲ
ＬＥＵ（ａａ６６４−６６９）とモノクローナル抗体と
の反応性は著しく低い。
重複する重合度６（６−ｍｅｒ）のペプチドをグルタチ
オンＳ−トランスフェラーゼと融合した。図１の（ｂ）
に示すように、ＧＬＵ ＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲ
Ｐ ＡＬＡ（ａａ６６２−６６７）（配列番号：１）の
アミノ酸配列を含むペプチドは抗体２Ｆ５と高度に反応
性に富み、これに対し、アミノ酸配列ＬＥＵ ＡＳＰ
ＬＹＳ ＴＲＰ ＡＬＡ ＳＥＲ（ａａ６６３−６６
８）またはＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ ＡＬＡ ＳＥＲ
ＬＥＵ（ａａ６６４−６６９）とモノクローナル抗体と
の反応性は著しく低い。
【００１７】 アミノ酸配列ＬＥＵ ＧＬＵ ＬＥＵ
ＡＳＰ ＬＹＳＴＲＰ（ａａ６６１−６６６）を含むペ
プチドは全く反応性を示さなかった。これらのデータは
このモノクローナル抗体のエピトープはＨＩＶ−１ Ｂ
Ｈ１０分離株のｇｐ１６０のａａ６６２−６６７に相当
するアミノ酸配列ＧＬＵ ＬＥＵＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲ
Ｐ ＡＬＡ（配列番号：１）からなることを示してい
る。これに関連して、このエピトープ配列に相当する合
成ペプチドとこの配列を含む融合タンパクの両者は２Ｆ
５抗体により仲介される中和を阻害することができる
（図３）。
ＡＳＰ ＬＹＳＴＲＰ（ａａ６６１−６６６）を含むペ
プチドは全く反応性を示さなかった。これらのデータは
このモノクローナル抗体のエピトープはＨＩＶ−１ Ｂ
Ｈ１０分離株のｇｐ１６０のａａ６６２−６６７に相当
するアミノ酸配列ＧＬＵ ＬＥＵＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲ
Ｐ ＡＬＡ（配列番号：１）からなることを示してい
る。これに関連して、このエピトープ配列に相当する合
成ペプチドとこの配列を含む融合タンパクの両者は２Ｆ
５抗体により仲介される中和を阻害することができる
（図３）。
【００１８】この領域の配列比較により相当するアミノ
酸配列は別に遺伝的に高度に分岐したＨＩＶ−１分離株
の間に高度に保存されていることが明示された（表２の
ａ）。本発明者らは、また、この領域におけるアミノ酸
置換−異なったＨＩＶ−１分離株によると−を伴った融
合ペプチドは２Ｆ５抗体と反応性があることを示すこと
ができた図１の（ｃ）。この領域の抗原領域の存在は既
に報告されている（２１、２２）。Ｔｅｅｕｗｓｅｎら
はｇｐ１６０のａａ６４３−６９２に相当するペプチド
と反応するモノクローナル抗体を報告している。更に、
ＢｒｏｌｉｄｅｎｎらはＨＩＶ−１抗体陽性ヒト血清は
領域６５７−６７１に相当するペプチドと反応すること
を報告している。
酸配列は別に遺伝的に高度に分岐したＨＩＶ−１分離株
の間に高度に保存されていることが明示された（表２の
ａ）。本発明者らは、また、この領域におけるアミノ酸
置換−異なったＨＩＶ−１分離株によると−を伴った融
合ペプチドは２Ｆ５抗体と反応性があることを示すこと
ができた図１の（ｃ）。この領域の抗原領域の存在は既
に報告されている（２１、２２）。Ｔｅｅｕｗｓｅｎら
はｇｐ１６０のａａ６４３−６９２に相当するペプチド
と反応するモノクローナル抗体を報告している。更に、
ＢｒｏｌｉｄｅｎｎらはＨＩＶ−１抗体陽性ヒト血清は
領域６５７−６７１に相当するペプチドと反応すること
を報告している。
【００１９】しかしこの両者の場合は特定のエピトープ
は同定されていなかった。Ｔｅｅｕｗｓｅｎらによって
報告されたモノクローナル抗体は中和活性を有していな
い。またＢｒｏｌｉｄｅｎらのペプチド６５７−６７１
と反応する血清は、単に部分的な中和活性を示すだけで
ある。異なった中和測定において、このグループはＨＩ
Ｖ−１分離株III Ｂに対する中和活性を示すことができ
たが、ＳＦ２およびＲＦに対しては駄目であった。この
結果と対照的にモノクローナル抗体２Ｆ５はＳＦ２およ
びＲＦを含む種々の異なったＨＩＶ−１分離株を中和す
る（表１）。これらのデータはＢｒｏｌｉｄｅｎらによ
り報告された抗体はＴｅｅｕｗｓｅｎらにより報告され
たモノクローナル抗体と共に、抗体２Ｆ５よりも異なっ
た特異性を有し、異なったエピトープを認識することを
示している。
は同定されていなかった。Ｔｅｅｕｗｓｅｎらによって
報告されたモノクローナル抗体は中和活性を有していな
い。またＢｒｏｌｉｄｅｎらのペプチド６５７−６７１
と反応する血清は、単に部分的な中和活性を示すだけで
ある。異なった中和測定において、このグループはＨＩ
Ｖ−１分離株III Ｂに対する中和活性を示すことができ
たが、ＳＦ２およびＲＦに対しては駄目であった。この
結果と対照的にモノクローナル抗体２Ｆ５はＳＦ２およ
びＲＦを含む種々の異なったＨＩＶ−１分離株を中和す
る（表１）。これらのデータはＢｒｏｌｉｄｅｎらによ
り報告された抗体はＴｅｅｕｗｓｅｎらにより報告され
たモノクローナル抗体と共に、抗体２Ｆ５よりも異なっ
た特異性を有し、異なったエピトープを認識することを
示している。
【００２０】免疫原としての本発明に記載されたペプチ
ドの応用は、いくつかの利点を有する。それらは丁度６
ａａから成っている。それゆえに、ＨＩＶ−１感染を増
強し、あるいは免疫抑制を導くような抗体を誘導する別
のｇｐ１６０ペプチド配列は除くことができる（２、
３）。さらに、効果的なＨＩＶ−１ワクチンは遺伝子配
列がかなり変化しているＨＩＶ−１分離株に対する免疫
応答を誘導しなければならない。この点に関して、２Ｆ
５エピトープの領域の配列比較は２Ｆ５抗体のエピトー
プは異なったＨＩＶ−１分離株の間にも高度に保存され
ていることを明らかにした（表２のａ）。
ドの応用は、いくつかの利点を有する。それらは丁度６
ａａから成っている。それゆえに、ＨＩＶ−１感染を増
強し、あるいは免疫抑制を導くような抗体を誘導する別
のｇｐ１６０ペプチド配列は除くことができる（２、
３）。さらに、効果的なＨＩＶ−１ワクチンは遺伝子配
列がかなり変化しているＨＩＶ−１分離株に対する免疫
応答を誘導しなければならない。この点に関して、２Ｆ
５エピトープの領域の配列比較は２Ｆ５抗体のエピトー
プは異なったＨＩＶ−１分離株の間にも高度に保存され
ていることを明らかにした（表２のａ）。
【００２１】ａａ置換−遺伝的に異なったＨＩＶ−１分
離株−を有するペプチドは２Ｆ５抗体と反応性がある図
１の（ｃ）から、本発明に記載されたペプチドにより誘
導される抗体は種々の分岐ＨＩＶ−１分離株に対するも
のに適している。加えるに、２Ｆ５抗体は広範な種々の
遺伝的に異なったＨＩＶ−１分離株に対する中和抗体を
示すので、本発明に記載されたペプチドは中和エピトー
プとして提示されることが示された（表１）。
離株−を有するペプチドは２Ｆ５抗体と反応性がある図
１の（ｃ）から、本発明に記載されたペプチドにより誘
導される抗体は種々の分岐ＨＩＶ−１分離株に対するも
のに適している。加えるに、２Ｆ５抗体は広範な種々の
遺伝的に異なったＨＩＶ−１分離株に対する中和抗体を
示すので、本発明に記載されたペプチドは中和エピトー
プとして提示されることが示された（表１）。
【００２２】エピトープ配列のどの変異がモノクローナ
ル抗体２Ｆ５に結合性を有するのかを知るために、本発
明者らは繊維状ファージのタンパクＩＩＩで示されるラ
ンダムヘキサペプチドライブラリーと共にペプチドマッ
ピングを行った（２２ａ）。溶離したファージ粒子のヘ
キサペプチド配列を編集した（表２のｂ）。異なったＨ
ＩＶ−１感染人におけるＨＩＶ−１関連疾患の進行には
広い変化の範囲がある。多くのケースにおいて、ＨＩＶ
−１感染はＡＩＤＳ関連症候群（ＡＲＣ）と数年以内の
ＡＩＤＳに帰着し、いくつかのＨＩＶ−１陽性人は無症
候性で残る。ある種のペプチドエピトープに対する抗体
価は無症候状態と比較してＡＩＤＳ患者においてより低
いことが示されている（２３）。
ル抗体２Ｆ５に結合性を有するのかを知るために、本発
明者らは繊維状ファージのタンパクＩＩＩで示されるラ
ンダムヘキサペプチドライブラリーと共にペプチドマッ
ピングを行った（２２ａ）。溶離したファージ粒子のヘ
キサペプチド配列を編集した（表２のｂ）。異なったＨ
ＩＶ−１感染人におけるＨＩＶ−１関連疾患の進行には
広い変化の範囲がある。多くのケースにおいて、ＨＩＶ
−１感染はＡＩＤＳ関連症候群（ＡＲＣ）と数年以内の
ＡＩＤＳに帰着し、いくつかのＨＩＶ−１陽性人は無症
候性で残る。ある種のペプチドエピトープに対する抗体
価は無症候状態と比較してＡＩＤＳ患者においてより低
いことが示されている（２３）。
【００２３】本発明者らは本発明に記載されたペプチド
に対する抗体価とＨＩＶ−１関連疾患の進行との間に著
しい相関があることを見出した（図２）。本発明に記載
のペプチドに対し高抗体価を有する患者番号２０、２
５、２９、３５、４１、４４、４６（図２）は今まで過
去５年以内に疾病の進行がみられなかった。ＨＩＶ−１
陽性患者の血清に見出された本発明に記載されたペプチ
ドにまれに高い抗体価を示すという事実は、ｇｐ１６０
上のこれらのエピトープがヒト免疫系により即座に認識
されなくて、これらのエピトープに特異的な低いＨＩＶ
−１中和抗体価であることを示している。
に対する抗体価とＨＩＶ−１関連疾患の進行との間に著
しい相関があることを見出した（図２）。本発明に記載
のペプチドに対し高抗体価を有する患者番号２０、２
５、２９、３５、４１、４４、４６（図２）は今まで過
去５年以内に疾病の進行がみられなかった。ＨＩＶ−１
陽性患者の血清に見出された本発明に記載されたペプチ
ドにまれに高い抗体価を示すという事実は、ｇｐ１６０
上のこれらのエピトープがヒト免疫系により即座に認識
されなくて、これらのエピトープに特異的な低いＨＩＶ
−１中和抗体価であることを示している。
【００２４】従って、本発明の目的は、また本発明に記
載されたペプチドが適切な形態で、そして充分な中和免
疫応答を誘導することを呈示することである。
載されたペプチドが適切な形態で、そして充分な中和免
疫応答を誘導することを呈示することである。
【００２５】
【表１】
【００２６】ａ）ｉｎ ｖｉｔｒｏ中和検定：２Ｆ５抗
体の異なった濃度のものを無細胞ウイルスプレパレーシ
ョン（１０2 −１０3 ＴＣＩＤ50）と共に１時間３７℃
で培養した。１０5 の適量のＨ９細胞をウイルス／抗体
混合物に加え、更に３７℃で１時間培養した。２０日
後、ウイルス複製の指標としてＰ２４抗原濃度を常法に
より上清から測定した。
体の異なった濃度のものを無細胞ウイルスプレパレーシ
ョン（１０2 −１０3 ＴＣＩＤ50）と共に１時間３７℃
で培養した。１０5 の適量のＨ９細胞をウイルス／抗体
混合物に加え、更に３７℃で１時間培養した。２０日
後、ウイルス複製の指標としてＰ２４抗原濃度を常法に
より上清から測定した。
【００２７】ｂ）シンチウム阻害検定：抗体／ウイルス
混合物を表１ａ記載の方法で調製した。この混合物に、
１０5 ＡＡ２細胞を加え３７℃で培養した。５日後ＨＩ
Ｖ複製の指標としてシンチウム生成をしらべた。
混合物を表１ａ記載の方法で調製した。この混合物に、
１０5 ＡＡ２細胞を加え３７℃で培養した。５日後ＨＩ
Ｖ複製の指標としてシンチウム生成をしらべた。
【００２８】
【表２】
【００２９】表中ＡおよびＣはウイーンでの臨床分離株
を示す。 ａ：異なったＨＩＶ−１分離株のｇｐ１６０に存在する
配列それぞれの配列の右端の番号は、スクリーンしたデ
ータベースでの出現率を示す（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔおよ
びＧｅｎＰｅｐｔ）。 ｂ：繊維状ファージの表面に現れたランダムヘキサペプ
チドライブラリーのスクリーニングによって見出された
結合配列〔ａ）で既に記載された配列は含まない〕。
を示す。 ａ：異なったＨＩＶ−１分離株のｇｐ１６０に存在する
配列それぞれの配列の右端の番号は、スクリーンしたデ
ータベースでの出現率を示す（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔおよ
びＧｅｎＰｅｐｔ）。 ｂ：繊維状ファージの表面に現れたランダムヘキサペプ
チドライブラリーのスクリーニングによって見出された
結合配列〔ａ）で既に記載された配列は含まない〕。
【００３０】図１は融合ペプチドのウエスタンブロット
を示す。Ｅ．ｃｏｌｉで発現させた組換えタンパクを実
施例１記載のようにして精製した。そしてそれぞれの融
合タンパク１００ｎｇを２０％ポリアクリルアミドゲル
上でドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電
気泳動により分画し、ニトロセルロースフィルター上に
エレクトロブロッティングした。ブロットを０．１％Ｔ
ｗｅｅｎ含有リン酸バッファー生理食塩液中に０．５％
脂肪不含有乾燥ミルクで１時間、室温にてブロックし
た。洗浄の後、ブロットを抗体２Ｆ５（５００ｎｇ／ｍ
ｌ）と共に１時間室温にてインキュベートした。洗浄の
後、ブロットを抗ヒトＩｇＧアルカリホスファターゼ複
合体と共に、１時間室温にてインキュベートした。ブロ
ットを、３５０μｇ／ｍｌニトロブルーテトラゾリウム
クロリドおよび３５０μｇ／ｍｌ５−ブロモ−４クロロ
−３−インドリルホスフェートを含む１Ｍジエタノール
アミンバッファー（ｐＨ９．６）で展開した。
を示す。Ｅ．ｃｏｌｉで発現させた組換えタンパクを実
施例１記載のようにして精製した。そしてそれぞれの融
合タンパク１００ｎｇを２０％ポリアクリルアミドゲル
上でドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電
気泳動により分画し、ニトロセルロースフィルター上に
エレクトロブロッティングした。ブロットを０．１％Ｔ
ｗｅｅｎ含有リン酸バッファー生理食塩液中に０．５％
脂肪不含有乾燥ミルクで１時間、室温にてブロックし
た。洗浄の後、ブロットを抗体２Ｆ５（５００ｎｇ／ｍ
ｌ）と共に１時間室温にてインキュベートした。洗浄の
後、ブロットを抗ヒトＩｇＧアルカリホスファターゼ複
合体と共に、１時間室温にてインキュベートした。ブロ
ットを、３５０μｇ／ｍｌニトロブルーテトラゾリウム
クロリドおよび３５０μｇ／ｍｌ５−ブロモ−４クロロ
−３−インドリルホスフェートを含む１Ｍジエタノール
アミンバッファー（ｐＨ９．６）で展開した。
【００３１】図１の（ａ）：
レーン１、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳ
Ｔ）； レーン２、ＧＳＴと共に融合したｇｐ１６０のアミノ酸
（ａａ）５９７−６７７； レーン３、ＧＳＴと共に融合したａａ６３４−６７７；
レーン４、ＧＳＴと共に融合したａａ６４８−６７７；
レーン５、ＧＳＴと共に融合したａａ６６７−６７７。 レーン４、ＧＳＴと共に融合したａａ６４８−６７７； レーン５、ＧＳＴと共に融合したａａ６６７−６７７。
Ｔ）； レーン２、ＧＳＴと共に融合したｇｐ１６０のアミノ酸
（ａａ）５９７−６７７； レーン３、ＧＳＴと共に融合したａａ６３４−６７７；
レーン４、ＧＳＴと共に融合したａａ６４８−６７７；
レーン５、ＧＳＴと共に融合したａａ６６７−６７７。 レーン４、ＧＳＴと共に融合したａａ６４８−６７７； レーン５、ＧＳＴと共に融合したａａ６６７−６７７。
【００３２】図１の（ｂ）：
レーン１、ＧＳＴ；レーン２、ａａＧＬＵ ＬＥＵ Ａ
ＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ・ＡＬＡ（ａａ６６２−６６７）
と共に融合したＧＳＴ； レーン３、ａａＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ ＡＬ
Ａ ＳＥＲ（ａａ６６３−６６８）と共に融合したＧＳ
Ｔ； レーン４、ａａＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ ＡＬＡ ＳＥ
Ｒ ＬＥＵ（ａａ６６４−６６９）と共に融合したＧＳ
Ｔ； レーン５、ＬＥＵ ＧＬＵ ＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ
ＴＲＰと共に融合したＧＳＴ（ａａ６６１−６６６）。
ＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ・ＡＬＡ（ａａ６６２−６６７）
と共に融合したＧＳＴ； レーン３、ａａＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ ＡＬ
Ａ ＳＥＲ（ａａ６６３−６６８）と共に融合したＧＳ
Ｔ； レーン４、ａａＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ ＡＬＡ ＳＥ
Ｒ ＬＥＵ（ａａ６６４−６６９）と共に融合したＧＳ
Ｔ； レーン５、ＬＥＵ ＧＬＵ ＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ
ＴＲＰと共に融合したＧＳＴ（ａａ６６１−６６６）。
【００３３】図１の（ｃ）：２Ｆ５エピトープの領域に
おいて相異するＨＩＶ−１分離株についてアミノ酸置換
した融合ペプチド。アミノ酸の相異点はアンダーライン
で示す。 レーン１、ＧＳＴ； レーン２、ＧＬＵ ＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ
ＡＬＡ； レーン３、ＧＬＮ ＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ
ＡＬＡ； レーン４、ＧＬＹ ＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ
ＡＬＡ； レーン５、ＡＬＡ ＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ
ＡＬＡ； レーン６、ＧＬＵ ＬＥＵ ＡＳＮ ＬＹＳ ＴＲＰ
ＡＬＡ （この融合ペプチドと２Ｆ５抗体との反応はこのウエス
タンブロットではみえない。しかしＥＬＩＳＡ競合アッ
セイにおいてこのペプチドは２Ｆ５抗体結合について組
換えｇｐ４１と競合している）； レーン７、ＧＬＵ ＬＥＵ ＡＳＰ ＴＨＲ ＴＲＰ
ＡＬＡ； レーン８、ＧＬＵ ＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ
ＡＳＰ。
おいて相異するＨＩＶ−１分離株についてアミノ酸置換
した融合ペプチド。アミノ酸の相異点はアンダーライン
で示す。 レーン１、ＧＳＴ； レーン２、ＧＬＵ ＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ
ＡＬＡ； レーン３、ＧＬＮ ＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ
ＡＬＡ； レーン４、ＧＬＹ ＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ
ＡＬＡ； レーン５、ＡＬＡ ＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ
ＡＬＡ； レーン６、ＧＬＵ ＬＥＵ ＡＳＮ ＬＹＳ ＴＲＰ
ＡＬＡ （この融合ペプチドと２Ｆ５抗体との反応はこのウエス
タンブロットではみえない。しかしＥＬＩＳＡ競合アッ
セイにおいてこのペプチドは２Ｆ５抗体結合について組
換えｇｐ４１と競合している）； レーン７、ＧＬＵ ＬＥＵ ＡＳＰ ＴＨＲ ＴＲＰ
ＡＬＡ； レーン８、ＧＬＵ ＬＥＵ ＡＳＰ ＬＹＳ ＴＲＰ
ＡＳＰ。
【００３４】図２はＨＩＶ−１陽性人からの６５血清の
アミノ酸配列「ＥＬＤＫＷＡ」ペプチドに対する特異抗
体価の図式を示す。抗体価はＥＬＩＳＡ法で測定した。
ペプチドは融合ペプチドの型（グルタチオン−Ｓ−トラ
ンスフェラーゼとの結合で）として用いた。融合ペプチ
ドは９６マイクロタイタープレートに１００μｌ／孔
（２．５μｇ／ｍｌ）ずつコートし、一夜４℃でインキ
ュベートした。洗浄バッファーで３回洗浄の後、陽性の
血清を希釈バッファーで２n 倍（１：４０−１：８１９
２０）に希釈し、適量をテストプレートに移した（１０
０μｌ／孔）、そして１時間室温でインキュベートし
た。
アミノ酸配列「ＥＬＤＫＷＡ」ペプチドに対する特異抗
体価の図式を示す。抗体価はＥＬＩＳＡ法で測定した。
ペプチドは融合ペプチドの型（グルタチオン−Ｓ−トラ
ンスフェラーゼとの結合で）として用いた。融合ペプチ
ドは９６マイクロタイタープレートに１００μｌ／孔
（２．５μｇ／ｍｌ）ずつコートし、一夜４℃でインキ
ュベートした。洗浄バッファーで３回洗浄の後、陽性の
血清を希釈バッファーで２n 倍（１：４０−１：８１９
２０）に希釈し、適量をテストプレートに移した（１０
０μｌ／孔）、そして１時間室温でインキュベートし
た。
【００３５】プレートを再度３回洗浄バッファーで洗浄
した。第２抗体として、西洋ワサビパーオキシダーゼを
結合したヤギ抗ヒトγ鎖を使用した（１：１０００、１
００μｌ／孔）。室温で１時間インキュベーションの
後、プレートを３回洗浄バッファーで洗浄した。次い
で、プレートを基質としてｏ−フェニレン−ジアミン−
ジヒドロクロライドで染色した。反応を２．５Ｍ−Ｈ2
ＳＯ4 で停止し、プレートを測定し（測定波長４９２ｎ
ｍ、対照標準波長６２０ｎｍ）、評価した。
した。第２抗体として、西洋ワサビパーオキシダーゼを
結合したヤギ抗ヒトγ鎖を使用した（１：１０００、１
００μｌ／孔）。室温で１時間インキュベーションの
後、プレートを３回洗浄バッファーで洗浄した。次い
で、プレートを基質としてｏ−フェニレン−ジアミン−
ジヒドロクロライドで染色した。反応を２．５Ｍ−Ｈ2
ＳＯ4 で停止し、プレートを測定し（測定波長４９２ｎ
ｍ、対照標準波長６２０ｎｍ）、評価した。
【００３６】切り捨て＝ＨＩＶ−１陰性血清（１：４
０）の平均値（４倍）＋３Ｓ．Ｄ．血清番号２０、２
５、２９、３５、４１、４４、４６の提供者は少なくと
も５年間ＨＩＶ−１陽性であり、未だ無症候である。
０）の平均値（４倍）＋３Ｓ．Ｄ．血清番号２０、２
５、２９、３５、４１、４４、４６の提供者は少なくと
も５年間ＨＩＶ−１陽性であり、未だ無症候である。
【００３７】図３はペプチドによる中和の阻害を示す。
合成ペプチド（ＰＥＰ）、融合ペプチド（ＦＰ）、グル
タチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）をｈｕｍ
Ａｂ２Ｆ５または１Ｂ１で３７℃１時間プレインキュベ
ーションし、シンシチウム阻害検定を行った。抗体は５
μｇ／孔より２倍系列で希釈した。図３において、 ＰＥＰ：合成ペプチドＥＬＤＫＷＡ（配列番号：１に相
当するペプチド）ａ；２５μｇ／孔、ｂ；５μｇ／孔； ＦＰ ：ＧＳＴと融合ペプチド、ａ；２５μｇ／孔、
ｂ；５μｇ／孔； ＧＳＴ：グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、ａ；
２５μｇ／孔、ｂ；５μｇ／孔 １Ｂ１：中和抗ｇｐ１２０ ｈｕｍＡｂを示す。
合成ペプチド（ＰＥＰ）、融合ペプチド（ＦＰ）、グル
タチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）をｈｕｍ
Ａｂ２Ｆ５または１Ｂ１で３７℃１時間プレインキュベ
ーションし、シンシチウム阻害検定を行った。抗体は５
μｇ／孔より２倍系列で希釈した。図３において、 ＰＥＰ：合成ペプチドＥＬＤＫＷＡ（配列番号：１に相
当するペプチド）ａ；２５μｇ／孔、ｂ；５μｇ／孔； ＦＰ ：ＧＳＴと融合ペプチド、ａ；２５μｇ／孔、
ｂ；５μｇ／孔； ＧＳＴ：グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、ａ；
２５μｇ／孔、ｂ；５μｇ／孔 １Ｂ１：中和抗ｇｐ１２０ ｈｕｍＡｂを示す。
【００３８】表３はＨＩＶ−１中和のインフルエンザ／
ＨＩＶ阻害を示す。結果はｍＡＢｓ２Ｆ５および２Ｇ１
２を培地（Ｍｏｃｋ）、インフルエンザＷＳＮまたはイ
ンフルエンザ／ＨＩＶと共にプレインキュベートした
後、ＨＩＶ価が＞９０％減少を与える血清希釈の逆数と
して表した。２Ｆ５はｇｐ１６０の異なったエピトープ
に特異的なモノクローナル抗体である。残存ＨＩＶ中和
活性はＨＩＶ−１IIIbの１０3 感染価と抗体／ウイルス
混合物の希釈を３７℃１時間インキュベートして測定し
た。１０4 Ｃ８１６６細胞を含む培地の適量（１００μ
ｌ）を加え、シンチウムの存在をＨＩＶ感染の指標とし
て４８時間後に記録した。
ＨＩＶ阻害を示す。結果はｍＡＢｓ２Ｆ５および２Ｇ１
２を培地（Ｍｏｃｋ）、インフルエンザＷＳＮまたはイ
ンフルエンザ／ＨＩＶと共にプレインキュベートした
後、ＨＩＶ価が＞９０％減少を与える血清希釈の逆数と
して表した。２Ｆ５はｇｐ１６０の異なったエピトープ
に特異的なモノクローナル抗体である。残存ＨＩＶ中和
活性はＨＩＶ−１IIIbの１０3 感染価と抗体／ウイルス
混合物の希釈を３７℃１時間インキュベートして測定し
た。１０4 Ｃ８１６６細胞を含む培地の適量（１００μ
ｌ）を加え、シンチウムの存在をＨＩＶ感染の指標とし
て４８時間後に記録した。
【００３９】
【表３】
【００４０】表４は抗体価を示す。Ｂａｌｂ／ｃマウス
３匹を１００μｇＧＳＴ（Ｋ）、１００μｇ融合タンパ
ク（Ｆ）、１００μｇ「免疫スーパーモレキュール」、
１００μｇ組換え抗イディオタイプ抗体（ｒＡ）または
組換えインフルエンザ／ＨＩＶウイルス（Ｖ）の４．０
ｌｏｇ10ＴＣＩＤ50のいずれかで免役し、２週間後お
よび４週間後に追加免疫した。最後の免疫の後１週間に
ＥＬＩＳＡ抗体を測定した。結果は有意の陽性価の逆数
で表した。切り捨ては正常マウス血清の２倍の価をとっ
た。組換えｇｐ４１を抗原として用いた。
３匹を１００μｇＧＳＴ（Ｋ）、１００μｇ融合タンパ
ク（Ｆ）、１００μｇ「免疫スーパーモレキュール」、
１００μｇ組換え抗イディオタイプ抗体（ｒＡ）または
組換えインフルエンザ／ＨＩＶウイルス（Ｖ）の４．０
ｌｏｇ10ＴＣＩＤ50のいずれかで免役し、２週間後お
よび４週間後に追加免疫した。最後の免疫の後１週間に
ＥＬＩＳＡ抗体を測定した。結果は有意の陽性価の逆数
で表した。切り捨ては正常マウス血清の２倍の価をとっ
た。組換えｇｐ４１を抗原として用いた。
【００４１】
【表４】
【００４２】表５はＨＩＶ−１感染の中和を示す。中和
価はＨＩＶ−１の１０3 感染単位を含む４０μｌウイル
ス上清と１０μｌ熱不活化抗血清を３７℃１時間インキ
ュベートして測定した。残存ＨＩＶ−１感染価は表３の
記載により測定した。表中において、Ｐ：融合ペプチ
ド、Ｖ：キメラインフルエンザ／ＨＩＶウイルス、Ｓ
Ｍ：免疫スーパーモレキュール、ｒＡ：組換え抗体、を
示す。全ての対照群の中和価の逆数は１０より低かっ
た。
価はＨＩＶ−１の１０3 感染単位を含む４０μｌウイル
ス上清と１０μｌ熱不活化抗血清を３７℃１時間インキ
ュベートして測定した。残存ＨＩＶ−１感染価は表３の
記載により測定した。表中において、Ｐ：融合ペプチ
ド、Ｖ：キメラインフルエンザ／ＨＩＶウイルス、Ｓ
Ｍ：免疫スーパーモレキュール、ｒＡ：組換え抗体、を
示す。全ての対照群の中和価の逆数は１０より低かっ
た。
【００４３】
【表５】
【００４４】以下に、実施例について詳しく説明する
が、本発明はこれのみに限定されるものではない。 実施例 １ グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との
融合タンパクとして本発明に記載されているペプチドの
クローニングと発現、これらのペプチドによるマウスの
免疫を記載する、すべてのクローニング方法は常法に従
って行った（２４）。本発明に記載されたペプチドに相
当するオリゴヌクレオチドは、ハイブリッド化され、プ
ラスミドｐＧＸ−２Ｔ（ファルマシア製）のＢａｍＨＩ
とＥｃｏＲＩサイトの間にクローン化された。これによ
り、これらのペプチドのＮＨ2 末端はＧＳＴのＣＯＯＨ
末端に融合された。さらに、終止コドンがｇｐ４１ペプ
チド配列のＣＯＯＨ末端に加えられた。
が、本発明はこれのみに限定されるものではない。 実施例 １ グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との
融合タンパクとして本発明に記載されているペプチドの
クローニングと発現、これらのペプチドによるマウスの
免疫を記載する、すべてのクローニング方法は常法に従
って行った（２４）。本発明に記載されたペプチドに相
当するオリゴヌクレオチドは、ハイブリッド化され、プ
ラスミドｐＧＸ−２Ｔ（ファルマシア製）のＢａｍＨＩ
とＥｃｏＲＩサイトの間にクローン化された。これによ
り、これらのペプチドのＮＨ2 末端はＧＳＴのＣＯＯＨ
末端に融合された。さらに、終止コドンがｇｐ４１ペプ
チド配列のＣＯＯＨ末端に加えられた。
【００４５】これらの構造をＥ．ｃｏｌｉＤＨ５αに形
質転換し、融合タンパクの発現をイソプロピルチオガラ
クトシド（ＩＰＴＧ）で誘導した。誘導３時間の後、細
菌を遠心分離で集め、１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含
むリン酸バッファー生理食塩液（ＰＢＳ、ｐＨ７．２）
に懸濁し、そして超音波破砕した。細菌破片は遠心で落
とし、上清をグルタチオン セファロース４Ｂカラム
（ファルマシア製）にかけた。融合タンパクの溶出を１
００ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）中２０ｍＭグ
ルタチオンおよび１２０ｍＭＮａＣｌ含有液で行った。
この処理で得られた精製融合タンパクは常法に従いマウ
ス免疫に使用した。対照として、融合タンパクと同様に
調製したＧＳＴで免疫した。最終免疫の１週間後にマウ
スから採血した血清は、本発明に記載されたペプチドに
対して高い中和抗体価を示し、ｉｎｖｉｔｒｏでＨＩＶ
−１複製を阻害した（表４、表５）。
質転換し、融合タンパクの発現をイソプロピルチオガラ
クトシド（ＩＰＴＧ）で誘導した。誘導３時間の後、細
菌を遠心分離で集め、１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含
むリン酸バッファー生理食塩液（ＰＢＳ、ｐＨ７．２）
に懸濁し、そして超音波破砕した。細菌破片は遠心で落
とし、上清をグルタチオン セファロース４Ｂカラム
（ファルマシア製）にかけた。融合タンパクの溶出を１
００ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）中２０ｍＭグ
ルタチオンおよび１２０ｍＭＮａＣｌ含有液で行った。
この処理で得られた精製融合タンパクは常法に従いマウ
ス免疫に使用した。対照として、融合タンパクと同様に
調製したＧＳＴで免疫した。最終免疫の１週間後にマウ
スから採血した血清は、本発明に記載されたペプチドに
対して高い中和抗体価を示し、ｉｎｖｉｔｒｏでＨＩＶ
−１複製を阻害した（表４、表５）。
【００４６】実施例 ２
本実施例は、インフルエンザＡウイルスの血球凝集素の
部分として、本発明に記載されたペプチド配列の発現を
記載する。ｉｎ ｖｉｔｒｏ突然変異誘発が、本ペプチ
ド配列をインフルエンザＡウイルスの血球凝集素の抗原
部位Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥに導入するために用いられ
た（２５、２６）。これらのキメラＤＮＡ構造は、そこ
でインフルエンザＨＫ／ＷＳＮに「ＲＮＰ−トランスフ
ェクト」された。これらのキメラインフルエンザ／ＨＩ
Ｖウイルスは該ペプチドの抗原性質を有していた。
部分として、本発明に記載されたペプチド配列の発現を
記載する。ｉｎ ｖｉｔｒｏ突然変異誘発が、本ペプチ
ド配列をインフルエンザＡウイルスの血球凝集素の抗原
部位Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥに導入するために用いられ
た（２５、２６）。これらのキメラＤＮＡ構造は、そこ
でインフルエンザＨＫ／ＷＳＮに「ＲＮＰ−トランスフ
ェクト」された。これらのキメラインフルエンザ／ＨＩ
Ｖウイルスは該ペプチドの抗原性質を有していた。
【００４７】抗体吸収実験で、これらのキメラウイルス
は抗体２Ｆ５を通じてＨＩＶ−１の中和を阻害した（表
３）。キメラウイルスで免役したマウスの抗血清は該ペ
プチドと反応した（表４）。さらに、ｉｎ ｖｉｔｒｏ
でこれらの抗血清はことなったＨＩＶ分離株を中和した
（表５）。
は抗体２Ｆ５を通じてＨＩＶ−１の中和を阻害した（表
３）。キメラウイルスで免役したマウスの抗血清は該ペ
プチドと反応した（表４）。さらに、ｉｎ ｖｉｔｒｏ
でこれらの抗血清はことなったＨＩＶ分離株を中和した
（表５）。
【００４８】実施例 ３
本実施例は、ペプチド配列が免疫グロブリン分子の重鎖
および軽鎖の可変領域をつなぐリンカー中に挿入され
た、いわゆる「免疫スーパーモレキュール」の部分とし
て本発明記載のペプチドの発現を記述する。特に、中和
抗ＨＩＶ−ｇｐ１２０抗体の単鎖Ｆｖ構造が常法により
つくられた（２７）。本発明記載のこの構造のペプチド
配列は軽鎖の可変領域を重鎖の可変領域につなぐリンカ
ー中に挿入された。この組換えタンパクを常法により
Ｅ．ｃｏｌｉで発現し、精製した。この構造には２つの
機能が観察された。第１のこの構造は元の抗体の抗原結
合性を示し、更にこの構造は、マウスに投与するとき、
異なったＨＩＶ−１分離株を中和する抗体を誘導した
（表５）。
および軽鎖の可変領域をつなぐリンカー中に挿入され
た、いわゆる「免疫スーパーモレキュール」の部分とし
て本発明記載のペプチドの発現を記述する。特に、中和
抗ＨＩＶ−ｇｐ１２０抗体の単鎖Ｆｖ構造が常法により
つくられた（２７）。本発明記載のこの構造のペプチド
配列は軽鎖の可変領域を重鎖の可変領域につなぐリンカ
ー中に挿入された。この組換えタンパクを常法により
Ｅ．ｃｏｌｉで発現し、精製した。この構造には２つの
機能が観察された。第１のこの構造は元の抗体の抗原結
合性を示し、更にこの構造は、マウスに投与するとき、
異なったＨＩＶ−１分離株を中和する抗体を誘導した
（表５）。
【００４９】この「免疫スーパーモレキュール」は同時
に能動および受動免疫を獲得する可能性を提供するもの
である。基本的にはこのような構造において、感染の進
行は、本分子の中和エピトープにより免疫系の効果的な
攻撃が開始される前に、抗原結合中和性質によって、最
初の投与と共に減速することができた。かくして、通常
観察される、免疫と典型的な能動免疫の応答の間の「タ
イム・ラグ」は克服することができた。更に既に示した
ＨＩＶ−ビリオンの中和の間にエピトープの呈示は非常
に効果的であるように思える。
に能動および受動免疫を獲得する可能性を提供するもの
である。基本的にはこのような構造において、感染の進
行は、本分子の中和エピトープにより免疫系の効果的な
攻撃が開始される前に、抗原結合中和性質によって、最
初の投与と共に減速することができた。かくして、通常
観察される、免疫と典型的な能動免疫の応答の間の「タ
イム・ラグ」は克服することができた。更に既に示した
ＨＩＶ−ビリオンの中和の間にエピトープの呈示は非常
に効果的であるように思える。
【００５０】実施例 ４
本実施例は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ組換え技術を使って抗イ
ディオタイプ抗体の産生と共に抗体２Ｆ５に対する抗イ
ディオタイプ抗体の生成につき記述する。抗体２Ｆ５を
抗イディオタイプ抗体の生成を誘導するためにマウスを
免疫するのに使用した。用いられた免疫の計画は、抗イ
ディオタイプ抗体が動物に展開されるよう頻度を増強す
るために常法に従って行った。そのようにして得られた
ポリクロナール血清を免疫活性につき試験し、そこで液
性免疫応答が抗体２Ｆ５の結合部位に対して実際に働い
ていることが抗原競合ＥＬＩＳＡによって決定された。
そこで、これらの血清中で抗イディオタイプ抗体がどこ
に存在するのかが証明された。
ディオタイプ抗体の産生と共に抗体２Ｆ５に対する抗イ
ディオタイプ抗体の生成につき記述する。抗体２Ｆ５を
抗イディオタイプ抗体の生成を誘導するためにマウスを
免疫するのに使用した。用いられた免疫の計画は、抗イ
ディオタイプ抗体が動物に展開されるよう頻度を増強す
るために常法に従って行った。そのようにして得られた
ポリクロナール血清を免疫活性につき試験し、そこで液
性免疫応答が抗体２Ｆ５の結合部位に対して実際に働い
ていることが抗原競合ＥＬＩＳＡによって決定された。
そこで、これらの血清中で抗イディオタイプ抗体がどこ
に存在するのかが証明された。
【００５１】抗イディオタイプ抗体による予防接種の概
念を試験するために、抗イディオタイプ抗体を含む血清
を引き続いてマウスの他の群を免役するのに用いた。こ
の免疫処置の完了後、実施例１に記載のグルタチオン−
Ｓ−トランスフェラーゼ融合タンパクのＨＩＶ−１ペプ
チド部分に対する上記記載の免疫反応に定性的に比較し
得る抗イディオタイプ血清に対する免疫応答を検出する
ことが可能となった。
念を試験するために、抗イディオタイプ抗体を含む血清
を引き続いてマウスの他の群を免役するのに用いた。こ
の免疫処置の完了後、実施例１に記載のグルタチオン−
Ｓ−トランスフェラーゼ融合タンパクのＨＩＶ−１ペプ
チド部分に対する上記記載の免疫反応に定性的に比較し
得る抗イディオタイプ血清に対する免疫応答を検出する
ことが可能となった。
【００５２】ここに記載したペプチドは、免疫原として
作用するに必要な品質を有していることが今や証明され
たのであるから、そしてまた更に、ここに記載のペプチ
ドの内部想像的品質の抗イディオタイプ抗体を使用する
ことによってＨＩＶ−１中和免疫応答を誘導することが
可能になったのであるから、抗イディオタイプ抗体がｉ
ｎ ｖｉｔｒｏ組換え技術によって構成される。この目
的を達成するために、存在する、分子的にクローン化さ
れた抗体の１あるいはそれ以上の高頻度可変領域（また
はその部分）が本発明に記載されたペプチド配列によっ
て置換された。それぞれの構造は、Ｅ．ｃｏｌｉで単鎖
Ｆｖフラグメントとして発現され、そして組換えタンパ
クは常法に従い精製された。そのように生産された抗イ
デイオタイプ抗体でマウスを免疫することによってＨＩ
Ｖ−１中和免疫応答を導き出した（表５）。
作用するに必要な品質を有していることが今や証明され
たのであるから、そしてまた更に、ここに記載のペプチ
ドの内部想像的品質の抗イディオタイプ抗体を使用する
ことによってＨＩＶ−１中和免疫応答を誘導することが
可能になったのであるから、抗イディオタイプ抗体がｉ
ｎ ｖｉｔｒｏ組換え技術によって構成される。この目
的を達成するために、存在する、分子的にクローン化さ
れた抗体の１あるいはそれ以上の高頻度可変領域（また
はその部分）が本発明に記載されたペプチド配列によっ
て置換された。それぞれの構造は、Ｅ．ｃｏｌｉで単鎖
Ｆｖフラグメントとして発現され、そして組換えタンパ
クは常法に従い精製された。そのように生産された抗イ
デイオタイプ抗体でマウスを免疫することによってＨＩ
Ｖ−１中和免疫応答を導き出した（表５）。
【００５３】実施例 ５
本実施例はランダムヘキサペプチドライブラリーでのペ
プチドマツプと配列番号１０−配列番号２５のペプチド
を含むフアージでマウスを免役することについて記述す
る。モノクローナル抗体２Ｆ５をコーデイングバッフア
ー（０．１Ｍ炭酸ナトリウムバッハアー、ｐＨ９．６）
中に５μｇ／ｍｌの濃度で一夜４℃において、ポリスチ
ロールチューブ（Ｍａｘｉｓｏｒｐ、Ｎｕｎｃ、デンマ
ーク）に被覆した。ＰＢＳで洗浄後、表面を５％ｗ／ｖ
スキムミルク粉末を含むＰＢＳで、３６℃２時間ブロッ
クした。ＰＢＳで洗浄し、次いでヘキサペプチドフアー
ジの培養をライブラリーで一夜５℃にて行った。〔ＴＰ
ＢＳ（０．５％ｖ／ｖＴｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）中
１０11形質導入単位〕。
プチドマツプと配列番号１０−配列番号２５のペプチド
を含むフアージでマウスを免役することについて記述す
る。モノクローナル抗体２Ｆ５をコーデイングバッフア
ー（０．１Ｍ炭酸ナトリウムバッハアー、ｐＨ９．６）
中に５μｇ／ｍｌの濃度で一夜４℃において、ポリスチ
ロールチューブ（Ｍａｘｉｓｏｒｐ、Ｎｕｎｃ、デンマ
ーク）に被覆した。ＰＢＳで洗浄後、表面を５％ｗ／ｖ
スキムミルク粉末を含むＰＢＳで、３６℃２時間ブロッ
クした。ＰＢＳで洗浄し、次いでヘキサペプチドフアー
ジの培養をライブラリーで一夜５℃にて行った。〔ＴＰ
ＢＳ（０．５％ｖ／ｖＴｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）中
１０11形質導入単位〕。
【００５４】充分にＴＰＢＳで洗浄して、次いで溶出バ
ッハー（０．１Ｎ ＨＣｌ／グリシン、ｐＨ２．２、１
ｍｇＢＳＡ／ｍｌ）でフアージを溶出した。溶出液を１
Ｍ−Ｔｒｉｓで中和した。Ｅ．ｃｏｌｉＫ９１Ｋａｎの
感染に使用した。フアージは気胞の方法により感染培地
から調製した。最終溶出液は形質導入Ｅ．ｃｏｌｉＫ９
１Ｋａｎを作出するのに使用された。これらのクローン
のＤＮＡの配列を決め、そしてヘキサペプチド配列を示
すフアージをコンピュータ翻訳で導き出した。
ッハー（０．１Ｎ ＨＣｌ／グリシン、ｐＨ２．２、１
ｍｇＢＳＡ／ｍｌ）でフアージを溶出した。溶出液を１
Ｍ−Ｔｒｉｓで中和した。Ｅ．ｃｏｌｉＫ９１Ｋａｎの
感染に使用した。フアージは気胞の方法により感染培地
から調製した。最終溶出液は形質導入Ｅ．ｃｏｌｉＫ９
１Ｋａｎを作出するのに使用された。これらのクローン
のＤＮＡの配列を決め、そしてヘキサペプチド配列を示
すフアージをコンピュータ翻訳で導き出した。
【００５５】配列番号１０−２５（表２）を有するクロ
ーンをフアージ調製に使用し、それぞれのフアージをマ
ウスに注射投与した。２回のブースター注射の後に夫々
の血清のＨＩＶ−１中和活性を試験した。全てのこれら
の血清はｉｎ ｖｉｔｒｏで中和された。対照の血清は
野生型フアージで免疫することによつて調製したがＨＩ
Ｖ−１を中和しなかつた。更に、配列番号１０ないし２
５をコードするオリゴヌクレオチドを、常法のクローニ
ング技術によつて非成熟タンパクVIIIのａａ２７と２８
の間のｆｄ−ｔｅｔの遺伝子VIIIに導入した。組換えフ
アージはＥ．ｃｏｌｉＫ９１Ｋａｎ内で生産し、常法で
精製し（ＰＥＧ媒介沈澱に次いで、ＣｓＣｌ濃度勾配
法）、そして免疫原として使用した。それぞれの血清は
ＨＩＶ−１中和測定で中和することが見出されたが、抗
野生型ｆｄ−ｔｅｔはそうでなかった。
ーンをフアージ調製に使用し、それぞれのフアージをマ
ウスに注射投与した。２回のブースター注射の後に夫々
の血清のＨＩＶ−１中和活性を試験した。全てのこれら
の血清はｉｎ ｖｉｔｒｏで中和された。対照の血清は
野生型フアージで免疫することによつて調製したがＨＩ
Ｖ−１を中和しなかつた。更に、配列番号１０ないし２
５をコードするオリゴヌクレオチドを、常法のクローニ
ング技術によつて非成熟タンパクVIIIのａａ２７と２８
の間のｆｄ−ｔｅｔの遺伝子VIIIに導入した。組換えフ
アージはＥ．ｃｏｌｉＫ９１Ｋａｎ内で生産し、常法で
精製し（ＰＥＧ媒介沈澱に次いで、ＣｓＣｌ濃度勾配
法）、そして免疫原として使用した。それぞれの血清は
ＨＩＶ−１中和測定で中和することが見出されたが、抗
野生型ｆｄ−ｔｅｔはそうでなかった。
【００５６】配列番号：１
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株ＢＨ１０のＧＰ１６０
ＧＰ１６０中の配列の位置：残基６６２−６６７より
性状：ＨＩＶ−１ ＧＰ１６０に対するヒトモノクロー
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ１５６５４、ヌクレオ
チド７５６３−７５８０より翻訳
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ１５６５４、ヌクレオ
チド７５６３−７５８０より翻訳
【００５７】配列番号：２
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株ＪＳ４／２６のＧＰ１６０
ＧＰ１６０中の配列の位置：残基６５５−６６０より
性状：ＨＩＶ−１ ＧＰ１６０に対するヒトモノクロー
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ３７５７６、ヌクレオ
チド１９６３−１９８０より翻訳
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ３７５７６、ヌクレオ
チド１９６３−１９８０より翻訳
【００５８】配列番号：３
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株（患者３Ｌ）のＧＰ１６０
ＧＰ４１中の配列の位置：残基１６４−１６９より
性状：ＨＩＶ−１ ＧＰ１６０に対するヒトモノクロー
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＸ６１３５２、ヌクレオ
チド４９０−５０７より翻訳
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＸ６１３５２、ヌクレオ
チド４９０−５０７より翻訳
【００５９】配列番号：４
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株のＳＦ１７０のＧＰ１６０
ＧＰ１６０中の配列の位置：残基６６７−６７２より
性状：ＨＩＶ−１ ＧＰ１６０に対するヒトモノクロー
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ６６５３３、ヌクレオ
チド１９９９−２０１６より翻訳
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ６６５３３、ヌクレオ
チド１９９９−２０１６より翻訳
【００６０】配列番号：５
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株のＪＨ３のＧＰ１６０
ＧＰ１６０中の配列の位置：残基６７３−６７８より
性状：ＨＩＶ−１ ＧＰ１６０に対するヒトモノクロー
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ２１１３８、ヌクレオ
チド２２６３−２２８０より翻訳
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ２１１３８、ヌクレオ
チド２２６３−２２８０より翻訳
【００６１】配列番号：６
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株のＺ−８４のＧＰ１６０
ＧＰ１６０中の配列の位置：残基６６９−６７４より
性状：ＨＩＶ−１ ＧＰ１６０に対するヒトモノクロー
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＪ０３６５３、ヌクレオ
チド２０３７−２０５４より翻訳
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＪ０３６５３、ヌクレオ
チド２０３７−２０５４より翻訳
【００６２】配列番号：７
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株のＣＡＭ１プロウイルスゲノム
のＧＰ１６０ ＧＰ１６０中の配列の位置：残基６６２−６６７より 性状：ＨＩＶ−１ ＧＰ１６０に対するヒトモノクロー
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＤ１０１１２、ヌクレオ
チド８２０９−８２２６より翻訳
のＧＰ１６０ ＧＰ１６０中の配列の位置：残基６６２−６６７より 性状：ＨＩＶ−１ ＧＰ１６０に対するヒトモノクロー
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＤ１０１１２、ヌクレオ
チド８２０９−８２２６より翻訳
【００６３】配列番号：８
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株のＪＳ４／６のＧＰ１６０
ＧＰ１６０中の配列の位置：残基６５９−６６４より
性状：ＨＩＶ−１ ＧＰ１６０に対するヒトモノクロー
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ３７４９１、ヌクレオ
チド２４１６−２４３３より翻訳
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ３７４９１、ヌクレオ
チド２４１６−２４３３より翻訳
【００６４】配列番号：９
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株のＳＢＢのＧＰ１６０
ＧＰ１６０中の配列の位置：残基４１３−４１８（部分
配列）より 性状：ＨＩＶ−１ ＧＰ１６０に対するヒトモノクロー
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ７７２２９、ヌクレオ
チド１２３９−１２５６より翻訳
配列）より 性状：ＨＩＶ−１ ＧＰ１６０に対するヒトモノクロー
ナル抗体のエピトープ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ７７２２９、ヌクレオ
チド１２３９−１２５６より翻訳
【００６５】配列番号：１０
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より
性状：モノクローナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００６６】配列番号：１１
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より
性状：モノクローナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００６７】配列番号：１２
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より
性状：モノクローナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００６８】配列番号：１３
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より
性状：モノクローナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００６９】配列番号：１４
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より
性状：モノクローナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００７０】配列番号：１５
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より
性状：モノクローナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００７１】配列番号：１６
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より
性状：モノクローナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００７２】配列番号：１７
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より
性状：モノクローナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００７３】配列番号：１８
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より
性状：モノクローナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００７４】配列番号：１９
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より
性状：モノクローナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００７５】配列番号：２０
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より
性状：モノクローナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００７６】配列番号：２１
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より性状：モノクロー
ナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
ナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００７７】配列番号：２２
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より
性状：モノクローナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００７８】配列番号：２３
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より
性状：モノクローナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００７９】配列番号：２４
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より
性状：モノクローナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００８０】配列番号：２５
配列の長さ：６アミノ酸残基
配列の型：アミノ酸配列
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパク
ｐ３中の配列の位置：残基４−９より
性状：モノクローナル抗体２Ｆ５結合ヘキサペプチド
【００８１】配列番号：２６
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：ウイルスＲＮＡに対するｃＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株ＢＨ１０のＧＰ１６０
参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ１５６５４
データベース入力の配列位置：７５６４−７５８０
【００８２】配列番号：２７
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：ウイルスＲＮＡに対するｃＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株ＪＳ４／２６のＧＰ１６０
参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ３７５７６
データベース入力の配列位置：１９６３−１９８０
【００８３】配列番号：２８
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：ウイルスＲＮＡに対するｃＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株（患者３Ｌ）のＧＰ１６０
参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＸ６１３５２
データベース入力の配列位置：４９０−５０７
【００８４】配列番号：２９
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：ウイルスＲＮＡに対するｃＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株ＳＦ１７０のＧＰ１６０
参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ６６５３３
データベース入力の配列位置：１９９９−２０１６
【００８５】配列番号：３０
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：ウイルスＲＮＡに対するｃＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株ＪＨ３のＧＰ１６０
参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ２１１３８
データベース入力の配列位置：２２６３−２２８０
【００８６】配列番号：３１
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：ウイルスＲＮＡに対するｃＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株Ｚ−８４のＧＰ１６０
参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＪ０３６５３
データベース入力の配列位置：２０３７−２０５４
【００８７】配列番号：３２
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：ウイルスＲＮＡに対するｃＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株ＣＡＭ１プロウイルスゲノムの
ＧＰ１６０ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＤ１０１１２ データベース入力の配列位置：８２０９−８２２６
ＧＰ１６０ 参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＤ１０１１２ データベース入力の配列位置：８２０９−８２２６
【００８８】配列番号：３３
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：ウイルスＲＮＡに対するｃＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株ＪＳ４／６のＧＰ１６０
参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ３７４９１
データベース入力の配列位置：２４１６−２４３３
【００８９】配列番号：３４
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：ウイルスＲＮＡに対するｃＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：ＨＩＶ−１分離株ＳＢＢのＧＰ１６０
参考：ＧｅｎｅＢａｎｋ受入れＭ７７２２９
データベース入力の配列位置：１２３９−１２５６
【００９０】配列番号：３５
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
【００９１】配列番号：３６
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
【００９２】配列番号：３７
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
【００９３】配列番号：３８
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
【００９４】配列番号：３９
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
【００９５】配列番号：４０
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
【００９６】配列番号：４１
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
【００９７】配列番号：４２
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
【００９８】配列番号：４３
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
【００９９】配列番号：４４
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
【０１００】配列番号：４５
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
【０１０１】配列番号：４６
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
【０１０２】配列番号：４７
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
【０１０３】配列番号：４８
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
【０１０４】配列番号：４９
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
【０１０５】配列番号：５０
配列の長さ：１８塩基対
配列の型：ヌクレオチド配列
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列分子の型：フアージＤＮＡ
フラグメントの型：内部フラグメント
起源：繊維状フアージｆＵＳＥ５のｐ３融合タンパクに
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
対する遺伝子コーデイング ｐ３内の配列位置：１０−２７
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-1 infection inchimpanzees by gp 120 V3 domain-
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using a definedrecombinant antigen, Nature 338: 5
85-587
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Burke, K. Katrak, 1 A.John, M. Ferguson, P.D. Min
or, R. A. Weiss, and J.W. Almond. 1989. Anengine
ered poliovirus chimaera elicits broadly
reactive HIV-1neutralizing antibodies, Nature 3
39: 385-388
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s containing Influenza B virus 5' and 3'noncod
ing regions on the neuraminidase gene is atte
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l antibody, reactive with conserved epitope on gp
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igenicity of the Hemagglutinin of Influenzavirus,
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【０１１７】26. Wiley, D. C., I. A. Wilson and
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luenzaHemagglutinin and their involvement in the
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and H. Katinger. 1991.Cloning and expression of a
HIV-1 specific single-chain Fv region fusedto Esc
hrichia coli Alkaline Phosphatase, Ann. New York
Acad. Sci. 646:106-114
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hrichia coli Alkaline Phosphatase, Ann. New York
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【図１】融合ペプチドのウエスタンブロツトである。
【図２】ＨＩＶ−１陽性６５名の血清の抗体価の結果を
示ものである。
示ものである。
【図３】ペプチドによる中和阻害の結果を示すものであ
る。
る。
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｐ 21/02
21/08 Ｃ１２Ｒ 1:19
//(Ｃ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/02
Ｃ１２Ｒ 1:19） Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ
(72)発明者 ゴツトフリード ヒムラー
オーストリア国エイ−1180 ウイーン、
コロレドガツセ29／13
(72)発明者 トーマス ムスター
オーストリア国エイ−1180 ウイーン、
チミツヒガツセ４
(72)発明者 アレクサンドラ トルコラ
オーストリア国エイ−1232 ウイーン、
シメルガツセ14
(72)発明者 マルチン プルチャー
オーストリア国エイ−1180 ウイーン、
クロステルガツセ１／12
(72)発明者 ゲオルグ マイワルト
オーストリア国エイ−1040 ウイーン、
フオルマンガツセ６／15
(72)発明者 フランツ シュタインドル
オーストリア国エイ−1160 ウイーン、
コツプストラーセ69／３／23
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)
ＣＡ（ＳＴＮ)
ＥＵＲＯＰＡＴ（ＱＵＥＳＴＥＬ)
ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)
ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (16)
- 【請求項１】 ヒト免疫不全ウイルス−１（ＨＩＶ−
１）の異なった株および臨床分離株に対し中和活性を示
し、ＨＩＶ−１に起因する細胞融合を阻害する抗体に結
合するペプチドであって、該ペプチドは配列番号１ない
し配列番号２５の１つよりなることを特徴とするペプチ
ド。 - 【請求項２】 請求項１記載のペプチドであって、該ペ
プチドが配列番号２６ないし配列番号５０のいずれか１
つに記載したヌクレオチド配列によって、あるいは縮重
により配列番号２６ないし配列番号５０のヌクレオチド
配列から引き出される配列によって、エンコードされて
いることを特徴とするペプチド。 - 【請求項３】 哺乳動物に単独またはアジュバントと組
み合わせて投与することによりＨＩＶ−１中和抗体の生
成を導く免疫反応を引き起こす請求項１記載のペプチ
ド。 - 【請求項４】 アジュバントが、該ペプチドが化学作用
によってそれに結合される、物質である、請求項３記載
のペプチド。 - 【請求項５】 配列番号１ないし配列番号２５よりなる
群から選択された少なくとも１つのペプチドが、タンパ
ク質分子であるアジュバントに、それぞれのヌクレオチ
ド配列の融合と、それに続く生物発現系における融合遺
伝子の発現により結合されたことを特徴とする融合ペプ
チドの形である請求項４記載のペプチド。 - 【請求項６】 ペプチドが、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＨＩＶ
−１に結合する抗体または抗体フラグメントを選択する
ために使用されることを特徴とする請求項１記載のペプ
チド。 - 【請求項７】 ペプチドが、ＨＩＶ−１感染患者または
実験動物の完全血清中の中和価を測定するための、ある
いは感染状態を決定するための、あるいは更に感染の進
行を予測するための免疫テストに使用される請求項１記
載のペプチド。 - 【請求項８】 配列番号１ないし配列番号２５からなる
群より選択された１またはそれ以上のペプチドが単鎖Ｆ
ｖフラグメントの可変領域をつなぐためのリンカーまた
はその部分として使用されることを特徴とする請求項５
記載の融合ペプチド。 - 【請求項９】 配列番号１ないし配列番号２５からなる
群より選択された１またはそれ以上のペプチドがモノク
ローナル抗体のペプチド配列の１またはそれ以上の部分
で置換されることを特徴とする請求項５記載の融合ペプ
チド。 - 【請求項１０】 配列番号１ないし配列番号２５からな
る群より選択された１またはそれ以上のペプチドが、モ
ノクローナル抗体のペプチド配列の１またはそれ以上の
高頻度可変領域の部分として発現されることを特徴とす
る請求項５記載の融合ペプチド。 - 【請求項１１】 融合ペプチドが、単鎖Ｆｖフラグメン
トの部分あるいはＦａｂフラグメントの部分として発現
されるか、あるいは化学的または酵素的に合成されるこ
とを特徴とする請求項５記載の融合ペプチド。 - 【請求項１２】 配列番号１ないし配列番号２５からな
る群より選択された１またはそれ以上のペプチドがウイ
ルスタンパクのペプチド配列の１またはそれ以上の部分
で置換されるか、あるいはウイルスタンパクの抗原部位
に挿入されていることを特徴とする請求項５記載の融合
ペプチド。 - 【請求項１３】 融合ペプチドが、ウイルスの一部であ
ることを特徴とする請求項１２記載の融合ペプチド。 - 【請求項１４】 ウイルスタンパクが、インフルエンザ
ウイルスの血漿凝集素またはノイラミニダーゼであるこ
とを特徴とする請求項１２記載の融合ペプチド。 - 【請求項１５】 ウイルスタンパクが、Ｂ型肝炎ウイル
スの表面抗原またはコア抗原であることを特徴とする請
求項１２記載の融合ペプチド。 - 【請求項１６】 請求項１に記載された少なくとも１つ
のペプチド、あるいは、請求項４または請求項５に記載
された少なくとも１つの融合ペプチドからなることを特
徴とするＨＩＶ−１に対するワクチン。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT98792A AT403050B (de) | 1992-05-14 | 1992-05-14 | Peptide, die antikörper binden |
| AT987/92 | 1992-05-14 | ||
| US93278792A | 1992-08-29 | 1992-08-29 | |
| US987/92 | 1992-08-29 | ||
| US932787 | 1992-08-29 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06293797A JPH06293797A (ja) | 1994-10-21 |
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Family
ID=25594514
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11300793A Expired - Fee Related JP3369246B2 (ja) | 1992-05-14 | 1993-05-14 | 遺伝的に分岐したｈｉｖ−１分離株を中和する抗体誘導能を有するペプチド |
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|---|---|
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| EP (1) | EP0570357B1 (ja) |
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| DE (2) | DE69311764T2 (ja) |
| ES (1) | ES2053413T3 (ja) |
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