CZ477799A3 - Polymorfní forma 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1H,4H-1,2,4-triazol)metyl-morfolinu s antagonistickým účinkem na tachykininové receptory - Google Patents

Description

Oblast techniky

Vynález se týká nové polymorfní formy sloučeniny: 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1H,4H,-1,2,4-triazol)metyl-morfolinu.

Současný vynález se také týká farmaceutických přípravků obsahujících novou polymorfní formu uvedené sloučeniny jako účinnou složku a jejich užití při léčbě.

Novou polymorfní formou je sloučenina podle současného vynálezu, která jako antagonista tachykininového receptorů je vhodná k léčbě nebo prevenci onemocnění centrálního nervového systému, zánětlivých onemocnění, bolestí nebo migrény, astmatu a zvracení.

Tato polymorfní forma se od ostatních známých forem 2-(R)-(l-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu pozitivně liší termodynamickou stabilitou a možností zavedení do farmaceutických přípravků.

······ · · · ·· ·· • · · · · · ···· ·· · · · · · ···« « · 4 9 4 4 9999 99 4 4 9

4 4 4 9 9 · 4 4 4 ·

9 4 9 4 4 4 4 94

Dosavadní stav techniky

Neuropeptidové receptory vázající substanci P (neurokinin-1; NK-1) se hojně vyskytují v nervovém systému savců (především v mozku a spinálních gangliích), v oběhovém systému a v tkáních (především v duodenu a jejunu) a jsou zapojeny do regulace velkého počtu rozmanitých biologických pochodů. Jde o senzorové vnímání - čich, vidění, sluch a bolest, kontrolu pohybu, žaludeční motolitu, vazodilataci, slinění a vylučování moči. Substance P (také jako SP) je přirozeně se vyskytující undekapeptid patřící do tachykininové skupiny peptidů, která byla nazvaná podle jejich okamžitého kontrakčního účinku na extravaskulární hladkou svalovou tkáň. Tachykininy se rozlišují podle konzervované karboxyl-terminální sekvence Phe-X-Gly-Leu-Met-NH₂.

Ze známých tachykininů savců jsou známé kromě SP ještě neurokinín A a neurokinin B označované jako NK-1, NK-2 a NK-3.

Substance P je farmakologicky účinný neuropeptid savců působící jako vazodilatant, depresant, stimulátor slinění a zvyšující kapilární permeabilitu. U zvířat způsobuje jak analgezii, tak hyperalgezii - tento účinek závisí na dávce a vnímavosti bolesti.

Výzkumem se prokázala možnost použití antagonistů tachykíninových receptorů při bolestech, bolestech

hlavy, především migrény, Alzheimerovy nemoci, roztroušené sklerózy, zeslabení abstinenčních příznaků po vysazení morfinu, kardiovaskulární změny, otoky (například otoky způsobené tepelným úrazem), chronických zánětlivých onemocnění (revmatická arthritis), astmatu a bronchiální hyperaktivity a ostatních respiračních onemocnění (např. senné rýmy), zánětlivých onemocnění střev (ulcerativní kolitidy, Crohnovy nemoci), zranění očí a zrakových zánětlivých onemocnění (proliferativní vitreoretínopatie), syndromu dráždívého tračníku a onemocnění močového měchýře (cystitidy, hyperreflexie detrusoru močového měchýře).

Dále se předpokládá možnost pozitivního využití antagonistů tachykininových receptorů u těchto onemocnění: deprese, změny nálady, chronické obstruktivní nemocnění dýchacích cest, hypersenzitivní onemocnění (škumpa jedovatá), vazospastická onemocnění (angína pectoris, Reynauldova nemoc), kolagenózy (skleroderma a eosinofilní fasciolóza), reflexní sympatická dystrofie (syndrom bolestivého ramene, ruky) a jiné onemocnění jako alkoholismus, somatické onemocnění způsobené stresem, neuropatie, neuralgie, onemocnění způsobené zvýšenou imunitní činností nebo její supresí jako systematický lupus erythematodes, oční onemocnění (konjunktivitis, alergická konjunktivitis), kožní onemocnění (kontaktní dermatitida, atopický ekzém, kopřivka a ostatní

CD ekzematické dermatitidy).

Pokusy směřují k získání antagonistů receptorů substance P a ostatních tachykininových peptidů účinně zasahujících v léčbě tohoto širokéškály onemocnění. Určité morfolinové a thiomorfolinové sloučeniny působící antagonisticky k substanci P jsou popsané ve veřejné přihlášce WO č. 94/00440, evropské přihlášce č. 0,577,394 a veřejné přihlášce WO č. 95/16679. Sloučenina 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)feny1-4-(3-(5-oxo-1H,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolin je výslednou sloučeninou příkladu 75 ve zveřejněné přihlášce WO č.95/16679. Tato sloučenina je pak v této přihlášce označovaná jako forma II.

Morfologické formy farmaceutických sloučenin se během klinických studií a zkoušek stability neudržovaly konstantní, takže stanovení účinné dávky se může lišit od jedné šarže k druhé. Pokud je farmaceutická sloučenina připravena pro užití, je nutné rozpoznat morfologickou formu obsaženou v každé dávce, aby bylo jisté, že je použitá- stejná forma a stejné množství účinné látky v každé jednotlivé dávce. Proto je nanejvýš důležité zjištění, zda jde o jednoduchou morfologickou formu nebo zda jde o některé známé kombinace morfologických forem. K tomu je třeba dodat, že určité morfologické formy mohou zvýšit termodynamickou stabilitu a jsou vhodnější k zavedení • · • · · · • · · · · · «··· • · · ·»······ • · · · ♦ ······· · · · » · · · · · · ···· • · · · 4 4 4 44 9 4 do farmaceutických přípravků. Polymorfní forma chemické sloučeniny má stejné chemické složení, ale rozdílné krystalické uspořádání.

Přehled obrázků na výkrese

Obr.l difrakce RTG. záření na práškovém materiálu formy I 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu

Obr.2 difrakce RTG. záření na práškovém materiálu formy II 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H -1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je nová polymorfní forma sloučeniny 2-(R)-(l-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu a postup přípravy této polymorfní formy.

• · « · * ·

Sloučenina 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3- (5-oxo-lH,4H —1,2,4-triazol)-metyl-morfolin má následující strukturu:

Sloučenina je antagonistou tachykininového receptorů k léčbě zánětlivých onemocnění, bolesti nebo migrény, astmatu a zvracení.

• · · ftft ftft · * ftftft · · · · ·< · ftftftft ftftftft • · ftftft ftftftftftftft ftft ft <*·· ftft · ftftftft ·· ·· ftft » ftft ftft

Tato polymorfní forma (zde označována jako forma I) vyniká mezi krystalickými a ostatními morfologickýmí formami termodynamickou stabilitou a je vhodnější pro zavedení do farmaceutických přípravků.

Součástí vynálezu je postup přípravy formy I 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3 - (S)- (4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H -1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu, která zahrnuj e:

uvedení do rovnovážné polohy formy II 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)etoxy)- .

-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH, 4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu v rozpouštědle, které se volí z etanolu, 2-propanolu, acetnitrilu a izopropyl-acetátu.

Součástí vynálezu je postup přípravy formy I sloučeniny 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis (trifluor-metyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu, která zahrnuje:

zahřívání 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1H, 4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu vhodného morfologického uspořádání při teplotě v rozmezí od 215 do 230°C, a následné navrácení vzorku k teplotě místnosti.

Zahřívání 2-(R)- (1- (R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3- (S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo• 9

-IH, 4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu lze provést v atmosféře dusíku v diferenciální kalorimetrické buňce pro sériové vyšetření vzorku a 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis-(trifluor-metyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor) ¹ fenyl-4-(3-(5-οχο-1Η,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolin lze zahřívat na teplotu okolo 215-230°C, a pak zchladit *

na teplotu místnosti. Vhodným výchozím morfologickým uspořádáním 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3- (S)- (4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1H, 4H-1,2,4-triazol)metyl-morfolinu je forma II.

Současný vynález se týká i přípravy ve velkém měřítku formy I 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl) -fenyl)etoxy)-3- (S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1H, 4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu, která zhruba zahrnuj e:

uvedení 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo' -IH, 4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu ve vhodném morfologickém uspořádání do suspenze v roztoku metanolu » a vody především v poměru 2:1, přidání očkujících krystalů formy I sloučeniny

2-(R)-(l-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1H,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu, míchání výsledné směsi při teplotě v rozmezí od 0 do 50°C pod dobu vhodnou k vytvoření formy I sloučeniny

2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo« · · · • » · · · φ φ • * · · * · φ

9 Φ ΦΦΦΦ φφφφ • φ φφφ φφφφφφφ φφ φ φφφφ ·· φ φφφφ φφ φφ φφ · φφ φφ

-IH, 4Η-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu a oddělení výsledné formy I sloučeniny

2-(R)-(l-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl) -fenyl)etoxy)-3 - (S)- (4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1H,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu.

Současný vynález se týká postupu přípravy morfologicky homogenního 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1H,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu, který zahrnuje shora uvedené postupy.

Sloučenina podle současného vynálezu, nová polymorfní forma 2-(R)-(1-(R)- (3,5-bis (trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1H,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu působí antagonisticky na tachykininové receptory a je vhodná k léčbě zánětlivých onemocnění, bolesti nebo migrény, astmatu a zvracení.

Současný vynález se týká farmaceutických přípravků obsahujících novou polymorfní formu jako účinnou látku a užití sloučeniny a přípravků tuto sloučeninu obsahujících při léčbě.

Forma I 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1H,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu je bezvodá a nehygroskopická sloučenina s vysokým stupněm tepelné stability. Vyskytuje se jako čistá pevné látka nebo ve směsi vody a alkoholu.

t « · 4 r · · i * · 9 4

B * · 4

Forma II je bezvodý krystalický materiál o teplotě tání 254°C, který se přímo získá krystalizací během chemické syntézy 2-(R)-(l-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl) etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1H,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu.

Difrakce RTG záření na práškovém materiálu (XRPD)

Difrakce RTG záření na práškovém materiálu se často používá k ozřejmění struktury molekuly, krystaličností a polymorfismů. Výsledky této metody se zaznamenávají difraktometrem práškového materiálu Philips APD 3720 vybaveným generátorem 3 kW rentgenového záření (CuKal záření) a scintilačním detektorem Nal (Ti). Měření se provádí v rozmezí od 3° do 45° (2 theta) při teplotě místnosti. Výsledky jsou presentovány na obrázcích 1 a 2 .

Forma I sloučeniny 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1H,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu je charakterizována křivkou difrakce RTG záření s vrcholy při: 12.0, 15.3, 16.6, 17.0, 17.6, 19.4, 20.0, 21.9, 23.6, 23.8 a 24.8° (2 theta).

Forma II 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)etoxy)-3- (S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1H,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu je charakterizována křivkou difrakce RTG záření s vrcholy při: 12.6, 16.7, 17.1, 17.2, 18.0, 20.1, 20.6, 21.1, • · · · · · · ♦ · · ·* ♦ · · · · to 1 1 « · · · * ·····»» · · « • · · · ·· * * ♦ · · ·· ♦♦ ·· >» ·» tol •· «*»·

22.8, 23.9 a 24.8° (2 theta).

Tyto křiky ukazují na jednoznačnou krystalickou strukturu sloučenin. Obě, forma I i forma II,-vykazují jasné vrcholy v oblasti charakteristické pro krystalický materiál.

Diferenciální sériová kalorimetrie (DSC)

Podle diferenciální sériové kalorimetrie formy I 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)-etoxy)-3-(S)- (4-fluor)fenyl-4-(3-(5-οχο-1Η,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu a formy II 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)-etoxy)-3-(S)- (4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu se termální vlastnosti těchto morfologických forem neliší.

Obě formy při stejné teplotě vykazují při tání jedinou endotermní křivku.

Křivka DSC formy I 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-IH,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu se jeví jako jediná endotermní křivka při tání s vrcholem teploty při 254,7°C, s extrapolovanou teplotou nástupů při 254,7°C a entalpií 105 J/g.

Křivka DSC formy II 2-(R)-(l-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolinu se jeví jako jediná endotermní křivka při tání s vrcholem

9

9**9 ♦ ♦ · · * 9 · 9 9 · * 9 * · 9 · 9··» * ·«· *·«··«« * « · * * * * · * · *99*

9 « · 99 · «« «· teploty při 255, 6°C, s extrapolovanou teplotou dobou nástupů při 254,4°C a entalpií 107 J/g.

NMR

Spektrum v protonové a uhlíkové nukleární magnetické rezonanci formy I a formy II neprokazuje žádní chemické změny při konverzi z formy II na formu I.

Rozpustnost

Rozpustnost formy I v roztoku metanolu a vody v poměru 2:1 při teplotě 0°C je 0,9 ± 0,1 mg/ml.

Rozpustnost formy II v roztoku metanolu a vody v poměru 2:1 při teplotě 0°C je 1,3 ± 0,2 mg/ml.

Rozmezí rozpustnosti je 1,4, což poukazuje na to, že forma I je více stabilní polymorfní forma. Forma I je stabilnější než forma II o 0,2 kcal/mol.

Tlak par

Při zkoušce Knudsenovou efuzí byl tlak par formy I a formy II při zvýšených teplotách podobný.

Zkouška antagonismu k tachykininu

Sloučenina podle současného vynálezu, polymorfní forma I 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-οχο-1Η,4H-1,2,4-triazol)-metyl-morfolínu, je použitelná pro svůj antagonismus k tachykininům, především substanci P a neurokininu A, k léčbě gastrointestinálních onemocnění, onemocnění »»«» φ« · φφφφ ·· · «φφ «φφφ ·* · ·♦♦» ·««* • · φφφφ φφφφ · · φ φ · φ · φ · ·· φ φφφφ ·· ·· ·· » φφ φφ centrálního nervového systému, zánětlivých onemocnění, bolestí a migrény, astmatu a zvracení. Jde o léčbu savců. Antagonismus této sloučeniny lze demonstrovat následující zkouškou.

A. Exprese receptoru v COS

K expresi klonovaného lidského neurokinin-1 receptoru (NK1R) přechodně v COS se cDNA pro lidský NK1R klonuje v expresním vektoru pCDM9, který vznikl z expresního vektrou pCDM8 (INVITROGEN) vložením genu ampicilin rezistentního (nukleotid 1973 až 2964 z BLUESCRIPT SK+) na místo Sac II. Přenos 20 pg plasmidu DNA do 10 miliónů COS buněk se provedlo otevřením pórů za pomoci elektrického proudu v 800 pl pufru pro přenos genetického materiálu do buněk (135 mM chloridu sodného, 1,2 mM chloridu vápenatého, 1,2 mM chloridu hořečnatého, 2,4 mM hydrogenfosforečnanu draselného,

0,6 mM dihydrogenfosforečnanu draselného, 10 mM glukózy, 10 mM HEPES o pH 7,4) pří 260 V a 950 pF a dále za použití IBI GENEZAPPER (IBI, New Haven, CT).

Tři dny před zkouškou vazby se při teplotě 37°C buňky inkubují v 10% roztoku telecího séra, 2mM glutaminu,

100 U/ml penicilin-streptomycinu a 90% DMEM media (GIBCO, Grand Island, NY) v 5% oxidu uhličitého.

B. Stabilní exprese v CHO

K vytvoření stabilní buněčné linie s expresí klonovaného lidského NK1R se cDNA klonuje ve vektoru • · • ft ft « · 4 44 9 4 · 4

4 4 4 4 4

9 4 ftftftft • 9 444 494444 • ftftft 4 4 9

94 44 ft pRcCMV (INVITROGEN) . Přenos 20 p.g plasmidu DNA do CHO buněk se provede otevřením pórů pomocí elektrického proudu v 800 μΐ pufru pro přenos genetického materiálu do buněk doplněného 0,625 mg/ml DNA spermatem slanečka ve 300 V a 950 pF za použití IBI GENEZAPPER (IBI).

Buňky s přeneseným genetickým materiálem se inkubují v CHO živném prostředí (10% telecí sérum, 100 U/ml penicilin-streptomycin, 2mM glutaminu, 1/500 hypoxantin-thymidin (ATCC), 90% IMDM živné prostředí (JRH BIOSCIENCES, Lenxa, KS) 0,7 mg/ml G418 (GIBCO)] v 5% oxidu uhličitém při teplotě 37°C do vzniku viditelných kolon. Každá kolona se oddělí a rozmnoží. Buněčný klon s největším počtem lidských NK1R se oddělí pro následné použití ve screeningu léku.

C. Provedení zkoušky za použití COS nebo CHO

Zkouška vazby lidského NK1R s expresí buď v COS nebo CHO buňkách je založená na použití substance P značené I¹²⁵ ( ¹²⁵i-gp_z Du PONT, Boston, MA) jako radioaktivně značeném ligandu, který konkuruje neznačené substanci P nebo jakémukoli jinému ligandu ve vazbě k lidskému NK1R. Jednovrstevné buněčné kultury COS .nebo CHO se rozdělí v non-enzymatíckém roztoku (SPECIALTY MEDIA, Lavallette, NJ) a znovu se uvede do suspenze v odpovídajícím množství pufru pro vazbu (50 mM Tris pH 7,5, 5 mM chloridu manganatého, 150 mM chloridu sodného, 0,04 mg/ml bacitracinu, 0,004 mg/ml leupeptinu, 0,2 mg/ml BSA, 0,01 mM fosforamidonu) tak, ·· 999 · aby 200 μί suspenze buněk způsobila zvýšení na přibližně 10 000 imp/min ze specificky vázaného ¹²⁵I-SP (přibližně 50 000 až 200 000 buněk).

Při zkoušce vazby se 200 μί buněk přidá do trubice obsahující 20 μί 1,5-2,5 nM ¹²⁵I-SP a 20 ml neznačené substance P nebo jiné zkoumané sloučeniny. Trubice se za mírného protřepávání inkubuje 1 hodinu při teplotě místnosti nebo při teplotě 4°C . Vázaný radioaktivní materiál se od nevázaného oddělí GF/C filtrem (BRANDEL, Gaithersburg, MD) , který se předem zvlhčí 0,1% roztokem polyetyleniminu. Filtr se třikrát promyje 3 ml promývacího pufru (50 mM Tris pH 7.5, 5mM chlorid manganatý, 150 mM chlorid sodný) a radioaktivita se určí počítačem gama záření.

Aktivaci fosfolipázy C přítomností NKlR lze měřit expresi lidských NKlR v CHO buňkách stanovením akumulace inositol-monofosfátu (degradačního produktu IP₃) . CHO buňky se naočkují na plotny s dvanácti prohlubněmi v počtu 250 000 buněk na prohlubeň. Po 4 dnech inkubace v CHO živném prostředí se do buněk inkubací se přes noc uloží 0,025 μθί/ml ³H-myoinositolu. Extracelulární radioaktivní částice se odstraní promytím fyziologickým roztokem s fosfátovým pufrem. Každá prohlubeň se naplní chloridem lithným do konečné koncentrace 0,1 mM s nebo bez testované sloučeniny a inkubace se provádí 15 minut při teplotě 37°C. K aktivaci lidských NKlR se do prohlubně přidá substance

99

9 9 9

9 9 9 • »0 0

9 9 9 •0 *0

9

0 0

9 999 • 0 ·«·· ♦ ♦ ·

9 9

9 9

9 9 9

99 »

P k výsledné koncentraci 0,3 nM. Po 30 minutách inkubace při teplotě 37°C se živné prostředí odstraní a přidá se O,1N roztok kyseliny chlorovodíkové. Na každou prohlubeň se působí ultrazvukem při teplotě 4°C a provede se extrakce směsí chloroformu a metanolu v poměru 1:1. Vodný podíl se vloží na 1 ml kolony iontoměniče Dowex AG 1X8. Kolona se promyje O,1N roztokem kyseliny mravenčí, a následně směsí 0,025M roztoku mravenčanu amonného a O,1N roztoku kyseliny mravenčí. Inositol monofosfát se eluuje směsí 0,2M roztokem mravenčanu amonného a O,1N roztoku kyseliny mravenčí, a následně se provede kvantitativní analýza počítačem beta záření.

Aktivita sloučeniny podle současného vynálezu je popsána zkouškou popsanou Lei a spol. v British J. Pharmacol, 105, 261-262 (1992).

Význam sloučeniny podle současného vynálezu spočívá v možnosti využití pro léčbu onemocnění způsobených přebytkem tachykininové aktivity, zvláště substance P.

Zvýšení tachykininové aktivity, především substance P, způsobuje rozmanité onemocnění centrálního nervového systému. Mezi takové onemocnění patří změny nálady, deprese a depresivní stavy - záchvat deprese nebo recidivující depresivní stavy a poruchy nálady nebo maniodepresivní stavy I, II a dále cyklické poruchy nálady; úzkostné stavy - epizody panické úzkostné poruchy, panické stavy spojené s agorafobií, agorafobie • 4 » 4 · 4

4 4

4 4 • · 4 • · · · ♦ · ·· • » 4 4

4 ··♦· »44 • 4 »4 • »4 4 « * 4 4 • 4 4 4 • 4 4 4 • 4 44 s předcházejícími panickými úzkostnými stavy v anamnéze; specifické fóbie - specifické animální fóbie, sociální fóbie; obsesivně kompulsivní poruchy; onemocnění způsobené stresem - posttraumatické stresové onemocnění, akutní stresové stavy a generalizované úzkostné stavy; schizofrenie a ostatní psychotické onemocnění - například schizofreniformní onemocnění, schizoafektivní onemocnění, delirantní představy, krátké psychopatické příhody, sdílené psychopatické stavy, psychopatické onemocnění s delirantními představami nebo halucinacemi; delirium, demence a amnestické a jiné kognitivní a neurodegenerativní onemocnění jako například Alzheimerova nemoc, senilní demence, demence Alzheimerova typu, vaskulární demence a ostatní demence, jako například demence způsobená virem HIV, traumatem hlavy, Parkinsonovou nemocí, Huntingtoným onemocnění, Pickovou nemocí,

Creutzfeldt-Jakobovým onemocněním a demence s mnohočetnou etiologií; Parkinsonova nemoc a jiné extrapyramidální pohybová onemocnění - lékově navozené onemocnění pohybového aparátu, například neuroleptiky navozený parkinsonismus, neuroleptický maligní syndrom, neuroleptiky navozená akutní dystonie, neurolepriky navozené akutní akathisie, neuroleptiky navozená akutní pomalá diskinezie a lékově navozený posturální tremor; na substanci závislé onemocnění vznikající požíváním alkoholu, amfetaminů (nebo amfetaminu podobných látek), kofeinu, výtažků konopí, kokainu, halucinogenů, · 9 · ·· · • 9 · «

• 99 9 • « 9 4 ♦ · » • 4 4 4 • · « 9

9* 9« ¹⁷ inhalačních a aerosolových hnacích plynů, nikotinu, opiátů, derivátů fenylglycinu, sedativ, hypnotik a anxiolytik, jakož i závislost, předávkování, intoxikaci, abstinenční příznaky při vysazení drogy, intoxikační delirium, delirium při vysazení drogy, přetrvávající demence, psychotické onemocnění, změny nálad, úzkostné stavy, sexuální dysfunkce a poruchy spánku. Se zvýšením tachykininové aktivity souvisí i epilepsie, Downův syndrom a demyelinizačni onemocnění jako je roztroušená skleróza a amyotrofická laterální skleróza a ostatní neuropatologické stavy jako je periferní neuropatie, například diabetická neuropatie nebo chemoterapií navozená neuropatie, postherpetická neuropatie, trigeminální neuralgie, segmentální nebo interkostální neuralgie a ostatní neuralgie; cerebrovaskulární onemocnění způsobené akutním nebo chronickým poškozením cerebrovaskulárního systému jako je mozková infarzace, subarachnoídálním krvácením nebo mozkový edém.

Tachykininová aktivita, především substance P, je významně spojena s nocicepcí a bolestí. Sloučeninu podle současného vynálezu lze proto s výhodou použít při prevenci nebo léčbě onemocnění nebo stavů spojených s výraznou bolestivostí. Jde o onemocnění měkkých tkání a povrchová zranění, jako je akutní trauma, osteoartritis, revmatická artritis, muskulo-skeletální bolest, zvláště post-traumatická, bolesti páteře, bolestivé syndromy myofasciální, bolesti hlavy, φ φ φ φ φ φ « * φφφ φ φφφφ φ

φφ φφ • φ φ φ • φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φφ φφ episiotomické bolesti a popáleniny; hluboká a viscerální bolest jako je bolest srdce, bolesti svalů, bolesti očí, orofaciální bolest - bolesti zubů, dále bolesti břicha, gynekologické bolesti - způsobené dysmenorrhoeou nebo porodní bolesti; bolesti způsobené poraněním periferního nervu a nervového kořene, bolesti způsobené onemocnění nervu jako například uskřinutí nervu a vytržení brachiálního plexu, amputace, periferní neuropatie, bolesti troj klaného nervu, atypické faciální bolesti, poraněni nervového kořene a arachnoiditis; bolesti způsobené karcinomem, často označované jako karcinomové bolesti; bolesti centrálního nervového systému, jako například bolesti způsobené poraněním páteře nebo mozkového kmene; bolesti páteře v oblasti křížo-kyčelní, ischias, ankylozující spondylitida, dna a bolesti jizev.

Tachykininový antagonismu, především substance P, je významně spojen s léčbou respiračních onemocnění, především těch, které souvisejí s nadbytečnou sekrecí hlenu jako je například chronické obstruktivní onemocnění dýchacích cest, bronchopneumonie, chronická bronchitis, cystícká fíbróza a astma, respirační distress syndrom dospělých (ARDS), bronchospasmus; zánětlivé onemocnění, jako například zánětlivé onemocnění střev, psoriáza, fibrositis, osteoartritis, revmatická artritis, pruritis a spálení sluncem; alergie jako je ekzém a rhinitis; hypersensitivita jako například reakce na škumpu jedovatou; oftalmologické φφ ♦·*·♦ φ • · φ φφφ • · φ · • φ φ φ φφ φφ

onemocnění - zánět spojivek, alergická konjunktivitis, oftalomologické onemocnění spojené s proliferaci buněk - vitroretinopatie; kožní onemocnění jako například kontaktní dermatitida, atopická dermatitida, kopřivka a ostatní ekzematické dermatitidy.

Tachykininový antagonismu, především substance P, je významně spojen léčbou neoplasmat, především nádoru prsu, neuroganglioblastémů a malobunščných karcinomů malobunščného karcinomu plic.

Antagonisty tachykininových receptorů lze s výhodou použít při léčbě gastrointestinálních onemocnění, včetně zánětlivých a onemocnění gastrointestinálního traktu jako je gastritis, gastroduodenální vředová choroba; při žaludečních karcinomech, žaludečních lymfomech, při onemocnění spojených s viscerální neuronální dysbalancí a při léčbě následujících onemocnění: ulcerativní kolitis, Crohnova nemoc, syndrom dráždivého tračníku, zvracení, včetně akutního, opožděného zvracení a zvracení vyvolané léčbou chemoterapeutiky, zářením, toxiny, virovou a bakteriální infekcí, těhotenstvím, vestibulárním onemocněním jako je například kinetózou, při závratích a Menierově nemoci, zvracení vyvolané chirurgickým zákrokem, migrénou, změnami íntrakraníálního tlaku; dále při léčbě gastro-esofageálním refluxu, následků požití kyselin, následků požití velkého množství jídla nebo pití, zvýšené žaludeční kyselosti, regurgitace, • · · · · 4 · · *· 4 4 4 4 4 • · 4 4 4 4 4«*· •444 4 φ 4

44 44 4 • 4 4 4

4 4 4 • · 4 4 • ·4 4

44 pálení žáhy - náhlého, nočního nebo jídlem vyvolaného, dyspepsie a vodnatých průjmů.

Tachykininového antagonismu, především antagonismu substance P, lze s výhodou využít při léčbě onemocnění způsobených stresem, reflexní sympatetickou dystrofií, jako je například syndrom bolestivé ruky, syndrom bolestivého ramene; adverzní imunologické reakce jako je rejekce proti transplantované tkání a onemocnění spojené se zvýšené imunitní odpovědi nebo její supresí jako například systémový lupus erythematodes;

extravazace plazmy při léčbě cytokiny; onemocnění močového měchýře jako je cystitis, hyperreflexie detrusoru močového měchýře a inkontinence; fibrózy a kolagenózy jako je skleroderma a eosinofilní fasciolóza; vaskulárních onemocnění způsobených vazodilatací, vazospastických onemocnění jako je angína pektoris, vaskulární bolesti hlavy, migréna a Reynauldovy nemoc; a bolestí a nociceptivních vjemů odpovídajících nebo spojených s dalšími současnými změnami především přenesená bolest při migréně.

Sloučeninu podle současného vynálezu lze použít při léčbě kombinací shora uvedených onemocnění, především při léčbě pooperční bolesti a pooperační nauzey a zvracení.

Sloučenina podle současného vynálezu je zvláště vhodná při léčbě zvracení, a to akutního, opožděného a zvracení vyvolaného léčbou chemoterapeutiky, zářením,

9 ·

• · 9 9 9 • 9 9 9 9 9 •99 99 99 999 9 9 • · · 9 ·99 toxiny, chirurgickým zásahem, těhotenstvím, vestibulárním onemocněním, kinetózou, migrénou a změnami intrakraniálního tlaku. Velmi vhodné je použití sloučeniny podle současného vynálezu při léčbě zvracení způsobeného antineoplastickými (cytotoxickými) látkami, včetně běžně používaných při chemoterapii karcinomů.

Příkladem takových chemoterapeutik jsou alkylační činidla jako například mechloretamin, etylen-iminové sloučeniny, alkyl-sulfonáty a ostatní sloučeniny s alkylačním účinkem jako je nitrosourea, cis-platina a dacarbazin; antimetabolity jako například kyseliny listová, purin a antagonisté pyrimidinu; mitotické inhibitory - vinkristin, vinblastin a deriváty podofylotoxinů; a konečně cytotoxická antibiotika.

Příklady těchto chemoterapeutických látek jsou popsány například D.J.Stewartem v Nausea and Vomiting: Recent Research and Clinical Advances vydal J.Kucharczyk a spol., CRP Press Inc., Boča Raton, Florida, USA (1991), str. 177-203, především strana 188. Běžně užívanými chemoterapeutiky jsou: cis-platina, dacarbazin (DTIC), dactinomycin, mechloretamin, streptozocin, cyklofosfamid, carmustin (BCNU), lomustin (CCNU), doxorubicin (adriamycin), daunorubicin, procarbazin, mitomycin, cytarabin, etoposid, metotrexat,

5-fluoruracil, vinblastin, vinkristin, bleomycin a chlorambucil (R.J.Gralla a spol., Cancer Treatment Report, 68(1), 163-172 (1984).

Sloučeninu podle současného vynálezu lze s výhodou použít k léčbě zvracení vyvolané zářením včetně terapie ozařováním při léčbě rakoviny a dále k léčbě nemoci z ozáření, při léčbě pooperativní nevolnosti a zvracení.

V určitých případech lze sloučeninu podle současného vynálezu společně s jinou farmakologicky účinnou látkou. Vhodným spojením s jinou terapeuticky účinnou látkou vznikne přípravek pro simultánní, oddělené nebo postupné podávání pro potlačení zvracení. Tyto kombinované přípravky lze připravit jako ve formě podvojného balení.

Další hledisko současného vynálezu je spojení sloučeniny podle současného vynálezu s antagonisty serotoninu na 5-HT₃ receptorech jako je ondasetron, granisetron, tropisetron nebo zatisetron nebo ostatními antiemetické přípravky jako je dexametazon nebo antagonisté dopaminu jako je metoclopramid. Sloučeninu podle současného vynálezu lze kombinovat s protizánětlivými kortikosteroičy jako je dexametazon. Dále lze sloučeninu podle současného vynálezu v kombinaci s chemoterapeutiky jako jsou například shora popsaná alkylační činidla, antímetabolíty, mitotické inhibitory a cytotoxická antibiotika. V podstatě lze říci, že v současnosti dostupná terapeutické činidla lze při zachování jejich vhodného dávkování použít v kombinaci se sloučeninou podle současného vynálezu.

· ** »**· ··

Při pokusech na fretce, při kterých se sledovalo zvracení vyvolané cis-platinou a které jsou popsány F.D.Tattersallem a spol., v Eur. J. Pharmacol., (1993), 250, R5-R6 se prokázalo, že sloučenina podle současného vynálezu způsobuje útlum dávení a zvracení vyvolané podáním cis-platiny.

Sloučeninu podle současného vynálezu lze použít při léčbě bolesti, nežádoucích nociceptivních vjemů, zánětlivých onemocnění a kombinací těchto stavů jako například neuropatie (diabetické, chemoterapeutiky vyvolané, postherpetické a ostatních neuralgií), astmatu, osteoartritidy, revmatické arthritis a bolestí hlavy (migrény, bolestí hlavy podobných migréně, akutní a chronické tenzní bolesti hlavy, temporo-mandibulární bolesti a bolesti čelistních dutin). Současný vynález se týká použití sloučeniny podle současného vynálezu v terapii.

Z toho vyplývá, že současný vynález se týká sloučeniny podle současného vynálezu a jejího použití při výrobě léčiv k terapii a prevenci fyziologických změn způsobených přebytkem tachykininů, především substance

P.

Současný vynález se týká sloučeniny podle současného vynálezu a metody léčby a prevenci fyziologických změn způsobených přebytkem tachykininů, především substance P. Tato metoda zahrnuje podání sloučeniny podle současného vynálezu nebo přípravku tuto sloučeninu » · • · 4 ····<· • 4 44 • · 4 » 4 4 1 » 4 · <

► 4 · I

4 »· obsahujícího pacientům v účinné dávce, která způsobí snížení hladiny tachykininů.

V určitých případech je žádoucí sloučeninu podle současného vynálezu společně s jinou farmakologicky účinnou látkou. Při léčbě respiračních onemocnění, jako je astma, lze sloučeninu podle současného vynálezu použít ve spojení s léčivy s bronchodilatačním účinkem, jako například antagonisty P₂-adrenergních receptorů nebo antagonisty tachykininů, které účinkují na receptory NK-2. Sloučeninu podle současného vynálezu lze aplikovat s léčivy s bronchodilatačním účinkem současně, postupně nebo v kombinaci. Při léčbě stavů vyžadujících antagonistické působení na receptory neurokininu-1 a neurokininu-2, jako jsou onemocnění projevující se bronchokonstrikcí a nebo extravazací plazmy do dýchacích cest jako je astma, chronická bronchítís, onemocnění dýchacích cest nebo cystická fibróza lze použít sloučeninu podle současného vynálezu společně s antagonisty neurokinin-2 receptorů nebo antagonisty tachykininových receptorů účinkujících na receptory neurokininu-1 a neurokininu-2'.

Sloučeninu podle současného vynálezu lze použít v kombinaci s antagonisty leukotrienů jako jsou antagonisté na leukotrienových D4 receptorech. Tyto sloučeniny jsou popsány v EP č. 0,408,717 a 0,604,114 a v US č. 4,859,692 a 5,270,324. Taková kombinace je výhodná při léčbě astmatu, chronické bronchitidy a »0 0 ·· »00«

0 0 « 0 0 0

0 0···

0 0

0« · *· 00 * 0 0 0

0 0 0 · 0 0 <0 00 kašle .

Současný vynález se týká metody léčby respiračních onemocnění, jako například astmatu. Tato metoda zahrnuje aplikaci účinného množství sloučeniny podle současného vynálezu a účinného množství léčiva s bronchodilatačním účinkem. Současný vynález se týká přípravku obsahujícího sloučeninu podle současného vynálezu, léčivo s bronchodilatačním účinkem a farmakologický vhodný nosič.

Při léčbě a prevenci migrény lze sloučeninu podle současného vynálezu použít společně s ostatními antimigreniky jako jsou ergotamin nebo léčiva s agonistickým působení na serotcninové 5-HT_x receptory, především sumatriptan nebo rizacriptan. Podobně i při léčbě behaviorální hyperalgezie lze sloučeninu podle současného vynálezu použít společně s antagonistou N-metyl D-aspartátu (NMDA) jako je dizocilpin. Pro léčbu a prevenci zánětů dolních močových cest, především cystitidy, lze sloučeninu podle současného vynálezu použít ve spojení s protizánětlivými léčivy s antagonistickým účinkem na bracykininové receptorů.

S výhodou lze sloučeninu podle současného vynálezu použít při léčbě a prevenci bolesti a nežádoucích nociceptivních vjemů v kombinaci s neopioidnímu analgetiky - acetaminofenem (paracetamolem), aspirinem a nesteroidními antirevmatiky, a zvláště pak s opioidními analgetiky, především s morfinem. Mezi «

·· 9999 • · • 9 • 9 • 9 9 »9 >

• 9 9 • · · 9 • · · 91·· · • · « ·· 9 «9 • 9 9 • 9 9 • · 9 • «9 specifická protizánětlivá činidla patří diclofenac, ibuprofen, indometacin, ketoprofen, naproxen, piroxikam a sulindak. Vhodnými opioidními analgetiky pro použití ve spojení se sloučeninou podle současného vynálezu je morphin, codein,' dihydrocodein, diacetylmorfin, hydrocodon, hydromorfon, levorfanol, oxymorfon, afenantil, buprenorphin, butorphanol, fentanyl, sufentanyl, meperidin, metadon, nalbuphín, propoxyphen a pentazocin nebo jejich farmakologicky vhodné soli jako je morphin sulfát, morphin hydrochlorid, morphin tartarát, kodein fosfát, kodein sulfát, dihydrokodein bitartarát, diacetylmorfin hydrochlorid, hydrokodon bitartarát, hydromorfon hydrochlorid, levorfanol tartarát, oxymorfon hydrochlorid, afenantil hydrochlorid, buprenorfin hydrochlorid, butorfanol tartarát, fentanyl citrát, meperidin hydrochlorid, metadon hydrochlorid, nalbufin hydrochlorid, propoxyfen hydrochlorid, propoxyphen napsylát (monohydrát 2-naftalensulfonové kyseliny v poměru 1:1) a pentazocin hydrochlorid.

Další hlediskem současného vynálezu je farmakologický přípravek obsahujícího sloučeninu podle současného vynálezu, analgetikum a nejméně jeden farmakologicky vhodný nosič nebo pomocnou látku.

Současný vynález se týká i produktu obsahujícího sloučeninu podle současného vynálezu a analgetikum jako kombinovaného přípravku pro simultánní, oddělené nebo • φ φ

φ φφ φφφφ φφ φφ ·· φφ φφ φ • · · • φφφ • φ φφφφ • · φ φφ · φφ • » • · • · φ φ postupné podávání při léčbě nebo prevenci bolesti a nežádoucích nociceptivních vjemů.

Při léčbě a prevenci depresí nebo úzkostných stavů lze sloučeninu podle současného vynálezu s výhodou použít v kombinaci s antidepresivy nebo anxiolytiky. Vhodnými antidepresivy pro použití ve spojení se sloučeninou podle současného vynálezu jsou: inhibitory zpětného vychytávání noradrenalinu ze synaptické štěrbiny (reuptake inhibitor - RUI), inhibitory selektivního vychytávání serotoninu (RUI), inhibitory monoamin-oxidázy, reversibilní inhibitory monoamin-oxidázy, inhibitory zpětného vychytávání serotoninu a noradrenalinu, antagonisté faktoru uvolňujícího kortikotropin (CRF), antagonisty adrenergních α-receptorů a atypická antidepresiva. Jinými antidepresivy vhodnými pro společné použití se sloučeninou podle současného vynálezu jsou mezi ostatní thymoleptika se řadící mirtazapin.

Příkladem inhibitorů zpětného vychytávání noradrenalinu jsou amitripdylin, clomipramin, doxepin, imipramin, trimipramin, amoxapin, desipramin, maprotilin, nortriptylin, reboxetin a protriptylin a jejich farmakologicky vhodné sole.

Vhodnými příklady selektivních inhibitorů zpětného vychytávání serotoninu (thymoleptika III.generace) jsou fluoxetin, fluvoxamin, paroxetin a sertralin a jejich farmakologicky vhodné sole.

Příkladem inhibitorů monoaminoxidázy jsou isocarbo• · φ · · φ φφφφ • · φ φφφφ φφφ · • · φφφ φφφφφφφ φφ φ • φφφ φφ φ φφφφ φφ φφ φφ φ φφφφ xazid, phenelzin, tranylcypromain a selegilin a jejich farmakologicky vhodné sole.

Vhodným příkladem reverzibilních inhibitorů monoaminoxidázy je moclobemid a jeho farmakologicky vhodná sůl. Vhodnými inhibitory zpětného vychytávání serotoninu a noradrenalinu jsou venlafaxin a jeho farmakologicky vhodné sole.

Příkladem inhibitoru faktoru uvolňujícího kortikotropin (CRF) jsou sloučeniny popsané ve zveřejněných přihláškách č. WO 94/13643, WO 94113644, WO 94/13661,

WO 94113676 a ve WO č. 94113677.

Příkladem atypických antidepresiv jsou: bupropion, lithium, nefazoedon, sibutramin, trazodon a viloxazin a jejich farmakologicky vhodné sole.

Ostatními vhodnými antidepresivy jsou: adinozolam, alaproclat, amineptin, kombinace amitryptylinu a chlordiazepoxidu, atipamezol, azamianserin, bazinaprin, fefuralin, bifemelan, binodalin, bipenamol, brofaromin, bupropion, caroxazone, cericlamin, cianopramin, cimoxaton, citalopram, clemeprol, clovoxamin, dasepinil, deanol, demexiptilin, dibenzepin, dothiepin, droxidopa, enefexin, setazolam, etoperidone, femoxetin, fengabin, fezolamin, fluotracen, idazoxan, indalpin, indeloxazin, iprindol, levoprotilin, litoxetin, lofepramin, medifoxamin, metapramin, metralindol, mianserin, milnacipran, minaprin, mirtazapin, montirelin, nebracetam, nefopam, nialamid, nomifensin, norfluoxetin, orotirelin, oxaflozan, pinazepam,

0 <0 0 0 0 0 ·

0000000 00 0

0 0 0 0 ·

0 0 0 0 0 0

0 0 pirindol, pizotylin, ritaserin, rolipram, sercloremin, setiptilin, sibutramin, sulbutiamin, sulprid, teniloxazin, thozalinon, thymoliberin, tianeptin, tiflucarbin, tofenacin, tofisopam, toioxatone, tomoxetin, veraliprid, viqualin, zimelidin a zometapin a jejich farmakologicky vhodné sole. Dále rostliny rodu Hypericum nebo Hyperícum perforatum nebo jejich extrakty.

Výhodným antidepresivy jsou selektivní inhibitory zpětného vychytávání serotoninu jako jsou fluoxetin, fluvoxamin, paroxetin a sertralin a jejich farmakologicky vhodné sole.

Příkladem vhodných anxiolytik v kombinaci se sloučeninou podle současného vynálezu jsou benzodiazepiny a agonisté nebo antagonisté na 5-HT_1A receptorech, především částeční agonisté na receptorech 5-HT_1a a antagonisticky působící léčiva na faktor uvolňující kortikotropin (CRF).

Další vhodnou skupinou kromě benzodiazepinů jsou nebenzodiazepinová anxiolitika se sedativními a hypnotickými účinky jako je zolpidem;

dále látky stabilizující náladu jako je clobazam, gabapentin, lamotrigin, loreclezol, oxcarbamazepin, stiripentol a vigabatrin a barbituráty.

Vhodnými benzodiazepiny v kombinaci se sloučeninou podle současného vynálezu jsou alprazolam, chlordiazepoxid, clonazepam, chlorazepat, diazepam, halazepam, lorezepam, oxazepam a prazepam a jejich · * 4 • 4 4 4 4 4 4 • · · ···· 4 4 4 4 • · 4 4 · 4 4444 4 · 4 4 4 farmakologický vhodné sole.

Příkladem agonistů nebo antagonistů na receptorech 5-HT_1A vhodných k použití společně se sloučeninou podle současného vynálezu jsou především léčiva působící částěčně agonisticky na 5-HT_1A receptorech jako jsou buspiron, flesinoxan, gepiron, ipsapiron a pindolol a jejich farmakologický vhodné sole.

Vhodným příkladem faktoru uvolňujícího kortíkotropin (CRF) jsou sloučeniny popsané v WO č. 94/13643, WO č. 94113644, WO č.94/13661, WO č.94/13676 a WO č.94113677. Dalším typem antianxiózních látek použitelných současně se sloučeninou podle současného vynálezu jsou parasympatolytika s antagonistickým působením na Ml muskarinové receptory. Příklady těchto léčiv jsou popsány v EP č.O 709 093, 0 709 094 a 0 773 021 a ve WO č. 96112711.

Dalšími anxiolytíky jsou sloučeniny působící na úrovni iontových kanálů. Takovými vhodnými sloučeninami jsou carbamazepin, lamotrigin a valproat a jejich farmakologický vhodné sole.

Současný vynález se týká i přípravku obsahující sloučeninu podle současného vynálezu, antidepresivum nebo anxiolytikum společně s jedním nebo více nosiči nebo pomocnými látkami.

Vhodným psychofarmakem kombinovaným se sloučeninou podle současného vynálezu je fenothiazin, thioxanten, heterocyklický dibenzazepin, butyrofenon, ♦ · • fcfc • · · · · • · fc · difenylbutylpiperidin a deriváty indolu.

Vhodným příkladem fenothiazinů jsou chlorpromazin, mesoridazin, thioridazin, acetophenazin, fluphenazin, perphenazin a trifluoperazin.

Vhodným příkladem derivátů thioxanthenů jsou chlorprothíxen a thiothixen.

Příkladem dibenzazepinů jsou clozapin a olanzapin. Příkladem derivátu butyrofenonu je haloperidol.

Vhodným příkladem derivátu difenylbutylpiperidinu je pimozid.

Příkladem derivátu indolonu is molindolon.

Mezi ostatní vhodná psychofarmaka patří loxapin, sulpirid a risperidon.

V kombinaci se sloučeninou podle současného vynálezu lze použít i farmakologicky vhodné sole těchto psychofarmak: chlorpromazin hydrochlorid, mesoridazin besylát, thioridazin hydrochlorid, acetophenazin maleát, fluphenazin hydrochlorid, flurphenazin enatát, fluphenazin dekanoát, trifluoperazin hydrochlorid, thiothixen hydrochlorid, haloperidol dekanoát, loxapin sukcinát a molindon hydrochlorid.

Perphenazin, chlorprothíxen, clozapin, olanzapin, haloperidol, pimozid a risperidon nejsou běžně používané ve formě solí.

Další skupinou psychofarmak vhodných v kombinaci se sloučeninou podle současného vynálezu jsou antagonisté receptorů dopaminu především antagonisté dopaminových • · · · · · • · · · · · · • · · · · · · · · · • * · · · · · » · · · · · · ·

D2, D3 a D4 receptorů a agonisté muskarinových Ml receptorů.

Příkladem antagonisty dopaminových D3 receptorů je sloučenina PNU-99194A.

Příkladem antagonisty na dopaminových D4 receptorech je sloučenina PNU-101387.

Příkladem agonisty muskarinových Ml receptorů je xanomelin.

Další skupinou psychofarmak vhodných ve spojení se sloučeninou podle souačasného vynálezu jsou antagonisticky působící látky na 5-HT_2A receptorech, například sloučenina MDL100907 a fananserin.

V kombinaci se sloučeninou podle současného vynálezu lze použít i antagonisty serotoninu a dopaminu (SDSAs), u nichž se předpokládá společný antagonistický účinek na serotoninových 5-HT_2A receptorech a na dopaminových receptorech. Příkladem sloučenin s touto aktivitou jsou olanzapin a ziperasídon.

Současný vynález se týká i přípravku obsahujícího společně sloučeninu podle současného vynálezu, psychofarmakum a jedno nebo více nosičů nebo pomocných látek.

Sloučeninu podle současného vynálezu lze aplikovat současně, postupně nebo v kombinaci. V případě kombinace sloučeniny podle současného vynálezu s jinou farmakologicky účinnou látkou lze použít stejný farmakologicky vhodný nosič, a tak látky podat • · · · • · současně. Na oddělených nosičích lze tyto látky podat ve formě současného podání běžně dostupných forem pro orální podání. Termín kombinace dále označuje případy, kdy se sloučeniny podávají postupně v oddělených lékových formách. .

Možnost použití sloučeniny podle současného vynálezu v terapii podporuje také možnost aplikace nízkých dávek, čímž se zmenšuje riziko nežádoucích vedlejších účinků.

Sloučeninu podle současného vynálezu lze podat pacientům (zvířatům a lidem) v případě potřeby léčby takové dávky, které zaručují optimální farmaceutický účinek. Dávkování vhodné pro konkrétní případy se u každého pacienta liší, nejen v závislosti na konkrétní sloučenině nebo vybraném složení, ale také na cestě podání, na povaze léčeného stavu, na věku a stavu pacienta, na současné medikaci, na dietě a na ostatních běžně uvažovaných faktorech. 0 vhodném dávkování tak může rozhodnout ošetřující lékař.

Pro léčbu stavů spojených s přebytkem tachykininů lze obecně vhodné dávkování stanovit v rozmezí 0,001 až 50 mg na kg pacientovy tělesné hmotnosti a den. Dávku lze podat v jedné nebo několika dávkách. Vhodnou dávkou je 0,01 až asi 25 mg /kg a den, především pak dávka 0,05 až asi 10 mg/kg a den.

Například pro léčbu stavů zahrnující neurotransmisi bolestivých vjemů jsou vhodné dávky okolo 0,001 až 25 mg/kg a den, lépe 0,005 g až 10 mg /kg a den a * · • · • · ft · především okolo 0,01 až 5 mg/kg a den. Sloučeninu lze podat jedenkrát až čtyřikrát denně, především jedenkrát až dvakrát denně.

Při léčbě zvracení jsou vhodné dávky v rozmezí 0,001 až 10 mg/kg a den, lépe 0,005 až 5 mg/kg a den a především 0,01 až 1 mg/kg a den. Sloučeninu lze podat jedenkrát až čtyřikrát denně, především jedenkrát až dvakrát denně.

Při terapii nebo prevenci onemocnění centrálního nervového systému jsou vhodné dávky v rozmezí 0,001 až 10 mg/kg a den, lépe 0,005 až 5 mg/kg a den a především 0,01 až 1 mg/kg a den. Sloučeninu lze podat jedenkrát až čtyřikrát denně, především jedenkrát až dvakrát denně.

Dávkování vhodné pro konkrétní případy se u každého pacienta liší nejen v závislosti na konkrétní sloučenině nebo vybraném složení, ale také na cestě podání, na povaze léčeného stavu, na věku a stavu pacienta. O vhodném dávkování tak může rozhodnout ošetřující lékař.

Farmaceutický přípravek podle tohoto vynálezu lze použít jako farmaceutický přípravek například v pevné, polotuhé nebo kapalné formě, který obsahuje jednu nebo více sloučenin podle tohoto vynálezu jako účinnou látku ve směsi s organickým nebo anorganickým nosičem nebo pomocnou látkou pro zevní, enterální nebo parenterální podání. Účinná látku lze smísit s obvyklými netoxickými, farmakologicky vhodnými nosiči pro • · • · • * ·♦ ·· přípravu tablet, pelet, kapslí, čípků, roztoků, emulzí, suspenzí a jakýchkoli jiných vhodných forem.

Použitými nosiči mohou být: voda, glukóza, laktóza, akáciové guma, želatina, manitol, škrobová pasta, trisilikát hořečnatý, mastek, kukuřičný škrob, keratin, koloidní oxid křemičitý, bramborový škrob, močovina a ostatní nosiče vhodné pro průmyslovou výrobu pevné, polotuhé nebo kapalné lékové formy, ke které lze přidat pomocné látky, stabilizátory, barviva, parfumační a zahušťující činidla.

Množství účinné látky se ve farmaceutickém přípravku se volí tak, aby došlo k požadovanému účinku na průběh a stav onemocnění.

K přípravě přípravku v pevné lékové formě, například tablet, se hlavní účinná látka smísí s farmakologický vhodným nosičem, tedy složkou běžně používanou pro výrobu tablet (kukuřičný škrob, laktóza, sacharóza, sorbitol, mastek, kyselina stearová, searát hořečnatý, fosfát vápenatý nebo pryže). Pro přípravu pevných přípravků obsahujících homogenní směs sloučeniny podle současného vynálezu nebo její netoxickou, farmaceuticky vhodnou sůl se použije voda jako rozpouštědlo. V homogenním přípravku je účinná látka rovnoměrně rozptýlená v jednotlivých lékových formách - tabletách, pilulkách nebo kapslích. V jednotlivých shora uvedených lékových formách je přítomno 0,1 do 500 mg účinné látky podle současného vynálezu. Tablety nebo pilulky podle současného vynálezu lze opatřit obalem nebo se připraví • * · · • · 4 4 · · 4 « « « •4 · · 4 » · 4 4 4 4 • · 4 · 4 4444444 <4 4 ···· ·4 · 4444 • · ·· 44 4 44 44 léková forma s prodlouženým účinkem. V takovém případě obsahují tablety nebo pilulky vnitřní složku účinné látky a vnější složku, která obaluje vnitřní složku. Tyto dvě složky mohou být odděleny enterosolventní obalovou vrstvou, která nepodléhá rozkladu v žaludku a tím pomáhá vnitřní složce přejít do duodena nebo způsobuje její pomalejší uvolňování. Jako enterosolventní obal nebo obal tablet lze použít velké množství polymerních kyselin nebo směsi polymerních kyselin s šelakem, acetalkoholem a acetátem celulózy.

Tekutou formu nového přípravku podle současného vynálezu lze aplikovat orálně nebo injekčně jako vodný roztok, vhodně ochucený sirup, vodou nebo olejovou suspenzi a jako emulzi ve vhodně vybraném oleji (olej semen bavlníku, sezamový olej, kokosový olej nebo arašídový olej) nebo v rozpouštědle nebo emulzifikačním činidle pro intravenozní podání. Vhodným disperzním a suspenzním činidlem k přípravě vodných suspenzí jsou syntetické a přírodní pryže jsako tragakant, akaciová guma, alginát, dextran, sodná sůl karboxymetylcelulózy, metylcelulóza, polyvinyl-pyrolidin nebo želatina.

Přípravky pro inhalační nebo insuflační podání obsahují roztoky nebo suspenze ve farmakologicky vhodných vodných nebo organických roztocích nebo směsích, a nebo obsahují pevnou práškovou formu léčiva. Tekuté a pevné přípravky obsahují farmaceuticky vhodné (shora uvedené) pomocné látky. Přípravky jsou podávány orálně nebo • · · φφφ φφφφ • » ♦ · φ · · φφφφ φ φ φφφφ φφφφ φ φ φ φ φ • φφφ φφ φ φφφφ ·· φφ φφ φ φφ φφ nasálně s lokálním nebo celkovým účinkem. Přípravek obsahující především sterilní, farmakologicky vhodná rozpouštědla lze aplikovat pomocí rozprašovače za použití inertních plynů. Roztoky aplikované rozprašovačem lze přímo vdechovat z nebulizéru nebo lze nebulizér připevnit k obličejové masce, stanu nebo k dýchacímu přístroji pracujícímu pod intermitentním pozitivním tlakem. Roztok, suspenze nebo přípravek ve formě prášku lze aplikovat především orálně nebo nasálně za pomoci prostředků, které přípravek vhodným způsobem aplikují.

K léčbě shora uvedených klinických stavů a onemocnění lze sloučeninu aplikovat orálně, lokálně, parenterálně, inhalačně rozprašovačem nebo rektálně ve formě přípravku obsahujícího jednotlivou dávku léčiva, běžně dostupná, netoxický a farmakologicky vhodný nosič, pomocnou látku nebo nosné prostředí. Parenterálním podáním zde rozumíme podkožní, intravenózní, intramuskulární, intrasternální injekční podání a infúze.

Postupem přípravy polymorfních forem sloučeniny podle současného vynálezu se zabývají následující příklady provedení vynálezu. Příklady provedení mají ilustrující účel a neměly by být chápány jako limitující šíři a celkovou podstatu vynálezu.

»··«·· · · · φφ ·· • · φ φφφ · · * » φφ φ φ φ φ φ φφφφ φ · Φ·· ΦΦΦΦΦ·· · · φ φφφφ · φ · φφφφ • ΦΦΦ φφ · ·· ··

Příklady provedení vvnálezu

Příklad 1 (S)-(4-fluorfenyl)glycin

Chirální syntéza

Krok A: 3-(4-fluor-fenyl)acetyl-4-(S)-benzyl-2-oxazolidinon

V peci se vysuší nádobas třemi hrdly o objemu 1 litr, vybavená přepážkou, vstupem pro dusík, teploměrem, magnetickým míchadlem a po propláchnutí dusíkem se do ní umístí roztok 5,09 g (33,0 mmol) 4-fluorfenyloctové kyseliny ve 100 ml bezvodého eteru. Roztok se zchladí na teplotu -10°C a přidá se 5,60 ml (40,0 mmol) trietylaminu, a následně 4,30 ml (35,0 mmol) trimetylacetyl-chloridu. Ihned vznikne bílá sraženina. Vytvořená směs se 40 minut míchá při teplotě 10°C, a pak se zchladí na teplotu -78°C.

V peci se vysuší nádoba s kulatým dnem o objemu 250 ml, vybavená přepážkou, magnetickým míchadlem a po propláchnutí dusíkem se do ní umístí roztok 5,31 g (30,0 mmol) 4-(S)-benzyl-2-oxazolidinonu ve 40 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Roztok se 10 minut míchá v lázni suchého ledu a acetonu, a pak se pomalu přidá 18,8 ml 1,6 M roztoku n-butyllithia ve směsi hexanů.

Po 10 minutách se do směsi v nádobě se třemi hrdly ·· 49*4 99 9 «* 44 *9 9 9*9 9*99 • · 9 9999 9999 • · 449 4999444 44 4

4 4 4 44 4 4449

4949 49 · 994* kanylou přidá lithiovaný roztok oxazolidinonu. Chladící lázeň vytvořené směsi se odstraní a teplota se zvýší na teplotu 0°C. Reakce se ukončí přidáním 100 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného, přemístí se do nádoby o objemu 1 1. Éter a tetrahydrofuran se odstraní ve vakuu, zahuštěná směs se rozdělí mezi 300 ml metylenchloridu a 50 ml vody a podíly se oddělí.

Organický podíl se promyje 200 ml 2 N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové, 300 ml nasyceného vodného roztoku bikarbonátu sodného, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu. Zbytek se čistí rychlou chromatografií na 400 g silikagelu při eluci směsí hexanů a eteru v poměru 3:2 za vzniku 8,95 g oleje, který stáním pomalu tuhne. Krystalizací ze směsí hexanů a eteru v poměru 10:1 vznikne 7,89 g výsledné sloučeniny s výtěžkem 83% jako bílé pevné látky o teplotě tání 64-66°C.

Hmotové spektrum (FAB) : m/Z 314 (M+H, 100%) ,

177 (M-ArCH₂CO+H, 85%).

¹H-NMR (400 MHz, CDC1₃) : δ 2,76 (dd,l H, J = 13,2, 9,2),

3,26 (dd, J = 13,2, 3,2), 4,16-4,34 (m, 4 Η), 4,65-4,70 (m,1 Η), 7,02-7,33 (m, 9 H).

Vypočteno pro C₁₈H₁₆FNO₃: C 69, 00; H 5,15; N 4,47; F

6,06. Nalezeno: C 68,86; H 5,14; N 4,48; F 6,08.

Krok B: 3-((S)-azido-(4-fluorfenyl))acetyl-4-(S)-benzyl-2-oxazolidinon

V peci se vysuší nádoba s třemi hrdly o objemu 1 litr, • φ φφ • Φ φ φφ • φ φ φφφφ • φφφ φφφφ • φ φφφφ φ φ φ φ « φ φ φ φφφφ φφ φ φφ φφ vybavená přepážkou, vstupem pro dusík, teploměrem, magnetickým míchadlem a po propláchnutí dusíkem se do ní umístí roztok 58,0 ml 1 M roztoku bis(trimetylsilyl) amidu draselného v toluenu a 85 ml tetrahydrofuranu a směs se zchladí na teplotu -78°C.

V peci se vysuší nádoba s kulatým dnem o objemu 250 ml, vybavená přepážkou, magnetickým míchadlem a po propláchnutí dusíkem se do ní umístí roztok 7,20 g (23,0 mmol) 3-(4-fluorfenyl)acetyl-4-(S)-benzyl-2-oxazolidinonu ve 40 ml tetrahydrofuranu. Roztok acyl-oxazolidinonu se 10 minut míchá v lázni suchého ledu a acetonu, a pak se přemístí kanylou do roztoku bis(trimetylsilyl)amidu draselného tak, aby vnitřní teplota směsi zůstala pod -70°C. Nádoba s roztokem acyl-oxazolidinonu se promyje 15 ml tetrahydrofuranu a kanylou se do reakční směsi přidá promývací podíl a vytvořená směs se 30 minut míchá při teplotě -78°C.

V peci se vysuší nádoba s kulatým dnem o objemu 250 ml, vybavená přepážkou, magnetickým míchadlem a po propláchnutí dusíkem se do ní umístí roztok 10,89 g (35,0 mmol) 2,4,β-triizopropyl-fenylsulfonyl-azidu ve 40 ml tetrahydrofuranu. Roztok azidu se 10 minut míchá v lázni suchého ledu a acetonu, a pak se přemístí do reakční směsi kanylou tak, aby vnitřní teplota směsi zůstala pod -70°C. Po 2 minutách se reakce ukončí přidáním 6,0 ml ledové kyseliny octové, chladící lázeň se odstraní a směs se 18 hodin míchá při teplotě • ftft ft ftftftft ftftft místnosti. Reakční směs se rozdělí mezi 300 ml etyl-acetátu a 300 ml 50% nasyceného vodného roztoku bikarbonátu sodného. Organický podíl se oddělí, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu. Zbytek se čistí rychlou chromatografií na 500 g silikagelu při eluci směsí hexanů a metylenchloridu v poměru 2:1, a pak směsí hexanů a metylenchloridu v poměru 1:1 za vzniku 5,45 g (výtěžek 67%) výsledné sloučeniny jako olej e.

IR spektrum (cm'¹): 2104, 1781, 1702.

¹H-NMR (400 MHz, CDC1₃) : δ 2,86 (dd, 1 H, J = 13,2, 9,6), 3,40 (dd, 1 H, J = 13,2, 3,2), 4,09-4,19 (m, 2 Η), 4,62-4,68 (m,1 Η), 6,14 (s,l Η), 7,07-7,47 (m, 9 H) .

Vypočteno pro: C₁₈H₁₅FN₄O₃: C 61,01; H 4,27; N 15,81; F 5,36.

Nalezeno: C 60,99; H 4,19; N 15,80; F 5,34.

Krok C: (S)-azido-(4-fluorfenyl)octová kyselina

V ledové lázni se 10 minut míchá roztok 5,40 g (15,2 mmol) 3-((S)-azido-(4-fluorfenyl))acetyl-4-(S)-benzyl-2-oxazolidinonu ve 200 ml směsi tetrahydrofuranu a vody v poměru 3:1. Najednou se přidá 1,28 g (30,4 mmol) monohydrátu hydroxidu lithného a vytvořená chladná směs se 30 minut míchá. Reakční směs se rozdělí mezi 100 ml metylenchloridu a 100 ml 25% nasyceného vodného roztoku bikarbonátu sodného a podíly se oddělí. Vodný podíl se promyje dvakrát 100 ml metylenchloridu a okyselí se na • · · · • ·

999 • 9 9 9 9 • · » · · • · · 9 9 9 • 999 9 9

99 99

99 • 9 9 9

9 9 9 • 9 9 9

9 9 9

99 pH 2 přidání 2 N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové. Vytvořená směs se dvakrát extrahuje 100 ml etylacetátu, extrakty se sloučí, promyjí se 50 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu za vzniku 2,30 g (výtěžek 77%) výsledné sloučeniny jako oleje, který se bez dalšího čištění použije v dalších krocích syntézy.

IR spektrum (cm-1): 2111, 1724.

1H-NMR (400 MHz, CDC1₃) : δ 5,06 (s, 1 Η) , 7,08-7,45 (m, 4 Η), 8,75 (br s,ÍH).

Krok D: (S)-(4-fluorfenyl)glycin

V atmosféře vodíku se 18 hodin míchá směs 2,30 g (11,8 mmol) (S)-azido-(4-fluorfenyl)octové kyseliny, 250 mg 10% paladia na aktivním uhlí a 160 ml vody a kyseliny octové v poměru 3:1. Reakční směs se filtruje přes celit, nádoba a filtrační koláč se promyjí 1 1 směsi vody a kyseliny octové v poměru 3:1. Filtrát se zahustí ve vakuu na objem asi 50 ml. Přidá se 300 ml toluenu a směs se zahustí za vzniku pevné látky, která se uvede do suspenze ve směsi metanolu a eteru v poměru 1:1. Suspenze se filtruje a suší za vzniku 1,99 g (výtěžek 100%) výsledné sloučeniny.

1H-NMR (400 MHz, D20 + NaOD) : δ 3,97 (s,l Η) , 6,77 (app t, 2 H, J = 8,8), 7,01 (app t, 2H, J = 5,6).

•ftftft·· ftft · • · · · · · • · ft · · · · • · ftftftft ftftftft • ftftft ftft · ftft ftft ftft · • ftft ft ft ftft · • ftft · • ftft · • ft ftft

Dělením:

Krok A: 4-fluorfenylacetyl-chlorid

Na roztok 150 g (0,974 mol) 4-fluorfenyloctové kyseliny v 1 ml N N-dimetylformamidu v 500 ml toluenu se při teplotě 40°C působí 20 ml thionyl-chloridu a směs se zahřívá se na teplotu 40°C. Po kapkách se během 1,5 hodiny přidá dalších 61,2 ml thionyl-chloridu. Po adici se roztok 1 hodinu zahřívá na teplotu 50°C, rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a vytvořený zbytek jako olej se destiluje za sníženého tlaku (199,5 Pa) za vzniku 150,4 g (výtěžek 89,5%) výsledné sloučeniny o teplotě varu = 68-70°C.

Krok B: metyl-2-brom-2-(4-fluor)fenylacetát

Směs'150,4 g (0,872 mol) 4-fluor-fenylacetyl-chloridu a

174,5 g (1,09 mol) bromu se 5 hodin ozařuje při teplotě 40-50°C křemíkovou lampou. Reakční směs se přidá po kapkách do 400 ml metanolu a roztok se 16 hodin míchá. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a vytvořený zbytek jako olej se destiluje za sníženého tlaku (199,5 Pa) za vzniku 198,5 g (výtěžek 92%) výsledné sloučeniny o teplotě varu = 106-110°C.

Krok C: metyl-(±)-(4-fluorfenyl)glycin

Na roztok 24,7 g (0,1 mol) metyl-2-bromo-2-(4-fluor)fenylacetátu a 2,28 g (0,01 mol) benzyl-trietyl-ammonium-chloridu v 25 ml metanolu se působí 6,8 g

4 444 4444

4 4444 4444

4 444 4 4444 44 44 4

4444 44 4 4444

44 44 4 44 44

4« 4 4 4 4 (0,105 mol) azidu sodného a vytvořená směs se míchá 20 hodin při pokojové teplotě. Reakční směs se filtruje, filtrát se zředí 50 ml metanolu a hydrogenuje se 1 hdoinu za přítomnosti 0,5 g 10% paladia na aktivním uhlí při tlaku 0,35 MPa. Roztok se filtruje a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Zbytek se rozdělí mezi 10% vodného roztoku uhličitanu sodného a etylacetátu. Organický podíl se promyje vodou, nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu za vzniku 9,8 g výsledné sloučeniny jako oleje.

Krok D: metyl-(S)-(4-fluor-fenylglycinát

Roztok 58,4 g metyl-(±)-4-fluor-fenylglycinátu v 110 ml směsi etanolu a vody v poměru 7:1 se smíchá s roztokem

28,6 g (0,0799 mol) O,O'-(+)-dibenzoyl-tartarové kyseliny ((+)-DBT) ve 110 ml směsi etanolu a vody v poměru 7:1 a vytvořený roztok se nechá stát při pokojové teplotě. Po ukončení krystalizace se přidá 220 ml etylacetátu, vytvořená směs se zchladí na teplotu -20°C a filtruje se za vzniku 32,4 g metyl-(S)-(4-fluor-fenyl)glycinátu, (+)-DBT (přebytek enantiomerů =

93,2%) . Matečný louh se zahustí ve vakuu a volné baze se uvolní rozdělením mezi etylacetát a vodný roztok uhličitanu sodného. Vytvořený roztok volných bází v 110 ml směsí etanolu a vody v poměru 7:1 se smíchá s roztokem 28,6 g (0,0799 mol)

O,O'-(+)-dibenzoyl-tartarové kyseliny ((-)-DBT) v 110 ·« *♦·4

• · · · · • 44 4 4 ·

4444 44 44

4 4 4 4 ml směsi etanolu a vody v poměru 7:1 a vytvořený roztok se nechá stát při pokojové teplotě. Po ukončení krystalizace se přidá 220 ml etylacetátu, vytvořená směs se zchladí na teplotu -20°C a filtruje se za vzniku 47,0 g metyl-(R)-(4-fluor-fenyl)glycinátu, (-)-DBT salt (přebytek enantiomerů = 75,8%).

Recyklací matečného louhu a přidáním (+)-DBT vznikne druhý podíl 7,4 g (S)- (4-fluor-fenyl)glycinátu, ( + )-DBT (přebytek enantiomerů = 96,4%). Dva podíly (39,8 g) (S)-amino-esteru se sloučí ve 200 ml směsi etanolu a vody v poměru 7:1, zahřívá se 30 minut a zchladí se na teplotu místnosti. Přidáním etylacetátu, zchlazením a filtrací za vzniku 31,7 g (S)-(4-fluor-fenyl)glycinátu, (+)-DBT (přebytek enantiomerů větší než

98%)

Přebytek enantiomerů se určí chirální HPLC (Crownpak CR(+), 5% roztok metanolu ve vodném roztoku kyseliny chlorovodíkové, pH 2, 1,5 ml/min, 40°C, 200 nm) .

Směs 17,5 g (S)- (4-fluor-fenyl) glycinátu, ( + )-DBT a 32 ml 5,5 N roztoku kyseliny chlorovodíkové se 1,5 hodiny zahřívá k teplotě refluxu. Reakční směs se zahustí ve vakuu a zbytek se rozpustí ve 40 ml vody. Vodný roztok se promyje třikrát 30 ml etylacetátu a podíly se oddělí. Přidáním hydroxidu amonného se pH vodného podílu se přivede na pH 7 a sraženina jako pevná látka se filtruje za vzniku 7,4 g výsledné sloučeniny (přebytek enantiomerů = 98,8%).

•fc ···· • · · ···· ···· • · · * · ♦ ···· · · fc · « • ♦ · · · · · 9 9 9 9

9 9 99 9 4 9 99

Příklad 2

3-(S)-(4-fluor-fenyl)-4-benzyl-2-morfolinon

Krok A: N-benzyl-(S)-(4-fluor-fenyl)glycin

Na roztok 1,87 g (11,05 mmol) (S)-(4-fluor-fenyl)-glycinu a 1,12 ml (11,1 mmol) benzaldehydu v 11,1 ml 1

N vodného roztoku hydroxidu sodného a 11 ml metanolu se při teplotě 0°C působí 165 mg (4,4 mmol) borhydridu sodného. Chladící lázeň se odstraní a vytvořená směs se míchá 30 minut při teplotě místnosti. Do reakční směsi se přidá druhý podíl 1,12 ml (11,1 mmol) benzaldehydu a

165 mg (4,4 mmol) borhydridu sodného a v míchání se pokračuje 1,5 hodiny. Reakční směs se rozdělí mezi 100 ml eteru a 50 ml vody a podíly se oddělí. Vodný podíl se oddělí a filtruje se k odstranění malého množství nerozpustného materiálu. Filtrát se okyselí na pH 5 přidáním 2 N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové.

Vytvoří se sraženina jako pevná látka, která se filtruje, důkladně se promyje vodou, a pak eterem a suší se za vzniku 1,95 g výsledné sloučeniny.

1H-NMR (400 MHz, D₂0 + NaOD) : δ 3,33 (AB q, 2 H, J =

8,4), 3,85 (s,l Η), 6,79-7,16 (m, 4 H).

Krok B: 3-(S)-(4-fluor-fenyl)-4-benzyl-2-morfolin

Směs 1,95 g (7,5 mmol) N-benzyl-(S)-(4-fluorfenyl)-glycinu, 3,90 ml (22,5 mmol) N,N-diizopropyletylaminu,

6,50 ml (75,0 mmol) 1,2-dibrom-etanu a 40 ml • 9 ···· • 9 9 ·· 99

9 9 «·· 4 4 9 4

4 4 4 9 4 9 9 4 4 9 • * 999 9999··· ·« 9

9 · 9 9 9 9 9 9 9 9

99 44 4 44 44

N,N-dimetylformamidu se 20 hodin míchá při teplotě

100°C (zahříváním dojde k rozpuštění veškerého pevného podílu). Reakční směs se zchladí a zahustí se ve vakuu.

Zbytek se rozdělí mezi 250 ml eteru a 100 ml 0,5 N roztoku hydrogensulfátu draselného a podíly se oddělí.

Organický podíl se promyje jedenkrát 100 ml nasyceného vodného roztoku bikarbonátu sodného a třikrát 150 ml vody, suší se nad síranem hořečnatým, a pak se zahustí ve vakuu. Produkt se čistí rychlou chromatografií na

125 g silikagelu při eluci směsí hexanů a eteru v poměru 3:1 za vzniku 1,58 g (výtěžek 74%) výsledné sloučeniny jako oleje.

1H-NMR (400 MHz, CDC1₃) : δ 2,65 (dt, ÍH, J = 3,2, 12,8),

3,00 (dt, ÍH, J = 12,8, 2,8), 3,16 (d, ÍH, J = 13,6),

3,76 (d, ÍH, J = 13,6), 4,24 (s, ÍH) , 4,37 (dt, ÍH, J =

13,2, 3,2), 4,54 (dt, ÍH, J=2,8, 13,2), 7,07-7,56 (m,

9H) .

Příklad 3

2-(R)-(3,5-bis(tri-fluor-metyl)benzoyloxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-benzyl-morfolin

Roztok 2,67 g (10,0 mmol) 3-(R) -(4-fluor)-fenyl-4-benzyl-2-morfolinonu ve 40 ml bezvodého tetrahydrofuranu se zchladí na teplotu -78°C. Na studený roztok se působí 12,5 ml 1,0 M roztoku L-Selectride® v tetrahydrofuranu, při udržení vnitřní teploty reakční

9*99 99 * 9 9 ·· • · 9 9 9 9 9···

9 9 9 9 9 9999

9 9999 9999 99 99 9

99·· 9 9 9 9 · 9 «

99 99 9 99 99 směsi pod -70 °C. Vytvořený studený roztok se míchá 45 minut a do reakční směsi se vloží 3,60 ml (20,0 mmol)

3,5-bis(trifluor-metyl)benzoyl-chloridu. Vytvořená studená žlutá směs se 30 minut míchá a reakce se ukončí přidáním 50 ml nasyceného vodného roztok bikarbonátu sodného. Směs s ukončenou reakcí se rozdělí mezi 300 ml eteru a 50 ml vody a podíly se oddělí. Organický podíl se suší nad sulfátem hořečnatým. Vodný podíl se extrahuje 300 ml eteru. Extrakt se suší a sloučí se s původním organickým podílem. Sloučené organické podíly se zahustí ve vakuu. Produkt se čistí rychlou chromatografií na 150 g silikagelu při eluci směsí hexanů a eteru v poměru 37:3 za vzniku výsledné sloučeniny jako pevné látky (83% výtěžek).

Hmotové spektrum (FAB): m/z 528 (M+H, 25%), 270 (100%) .

ÍH NMR (CDC1₃, 400 MHz, ppm): δ 2,50 (dt, J = 3,2, 12,0, ÍH) , 2,96 (app d, J = 12,0, ÍH), 2,98 (d, J = 13,6,

ÍH), 3,74-3,78 (m, ÍH), 3,81 (d, J=2,8, ÍH) , 3,94 (d, J = 13,6, ÍH), 4,19 (dt, J = 2,0, 12,0), 6,20 (d, J = 2,8, 1H), 6,99 (t, J = 8,4, 2H), 7,27-7,38 (m, 5H), 2,52-7,56 (m, 2H) , 8,09 (s, ÍH) , 8,46 (s, 2H) .

Příklad 4 dimetyl-titanocen

Na roztok 2,49 g (10,0 mmol) titanocen-dichloridu v 50 ο» ···· ·· · ·· ·· ·· · · · · · » · · • · · · · · · · 9 4 Φ • · · · · · ···· · · · · · • · · · · · · ···· ·· ·· »* · ·· ·· ml eteru se ve tmě při teplotě 0°C působí 17,5 ml 1,4 M roztoku metyllithia v eteru při udržení vnitřní teploty pod 5°C. Vytvořená žluto-oranžová směs se 30 minut míchá při pokojové teplotě a reakce se ukončí pomalým přidáním 25 g ledu. Reakční směs s ukončenou reakcí se zředí 50 ml eteru a 25 ml vody a podíly se oddělí. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu za vzniku 2,03 g (výtěžek 98%) výsledné sloučeniny jako pevné látky citlivé na světlo. Dimetyl-titanocen lze nejméně 2 týdny skladovat jako roztok v toluenu při teplotě 0°C bez zjevné chemické degradace.

IH NMR (CDC1₃, 200 MHz, ppm): d -0,15 (s, 6H), 6,06 (s, 10H) .

Příklad 5

2-(R)-(1-(3,5-bís(trifluor-metyl)fenyl)etylenoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-benzyl-morfolin

Roztok 4,9 mmol 2-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl)-benzoyloxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-benzyl-morfolinu a 2,50 g (12,0 mmol) dimetyl-titanocenu v 35 ml směsi tetrahydrofuranu a toluenu v poměru 1:1 se 16 hodin míchá v olejové lázni při teplotě 80°C. Reakční směs se zchladí a zahustí ve vakuu. Produkt se čistí rychlou chromatografíí na 150 g silikagelu při eluci směsí směsi hexanů a metylenchloridu v poměru 3:1 za vzniku ·· φ φφφ · · · · ·· φ ···· φφφφ • · φφφφ φφφφ φ · φ · · výsledné sloučeniny jako pevné látky (60% výtěžek). Hmotové spektrum (FAB): m/z 526 (M+H 75%), 270 (100%) .

ÍH NMR (CDC1₃, 400 MHz, ppm): δ 2,42 (dt, J = 3,6, 12,0), 2,90 (app d, J = 12,0, ÍH) , 2,91 (d, J = 13,6, ÍH) ,

3, 62-3, 66 (m, ÍH) , 3,72 (d, J = 2,6), 3,94 (d, J =

13,6, ÍH), 4,09 (dt, J= 2,4,12,0, ÍH) , 4,75 (d, J =

3,2, ÍH), 4,82 (d, J = 3,2, ÍH), 5,32 (d, J = 2,6, ÍH), 7,09 (t, J = 8,8, 2H), 7,24-7,33 (m, 5H) , 7,58-7,62 (m, 2H), 7,80 (s, ÍH), 7,90 (s, 2H).

Příklad 6

2-(R)-(1-(S)-(3,5-bis(trifluormetyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-morfolin a

2-(S)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl) -fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-morfolin

Směs 1,83 g (3,5 mmol) 2-(R)-(1-(3,5-bis(trifluormetyl)fenyl)etenyloxy)-3-(S)-(4-fluor) fenyl-4-benzylmorfolinu a 800 mg 5% rhodia na oxidu hlinitém ve 40 ml absolutního etanolu se 24 hodin míchá v atmosféře vodíku. Katalyzátor se filtruje přes celit. Reakční nádoby a filtrační koláč se promyjí 200 ml etylacetátu. Filtrát se zahustí ve vakuu a zbytek se při teplotě místnosti a tlaku 133 Pa odčerpá podtlakem dosucha.

Zbytek se rozpustí ve 40 ml isopropanolu. Po přidání

800 mg 10% paladia na aktivním uhlí se vytvořená směs 24 hodin míchá v atmosféře vodíku. Katalyzátor se filtruje přes celit. Reakční nádoby a filtrační koláč se promyje 200 ml etylacetátu. Filtrát se zahustí ve vakuu. Produkt se čistí rychlou chromatografií na 50 g silikagelu při eluci směsí hexanů a eteru v poměru 2:1, a pak směsí eteru a hexanů v poměru 3:2 za vzniku 283 mg 2- (R)- (1- (S)- (3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-morfolinu a 763 mg 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-morfolinu jako olejů (celkový výtěžek 68%).

2-(R)- (1- (S)- (3,5-bis(trifluormetyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl -morfolin:

Hmotové spektrum (FAB) m/z 438 (M+H 65%), 180 (100%). 1H NMR (CDC1₃, 400 MHz, ppm): δ 1,47 (d, J = 6,8, 3H) ,

1.87 (br s, 1H), 3,03 (dd, J = 2,8, 12,8), 3,17 (dt, J = 4,0, 12,4, 1H), 3,43-3,47 (m, 1H) , 3,80 (dt, J = 3,2, 11,6), 4,10 (d, J = 2,2, 1H), 4,70 (q, J = 6,8, 1H),

4.87 (d, J = 2,2, 1H), 6, 99-7,03 (m, 2H), 7,23-7,27 (m, 2H), 7,63 (s, 2H), 7,66 (s, 1H).

2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-morfolin:

Hmotové spektrum (	FAB)	m/ z	438	(M+H	75%) ,	180	(100%
1H NMR (CDC13, 400	MHz	, ppm): δ	1,16	(d, J	= 6,8	) ,
1,80 (br s, 1H), 3	,13	(dd,	J =	3,2,	12,4),	3,23	(dt,
J = 3,6, 12,4) , 3	, 63	(dd,	J =	2,4,	11,2),	4,01	(d,

j = 2,4, 1H), 4,13 (dt, J = 3,2, 12,0), 4,42 (d, J = •4 ·· ··

2,4, IH), 4,19 (q, J=6,8, IH) , 7,04-7,09 (m, 2H) ,

7,27-7,40 (m, 4H), 7,73 (s, IH) .

Příklad 7

2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-l,2,4-triazolo)-metylmorfolin

Krok A: N-metylkarboxy-2-chlor-acetamidrazon

Na roztok 5,0 g (66,2 mmol) chlor-acetonitril v 35 ml bezvodého metanolu zchlazeného na teplotu 0°C se působí 0,105 g (1,9 mmol) metoxidu sodného. Ledová lázeň se odstraní a směs se 30 minut míchá při pokojové teplotě. Do reakční směsi se pak přidá 0,110 ml (1,9 mmol) octové kyseliny, a pak 5,8 g (64,9 mmol) metylhydrazin-karboxylátu. Po 30 minut míchání při pokojové teplotě se suspenze zahustí ve vakuu, a umístí se přes noc do vysokého vakua. Vytvoří se 10,5 g (výtěžek 98%) žlutého prášku, jehož část se použije v postupu kroku C tohoto příkladu.

Krok B:

2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(2-(N-metyl-karboxy-acetamid-razon)-morfolin • · · · · · φ φ φ • · φ • φ φ φ • φ φ · φφφ · φ · · • · · · φ φ φ • ΦΦΦ φφφφ φ φφφφφφφ Φ· · • · φ φφφφ ·· φ · φ φ φ

Na roztok 945 mg (2,3 mmol) (2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis-(trifluormetyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-morfolinu, 447 mg (2,7 mmol) N-metyl-karboxy-2-chlor-acetamidrazonu a 0,78 ml (4,5 mmol) N,N-diizopropyl-etylaminu v 17 ml acetonitrilu se 20 hodin míchá při pokojové teplotě. Reakční směs se zahustí ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi 50 ml metylenchloridu a 25 ml vody. Organický podíl se oddělí, suší se nad síranem horečnatým a zahustí se ve vakuu. Produkt se čistí rychlou chromatografií na 50 g silikagelu při eluci směsí metylenchloridu, metanolu a hydroxidu amonného 50:1:0,1 za vzniku 1,12 g (výtěžek 90%) výsledné sloučeniny jako pěny.

Krok C: 2-(R)- (1-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl)fenyl)-etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-l,2,4-triazol)metyl-morfolin

Roztok 1,01 g (1,8 mmol) 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bís(tri-fluormetyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(2-(N-metyl-karboxy-acetamid-razon)morfolínu v 15 ml směsi xylenů se 2 hodiny zahřívá na teplotu refluxu. Reakční směs se zchladí a zahustí ve vakuu. Produkt se čistí rychlou chromatografií na 50 g silikagelu při eluci směsí metylenchloridu, metanolu a hydroxidu amonného v poměru 50:1:0,1 za vzniku výsledné sloučeniny jako pevné látky (79% výtěžek).

Hmotové spektrum (FAB): m/z 535 (M+H 100%),.277 (60%). IH NMR (CDC1₃ + CD₃OD, 400m/z, ppm): δ 1,48 (d, J = 6,8,

• ·

3H), 2,52 (app t, J = 10,4, IH), 2,85-2,88 (m, 2H) ,

3,47 (d, J = 2,8, IH), 3,63 (d, J = 14,4, IH) , 3,70 (dd, J = 2,0, 11,6, IH), 4,24 (app t, J = 10,8, IH) , 4,35 (d, J = 2,8, IH), 4,91 (q, J = 6,8, IH), 7,07 (app t, J = 8,4, 2H), 7,15 (s, 2H), 7,37-7,40 (m, 2H), 7,65 (s, IH) .

Vypočteno pro: C₂₃H₂₁F₇N₄O₃: C 51,69; H 3,96; N 10,48; F 24,88. Nalezeno: C 51,74; H 4,04; N 10,50; F 24,59.

Vzorek připravený tímto způsobem byl následně označen jako polymorfní forma II. Metodou určení byla difrakce RTG záření na práškovém materiálu, hlavní ohyby jsou při: 12,6, 16,7, 17,1, 17,2, 18,0, 20,1, 20,6, 21,1, 22,8, 23,9, a 24,8° (2 theta).

Příklad 8 dimetyl-titanocen

Do důkladně míchané suspenze 249 g (1,00 mol) titanocen-dichloridu (Cp₂TiCl₂) ve 2,75 1 toluen zchlazené na teplotu -5 °C (vnitřní teplota) se během 1 hodiny přidá 750 ml (2,25 mol) 3,0 M roztoku metyl-magnesium-chloridu (CH₃MgCl) v tetrahydrofuranu, při udržení teploty pod 8°C. Vytvořená oranžová suspenze se nechá 1 hodinu stát při teplotě 0-5°C nebo dokud se nerozpustí purpurově zbarvený Cp₂TiCl₂.

Potvrzení ukončení reakce se provede nukleární

• · · · · · · • · · · · · · • · · * · · · · • · ······· ·· · • · · · · · · magnetickou rezonancí (NMR viz dole), a pak se reakce ukončí přidáním do 700 ml roztoku 6% vodného roztoku chloridu amonného, při udržování teploty při teplotě 0-5°C. Podíly se oddělí a organický podíl se třikrát promyje 575 ml studené vody a jedenkrát 575 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, a pak se suší nad 220 g síranu sodného. Filtrovaný organický podíl se odpařuje na hmotnost 1,5 kg (při udržení vnitřní teploty 25°C nebo méně).

Podle IH NMR obsahuje roztok 187 g produktu (výtěžek 90% za použití 12,5% roztoku toluenu v tetrahydrofuranu .

Tento materiál byl více než z 95% čistý, pouze se stopovým množstvím počátečního materiálu a monometylových intermediátů. Roztok lze pro snadnější provádění zkoušek dále zahustit na hmotnost 1,0 kg za vzniku 18% hmotnostních roztoku v toluenu.

Přítomnost malého množství tetrahydrofuranu zvyšuje stabilitu sloučeniny. Materiál se skladuje pod dusíkem v uzavřené opletené nádobě z barevného skla při teplotě 0°C.

^ΧΗ NMR Cp₂Ti(CH₃)₂: δ 6,05 (s,10H), -0,05 (s, 6H) .

Cp₂Ti (CH₃) : δ 6,22 (s, 10H) , 0,80 (s, 3H) .

Cp₂TiCl₂: δ 6,56 (s, 10H) .

¹³C NMR Cp₂Ti(CH₃)₂: δ 113,20 (Cp₂) , 45,77 ((CH₃)₂).

Cp₂TiClCH₃: δ 115,86 (Cp₂) , 50,37 (CH₃) .

Cp₂TiCl₂: δ 120,18.

• · * · • ·

Příklad 9

4-fluor-α-[(fenylmetyl)amino]benzenoctová kyseliny

Do roztoku 5,7.6 kg (30,3 mol) hydrogensiřičitanu sodného v 50 1 vody se přidá 7,0 kg (56,4 mol)

4-fluor-benzaldehydu a roztok se promyje 5 1 metanolu. Po přidání 2,83 kg (57,7 mol) kyanidu sodného se reakční směs promyje 3 1 vody. Vytvořený materiál se 15 minut míchá při teplotě 25°C, a pak se zchladí 8°C.

Přidá se roztok 6,04 kg (56,4 mol) benzylaminu v 11 1 metanolu. Směs se zahřeje na teplotu 34°C a 2 hodiny se míchá. Přidá se 23 1 vody a směs se extrahuje 30 1 izopropyl-acetátu. Organický podíl se promyje dvakrát 10 1 vody, a následně jedenkrát 10 1 nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Po odpaření za sníženého tlaku vznikne nitrilová sloučeniny.

Materiál se rozpustí v 50 1 dimetylsulfoxidu. Po přidání 3,27 kg (23,7 mol) uhličitanu draselného se směs promyje 6 1 dimetylsulfoxidu a přidá se 9,43 1 (83,2 mol) 30% roztoku peroxidu vodíku ve vodě a materiál se přes noc míchá při pokojové teplotě.

Produkt se zředí 120 1 vody a zchladí se na teplotu 13°C. Po filtraci materiálu se filtrační koláč promyje 50 1 vody. Vytvořený amid se suší na filtru, a zbytek se pak uvede do suspenze ve 38 1 technického metylovaného etanolu. Do suspenze se přidá roztok 3,27 kg (81,75 mol) pevného hydroxidu sodného v 11 1 vody a produkt se promyje 6 1 technického metylovaného

9 etanolu.

Po 3,5 hodinách zahřívání při teplotě refluxu (80°C), se produkt destiluje na nízký objem k odstranění technického metylovaného etanolu. Zbytek se zředí 100 1 vody a extrahuje se 30 1 izopropyl-acetátu. Podíly se oddělí a vodný podíl se okyselí na pH 5-6 přidáním koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Vytvořená sraženina jako pevná látka se filtruje a promyje se dvakrát 10 1 vody. Produkt se sebere a suší se ve vakuu za vzniku 12,3 kg (84% výtěžek z 4-fluor-benzaldehydu) 4-fluor-a-[(fenylmetyl)amino]-benzen-octové kyseliny.

Příklad 10 metylester hydrochloridu 4-fluor-α-[(fenylmetyl)amino]-benzen-octové kyseliny

Ve 37 1 metanolu se uvede do suspenze 12,2 kg (47,1 mol) 4-fluor-a-[(fenylmetyl)amino]benzenoctové kyseliny, a pak se směsí nechá procházet plynný chlorovodík. Vytvořená suspenze se 3 hodiny míchá při teplotě 35-45°C, a pak se destilací zahustí na objem 30-35 1. Po přidání 20 1 metyl-t-butyl-eteru a produkt se naočkuje přidáním metylesterů hydrochloridu 4-fluor-a-[(fenylmetyl)amino]benzen-octové kyseliny. Po vytvoření krystalů se přidá 20 1 metyl-t-butyl-eteru. Suspenze se nechá stát 1 hodinu, a pak se filtruje.

Filtrační koláč se promyje 8,0 1 směsi metyl-t-butyl-eteru a metanolu v poměru 95:’5, a pak se suší ve vakuu při teplotě 30°C za vzniku 12,2 kg (84% výtěžek) metylester hydrochloridu 4-fluor-a-[(fenylmetyl)amino]benzen-octové kyseliny

Příklad 11 metylester a-amino-4-fluor-benzen-octové kyseliny

Do suspenze 1,2 kg 10% paladia na aktivním uhlí v 50 1 isopropanolu 12,2 kg (39,4 mol) metylesteru hydrochloridu 4-fluor-a-[(fenylmetyl)amino]benzen-octové kyseliny. Po přidání 5,0 kg (79,4 mol) mravenčanu amonného se směs zahřívá na teplotu 50°C. Průběh reakce se sleduje HPLC. Produkt se filtruje přes Hyflo Supercel a filtrační koláč se promyje 25 1 isopropanolu. Filtrát se odpaří na malý objem a propláchne se 50 1 izopropyl-acetátu. Zbytek se rozpustí v 30 1 izopropyl-acetátu a promyje se 40 1 5% vodného roztoku fosfátu draselného, a následně 10 1 nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Roztok se odpaří ve vakuu za vzniku 5,79 kg (87% výtěžek) racemického metylesteru a-amino-4-fluor-benzeneoctové kyseliny.

HPLC - kolona: Zorbax Rx-C8, 25 cm x 4,6 mm; teplota kolony: 40°C; mobilní fáze: směs acetnitrilu a 0,1% vodný roztok kyseliny fosforečné v poměru 70:30;

·· · ··· • φ «

φ · φ φ φ φ φ φ φ φ · · φ · φ φ φ φ φφ rychlost průtoku: 1 ml/min; detekce při UV 220 nm; přibližné doby retence:

metylester a-amino-4-fluor-benzen-octové kyseliny: 2,2 minuty;

metylester 4-fluor-α-[(fenylmetyl)amino)benzen-octové kyseliny: 2,6 minut.

Pokud je po 1 hodině stále přítomný metylester

4-fluor-a-[(fenylmetyl)amino]benzen-octové kyseliny (> 2%), uvede se do suspenze druhý podíl 300 g 10% paladia na aktivním uhlí v 2,0 1 isopropanolu, a následně 1,0 kg mravenčanu amonného. V zahřívání se pokračuje do ukončení reakce.

Příklad 12 (S)-a-amino-4-fluor-benzen-octová kyselina

Roztok 3,32 kg (18,2 mol) racemického metylesteru ct-amino-4-fluor-benzen-octové kyseliny v 5 1 96% etanolu (5 1) se filtruje, do filtrovaného roztoku se přidá 500 ml vody, a následně 1,32 kg (3,7 mol) di-O-benzoyl-D-tartarové kyseliny (DBT) ve 2,86 1 směsi vody a etanolu v poměru 1:7. Krystalizační směs se zchladí na teplotu 5°C, a nechá se 1,5 hodin stát. Produkt se sebere filtrací, promyje se 1,1 1 směsí vody a etanolu v poměru 1:7. Po sušení na vzduchu a ve vakuu při teplotě 50°C vznikne 1,91 kg metylesteru •9 ·«♦» oc-amíno-4-fluor-benzen-octové kyseliny, DBT (95,8% přebytek enantiomeru).

Rozpouštědlo (6,6 1) se odstraní odpařením za sníženého tlaku. Po přidání 120 ml benzaldehydu se roztok míchá a 4 hodiny zahřívá k teplotě 50°C. Roztok se filtruje a pevný podíl se dvakrát promyje 150 ml směsi vody a etanolu v poměru 1:7 (chirální HPLC se prokáže, že filtrát obsahuje racemický metylester cc-amino-4-fluorbenzen-octové kyseliny). Roztok 439 g (1,23 mol) di-O-benzoyl-D-tartarové kyseliny v 960 ml směsi vody a etanolu v poměru 1:7 se přidá do filtrátu, a pak se zchladí na teplotu 5°C a nechá se 1,5 hodiny stát. Produkt se sebere filtrací, promyje se dvakrát 1,1 1 směsi vody a etanolu v poměru 1:7, suší se na vzduchu, a pak ve vakuu při teplotě 50°C za vzniku 1,05 kg metylesterů a-amino-4-fluor-benzen-octové kyseliny, DBT (95,4% přebytek enantiomerů). Sloučený výtěžek metylesterů cc-amino-4-fluor-benzen-octové kyseliny, DBT je 2,96 kg (95% přebytek enantiomerů).

Mezi 5 1 metyl-t-butyl-eteru a 6,2 1 5,5 M roztoku kyseliny chlorovodíkové se rozdělí metylester kyseliny a-amino-4-fluor-benzen-octové, DBT. Vodný podíl se promyje se 5 1 metyl-t-butyl-eteru, a pak se filtruje.

Mezi druhým extraktem metyl-t-butyl-eteru (shora uvedeným) a 6,2 1 5,5 M roztoku kyseliny chlorovodíkové se rozdělí 2899 g metylesterů kyseliny cc-amino-4-fluor-benzen-octové, DBT. Vodný podíl se znovu extrahuje 5 1 φ φ · φ φ φ φ φ · • φφφ · φφ φ φ • φφφφ φ φ φφφφ ······ · · · • φφφ · • φ φ · · metyl-t-butyl-eteru, a pak se filtruje. Vodný filtrát se sloučí a zahustí se pomalou destilací. Materiál se zchladí a nechá se 2 hodiny stát při teplotě 5°C.

Produkt se sebere filtrací a suší se 30 minut vzduchem za vzniku 4,055 kg hydrochloridu (S) -cc-amino-4-fluor-benzen-octové kyseliny (98,7% přebytek enantiomerů). Krystalizací z 5 1 5,5 M roztoku kyseliny chlorovodíkové vznikne hydrochlorid kyseliny (S)-a-amino-4-fluor-benzen-octové jako 3,28 kg vlhkého filtračního koláče (99,8% přebytek enantiomerů). Tento produkt se zahřívá ve směsi 12 1 vody a 375 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Přidá se 1,2 1 koncentrovaného vodného roztoku amoniaku a 4 1 vody, a pak se materiál zchladí na teplotu 20°C a nechá stát přes noc. Produkt se sebere filtrací, promyje se šestkrát 4 1 vody, suší se na vzduchu, a pak se suší 24 hodin ve vakuu při teplotě 50°C za vzniku 1,905 kg volných bází (S) -ct-amino-4-f luorbenzen-octové kyseliny (přebytek enantiomerů > 99,7%, výtěžek 48% z racemického metylesteru a-amino-4-fluor-benzen-octové kyseliny. Chirální HPLC: kolona: Crownpak CR(+), 15 cm x 4,5 mm; teplota kolony: 40°C; mobilní fáze: směs vodného roztoku perchlorové kyseliny a metanolu v poměru 95:5, pH 2,0; rychlost průtoku: 1 ml/min; detekce při: UV při 220 nm; přibližná doba retence:

(R) -a-amino-4-fluor-benzen-octové kyseliny: 2,9 minut;

(S) -a-amino-4-fluor-benzen-octové kyseliny: 5,6 minut; metylester kyseliny (R)-a-amino-4-fluor-benzen-octové:

4 4 4 4 4 4 ·· 4 444 4444 •4 4 4444 4444 • * 444 4444444 44 4 • · 4 4 44 4 4444

4« 44 4 44 44

7,7 minut;

metylester-(S)-a-amino-4-fluor-benzen-octové kyseliny: 14,0 minut.

Příklad 13 (S)-4-fluor-a-[(fenylmetyl)amino]benzenacetát sodný

Roztok 1,00 kg (5,91 mol) kyseliny (S) -a-amino-4-fluor-benzen-octové v 5,91 1 1 M vodného roztoku hydroxidu sodného se filtruje, a pak se přidá do 25 g 10% paladia na aktivním uhlí. Po přidání roztoku 941 g (8,87 mol) benzaldehydu se materiál 4 hodiny míchá v atmosféře vodíku při tlaku 0,35 Pa. Materiál se filtruje a filtrát se odpaří ve vakuu za vzniku zbytku, který se dvakrát promyje 3 1 etanolu. Zbytek se uvede do suspenze v 1,5 1 vroucího etanolu, a pak se zchladí na teplotu 15°C. Suspenze se filtruje a filtrační koláč se dvakrát promyje 500 ml studeného etanolu. Po sušení ve vakuu při teplotě 55°C za vznikne 1,83 kg (92% výtěžek) (S) -4-fluor-a-[(fenylmetyl)amino]benzenacetátu sodného.

Příklad 14 (S)-3-(4-fluor-feny)-4-(fenylmetyl)-2-morfolinon-hydrochlorid • 9

9 9·· · • 9 99

Do 4,85 kg (25,8 mol) 1,2-dibrom-etanu a 419 g (3,25 mol) diizopropyl-etylaminu ve 14,7 1 dimetylformamidu se přidá 850 g (3,02 mol) (S)-4-fluor-a-[(fenylmetyl)amino]benzen-acetátu sodného. Reakční směs se 5 hodin zahřívá při teplotě 90°C, a pak se zahustí destilací ve vakuu k odstranění dimetylformamidu. Zbytek se rozdělí mezi 3,2 1 etylacetátu a 3,2 1 vody. Vodný podíl se extrahuje druhou částí etylacetát (2,0 1). Roztok se suší nad sulfátem sodným, filtruje se přes 1,6 kg vrstvu oxidu křemičitého, která se promyje 8,0 1 etylacetátu a filtrát se odpaří ve vakuu. Vytvořený zbytek se rozpustí ve směsi 1,35 1 isopropanolu a 400 ml etylacetát, a pak se filtruje. Přidá se 1,34 1 2,44 M roztoku chlorovodíku v etylacetátu a suspenze se nechá stát v 1 hodinu v ledové lázni. Po filtraci suspenze se filtrační koláč promyje 600 ml směsi isopropanolu a etyl-acetátu v poměru 1:1, a následně 600 ml metyl-t-butyl-eteru. Pevný produkt se suší ve vakuu za vzniku 749 g (výtěžek 77%, přebytek enantiomerů 98%) (S)-3-(4-fluor-feny)-4-(fenylmetyl)-2-morfolinon-hydrochloridu.

Chirální HPLC: kolona: chirální (D)-dinitro-benzoyl-fenyl-glycin (kovalentní vazba), normální fáze, 25 cm x 4,6 mm; teplota kolony: 35°C; mobilní fáze: směs hexanu a etanolu v poměru 99:1; rychlost průtoku: 1 ml/min; detekce při: UV 220 nm;

přibližné doby retence:

(R)-3-(4-fluor-feny)-4-(fenylmetyl)-2-morfolinon:

9999 99 9 99 99 • ♦ · 9 9 9 9 9 9 ·

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 · · 9 · ·«*···' « « φ *··♦ ·· · «··· • Φ 9 9 9 9 9 9 · 9 9 minut;

(S)-3-(4-fluor-feny)-4-(fenylmetyl)-2-morfolinon:

minut.

Příklad 15 racemizace/dělení

3-(4-fluor-fenyl)-4-fenylmetyl-2-morfolinonu

Do roztoku 10 g 3-(4-fluor-fenyl)-4-fenylmetyl-2-morfolinonu (tj. N-benzyl-4-fluor-fenyl-1,4-oxazin-2-onu) ve 110 ml izopropyl-acetátu se při pokojové teplotě přidá roztok 12 g (-)-3-brom-kamfor-8-sulfonové kyseliny ((-)-3BCS) ve 24 ml acetnitrilu. Krystalizace začíná po 2-3-minutách. Suspenze se 1 hodinu míchá při pokojové teplotě. Po přidání 7 ml trifluoroctové kyseliny se směs 3 dny míchá pří teplotě 65°C. Zchlazená směs na teplotu 0-5°C se nechá stát 1 hodinu. Sebere se pevná látka, která se promyje izopropyl-acetátem a suší se ve vakuu při teplotě 40°C za vzniku 17,24 g (S) izomeru N-benzyl-3-(S)-(4-fluorfenyl)-1,4-oxazin-2-onu (-)-3BCS (přebytek enantiomerů 98,6%).

Chirální složení matečného louhu: 79% (R), 21% (S).

MAtečný louh se 3 dny míchá při teplotě 65°C, a pak se zchladí na teplotu 0-5°C. Pevná látka se sebere, promyje se izopropyl-acetátem a suší se ve vakuu za vzniku další porce 0,84g (S)-isomeru N-benzyl-3-(S)-(4···· • · ftft ft ft··· · · · ft ft · ftftft ft······ ft· · ftftft· ftft ft *··« • ft ·· ·· · ftft ftft

-fluor-fenyl)-1,4-oxazin-2-onu, (-)-3BCS (přebytek enantiomerů 98,6%).

Chirální složení matečného louhu: 64%(R), 36% (S) .

Destilát se stripuje ve vakuu a zbytek se rozpustí ve 20ml izopropyl-acetátu, obsahující 1 ml trifluoroctové kyseliny. Roztok se 20 hodin míchá při teplotě 65°C. Po 1 hodině chlazení na teplotu 0-5°C se pevná látka sebere, promyje se izopropyl-acetátem a suší ve vakuu za vzniku další porce 2,2 g (S)-isomeru N-benzyl-3-(S)-(4-fluor-fenyl)-1,4-oxazin-2-onu, (-)-3BCS (přebytek enantiomerů 99,2%).

Celková hmotnost (-)-3BCS: 20,28g (výtěžek 97%).

Vzorek 0,5 g (-)-3BCS se zachová a zbytek se přemění zpět do formy volných bází. Sůl se rozdělí mezi 50 ml izopropyl-acetátu a 100 ml vody, obsahující 3 ml 0,88% roztoku amoniaku. Podíly se oddělí a vodný podíl extrahuje 25 ml izopropyl-acetátu. Sloučené organické podíly se promyjí 25 ml vody. Organický podíl se zahustí a vytvořený zbytek se propláchne izopropyl-acetátem za vzniku 8,7 g volných bází (S)-izomeru 3-(S)-(4-fluor-fenyl)-4-fenylmetyl-2-morfolinonu (tj . N-benzyl-3-(S)-(4-fluor-fenyl)-1,4-ozazin-2-onu) (výtěžek 93%, přebytek enantiomerů 98,4%).

Další porce N-benzyl-3-(S)-(4-fluor-fenyl)-1,4-oxazin-2-onu, (-)-3BCS se připraví obdobným postupem za použití 4,96g racemátu N-benzyl-3-(4-fluor-fenyl)-1,4-oxazin-2-onu (racemát), (-J-3BCS v 9,4 ml 1,85M φφ φφφφ • Φ · ·· φφ • · · φ φ φ φφφφ • · · φφφφ φφφφ • φ φφφφ Φ·ΦΦ « φ φ φ φ • φφφ φφ φ φφφφ • Φ ♦· ·· φ φφ φφ roztoku acetnitrilu, 2,1 ml trifluoroctové kyseliny a 55 ml izopropyl-acetátu. Reakční směs se 6 dní míchá při teplotě 90°C, zchladí se na teplotu 0-5°C a nechá se 1 hodinu stát. Pevná látka N-benzyl-3-(S)-(4-fluor-fenyl)-1,4-oxazin-2-onu, (-)-3BCS se sebere a promyje se 20 ml izopropyl-acetátu. Vznikne 9,40 g (výtěžek 90%, přebytek enantiomerů 99,6%) (S)-izomeru výsledné sloučeniny.

Chirální složení matečného louhu: 88%(R), 12% (S) .

Příklad 16

3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenylmetyl)-2-morfolinylester kyseliny (2R-cis)-3,5-bis(trifluor-metyl)benzen-octové

Na míchanou suspenzi 2,30 kg (7,15 mol) (S)-3-(4-fluorfenyl ) -4- ( fenylmetyl ) -2-morfolinon-hydrochloridu ve 22 1 etylacetát se působí 22 1 10% vodného roztoku bikarbonátu sodného. Vytvořený organický roztok se postupně promyje jedenkrát 11 1 10% vodného roztoku bikarbonátu sodného a dvakrát 11 1 vody, a pak se přes noc suší za použití 1 1 molekulových sít o velikosti otvorů 4A. Roztok se odpaří, propláchne se dvakrát 3 1 tetrahydrofuranu (k odstranění stopového množství etylacetátu). Vytvořené volné báze (S)-3-(4-fluor-feny)-4-(fenylmetyl)-2-morfolínonu se rozpustí v 19 1 tetrahydrofuran a zchladí se na teplotu -75°C. Do reakční směsi se přidá 6,74 1 (7,15 mol) 1,06 M roztoku • · · · · · · ···· • · · · · ···»··· · · · • · · · · · · · · · · ·· ·· ·· · 99 99 ·“· ····

L-Selectridu (tri-sec-butylborohydridu lithného), přičemž se teplota udržuje pod -70°C. Reakční směs se nechá stát 15 minut, a pak se přidá 2,57 kg (9,29 mol)

3,5-bis(trifluor-metyl)benzoyl-chloridu přidá, při udržení teploty nižší než -70°C. Reakční směs se sleduje HPLC. Reakce se ukončí přidáním 205 ml octové kyseliny v 800 ml tetrahydrofuran a reakční směs se přes noc nechá ohřát k teplotě místnosti. Roztok se zahustí ve vakuu a vytvořený olej se zředí 36 1 hexanů. Reakční směs se promyje postupně jedenkrát 17 1 vody, třikrát

8,5 1 10% vodného roztoku bikarbonátu sodného a dvakrát

8,5 1 vody, a pak se suší přes noc za použití 11 molekulových sít s velikostí otvorů 4A. Podle HPLC obsahuje reakční směs 2,44 kg (65% výtěžek)

3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenyl-metyl)-2-morfolinyl-esteru (2R-cis)-3,5-bis(trifluor-metyl)-benzen-octové kyseliny.

Tato porce se sloučí s 0,59 kg 3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenylmetyl)-2-morfolinyl-ester (2R-cis)-3,5-bis-(trifluormetyl)benzen-5-octové kyseliny v 7 1 hexanů, připraveného stejným způsobem. Sloučené roztoky sloučenin se filtrují přes filtr s velikostí otvorů 20 pm, a pak se zředí 9 1 hexanů. Na surových 3,03 kg (5,74 mol) 3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenylmetyl)-2-morfolinyl-esteru (2R-cis)-3,5-bis(trifluor-metyl)-benzen-octové kyseliny se působí 9,6 1 1,0 M roztoku kyseliny chlorovodíkové v dietyleteru za vzniku bílé sraženiny 3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenylmetyl)-2·· · ·· ··

9 · 9 · 9 9 9 9 9 • 9 9 9999 9999

9999 9999 99 99 9

9999 99 9 9999

99 99 9 99 99 rw ·♦* ·

-morfolinyl-esteru hydrochloridu (2R-cis)-3,5-bis- (trifluormetyl)benzen-octové kyseliny (hydrochloridová sůl se vytvoří k odstranění tri-sec-butyl-boranového zbytku (z L-Selectridu)). Pevná látka se sebere filtrací, promyje se dvakrát 8 1 směsi hexanů, a pak se suší pod dusíkem. Hydrochloridován sůl se rozštěpí uvedením do suspenze ve směsi 36 1 toluenu a 13 1 10% vodného roztoku bikarbonátu sodného. Vytvořený organický roztok se promyje 13 1 10% vodného roztoku bikarbonátu sodného a dvakrát 18 1 vody. Toluenový roztok obsahuje 3,00 kg 3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenyl-metyl)-2-morfolinyl-esteru (2R-cis)-3,5-bis(trifluor-metyl)benzen-octové kyseliny (80% plochy pod křivkou, opraveno pro toluen). Produkt se umístí na 1 1 molekulových sít s velikostí otvorů 4A.

HPLC: kolona: Zorbax RX-C8, 25 cm x 4,6 mm;

mobilní fáze: směs acetnitril a 0,1% vodného roztoku kyseliny fosforečné v poměru 75:25; rychlost průtoku:

1,5 ml/minut; detekce při: UV při 220 nm;

přibližné doby retence: redukovaný (S)-3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenylmetyl)-2-morfolinon: 1,6 minut;

(S)-3-(4-fluor-feny)-4-(fenylmetyl)-2-morfolinon:

3,3 minut;

3-(4-fluorfenyl)-4-(fenylmetyl)-2-morfolinyl-ester kyseliny (2R-cís)-3,5-bis(trifluor-metyl)-benzen-octové: 9,2 minut.

ν· ftftft· • ft · ftft ftft • ft «ftft· «ftftft • ft ft ftftftft «ftftft ftft ftftftft ftftftft ftft ftft · • ftftft ftft ft ftftftft • ft ftft ftft ft ftft ftft

Příklad 17 (2R-cis)-2-[[1-[3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl]etenyl]-oxy]-3-(4-fluorfenyl)-4-(fenylmetyl)morfolin

Toluenový roztok 1,60 kg (3,02 mol) 3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenylmetyl)-2-morfolinyl-esteru (2R-cis)-3,5-bis(trifluor-metyl)benzen-octové kyseliny se odpaří, zbytek se probublává dusíkem. Přidá se 1,6 1 tetrahydrofuranu, a následně roztok dimetyl-titanocenu v toluen (8,35 % hmotnostních, 1,73 kg reakčního činidla, 8,31 mol) (připraveného podle postupu následně uvedeného). Reakční směs se probublává dusíkem 25 minut, a pak se zahřívá na teplotu 80°C. Směs se nechá stát ve tmě 5 hodin při teplotě 80°C, a pak se zchladí na teplotu místnosti a nechá se stát přes noc. Rozpouštědlo reakční směs se vakuovou destilací zamění na heptan při udržení teploty nižší než 20°C (126 1 heptanu se přidá se současnou destilaci 120 1) (rozpouštědlo reakční směsi se zamění na heptan a na směs se působí peroxidem pufrovaným bikarbonátem, který způsobil precipitaci titanového zbytku). Do směsi zchlazené na teplotu 7°C se přidá 22 1 vody, 2,0 kg bikarbonátu sodného, a pak 3,5 1 30% peroxidu vodíku. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě teplotu místnosti. Podíly se rozdělí. Vodný podíl, který obsahuje značné množství titanového zbytku, se zpětně extrahuje 10 1 heptanu. Sloučené organické podíly se filtrují, promyjí se dvakrát 4 1 vody, a pak se ·· • · ·

4 · • · ·

4 4 ·· ···· ·· · • · · · · · • · · * · · · • · · · · · ·*·4 • · · · · · « ·· ·· Φ· φ • 4 94

ΊΟ zahustí. Surový produkt se krystalizuje rozpuštěním v 17 1 horkého metanolu a po zchlazení na teplotu místnosti se přidá 1,8 1 vody. Produkt se izoluje filtrací při teplotě 0°C. Filtrační koláč se promyje 2 1 10% vodného metanolu při teplotě 0°C, a pak se pevná látka suší v atmosféře dusíku na teplotu místnosti za vzniku 1,45 kg (výtěžek 94 % hmotnostních) čistého (2R-cis)-2-[[1-[3,5-bis(trifluormetyl)fenyl]-etenyl] oxy]-3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenylmetyl) morfolinu) .

Dimetyl-titanocenové činidlo lze připravit následným způsobem:

Do důkladně míchané suspenze 3,35 kg (13,5 mol) titanocen-dichloridu v 13,4 1 metyl-t-butyl-eteru zchlazeného na teplotu -8°C se přidá 590 g (26,9 mol) metyl-lithia v 4,38% hmotnostních roztoku 13,5 kg dietyleteru, při udržení teploty pod 5°C. Vytvořená suspenze se 1 hodinu nechá stát při teplotě 0-5°C.

Reakce se ukončí přidáním 8 1 vody, při udržení teploty v rozmezí 0 až 8°C. Organický podíl se čtyřikrát promyje 3 1 studené vody. Rozpouštědlo organického podílu se zamění na toluen destilací se současným přidáváním 24 1 toluenu, zatímco se teplota udržuje při teplotě 25°C nebo méně. Podle IH NMR obsahuje 8,35 % hmotnostních roztok v toluenu 1,75 kg dimetyl-titanocenu (výtěžek 63%). Materiál se skladuje v atmosféře dusíku při teplotě 0°C.

Průběh reakce podle IH NMR (250 MHz, CDC13, odstup 10 • 4 ·· · ··· · · · · · • · ··· ······· · · · • · · · · · · ···· • · ·· ·· · ·· ·« sekund mezi impulsy):

Cp₂TiMe₂: δ (ppm) 6,05 (s, 10H) , -0,05 (s, 6H) .

Cp₂TiClMe: δ 6,22 (s, 10H), 0,80 (s, 3H).

Cp₂TiCl₂: δ 6,56 (s, 10H) .

Alternativní způsob výroby dimetyl-titanocenového činidla:

Do důkladně míchané suspenze 6,0 g (24,1 mmol) titanocen-dichloridu (Cp₂TiCl₂) v 72 ml toluen zchlazené k -5 °C se po kapkách během 10 minut přidá 3,0 M roztoku v tetrahydrofuranu 19,8 g (19,2 ml, 57,6 mmol, 2,4 ekv.) metyl-magnesium-chloridu (CH₃MgCl) 10 minut, při udržení teploty pod 5°C. Vytvoří se viskózní suspenze a sraženina chloridu hořečnatého. Vytvořená suspenze se 50 minut nechá stát při teplotě 0-5°, přičemž dojde k rozpuštění červeného titanocen-dichloridu (Cp₂TiCl₂) · Ukončení reakce se potvrdí pomocí NMR. Ve 0,2 ml vzorku se ukončí reakce přidáním do 1 ml vody a 1 ml CDC13. Chloroformový podíl se použije přímo pro analýzu NMR. Rezonance dimetyl-titanocenu se jeví při 6,0 ppm (Cp skupina) a -0,2 ppm (CH₃ skupina) .

Rezonance monometylových sloučeniny je 0,2-0,3 ppm a rezonance titanocen-dichloridu je 6,5 ppm.

Reakce se při teplotě nižší než 10°C ukončí přidáním během 10 minut 20 ml roztoku 10% vodného roztoku chloridu amonného. Podíly se oddělí a organický podíl se třikrát promyje 20 ml studené vody a jedenkrát 20 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, a pak se suší nad 20 g síranu sodného. Filtrovaný organický podíl se

0 zahustí ve vakuu na poloviční objem. Celková hmotnost roztoku je 43 g. Podle NMR obsahuje 11,2 % hmotnostních (4,8 g (96% výtěžek) v dimetyl-titanocenu.

Tetrahydrofuran byl přítomen v množství 2%, přičemž přítomnost malého množství tetrahydrofuranu zvyšuje stabilitu činidla. Materiál se skladuje v atmosféře dusíku při teplotě 0°C.

Alternativní způsob výroby dimetyl-titanocenového činidla:

Do důkladně míchané suspenze 249 g (1,00 mol) titanocen-dichloridu v 2,75 1 toluen zchlazené na teplotu -5° (vnitřní teplota) se během 1 hodiny při teplotě nižší než 8°C přidá 3,0 M roztok 750 ml (2,25 mol) metyl-magnesium-chloridu (MeMgCl) v tetrahydrofuranu. Vytvořená oranžová suspenze se nechá 1 hodinu stát při teplotě 0-5° do rozpuštění purpurově zbarveného titanocen-dichloridu (Cp₂TiCl₂) . Ukončení reakce se potvrdí pomocí NMR (viz dole), a pak se reakce ukončí při teplotě 0-5° přidáním do 700 ml roztoku 6% vodného roztoku chloridu amonného. Organický podíl se promyje třikrát 575 ml studené vody a jedenkrát 575 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, a pak se suší nad 220 g síranu sodného. Filtrovaný organický podíl zahustí odpařováním na 1,5 kg (při udržení vnitřní teploty nižší než 25°C) .

Podle ÍH NMR obsahuje 12,5 % hmotnostních roztok v toluenu a tetrahydrofuranu 187 g (90%) produktu.

Produkt je více než z 95% čistý, pouze se stopovým • · • · · · • · • · · ··· ···<

• · · ♦ · · · ···· • · ··· ······· ·· · • · · · · · · ···· • φ · * ·· · ·· ·· množstvím počátečního materiálu a monometylových meziproduktů. Roztok lze pro snazší provedení sledování zahustit na hmotnost 1,0 kg, za vzniku 18% hmotnostních roztoku v toluenu. Přítomnost malého množství tetrahydrofuranu zvyšuje stabilitu činidla. Materiál se skladuje v atmosféře dusíku při teplotě 0° v uzavřené opletené nádobě z barevného skla.

^rH NMR Cp₂TiMe₂: δ 6,05 (s, 10H) , -0,05 (s, 6H) .

Cp₂TiClMe: δ 6,22 (s, 10H), 0,80 (s, 3H). Cp₂TiCl₂: δ 6,56 (s, 10H) ¹³C NMR Cp₂TiMe₂: δ 113,20 (Cp₂) , 45, 77 (Me₂) .

Cp₂TiClMe: δ 115,86 (Cp₂) , 50,37 (Me) .

Cp₂TiCl₂: δ 120,18.

HPLC: kolona: Zorbax RX-C8, 25 cm x 4,6 mm; mobilní fáze: směs acetnitrilu a 0.1% vodného roztoku kyseliny fosforečné v poměru 65:35; rychlost průtoku:

1,5 ml/min; detekce při: UV při 220 nm;

přibližné doby retence:

(2R-cis)-2-[(1-[3,5-bis(trifluormetyl)fenyl]etenyl] oxy]-3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenylmetyl)mopholin:

17,2 minut;

3-(4-fluorfenyl)-4-(fenylmetyl)-2-morfolinyl-ester (2Rcis)-3,5-bis(trifluormetyl)-benzen-octové kyseliny:

18,9 minut.

·

4 4 · • · · · 4 4 · · ·

4*4 « • 4444 4 ·

Příklad 18 (2R-cis)-2-[[1-[3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)etenyl] oxy]-3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenylmetyl)morfolin

Toluenový roztok obsahující 2,99 kg (5,67 mol)

3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenylmetyl)-2-morfolinyl-esteru (2R-cis)-3,5-bis(trifluormetyl)benzen-octové kyseliny [tj.. (4-benzyl-2-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl)benzoyloxy)-3-(S)-(4-fluorfenyl)-1,4-oxazinu] se odpaří na objem 100 1. Nádoba se probublává dusíkem, přidá se 25 1 tetrahydrofuranu, a následně 12,5% hmotnostních roztok 4,2 kg (20,2 mol) dimetyl-titanocenu ve směsi toluenu a tetrahydrofuranu. Oranžový roztok se probublává 25 minut dusíkem, a pak se zahřívá na teplotu 80°C. Reakční směs se nechá 4 hodiny stát ve tmě při teplotě 80°C, a pak se zchladí na teplotu místnosti. Přidá se 11,6 1 metanolu a 1,9 1 vody a směs se přes noc zahřívá na teplotu 40°C, za vzniku sraženiny titanového zbytku jako zelené pevné látky. Po zchlazení k teplotě místnosti se pevná látka odstraní filtrací, filtrační koláč se promyje toluenem a matečná kapalina se odpaří. Surový produkt se během 3 hodin krystalizuje rozpuštěním ve 30 1 horkého metanolu, zchlazením k teplotě místnosti, a následným přidáváním 3,4 1 vody (3,4 1). Produkt se oddělí filtrací při teplotě O°C, filtrační koláč se promyje při teplotě 0°C 2 1 10% vodného roztoku metanolu a pevná látka se v atmosféře dusíku suší při teplotě místnosti za vzniku 2,55 kg

• · 9 • · (výtěžek 85%) (2R-cis)-2-[[1-[3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl]-etenyl]oxy]-3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenylmetyl)morfolinu.

Příklad 19

4-metyl-benzen-sulfonát [2R-[2a(R*), 3a]]-2-[1-[3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl]etoxy]-3-(4-fluorfenyl)morfolin

Na roztok 1082 g (čistota 94%, 1,94 mol) (2R-cis)-2-[[1-[3,5-bis(trifluormetyl)fenyl]etenyl]oxy]-3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenylmetyl)morfolinu ve 13 1 směsi etylacetátu a etanolu v poměru 1:1 se smíchá se 165 g 10% paladia na aktivním uhlí. Na vytvořenou suspenzi se 12 hodin působí při teplotě 20-25°C při tlaku 0,28 MPa vodíku. Spotřeba vodíku během reakce se sleduje HPLC. Nádoba se se odvětrá a katalyzátor se odstraní filtrací. Po promytí katalyzátoru 6 1 směsi etyl-acetátu a etanolu v poměru 1:1, a následně 2 1 etylacetátu se sloučené organické podíly obsahující surový [2R-[2a(R*),3a)]-2-[1-[3,5bis(trifluormetyl)-fenyl]etoxy]-3-(4-fluor-fenyl)morfolinu zahustí ve vakuu.

Připraví se druhá porce této sloučeniny za použití 1078 g (1,93 mol) (2R-cis)-2-[[1-[3,5-bis(trifluormetyl)-fenyl]etenyl]oxy]-3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenylmetyl)-morfolinu. Vytvořený surový • · • · · ·

9 9

9 999 [2R-[2a(R*),3a)]-2-[1-(3,5-bis(trifluormetyl)-fenyl]-etoxy]-3-(4-fluorfenyl)morfolinu se zahustí ve vakuu a sloučí se s první porcí sloučeniny.

Sloučené podíly surového [2R-(2a(R*),3a]]-2-[1-[3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl]etoxy]-3-(4-fluor-fenyl)morfolinu se dvakrát propláchne 3 1 metyl-t-butyl-eteru k odstranění etylacetátu a etanolu, a pak se produkt rozpustí ve 3 1 metyl-t-butyl-eteru. Roztok podle analýzy obsahuje 1348 g (3,09 mol, výtěžek 80%) [2R-[2a(R*),3a]]-2- [1-[3,5-bis(trifluormetyl)fenyl]etoxy]-3-(4-fluorfenyl)morfolinu (jako volných bází). Lze také 12 hodin míchat 60 g vinyleteru, 650 ml metyl-t-butyl-eteru (MTBE) a 18 g 5% paladia na aktivním uhlí při tlaku vodíku 0,28 MPa a teplotě 40°C. Výtěžek je 87%, poměr diastereoizomerů 91:9. Po ukončení reakce se katalyzátor odstraní filtrací přes SolkaFloc, a pak se filtrát zahustí na objem 140 ml.

Na první porci reakčního produktu se působí roztokem o teplotě 40°C 575 g (3,03 mol) monohydrátu p-toluen-sulfonové kyseliny v 3,2 1 metyl-t-butyl-eteru. Po přidání začne krystalizovat p-toluen-sulfonát [2R-(2a(R*),3a]]-2-[1-[3,5-bis(trifluormetyl)fenyl]etoxy]-3-(4-fluor-fenyl)morfolinu. Reakční směs se zchladí na teplotu místnosti, přidá se 24 1 hexanu, směs se 2 hodiny nechá stát, a pak se produkt se sebere filtrací. Pevná látka se promyje dvakrát 2,5 1 směsi hexanu a metyl-t-butyl-eteru v poměru 4:1,a pak se suší v atmosféře dusíku za vzniku 1761 g (čistých 1655 g «· φ • « • · · · · » · ···« • · · · « ·«··*«· · · · • · · · 4 · · · · · · ·· ·» ·· · » · · · produktu) 4-metylbenzen-sulfonátu [2R-[2a(R*),3a]]-2-[1-[3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl]etoxy]-3-(4-fluor-fenyl)morfolinu (výtěžek čistého produktu 94% hmotnostních, 70% výtěžek).

Lze také do druhého roztoku během 20 minut přidat roztok 16,0 g monohydrátu p-toluen-sulfonové kyseliny v 64 ml metyl-t-butyl-eteru (MTBE) při teplotě 35°. Vznikne hustá suspenze s krystaly tosylátu. Do suspenze se během 1 hodiny přidá 520 ml směsi hexanů a suspenze se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti. Po filtraci se promyje dvakrát 60 ml směsi 1:4 metyl-t-butyl-eteru (MTBE) a hexanů a suší se odsáváním za vzniku 51,9 g tosylátu (výtěžek 75%) obsahující 0,9% nežádoucího diastereomeru.

HPLC: kolona: Zorbax RX-C18, 25 cm x 4,6 mm;

mobilní fáze: směs acetnitrilu a 0,005 M vodného roztoku heptan-sulfonátu sodného, směs 0,002 M roztoku dihydrogenfosforečnanu draselného a 0,0005 M roztoku hydrogenfosforečnanu sodného v poměru 75:25;

rychlost průtoku: 1,5 ml/min; detekce při: UV při 220 nm; přibližná doba retence:

[2R-[2a(R*),3a]]-2-[1-[3,5-bis(trifluormetyl)fenyl]-eto xy]-3-(4-fluorfenyl)morfolin: 4,5 minut;

N-benzyl- [2R-(2a(R*),3a]]-2-[1-[3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl]etoxy]-3-(4-fluor-fenyl)morfolin: 25,0 minut;

(2R-CÍS)-2-[[1-[3,5-bis(trifluormetyl)-fenyl]-etenyl]oxy]-3-(4-fluor-fenyl)-4-(fenylmetyl)morfolin:

* ♦ ί ·4 «4 ♦ 4 · 4 · • · 4 4 4 · «

4444444 44 · •4 4444 «4 44

4· 4 4

30,0 minut.

HPLC: kolona: Zorbax RX-C18, 25 cm x 4,6 mm; mobilní fáze: směs acetnitrilu a 0,005 M vodného roztoku heptan-sulfonátu sodného, směs 0,002 M roztoku dihydrogenfosforečnanu draselného a 0,0005 M roztoku hydrogenfosforečnanu sodného v poměru 60:40; rychlost průtoku: 1,5 ml/minut; detekce při: UV při 220 nm; přibližné doby retence:

[2R-[2a(R*),3a]]-2-[1-[3,5-bis(trifluormetyl)fenyl]-etoxy]-3-(4-fluor-fenyl)morfolin: 9,0 minut; diastereomer [2R-(2a (R*) , 3a] ] -2- [1- [3,5-bis(trifluormetyl) fenyl]etoxy]-3-(4-fluor-fenyl)morfolin: 11,0 minut (epimerní na metylové skupině).

Příklad 20 [2R-[2a(R*),3a]]-5-[[2-[l-[3,5-bis(triifluor-metyl)-fenyl]etoxy]-3-( 4-fluorfenyl-4-morfolinyl]metyl]-1,2-dihydro-3H-l,2,4-triazol-3-on

Do roztoku se 1254 g (2,06 mol) [2R-[2a(R*),3a]]-2-[1-[3, 5-bis(triifluor-metyl)fenyl]-etoxy]-3-(4-fluor-fenyl)morfolin 4-metylbenzen-sulfonátu, 375 g (2,26 mol) N-metylkarboxy-2-chlor-acetamidrazonu a 10 1 dimetylformamidu se přidá 682 g (4,93 mol) práškového uhličitanu draselného. Reakční směs se nechá stát 2,5 hodiny při teplotě v rozmezí 15 až 25°C. Reakční směs se zředí 10 1 směsi hexanu a metyl-t-butyl-eteru v poměru « · « »

1:1 a 11 1 10,9% vodného roztoku chloridu amonného. Podíly se rozdělí a vodný podíl dvakrát extrahuje 8 1 směsi hexanu a metyl-t-butyl-eteru v poměru 1:1, a následně 8 1 směsi hexanu a metyl-t-butyl-eteru v poměru 1:2. Sloučené organické podíly se promyjí dvakrát 15 1 vody, a pak se zahustí ve vakuu. Vytvořený produkt se rozpustí ve 20 1 xylenů a směs se 3 hodiny zahřívá na teplotu refluxu (137°C) . Po zchlazení na teplotu místnosti dojde ke krystalizaci [2R-[2a(R*),3a]]-5-[[2-[1-[3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl]etoxy]-3-(4-fluor-fenyl)-4-morfolinyl]metyl]-1,2-dihydro-3H-l,2,4-triazol-3-onu. Reakční směs se nechá přes noc stát, a pak se filtruje. The filtrační koláč se promyje jedenkrát 2 1 směsi xylenů, a následně dvakrát 2 1 hexanů, a pak se 3 dny suší ve vakuu při teplotě 30°C za vzniku 696 g (výtěžek 63%) [2R-[2a(R*),3a]]-5-[[2-[1-[3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl]etoxy]-3-(4-fluor-fenyl)-4-morfolinyl]metyl]-1,2-dihydro-3H-l,2,4-triazol-3-onu (tj. 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)-etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazolo)metylmorfolinu).

Výslednou sloučeninu lze připravit z 1,90 kg (3,12 mol) amintosylátu, 516,3 g (3,12 mol) N-metylkarboxyl-2-chlor-acetamidrazonu, 1,08 kg (2,5 ekv.) uhličitanu draselného a 15,6 1 DMSO.

Do suspenze aminové soli a práškového uhličitanu draselného v 7,8 ml DMSO se při teplotě 20°C přidá * · ··* «V 4 ·· 44 • 4 4 4 4 4 <444

4 4444 4444

4 444 4444444 44 4

4444 44 4 4444

44 44 4 44 44 roztok N-metylkarboxyl-2-chlor-acetamidrazonu v 7,8 1 DMSO. První polovina roztoku se přidá rychle (s mírným chlazením v lázni ledové vody), druhá polovina se přidá během 1 hodiny. Po adici se průběh reakce kontroluje kapalinovou chromatografií a reakce se ukončí přidáním 15 1 studené vody a 30 1 roztoku metyl-t-butyl-eteru (MTBE). Organický podíl se oddělí, promyje se 20 1 vody, 20 1 nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 20 1 nasyceného roztoku chloridu sodného a 20 1 vody. Vodný podíl se extrahuje 15 1 roztoku metyl-t-butyl-eteru (MTBE). Sloučený MTBE roztok se zahustí za vzniku oleje. Vytvořený surový produkt se rozpustí ve 25 1 xylenu a 6,25 1 diizopropyl-etylaminu a roztok se zahřívá se na teplotu refluxu (-135 °C). Postup reakce se monitoruje kapalinovou chromatografií. Po ukončení reakce po 4-6 hodin se reakční roztok·přes noc zchladí na teplotu místnosti a filtruje se za vzniku 1,33 kg (výtěžek přibližně 80%, čistota 98,5A%). Vytvořený surový produkt se rozpustí ve 13,3 1 horkého metanolu, přidá se 133 g aktivního uhlí, směs se filtruje a aktivní uhlí se promyje 3,3 1 horkého metanolu. Metanolový roztok se zchladí na teplotu místnosti, a pak se přidá po kapkách 7 1 vody. Po 2 hodinách míchání při pokojové teplotě se suspenze filtruje. Získá se 1,20 kg čištěného produktu (tj.

2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-οχο-1Η-4Η-1,2,4-triazolo)metylmorfolinu) jako bílého krystalického produktu • * • « • 99 • · 9 9 « (výtěžek 90%, čistota 99,5A%).

HPLC: kolona: Zorbax RX-C8, 25 cm x 4,6 mm; mobilní fáze: (A) acetnitril, (B) 0,1% vodný roztok kyseliny fosforečné; lineární gradient od 40:60 A:B do 70:30 A:B v 10 minut; rychlost průtoku: 1,5 ml/minut; detekce při UV 220 nm; přibližné doby retence:

alkylovaný meziprodukt: 5,7 minut;

[2R-[2a(R*),3a]]-5-[(2-[1-[3,5-bis(trifluormetyl)fenyl] etoxy]-3-(4-fluor-fenyl)-4-morfolinyl)metyl)-1,2-dihydro-3H-l,2,4-triazol-3-on: 8,2 minut.

Vzorek připravený tímto způsobem byl následně označen jako polymorfní forma II. Metodou určení byla difrakce RTG záření na práškovém materiálu, hlavní ohyby jsou při: 12,6, 16,7, 17,1, 17,2, 18,0, 20,1, 20,6, 21,1, 22,8, 23,9, a 24,8° (2 theta).

PŘÍKLAD 21

Příprava formy I 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl) fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazolo)metylmorfolinu

Forma I 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazolo)metylmorfolinu se připraví mícháním formy II

2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-l,2,4φφφφ • · • φ φ φφφ φφφ· φφ φ φφφφ φφφφ φ φ φφφ φφφφφφφ φφ φ • φφφ φφ φ Φφφφ * φφ φφ φ φφ φφ

-triazolo)metylmorfolinu v izopropyl-acetátu při teplotě 25°C a následným oddělením pevné látky filtrací.

Formu I 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl)fenyl)etoxy)-3-(S)- (4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazolo)metylmorfolinu lze také připravit mícháním formy II 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)-etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazolo)metylmorfolinu v etanolu, 2-propanol, vodě, směsi metanolu a vody nebo acetnitrilu při teplotě 25°C, a následným oddělením pevné látky filtrací.

Příklad 22

Příprava očkovacích krystalů formy I 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)etoxy) - 3-(S)-(4-fluor)-fenyl-4-(3-(5-οχο-1Η,4H-1,2,4triazolo)metylmorfolinu

Vzorek formy II 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluor-metyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazolo)metylmorfolinu se umístí na malou otevřenou hliníkovou nádobu a neuzavřená nádoba se umístí do přístroje pro diferenciální sériovou kalorimetrii (DSC). Produkt se zahřívá od teploty místnosti na teplotu 230°C, a pak se zchladí zpět na teplotu místnosti. Vytvořenou pevnou látku je vhodné použít jako očkující krystaly pro přípravu velkého množství formy I 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis83

-(trifluormetyl)fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazolo)-metylmorfolinu.

• 94 9 *

• · 9 • 494 4

Příklad 23

Příprava formy I 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl) fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazolo)metylmorfolinu

Nádoba o objemu 22 litrů se naplní 566 g formy II 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazolo)metylmorfolinu a 5,7 1 metanolu. Směs se zahřívá na teplotu refluxu (65°C) k dosažení přeměny pevného podílu na roztok. Roztok se nechá zchladit 50°C a naočkuje se přibližně 200 mg formy I 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)-fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazolo)metylmorfolinu. Po zchlazení na teplotu 45°C se vytvoří krystaly. Směs se zchladí na teplotu 26°C, načež se přidá během 1 hodiny 2,8 1 vody. Směs se nechá 2 hodiny stát při pokojové teplotě, a pak se 2 hodiny zahřívá se na teplotu 70°C, tak aby došlo k dokonalé přeměně veškeré formy II na formu I. Směs se nechá přes noc zchladit, zchladí se k teplotě 0°C, a pak se nechá 70 minut stát při teplotě 0°C, načež se při teplotě -3°C filtruje. Materiál se přes noc suší na filtru v uzavřené atmosféře dusíku a balí se zasucha za vzniku 549 g • · • ·4 ·4 • 4 4 ♦ 4 4 • 44 · · 4 9 ··«···· »4 4

4 4 4 4 · «4 4 · (výtěžek 97%) .

Příklad 24

Příprava formy I 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl) fenyl)etoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazolo)metylmorfolinu

Velká reakční nádoba se naplní 14,5 kg formy II

2-(R)-(i-(R)-(3,5-bis(trifluormetyl)-fenyl)etoxy)-3-(S)- (4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-lH,4H-1,2,4-triazolo)metylmorfolinu a 158 1 metanolu. Směs se zahřívá na teplotu 50°C, přičemž dojde k úplnému rozpuštění. Do suspenze produktu v 6 kg metanolu se ořidá 1,5 kg aktivního uhlí (Darco G60) a suspenze se propláchne 2 1 metanolu. Reakční směs se zahřeje na teplotu refluxu (62°C) a 1 hodinu se nechá stát. Reakční směs se zchladí na teplotu 60°C a filtruje se přes recyklační filtr 14 SS. Po 10 minutách se recyklace přeruší a materiál se vrátí do reaktoru. Pak se veškerý materiál nechá postupně projít ještě jednou recyklačním filtrem, filtrem s průměrem otvorů 10 mikrometrů a pak filtrem s otvory 0,6 mikrometrů, načež se převede do jiné nádoby. Do reaktoru se k jeho vypláchnutí přivede 50 litrů methanolu Reaktor se proplachuje 10 minur k vyčištění recyklačního potrubí a k zahřátí na teplotu vyšší než je teplota místnosti. Pak se methanol převede do nádoby s výsledným materiálem.

•· ···· • · · · · · • · · · ·«* · •^r)

Reakční směs se zahustí z objemu přibližně 210 1 na 170 1 distilací za atmosferického tlaku. Koncentrace vzorku je 88 g/1 (14,9 kg, beze ztrát). Materiál se zchladí na teplotu 50°C a přidá se k naočkování 300 g čisté formy I 2- (R) - (1- (R) - (3,5-bis (trifluormetyl) fenyl) etoxy) -3-(S) -(4-fluor)fenyl-4 - (3 - (5-οχο-1Η, 4H-1,2,4-triazolo)metylmorfolinu. Vytvoří velmi jemné krystaly, které lze jen obtížně detekovat i při teplotě 45°C.

Jemná suspenze se nechá 1 hodinu stát při teplotě 45 °C, přičemž dojde k malé změně vzhledu suspenze. Suspenze se přes noc nechá zchladit na teplotu 25 °C za vzniku suspenze s obsahem 60,5 g/1 rozpuštěné sloučeniny. Ve vzorku vlhkého filtračního koláče byly přítomny jen krystaly formy I. Přidá se 33% roztok 83,6 kg vody v metanolu během 3 hodin pomocí přívodu pod povrchem kapaliny Vzorky obsahovaly 0,1 % hmotnostních produktu v supernatantu .

Krystaly byly určeny jako forma I. Reakční směs se během 2 hodin zchladí na teplotu 0°C, a nechá se jednotlivými kapkami překapávat na velkém filtru.

• * • · ·· ···· 99 ·· ·· • · · · * · · • · ····· · • · ·· ·· · . . «· . • · · · · · ···· ···· · ·· ·· ·· ··

Přibližně 15 kg směsi metanolu a vody v poměru 2:1 se použije k promytí nádoby, přičemž zbývá v zařízení pravděpodobně 500-1000 g produktu. Vytvořených 15 kg filtračního koláče se rozprašovací tryskou umístí na filtr Sebere se 217,8 kg matečného louhu a promývací kapaliny (0,1% hmotnostních 030). Vlhký produkt na filtru se suší při teplotě 50°C přes noc ve 27,5 vakuu, proud vzduchu 1,13 m /min. p_o 12 hodinách se pomocí vážení prokáže ztráta 0,0%hmotnostních. Celková hmotnost výsledné sloučeniny je 12,82 kg.

Příklad 25

Složení farmaceutického přípravku obsahujícího sloučeninu podle současného vynálezu

A: Kapsle plněné práškem s obsahem 5 mg účinné látky v každé kapsli

Složka množství v kapsli (mg) účiná látka 5 laktóza 194 stearát hořečnatý_1 kapsle (velikost č.l) 200

Částice účinné látky lze zmenšit na prášek č.60 a laktózu a stearát hořečnatý lze nechat projít blotační tkaninou č.60 do prášku. Sloučené složky lze asi 10 minut míchat a plnit do suchých želatinových kapslí

č.l.

9 • 9

9· • 9 · 9

99999 « 9

Β:

Tablety

Jednotlivá tableta obsahuje:

mg účinné složky, mg předem gelatinizovaného škrobu USP, 82 mg mikrokrystalické celulózy 1 mg stearátu hořečnatého.

Ikdyž je vynález popsán a objasněn pomocí příkladů a odkazů na určité specifické formy podání, lze s výhodou postupy a plány výroby měnit, modifikovat, provádět substituce, delece a adice, aniž by došlo k odchýlení od podstaty a celkového záměru vynálezu.

Například je vhodná jiná volba účinného dávkování než shora konkrétně uvedené dávkování, a to vzhledem ke kolísání vnímavosti savců k léčbě shora uvedených indikovaných stavů. Podobně i specifické reakce na farmakologický přípravek jsou rozdílné v závislosti na výběru konkrétní účinné látky, na typu nosiče, jakož i na typu přípravku a způsobu podání. Takové předpokládané obměny a rozdíly ve výsledcích jsou v souladu s předmětem a způsobem provedení současného vynálezu. Záměrem je, aby byl vynález definován škálou požadavků, které následují a tyto požadavky, aby byly interpretovány v přijatelné šíři.

Claims (16)

0000 00 0 0000 00 00 00 0 00 00 »χ 22. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič a polymorfní formu 2-(R)-(1-(R)-(3,5bis(trifluormethyl)fenyí)- ethoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyí -4-(3-(5-oxo-1 H,4H-1,2,4-triazolo)methylmorfolinu s difrakcí rtg-záření na práškovém materiálu s klíčovými hodnotami 12,0, 15,3, 16,6, 17,0, 17.6, 19,4, 20,0, 21,9, 23,6, 23,8 a 24,8° (2 theta), v podstatě prostou polymorfní formy 2-(R)-(1-(R)- (3,5bis- (trifluormethyl)fenyl)-ethoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1 H,4H- 1,2,4-triazolo)methylmorfolinu s difrakcí rtg-záření na práškovém materiálu s klíčovými hodnotami 12,6, 00 0-000 »0 0 00 «0 00 0 000 000 0 «0 0 0·0· 0000 0 0 000 0000000 00 t PATENTOVÉ NÁROKY

1. Polymorfní forma 2-(R)-(1-(R)-(3,5bis(trifluormethyl)fenyl)ethoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1H,4H-1,2,4-triazoio)methylmorfolinu vzorce I

CF<

(i)

2. Polymorfní forma podle nároku 1, charakterizovaná difrakcí rtg-záření na práškovém materiálu s klíčovými hodnotami 12,0, 15,3, 16,6, 17,0, 17,6, 19,4, 20,0, 21,9, 23,6, 23,8 a 24,8° (2 theta).

3. Farmaceutický prostředek, vyznačující se t í m, že jako účinnou složku obsahuje účinné množství polymorfní formy podle nároku 1 spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.

4 4 4 4 « · · · • 9 9 9

4 9999

99 49

4 4 φ 4 · · ♦···

44 4 4444 4···

44 4444 4444 44 4· ·

4444 44 4 44·« • 4 44 4· · ♦· ♦·

4 9 4 · 9 · · 9 4 4 4

94 ·* 99 · 49 94

4 4 4 4 4 9444944 44 4

4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 9

4 4 4494

44 4 99 94 » · 9 9 9 4 4 9 9 9

4. Způsob antagonizace účinku látky P v místě jejího receptoru nebo blokády receptoru neurokininu-1 u savců, vyznačující se t í m, že se savcům podává účinné množství polymorfní formy vzorce I.

5. Způsob léčení nebo prevence stavů ze skupiny: diabetická neuropathie, periferní neuropathie, neuropathie, spojená s AIDS, neuropathie, vyvolaná chemotherapií a neuralgie, vyznačující se tím, že se savcům podává účinné množství polymorfní formy vzorce i.

6. Způsob léčení nebo prevence zvracení u savců, vyznačující se t í m, že se savcům podává účinné množství polymorfní formy vzorce I.

7. Způsob léčení nebo prevence poruch centrálního nervového systému u savců, vyznačující se tím, že se savcům podává účinné množství polymorfní formy vzorce I.

8. Způsob léčení nebo prevence deprese u savců, vyznačující se t í m, že se savcům podává účinné množství polymorfní formy vzorce I.

9 9 9 9

18. Způsob výroby polymorfní formy I 2-(R)-(1-(R)-(3,5bis(trifluormethyl)fenyl)ethoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1 H.4H-1,2,4triazolo)methylmorfolinu .vyznačující se t í m, že se uvede do suspenze 2-(R)-(1-(R)-(3,5bis- (trifluormethyl)fenyl)-ethoxy)- 3-(S)5 (4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1 H,4H-1,2,4-triazolo)methylmorfolin odlišné morfologické formy ve směsi methanolu a vody, přidají se očkovací krystalky formy I 2-(R)-(1-(R)-(3,5bis- (trifluormethyl)fenyl)- ethoxy) -3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1 H,4H-1,2,4- triazolo)methylmorfolinu , výsledná směs se míchá při teplotě 0 až 50 °C do vytvoření formy I

9. Způsob léčení nebo prevence deprese u savců, vyznačující se t í m, že se savcům podává účinné množství polymorfní formy vzorce I spolu s antidepresivní látkou pro dosažení účinné úlevy.

10 2-(R)-(1-(R)-(3,5bis-(trifluormethyl)fenyl)ethoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4(3- (5-oxo-1H,4H-1,2,4- triazolo)methylmorfolinu a výsledná forma I 2-(R)-(1-(R)-(3,5bis- (trifluormethyl)fenyl)- ethoxy) -3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1 H.4H-1,2,4- triazolo)methylmorfolinu se oddělí.

19. Způsob podle nároku 18, v y z n a č u j í c í se t í m, že se ¹⁵ jako výchozí látka užije forma II 2-(R)-(1-(R)-(3,5bis(trifluormethyl)fenyl)ethoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1 H,4H-1,2,4triazolo)methylmorfolinu.

20. Produkt, získaný způsobem podle nároku 20.

21. Polymorfní forma 2-(R)-(1-(R)-(3,5bis(trifluormethyl)fenyl)ethoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1 H,4H-1,2,4-triazolo)methylmorfolinu s difrakcí rtg-záření na práškovém materiálu s klíčovými hodnotami 12,0, 15,3, 16,6, 17,0, 17,6, 19,4, 20,0, 21,9, 23,6, 23,8 a 24,8° (2 theta), v podstatě prostá polymorfní formy 2-(R)-(1-(R)- (3,5bis²⁵ (trifluormethyl)fenyl)-ethoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1H,4H1,2,4-triazolo)methylmorfolinu s difrakcí rtg-záření na práškovém materiálu s klíčovými hodnotami 12,6, 16,7, 17,1, 17,2, 18,0, 20,1, 20,6,

21,1, 22,8, 23,9 a 24,8° (2 theta).

10. Způsob léčení nebo prevence úzkostných stavů u savců, vyznačující se t í m, že se savcům podává účinné množství polymorfní formy vzorce I.

11. Způsob léčení nebo prevence úzkostných stavů u savců, vyznačující se t í m, že se savcům podává účinné množství polymorfní formy vzorce I spolu s protiúzkostnými látkami.

12. Způsob léčení nebo prevence schiofrenie u savců, vyznačující se t í m, že se savcům podává účinné množství polymorfní formy vzorce I .

13. Způsob léčení nebo prevence schiofrenie u savců, vyznačující se t í m, že se savcům podává účinné množství polymorfní formy vzorce I spolu s antipsychotickou látkou.

* 20

14. Způsob výroby polymorfní formy I 2-(R)-(1-(R)-(3,5bis(trifIuormethyl)fenyl)ethoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1 H.4H-1,2,4triazolo)methylmorfolinu .vyznačující se tím, že se uvede do rovnovážného stavu v rozpouštědle ze skupiny ethanol, 2-propanol, acetonitril a isopropylacetát forma II 2-(R)-(1-(R)-(3,5bis(trifluormethyl)fenyl)ethoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1 H.4H-1,2,4triazolo)methylmorfolinu.

15. Produkt, získaný způsobem podle nároku 14.

16. Způsob výroby polymorfní formy I 2-(R)-(1-(R)-(3,5bis(trifluormethyl)fenyl)ethoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1 H.4H-1,2,4triazo!o)methylmorfolinu .vyznačující se tím, že se zahřívá vzorek 2-(R)-(1-(R)-(3,5bis- (trifluormethyl)fenyl)-ethoxy)- 3-(S)(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1 H,4H-1,2,4-triazolo)methylmorfolínu odlišné morfologické formy na teplotu 215 až 230 °C, načež se vzorek nechá zchladnout ne teplotu místnosti.

17. Způsob podle nároku 16, v y z n a č u j í c í se t í m, že se jako výchozí látka užije forma II 2-(R)-(1-(R)-(3,5bis(trifluormethyl)fenyl)ethoxy)-3-(S)-(4-fluor)fenyl-4-(3-(5-oxo-1 H.4H-1,2,4triazolo)methylmorfolinu.

··*· • · • · ·

16.7, 17,1, 17,2, 18,0, 20,1, 20,6, 21,1, 22,8, 23,9 a 24,8° (2 theta).