CZ451299A3

CZ451299A3 - 13-Dihydro-3'aziridino anthracykliny

Info

Publication number: CZ451299A3
Application number: CZ19994512A
Authority: CZ
Inventors: Cristina Geroni; Marina Ripamonti; Michele Caruso; Antonino Suarato
Original assignee: Pharmacia & Upjohn S. P. A.
Priority date: 1998-04-15
Filing date: 1999-04-09
Publication date: 2000-05-17
Also published as: ATE230411T1; MY115486A; IL133114A0; HUP0003802A3; AR019046A1; EA002161B1; AU749578B2; CN1263532A; HUP0003802A2; EP0989989B1; AU3817499A; UA45493C2; NO996127L; GB9808027D0; TW454012B; BR9906305A; JP2002505691A; NO996127D0; DK0989989T3; NZ501931A

Description

13-Dihydro-3'aziridino-anthracykliny

Oblast techniky

Vynález se týká anthracyklinových glykosidů, způsobu jejich přípravy a farmaceutických kompozic s jejich obsahem.

Podstata vynálezu

Vynález se týká anthracyklinových glykosidů vzorce I:

může být v poloze a nebo β, nebo jejich směsí. Sloučeniny vzorce I zahrnují deriváty ve kterých hydroxy skupina v poloze 13 má konfigurace 13(S), 13(R) nebo směsi obou diastereoisomerů 13(R) a 13 (S), to jest:

4-demethoxy-13(S/R)-dihydro-3'-deamino-3'-aziridinyl-4'methansulfonyl-daunorubicin (la) ,

4-demethoxy-13(S)-dihydro-3'-deamino-3'-aziridinyl-4'methansulfonyl-daunorubicin (lb) a

• · · —·♦ ·

9 9

99 99

4-demethoxy-13(R)-dihydro-3'-deamino-3'-aziridinyl-4'methansulfonyl-daunorubicin (Ic) .

Výhodněji se předložený vynález týká anthracyklinových glykosidů vzorce I uvedeného výše ve kterých atom uhlíku v poloze 13 je v konfiguraci S, to jest 4- demethoxy-13 (S)3'-deamino-3'-aziridinyl-4'-methansulfonyl-daunorubicinu (Ib) .

Sloučeniny vzorce I mohou být připraveny redukcí anthracyklinu vzorce II

v přítomnosti redukčního činidla jako je borohydrid sodný, ve směsi organických rozpouštědel jako je methylenchlorid a methanol, výhodně při teplotě nižší než 50 °C, výhodněji při teplotě -70 °C, a pokud je to požadováno a nutné, separací výsledné směsi 13(R) a 13 (S) sloučenin na jednotlivé diastereoisomery. Jednotlivé 13-dihydro diastereoisomery například mohou být získány separací směsi vysokotlakou kapalinovou chromatografií (HPLC).

ft · ftftftft ftftft · · · ♦ ♦ ftftft ft • ftft ftftft ftftftft _ 3 _·· # ·· ···· ·· ·♦

HPLC separace může být konkrétně prováděna na koloně s obrácenými fázemi, použitím směsi fosfátového pufru, jako je 10 mM K₂HPO₄ upravený na pH 7,0 pomocí 85 % H₃PO₄, a organického rozpouštědla jako mobilní fáze, jako je tetrahydrofuran nebo acetonitril.

Výchozí materiál pro přípravu nových anthracyklinových glykosidů je 4-demethoxy-3'-deamino-3'-aziridinyl-4'methansulfonyl-daunorubicin (II), který je popsán v popsán v dokumentu (JS-A-5,532,218 .

Předložený vynález se dále týká farmaceutické kompozice obsahující anthracyklinový glykosid vzorce I smíchaný s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem. Mohou být použity obvyklé nosiče a ředidla. Kompozice mohou být formulovány a podávány obvyklým způsobem.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou použitelné ve způsobech léčení lidského nebo zvířecího těla terapií. Sloučeniny jsou použitelné jako protinádorová činidla. Jsou použitelné při léčení leukemie a pevných nádorů jako jsou nádory trakčníku, konečníku, vaječníků, prsu, prostaty, plic, ledvin a také melanomů. Člověk proto může být léčen způsobem, který zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle předloženého vynálezu. Tímto může být zlepšen stav lidského pacienta. Podávaná dávka může být určena použitím známých dávkových rozsahů v oboru anthracyklinů, změněnou s přihlédnutím k účinku vykázanému sloučeninami podle vynález ve in vitro a in vivo protinádorových testech. Vhodné dávky jsou obecně v rozmezí od 1 do 200 mg/m² povrchu těla, výhodně od 1 do 100 mg/m² v

99 99 99 ·· · to 9 to 9 9 9 9 9

9 9 9 9 *· * · ♦ · J • · · ··· toto·· — 4 — toto · ·♦ 9999 99 9· • to 9 99 9 závislosti na povaze a závažnosti onemocnění které je léčeno a na celkovém stavu pacienta.

Sloučeniny vzorce I byly testovány a bylo zjištěno, že jsou účinné in vitro při použití na souboru myších a lidských nádorových buněčných linií a in vivo při disseminaované P388/DX myší leukémii.

Příklady provedení vynálezu

Účinky sloučeniny vzorce la in vitro a in vivo

Na souboru myších a lidských nádorových buněčných liniích vykazuje sloučenina vzorce la vysokou cytotoxicitu, jak je vidět z hodnot IC₅₀ v Tabulce 1. Výsledky in vivo testů sloučeniny vzorce la na disseminované P388/DX myší leukémii jsou podány v Tabulce 2.

Tabulka 1:

In vitro cytotoxicita sloučeniny vzorce la

Buněčná linie	Sloučenina vzorce la IC50² ng/ml střed ± odchylka
L121O^J	3,76 ± 0,13
JURKAT³	4,87 ± 0,7
CEM³ 5,86 ± 0,4
LoVo⁴	20,3 ± 2

• 9 *♦· 9 • · • 9

9 • 9 • 9 • ·

9

99

9 9 ·

9 9 • 99

9 9 •9 »999

1) Buňky inkubované se sloučeninou po dobu 1 hodiny.

2) 50% inhibiční koncentrace představuje střední hodnotu ± standardní odchylku z křivky závislosti odezvy na dávce pro alespoň dva experimenty

3) Inhibice růstu určená počítáním přežívajících buněk.

4) Inhibice růstu určená pomocí SRB kolorimetrického testu.

Tabulka 2: In vivo protinádorový účinek sloučeniny vzorce la proti disseminovaným P388/DX

Sloučenina	Dávka^z (mg/kg/den)	ILS%^J	Tox“ LTS^s
la	2,9	80	0/20	0/20
	3,8	102	4/17	0/17

1) P388/DX Johnson leukemiové buňky (10⁵/myš) podané IV injekcí v den 0.

2) Léčební dávka podána IV v den 1 po transplantaci nádoru '(den 0). Sloučenina vzorce la byla rozpuštěna ve směsi [Cremophor®/ethanol=6, 5: 3, 5] / [normální fyziologický roztok]=20/80 objemově.

3) Prodloužení přežívání : [(střední doba přežití ošetřené myši/střední doba přežití kontrolní myši) x 100] - 100.

4) Počet smrtí způsobených toxicitou/počet myší.

5) Dlouhodobé přežití (delší než 60 dní) na konci experimentu

9 • · ·*· 9 · · 9 · 9 9 9 · 9 9 ·9· 9 9 · »·9· • · · 999 9 9·«·« • 9 · 9 · 9 · · · ♦ g _ 99 · 99 999· ·· ♦ ·

Následující příklad ilustruje předložený vynález.

Příklad 1

13(R/S)-dihydro-4-demethoxy-3'-deamino-3'-aziridinyl-4'methansulfonyl-daunorubicin (la)

4-demethoxy-3'-deamino-3'-aziridinyl-4'-methansulfonyldaunorubicin (II, 600 mg, 1 mmolů) byl rozpuštěn v methylenchloridu (50 ml) a ochlazen na teplotu -70 °C.

Roztok byl přidán po kapkách s roztokem borohydridu sodného (120 mg, 3,2 mmolů) rozpuštěném v methanolu (5 ml). Po uplynutí 15 minut byl přidán aceton (10 ml), potom byla reakční směs zahřáta na teplotu okolí byl přidán methylenchlorid (500 ml) a směs byla promývána vodou (2x200 ml). Organická fáze byla separována, koncentrována na malý objem a chromatografována mžikovou chromatografií na silikagelu použitím směsi toluenu a acetonu (8:2 objemově). Frakce obsahující sloučeninu z názvu byly shromážděny, koncentrován na malý objem a precipitovány směsí exanethyletheru (85:5 objemově) a tím se získal 13(R/5)dihydro-4-demethoxy-3'-deamino-3'-aziridinyl-4'methansulfonyl-daunorubicin (la, 400 mg).

TLC na Kieselgel desce (Merck) použitím směsi toluenu a acetonu jako vymývacího rozpouštědla (80:20 objemově), R_f = 0,3 *H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ: 1,14, 1,23, 1,72 (m, CH₂CH₂aziridin, Ia+Ib) ; 1,27 (d, J = 6,3 Hz, CH₃-13, lb) ; 1,32 (d, J = 6,3 Hz, CH3-13, la) ; 1,38 (d, J = 6,5 Hz, CH₃-5' , Ia+Ib); 1,47 (ddd, J = 2,6, 4,5, 12,5 Hz, CH₃-3' , Ia+Ib); 1,78 (m, H-2'ax, Ia+Ib; H-8ax, la); 1,87 (dd, J = 4,1, 15,0 ·· ·*·· • · • *

Hz, H-8ax, Ib) ; 2,07 (dd, J = 4,0, 13,4 Hz, H-2'eq, Ia) ;

2,10 (dd, J = 4,0, 13,4 Hz, H-2'eq, Ib) ; 2,12 (d, J = 7,8 Hz, OH-13, Ia) ; 2,35 (ddd, J = 1,7, 2,6, 15,0 Hz, H-8eq, Ib) ; 2,40 (d, J = 3,8 Hz, OH-13, Ib) ; 2,54 (ddd, J = 1,7, 2,6, 15,0 Hz, H-8eq, Ia) ; 2,61 (d, J = 19,1 Hz, H-lOax,

Ia); 2,65 (d, J = 19,1 Hz, H-lOax, Ib); 3,20 (dd, J = 1,9, 19,1 Hz, H-lOeq, Ia+Ib); 3,21 (s, SO₂CH₃) ; 3,67 (m, CH-13, Ia) ; 3,82 (m, CH-13, Ib) ; 4,11 (m, H-5', Ia+Ib); 4,22 (s, OH-9, Ia); 4,36 (s, OH-9, Ib); 4,74 (m, H-4', Ia+Ib); 5,27 (dd, J = 2,6, 4,4 Hz, H-7, Ia); 5,29 (dd, J = 2,6, 4,4 Hz, H-7, Ib); 5,55 (d, J = 3,8 Hz, H-l', Ia+Ib); 7,84 (m, H2+H-3, Ia+Ib); 8,36 (m, H-l+H-4, Ia+Ib); 13,38 (s, OH-11,

Ia) ; 13,39 (s, OH-11, Ib) ; 13,59 (s, OH-6, Ia) ; 13,60 (s, OH-6, Ib).

FAB-MS (+) m/z: 604 [MH]⁺

Claims

1. Anthracyklinový glykosid vzorce I ve kterém vlnovka znamená, že hydroxy skupina v poloze 13 může být v poloze a nebo β, nebo jejich směsi.

2. Sloučenina podle nároku 1, kterou je

4-demethoxy-13(S/R)-dihydro-3'-deamino-3'-aziridinyl-4'methansulfonyl-daunorubicin,

4-demethoxy-13(S)-dihydro-3'-deamino-3'-aziridinyl-4'methansulfonyl-daunorubicin nebo

4-demethoxy-13(R)-dihydro-3'-deamino-3'-aziridinyl-4'methansulfonyl-daunorubicin.

3. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 4-demethoxy-13(S)dihydro-3'-deamino-3'-aziridinyl-4'-methansulfonyldaunorubicin .

• · ··· · «· ·· *· · · ·· · · · · · · · · · ··· ♦ · ····· • · · · · · ······ ··· · · · · · · · . · · · · · · · · · *· * ·

4. Způsob přípravy anthracyklinového glykosidu vzorce (I) podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnuje redukci anthracyklinu vzorce II v přítomnosti redukčního činidla ve směsi organických rozpouštědel a, je-li to požadováno a nutné, separaci výsledné směsi 13(R) a 13(S) sloučenin na jednotlivé diastereoisomery.

5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že redukční činidlo je borohydrid sodný.

6. Způsob podle nároků 4 nebo 5, vyznačující se tím, že redukce se provádí při teplotě nižší než 50 °C.

7. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, že redukce se provádí při teplotě - 70 °C.

8. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje anthracyklinový glykosid vzorce I podle nároku 1 a ·· *··· farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo.

9. Sloučenina podle nároků 1 nebo 2 pro použití ve způsobu léčení lidského nebo zvířecího těla terapií.

10. Sloučenina podle nároku 9 pro použití jako protinádorové činidlo.