CZ304470B6 - Protilátky proti humánnímu IL-1beta, způsob jejich přípravy a jejich použití - Google Patents

Protilátky proti humánnímu IL-1beta, způsob jejich přípravy a jejich použití Download PDF

Info

Publication number
CZ304470B6
CZ304470B6 CZ2003-505A CZ2003505A CZ304470B6 CZ 304470 B6 CZ304470 B6 CZ 304470B6 CZ 2003505 A CZ2003505 A CZ 2003505A CZ 304470 B6 CZ304470 B6 CZ 304470B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
amino acid
human
binding
ser
antibody
Prior art date
Application number
CZ2003-505A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2003505A3 (cs
Inventor
Hermann Gram
Padova Franco E. Di
Original Assignee
Novartis Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=9898090&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ304470(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Novartis Ag filed Critical Novartis Ag
Publication of CZ2003505A3 publication Critical patent/CZ2003505A3/cs
Publication of CZ304470B6 publication Critical patent/CZ304470B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C07K16/245—IL-1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)

Abstract

Předmětem řešení je IL-1.beta. vazebná molekula, zejména protilátka proti humánnímu IL-1.beta., zejména humánní protilátka proti humánnímu IL-1.beta., kde úseky CDR variabilních domén těžkého a lehkého řetězce mají specifické aminokyselinové sekvence. Tato molekula je užitečná pro použití při léčení nemocí a poruch zprostředkovaných IL-1, jako je např. osteoartritida, osteoporóza a další zánětlivé artritidy.

Description

Protilátky proti humánnímu IL-Ιβ, způsob jejich přípravy a jejich použití
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká protilátek proti humánnímu interleukinu I beta (IL-Ιβ) a použití takových protilátek při léčení IL-1 zprostředkovaných nemocí a chorobných stavů.
Dosavadní stav techniky
Interleukin 1 (IL-1) je tkáňový hormon, tvořený buňkami imunitního systému, který působí jako mediátor akutní fáze zánětlivé reakce. Nepatřičná nebo přílišná produkce IL-1, konkrétně IL-Ιβ, je spojena s patologií různých nemocí a chorobných stavů, jako například septikémie, septický nebo endotoxický šok, alergie, astma, ztráta kostní hmoty, ischémie, mrtvice, revmatoidní artritida a další zánětlivé chorobné stavy. Protilátky proti IL-Ιβ již byly navrhovány pro použití k léčení IL-1 zprostředkovaných nemocí a chorobných stavů, viz například WO 95/01997, konkrétně diskuse v úvodu uvedené přihlášky.
Původci předkládaného vynálezu však připravili zlepšené protilátky proti humánnímu IL-Ιβ vhodné pro použití při léčení IL-1 zprostředkovaných nemocí a chorobných stavů.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález tedy poskytuje IL-Ιβ vazebnou molekulu, která obsahuje variabilní domény jak těžkého řetězce Vh tak i lehkého řetězce VL, přičemž vazebná molekula IL-Ιβ obsahuje alespoň jedno antigenní vazebné místo obsahující:
a) variabilní doménu VH těžkého řetězce imunoglobulinu, která obsahuje sled hypervariabilních úseků CDR1, CDR2 a CDR3, kde CDR1 má aminokyselinovou sekvenci Val-TyrGly-Met-Asn, CDR2 má aminokyselinovou sekvenci Ile-Ile-Trp-Tyr-Asp-Gly-Asp-AsnGln-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly, a CDR3 má aminokyselinovou sekvenci AspLeu-Arg-Thr-Gly-Pro, a
b) variabilní doménu VL lehkého řetězce imunoglobulinu, která obsahuje sled hypervariabilních úseků CDR1', CDR2' a CDR3', kde CDR1' má aminokyselinovou sekvenci Arg— Ala-Ser-Gln-Ser-Ile-Gly-Ser-Ser-Leu-His, CDR2' má aminokyselinovou sekvenci AlaSer-Gln-Ser-Phe-Ser, a CDR3' má aminokyselinovou sekvenci His-Gln-Ser-Ser-SerLeu-Pro a její přímé ekvivalenty, ve kterých hypervariabilní oblasti CDR1, CDR2, CDR3, CDR1', CDR2' a CDR3' vzaty jako celek, jsou alespoň z 95 % homologní s hypervariabilními úseky uvedenými v a) a b) a vykazují vazebnou specifícitu pro antigenní epitop humánního IL-Ιβ, který obsahuje kličku obsahující zbytek Glu64 zralého humánního IL-Ιβ proteinu, a jsou schopné inhibovat vazbu IL-Ιβ k jeho receptoru a mají KD pro vazbu k IL-Ιβ nižší než 50 pM.
Není-li uvedeno jinak, kterýkoliv polypeptidový řetězec je v tomto textu popisován tak, že má aminokyselinovou sekvenci začínající N-koncovým úsekem a končící C-koncovým úsekem (ve směru čtení zleva doprava). Když antigenní vazebné místo obsahuje obě VH a VL domény, tyto domény mohou být lokalizovány na stejné polypeptidové molekule nebo, výhodně, každá doména může být na různém řetězci, přičemž Vh doména je částí imunoglobulinového těžkého řetězec nebo jeho fragmentu a VL je částí imunoglobulinového lehkého řetězce nebo jeho fragmentu.
-1 CZ 304470 B6
Termín „IL-Ιβ vazebná molekula“ označuje jakoukoliv molekulu schopnou vázat se kIL-Ιβ antigenů buďto samotnému nebo ve spojení s jinými molekulami. Vazebná reakce může být prokázána standardními metodami (kvalitativní testy) včetně například biologických testů pro stanovení inhibice vazby IL—1 β kjeho receptorů, nebo kterýkoli z mnoha známých vazebných testů, který se vztahuje k negativnímu kontrolnímu testu, ve kterém se použije protilátka nepříbuzné specificity, ale stejného izotypu, např. protilátka anti-CD25. Výhodně se vazba IL-Ιβ vazebné molekuly podle vynálezu k IL-Ιβ může prokázat v kompetitivním vazebném testu.
Příklady molekul vázajících antigen jsou protilátky tvořené B-lymfocyty nebo hybridomy, chimérické CDR-roubované protilátky nebo humánní protilátky, nebo jakékoliv jejich fragmenty, např. fragmenty F(ab')2 a Fab, a také jednořetězcové protilátky nebo jednodoménové protilátky.
Jednořetězcová protilátka sestává z variabilních domén těžkého a lehkého řetězce protilátky kovalentně spojených pomocí peptidové spojky, kterou tvoří obvykle 10 až 30 aminokyselin, výhodně 15 až 25 aminokyselin. Tudíž taková struktura neobsahuje konstantní úseky těžkého a lehkého řetězce a věří se, že malý spojovací peptidový úsek by měl být méně antigenní než celý konstantní úsek protilátky. Termín „chimérická protilátka“ v popisu označuje protilátku, ve které konstantní úseky těžkého nebo lehkého řetězce nebo obou jsou humánního původu, zatímco variabilní domény jak těžkého tak lehkého řetězce jsou jiného než humánního původu (nonhumánní), např. myšího, nebojsou humánního původu, ale pocházejí z odlišné humánní protilátky. Termín „CDR-roubovaná protilátka“ označuje protilátku, ve které hypervariabilní úseky (CDR) pocházejí z donorové (dárcovské) protilátky, jako je například non-humánní (např. myší) protilátka nebo odlišná humánní protilátka, zatímco všechny nebo v podstatě všechny další části imunoglobulinu, např. konstantní úseky a vysoce konzervativní úseky variabilní domény, tj. úseky definující základní strukturu, tzv. rámec protilátky, pocházejí z akceptorové (příjemcovské) protilátky, např. protilátky humánního původu. CDR-roubovaná protilátka může však obsahovat několik aminokyselin donorové sekvence v úseku rámce, například v úsecích rámce sousedících s hypervariabilními úseky. Termín „humánní protilátka“ označuje protilátku, ve které konstantní a variabilní úseky těžkého a lehkého řetězce jsou všechny humánního původu, nebo mají sekvence v podstatě identické se sekvencemi humánního původu, nikoliv nutně ze stejné protilátky, a patří sem i protilátky produkované v myších, ve kterých byly geny pro variabilní a konstantní části imunoglobulinu nahrazeny jejich humánními protějšky, např. jak bylo popsáno obecně v patentových dokumentech EP 0546073 Bl, US 5545806, US 5569825, US 5625126, US 5633425, US 5661016, US 5770429, EP 0438474B1 aEP 04663151 Bl.
Zvláště výhodné IL-Ιβ vazebné molekuly podle vynálezu jsou humánní protilátky, obzvláště protilátka ACZ 885, která je dále popsána v příkladech.
Takže ve výhodných chimérických protilátkách jsou variabilní domény jak těžkého tak i lehkého řetězce humánního původu, například takové, jaké jsou v protilátce ACZ 885, a které jsou v seznamu sekvencí uvedeny jako SEKVENCE ID. Č. 1 a SEKVENCE ID. Č. 2. Domény konstantního úseku výhodně také obsahují vhodné humánní domény konstantního úseku, například jak byly popsány v publikaci „Sequences of Proteins of Immunological Interest“, Kabat E. A. et al., US Department of Health and Human Services, Public Health Service, National Institute of Health.
Hypervariabilní úseky mohou být asociovány sjakýmikoliv úseky rámce protilátky, avšak výhodně humánního původu. Vhodné úseky rámce protilátek byly popsány v Kabat E. A. et al. (cit. výše). Výhodný rámec těžkého řetězce je humánní rámec těžkého řetězce, například protilátky ACZ 885, uvedený v seznamu sekvencí jako SEKVENCE ID. C. 1. Tato sekvence sestává z úseků FR1, FR2, FR3 a FR4. Podobně SEKVENCE ID. Č. 2 ukazuje výhodný rámec lehkého řetězce protilátky ACZ885, jehož sekvence sestává z úseků FRT, FR2', FR3' a FR4'.
-2CZ 304470 B6
Tudíž vynález také poskytuje IL—1 β vazebnou molekulu, která obsahuje alespoň jedno antigenní vazebné místo obsahující buďto první doménu mající aminokyselinovou sekvenci v podstatě identickou se sekvencí uvedenou v seznamu sekvencí jako SEKVENCE ID. Č. 1 počínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 118, nebo první doménu popsanou výše a druhou doménu mající aminokyselinovou sekvenci v podstatě identickou se sekvencí uvedenou v seznamu sekvencí jako SEKVENCE ID. Č. 2, počínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 107.
Monoklonální protilátky namířené proti proteinům přirozeně se vyskytujícím u všech lidí jsou typicky produkovány v non-humánních systémech, např. v myši. Přímým důsledkem těchto skutečností je to, že xenogenní protilátka produkovaná pomocí hybridomu, když je podávána člověku, vyvolává nežádoucí imunitní reakci, která je především zprostředkovaná konstantní částí xenogenního imunoglobulinu. To jasně omezuje použití takových protilátek, jelikož nemohou být podávány po delší období. Tudíž je zvláště výhodné použití jednořetězcových, jednodoménových, chimérických, CDR-roubovaných nebo zejména humánních protilátek, které po podání člověku s velkou pravděpodobností nevyvolají významnou allogení reakci.
S ohledem na skutečnosti výše uvedené, výhodnější IL—1 β vazebná molekula podle předkládaného vynálezu je molekula vybraná ze skupiny humánních protilátek anti-IL-1 β podle nároku 1.
Alternativně IL-Ιβ vazebná molekula podle vynálezu je molekula vybraná ze skupiny jednořetězcových vazebných molekul, která obsahuje vazebné místo pro antigen obsahující
a) první doménu obsahující sled hypervariabilních úseků CDR1, CDR2 a CDR3, přičemž tyto hypervariabilní úseky mají aminokyselinové sekvence uvedené v SEKVENCI ID. Č. 1,
b) druhou doménu obsahující hypervariabilní úseky CDR1', CDR2' a CDR3', přičemž tyto hypervariabilní úseky mají aminokyselinové sekvence uvedené v SEKVENCI ID. Č. 2, a
c) peptidový linker, který je navázán buďto k N-konci první domény a k C-konci druhé domény, nebo k C-konci první domény k N-konci druhé domény, a její přímé ekvivalenty.
Jak je odborníkovi dobře známo, malé změny v aminokyselinové sekvenci, jako je například delece (odstranění), adice (přidání) nebo substituce (nahrazení) jedné, několika málo nebo dokonce i několika více aminokyselin, mohou poskytnout alelickou formu původního proteinu, která má v podstatě identické vlastnosti.
Tudíž termín ,její přímý ekvivalent“ označuje v předkládaném popisu vynálezu IL-Ιβ vazebnou molekulu, která má alespoň dvě domény na vazebné místo, (molekulu X) podle nároku 1.
Inhibice vazby IL-Ιβ kjeho receptorů může být snadno testována pomocí různých testů, jako jsou např. testy popsané dále v textu. Výrazem „ve stejném rozsahu“ nebo „ve stejné míře“ se rozumí v kontextu předkládaného popisu, že referenční a s ní ekvivalentní molekula vykazují, statisticky vzato, v podstatě identickou křivku (tj. funkční závislost) inhibice IL-Ιβ vazby podle jednoho z testů zmíněných výše. Tak například IL-Ιβ vazebná molekula podle vynálezu má typicky IC50 pro inhibici vazby IL-Ιβ k receptorů v rozmezí +/-x5 hodnoty, výhodně shodnou hodnotu s IC50 odpovídající referenční molekule, když je testována stejně, jak bylo popsáno výše.
Použitý test může být např. test kompetitivní inhibice vazby IL-Ιβ rozpustným receptorem IL—1 a IL-Ιβ vazebnými molekulami podle vynálezu.
Nejvýhodněji humánní IL-Ιβ protilátka obsahuje alespoň
-3CZ 304470 B6
a) jeden těžký řetězec, který obsahuje variabilní doménu, která má aminokyselinovou sekvenci v podstatě identickou se SEKVENCÍ ID. Č. 1 počínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 118, a konstantní úsek humánního těžkého řetězce, a
b) jeden lehký řetězec, který obsahuje variabilní doménu, která má aminokyselinovou sekvenci v podstatě identickou se SEKVENCÍ ID. Č. 2 počínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 107, a konstantní úsek humánního těžkého řetězce.
Konstantní úsek humánního těžkého řetězce může být typu γ,, γ2, γ3 a γ4, μ, α,, α2, δ nebo ε, přičemž výhodně je typu γ, a výhodněji typu γι, zatímco konstantní úsek humánního lehkého řetězce může být typu κ nebo λ (který zahrnuje subtypy λ3, λ2 a λ3), avšak výhodně je typu k. Aminokyselinové sekvence všech těchto konstantních úseků jsou uvedeny v publikaci Kabat et al. (citováno výše).
Všechny IL-Ιβ vazebné molekuly podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny metodami rekombinantní DNA. Pro tento účel je třeba zkonstruovat jednu nebo více DNA molekul kódujících vazebnou molekulu a tuto DNA molekulu umístit pod kontrolu vhodné kontrolní sekvence a přenést do vhodného hostitelského organismu, kde je pak exprimována.
V obecném smyslu tedy předkládaný vynález poskytuje DNA molekuly kódující jednodoménovou IL-1 β vazebnou molekulu podle vynálezu, jednořetězcovou IL-Ιβ vazebnou molekulu podle vynálezu, těžké nebo lehké řetězce nebo jejich fragmenty IL-Ιβ vazebné molekuly podle vynálezu, a použití DNA molekuly podle vynálezu k produkci IL-Ιβ vazebné molekuly podle vynálezu pomocí rekombinantní technologie.
Dosavadní stav techniky je takový, že odborník je schopen snadno syntetizovat DNA molekuly podle předkládaného vynálezu na základě informací uvedených v tomto popisu, tj. aminokyselinových sekvencí hypervariabilních úseků a DNA sekvencí, které je kódují. Způsob konstrukce genu pro variabilní doménu byl například popsán v dokumentu EPA 239 400 a může být stručně shrnut následovně: Klonuje se gen kódující variabilní doménu MAb (monoklonální protilátky) s libovolnou specificitou. DNA segmenty kódující rámec protilátky a hypervariabilní úseky se určí a DNA segmenty kódující hypervariabilní úseky se odstraní, takže DNA segmenty kódující rámcové úseky jsou vzájemně spojeny pomocí vhodných restrikčních míst v místě spojení. Restrikční místa mohou být vytvořena ve vhodných polohách mutagenezí DNA molekul pomocí standardních postupů odborníkovi známých. Dvoj řetězcové syntetické CDR kazety jsou připraveny pomocí DNA syntézy podle sekvence uvedené jako SEKVENCE ID. Č. 1 nebo SEKVENCE ID. C. 2. Tyto kazety jsou opatřeny „lepivými“ konci, takže mohou být spojeny (ligovány) s vhodnými konci rámce.
A navíc, aby bylo možné získat DNA konstrukt kódující IL—1β vazebnou molekulu podle vynálezu, není potřeba, aby byla dostupná mRNA z produkující hybridomové buněčné linie. Tak např. PCT přihláška publikovaná jako WO 90/07861 poskytuje úplné instrukce pro produkci protilátky pomocí techniky rekombinantní DNA, přičemž výchozí informací je pouze nukleotidová sekvence genu. Popsaný způsob zahrnuje syntézu řady oligonukleotidů, jejich amplifikací pomocí PCR (polymerázové řetězové reakce) a nakonec jejich sestřih a spojení („splicing“), čímž vznikne požadovaná DNA sekvence.
Expresní vektory obsahující vhodný promotor nebo geny kódující konstantní úseky těžkého a lehkého řetězce jsou odborné veřejnosti běžně k dispozici. Takže jakmile je jednou DNA molekula podle vynálezu připravena, může být snadno přenesena ve vhodném expresním vektoru. DNA molekuly kódující jednořetězcové protilátky mohou také být připraveny pomocí standardního postupu, například jak byl popsán v mezinárodní patentové přihlášce WO 88/1649.
Vzhledem k výše uvedenému není nutné ukládat ani hybridomy ani buněčné linie, aby byl splněn požadavek dostatečnosti a úplnosti popisu vynálezu.
-4CZ 304470 B6
V konkrétním provedení předkládaný vynález poskytuje první a druhý DNA konstrukt pro produkci IL-Ιβ vazebné molekuly, jak jsou popsány dále:
První DNA konstrukt kóduje těžký řetězec nebo jeho fragment a obsahuje
a) první část, která kóduje variabilní doménu obsahující střídavě rámec a hypervariabilní úseky, přičemž hypervariabilní úseky jsou sled úseků CDR1, CDR2 a CDR3 s aminokyselinovou sekvencí uvedenou v seznamu sekvencí jako SEKVENCE ID. Č. 1, a tato první část začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu variabilní domény a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu variabilní domény, a
b) druhou část kódující konstantní úsek těžkého řetězce nebo jeho fragment, který začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu konstantní části těžkého řetězce a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu konstantní části nebo jejího fragmentu, po kterém následuje stop kodon.
Výhodně první část kóduje variabilní doménu, která má aminokyselinovou sekvenci v podstatě identickou s aminokyselinovou sekvencí uvedenou v seznamu sekvencí jako SEKVENCE ID. Č.
začínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 118. Výhodněji první část má nukleotidovou sekvenci jako SEKVENCE ID. Č. 1 začínající nukleotidem v poloze 1 a končící nukleotidem v poloze 354. A také výhodně druhá část kóduje konstantní část humánního těžkého řetězce, výhodněji konstantní část humánního řetězce yl. Tato druhá část může být DNA fragment genomového původu, (tj. obsahující introny) nebo fragment cDNA (tj. bez intronů).
Druhý DNA konstrukt kóduje lehký řetězec nebo jeho fragment a obsahuje
a) první část, která kóduje variabilní doménu obsahující střídavě úseky rámce a hypervariabilní úseky, přičemž hypervariabilní úseky jsou CDR3' a volitelně CDR1' a CDR2', jejichž aminokyselinové sekvence jsou v seznamu sekvencí uvedeny jako SEKVENCE ID. Č. 2, přičemž tato první část začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu variabilní domény a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu variabilní domény, a
b) druhou část kódující konstantní část lehkého řetězce nebo její fragment, který začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu konstantní části lehkého řetězce a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu konstantní části nebo jejího fragmentu, po kterém následuje stop kodon.
Výhodně tato první část kóduje variabilní doménu mající aminokyselinovou sekvenci v podstatě identickou s aminokyselinovou sekvencí uvedenou v seznamu sekvencí jako SEKVENCE ID. Č.
začínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 107. Výhodněji, první část má nukleotidovou sekvenci uvedenou jako SEKVENCE ID. Č. 2 začínající nukleotidem v poloze 1 a končící nukleotidem v poloze 321. Výhodně také druhá část kóduje konstantní část humánního lehkého řetězce, výhodněji konstantní část humánního řetězce k.
V prvním a druhém DNA konstruktu může být první a druhá část oddělena intronem, a v intronu mezi první a druhou částí může být výhodně lokalizován enhancer (zesilovací element). Přítomnost takového enhanceru, který je transkribován ale není translatován, může napomoci účinnosti transkripce. Ve zvláštním provedení první a druhý DNA konstrukt obsahují enhancer genu těžkého řetězce, výhodně humánního původu.
Každý z DNA konstruktů je umístěn pod kontrolu vhodných kontrolních sekvencí, zejména pod kontrolu vhodného promotoru. Může být použit jakýkoliv typ promotoru, za předpokladu, že je adaptován pro hostitelský organismus, ve kterém budou DNA konstrukty exprimovány. Avšak pokud má k expresi dojít v savčích buňkách, zvláště výhodné je použití promotoru imunoglobulinového genu.
-5CZ 304470 B6
Požadovaná protilátka může být produkována v buněčné kultuře nebo v transgenním zvířeti. Vhodné transgenní zvíře může být připraveno standardním způsobem, který je odborníkům dobře znám, a který zahrnuje například mikroinjekce prvního a druhého DNA konstruktu s vhodnými kontrolními sekvencemi do vajíčka a pak přenesení takto připraveného vajíčka do vhodné pseudopregnantní samice a nakonec selekci potomstva exprimujícího požadovanou protilátku.
Když jsou řetězce protilátky produkovány v buněčné kultuře, DNA konstrukty musí být nejdříve vloženy buďto do jednoho expresního vektoru nebo do dvou oddělených, ale přitom kompatibilních expresních vektorů, přičemž tato druhá možnost je považována za výhodnější.
Takže předkládaný vynález také poskytuje expresní vektor, který je výhodně schopný replikace v prokaryotické nebo eukaryotické buněčné linii, a který obsahuje
1) první konstrukt DNA kódující těžký řetězec nebo jeho fragment, který obsahuje
a) první část, která kóduje variabilní doménu obsahující střídavě úseky rámce a hypervariabilní úseky, kde hypervariabilní úseky jsou sled CDR1, CDR2 a CDR3, jejichž aminokyselinové sekvence jsou uvedeny v sekvenci id. č.l, přičemž tato první část začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu variabilní domény a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu variabilní domény, a
b) druhou část kódující konstantní úsek těžkého řetězce nebo jeho fragment, která začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu konstantní části těžkého řetězce a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu konstantní části nebo jejího fragmentu, po kterém následuje stop kodon a
2) druhý konstrukt DNA kódující lehký řetězec nebo jeho fragment, který obsahuje
a) první část, který kóduje variabilní doménu obsahující střídavě úseky rámce a hypervariabilní úseky, kde hypervariabilní úseky jsou CDRT, CDR2' a CDR3', jejichž aminokyselinové sekvence jsou uvedeny v sekvenci id. č. 2, přičemž tato první část začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu variabilní domény a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu variabilní domény, a
b) druhou část kódující konstantní úsek lehkého řetězce nebo jeho fragment, která začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu konstantní části lehkého řetězce a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu konstantní části nebo jejího fragmentu, po kterém následuje stop kodon.
Každý z expresních vektorů obsahujících DNA konstrukt je pak přenesen do vhodného hostitelského organizmu. Když jsou DNA konstrukty odděleně vloženy do dvou expresních vektorů, mohou být přeneseny odděleně, tj. jeden typ vektoru do jedné buňky, nebo mohou být přeneseny společně (ko-transfer), což je považováno za výhodnější možnost. Vhodným hostitelským organismem jsou baktérie, kvasinky nebo savčí buněčné linie, přičemž výhodná je tato třetí možnost. Výhodněji, savčí buněčná linie je linie lymfoidního původu, např. myelom, hybridom nebo normální imortalizované B-lymfocyty, které neexprimují endogenně žádné těžké ani lehké řetězce protilátky.
Pro expresi v savčích buňkách je výhodné, když sekvence kódující IL-Ιβ vazebnou molekulu je integrována do DNA hostitelské buňky do lokusu, který umožňuje nebo podporuje vysoký stupeň exprese IL—1 β vazebných molekul. Buňky, ve kterých je sekvence kódující IL—1 β vazebnou molekulu integrována do takového výhodného lokusu, mohou být identifikovány a selektovány na základě hladiny IL—1 β vazebných molekul, kterou exprimují. Jakýkoliv vhodný selekční markér může být použit pro přípravu hostitelských buněk obsahujících kódující sekvenci pro IL—1 β vazebnou molekulu, např. gen dhfř/metotrexat nebo ekvivalentní selekční systém. Výhodné systémy pro expresi IL-Ιβ vazebné molekuly podle vynálezu jsou např. systémy založené na GSamplifikaci/selekci, popsané v dokumentech EP 0256055 B, EP 0323997 B a evropské patentové přihlášce 89303964.4.
-6CZ 304470 B6
Další aspekt předkládaného vynálezu poskytuje způsob produkce IL-Ιβ vazebné molekuly, kterýžto způsob zahrnuje kroky (i) kultivace organizmu, který je transformován expresním vektorem definovaným výše, a (ii) izolace IL-Ιβ vazebné molekuly z kultury.
V souladu s předkládaným vynálezem bylo zjištěno, že protilátka ACZ 885 má vazebnou specificitu pro antigenní epitop humánního IL-Ιβ, který zahrnuje kličku obsahující zbytek Glu64 zralého humánního IL-Ιβ proteinu (tento zbytek Glu64 ve zralém humánním IL-Ιβ odpovídá zbytku 180 prekurzoru humánního IL-Ιβ). Tento epitop je lokalizován vně rozpoznávacího místa receptoru IL-1 a je proto nanejvýš překvapující, že protilátky proti tomuto epitopu, tj. např. protilátka ACZ885, jsou schopné inhibovat vazbu IL-Ιβ k receptoru. Protilátky, zejména chimérické protilátky a CDR-roubované protilátky, a zejména humánní protilátky, které mají vazebnou specificitu pro antigenní epitop zralého humánního IL-Ιβ, který obsahuje kličku obsahující zbytek Glu64, a které jsou schopné inhibovat vazbu IL-Ιβ na jeho receptor, a také použití těchto protilátek při léčení nemocí a poruch zprostředkovaných IL-1, jsou proto nové a jsou též zahrnuty v předkládaném vynálezu.
Takže dalším aspektem předkládaného vynálezu je protilátka proti IL-Ιβ, která má antigenní vazebnou specificitu pro antigenní epitop humánního IL-Ιβ, který obsahuje kličku obsahující zbytek Glu64 zralého humánního IL-Ιβ, a která je schopná inhibovat vazbu IL-Ιβ na jeho receptor.
Ještě další aspekty předkládaného vynálezu se týkají:
i) Použití protilátky proti IL-Ιβ, která má antigenní vazebnou specificitu pro antigenní epitop zralého humánního IL-Ιβ, který zahrnuje kličku obsahující zbytek Glu64, a která je schopná inhibice vazby IL-Ιβ kjeho receptoru, při léčení IL-1 zprostředkovaných nemocí nebo poruch.
ii) Larmaceutického přípravku, který obsahuje protilátku proti IL-Ιβ, která má antigenní vazebnou specificitu pro antigenní epitop zralého humánního IL-Ιβ, který zahrnuje kličku obsahující zbytek Glu64, a která je schopná inhibice vazby IL-Ιβ kjeho receptoru, v kombinaci s farmaceuticky přijatelným excipientem, ředidlem nebo nosičem, a iii) Použití protilátky proti IL-Ιβ, která má antigenní vazebnou specificitu pro antigenní epitop zralého humánního IL-Ιβ, který zahrnuje kličku obsahující zbytek Glu64, a která je schopná inhibice vazby IL—1β kjeho receptoru, pro výrobu látku klečení IL—1 zprostředkovaných nemocí a poruch.
V kontextu předkládaného popisu výraz, že protilátka je „schopná inhibovat vazbu IL-Ιβ“ znamená, že protilátka je schopná inhibovat vazbu IL-Ιβ kjeho receptoru v podstatě ve stejném rozsahu jako protilátka ACZ 855, přičemž výraz „ve stejném rozsahu“ již byl definován výše.
Protilátka ACZ 855 má vazebnou afinitu pro IL-Ιβ vyšší, než jaká byla dříve popsána pro protilátky anti-IL-Ιβ, např. humánní protilátky anti-IL-Ιβ. Protilátka ACZ 885 má rovnovážnou disociační konstantu KD pro vazbu IL-Ιβ nižší než 50 pM, např. přibližně 35 pM. Díky této vysoké vazebné afinitě je protilátka ACZ mimořádně vhodná pro terapeutické využití.
Takže další aspekt předkládaného vynálezu poskytuje protilátku proti IL-Ιβ, která má rovnovážnou disociační konstantu KD pro vazbu IL-Ιβ nižší než 50 pM. Tento aspekt vynálezu se týká také použití, způsobů a přípravků založených na této protilátce s vysokou afinitou, jak je popsáno výše pro protilátky proti IL-1 β s vazebnou specifickou pro antigenní determinantu zralého humánního IL-Ιβ, která zahrnuje kličku obsahující Glu64.
-7CZ 304470 B6
V kontextu předkládaného popisu výraz „IL-1 zprostředkovaná nemoc“ zahrnuje všechna onemocnění a zdravotní stavy, ve kterých hraje nějakou roli IL-1, ať již přímo nebo nepřímo při nemoci nebo stavu, včetně příčiny nemoci, rozvoji a progrese nemoci, persistenci nebo patologii nemoci nebo stavu.
V kontextu předkládaného popisu se termíny „léčení“ nebo „léčit“ týkají jak preventivní čili profylaktické péče tak i léčebné čili kurativní péče nebo péče vedoucí k modifikaci onemocnění, včetně péče o pacienty, kteří jsou v riziku získání nemoci nebo mají podezření, že nemoc získali, a také pacienty, kteří nemocí již trpí nebo byly diagnostikovány jako trpící nemocí, a dále se týkají i potlačení klinického relapsu.
Protilátky podle vynálezu jsou definovány v nárocích.
Výhodné protilátky podle vynálezu jsou humánní protilátky, nejvýhodněji je to protilátka ACZ 885 a její přímé ekvivalenty.
Protilátky podle vynálezu blokují účinky IL-Ιβ na jeho cílové buňky a jsou tedy určeny pro použití při léčení IL-1 zprostředkovaných nemocí a poruch. Tyto a další farmakologické účinky protilátek podle vynálezu mohou být prokázány užitím standardních testovacích metod, např. testu popsaného dále:
Neutralizace IL-Ιβ dependentní tvorby PGE2 a interleukinu-6 v primárních humánních fibroblastech.
Tvorba PGE2 a IL-6 v primárních humánních dermálních fibroblastech je závislá na IL-Ιβ. Samotný TFN-α nemůže sám účinně indukovat mediátory zánětu, ale působí synergicky sIL-1. Primární dermální fibroblasty se užívají jako náhradní model pro IL-1-indukovanou buněčnou aktivaci.
Primární humánní fibroblasty se stimulují rekombinantním IL-Ιβ nebo kondicionovaným médiem získaným z LPS-stimulovaných humánních PBMC v přítomnosti různých koncentrací protilátky podle vynálezu nebo IL-1RA v rozsahu 6 až 18000 pM. Chimérická protilátka anti-CD25 Simulect® (basiliximab) se užívá jako kontrola se shodným izotypem. Supematant se odebírá po 16 hodinách stimulace a testuje se na přítomnost IL-6 ELISA testem nebo na přítomnost PGE2 RIA testem. Protilátky podle vynálezu mají při testování v těchto testech typicky hodnotu IC50 pro inhibici produkce IL-6 přibližně 1 nM nebo nižší (např. 0,1 až 1 nM).
Jak bylo ukázáno ve výše popsaném testu, protilátky podle vynálezu silně blokují účinek IL-Ιβ. Tudíž jsou protilátky podle vynálezu farmaceuticky využitelné, a sice následujícími způsoby:
Protilátky podle vynálezu jsou užitečné k profylaxi a léčení IL-1 zprostředkovaných nemocí a stavů, jako je např. zánět, alergie a alergický stav, hypersensitivní reakce, autoimunitní choroby, silné infekce a rejekce orgánového nebo tkáňového transplantátu.
Tak například protilátky podle vynálezu mohou být užity při léčení příjemců transplantátů srdce, plic, bloku srdce-plíce, ledvin, slinivky, kůže nebo rohovky, a také při prevenci reakce příjemce proti transplantátu dárce, např. po transplantaci kostní dřeně, a arteriosklerózy spojené s orgánovým transplantátem.
Protilátky podle vynálezu jsou konkrétně použitelné např. při léčení, prevenci nebo zmírnění autoimunitních onemocnění a zánětlivých onemocnění, zejména zánětlivých stavů s etiologií zahrnující autoimunitní složku, jako je například artritida (např. revmatoidní artritida, chronická progredující artritida a deformující artritida), a revmatických onemocnění, včetně zánětlivých stavů a revmatických onemocnění zahrnujících ztrátu kostní hmoty, bolestivé záněty, a hypersen-8CZ 304470 B6 zitivity (včetně hypersenzitivity dýchacích cest i kožní hypersenzitivity) a alergií. Ke specifickým autoimunitním chorobám, pro které mohou být protilátky podle vynálezu použity, patří autoimunitní hematologické poruchy (včetně např. hemolytické anemie, aplastické anemie, anemie červených krvinek a idiopatické trombocytopenie), systémový lupus erythematosus, polychondritida, skleroderma, Wegenerova granulomatóza, dermatomyositida, chronická aktivní hepatitida, myasthenia gravis, psoriáza, Steven-Johnsonův syndrom, idiopatická porucha vstřebávání v tenkém střevu (sprue), autoimunitní zánětlivé onemocnění střev (včetně např. ulcerativní kolitidy, Crohnovy nemoci a syndromu dráždivého tračníku), endokrinní oftalmopatie, Gravesova nemoc, sarkoidóza, roztroušená skleróza mozkomíšní, primární biliámí cirhóza, juvenilní diabetes (diabetes mellitus typu I), uveitida (anterior a posterior), keratoconjunctivitis sicca a vernální keratokonjunktivitida, fibróza plicního interstitia, psoriatická artritida a glomerulonefritida (jak bez tak i s nefrotickým syndromem, např. včetně idiopatického nefrotického syndromu nebo nefropatie s minimálními změnami).
Protilátky podle vynálezu jsou také užitečné při léčení, prevenci nebo zmírnění nemocí jako je astma, bronchitida, pneumokonióza, emfyzém plic, a další obstruktivní nebo zánětlivá onemocnění dýchacích cest.
Protilátky podle vynálezu jsou použitelné také při léčení nežádoucí akutní a hyperakutní zánětlivé reakce, kteráje zprostředkovaná IL—1 nebo zahrnuje tvorbu IL-1, zejména pak IL—1 β, nebo podporuje uvolňování TNF pomocí IL-1, jako je např. akutní infekce, např. septický šok (např. endotoxický šok a respirační distresový syndrom dospělých), meningitida pneumonie, těžké popáleniny, a dále při léčení kachexie nebo úbyťového syndromu spojeného s patologickým uvolňováním TNF v důsledku infekcí, karcinomu nebo orgánových dysfunkcí, obzvláště s AIDS související kachexie, např. asociované nebo následující po infekci HTV.
Protilátky podle vynálezu jsou dále užitečné zejména při léčení onemocnění metabolismu kostí, jako je např. osteoartritida, osteoporóza a další zánětlivé artritidy a ztráty kostní hmoty obecně, včetně ztráty kostní hmoty související se stárnutím, a při specifických onemocněních periodontu.
Pro výše uvedené indikace je vhodná dávka, samozřejmě, různá, v závislosti například na konkrétní použité protilátce podle vynálezu, příjemci, způsobu podávání, a povaze a závažnosti onemocnění, které se má léčit. Avšak při profylaktickém použití lze obecně uspokojivých výsledků dosáhnout s denními dávkami přibližně 0,05 mg až přibližně 10 mg na 1 kilogram tělesné hmotnosti, obvykle 0,1 mg až 5 mg na 1 kilogram tělesné hmotnosti. Při profylaktickém léčení se typicky podává lék jedenkrát týdně až jedenkrát za 3 měsíce, obvykle jedenkrát za 2 týdny až jedenkrát za 10 týdnů, např. jedenkrát za 4 až 8 týdnů. Protilátka podle vynálezu se obvykle podává parenterálně, intravenózně, např. do antekubitální nebo jiné periferní žíly, intramuskulámě, nebo subkutánně. Proíýlaktické podávání typicky spočívá v podávání protilátky podle vynálezu jedenkrát za měsíc až jedenkrát za 2 až 3 měsíce, nebo dokonce ještě s menší frekvencí.
Farmaceutické přípravky podle předkládaného vynálezu jsou vyráběny obvyklými způsoby, které jsou odborníkům dobře známy. Přípravek podle vynálezu je výhodně poskytnut v lyofilizované formě. Pro podání se rozpustí ve vhodném vodném nosiči, jako je například sterilní voda pro injekce nebo sterilní pufrovaný fyziologický roztok. Pokud je vhodné připravit větší objem takového roztoku pro podávání infúzí namísto bolusové injekce, je výhodné během formulace přípravku do fyziologického roztoku přidat humánní sérový albumin nebo přímo pacientovu vlastní heparinizovanou krev. Přítomnost nadbytku fyziologicky inertního proteinu zabraňuje ztrátě protilátky v důsledku adsorpce na stěnách kontejneru a hadiček, které se užívají pro infuzní roztok. Pokud se užije albumin, pak vhodná koncentrace je 0,5 až 4,5 % (hmotn.) vzhledem k hmotnosti fyziologickému roztoku.
Předkládaný vynález je dále popsán a vysvětlen pomocí příkladů, jejichž funkce je ilustrativní, a doplněn výkresem, který ukazuje křivku závislosti reakce na dávce pro inhibici vazby IL-Ιβ rozpustnými receptory IL-1 typu I a II.
-9CZ 304470 B6
Popis obrázků
Obrázek 1 je graf ukazující kompetitivní inhibici vazby ACZ885 k IL—1 β rozpustnými receptory IL-1 typu I a typu II.
Příklady provedení vynálezu
Pro přípravu protilátek proti humánnímu IL-Ιβ byly použity transgenní myši exprimující humánní IgG/κ repertoár místo vlastního imunoglobulinového repertoáru (Fishwild et al., 1996, Nátuře Biotechnol., 14, 845-851). B lymfocyty z těchto myší byly imortalizovány užitím standardní hybridomové technologie a byly tak získány myší hybridomové buňky, které secemují humánní IgGl/κ protilátku označenou ACZ 885.
Příklad 1
Příprava hybridomu a purifikace protilátky
Geneticky modifikovaná myš 18077 (Medarex lne. Annadale, NJ) byla imunizována rekombinantním humánním IL—1 β navázaným na KLH (50 pg) v adjuvans subkutánně (s.c.) v několika místech. Imunitní reakce myši byla dále zesílena pěti dalšími injekcemi, poslední injekce tři dni před fúzí. V den fúze byla myš 18077 utracena inhalací CO2 a pak byly buňky ze sleziny (4,1 x 107) fúzovány rutinním způsobem užitím PEG4000 se stejným počtem buněk PAI-0 myší myelomové buněčné linie. Fúzované buňky byly přeneseny do 624 jamek (1 ml/jamka) obsahujících podpůrnou vrstvu myších peritoneálních buněk (Balb C myši), v médiu RPMI 1640 doplněném HAT, 10% tepelně inaktivovaným fetálním telecím sérem a 5 x 10 5M β-merkaptoethanolem. Supematanty byly odebírány a testovány pomocí ELISA testu a byl prováděn screening na IL-Ιβ reaktivní monoklonální protilátky. Pět monoklonálních protilátek podtřídy IgG/κ bylo identifikováno. Klonování bylo provedeno pomocí 4 x 96jamkové mikrotitrační destičky, do každé jamky bylo přeneseno 0,5 buněk. Po dvou týdnech byly jamky kontrolovány inverzním mikroskopem. Supematanty byly odebrány z jamek s pozitivním růstem a produkce monoklonální protilátky anti-IL-Ιβ byla vyhodnocována pomocí ELISA. Byly připraveny 1 až 2 litry kondicionovaného supematantu ze čtyř subklonů původně identifikovaného hybridomu #657 a protilátky byly purifikovány pomocí afinitní chromatografie na koloně s proteinem A.
Čistota a částečná aminokyselinová sekvence těžkého a lehkého řetězce
Aminokyselinové sekvencování
Lehké a těžké řetězce purifikované protilátky ACZ 885 byly odděleny pomocí SDS-PAGE a amino-koncové aminokyseliny byly stanoveny pomocí Edmanovy degradace. Čistota protilátky použité v této studii pomocí sekvenování byla > 90%. cDNA sekvence kódující variabilní domény těžkého a lehkého řetězce byly získány pomocí PCR amplifikace z cDNA připravené z mRNA z klonovaných hybridomových buněk a byly plně sekvencovány. Aminokoncové sekvence variabilních domén těžkého a lehkého řetězce a odpovídající DNA sekvence jsou dále uvedeny jako SEKVENCE ID. Č. 1 a SEKVENCE ID. Č. 2, kde úseky CDRjsou vyznačeny tučně.
Variabilní úsek těžkého řetězce ACZ885 (SEKV. ID. Č. 1)
-10CZ 304470 B6
ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGGTTTTCCTCGTTGCTCTTTTAAGAGGTGTCCAGTGTCAG -19 MEFGLSWVFLVALLRGVQCQ -1
GTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCC VQLVESGGGVVQPGRSLRLS -21
TGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGTTTATGGCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCA CAASGFTFSVYGMNWVRQAP -41
GGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATTTGGTATGATGGAGATAATCAATACTATGCA GKGLEWVAIIWYDGDNQYYA -61
GACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTG DSVKGRFTISRDNSKNTLYIi -81
CAAATGAACGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTATTGTGC GAGAGA TCTTAGG QMNGLRAEDTAVYYCARDLR -101
ACTGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTC
TGPFDYWGQGTLVT, VSS -118
Variabilní úsek lehkého řetězce ACZ885 (SEKV. ID. Č. 2)
ATGTTGCCATCACAACTCATTGGGTTTCTGCTGCTCTGGGTTCCAGCCTCCAGGGGTGAA -19 MLPSQLIGFLLLWVPASRGE -1
ATTGTGCTGACTCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAGAAAGTCACCATC IVLTQSPDFQSVTPKEKVTI -21
ACCTGCCGGGCCAGTCAGAGCATTGGTAGTAGCTTACACTGGTACCAGCAGAAACCAGAT TCRASQSIGSSLHWYQQKPD -41
CAGTCTCCAAAGCTCCTCATCAAGTATGCTTCCCAGTCCTTCTCAGGGGTCCCCTCGAGG QSPKLLIKYASQSFSGVPSR -61
TTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAC-ATTTCACCCTCACCATCAATAGCCTGGAAGCTGAA
FSGSGSGTDFTLTINSLEAE -81
GATGCTGCAGCGTATTACTGTCATCAGAGTAGTAGTTTACCATTCACTTTCGGCCCTGGG DAAAYYCHQSSSLPFTFGPG -101
ACCAAAGTGGATATCAAA - 107 5 T K V D I K
Kurzívou je vyznačena vedoucí („leader“) sekvence (není u zralé protilátky) a tučně úseky CDR. Konstrukce expresních vektorů pro těžký a lehký řetězec
Byl použit amplifikační/selekční systém založený na GS, jaký byl například popsán v dokumentech EP 0256055 B, EP 0323997 B nebo evropské patentové přihlášce 89303964.4, kde byla jako selekční markér použita GS kódující sekvence.
Příklad 2
Biochemická a biologická data
Bylo zjištěno, že monoklonální protilátka ACZ885 neutralizuje in vitro aktivitu interleukinu-ΐβ. Monoklonální protilátka byla dále charakterizována prostřednictvím vazby protilátky k rekombinantnímu humánnímu ILl-β analyzované systémem BIAcore. Neutralizace byla hodnocena
-11 CZ 304470 B6 kompetitivní vazebnou studií s rozpustnými IL—1 receptory. Biologická aktivita protilátky ACZ 885 vůči rekombinantně připravenému a přirozeně tvořenému IL-Ιβ byla stanovena na primárních humánních buňkách (viz příklad 3), reagujících na stimulaci IL—1 β.
Stanovení rovnovážné disociační konstanty
Konstanty rychlosti asociace a disociace vazby rekombinantního humánního IL-Ιβ a ACZ 885 byly stanoveny analýzou BIAcore. ACZ 885 byla imobilizována a vazba rekombinantního IL—1 β v rozmezí koncentrací 1 až 4nM byla měřena pomocí povrchově plazmonové rezonance. Vybraný formát analýzy umožnil zacházet s vazebnou událostí IL-Ιβ k NQ/L 885 podle 1:1 stechiometrie. Analýza dat byla provedena pomocí softwaru „BIAevaluation“.
kon [105/ms] kOff [10'5/s] KD [pM]
Humánní IL-Ιβ 11,0 ± 0,23 3,3 ± 0,27 30,5 ± 2,6 N = 22
Závěr: ACZ 885 se váže k rekombinantnímu humánnímu IL— 1 β s vysokou afinitou.
Studie kompetitivní inhibice vazby s rozpustnými IL—1 receptory typu I a II
Studium kompetice vazby pomocí rozpustných receptorů IL—1 typu I a II
Kompetice mezi ACZ885 a rozpustným humánním receptorem IL—1 typu I a typu II byla měřena pomocí systému BIAcore. ACZ885 byla imobilizována na povrchu čipu a rekombinantní humánní IL-Ιβ (lnM) byl injikován, aby se navázal na ACZ885 za absence nebo přítomnosti zvyšující se koncentrace rekombinantního humánního rozpustného receptorů I nebo receptorů II (0 až 12nM, vždy 4 nezávislé cykly). Získané výsledky jsou ukázány na obrázku 1. Vazba NVP-ACZ885 na humánní IL-Ιβ byla stanovena v přítomnosti rekombinantního rozpustného receptorů IL1 typu I nebo typu II. Hodnoty polovičního maxima účinku (IC50) byly stanoveny pomocí programu Origin 6.0, uvedena je průměrná hodnota ± střední chyba průměru (SEM).
Závěr: Vazba ACZ885 na IL-Ιβ je kompetitivní jak s receptorem IL-Ιβ typu I tak s receptorem typu II.
Profil reaktivity s humánním IL-Ία, humánním IL-1RA a IL-Ιβ z jiných biologických druhů
Profily reaktivity ACZ885 s humánním IL-Ία, IL-1RA a IL—1 β z makaka „cynomolgus“, králíka, myši a laboratorního potkana, byly analyzovány opět pomocí zařízení Biacore. ACZ885 byla imobilizována a zkoumané cytokiny byly užity v koncentraci 8nM (6 nezávislých cyklů).
- 12CZ 304470 B6
Tabulka 3: Zkřížená reaktivita NVP-ACZ885 s IL-Ιβ, IL-Ια a IL-1RA
% vazby (průměr ± stř. chyba)
Rek. humánní IL-Ιβ (n=6) 100
Rek. IL-Ιβ cynomolg. makaka (n=ll) 7,8 ± 1,0
Rek. králičí IL-Ιβ (n=6) -0,5 ± 0,2
Rek. myší IL-Ιβ (n=6) -2,6 ± 0,6
Rek. IL-Ιβ lab. potkana (n=6) -6,2 ± 1,0
Rek. humánní IL-Ια (n=6) 8,4 ± 2,4
Rek. humánní IL-IRa (n=6) -3,7 ± 1,7
Jednotky rezonance byly odečítány v čase 1000 s po zahájení injikování, hodnota pro injikování samotného pufru byla odečtena ze všech sensogramů a základní linie po imobilizaci anti-Fcy byla nastavena na nulu. Vazba je vyjádřena jako procenta akumulované rezonanční jednotky pro humánní IL-Ιβ.
Závěr: Protilátka ACZ 885 zkříženě významně nereaguje s humánním IL-Ιβ, humánním IL-IRa, nebo IL-Ιβ z myši, laboratorního potkana nebo králíka. Reaktivita vůči IL-Ιβ zmakaka je v podstatě shodná s humánním cytokinem.
Příklad 3
Neutralizace uvolňování interleukinu-6 v humánních dermálních fibroblastech působením ACZ885
Pro vyhodnocení biologické aktivity ACZ885 v neutralizaci působení humánního IL-Ιβ byl použit následující postup:
1. Příprava kondicionovaného média obsahujícího IL-1 β
Příprava kondicionovaného média z humánních mononukleámích buněk periferní krve byla provedena následovně: mononukleámí buňky periferní krve byly připraveny oddělením buněk od periferní krve opic s použitím hustotního gradientu fícoll-hypaque podle způsobu, který publikoval Hansel [Hansel, T. T. et. al. (1991). Improved immunomagnetic proceduře for the isolation of highly purified human blood eosinophils. J. Imm. Methods. 145: 105-110], a pak byly použity v koncentraci 105 buněk/jamka v RPMI/10% FCS. ΠΤΜβ (100 U/ml) a LPS (5 pg/ml) byly přidány a buňky byly následně inkubovány po dobu 6 hodin. Inkubace byla ukončena centrifugací při 1200 RPM po dobu 10 minut. IL-Ιβ přítomný v supematantu byl kvantifikován užitím ELISA testu.
- 13 CZ 304470 B6
2. Neutralizační test
Humánní dermální fibroblasty z předkožky byly získány od firmy Clonetics (CC-2509) a byly pěstovány v médiu FBM (Clonetics, CC-3131) obsahujícím bFGF (1 ng/ml, CC-4065), inzulín (5 pg/ml, CCA021) a 2% FCS (CCA101).
Pro indukci IL-6 byly buňky nasazeny v hustotě 104 buněk/jamka na 48jamkové tkáňové misky. Následující den buňky byly ponechány hladovět po dobu 6-7 h v FBM obsahujícím 2% FCS před tím, než byl přidán cytokin. Pro stimulaci bylo kultivační médium nahrazeno FBM + 2% FCS obsahujícím vhodné množství kondicionovaného média s přibližně 50pg/ml IL-Ιβ. Alternativně byl použit rekombinantní humánní IL-Ιβ v konečné koncentraci 50 pg/ml.
Neutralizující anti—IL1 β protilátka byla titrována do naředěného kondicionovaného média před přidáním k buňkám. Rekombinantní IL-IRa (R&D Systems, # 280-RA-010) byla použita jako pozitivní kontrola.
Buněčný supematant byl odebrán 16 až 17 h po stimulaci a množství uvolněného IL-6 bylo stanoveno sendvičovým testem ELISA.
3. IL-6 ELISA
Mikrotitrační destičky pro ELISA byly potaženy myší anti-humánní IL-6 monoklonální protilátkou (Mab) 314-14 (Novartis Pharma, šarže EN23,961, 5,5 mg/ml, 100 μΐ, 3 pg/ml) v PBS s 0,02% NaN3 a inkubovaly se přes noc v +4 °C, následující den byly mikrotitrační destičky promyty 4krát PBS/0,05% Tween/0,02% NaN3 a blokovány užitím 300 μΐ PBS/3% bovinni sérový albumin (BSA)/0,02% NaN3 po dobu 3 hodin. Destičky byly pak promyty znovu (4krát) a 100 μΐ supematantu (konečné ředění 1:20) nebo standardu rekombinantního humánního IL-6 ((Novartis Pharma, #91902), titrační křivka v rozmezí od 1 do 0,0156 ng/ml v krocích s dvojnásobným ředěním) bylo přidáno ve dvojím opakování. Po inkubaci přes noc při teplotě místnosti (RT) byly destičky promyty (4krát) a různé koncentrace myši anti-humánní IL-6 MAb (110-14, Novartis Pharma, 6,3 mg/ml, 100 μΐ, 1 pg/ml, 3 h při teplotě místnosti) byly přidány. Po dalších 4 promytích bylo přidáno biotinem značené kozí anti-myší IgG2b antisérum (Southern Biotechnology, #1090-08) v konečném ředění z 1/10000 (100 μΐ/jamka, 3 h při teplotě místnosti). Po inkubaci byly destičky promyty 4krát a streptavidin kondenzovaný s alkalickou fosfatázou (Jackson ImmunoResearch, #016-050-084) byl přidán v konečném ředění 1/3000 (100 μΐ/jamka, 30 minut při teplotě místnosti). Po promytí (4krát) byl přidán na dobu 30 minut substrát (p-nitrofenylfosfát v diethanolaminovém pufru, 100 μΐ). Reakce byla zastavena přidáním 5M NaOH v množství 50 μΐ/jamka. Destičky byly odečítány v mikrotitračním čtecím přístroji (Bio-Rad) s použitím filtru pro 405 a 490 nm.
Hladiny IL-6 v supematantech z kultur byly vypočítány užitím standardní kalibrační křivky získané proložením kvadratické funkce. Statistické vyhodnocení a stanovení IC50 bylo provedeno pomocí proložení sigmoidní křivky.
Výsledky:
Tabulka: Inhibice IL-Ιβ indukované sekrece IL-6
Hodnoty IC50 pro inhibici ΙΙ^Ιβ-indukované sekrece IL-6 humánních kožních fibroblastů. Fibroblasty byly stimulovány rekombinantním humánním IL-Ιβ nebo kondicionovaným médiem obsahujícím 50 až 100 pg/ml IL-Ιβ.
- 14CZ 304470 B6
NVP-ACZ885, šarže 1 IC50 [pM] + SEM NVP-ACZ88, šarže 2 IC50 [pM] + SEM IL-1RA IC50 [pM] + SEM
sekrece IL-6 54+6,1 44,6 +3,6 30 + 3,1
kond. médium
(9,1+1,0 ng/ml) (7,4+0,6 ng/ml) (0,51+0,05 ng/ml)
(n=6) (n=6) (n=5)
sekrece IL-6 42 + 3,4 63 + 2,8
rek. humánní
IL-Ιβ (7,1+0,56 ng/ml) (n=4) (10,5+0,5) (n=6) Neměřeno
Příklad 4
Definice epitopu pro ACZ885
ACZ885 se váže k humánnímu IL-Ιβ s vysokou afinitou, ale selhává v rozpoznání vysoce homologních IL-Ιβ pocházejících zmakaka „rhesus“. Jeden z nejvýraznějších rozdílů vaminoío kyselinové sekvenci mezi IL-Ιβ makaka „rhesus“ a humánním IL-Ιβ je poloha 64 zralého ILΙβ. Humánní IL-Ιβ má v této poloze glutamovou kyselinu, zatímco makak „rhesus“ alanin. Mutantní humánní IL-Ιβ s příslušnou záměnou Glu64Ala ztrácí schopnost vázat se kACZ885 s měřitelnou afinitou. Původci vynálezu na základě toho došli k závěru, že Glu64 v humánním IL-Ιβ je nezbytný pro rozpoznávání protilátkou ACZ885. Glu64 je lokalizovaný v kličce IL-Ιβ, která není částí vazebného povrchu pro receptor IL-Ιβ typu I, ani není v jeho bezprostřední blízkosti. Proto protilátky namířené proti vazebnému epitopu obsahujícímu Glu64 mají schopnost neutralizovat biologickou aktivitu humánního IL-Ιβ.
Seznam sekvencí
SEKVENCE ID. Č. 1
DNA a aminokyselinová sekvence variabilního úseku těžkého řetězce protilátky ACZ885
ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGGTTTTCCTCGTTGCTCTTTTAAGAGGTGTCCAGTGTCAG -19 MEFGLSWVFLVALLRGVQCQ -1
GTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCC VQLVESGGGVVQPGRSLRLS -21
TGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGTTTATGGCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCA CAASGFTFSVYGMNWVRQAP -41
GGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATTTGGTATGATGGAGATAATCAATACTATGCA GKGLEWVAIIWYDGDNQYYA -61
GACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTG DSVKGRFTISRDNSKNTLYL -81
CAAATGAACGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTATTGTGCGAGAGATCTTAGG QMNGLRAEDTAVYYCARDLR -101
ACTGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTC
TGPFDYWGQGTLVTVSS -118
- 15CZ 304470 B6
SEKVENCE ID. Č. 2
DNA a aminokyselinová sekvence variabilního úseku lehkého řetězce protilátky ACZ885
ATGTTGCCATCACAACTCATTGGGTTTCTGCTGCTCTGGGTTCCAGCCTCCAGGGGTGAA -19 Af L P S Q L X G F L L L W V P A S P G Ε -1
ATTGTGCTGACTCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAGAAAGTCACCATC IVLTQSPDFQSVTPKEKVTI -21
ACCTGCCGGGCCAGTCAGAGCATTGGTAGTAGCTTACACTGGTACCAGCAGAAACCAGAT TCRASQSIGSSIiHWYQQKPD -41
CAGTCTCCAAAGCTCCTCATCAAGTATGCTTCCCAGTCCTTCTCAGGGGTCCCCTCGAGG QSPKLLIKYASQSFSGVPSR -61
TTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACCCTCACCATCAATAGCCTGGAAGCTGAA FSGSGSGTDFTLTINSLEAE -81
GATGCTGCAGCGTATTACTGTCATCAGAGTAGTAGTTTACCATTCACTTTCGGCCCTGGG DAAAYYCRQSSSLPFTFGPG - 101
ACCAAAGTGGATATCAAA - 107

Claims (2)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Vazebná molekula IL-Ιβ, která obsahuje variabilní domény jak těžkého řetězce Vh tak i lehkého řetězce VL, přičemž vazebná molekula IL-Ιβ obsahuje alespoň jedno antigenní vazebné místo obsahující:
    a) variabilní doménu VH těžkého řetězce imunoglobulinu, která obsahuje sled hypervariabilních úseků CDR1, CDR2 a CDR3, kde CDR1 má aminokyselinovou sekvenci Val-TyrGly-Met-Asn, CDR2 má aminokyselinovou sekvenci Ile-Ile-Trp-Tyr-Asp-Gly-Asp-AsnGln-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly, a CDR3 má aminokyselinovou sekvenci AspLeu-Arg-Thr-Gly-Pro, a
    b) variabilní doménu VL lehkého řetězce imunoglobulinu, která obsahuje sled hypervariabilních úseků CDR1', CDR2' a CDR3', kde CDR1' má aminokyselinovou sekvenci Arg-AlaSer-Gln-Ser-Ile-Gly-Ser-Ser-Leu-His, CDR2' má aminokyselinovou sekvenci Ala-SerGln-Ser-Phe-Ser, a CDR3' má aminokyselinovou sekvenci His-Gln-Ser-Ser-Ser-Leu-Pro a její přímé ekvivalenty, ve kterých hypervariabilní oblasti CDR1, CDR2, CDR3, CDR1', CDR2' a CDR3' vzaty jako celek, jsou alespoň z 95 % homologní s hypervariabilními úseky uvedenými v a) a b) a vykazují vazebnou specificitu pro antigenní epitop humánního IL-Ιβ, který obsahuje kličku obsahující zbytek Glu64 zralého humánního IL-Ιβ proteinu, ajsou schopné inhibovat vazbu IL-Ιβ k jeho receptoru a mají KD pro vazbu k IL-Ιβ nižší než 50 pM.
    2. Vazebná molekula IL-Ιβ podle nároku 1, jež je humánní protilátkou.
    3. Vazebná molekula IL-Ιβ podle nároku 1, která obsahuje alespoň jedno antigenní vazebné místo obsahující první doménu mající aminokyselinovou sekvenci identickou se sekvencí uvedenou v seznamu sekvencí jako sekvence id. č. 1, začínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 118 a druhou doménu mající aminokyselinovou sekvenci identickou se
    - 16CZ 304470 B6 sekvencí uvedenou v seznamu sekvencí jako sekvence id. č. 2, začínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 107.
    4. Expresní vektor zahrnující buď jeden expresní vektor, nebo sadu dvou kompatibilních expresních vektorů, jež obsahují
    1) první konstrukt DNA kódující těžký řetězec nebo jeho fragment, který obsahuje
    a) první část, která kóduje variabilní doménu obsahující střídavě úseky rámce a hypervariabilní úseky, kde hypervariabilní úseky jsou sled CDR1, CDR2 a CDR3, jejichž aminokyselinové sekvence jsou uvedeny v sekvenci id č. 1, přičemž tato první část začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu variabilní domény a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu variabilní domény, a
    b) druhou část kódující konstantní úsek těžkého řetězce nebo jeho fragment, která začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu konstantní části těžkého řetězce a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu konstantní části nebo jejího fragmentu, po kterém následuje stop kodon a
  2. 2) druhý konstrukt DNA kódující lehký řetězec nebo jeho fragment, který obsahuje
    a) první část, která kóduje variabilní doménu obsahující střídavě úseky rámce a hypervariabilní úseky, kde hypervariabilní úseky jsou CDR1', CDR2' a CDR3', jejichž aminokyselinové sekvence jsou uvedeny v sekvenci id. č. 2, přičemž tato první část začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu variabilní domény a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu variabilní domény, a
    b) druhou část kódující konstantní úsek lehkého řetězce nebo jeho fragment, která začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu konstantní části lehkého řetězce a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu konstantní části nebo jejího fragmentu, po kterém následuje stop kodon.
    5. Expresní vektor podle nároku 4, jenž je schopen replikace v prokaryotické nebo eukaryotické buněčné linii.
    6. Způsob přípravy vazebné molekuly IL-1 β podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnuje kroky (i) kultivace organismu, jenž je transformován expresním vektorem podle nároku 5 a (ii) izolaci vazebné molekuly IL—1β z buněčné kultury.
    7. Použití protilátky proti IL-Ιβ podle nároku 2 pro přípravu léčiva pro léčení nemocí nebo poruch zprostředkovaných IL-Ιβ.
    8. Larmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje protilátku proti IL1 β podle nároku 2 v kombinaci s farmaceuticky přijatelným excipientem, ředidlem nebo nosičem.
CZ2003-505A 2000-08-22 2001-08-20 Protilátky proti humánnímu IL-1beta, způsob jejich přípravy a jejich použití CZ304470B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB0020685.4A GB0020685D0 (en) 2000-08-22 2000-08-22 Organic compounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2003505A3 CZ2003505A3 (cs) 2003-05-14
CZ304470B6 true CZ304470B6 (cs) 2014-05-21

Family

ID=9898090

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2003-505A CZ304470B6 (cs) 2000-08-22 2001-08-20 Protilátky proti humánnímu IL-1beta, způsob jejich přípravy a jejich použití

Country Status (37)

Country Link
US (3) US7446175B2 (cs)
EP (1) EP1313769B2 (cs)
JP (2) JP4271936B2 (cs)
KR (2) KR100910789B1 (cs)
CN (1) CN100547003C (cs)
AR (1) AR035581A1 (cs)
AT (1) ATE396206T1 (cs)
AU (2) AU9549001A (cs)
BE (1) BE2009C057I2 (cs)
BR (1) BR0113420A (cs)
CA (1) CA2420231C (cs)
CY (2) CY1108779T1 (cs)
CZ (1) CZ304470B6 (cs)
DE (2) DE122009000078I1 (cs)
DK (1) DK1313769T4 (cs)
EC (1) ECSP034490A (cs)
ES (1) ES2305110T5 (cs)
FR (1) FR09C0062I2 (cs)
GB (1) GB0020685D0 (cs)
HK (1) HK1061403A1 (cs)
HU (2) HU228159B1 (cs)
IL (2) IL154465A0 (cs)
LU (1) LU91624I2 (cs)
MX (1) MXPA03001590A (cs)
MY (1) MY130248A (cs)
NL (1) NL300427I1 (cs)
NO (3) NO332609B1 (cs)
NZ (2) NZ524199A (cs)
PE (1) PE20020319A1 (cs)
PL (1) PL212480B1 (cs)
PT (1) PT1313769E (cs)
RU (1) RU2286351C2 (cs)
SI (1) SI1313769T2 (cs)
SK (1) SK288089B6 (cs)
TW (1) TWI321568B (cs)
WO (1) WO2002016436A2 (cs)
ZA (1) ZA200301275B (cs)

Families Citing this family (107)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2426710A1 (en) * 2000-11-08 2002-10-10 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to trail receptors
MXPA05002514A (es) 2002-09-06 2005-05-27 Amgen Inc Anticuerpo monoclonal anti-il-1r1 humano terapeutico.
US7101978B2 (en) * 2003-01-08 2006-09-05 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
WO2004067568A2 (en) * 2003-01-24 2004-08-12 Applied Molecular Evolution, Inc Human il-1 beta antagonists
GB0303337D0 (en) 2003-02-13 2003-03-19 Celltech R&D Ltd Biological products
WO2004100987A2 (en) * 2003-05-06 2004-11-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of using il-1 antagonists to treat neointimal hyperplasia
NZ549040A (en) 2004-02-17 2009-07-31 Schering Corp Use for interleukin-33 (IL33) and the IL-33 receptor complex
ES2523147T3 (es) * 2004-02-26 2014-11-21 Baylor Research Institute Composiciones y métodos para el tratamiento sistémico de la artritis
AU2012213934B9 (en) * 2005-01-26 2013-07-25 Amgen Fremont Inc. Antibodies against interleukin-1 beta
ES2395953T3 (es) 2005-01-26 2013-02-18 Amgen Fremont Inc. Anticuerpos frente a interleucina-1 beta
GB0509512D0 (en) * 2005-05-10 2005-06-15 Novartis Ag Organic compounds
ES2827247T3 (es) * 2005-06-21 2021-05-20 Xoma Us Llc Anticuerpos y fragmentos de los mismos que se unen a IL-1beta
JP2009511545A (ja) * 2005-10-14 2009-03-19 ノボ・ノルデイスク・エー／エス Ｉｌ−１インヒビターを使用する糖尿病の治療
PL2848258T3 (pl) * 2005-10-26 2018-06-29 Novartis Ag Leczenie rodzinnej gorączki śródziemnomorskiej przeciwciałami przeciwko IL-1beta
WO2007120828A1 (en) * 2006-04-14 2007-10-25 Novartis Ag Use of il-i antibodies for treating ophthalmic disorders
EP3124045A3 (en) 2006-12-20 2017-05-03 Xoma (Us) Llc Treatment of il-1 beta related diseases
CL2008001071A1 (es) * 2007-04-17 2009-05-22 Smithkline Beecham Corp Metodo para obtener anticuerpo penta-especifico contra il-8/cxcl8, gro-alfa/cxcl1, gro-beta/cxcl2), gro-gama/cxcl3 y ena-78/cxcl5 humanas; anticuerpo penta-especifico; proceso de produccion del mismo; vector, hbridoma o celela que lo comprende; composicion farmceutica; uso para tratar copd, otras enfermedades.
EP1997832A1 (en) * 2007-05-29 2008-12-03 Ganymed Pharmaceuticals AG Monoclonal antibodies against Claudin-18 for treatment of cancer
EP2152308A1 (en) * 2007-05-29 2010-02-17 Novartis Ag New indications for anti- il-i-beta therapy
SI2391650T1 (sl) 2007-12-20 2015-03-31 Xoma (Us) Llc Postopki za zdravljenje protina
KR20110014607A (ko) 2008-04-29 2011-02-11 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
EP2297208A4 (en) 2008-06-03 2012-07-11 Abbott Lab DUAL VARIABLE DOMAIN IMMUNOGLOBULINS AND ITS USES
NZ589434A (en) 2008-06-03 2012-11-30 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2009149370A1 (en) * 2008-06-06 2009-12-10 Xoma Technology Ltd. Methods for the treatment of rheumatoid arthritis
CA2729949A1 (en) 2008-07-08 2010-01-14 Abbott Laboratories Prostaglandin e2 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2010028273A1 (en) * 2008-09-05 2010-03-11 Xoma Technology Ltd. Methods for improvement of beta cell function
BRPI0919545A2 (pt) * 2008-10-20 2015-12-08 Abbott Lab anticorpos que se ligam a il-18 e métodos de purificar os mesmos
US8298533B2 (en) * 2008-11-07 2012-10-30 Medimmune Limited Antibodies to IL-1R1
EP2196476A1 (en) * 2008-12-10 2010-06-16 Novartis Ag Antibody formulation
US20130122008A1 (en) * 2009-05-06 2013-05-16 Novartis Ag Anti-IL 1- ß Antibody Combination Therapy
US8389474B1 (en) * 2009-07-14 2013-03-05 Alan Anson Wanderer Rationale for IL-1 β targeted therapy to improve harvested organ viability, allograft tolerance, replant success and for conditions characterized by reduced or absent arterial perfusion
BR112012004710A2 (pt) * 2009-09-01 2016-08-16 Abbott Lab imunoglobulinas de domínio variável duplo e uso das mesmas
MX2012004415A (es) * 2009-10-15 2012-05-08 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
DK2493922T3 (en) 2009-10-26 2017-04-24 Hoffmann La Roche Process for preparing a glycosylated immunoglobulin
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
SG185473A1 (en) 2010-05-07 2012-12-28 Xoma Technology Ltd METHODS FOR THE TREATMENT OF IL-1ß RELATED CONDITIONS
AU2011285852B2 (en) 2010-08-03 2014-12-11 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
PE20140229A1 (es) 2010-08-26 2014-03-27 Abbvie Inc Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
EP2697260A1 (en) 2011-04-15 2014-02-19 Merck Patent GmbH Anti- il-1r1 inhibitors for use in cancer
EP2731971A1 (en) 2011-07-12 2014-05-21 Universität Zürich MODULATORS OF THE NLRP3 INFLAMMASOME IL-1ß PATHWAY FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF ACNE
DE102011083595A1 (de) 2011-09-28 2013-03-28 Bayer Pharma AG Inhibition der Wirkung von Interleukin 1 beta zur Behandlung der Endometriose
US9683038B2 (en) 2011-09-30 2017-06-20 Novartis Ag Methods of reducing the risk of experiencing a cardiovascular (CV) event or a cerebrovascular event in a patient that has suffered a qualifying CV event
US20140348848A1 (en) 2011-12-02 2014-11-27 Dhananjay Kaul Anti-il-1beta (interleukin-1beta) antibody-based prophylactic therapy to prevent complications leading to vaso-occlusion in sickle cell disease
WO2013090635A2 (en) * 2011-12-14 2013-06-20 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
EP2791169B1 (en) 2011-12-16 2017-07-19 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Compounds and methods for treating inflammatory diseases
WO2013096516A1 (en) 2011-12-19 2013-06-27 Xoma Technology Ltd. Methods for treating acne
AU2012362326A1 (en) 2011-12-30 2014-07-24 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins against IL-13 and/or IL-17
PT2814843T (pt) * 2012-02-13 2020-06-18 Agency Science Tech & Res Anticorpos monoclonais humanos neutralizantes de il-b
CN103588878A (zh) * 2012-08-15 2014-02-19 江苏泰康生物医药有限公司 一种人源化抗人白细胞介素1 β单克隆抗体及其制备与应用
SG11201503412RA (en) 2012-11-01 2015-05-28 Abbvie Inc Anti-vegf/dll4 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2014068132A1 (en) * 2012-11-05 2014-05-08 Delenex Therapeutics Ag Binding members to il-1 beta
JP2016502526A (ja) 2012-11-16 2016-01-28 ノバルティス アーゲー 末梢動脈疾患を処置するためのＩＬ−１β結合抗体の使用
EP4001307A1 (en) 2012-12-17 2022-05-25 Cell Medica Inc. Antibodies against il-1 beta
EP2935589A1 (en) 2012-12-18 2015-10-28 Novartis AG Compositions and methods that utilize a peptide tag that binds to hyaluronan
JP2016522793A (ja) 2013-03-15 2016-08-04 アッヴィ・インコーポレイテッド ＩＬ−１βおよび／またはＩＬ−１７に対して指向された二重特異的結合タンパク質
WO2015083120A1 (en) 2013-12-04 2015-06-11 Novartis Ag USE OF IL-1β BINDING ANTIBODIES
WO2015198243A2 (en) 2014-06-25 2015-12-30 Novartis Ag Compositions and methods for long acting proteins
WO2015198240A2 (en) 2014-06-25 2015-12-30 Novartis Ag Compositions and methods for long acting proteins
WO2016008851A1 (en) * 2014-07-14 2016-01-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh Anti-il-1b antibodies
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
EP4245376A3 (en) 2014-10-14 2023-12-13 Novartis AG Antibody molecules to pd-l1 and uses thereof
SG11201703428SA (en) 2014-11-10 2017-05-30 Hoffmann La Roche Bispecific antibodies and methods of use in ophthalmology
KR20170082594A (ko) 2014-11-10 2017-07-14 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-ang2 항체 및 사용 방법
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
JP2018516931A (ja) 2015-06-04 2018-06-28 ノバルティス アーゲー 末梢動脈疾患を処置するためのｉｌ−１ベータ結合抗体の使用
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
LT3317301T (lt) 2015-07-29 2021-07-26 Novartis Ag Kombinuotos terapijos, apimančios antikūno molekules prieš lag-3
EP3328418A1 (en) 2015-07-29 2018-06-06 Novartis AG Combination therapies comprising antibody molecules to pd-1
US20180207273A1 (en) 2015-07-29 2018-07-26 Novartis Ag Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3
MX2018007423A (es) 2015-12-17 2018-11-09 Novartis Ag Moleculas de anticuerpo que se unen a pd-1 y usos de las mismas.
WO2017153936A1 (en) 2016-03-10 2017-09-14 Novartis Ag Chemically modified messenger rna's
US20210292404A1 (en) 2016-07-21 2021-09-23 Novartis Ag Use of il-1beta binding antibody canakinumab for treating or allevating symptoms pulmonary sarcoidosis
EP4252629A3 (en) 2016-12-07 2023-12-27 Biora Therapeutics, Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
EP3554343A1 (en) 2016-12-14 2019-10-23 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an il-1 inhibitor
UY37758A (es) 2017-06-12 2019-01-31 Novartis Ag Método de fabricación de anticuerpos biespecíficos, anticuerpos biespecíficos y uso terapéutico de dichos anticuerpos
JP2020524694A (ja) 2017-06-22 2020-08-20 ノバルティス アーゲー がんの処置における使用のためのＩＬ−１β結合性抗体
WO2018235056A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag IL-1BETA BINDING ANTIBODIES FOR USE IN THE TREATMENT OF CANCER
US20200158716A1 (en) * 2017-07-17 2020-05-21 Massachusetts Institute Of Technology Cell atlas of healthy and diseased barrier tissues
EP3710476A1 (en) 2017-08-25 2020-09-23 Novartis AG Use of canakinumab
KR20200052331A (ko) * 2017-09-13 2020-05-14 노파르티스 아게 알코올성 간염의 치료를 위한 il-1b 결합 항체의 용도
MX2020004756A (es) 2017-11-16 2020-08-20 Novartis Ag Terapias de combinacion.
CA3098277A1 (en) 2018-05-09 2019-11-14 Novartis Ag Use of canakinumab
BR112020024351A2 (pt) 2018-06-01 2021-02-23 Novartis Ag moléculas de ligação contra bcma e usos das mesmas
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
GB2575853A (en) * 2018-07-25 2020-01-29 Robert Wotherspoon Hugh IL-1ß binding antibody
CN110818793A (zh) * 2018-08-14 2020-02-21 中山康方生物医药有限公司 抗IL-1β的抗体、其药物组合物及其用途
WO2020039401A1 (en) 2018-08-24 2020-02-27 Novartis Ag Treatment comprising il-1βeta binding antibodies and combinations thereof
EP3878867A4 (en) * 2018-11-07 2022-07-06 Zeda Biopharmaceuticals, Inc. ANTIBODIES THAT BIND TO HUMAN IL-1, METHOD OF PRODUCTION THEREOF AND USE THEREOF
KR20210095165A (ko) 2018-11-19 2021-07-30 프로제너티, 인크. 바이오의약품으로 질환을 치료하기 위한 방법 및 디바이스
KR20210106437A (ko) 2018-12-20 2021-08-30 노파르티스 아게 3-(1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 유도체를 포함하는 투약 요법 및 약학적 조합물
WO2020128613A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1beta binding antibodies
GB201901187D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Autolus Ltd Treatment of neurotoxicity and/or cytokine release syndrome
US20220144807A1 (en) 2019-02-15 2022-05-12 Novartis Ag 3-(1-oxo-5-(piperidin-4-yl)isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
EP3924055B1 (en) 2019-02-15 2024-04-03 Novartis AG Substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
WO2021116789A1 (en) 2019-12-09 2021-06-17 Novartis Ag Anti-interleukin 1 beta antibodies for treatment of sickle cell disease
CN115666704A (zh) 2019-12-13 2023-01-31 比奥拉治疗股份有限公司 用于将治疗剂递送至胃肠道的可摄取装置
WO2021123996A1 (en) 2019-12-20 2021-06-24 Novartis Ag Uses of anti-tgf-beta antibodies and checkpoint inhibitors for the treatment of proliferative diseases
TWI793503B (zh) * 2020-01-20 2023-02-21 美商美國禮來大藥廠 抗IL-1β抗體
WO2021257539A1 (en) * 2020-06-16 2021-12-23 Academia Sinica ANTIBODIES TO INTERLEUKIN-1β AND USES THEREOF
CN115916199A (zh) 2020-06-23 2023-04-04 诺华股份有限公司 包含3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物的给药方案
WO2022023907A1 (en) 2020-07-31 2022-02-03 Novartis Ag Methods of selecting and treating patients at elevated risk of major adverse cardiac events
KR20230104651A (ko) 2020-11-06 2023-07-10 노파르티스 아게 Cd19 결합 분자 및 이의 용도
WO2022167916A1 (en) 2021-02-03 2022-08-11 Novartis Ag Use of il-1b binding antibodies for treating neuroinflammatory disorders
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
AR125874A1 (es) 2021-05-18 2023-08-23 Novartis Ag Terapias de combinación
WO2022249040A1 (en) 2021-05-24 2022-12-01 Novartis Ag Methods for the treatment of osteoarthritis
KR20240023123A (ko) 2021-06-22 2024-02-20 노파르티스 아게 화농성 한선염의 치료에 사용하기 위한 이중특이적 항체

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US534858A (en) * 1895-02-26 Workman s time-recorder
CA1172789A (en) 1980-09-25 1984-08-14 Hideo Kasahara POLYMERIC MATERIAL COMPRISING A POLYAMIDE BONDED TO A COPOLYMER CONTAINING AN IMIDE OF AN .alpha.,.beta. UNSATURATED CARBOXYLIC ACID
US4772685A (en) 1985-10-02 1988-09-20 Merck & Co., Inc. Immunogenic peptides of human interleukin-1 and the corresponding anti-peptide antibodies
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4935343A (en) * 1986-08-08 1990-06-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Monoclonal antibodies for interleukin-1β
DE3785186T2 (de) 1986-09-02 1993-07-15 Enzon Lab Inc Bindungsmolekuele mit einzelpolypeptidkette.
DK590387A (da) * 1986-11-13 1988-05-14 Otsuka Pharma Co Ltd Antistoffer mod interleukin-1
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
GB8809129D0 (en) 1988-04-18 1988-05-18 Celltech Ltd Recombinant dna methods vectors and host cells
DE68925935T2 (de) 1988-10-01 1996-08-14 Otsuka Pharma Co Ltd Antikörper gegen Interleukin-1-beta
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
FR2640146B1 (fr) 1988-12-08 1993-12-24 Commissariat A Energie Atomique Anticorps monoclonaux anti-interleukines 1(alpha) et 1(beta), leur procede de production et applications desdits anticorps a la detection des interleukines 1(alpha) et 1(beta) et en therapeutique
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
CA2018248A1 (en) 1989-06-07 1990-12-07 Clyde W. Shearman Monoclonal antibodies against the human alpha/beta t-cell receptor, their production and use
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
AU633698B2 (en) 1990-01-12 1993-02-04 Amgen Fremont Inc. Generation of xenogeneic antibodies
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
WO1992003918A1 (en) 1990-08-29 1992-03-19 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
JP3714683B2 (ja) 1992-07-30 2005-11-09 生化学工業株式会社 抗リウマチ剤
US5429614A (en) 1993-06-30 1995-07-04 Baxter International Inc. Drug delivery system
WO1995001997A1 (en) * 1993-07-09 1995-01-19 Smithkline Beecham Corporation RECOMBINANT AND HUMANIZED IL-1β ANTIBODIES FOR TREATMENT OF IL-1 MEDIATED INFLAMMATORY DISORDERS IN MAN
US6309636B1 (en) * 1995-09-14 2001-10-30 Cancer Research Institute Of Contra Costa Recombinant peptides derived from the Mc3 anti-BA46 antibody, methods of use thereof, and methods of humanizing antibody peptides
US6051228A (en) 1998-02-19 2000-04-18 Bristol-Myers Squibb Co. Antibodies against human CD40
GB0001448D0 (en) 2000-01-21 2000-03-08 Novartis Ag Organic compounds

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Boraschi D et al. Differential inhibition of IL-1 beta activities and receptor binding by monoclonal antibodies mapping within a discrete region of the protein. Lymphokine Research, 1991, 10(5), 377-384. *
D'Ettorre C et al. Functional epitope mapping of human interleukin-1 beta by surface plasmon resonance. Eur. Cytokine Netw., 1997, 8(2), 161-171. *
Herzbeck H et al. Functional and molecular characterization of a monoclonal antibody against the 165-186 peptide of human IL-1 beta. Scand. J. Immunol., 1989, 30(5), 549-562. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN1484652A (zh) 2004-03-24
NO2017052I1 (no) 2017-10-11
FR09C0062I2 (fr) 2010-12-31
MY130248A (en) 2007-06-29
NL300427I2 (en) 2010-02-01
US7446175B2 (en) 2008-11-04
NO332609B1 (no) 2012-11-19
BE2009C057I2 (cs) 2021-01-28
CY1108779T1 (el) 2012-01-25
MXPA03001590A (es) 2003-06-04
ECSP034490A (es) 2003-03-31
AU9549001A (en) 2002-03-04
NO20030827D0 (no) 2003-02-21
NZ534269A (en) 2006-04-28
HUP0300806A3 (en) 2005-09-28
WO2002016436A3 (en) 2002-06-20
NO20030827L (no) 2003-04-14
US20110256151A1 (en) 2011-10-20
JP2008295456A (ja) 2008-12-11
US8273350B2 (en) 2012-09-25
EP1313769B1 (en) 2008-05-21
KR100910789B1 (ko) 2009-08-04
CN100547003C (zh) 2009-10-07
HK1061403A1 (en) 2004-09-17
BRPI0113420B8 (cs) 2021-05-25
LU91624I9 (cs) 2018-11-19
TWI321568B (en) 2010-03-11
JP2004506448A (ja) 2004-03-04
NO2012018I1 (no) 2012-12-10
US7993878B2 (en) 2011-08-09
HUP0300806A2 (hu) 2003-12-29
US20040063913A1 (en) 2004-04-01
PE20020319A1 (es) 2002-06-11
DK1313769T4 (da) 2011-12-05
CA2420231A1 (en) 2002-02-28
DK1313769T3 (da) 2008-09-15
GB0020685D0 (en) 2000-10-11
SI1313769T1 (sl) 2008-10-31
LU91624I2 (fr) 2010-01-25
ES2305110T5 (es) 2012-03-13
SK288089B6 (sk) 2013-06-03
NO2017052I2 (no) 2018-05-14
IL154465A (en) 2010-11-30
PL212480B1 (pl) 2012-10-31
ES2305110T3 (es) 2008-11-01
SK2132003A3 (en) 2003-10-07
KR20080056316A (ko) 2008-06-20
BR0113420A (pt) 2003-07-29
HU228159B1 (en) 2013-01-28
RU2286351C2 (ru) 2006-10-27
PL360358A1 (en) 2004-09-06
ATE396206T1 (de) 2008-06-15
FR09C0062I1 (cs) 2010-08-01
AR035581A1 (es) 2004-06-16
SI1313769T2 (sl) 2012-01-31
CZ2003505A3 (cs) 2003-05-14
PT1313769E (pt) 2008-08-26
HUS1300015I1 (hu) 2021-05-28
AU2001295490B2 (en) 2005-06-16
WO2002016436A2 (en) 2002-02-28
CY2009019I1 (el) 2012-01-25
NL300427I1 (en) 2010-02-01
KR20030034140A (ko) 2003-05-01
DE60134148D1 (de) 2008-07-03
IL154465A0 (en) 2003-09-17
JP4271936B2 (ja) 2009-06-03
DE122009000078I1 (de) 2010-03-25
NZ524199A (en) 2004-09-24
BRPI0113420B1 (pt) 2002-02-28
NO2012018I2 (no) 2012-11-21
US20090081732A1 (en) 2009-03-26
EP1313769A2 (en) 2003-05-28
EP1313769B2 (en) 2011-11-09
ZA200301275B (en) 2004-04-02
CA2420231C (en) 2011-04-26
CY2009019I2 (el) 2017-07-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ304470B6 (cs) Protilátky proti humánnímu IL-1beta, způsob jejich přípravy a jejich použití
KR100697126B1 (ko) 인간 ＩＬ-1β에 대한 항체
AU2001295490A1 (en) Antibodies to human IL-1beta