CZ299648B6

CZ299648B6 - Sloucenina, použití cinidla stimulujícího produkci rustového hormonu, zpusob této stimulace a farmaceutický prostredek

Info

Publication number: CZ299648B6
Application number: CZ20004565A
Authority: CZ
Inventors: Peschke@Bernd; Lutz Richter@Stefan; Kruse Hansen@Thomas; Ankersen@Michael
Original assignee: Novo Nordisk A/S
Priority date: 1998-06-30
Filing date: 1999-06-29
Publication date: 2008-10-01
Also published as: AU4603899A; CN1304424C; WO2000001726A1; BRPI9911756B1; ATE500269T1; CA2334315A1; DK1100824T3; NO331351B1; CN1307588A; NO20006699D0; TW593337B; JP2002519436A; CA2334315C; RU2298547C2; CY1111509T1; BR9911756A; CZ20004565A3; PL345204A1; EP1100824A1; IL140044A0

Abstract

Slouceniny obecného vzorce I, ve kterém substituenty mají specifický význam, farmaceutické prostredky obsahující uvedené slouceniny a jejich použití pri lécbe poruch, které vznikají nedostatkem rustového hormonu.

Description

Sloučenina, použití činidla stimulujícího produkci růstového hormonu, způsob této stimulace a farmaceutický prostředek (57) Anotace:

Sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém substituenty mají specifický význam, farmaceutické prostředky obsahující uvedené sloučeniny a jejich použití při léčbě poruch, které vznikají nedostatkem růstového hormonu.

(I)

Sloučenina, použití činidla stimulujícího produkci růstového hormonu, způsob této stimulace a farmaceutický prostředek

Oblast techniky

Popisují se nové sloučeniny, prostředky, které obsahují uvedené sloučeniny a jejich použití při léčbě poruch, které jsou výsledkem nedostatku růstového hormonu.

Dosavadní stav techniky

Růstový hormon je hormon, který stimuluje růst tkání schopných růstu. Navíc je známo, že růstový hormon vykazuje řadu účinků na metabolické procesy, například na stimulaci syntézy pro15 teinu a mobilizaci volných mastných kyselin a způsobuje v energetickém metabolismu převod metabolizmu sacharidů na metabolizmus mastných kyselin. Nedostatek růstového hormonu může vést k řadě těžkých zdravotních poruch, jako je například nanizmus,

Růstový hormon se uvolňuje z hypofyzy. Uvolnění růstového hormonu řídí řada hormonů a ner20 vových mediátorů a to buď přímo nebo nepřímo. Uvolnění růstového hormonu se může stimulovat hormonem uvolňujícím růstový hormon (GHRH) a inhibovat somatostatinem. V obou případech se hormony uvolňují z hypotalamusu, ale jejich působení se zprostředkovává primárně pro-, střednictvím specifických receptorů lokalizovaných v hypofýze. Popisují se také jiné sloučeniny, které stimulují uvolnění růstového hormonu z hypofyzy. Například arginín, L-3,4“dihydroxy25 fenylalanin (L-Doga), glukagon, vasopressin, PACAP (peptid aktivující adenylylcyklázu hypofyzy), agonista muskarinového receptorů a syntetický hexapeptid, GHRP (peptid uvolňující růstový hormon) uvolňuje endogenní růstový hormon buď přímým působením na hypoíýzu nebo způsobuje uvolnění GHRH a/nebo somatostatinu z hypothalamu.

'30 U poruch a stavů, kdy je nutné zvýšit množství růstového hormonu, proteinová podstata růstového hormonu neumožňuje parenterální aplikaci. Navíc jiné přímo působící přirozené činidlo stimulující produkci enzymů, jako například GHRH a PACAP, jsou delší polypeptidy a z tohoto důvodu se preferuje parenterální aplikace.

Použití jistých sloučenin při zvýšení množství růstového hormonu u savců se popisuje { v dokumentech EP 18 072, EP 83 864, WO 83/02 272, WO 83/07 110, WO 89/01711, }

WO 89/10 933, WO 89/09 780, WO 91/18 016, WO 92/01 711, WO 93/04 081, WO 94/13 696,

WO 95/17 423; WO 95/14 666, WO 96/15 148, WO 96/22 997, WO 96/35 713, WO 97/00 894,

WO 97/22 620, WO 97/23 508, WO 97/40 023 a WO 98/10 653. í ⁴⁰ . . i

Kompozice sloučenin uvolňující růstový hormon je důležitá svým potenciálem uvolňovat růstový ?

hormon stejně jako svou biologickou dostupností. Vynález proto popisuje nové sloučeniny s vlastnostmi uvolňujícími růstový hormon. Vynález popisuje nové sloučeniny uvolňující růstový hormon (činidla stimulující produkci růstového hormonu), která jsou specifická a/nebo selektivní a nevykazují žádný nebo v podstatě žádný vedlejší účinek. Je to například EH, FSH, TSH,

ACTH, vasopressin, oxytocin, kortisol a/nebo prolaktin. Vynález také popisuje produkci sloučenin, které vykazují vysokou orální biologickou dostupnost.

so Podstata vynálezu

Vynález popisuje produkci nových sloučenin, které působí přímo na buňky hypofyzy za normálních experimentálních podmínek in vitro, přičemž se z nich uvolňuje růstový hormon.

CZ 299648 Bó

Tyto sloučeniny uvolňující růstový hormon se mohou využít in vitro, jako jedinečné nástroje výzkumu při zjišťování, jak je vylučování hormonu regulováno na úrovni hypoíyzy.

Sloučeniny uvolňující růstový hormon podle vynálezu se mohou také aplikovat in vivo, aby se 5 zvýšilo uvolňování endogenního růstového hormonu.

Vynález popisuje sloučeninu obecného vzorce I:

7-í%_M'(^CHR >d (CR R ), M

ve kterém symbol R¹ představuje vodík nebo C i_6-alkyl, symbol R² představuje vodík nebo Ci-<ralkyl, symbol L představuje

kde symbol R⁴ představuje vodík nebo C]_6-alkyl, symbol p představuje 0 nebo 1, symboly q, s, t, u představují nezávisle na sobě 0, 1, 2, 3 nebo 4, symbol r představuje 0 nebo 1, součet q + r + s +1 + u je 0,1, 2, 3 nebo 4, symboly R⁹, R^l°, R¹¹ a R¹² představují nezávisle na sobě vodík nebo C,_(-alkyl, symbol Q je větší než N-R¹³ nebo

- ?.

kde symbol o je 0, 1 nebo 2, symbol T představuje-N(R¹⁵) (R¹⁶) nebo hydroxyl, symboly R¹³, R¹⁵ a R¹⁶ představují nezávisle na sobě vodík nebo Cj_$-alkyl, symbol R¹⁴ představuje vodík, aryl nebo hetaryl, symbol G představuje -O-(CH₂)_k-R¹⁷,

kde symboly R¹⁷, R¹⁸, R¹⁹,.R²⁰ a R²¹ představují nezávisle na sobě vodík, halogen, aryl, hetaryl, C i^6-alkyl nebo C,.₆-alkoxy skupí nu, symbol kje 0, 1 nebo 2, symbol J představuje -O-(CH2)i-R²²,

kde symboly R²², R²³, R²⁴, R²⁵ a R²⁶ představují nezávisle na sobě vodík, halogen, aryl, hetaryl, C]-6~alkyl nebo Cj^-alkoxyskupinu, symbol I představuje 0, 1 nebo 2, symbol a představuje 0, 1 nebo 2, symbol b představuje 0, 1 nebo 2, symbol c představuje 0,1 nebo 2, symbol d představuje 0 nebo 1, symbol e představuje 0 1,2 nebo 3, symbol f představuje 0 nebo 1, symboly R⁵ představuje vodík nebo Ci_6—alkyl, který je popřípadě substituován jedním nebo více 5 hydroxyly, aryly nebo hetaryly, symboly R⁶ a R⁷ představují nezávisle na sobě vodík nebo Ci-6-alkyl, který je popřípadě substituován jedním nebo více halogeny, aminoskupinou, hydroxyly, aryly nebo hetaryly, ío symbol R⁸ představuje nezávisle na sobě vodík nebo Ci_g-alky 1, který je popřípadě substituován jedním nebo více halogeny, aminoskupinou, hydroxyly, aryly nebo hetaryly, symboly R⁶ a R⁷ nebo R⁶ a R⁸ nebo R⁷ a R^s mohou popřípadě tvořit -(CH2)rU-(CH₂)j- kde symbol i a j představují nezávisle na sobě 1, 2 nebo 3 a symbol U představuje -0-, -S-.nebo valenční vazbu, symbol M je ary len, hetarylen, -0-, -S- nebo -CR²⁷=CR^2SsymbolyR²⁷ a R²⁸ představují nezávisle na sobě vodík nebo Ci_₆ alkyl, který je popřípadě sub20 stituován jedním nebo více aryly nebo hetaryly, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou obsahovat libovolné její optické izomery ve formě separo25 váných, čistých nebo částečně čištěných optických izomerů nebo ve formě racemické směsi uvedených izomerů.

Jakmile je přítomen jeden nebo více chirálních atomů uhlíku, pak takové chirální centrum nebo centra se mohou vyskytovat v konfiguraci R a/nebo s nebo mohou tvořit směs R a S.

no _ — — _____

Dále sloučeniny obecného vzorce I mohou obsahovat jednu nebo více dvojných vazeb C=C s možností heometrické geometrie a vynález zahrnuje možné stereoizomery (E nebo z izomery) pokud není specifikován speciální geometrický izomer.

V jednom provedení sloučeniny obecného vzorce I symbol R¹ představuje Ci_e—alkyl, jako je Ci_4—alkyl, zvláště pak methyl. V druhém provedení vynálezu symbol R¹ představuje vodík.

V dalším provedení vynálezu se popisuje sloučenina obecného vzorce I, kde Ϊ symbol R² představuje Ci_$-alky 1, jako je Ci_₄—alky 1, zvláště pak methyl.

Další provedení vynálezu popisuje sloučenu obecného vzorce I, kde symbol L představuje

ve kterém symbol R⁴ představuje vodík nebo Ci_e-alkyl,

-4CZ 299648 B6 symbol p je 0 nebo 1, symbol q, s, t, u představují nezávisle na sobě 0, 1, 2, 3 nebo 4 5 symbol r představuje 0 nebo 1, součet q + r + s + t + ujeO, 1,2, 3 nebo 4, symboly R⁹, R¹⁰, R¹¹ a R¹² představují nezávisle na sobě vodík nebo CM-alkyl, o symbol Q je větší než N-R¹³ nebo

kde symbol o je 0, l nebo 2, symbol T představuje -N(R¹⁵) (R¹⁶) nebo hydroxyl, symboly R¹³, R¹⁵ a R¹⁶ představují nezávisle na sobě vodík nebo C'm-alkyl, symbol R¹⁴ představuje vodík, aryí nebo hetaryl. V jednom provedení vynálezu symbol R⁴ představuje vodík. V druhém provedení vynálezu symbol R⁴ představuje Cm-alkyl, jako je Cm~ alkyly zvláště pak methyl. Ve třetím provedení vynálezu symbol p je 0. V dalším provedení vynálezu symbol q je 0. V dalším provedení vynálezu symbol q je 1. V dalším provedení vynálezu symbol s je 0. V dalším provedení vynálezu symbol s je 1. V dalším provedení vynálezu symbol t - - - je O. V dalším provedení vynálezu-symbol t je 1; V dalším provedenΓvynálezu symború je*07

V dalším provedení vynálezu symbol r je 0. V dalším provedení vynálezu symbol r je 1. V dalším provedení vynálezu symbol R⁹ je vodík. V druhém provedení vynálezu symbol R⁹ představuje C] 6-alkyl. jako je Cm-alkyl, zvláště pak methyl. V dalším provedení vynálezu symbol R¹⁰ před30 stavuje vodík. V dalším provedení vynálezu symbol R¹⁰ představuje Ci_6—alky 1, jako je Cwalkyl, zvláště pak methyl. V dalším provedení vynálezu symbol R¹¹ představuje vodík. V dalším provedení vynálezu symbol R¹¹ představuje Ci_6—alkyl, jako je C| 4—alkyl, zvláště pak methyl.

V dalším provedení vynálezu symbol R¹² představuje vodík. V dalším provedení vynálezu . symbol R¹² představuje CM-alkyl, jako je CM-alkyl· zvláště pak methyl. V dalším provedení

35· vynálezu symbol Q je větší než N-R¹³. V dalším, provedení vynálezu symbol R¹³ představuje vodík. V dalším provedení vynálezu symbol R¹³ představuje CM-alkyl, jako je CM-alkyl, zvláště pak methyl. V dalším provedení vynálezu symbol Q představuje

V dalším provedení vynálezu symbol R¹⁴ představuje hetaryl, zvláště pak thiazolyl. V dalším provedení vynálezu symbol R¹⁴ představuje vodík. V dalším provedení vynálezu symbol o je 0.

V dalším provedení vynálezu symbol oje l. V dalším provedení vynálezu symbol Tje hydroxyl.

V dalším provedení vynálezu symbol T je -N(R¹³) (R¹⁶). V dalším provedení vynálezu sym45 bol R¹⁵ představuje Ci_₆-alkyl, jako je CM-alkyl, zvláště pak methyl. V dalším provedení vynálezu symbol R¹⁶ představuje CM-alkyl, jako je CM-alkyl, zvláště pak methyl.

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce 1 symbol L představuje

- 5 CZ 299648 B6

symbol q, s, t, u představují nezávisle na sobě 0,1,2, 3, nebo 4 5 symbol r představuje 0 nebo 1, součet q + r + s + t + ujeO, 1,2, 3 nebo 4, symboly R⁹, R¹⁰, R¹¹ a R¹² představují nezávisle na sobě vodík nebo Cj-g-alkyl, o symbol Q je větší než N-R¹³ nebo

kde symbol o je 0,1 nebo 2, symbol T představuje -N(R¹⁵) (R¹⁶) nebo hydroxyl, symboly R¹³, R¹⁵ a R¹⁶ představují nezávisle ná sobě vodík nebo Cm-alky 1, symbol R¹⁴ představuje vodík, aryl nebo hetaryl. V jednom provedení vynálezu symbol p je 0.

V dalším provedení vynálezu symbol q je 0. V druhém provedení vynálezu symbol q je 1.

V třetím provedení vynálezu symbol s je 0. V dalším provedení vynálezu symbol sje 1. V dalším provedení vynálezu symbol t je 0. V dalším provedení vynálezu symbol t je 1. V dalším prove25 dění vynálezu symbol u je 0, V dalším provedení vynálezu symbol r je 0. V dalším provedení vynálezu symbol rje 1. V dalším provedení vynálezu symbol R⁹ je-vodík. V dalším provedení vynálezu symbol R⁹ představuje Cm-alkyl, jako, je Cw~alkyl, zvláště pak methyl. V dalším provedení vynálezu symbol R¹⁰ představuje vodík. V dalším provedení vynálezu symbol R¹⁰představuje C| ₆-alkyl, jako je Cm-alkyl, zvláště pak methyl. V dalším provedení vynálezu symbol R¹¹ představuje vodík. V dalším provedení vynálezu symbol R¹¹ představuje Cj^-alkyl, jako je CM-alkyl, zvláště pak methyl. V dalším provedení vynálezu symbol R¹² představuje vodík. V dalším provedení vynálezu symbol R¹² představuje C|_ó—alkyl, jako je CM-alkyl, zvláště pak methyl. V dalším provedení vynálezu symbol Q je větší než N-R¹³. V dalším provedení vynálezu symbol R¹³ představuje vodík. V dalším provedení vynálezu symbol R¹³ představuje

Ci.g-alkyl, jako je CM-alkyl, zvláště pak methyl. V dalším provedení vynálezu symbol Q představuje

-6CL Z9904S Bb

V dalším provedení vynálezu symbol R¹⁴ představuje hetaryl, zvláště pak thiazolyk V dalším provedení vynálezu symbol R¹⁴ představuje vodík. V dalším provedení vynálezu symbol o je 0.

V dalším provedení vynálezu symbol oje 1. V dalším provedení vynálezu symbol T je hydroxyl.

V dalším provedení vynálezu symbol T je -N(R¹⁵) (R¹⁶). V dalším provedení vynálezu sym5 bol R¹⁵ představuje Ci_6—alkyl, jako je C] 4—alkyl, zvláště pak methyl. V dalším provedení vynálezu symbol R¹⁶ představuje Ci_$—alkyl, jako je Ci 4—alkyl, zvláště pak methyl.

Ve sloučenině podle shora v textu uvedeného obecného vzorce I symbol L představuje přednostně 4-hydroxy-4-(2-thienyl)piperidino-, (3-hydroxy-cyklohexyl)amino-, 4-(N,N10 dimethylamino)piperidino, N-methy1-N-( 1 -methylpiperidÍn-4-yl)amino)-. 4-((N,N~dimethylami-no)methyl)piperidono-, 4-methylpiperazino-, (2,2,6,6-tetramethylpiperidin^k-yI)amino-, 4-hydroxypiperidino-, (3S)-3-((N,N-dimethylamino)methyl)piperidino-, (2S)-2-((N,Ndimethyl-amino)methyl)pyrolidinoskupiny.

V dalším provedení sloučeniny podle obecného vzorce I symbol G představuje

kde symboly R¹⁷, R¹⁸, R¹⁹, R²⁰, R²¹ představují nezáviste na sobě vodík, halogen, aryl, hetaryl, 20 C₁₆-alkyl nebo Ci_6-alkoxyskupinu. V jednom provedení vynálezu symbol R¹⁷ představuje vodík. V druhém provedení vynálezu symbol R¹⁸ představuje vodík. V třetím provedení vynálezu symbol R¹⁹ představuje vodík. V dalším provedení vynálezu symbol R¹⁹ představuje aryl, zvláště fenyl. V dalším provedení vynálezu symbol R²⁰ představuje vodík. V dalším provedení vynálezu symbol R²¹ představuje vodík. V dalším provedení sloučeniny podle obecného vzorce I sym25'''' bo 1 G představuj e 2-nafíy 1 ne bo“ b ifeny 1-4-y 1. * ~ ^J ------ —

V dalším provedení sloučeniny podle obecného vzorce 1 symbol J představuje

kde symboly R²², R²³, R²⁴, R²³ a R²⁶ představují nezávisle na sobě vodík, halogen, aryl, hetaryl, C₁₆—alkyl nebo C₁₆-alkoxvskupinu. V jednom provedení vynálezu symbol R²² představuje vodík. V druhém provedení vynálezu symbol R²³ představuje vodík. V třetím provedení vynálezu symbol R²⁴ představuje vodík. V dalším provedení vynálezu symbol R²⁴ představuje halogen, zvláště fluor. V dalším provedení vynálezu symbol R²⁵ představuje vodík. V dalším provedení vynálezu symbol R²⁶ představuje vodík. V dalším provedení sloučeniny podle obecného vzorce l symbol J představuje přednostně fenyl, 4-fluorofenyl nebo 2-thienyl.

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I symbol a představuje 1.

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I symbol b představuje 1.

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I symbol c představuje 0,

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce Ϊ symbol d představuje 1.

-7CZ 299648 B6

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I symbol M představuje arylen nebo -CR²⁷=CR² kde symboly R²⁷ a R²⁸ představují nezávisle na sobě vodík nebo C_{] 6}—alkyl, který je popřípadě substituován jedním nebo více aryly nebo hetaryly. V jednom provedení sloučeniny symbol M je arylen, zvláště pak fenylen. V dalším provedení symbol M před stavuj e-CR²⁷=CR²⁸5 , kde symboly R²⁷ a R²⁸ představují nezávisle na sobě vodík nebo C|_g-alkyl. V dalším provedení vynálezu symbol R²⁸ je vodík, V dalším provedení symbol M je E-izomer -CR²⁷=CR^2S- Ve sloučenině podle shora uvedeného obecného vzorce I symbol přednostně představuje ethenylen, 1,3-fenylen nebo 1,2-propenylen.

ίο V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I symbol e představuje 0.

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I symbol e představuje 1.

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce 1 symbol f představuje 0.

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I symbol f představuje 1.

V dalším provedení sloučeniny podle obecného vzorce I symboly R⁶ a R⁷ představují nezávisle na sobě vodík nebo Cj^—alkyl. V jednom provedení symbol R⁶ představuje vodík. V druhém provedení symbol R⁶ představuje CM-alky 1, zvláště pak methyl. Ve třetím provedení symbol R⁷ představuje vodík. V dalším provedení symbol R⁷ představuje C]-6-alky 1. zvláště pak methyl. V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I symboly R⁶ a R⁷ nebo R⁶ a R⁸ nebo R⁷ a R⁸ mohou popřípadě tvořit -(CH₂)—U-(CH2)j-, kde symbol i a j představují nezávisle na sobě 1 nebo 2 a symbol U představuje -0-, -S- nebo valenční vazbu.

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I symboly R^{6 a R}7 tvoří -(CH₂)i-U-(CH₂)j- kde symbol i a j představují nezávisle na sobě 1, 2 nebo 3 a symbol U představuje -O-, -S- nebo valenční vazbu. V jednom provedení součet i + j se rovná 3. V druhém provedení symbol U představuje valenční vazbu. V určitém provedení (CR⁶R⁷) je cyklobutyl,

........V dalším provedení sloučeniny obecného _vzorce IsynibolvR⁶ a R⁷ tvoří—(CH2-)rV-(GH2)j-jkde— — symbol i a j představují nezávisle na sobě 1 nebo 2 a symbol U představuje -O-, -S- nebo valenční vazbu. V jednom provedení součet i + j se rovná 3. V druhém provedení symbol U představuje valenční vazbu. V určitém provedení (CR^éR⁷) je cyklobutyl.

V dalším provedení se popisuje sloučenina obecného vzorce I, kde symbol R⁶ je vodík. V druhém provedení představuje Ci^-alkyl, zvláště pak methyl.

Ve speciálním provedení podle vynálezu se popisuje sloučenina obecného vzorce I

ve kterém symbol R¹ představuje vodík nebo C1^-alkyl, symbol p představuje 0 nebo 1, symboly q, s, t, u představují nezávisle na sobě 0, 1,2, 3 nebo 4, 45 symbol r představuje 0 nebo 1, součet q + r + s +1 + u je 0, 1,2, 3 nebo 4,

-8CZ 299648 Bó symboly R⁹, R¹⁰} R¹¹ a R¹² představují nezávisle na sobě vodík nebo C|_6-alkyl, symbol Q je větší než N-R¹³ nebo

kde symbol o je 0, 1 nebo 2, symbol T představuje -N(R¹⁵) (R¹⁶) nebo hydroxyl, symboly R¹³, R¹³ a R¹⁶ představují nezávisle na sobě vodík nebo Calkyl, symbol R¹⁴ představuje vodík, aryl nebo hetaryl, symbol G představuje

kde symboly R¹⁷, R¹⁸, R¹⁹, R²⁰ a R²¹ představují nezávisle na sobě vodík, halogen, aryl, hetaryl, C]_₆-alkyl nebo C,_₆-alkoxyskupinu, symbol J představuje

AA AA A Λ AC kde symboly R , R , R , R a R představují nezávisle na sobě vodík, halogen, aryl, hetaryl, Ci_6—alkyl nebo C]_6-alkoxyskupinu, symbol a představuje 0, 1 nebo 2, symbol b představuje 0, 1 nebo 2, symbol c představuje 0, 1 nebo 2, symbol d představuje 0 nebo 1, symbol e představuje 0, 1,2 nebo 3, symbol f představuje 0 nebo 1, symboly R⁵ představuje vodík nebo C|_₆—alkyl, který je popřípadě substituován jedním nebo více hydroxyly, aryly nebo hetaryly, symboly R⁶ a R⁷ představují nezávisle na sobě vodík nebo Ci_$alkyl, který je popřípadě substituován jedním nebo více halogeny, aminoskupinou, hydroxyly, aryly nebo hetaryly,

-9CZ 299648 B6 symbol R⁸ představuje nezávisle na sobě vodík nebo C| ₆—alkyl, který je popřípadě substituován jedním nebo více halogeny, aminoskupinou, hydroxyly, aryly nebo hetaryly, symboly R⁶ a R⁷ nebo R⁶ a R⁸ nebo R⁷ a R⁸ mohou popřípadě tvořit -(CH₂)i-U-(CH2)j- kde symbol i a j představují nezávisle na sobě 1, 2 nebo 3 a symbol U představuje -0-, -S- nebo valenční vazbu, symbol M je ary len nebo -CR²⁷=CR²⁸-, ío symboly R²⁷ a R²⁸ představují nezávisle na sobě vodík nebo Ci_6-alkyl, který je popřípadě substituován jedním nebo více aryly nebo hetaryly, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

Preferované sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu jsou:

N-((lR)-l“{N-[(lR)-l-benzyl-2-(4-((dimethylamino)-methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethy]]N-methylkarbamoyl}~2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5-methylhex2-anové

TM—((1 R)-1-{N-[(1 R)-1-benzy 1-2-((3 S)-3-((dimethylamtnomethyl)piperid i n-l-yl)-2-oxoethyl]-N~methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethýl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-525 methylhex-2-anové

N-(( 1 R)-1-{N-[(1 R)- l-benzyl-2-((3S)-3-{(dimethylaminomethyl)piperidin-1 -yl)-2-oxo30 ethy l]-N-methyI kar bamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methyl amid kyseliny (2E)-4-(1-aminocykl ob uty 1) but-2-ano vé

CZ 299648 Bó

N-((lR)-l-{N-[(lR)-l-benzyl-2-((2S)-2-((dimethylamÍno)methyl)pyrolidin-l--yl)-2-oxoethyl]“N-metbylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5 methylhex-2-anové

N-((l R)-l-{N-[( 1 R)-l“benzyl-2-((2S)-2-((dimethylamino)methyl)pyrolidin-l-yl)-2-oxoio ethyl]-N-methylkarbamoyI}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methyl-3-((methylamino)niethyl)benzamid

N-((1R)-1-{N-[(1 R)~l-benzyl-2-(4-(dÍniethylainino)piperidin-l-yl)~2-oxoethyl]-N-methyI 15 karbamoyl}-2-{2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5-methyfhex-2-anové

-11CZ 299648 B6

CHa

I

N-methyl-N-[( l R)-l-(N-methyl-N-{( 1R)- l-[N-methyl-N-( l-methylpiperidin-4-yl)karbamoyl]-2-fenylethyl}-karbamoy1)-2“(2-naftyl)ethyl)amid kyseliny (2E)-5-amino-5-methyl hex-2-anové

3-aminomethyl-N-(( l R)-l-{N-[( 1 -benzy l-2-{ 4-methy lpiperazin-1-ýl)-2-oxoethyl]-Nío methylkarbamoyl}-2-(2-naťtyl)ethyl)-N-niethylbenzamid

N-(( 1R)- 1-{Ν-[( 1R)-1 -benzyl-2-(4-methylpÍperazÍn-1 -y l}-2-oxoethy l]-N-methylkarba15 moyl }-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5-methylhex-2-anové

-1? CZ 299648 B6

CH,.

N-methyl-N-(( 1 R)-l-{N-[( 1 R)-2-fenyl-1 —((2,2,6,6-tetramethy lpiperidin-4-y l)-karbamoy 1> ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamÍd kyseliny (2E)-5-amino-5-methylhex-25 anové

3-aminomethyl-N-methyl-N-(( 1 R)-l-{N-methy l-N-[( 1 R)-2-fenyl-l—(2.2,6,6-tetramethylio piperidin^-yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)benzamid

N-methyl-N-(( 1 R)-l-{N-methyl-N-[(l R)-2-fenyl-1-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)15 karbamoyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-nafty1)ethyl)aniid kyseliny (2E)-5-amino-3,5-dimethylhex

2-anové

-13CZ 299648 B6 ch₃ o

N—((1 R)l-{N-[( 1R) 1-benzy 1-2-( 4-methy lpiperazin-1 -y l)-2-oxoethy l]-N-methy lkarbamoy 1 }2-(2-naftyl)ethyl)~N“methyIamid kyseliny (2E)-4(l-aminocyklobutyl)but-2-anové

N-(( 1 R)1-{N-[(1 R) 1-benzy l-2-(4-methy lpiperazin- l-yl)-2-oxoethy l]-N-methy lkarbamoy 1 }2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-3,5-dimethylhex-2-anové

N-(( 1R) 1 —{N—[(1 R)l-benzyl-2-{4-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxoethyí]-N-methylkarbamoyl}-2-(bifenyM-yl)ethy lý-N-methylamid kyseliny (2E)-4-( l-aminocyklobutyl)but-215 anové

-14CZ 299648 B6

N-(( 1 R)-l-{N-[( 1 R)-l-benzyl-2-(4-hydroxypiperidin-l~yl>-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(bifenyl-4-yl)ethyl)-N-metbylamid kyseliny (2E)-5-amino-5-methylhex-2-anové

N-(( 1R) 1 -{N-[( 1R) 1 -benzy 1-2-(4-hydroxypiperid in-1 -yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-3,5-dimethylhex-2-anové

-15CZ 299648 B6

N-(( 1 R)-l-{N-[( 1 R)l-benzyl-2-(4-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-4-(l-aminocyklobuíyl)but-2-anové

N—((1 R)—1—{N—[(1 R)-l-(4”fluorobenzyl-2-(4-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-Nmethylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5-methylhex-2io anové

N-(( 1 R)-1-{N-[(1 R)l-(4-fluorobenzyl)-2-(4-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N15 methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-3,5-dirnethylhex-2-anové

-16CZ 299648 B6

N-((l R)-l-{N-[( 1 R)-l-benzyl-2-<4-hydroxy-4-(2-thÍenyl)piperidin-Uyl)-2-oxoethyl]-Nmethylkarbamoyl}-2-(2”naftyl)ethy])-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5-methylhex-25 anové

N-(( l R) 1 —{N—[(1 R)-l-(3-hydroxycyklohexylkarbamoyl)-2-fenylethy l]-N-methylkarbamoyl 10 2-(2-naftyl)ethyl>~N-methyÍamid kyseliny (2E)-5-amino-5-methylhex-2-anové

ΌΗ

N4(l R>-l-{N-[( 1 R>l-benzyl-2-(4-{dimethylamino)piperidin-l-yl)”2-oxoethyl]-N-methyl15 karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)~N-methylamid kyseliny (2E)4-(l-aminocyklobutyl)but-2anové

- 17CZ 299648 B6

N-(( ί R)-1-{N-[(2R)-2-(4-hydroxypiperid in-1-y 1)-2-οχ0-1-{(2-thieny l)methy l)ethyl]-Nmethyikarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethy1)-N-methylamÍd kyseliny (2E)-5-amino-5-methylhex-2 anové

N-((1 R)~l-{N-[2R)-2“(4-hydroxypiperidin-l”yl)-2-oxo-l-((2-thienyl)methyl)ethyl]-Nio methylkarbamoyl}-2-(2~naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-3,5-dimethyl hex-2-anové

OH

N-((lR)-2“(bifenyM-yl)-l-{N-[(2R)-2-(4-hydroxy-piperidin-l-yl)-2-oxo-l-{(thienyl)methyl)ethyl]-N“methylkarbamoyl }ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5methylhex-2-anové

-18CZ 299648 B6

N-(( 1 R>—2—(bipheny l—4—y l)— 1 -{N-[( 1 R)-2-(4-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxt}-l-((2-thienyl)methyl)ethyl]-N-methylkarbamoyl}ethýl)~N-methylamid kyseliny (2E)-5-amÍno~3,55 methylhex-2-anové

N-(( t R)-l —{N—[(1 R)-l-benzyl-2-(4-hydroxypiperidÍn-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarba10 moyl}-2-(bifenyl~4-yl)ethyl)~N-methylainid kyseliny (2E)-5-nnethyI-5-(methylamino)hex-2“ anové

((lR)-l-{N-[(lR)-l-benzyl-2-(4-hydroxypÍperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(bifenyM--yl)ethylamid kyseliny (2E)-4-( l-aminocyklobuty1)but-2-anové

- 19CZ 299648 B6

ajejich farmaceuticky přijatelné sole.

Obecné metody

Způsoby zobrazené dále v textu na schématech I až III v žádném případě neomezují vynález, ale pouze slouží jako průvodci, jak je možné připravit zde uvedené sloučeniny.

-20CZ 299648 B6

Schéma I

Aminy typu

to se mohou syntetizovat z aminokyseliny chráněné BOC (zobrazeno na schématu I). Kyselina se převede na ester reakcí s nebo bez činidla, jako je například 1-hydroxybenzotriazol, 1-hydroxy7-azabenzotriazol nebo 3~hydroxy-l,2,3-benzotriazoM(3H)-On a činidla takového jako je například hydrochlorid N-(3-ditnethylaminopropyl)-N'-ethylkarbodiimidu nebo diisopropylkarbodiimid a katalyzátor, jako je Ν,Ν-dimethylaminopyperidin. Ester se může redukovat vhod15 ným činidlem, jako je například hydrid diisobutylhlinitý ve vhodném rozpouštědle, takovém jako je například toluen, dichlormethan, ether nebo tetrahydrofuran za vzniku aldehydu nebo alkoholu chráněného BOC. Jestliže se získá alkohol, může se oxidovat na odpovídající aldehyd vhodnou

-21CZ 299648 B6 metodou za vzniku dímethylsulfoxidu/oxalylchlorid/triethylamin nebo dimethyfsulfoxid/sulfotrioxid/pyridin, dvojchromát pyridinu nebo chlorchromát pyridinu. Redukční aminace s vhodným 3 aminem b^R¹⁵) (R¹⁶) a vhodné činidlo, jako je cyanoborohydrid nebo triacetoxyborohydrid sodný 1 ve vhodném rozpouštědle, tak například alkoholy se mohou přeměnit na amin chráněný BOC. |

Jestliže alespoň jeden symbol R¹⁵ nebo R¹⁶ je vodík, aminoskupina se může chránit způsobem, I který je dobře znám v oboru a popisuje se například v publikaci T. W. Greene, P.G.M. Wuts 1

Protective groups in organic synthesis, 2^nd edition, Wiley, New York, pak se provede další krok. 1|

Odstranění ochranné skupiny BOC je možné dosáhnout způsobem dobře známým v oboru, jak se popisuje v publikaci T. W. Greene, P.G.M. Wuts protective groups in organic synthesis, 2^nd edition, Wiley, New York tak, jako například chlorovodík v ethylacetátu nebo kyselina triflurooctová v d ich 1 ormeth an u.

R² O ^u K

OH kupíovací podmínky

2.) odstr. ochr. skupiny

-22CZ 299648 B6 '1

Schéma II

ochraná skupina I

1.) R \cRWf^»'^KHR\A» kupíovaci podmínky ,A

2,)odstr. ochr. skupiny

Sloučeniny typu obecného vzorce I sé mohou syntetizovat spojením aminu typu

a vhodné ochranné kyseliny s nebo bez kuplovacího činidla, jako je například l-hydroxy-benzo10 trizaol, l-hydroxy-7-azabenzotriazol nebo 3-hydroxy-l,2,3-benzotriazoM(3)~on a činidlo jako je například hydrochlorid N-(3-dimethyl-aminopropyl)-N^,-ethylkarbodiimidu nebo diisopropylkarbodiimidu ve vhodném rozpouštědle, jako je například Ν,Ν-dimethyl-formamid nebo dichloromethan (schéma II). Z produktu se může odstranit ochrana v poloze dusíku kyseliny způ-23CZ 299648 B6 sobem, který je znám v oboru, jak se popisuje například v publikací T. W. Greene, P.G.M. Wuts Protective groups in organic synthesis, 2^nd edition, Wiley, New York. Produkt se spojil s vhodnou ochrannou kyselinou s nebo bez kuplovacího činidla, jako je například 1-hydroxybenzotriazol, l-hydroxy-7-azabenzotriazol nebo 3-hydroxy-l,2,3-benzotriazoM-(3H)-on a činidlo, jako je hydrochlorid N-(3-diinethylaminopropyl)-N'-ethylkarbodiimid nebo diidopropylkarbodíimid ve vhodném rozpouštědle, jako je Ν,Ν-dimethylformamid nebo dichlormethan. Ochrana produktu se může odstranit v poloze dusíku kyseliny způsobem, který je dobře znám v oboru a který se popisuje například v publikaci T. W. Greene, P.G.M. Wuts Protective groups in organic synthesis, 2^nd edition, Wiley, New York. Produkt se spojil s vhodnou ochrannou kyselinou s nebo bez kuplovacího činidla, jako je například 1-hydroxybenzotriazol. l-hydroxy-7-azabenzotriazol nebo 3-hydroxy-l,2,3-benzotriazol-4(3H)-on a činidlem je například hydrochloridu N-(3dimethylaminopropyl)-N'-ethylkarbodiimidu nebo diisopropylkarbodiimidu ve vhodném rozpouštědle, jako je Ν,Ν-dimethylformamid nebo dichlormethan.

Všechny skupiny se mohou odstranit způsobem Známým v oboru, jak se popisuje v publikaci T. W. Greene, P.G.M. Wuts Protective groups in organic synthesis, 2^nd edition, Wiley, New York.

-24CZ 299648 B6

Schéma III

ochtahá skupina q

Ί.) R^,x'^N''(CR⁶R⁷)T^OfrM^^(CHR5)i-_t^OH kuplovaci podmínky

2-)oďstr. ochr. skupiny

Sloučeniny typu obecného vzorce I se může syntetizovat spojením aminu typu

25CZ 299648 B6 a vhodné ochranné kyseliny s nebo bez kuplovacího činidla, jako je například 1-hydroxybenzotrizaol, 1-hydroxy-7-azabenzotriazol nebo 3-hydroxy-l,2,3-benzotriazol-4(3)—on a činidlo jako je například hydrochlorid N-(3-dimethylaminopropyl>-N^,-ethylkarbodiimidu nebo diisopropylkarbodíimidu ve vhodném rozpouštědle, jako je například Ν,Ν-dimethylfonnamid nebo dichlormethan (schéma III). Z produktu se může odstranit ochrana v poloze dusíku kyseliny způsobem, který je znám v oboru, jak se popisuje například v publikaci T. W. Greene, P.G.M. Wuts Protective groups in organic synthesis, 2^nd edition, Wiley, New York. Produkt se spojil s vhodnou ochrannou kyselinou snebo bez kuplovacího činidla, jako je například 1-hydroxybenzotriazol, l-hydroxy-7-azabenzotriazol nebo 3-hydroxy-lj2,3-benzotriazol-4(3H)-on a činidlo, jako je ío hydrochlorid N-(3-dimethylaminopropy!)-N^,-ethylkarbodiÍmidu nebo diidopropylkarbodiimid ve vhodném rozpouštědle, jako je Ν,Ν-dimethylformamÍd nebo dichlormethan. Ochrana produktu se může odstranit v poloze dusíku kyseliny způsobem, který je dobře znám v oboru a který se popisuje například v publikaci T. W, Greene, P.G.M. Wuts Protective groups in organic synthesis, 2^nd edition, Wiley, New York. Produkt se spojil s vhodnou ochrannou kyselinou s nebo bez kuplovacího činidla, jako je například 1-hydroxybenzotriazol, l-hydroxy-7-azabenzotriazol nebo 3-hydroxy-l,2,3-benzotriazol-4(3H) -on a činidlem je například hydochlorídu N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylkarbodiimidu nebo diisopropylkarbodiimidu ve vhodném rozpouštědle, jako je N.N-dimethylformamid nebo dichlormethan. Všechny skupiny se mohou odstranit způsobem známým v oboru, jak se popisuje v publikaci T. W. Greene, P.G.M. Wuts Protective groups in organic synthesis, 2^nd edition, Wiley, New York.

Sloučeniny obecného vzorce I vykazují zdokonalenou rezistenci vůči proteolytické degradaci enzymy, protože jsou přirozené zvláště proto, že přirozené amidové vazby jsou nahrazeny nepřirozenými náhradami amidové vazby. Očekává se, že zvýšená rezistence vůči proteolytické degradaci sloučenin podle vynálezu v porovnání se známými peptidy uvolňujícími hormon zlepšila jejich biologickou dostupnost v porovnání s peptidy, které se popisují v literatuře.

Ve shora uvedených strukturálních vzorcích mají následující termíny označené významy:

C]-6-alkylová, Ci_6-alkylenová, C^-alkylová nebo Ci^-alkylenové skupiny specifikované shora v textu zahrnují alkylovou nebo alkylenovou skupinu označené délky v lineární nebo rozvětvené nebo cyklické konfiguraci. Příklady lineárního alkylu jsou methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl a hexyl a jejich odpovídající divalentní části, jako je ethylen. Příklady větveného alkylu jsou isopropyl, sekundární butyl, terciální butyl, isopentyl a isohexyl a jejich odpovídající divalentní částice, jako je isopropylen. Příklady cyklického alkylu jsou Cj.^cykloalkyl, jako je cyklo35 propyl, cyklobutyl, cyklopentyl a cyklohexyl a jejich odpovídající divalentní části, jako je cyklopropylen.

'C]Í6-álkoxylo'vá skupina specifikovaná shora v textu zahrnuje ty' alkoxylóvé skupiny dané délky buď lineární nebo větvené nebo cyklické konfiguraci. Příklady lineární alkoxyskupiny jsou methoxy- ethoxy-, butoxy-, pentoxy- a hexoxyskupina. Příklady větvené alkoxyskupiny jsou isopropoxy-, sekundární butoxy-, terciální butoxy-, isopentoxy- a isohexoskupina. Příklady cyklické alkoxyskupiny je (XéCykloalkoxyskupina, jako je cyklopropyloxy-, cyklobutoxycyklopentoxy a cyklohexyloxyskupina.

Termín „aryl“ zahrnuje monovalentní karbocyklické aromatické kruhové části, které jsou buď monocyklické, bicyklické nebo polycyklické, vybrané například ze skupiny obsahující fenyl nebo naftyI, případně substituované jedním nebo více Ci^alkylů, Ci^alkoxyskupinou, halogenem, aminoskupinou nebo arylem.

Termín „arylen“ zahrnuje divalentní karboxylové aromatické kruhové části, které jsou buď monocyklické, bicyklické nebo polycyklické. Vybraly se například ze skupiny obsahující feny len a naftylen popřípadě se substituovaly jedním nebo více Ci_₆aíky íů, C,_₆alkoxyskupin, halogenem, aminoskupinou nebo arylem.

-26CZ 299648 B6

Termín „hetaryl“ zahrnuje monovalentní heterocyklické aromatické kruhové části, které jsou buď monocyklické, bicyklické nebo polycyklické. Vybraly se například ze skupiny obsahující pyridyl, l-H-tetrazol-5-yI, thiazolyl, imídazolyl, indoly 1, pyrimidinyl, thiadiazolyl, pyrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, oxadiazolyl, thíenyl, chinolinyl, pyrazinyl nebo ísothiazolyl, popřípadě se mohou substituovat jedním nebo více C ^alkylem, Ci^alkoxyskupinou, halogenem, aminoskupinou nebo arylem.

Termín „hetarylen“ zahrnuje divalentní heterocyklické aromatické kruhové části, které jsou buď monocyklické nebo polycyklické. Vybraly se například ze skupiny obsahující pyridinediyl, 1-Hio tetrazolediyl, thiazoldiyl, imidazolediyl, pyrimidinediyl, thiadiazolediyl, pyrazolediyl, oxazolediyl, isoxazoíediyl, oxadiazolediyl, thiofenediyl, ehinolinediyl, pyrazinediyl nebo ísothiazolediyl, popřípadě substituované jedním nebo více C|_₆alkylem, C|_₆atkoxyskupinou, halogenem, aminoskupinou nebo arylem.

Termín „heterocyklický systém“ zahrnuje aromatické stejně jako nearomatické kruhové části, které jsou monocyklické, bicyklické nebo polycyklické a obsahují ve své kruhové struktuře alespoň jeden, to znamená jeden, dva nebo tři atomy dusíku a popřípadě jeden nebo více, to znamená jeden nebo dva, heteroatomy, například atomy síry nebo kyslíku. Heterocyklický systém se přednostně vybral zpyrazolu, pyridazinu, triazinu, indazolu, ftalazinu, cinnolinu, pyrazolidinu, pyra20' zolinu, aziridinu, dithíazinu, pyrolu, imidazolu, pyrazolu, isoindolu, indolu, indazolu, purinu, pyrrolidinu, pyrazolidinu, pyrolinu, pyrazolinu, imidazolidinu, ímidazolinu, píperidinu, piperazinu, indolinu, isoindolinu nebo morfolinu, popřípadě substituovaným jedním nebo více Ci_ ₆alkylem, Cj.salkoxyskupinou, halogenem, aminoskupinou nebo arylem.

Termín „halogen“ zahrnuje chlór (Cl), fluór (F), bróm (Br) a jód (I),

Termín „činidlo stimulující produkci růstového hormonu“ zahrnuje libovolnou sloučeninu, která má kapacitu přímo nebo nepřímo (to znamená stimulovat nebo zvýšit) ovlivnit uvolnění růstového hormonu z hypofyzy. Termín „činidlo stimulující produkci růstového hormonu“ zahrnuje peptidy uvolňující růstový hormon, napodobeniny peptidů uvolňujících růstový hormon a sloučeniny uvolňující růstový hormon nepeptidylové povahy.

Sloučeniny podle vynálezu může popřípadě být farmaceuticky přijatelná sůl, jako jsou farmaceuticky přijatelné adíční sole kyselin sloučenin obecného vzorce 1, které zahrnují ty sloučeniny připravené reakcí sloučeniny obecného vzorce I s anorganickou a organickou kyselinou, jako je kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová, octová, fosforečná, mléčná, jablečná, maleová, mandlová, ftalová, citrónová, glutarová, glukonová, methansulfonová, salycilová, jantarová, vinná, toluensulfonová, trifluoroctová, sulfamová nebo fumarová kyselina a/nebo voda.

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou aplikovat ve formě farmaceuticky přijatelné adiční sole kyseliny nebo kde jeto vhodné ve formě sole alkalického kovu nebo kovu alkalických zemin nebo ve formě nižší alkylamonné sole. Věří se, že formy takových solí vykazují přibližně stejný řád aktivit jako jejich volné báze.

Vynález dále popisuje farmaceutickou kompozici obsahující jako aktivní složku sloučeninu obec45 ného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.

Farmaceutický prostředek obsahující sloučeninu podle vynálezu se mohou připravit běžnými metodami, například jak se popisuje v publikaci Remingtonů Pharmaceutical Sciences, 1985 nebo Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19 th Edition (1995). Farmaceutický prostředek se může vyskytovat v běžném prostředku například ve formě kapsulí, tablet, aerosolu, roztoků, suspenzí a prostředků vhodných pro povrchovou aplikaci.

Použitý farmaceutický nosič nebo ředidlo může být běžný pevný nebo kapalný nosič. Příklady pevných nosičů jsou laktóza, terra alba, sacharóza, cyklodextrin, talek, želatina, agar, pektin,

-27CZ 299648 BÓ akácie, stearát horečnatý, kyselina stearová nebo nižší alkylethery celulózy. Příklady kapalných nosičů jsou sirup, arašídový olej, olivový olej, fosfolipidy, mastné kyseliny, aminy mastných kyselin, polyoxyethylen nebo voda. Podobně nosič nebo ředidlo může být zahrnuté v libovolném materiálu, který umožňuje nepřerušované uvolňování a který je dobře popsán v oboru. Tímto materiálem je glycerylmonostearát nebo glyceryldistearát samotný nebo ve směsi s voskem.

Jestliže se při orální aplikaci použije pevný nosič, přípravek je ve formě tablet, nebo ve formě prášku, který se zavře do tvrdých želatinových kapsulí, nebo ve formě peletu nebo ve formě pastilky nebo bonbonu. Množství pevného nosiče bude kolísat v širokém rozmezí, ale bude v rozmezí přibližně 25 mg až přibližně 1 g. Jestliže se použije kapalný nosič, přípravek může být ve formě syrupu, emulze, měkkých želatinových kapsulí nebo sterilního injektovatelného roztoku, jako je vodná nebo nevodná kapalná suspenze nebo roztok.

Typická tableta se může připravit běžným postupem produkce tablet a může obsahovat:

jádro:

aktivní sloučenina (ve formě volné sloučeniny nebo sole) 10 mg koíoidní oxid křemičitý (aerosol) 1,5 mg mikrokrystalická celulóza (Avicel) 70 mg upravená celulózová guma (Ac-Di-Sol) - 7,5 mg stearát horečnatý potah:

HPMC přibližně 9 mg *Mywacett 9-40 T přibližně 0,9 mg *acylovaný monoglycerid se použil jako změkčovadlo při potahování filmem.

V případě nasální aplikace přípravek musí obsahovat sloučeninu obecného vzorce rozpuštěnou nebo suspendovanou v kapalném nosiči, zvláště ve vodném nosiči v případě aplikace aerosolem.

Nosíc může obsahovat aditiva, jako je rozpouštědlo, například propylenglykol, povrchově aktivní činidlo, činidlo zesilující absorpci, jako je lecitin (fosfatidylcholin) nebo cyklodextrin nebo konzervační činidla, jako jsou parabeny.

Ukázalo se, že sloučeniny obecného vzorce I mají schopnost uvolnit endogenní hormon in vivo.

Sloučeniny se mohou proto použít při léčbě stavů, které požadují zvýšené množství růstového hormonu v plazmě, jako je tomu u lidí s nedostatkem růstového hormonu nebo u přestárlých pacientů nebo u chovného dobytka.

Vynález popisuje farmaceutický prostředek stimulující uvolnění růstového hormonu z hypofýzy.

Jde o kompozici obsahující jako aktivní složku sloučeninu obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.

Vynález dále popisuje způsob stimulující uvolnění růstového hormonu z hypofýzy. Tento způsob zahrnuje aplikaci subjektu, který to potřebuje, účinného množství sloučeniny obecného vzorce I nebo jeho farmaceuticky přijatelné sole.

Vynález dále popisuje způsob léčby zpomalení růstu spojené s astmatem. Tento způsob zahrnuje aplikaci subjektu, který to potřebuje, účinného množství činidla stimulujícího produkci růstového hormonu nebo jeho farmaceuticky přijatelné sole. Provedení vynálezu pak popisuje metodu léčby zpomalení růstu ve spojení s astma. Tento způsob zahrnuje aplikaci subjektu, který to potřebuje, účinného množství sloučeniny obecného vzorce I nebo jeho farmaceuticky přijatelné sole.

Vynález popisuje způsob léčby zpomalení růstu ve spojení sjuvenilní revmatickou artritidou nebo se systickou fibrózou. Uvedený způsob zahrnuje aplikaci subjektu, který to potřebuje, účinné množství činidla stimulujícího produkci růstového hormonu nebo jeho farmaceuticky

-28CZ 299648 B6 přijatelné sole. V jednom provedení vynálezu se popisuje způsob léčby zpomalení růstu ve spojení s juvenilní revmatickou artritidou. Uvedený způsob zahrnuje aplikaci subjektu, který to potřebuje, účinného množství činidla stimulujícího produkci růstového hormonu nebo jeho farmaceuticky přijatelné sole. Ve druhém provedení vynálezu se popisuje způsob léčby zpomalení růstu ve spojení se systickou fibrózou. Uvedený způsob zahrnuje aplikaci subjektu, který to potřebuje, účinného množství činidla stimulujícího produkci růstového hormonu nebo jeho farmaceuticky přijatelné sole. V dalším provedení vynález popisuje způsob ošetření zpomalení růstu ve spojení s juvenilní revmatickou artritidou, přičemž způsob zahrnuje aplikaci subjektu účinného množství sloučeniny obecného vzorce I nebo jeho farmaceuticky přijatelné sole. V jiném provedení vyná10 lezu se popisuje metoda léčby zpomalení růstu ve spojení se systickou fibrózou. Způsob obsahuje aplikaci subjektu, který to potřebuje, účinného množství sloučeniny obecného vzorce I nebo jeho farmaceuticky přijatelné sole.

Vynález popisuje použití sloučeniny obecného vzorce I nebo jeho farmaceuticky přijatelné sole pro přípravu léku vhodného pro stimulaci uvolnění růstového hormonu z hypofýzy.

Je dobře známo, že současné a potencionální použití růstového hormonu u lidí je různé. Sloučeniny obecného vzorce 1 se mohou aplikovat v případě stimulace uvolnění růstového hormonu z hypofýzy a budou pak mít stejné účinky nebo použití jako samotný růstový hormon. Slouče20 niny obecného vzorce I jsou vhodné při stimulaci uvolnění růstového hormonu u přestárlých lidí, při prevenci katabolických vedlejších účinků glukokortikoidů, při prevenci a léčbě osteoporézy, léčby chronického únavového syndromu (CFS), při léčbě akutního únavového syndromu a ochabování svalů, což následuje po elektivním chirurgickém zásahu, při stimulaci imunitního systému, zrychlení hojení ran, zrychlení hojení zlomeniny kostí, zrychlení srůstání komplikovaných zlomenin, například při distrakění osteogenezi, léčbě sekundárního vysílení po faktuře, léčbě zpomalení růstu, léčbě zpomalení růstu, k čemuž dochází při selhání ledvin nebo při nedostatečné funkci ledvin, při léčbě vysílení spojené s chronickým onemocněním jater, léčbě trombocytopenie, léčbě zpomalení růstu vé spojení s Crohnovóu nemocí, léčbě vysílení ve spojení s chronickým obstruktivním pulmonámím onemocněním (COPD), léčbě komplikací spojených strans30 plantací, léčbě malé výšky postavy, které se vyskytují u dětí v závislosti na nedostatku růstového hormonu a u malého vzrůstu spojeného s chronickým onemocněním, léčbě obezity a zpomalení růstu spojeného s obezitou, léčba aborexie,. léčba zpomalení růstu, které je spojené s PraderWilliho syndromem a Turnérovým syndromem zvýšení rychlosti růstu u pacienta, který trpí syndromem částečné necitlivosti na růstový hormon, zrychlení léčby a zkrácení hospitalizace u popálených pacientů, léčba zpomalení nitroděložního růstu zárodku, léčba skeletové dysplázie, hyperkortisolismu a Cushingova syndromu,, vyvolání pulzního uvolňování růstového hormonu, nahrazení růstového hormonu u stresovaných pacientů, léčba osteochondrodysplasie, Noonanova syndromu, schizofrenie a depresí a Alžheimerovy nemoci, léčba pomalu sě hojících ran a psychosociální deprivace, léčba katabolizmu ve spojení pulmonámí dysfunkcí a závislého dýchání, léčba selhání srdce nebo příbuzné vaskulámí dysfunkce, léčba nesprávné funkce srdce, léčba nebo prevence infarktu myokardům, snížení krevního tlaku, ochrana proti ventrikulámí dysfunkci nebo prevence reperfúze, léčba dospělých jedinců při chronické dialýze, átenuace proteinové katabolické odezvy následující po chirurgickém zákroku, kachexii po ztrátě proteinů způsobené chronickým onemocněním, jako je rakovina nebo AIDS, léčba hyperinzulinemie zahrnující nesidoblastózu, vyvolání ovulace, stimulace vývoje brzlíku a prevencí snižování funkce brzlíku spojené s věkem, léčba pacientů se sníženou imunitou, léčba sarkopenie, léčba vysílení spojené s AIDS, zlepšení svalového tonusu, pohyblivosti, udržení tloušťky kůže, léčba metabolické hemostáze a renální homeostáze u přestárlých lidí, stimulace osteoblaštů, remodelování kostí a tvorba chrupavek, regulace příjmu potravy, stimulace imunitního systému v porovnání se zvířaty a léčba poruch domácích zvířat, podporují růst chovných zvířat a stimulaci růstu vlny u ovcí, zvýšenou produkci mléka u dobytka, léčba metabolického syndromu (syndrom X), léčba rezistence na inzulín, která zahrnuje u savců například lidi NIDDM, léčba rezistence na inzulín v srdci, zlepšení kvality spánku a korekce relativního hyposomatotrofizmu stárnutí způsobené * prodloužením fáze spánku REM a snížení latence REM, léčba hypothermie, léčba slabosti, která je spojená s vysokým věkem, selhání srdce, léčba fraktury krčku, léčba imunitní nedostatečnosti

-70CZ 299648 Bó u jedinců se snížením poměrem buněk T4/T8, léčba svalové atrofie, léčba svalově skeletálních poruch u přestárlých lidí, zvýšení aktivity proteinové kínázy B (PKB), zlepšení pulmonámí funkce a léčba poruch spánku.

Termín „léčba“ také zahrnuje proíylaktickou léčbu.

Dále vynález popisuje činidlo stimulující produkci růstového hormonu nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, který je vhodný pro přípravu léku vhodného pro léčbu zpomalení růstu ve spojení s astma. Provedení vynálezu popisuje použití sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceu10 ticky přijatelné sole při léčbě zpomalení růstu ve spojení s astma. Druhé provedení vynálezu popisuje použití peptidů uvolňující růstový hormon, napodobeniny peptidů uvolňující růstový hormon nebo sloučeniny uvolňující růstový hormon nepeptidylové povahy nebo jejich farmaceuticky přijatelnou sůl vhodnou pro léčbu zpomalení růstu ve spojení s astma.

Vynález dále popisuje použití popisuje činidlo stimulující produkci růstového hormonu nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl vhodné pro přípravu léku pro léčbu zpomalení růstu ve spojení sjuvenilní revmatickou artritidou nebo systickou fíbrózou. Provedení vynálezu také popisuje použití činidla stimulujícího produkci růstového hormonu nebo jeho farmaceuticky přijatelné sole při přípravě léku vhodného pro léčbu zpomalení růstu ve spojení sjuvenilní revmatickou artriti20 dou. V druhém provedení vynálezu se popisuje použití činidla stimulující produkci růstového hormonu nebo jeho farmaceuticky přijatelné sole vhodného pro přípravu léku pro léčbu zpomalení růstu ve spojení se systickou fíbrózou. Jedno provedení vynálezu popisuje sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl vhodnou pro léčbu zpomalení růstu ve spojení sjuvenilní revmatickou artritidou. V jiném provedení vynálezu ze popisuje použití sloučeniny obecného vzorce I nebo jeho, farmaceuticky přijatelné sole vhodného při léčbě zpomalení růstu ve spojení se systickou fíbrózou. V dalším provedení vynálezu se popisuje použití peptidů uvolňující růstový hormon, napodobeniny peptidů uvolňující růstový hormon nebo sloučenin uvolňující růstový hormon nepeptidylové povahy nebo jejich farmaceutické sole vhodné pro léčbu zpomalení růstu ve spojení sjuvenilní revmatickou artrózou. V dalším provedení vynálezu se popisuje použití peptidů uvolňující růstový hormon, napodobeniny peptidů uvolňující růstový hormon nebo sloučenin uvolňující růstový hormon nepeptidylové povahy nebo jejich farmaceutické sole vhodné pro léčbu zpomalení růstu ve spojení se systickou fíbrózou.

Ve shora uvedených indikacích dávka bude kolísat v závislosti na použitém činidle stimulující produkci růstového hormonu. Může se například použiti sloučenina obecného vzorce I, Dávka dále závisí na způsobu aplikace a na požadovaném způsobu terapie. Aby došlo k účinnému uvolnění endogenního růstového hormonu, v obecném případě se pacientům nebo zvířatům aplikuje dávka v rozmezí 0,0001 a 100 mg/kg tělesné hmotnosti za déii. Sloučeniny obecného vzorce 1 nevykazují nebo v podstatě nevykazují žádný vedlejší účinek, když se aplikují ve shora uvedené dávce. Takový vedlejší účinky jsou například uvolnění LH, FSH, TSH, ACTH, vasopresinu, oxytocinu, kortisolu a/nebo prolaktinu. V obvyklém případě dávkové formy jsou vhodné pro orální, nasální, pulmonální nebo transdermální aplikaci. Dávka se pohybuje v rozmezí 0,0001 mg až přibližně 100 mg, upřednostňuje sé rozmezí dávky 0,001 až přibližně 50 mg sloučenin obecného vzorce Ϊ smíchaného s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.

Dávka sloučeniny podle vynálezu je v rozmezí 0,01 až 500 mg/den, například přibližně 5 až přibližně 50 mg. Při aplikaci pacientovi, napříklaďčlověku, jako lék se preferuje dávka 10 mg.

Farmaceutická kompozice podle vynálezu může obsahovat sloučeninu obecného vzorce I kombi50 novanou s jednou nebo více sloučenin, které vykazují různou aktivitu, například antibiotika nebo jiný farmakologicky aktivní materiál.

Způsob aplikace se může provést libovolným způsobem, který účinně přenáší aktivní sloučeninu na vhodné nebo požadované místo působení, jako je orální, nasální, pulmonální, transdermální nebo parenterální způsob aplikace, přičemž se preferuje orální způsob aplikace.

-30CZ 299648 B6

Bez ohledu na farmaceutické použití sloučenin obecného vzorce I, mohou se použít jako nástroje in vitro pro zkoumání regulace uvolnění růstového hormonu.

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou také použit jako nástroje in vivo pro hodnocení schopnosti uvolnit růstový hormon z hypoťyzy. Například ve vzorcích séra odebraných před a po aplikaci těchto sloučenin lidem se může testovat přítomnost růstového hormonu, Porovnání růstového hormonu v každém vzorku séra se přímo stanoví schopnost hypofýzy pacientů uvolňovat růstový hormon.

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou aplikovat důležitým zvířatům, aby se zvýšila jejich rychlost růstu a zvýšila se produkce mléka nebo vlny.

Další použiti činidla stimulujícího produkci růstového hormonu, které má obecný vzorec I, je možné použít v kombinaci s jinými činidly stimulujícími produkci růstového hormonu a jeho analogy nebo somatomediny, které zahrnují IGF-1 a IGF-2.

Farmakologické metody

U sloučenin obecného vzorce I se může ín vitro hodnotit jejich účinnost a potenciál uvolnit růstový hormon v krysí hypofýzámí primární kultuře a takové hodnocení je možné provést způsobem popsaným dále v textu.

Izolace krysích hypofyzámích buněk je úprava metody popsané v publikaci O. Sartor et al.,

Endocrinology 116, 1985, pp. 952-957. Samci krys, albíni, Spray-Dewley (tělesná hmotnost 250±25 gramů) se získaly od Motlegaard, Lile Skensveld, Denmark. Krysy se chovaly ve skupinách v klecích (4 samci v jedné kleci) a umístily se do místnosti, kde se udržoval 12-ti hodinový světelný cyklus. Teplota místnosti kolísala od 19 do 24 hodin a vlhkost se pohybovala v rozmezí 30 až 60 %.

Myši se dekapitovaly a z těla se vyňaly hypofýzy. Neurointermediální lalůčky se odstranily a zbývající tkáň se bezprostředně umístila do ledem chlazeného izolačního pufru (Geyovo médium (Gibco 041-04030) doplNěné 0,25 % D-glukózou, 2% nepodstatných aminokyselin (Gibco 043-01140) a 1% bovinním sérovým albuminem (BSA) (Sigma A-4503)), Tkáň se nakrájela na malé kousky a přenesla se do izolačního pufru doplněného 3,8 mg/ml trypsinu (Worthington #3707 TRL-3) a 330 mg/ml DNázy (Sigma D-4527). Směs se inkubovala při míchání 70 otácek/min po dobu 35 minut při teplotě 37 ^ŮC v 95%/5% atmosféře O₂/CO₂. Tkáň se promyla třikrát· ve shora uvedeném pufru. Za použití standardní pasteurovy pipetý”sétkáň rozdělila na jednotlivé buňky. Po disperzi se-buňky filtrovaly přes nylonový filtr (160 mM), aby se odstranila nenatrávená tkáň. Buněčná suspenze se třikrát promyla izolačním pufrem doplNěném inhibitorem trypsinu (0,75 mg/ml, Worthington #2829) a nakonec se resuspendovala v kultivačním médiu, DMEM (Gibco 041-01965) se doplnil 25 mM HEPES (Sigma H-3375), 4 mM glutaminem (Gibco 043-05030H), 0,075 % uhličitan sodný (Sigma S#-8875), 0,1 % nepodstatná aminokyselina, 2,5%fetální telecí sérum (FCS, Gibco 011—06290), 3% koňské sérum (Gibco 03445 06050), 10% čerstvé krysí sérum, 1 nM T3 (Sigma T-2752) a 40 mg/1 dexamethasonu (Sigma D-4902) pH7,3 až do dosažení hustoty buněk 2x10⁵ buněk/ml. Buňky se nanesly na mikrotitrační destičky (Nunc, Denmark), 200 ml/prohlubeň a kultivovaly se po dobu 3 dní při teplotě 37 °C a 8 % CO₂.

Testování sloučeniny

Po kultivaci se buňky promyly dvakrát stimulačním pufrem (Hanksův rovnovážný solný roztok (Gibco 041-04020) doplněný 1% BSA (Sigma A-4503), 0,25 % D-glukózou (Sigma G-5250) a 25 mM HEPES (Sigma H-3375) pH7,3) a preinkubovaly se po dobu 1 hodiny při teplotě 37 °C.

Pufr se vyměnil za 90 ml stimulačního pufru (při teplotě 37 °C)? Přidalo se 10 ml roztoku testo-31 CZ 299648 B6 vane sloučeniny a plotny se inkubovaly po dobu 15 minut při teplotě 37 °C a v 5 % atmosféře j

CO₂. Médium se slilo a analyzoval se obsah GH v testovaném systému rGH SPA. j '4

Všechny sloučeniny se testovaly v dávkách v rozmezí 10 pM až 100 mM. Vztah dávka a odezva 3 se zkonstruoval za použití Hillovy rovnice (Obrázek P, Biosoft). Účinnost (maximální hodnota 1 uvolněného GH, E_raax) se vyjádřila v % hodnoty E_max GHRP-6. Účinnost (EC₅₀ se stanovila jako koncentrace zahrnující polovinu maximální stimulace uvolněného GH).

U sloučenin obecného vzorce I se může hodnotit metabolická stabilita za použití postupu popsalo ného dále v textu:

Sloučeniny se rozpustily v koncentraci Img/ml ve vodě. 25 ml tohoto roztoku se přidalo k 175 ml roztoku enzymu (výsledný poměr enzym: substrát (hmotnost.) je přibližně 1:5). Roztok se nechal ležet při teplotě 37 °C přes noc. 10 ml různých degradačních roztoků se analyzovalo proti odpo15 vídajícímu nulovému vzorku za použití průtokové injekční elektrosprejové hmotnostní spektroskopie (ESMS) se sledováním vybraného molekulového iontu. Jestliže se signál sníží více jak o 20 % v porovnání s nulovým vzorkem, zbytek roztoku se analyzuje HPLC a hmotnostní spektroskopií za účelem přesně identifikovat rozsah a místa degradace.

Několik standardních peptidů (ACTH 4-10, angiotensin 1—14 a glucagon) zahrnují testy stability za účelem ověřit schopnost různých roztoků degradovat peptidy.

Standardní peptidy (angiotensin 1-14, ACTH4-10 a glukagon) se získaly od firmy Sigma, MO, USA).

Enzymy (trypsin, chymotrypsin, elastasové aminopeptidáz M a karboxypeptidáza Y a B) se získaly od firmy Boehringer Mannheim GmbH (Mannheim, Germany).

Směs enzymu pankreasu tvoří trypsin, chymotrypsin a elastasa ve 100 mM uhličitanu amonném pH 8,0 (všechny koncentrace jsou 0,025 mg/ml).

Směs karboxypeptidázý tvoří karboxypeptidáza Y a B v 50 mM acetátu amonném pH4,5 (všechny koncentrace jsou 0,025 mg/ml). Roztok aminopeptidázy M tvoří aminopeptidáza M (0,025 mg/ml) ve 100 mM uhličitanu amonným pH8,0.

Hmotnostní spektrometrická analýza se uskutečnila za použití různých hmotnostních spektrometrů. Použilo se zařízení Sciex API III LC-MS s trojitým kvadrupolem (Sciex Instruments, Thomhill, Ontario) vybavené elektrosprejovým zdrojem iontů á zařízení Bio-Ion 20 tíme-offlight Plasma Desorption Instrument (Bio-Ion Nordic AB, Uppsala, Sweden).

⁴⁰

Kvantifikace sloučenin (před a po degradaci) se provedla na zařízení API III za použití monitorování jediného molekulového iontu s průtokovou injektáží analyzovaného vzorku. Průtok kapaliny (MeOH:voda rovná se 1:1). 100 ml/min se řídil jednotkou ABI I40B HPLC (Perkin-Elmer Applied Biosystems Divisions, Foster City, CA). Parametry instrumentů se nastavily na podmín45 ky standardních operací a sledování SIM se provedlo za použití nej intenzivnějšího molekulového iontu (v mnoha případech to odpovídá molekulovému iontu s dvojím nábojem).

Identifikace degradačních produktů dále zahrnuje použití plazmové desorpční hmotnostní spektrometrie (PDMS) s aplikací vzorku na cíle potažené nitrocelulózou a standardní nastavení pří50 strojů. Přesnost stanovení přístrojů je v obecném případě lepší než 0,1 %.

Separace a izolace degradačních produktů se provedla za použití HY-TACH C-18 s reverzní fází 4,6 x 105 mM kolony HPLC (Hewlett-Packard Company, palo Alto, CA) se standardním acetonitrilem (TFA separační gradient). Použitý systém HPLC byl HP1090M (Hewlett-Packard

Company, Palo Alto, CA).

-32CZ 299648 B6

peptidový derivát	MW/SIM jont (amu)	směs karboxypeptidázy	směs enzymu pankreasu
standardy
ACTH 4-10	1124 i 5/562,. 8	+	-
Glucagon	3483/871.8	-	-
inzulín (B23-29	859.1/430.6
árigiotensin 1- 14	1760.1/881.0
GHŘP-2	817.4/409.6	-	-
GHRP-6	872.6/437,4	-	-

+: stabilní (méně než 20 % snížení signálu SIM po 24 hodinách v degradačním roztoku) nestabilní (více než 20 % snížení signálu SIM po 24 hodinách .v degradačním roztoku)

Příklady provedení vynálezu:

Způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I a prostředků, které tyto sloučeniny obsahují se io popisují v následujících příkladech, které však nejsou limitující.

Struktury sloučenin potvrdila buď elementární analýza (MA) jaderné magnetické rezonance (NMR) nebo hmotnostní spektrometrie (MS). Posuň NMR (d) je dán v jednotkách ppm a vybraly se pouze některé píky. Zkratka „mp“ znamená teplota tání a udává se ve °C. Kolonová chroma15 tografie se provedla za použití metody popsané v publikaci W. C. Still et al., J. Org. Chem. 1978, 43, 2 923-2 925 na silikagelu 60. Sloučeniny, které se používají jako počáteční materiály, jsou dobře známé sloučeniny nebo sloučeniny, které se často připravují metodami známými v oboru. HPtC-analýza:

Způsob Al.

RP-analýza se provedla za použití ÚV detekčního systému při vlnové délce 214, 254, 276 a 301 nm na zařízení 218TP54 na koloně C-18-silica o rozměrech 4,6 mM x 250 mM x 5 m (The

Seperations Group, Hesperia), která se eluovala rychlostí 1 ml/min při teplotě 42 °C. Kolona se uvedla do rovnováhy 5% acetonitrilem vpufru, který obsahuje 0,1 M síran amonný, kde se pH upravilo,4 M kyselinou sírovou na hodnotu 2,5. Po zavedení vzorku injekcí došlo k elucí gradientem 5% až 60 % acetonitrilu ve stejném pufru během 50 minut.

Způsob B1.

RP-analýza se provedla za použití UV detekčního systému při vlnové délce 214, 254, 276 a 301 nm na zařízení 218TP54 na koloně C-18-silica o rozměrech 4,6 mM x 250 mM x 5 m (The Seperations Group, Hesperia), která se eluovala rychlostí 1 ml/min při teplotě 42 °C. Kolona se uvedla do rovnováhy 5% (acetonitril + 0,1 % TFA) ve vodném roztoku TFA ve vodě (0,1%). Po zavedení vzorku injekcí došlo k eluci gradientem 5% až 60 % (acetonitril + 0,1 % TFA) ve stejném vodném pufru během 50 minut.

-33CZ 299648 B6

Zkratky

TLC:

DMSO:

min: h:

Boc:

DMF:

THF:

EDAC: HOAt: DIEA: TFA:

chromatografie na tenké vrstvě DMSO: dimethylsulfoxid _;<j dimethylsulfoxid 1 minuty .1 hodiny j terciální butyloxykarbonyl DMF: dimethylformamid d i methyl formám i d 3 tetrahydrofuran hydrochloridN-ethyl-N’-dimethylaminopropylkarbodiimidu

-hydroxy-7-azabenzotriazol diisopropylethylamin kysel ina trifluoroctová

Stavební bloky:

Aminokyseliny s methylovaným N-koncem používané v následujících příkladech se připravily podle publikace Cari. J. Chem. 1977, 55,906.

terc-butylester kyseliny 3-hydroxy-l, 1-dimethylpropylkarbamové _CH, O H,C CH₃ ^h-^c40-^jLn·

H,C ^υ R

OH

K roztoku kyseliny 3-terc-butoxykarbonylamino-3-methylbutanové (2,50 g, 11,5 mmol) a tri25 ethylaminu (1,92 ml, 13,8 mmol) v tetrahydrofuranu (10 ml) se po kapkách při teplotě 0 °C přidával ethylchloroformát (1,10 ml, 11,5 ml). Roztok se míchal po dobu 40 minut při teplotě 0 °C. Vytvořila se sraženina, která se odfiltrovala a promyla se tetrahydrofuranem (20 ml). Kapalina se bezprostředně ochladila na teplotu 0 °C. Po kapkách se dále přidával 2M roztok borovodíku v tetrahydrofuranu (14,4 ml, 28,8 mmol). Roztok se míchal při teplotě 0 °C pó dobu 2 hodin a pak se po dobu 4 hodin zahříval ňa teplotu místnosti, Ochladil se na teplotu 0 °C. Opatrně se přidal methanol (5 ml). Dále se přidala IN kyselina chlorovodíková (100 ml). Roztok se extrahoval ethylacetátem (2x 100 ml, 3 x 50 ml). Kombinované organické vrstvy se promyly saturova___ nýmroztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a sušily se na.síranu hořečnatém.. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatograficky na oxidu křemičitém (T1 Og) se směsí ethylacetát/heptan v poměru 1:2 za vzniku 1,84 g terciálního esteru kyseliny 3hydroxy-1, 1-dimethylpropylkarbamové ‘H-NMR (CDCb): d 1,33 (s, 6H), 1,44 (s, 9H), 1,8 (t, 2H), 1,94 (br, IH), 3,75 (q, 2H), 4,98 (br, 1H).

3-(terc-butoxykarbony lam i no)-3-methy Ibutanal

-34CZ 299648 B6

K roztoku oxalylchloridu (1,1 ml, 12,9 mmol) při teplotě -78 °C v dichlormethanu (15 ml) se přidal DMSO (1,22 ml, 17,2 mmol). Směs se míchala po dobu 15 minut při teplotě -78 °C. Po dobu 15 minut se po kapkách přidával roztok terciálního esteru kyseliny 3-hydroxy-l,ldimethylpropylkarbamové (1,75 g, 8,6 mmol) v dichlormethanu (10 ml). Roztok se míchal při teplotě -78 °C po dobu 15 minut. Přidal se triethylamin (6,0 ml, 43 mmol). Roztok se míchal při teplotě -78 °C po dobu 5 minut a pak se ohřál na teplotu místnosti. Roztok se ředil dichlormethanem (100 ml) a extrahoval se IN kyselinou chlorovodíkovou (100 ml). Vodná fáze se extrahovala dichlormethanu (50 ml). Kombinované organické vrstvy se promyly saturovaným roztokem hydrogenuhliěitanu sodného (100 ml) a sušily se síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstranilo ío ve vakuu. Surový produkt se čistil na chromatografické koloně na oxidu křemičitém (140 g) se směsí ethylacetát/heptan v poměru 1:3 za vzniku 3-(terc-butoxy-karbonylamino)-3-methylbutanalu.

MHz-H-NMR (CDC1₃): d 1,39 (s, 6H), 1,45 (s,9H), 2,85 (d, 2H), 4,73 (br, 1H), 9,80 (t, 1H).

ethyl(2E)-5-(terc-butoxykarbonylamino)-5-methylhex-2-anát

CH, OHC CH

CH,

Triethylfosfonoacetát (1,96 ml, 9,8 mmol) se rozpustil v tetrahydrofuranu (30 ml). Přidal se tercbutoxid draselný (1,10 g, 9,8 mmol). Roztok se míchal po dobu 40 minut při teplotě místnosti. Přidal se roztok 3-(terc-butoxykarbonylamino)-3“methylbutanalu (Í,10g, 5,5 mmol) v tetrahydrofuranu (6 ml). Roztok se míchal při teplotě místnosti po dobu 75 minut. Naředil se ethylacetátem (100 ml) a IN kyselinou chlorovodíkovou (100 ml). Fáze se oddělily. Vodná fáze se extrahovala ethylacetátem (2 x 50 ml). Kombinované organické fáze se promyly saturovaným roztokem hydrogenuhliěitanu sodného (60 ml) a sušily se na síranu hořecnatém. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se čistil na chromatografické koloně na oxidu křemičitém (90 g) směsí ethylacetátu/heptanu v poměru 1:4 za vzniku 1,27 g ethyl(2E)-5“(terc-butoxykarbonylamino)-5-inethylhex-2-enoátu.

'

MHz-H-NMR (CDCIj): d 1,30(s, 6H), 1,30(t, 3H), 1,46(s, 9H), 2,62(d, 2H), 4,27(q, 2H), 4,42 (br, 1H), 5,88 (d, 1H), 6,94 (td, 1H).

(2E)-5-(terc-butoxykarbonylamino)-5-methylhex-2-enová kyselina

QH, OH,C CH .c n*^:''oh H₃C H

Ethyl(2E)-5-(terc-butoxykarbonylamino)-5-methylhex-2-enoát (1,233 g, 4,54 mmol) se rozpustil v dioxanu (20 ml). Hydroxid litný (0,120 g, 5,0 mmol) se přidal ve formě pevné látky. Dále se přidala voda (10 ml), dokud se nedosáhlo čirého roztoku. Roztok se míchal 16 hodin při teplotě místnosti. Roztok se naředil vodou (70 ml) a extrahoval se terc-butylmethyletherem (2 x 100 ml). Vodná fáze se okyselila roztokem IN hydrogensíranu sodného (hodnota pH je 1) a extrahoval se s terc-butylmethyletheem (3 x 70 ml). Organické fáze se kombinovaly a sušily za použití síranu hořečnatého. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu za vzniku 1,05 g kyseliny (2E)45 54terc-butoxykarbonylamino)-5-methylhex-2-anové. Surový produkt se použil k další syntéze.

-35CZ 299648 B6

H-NMR (DMSO d₆): d 1,15 (s, 6H), 1,35 (s, 9H), 2,53 (d, 2H), 5,75 (d, ÍH), 6,57 (br, ÍH), 6,75 (td, IH), 12,15 (s,lH).

-aza-spiro[3,3 ] heptan-2-on

Methylencyklobutan (40 g, 0,587 mol) se rozpustil v diethyletheru (250 ml). Při teplotě -40 °C se po kapkách přidal chlorsulfonylisocyanát (26 ml, 0,294 mol). Reakční směs se zahřála na teplotu ίο 10 °C, Došlo k exotermní reakcí a vytvořila se sraženina. Reakční směs se ochladila na teplotu 20 °C. Směs se míchala po dobu 16 hodin, zatímco se zahřívala na teplotu místnosti. Po kapkách se přidal saturovaný vodný roztok siřičitanu sodného (100 ml). Reakční směs se míchala po dobu jedné hodiny. Dále se přidal jiný saturovaný vodný roztok siřičitanu sodného (100 ml). Přidal se pevný hydrogenuhličitan sodný, až hodnota pH byla 7. Dále se přidal dichlormethan (500 ml).

Fáze se oddělily. Organická vrstva se sušila za použití síranu hořečnatého. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu za vzniku 23,59 g l-aza-spiro[3,3]heptan-2-onu.

'H-NMR (CDClj): d 1,75 (m, 2H), 2,26 (m, 2H), 2,39 (m, 2H), 2,96 (s, 2H), 6,55 (br, 1H).

terc-butylester xylové kyseliny 2-oxo-l-azaspiro[3,3]heptan-l-karboxylové ch₃

K roztoku l-aza-spiro[3,3]heptan-2-onu, triethylamínu (36 ml, 0,255 mol), a 4-dimethylamino25 piperidinu (2,6g, 0,021 mol) v dichlormethanu (100 ml) se po kapkách přidal roztok di-tercbutyldikarbonátu (55,7 g, 0,211 mol) v dichlormethanu (100 ml). Reakční směs se míchala po dobu 16 hodin při teplotě místnosti. Promyla se 10% vodným roztokem chloridu amonného (100 ml), vodou (100 ml) a saturovaným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml). Organická fáze se sušila za použití síranu hořečnatého. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu za vzniku

48,24 g surového terc-butylester kyseliny 2-oxo-l -azaspiro[3,3]heptan-l~karboxylové, který se použil v dalším kroku, aniž se čistil.

‘H-NMR (CDClj): d 1,55(s, 9H), l,78(m, IH), l,92(m, IH), 2,l8(m, 2H), 2,90(m, 2H), 3,04 (s, IH).

kyselina (1 -(terc-b utoxy karbony lam i no)cykl ob utyl)octová

H.

OH

-36CZ 299648 B6

K roztoku terc-butylesteru kyseliny 2-oxo-l-azaspiro[3,3]heptan-l-karboxylové (48 g, 0,227 mmol) v tetrahydrofuranu (200 ml) se přidal IN vodný roztok hydroxidu litného (227 ml, 227 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 2 hodin. Dále se přidal diethylether (200 ml) a voda (200 ml). Reakční směs se míchala po dobu 16 hodin. Izolovala se organická fáze. Vodná fáze se extrahovala diethyletherem (200 ml). Vodná fáze se okyselila 10% vodným roztokem hydrogensíranu sodného až se dosáhlo pH hodnoty 3. Vytvořená sraženina se odfiltrovala, promyla se vodou a sušila se ve vakuu za vzniku 38,84 g kyseliny (l-(terc-butoxykarbony 1amino)cyklobutyl)octové.

‘H-NMR (CDCh): d 1,45 (s,9H), 1,85 (m, 1H), 1,95 (m, 1H),2,25 (m, 4H), 2,87 (m, 2H), 5,15 a 6,20 (oba br, dohromady 1H).

kyselina (2L)-4-(l-(terc-butoxykarbonylamino)cyklobutyl)but-2-anová

Kyselina (2E)-4-(l™(terc-butoxykarbonylamÍno)cyklobutyl)but-2-anová se syntetizovala za použití kyseliny (l-(terc-butoxykarbonylamino)cykIobutyl)but-2-anové jako počáteční materiál analogicky se syntézou kyseliny (2E)-5^(terc-butoxykarbonylamino)-5-methylhex-2-anové, kde se jako počáteční materiál používá 3-terc-butoxykarbonyl-amino~3-methylbutanová kyselina.

'H-NMR (CDC1₃): d 1,43 (s, 9H), l,84(m, 1H), 1,95 (m, 1H), 2,IO(m, 2H), 2,20(m, 2H),

2,70 (m, 2H), 4,75 (br, 0,5H), 5,90 (m, 1H), 6,35 (br, 0,5H), 6,95 (m, 1H).

ethy lester kyseliny (2E)-5-(terc-butoxykarbonylamino-3,5-dimethylhex-2-anové

CH,

Diacetoaminhydrogenoxalát (30 g, 146 mmol) se suspendoval v tetrahydrofuranu (400 ml). Přidal se vodný roztok hydroxidu sodného (IN, 146 ml). Di-terc-butyldikarbonát (38,3 g, 175 mmol) se rozpustil v tetrahydrofuranu (100 ml) a po kapkách se přidával do reakční směsi. Reakční směs se míchala po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Přidal se hydroxid sodný (IN,

146 ml) a reakční směs se míchala po dobu 12 hodin při teplotě místnosti. Přidala se voda (200 ml) a ethylacetát (200 ml). Vodná fáze .se extrahovala ethylacetátem (4 x200 ml). Kombinované organické fáze se sušily za použití síranu hořečnatého a rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Zbytek se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (200 g) za použití ethylacetátu/heptanu (1:3) jako eluentu. Získalo se 28,4 g terc-butylesteru kyseliny (l,Í-dimethyl-3-oxo40 butyl)karbamové. Triethylfosfonoacetát (4,7 g, 20,9 mmol) se rozpustil v tetrahydrofuranu (36 ml). Přidal se terc-butoxid draselný (2,3 g, 20,9 mmol) a reakce se míchala po dobu 40 minut při teplotě místnosti. Terc-butylesteru kyseliny (l.l-dimethyI-3-oxobutyl)karbamové (2,5 g, 11,6 mmol) se rozpustil tetrahydrofuranu (15 ml) a přidal se po kapkách do reakční směsi, která se po dobu 12 hodin zahřívala na výtoku. Přidal se ethylacetát (100 ml) a kyselina chlorovodíko45 vá (IN, 100 ml) a oddělily se jednotlivé fáze. Vodná fáze se extrahovala ethylacetátem (3 x 50 ml). Kombinované organické fáze se promyly vodným roztokem hydrogenuhličitanu

-37CZ 299648 B6 sodného (saturovaného, 100 ml), sušily se za použití síranu hořečnatého a odpařily se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (120 g) za použití ethylacetátu/heptanu (1:2) jako eluentu. Získalo se 2,0 g ethylesteru kyseliny (2E)-5-terc-butoxykarbonylamino-3,5dimethylhex-2-anové.

'H-NMR (CDCb) d 1,25 (t, 3H), 1,30 (s, 6H), 1,44 (s, 9H), 2,21 (s, 3H), 2,58 (s, 2H), 4,14 (q, 2H), 4,48 (s, 1H), 5,65 (s, 1H).

kyselina (2E)-5-terc-butoxykarbonylamino-3,5-dimethylhex-2-anová.

h₃c h₃c ch₃ oh,c ch₃ch₃ o

H

OH

Ethylester kyseliny (2E)-5-terc-butoxykarbonylamino-3,5-dimethylhex-2-anové (1,95 g, 6,83 mmol) se rozpustil v 1,4-dioxanu (25 ml) a vodě (15 ml). Přidal se hydroxid litný (0,18 g,

7,52 mmol) a směs se míchala po dobu 12 hodin při teplotě místnosti. Přidala se voda (150 ml) a terc-butyl-methylether (150 ml). Vodná fáze se ředila 10% vodného roztoku v hydrogensíranu sodného až pH dosáhlo hodnoty 2,5 a extrahovala se terc-butylmethyletherem (3 x 100 ml). Kombinované organické fáze se sušily za použití síranu hořečnatého a odpařily se ve vakuu. Zbytek se rekrystalizoval z heptanu (20 ml) a vzniklo 0,6 g kyseliny (2E)-5-terc-butoxykarbo20 nylamino-3,5^-dimethylhex-2-anové.

'H-NMR (CDCb) d 1,29 (s, 6H), 1,44 (s, 9H), 2,23 (s, 3H), 2,62 (s, 2H), 4,45 (s, 1H), 5,66 (s, 1H).

kyselina (2 E)-5-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino-5-methylhex-2-anová

Kyselina (2E)-5-(terc-butoxykarbonylamino-5-methylhex-2-anová (5,0 g, 20,6 mmol) se roz30 pustila v tetrahydrofuranu (70 ml), Přidal se methyljódid (10,3 ml, 164 mmol) a roztok se ochladil na teplotu 0 °C. Po částech se přidával hydrid sodný (60 % v oleji) (2,07 g, 61,6 mmol) a roztok se míchal při teplotě místnosti po dobu 4 dní. Po kapkách se přidal ethylacetát (70 ml) a voda (60 ml) a rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se rozpustil ve vodě (40 ml) a etheru (40 ml). Organická fáze se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (30 ml). Vodné fáze se smíchaly a přidala se 5% vodná kyselina citrónová až se dosáhlo pH hodnoty 3. Vodná fáze se extrahovala ethylacetátem (4 x 50 ml). Organická fáze se promyla vodou (2 x 40 ml), vodným roztokem thiosíranu sodného (5%, 40 ml), vodou (40 ml), sušila se za použití MgSO₄ a rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Zbytek se rozpustil v ethylacetátu (45 ml) a promyl se vodným roztokem hydrogensíranu sodného (10 %, 3 x30 ml), sušil se za použití

MgSO₄ a koncentrace se zvýšila ve vakuu za vzniku 4,0 g kyseliny (2E)-5-(N-(terc-butoxykarbonyl}-N-me-thylamÍno-5-methylhex-2-anové.

'H-NMR (CDCb) δ 1,38 (s, 6H), 1,45 (s, 9H), 2,80 (d, 2H), 2,85 (s, 3H), 5,88 (d. 1H), 7,01 (q, 1H).

-38cz 299648 B6

Příklad 1:

N-((1 R)—1—{N—[(1 R)-l-benzy 1-2-( 4-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]N-methy]karbamoyl}-2-(2-nafíyI)ethyl)-N-rnethylamid kyseliny (2E)-5-amino-5-methylhex5 2-anové kyseliny

terc-butylester kyseliny 4-(dÍmethylkarbamoyl)piperidin-l~karboxylové

l-(terc-butoxykarbonyl)pÍperidin-4-karboxylová kyselina (8,0 g, 35 mmol) se rozpustila v dichlormethanu (70 ml) a N,N-di-methylformamidu (35 ml). Přidal se l-hydroxy-7-azaben15 zotriazol (4,75g, 35 mmol). Roztok se ochladil na teplotu 0 °C. Přidal se hydrochlorid N-(3dimethylaminopropyl)-N'-ethylkarbodiimidu (6,69 g, 35 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 20 minut při teplotě 0°C. Přidal se 5,6 M roztok dimethylaminu v ethanolu (37 ml, 209 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 3 dní, zatímco se zahřála na teplotu místnosti. Reakční směs se ředila ethylacetátem (400 ml) a promyla se 10 % vodným roztokem hydrogen20 síranu sodného (400 ml). Vodná fáze se extrahovala ethylacetátem (2 x 200 ml). Kombinované organické vrstvy se pak prómylý saturovaným vodným roztokem hydrogen uhličitanu sodného (300 ml) a sušily se síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatograficky na oxidu křemičitém (300 g) za použití směsi dichlormethanu/methanolu v poměru 20:1 jako eluentu. Vzniká 4,56 g terc-butylesteru kyseliny 4-(dimethyl25 karbamoyl)piperidin-l-karboxylové.

'H-NMR (CDCb) δ 1,47 (s, 9H), 1,70 (m, 4H\ 2,60-2,90 (m, 3H), 2,96 (s,3H), 3,08 (s, 3H), 4,17 (m,2H).

terc-butylester kyseliny 4-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-karboxylové

-3QCZ 299648 B6

K suspenzi borohydridu (1,61 g, 43 mmol) v tetrahydrofuranu (80 ml) se přidal po kapkách při teplotě 0 ^ĎC roztok tercbutyl ester kyseliny 4-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-karboxylové. Reakční směs se míchala po dobu 20 minut při teplotě 0 °C. Při teplotě 0 °C se přidal po kapkách roztok jódu (4,51 g, 18 mmol) v tetrahydrofuranu (80 ml). Reakční směs se na výtoku zahřívala po dobu 16 hodin. Pak se vše ochladilo na teplotu 4 °C. Po kapkách se přidal methanol (200 ml). Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Zbytek se rozpustil ve 20% vodném roztoku hydroxidu sodného (200 ml) a terc-butyl methyl etheru (150 ml). Oddělily se jednotlivé fáze. Vodná fáze se extrahovala terc-butylmethyletherem (3 x 100 ml). Kombinované organické fáze se sušily na síranu horečnatém. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (100 g) za použití směsi dichlormethanu/methanolu/25% vodného čpavku v poměru (100:10:1) jako eluentu za vzniku 4,07 g terc-butylesteru kyseliny 4-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-karboxylové.

'H-NMR (CDClj) δ 1,22 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,85 (d, 2H), 2,09 (m, 1H), 2,61 (s, 6H), 2,65 (m, is 2H), 2,78 (t, 2H), 4,05 (d, 2H).

N,N-dimethyl-N-((piperidin-4-yl)rnethyl)amin

K roztoku terc-butylesteru kyseliny 4-((dimethylamÍno)methyl)piperidin-l-karboxylové (2,0 g, 14 mmol) v ethylacetátu (50 ml) se přidal 3 M roztok hyrdogenchloridu v ethylacetátu (120 ml, 360 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 30 minut při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu za vzniku 2,3 g surové dihydrochloridové soleN,N-dimethyl-N-((piperÍdin25 4-yl)methyl)aminu, použil bez dalšího čištění v dalším kroku.

'H-NMR. (CDCb, selektivní hodnoty): δ 1,48 (m, 2H), 1,92 (s, 6H), 3,22 (d, 2H).

terc-butylester kyseliny N-[(lR)-l-benzyl-2-(4-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-yl)~2- 30 oxoethyl]-N-methylkarbamové

K roztoku (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-'N-methylamÍno)-3-fenylpropionové kyseliny (1 až 69 g, 6,04 mmol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,822 g, 6,04 mmol) v dichlormethanu (25 ml) a Ν,Ν-dimethyl formám idu (12 ml) se přidal při teplotě 0 °C hydrochlorid N-(335 dimethylaminopropyl)-N'-ethylkarbodiimidu (1,158 g, 6,04 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 20 minut při teplotě 0 °C. Přidal se roztok surové dihydrochloridové sole N,N-dimethyl-N((piperidin-4-yl)methyl)aminu. (1,3 g, 6,04 mmol) v N,N-dimethylformamidu (10 ml) a dichlormethanu (5 ml) a ethyldiisopropylaminu (6,2 ml, 36,25 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 16 hodin, zatímco se zahřívala na teplotu místnosti. Reakční směs se ředila ethylacetá40 tem (100 ml) a promyla se saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml). Organická vrstva se sušila za použití síranu horečnatého. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (100 g)za použití směsi dichlormethanu/methanolu/25 % vodného roztoku amoniaku v poměru 200:10:1 jako eluentu, přičemž vzniká 1,22 g terc-butylester kyseliny N-[(lR)-l-benzyl-2-(4-((dimethyl45 amino)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyI]-N-methylkarbamové.

.an _ 'H-NMR (CDCI3, selektivní hodnoty): 5 1,28, 1,11, 1,37 a 1,38 (všechny hodnoty jsou s, společně 9H) 4,00 (m, 1H), 4,57 (m, 1H), 4,97 a 5,28 (obě hodnoty jsou t, společně 1H), 7,10 až 7,40 (m, 5H).

MS: 404 [M+l]⁺.

(2R)-l-(4-((dimethyIamino)methyl)piperidin-l-yl)metby,amino)-3-fenylpropan-l-on

K roztoku terc-butylester kyseliny N-[(lR)-l-benzyl-2-(4~((dimethy]amino)methy])piperidinl-yI)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamové se při teplotě 0 °C přidala kyselina trifluoroctová (1,22 g, 3,02 mmol) v dichlormethanu (20 ml). Reakční směs se míchala po dobu 1 hodiny při teplotě 0 °C. Rozpouštědla se odstranila ve vakuu. Zbytek se rozpustil v dichlormethanu (70 ml) a rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu, což se opakovalo dvakrát. Surový produkt se čistil chromatografíí za použití oxidu křemičitého (100 g) za použití roztoku směsi dichlormethanu/methanoIu/25% vodného amoniaku v poměru 100:10:1 za vzniku 659 mg (2R)-l-(4((dimethyIamino)methyl)piperidin-l-yl)methylamino)-3-fenylpropan-l-onu.

'H-NMR (CDCI3, selektivní hodnoty): δ 0,91 a 1,47 (m a d, společně 1H), 1,27 (m, 1H), 4,62 (t, 1H).

terc-butylester kyseliny N-((lR>~l-{N-[(lR)-l-benzyl-2-(4-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2~naftyl)ethyl)-N25 methylkarbamové

K roztoku kyseliny (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3-(2-naftyl}’propio30 nové (715 mg, 2,17 mmol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (296 mg, 2,17 mmol) v dichlormethanu (20 ml) a N,N-d i methyl formám idu (10 ml) se přidá při teplotě 0 °C hydrochtorid N-(3-dimethyIaminopropyl)-N'-ethylkarbo-diimidu (416 mg, 2,17 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 20 minut při teplotě 0 °C. Přidal se roztok (2R)-l~(4-((di-methylamino)methyl)piperidin-l-yl)-2-(methylamino)-3-fenyl-propan-l-onu v dichlormethanu (10 ml) a Ν,Ν-dimethylformamidu (5 ml) a ethyldiisopropylaminu (0,56 ml, 3,26 mmol).

-41 CZ 299648 B6

Reakční směs se míchala po dobu 16 hodin, zatímco se zahřála na teplotu místnosti. Reakční směs se naredíla ethylacetátem (100 ml) a promyla se saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml). Vodný roztok se extrahoval ethylacetátem (3 x 50 ml). Kombinované organické vrstvy se sušily za použití síranu horečnatého. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu.

Surový extrakt se čistil chromatograficky za použití oxidu křemičitého (80 g) a směsi ethylacetátu/heptanu/triethy laminu v poměru 1:1:0,08 jako eluentu za vzniku 1,05 g terc-butylester kyseliny N-((lR)-l-{N-[(lR)-l-benzyl-2-(^zH(dimethylamino)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyI]-N-methylkarbamoyI}—2-(2-naftyl)ethyl)-N-methyl-karbamové.

io 'H-NMR (CDC1₃, selektivní hodnoty): δ 1,24 a 1,42 (obě hodnoty odpovídají s, společně 9H), 5,04, 5,28, 5,44, 5,54, 5,73 (m, dd, dd, dd a m, společně 3H).

(2R)-N-[(1 R)-l-benzy 1-2-( 4-((dimethy lam ino)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-Nmethyl-2-(niethylamino)-3-(2-naftyl)propionamid

K roztoku terc-butyl esteru kyseliny N-((lR)-l-{N-[(lR)-l-benzyi-2-(4-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methy[karbamoyl}-2-(2“naftyl)ěthyl)-N20 methylkarbamové (1,05 g, 1,71 mmol) v dichlormethanu (18 ml) při teplotě 0 °C se přidala kyselina trifluoroctová. Reakční směs sě míchala po dobu 50 minut při teplotě 0 °C. Rozpouštědla se odstranila ve vakuu. Zbytek se rozpustil v dichlormethanu (50 ml) a rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu, což se opakovalo dvakrát. Surový produkt.se čistil,chromatografíí na oxidu křemičitém (80 g) za použití směsí dichlormethan/methanol/25% vodný roztok amoniaku jako eluentu za vzniku 846 mg (2R)-N-[(1R)-l~benzyl-2-(4-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-yl)-2~-oxoethyl]-N-methyl~2-(methylamino)-3-{2-naftyl)propÍonamidu.

^lH-NMR (CDCI₃, selektivní hodnoty): δ 0,60 (m, IH), 4,38 (t, IH), 5,72 a 5,79 (obě hodnoty odpovídají t, společně 1H).

terc-butylester kyseliny {(3E)-4-[N-((lR)-l-{N-[(lR)-l-benzyl-2-(4-((dimethylamino)methyl)pÍperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ěthyl)-Nmethylkarbamoyí]-lJ-dimethylbut-3-enyl}karbamové

-42CZ 299648 B6

K roztoku kyseliny (2E)-5-(terc-butoxykarbonylamÍno)-5-methylhex-2-anové (142 mg, 0,58 mmol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (79 mg, 0,58 mmol) v dichlormethanu (10 ml) a

N,N-dimethylformamidu (5 ml) se přidal roztok hydrochloridu N-(3-diineth\laminopropyl)-N'ethyl-karbodiimidu (112 mg, 0,58 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 20 minut při teplotě 0^ĎC. Přidal se roztok (2R)-N-[(lR)-l-benzyl-2-(4-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-yl)2-oxoethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naftyI)propionamidu (300 mg, 0,58 mmol) v dichlormethanu (5 ml) a Ν,Ν-dimethylformamidu (5 ml) a ethyldiisopropylaminu (10 ml,

0,58 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 3 dní, zatímco se zahřívala na teplotu místnosti.

Reakční směs se ředila ethylacetátem (70 ml) a promyla se saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (70 ml). Vodná fáze se extrahovala ethylacetátem (3x50 ml). Kombinované organické vrstvy se sušily za použití síranu horečnatého. Rozpouštědla se odstranila ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (70 g) za použití směsi dichlormethan/methanol/25% vodný roztok amoniaku v poměru 200:10:1, jako eluentu za vzniku 313 g terc-butyl esteru kyseliny {(3E)^-[N-((lR)-l~{N-[(lR)-l-benzyl-2-(4((dimethylamino)methyl)piperÍdin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methyIkarbamoyl]-l, l-dimethylbut-3-enylj karbamové.

'H-NMR (CDCř, selektivní hodnoty): δ 1,28 a 1,30 (obě hodnoty odpovídají s, společně 6H), 1,42 (s, 9H), 2,23, 2,27, 2,38, 2,43, 2,51, 2,52, 2,81 a 2,82 (všechny hodnoty odpovídají s, společně 12H), 5,56, 5,76 a 5,90 (m, m a dd, společně 2H), 6,17 a 6,19 (obě hodnoty odpovídají dd,

- společně IH), 6,94(m, IH). \

K roztoku terc-butylesteru kyseliny {(3E)-4-[N-(( IR)— 1—{N—[(1 R)-l-benzyl-2-(4-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkařbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-“Nmethylkarbamoyl]-l,l-dimethylbut-3-enyl}karbamové (212 mg, 0,29 mmol) v dichlormethanu (6 ml) se přidala při teplotě 0 °C kyselina trifluoroctová (6 ml). Reakční směs se míchala po dobu 20 minut při teplotě 0 °C. Reakční směs se naředila dichlormethanem (30 ml). Po kapkách se přidával saturovaný vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (30 ml). Pak se přidal pevný hydrogenuhličitan sodný až se dosáhlo pH hodnoty 7. Oddělily se jednotlivé fáze. Vodná fáze se extrahovala dichlormethanem (3 x 50 ml). Kombinované organické vrstvy se sušily za použití síranu horečnatého. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (20 g) za použití směsi dichlormethan/methanol/25% vodný roztok amonia35 ku v poměru 100:10:1 jako eluentu za vzniku 5 mg sloučeniny uvedené v názvu.

'H-NMR (CDC1_3i selektivní hodnoty): δ 1,20 (s, 6H), 2,28, 2,32, 2,41, 2,49, 2,56, 2,57, 2,82 a 2,83 (všechny hodnot, odpovídají s, společně 12H), 5,58, 5,78 a 5,92 (m, m a dd, společně 2H), 6,16 a 6,19 (obě hodnoty odpovídají d, společně 1H), 7,00 (m, IH).

-43CZ 299648 B6

HPLC: 39,23 min. (Al).

41,55 min. (Bl).

MS: 640,4 [M+lf

V případě biologického testování se sloučenina uvedené v názvu převedla na svou acetátovou sůl lyořilizací s 0,5 M kyselinou octovou (40 ml).

Příklad 2:

N-(( 1 R)-l -{N-[(l R)-l -benzyl-2-{(3S)-34dimethylaminomethyl)piperidin-l -yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-515 methylhex-2-anové

l-terc-butylester-3-ethylester kyseliny (3 R)—piperidin— 1,3-dikarboxylové

(R)-ethylnipetkotáttartarát (10,0 g, 32,5 mmol) se suspendoval v tetrahydrofuranu (90 ml). Přidal se IN roztok hydroxidu sodného ve vodě (98 ml, 98 mmol). Přidal se roztok ditercbutyldikarbo25 nátu (7,10 g, 32,5 mmol) v tetrahydrofuranu (90 ml). Reakční směs se míchala po dobu 16 hodin při teplotě místnosti. Přidal se ethylacetát (400 ml). Reakční směs se promyla 10 % vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (400 ml). Vodný roztok se extrahoval ethylacetátem (2 x 200 ml). Kombinované organické vrstvy se promyly saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (200 ml) a sušily se za použití síranu horečnatého. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový extrakt produkt se Čistil chromatografií na oxidu křemičitém (90 g)

-44CZ 299648 B6 za použití směsi ethylacetát/heptan v poměru 1:4 za vzniku 4,13 g l-terc-butylester-3-ethylester kyseliny (3R)-piperidin-l,3-dikarboxylové. j 'H-NMR (CDCh): δ 1,27 (t, 3H), 1,48 (s, 9H), 1,54 (m, 1H), 1,62 (m, 1H), 1,73 (m, 2H), S

2,05 (m, 1H), 2,45 (m, 1H), 2,81 (m, 1H), 2,98 (br, 1H), 3,93 (m, 1H), 4,14 (q, 1H). J terc-butylester kyseliny (3R>~3-formylpiperidin-l-karboxylové .i

K roztoku l-terc-butylester-3-ethylester kyseliny (3R)-piperidin-l,3-dikarboxylové (4,13 g, 16,1 mmol) v diethyletheru (30 ml) se přidal 1,2 M roztok hydridu diisobuty 1 Hlinitého v toluenu (30,8 ml, 36,9 mmol) při teplotě -78 °Č. Reakční směs se míchala po dobu 2,5 hodin při teplotě 78 °C. Pak se po kapkách přidala voda (9,6 ml). Reakční směs se zahřála na teplotu místností. Sraženina se odstranila filtrací na celitu. Celit se promyl terc-butylmethyletherem (3 x 100 ml). Roztoky se slily a sušily se na síranu hořečnatém. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu za vzniku 1,94 g surového terc-butylesteru kyseliny (3R)-3-formylpiperidin-l-karboxylové, který se použije v dalším kroku, aniž se dále čistí.

‘H-NMR (CDCb): δ 1,45 (s, 9H), 1,67(m, 2H), 1,95 (m, 1H), 2,43 (m, 1H), 3,IO(m, 1H), 3,32 (dd, 1H), 3,52 (d, 1H), 3,66 (m, 1H), 3,95 (m, 1H), 9,69 (s, 1H).

terc-butylester kyseliny (3S)-3-(dimethylaminomethyl)piperidin-l-karboxylové

Připravil se roztok surového terc-butylester kyseliny (3 R)-3-formylpiperidin-l-karboxy lové (1,94 g, 9,1 mmol) v dichlormethanu (80 ml). Přidal se 5,6 M roztok dimethylaminu v ethanolu (3,2 ml, 18,2 mmol). Ktéto směsi se přidal triacetoxyborhydrid sodný (5,78 g, 27,3 mmol). Při30 dala se kyselina octová (1,04 ml, 18,2 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 16 hodin při teplotě místnosti. Dále se přidal IN vodný roztok hydroxidu sodného (70 ml) a terc-butylmethylester (70 ml). Oddělily se jednotlivé fáze. Vodný roztok se extrahoval terc-butylmethylesterem (3 x 70 ml). Kombinované organické vrstvy se sušily za použití síranu horečnatého. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (40 g) za použití směsi dichlormethanu/methanolu/25% vodného roztoku amoniaku (100:10:1) jako

-45CZ 299648 B6 eluentu za vzniku 866 mg terc-butyle steru kyseliny (3S)-3-(dÍmethylaminomethyl)piperidin~lkarboxylové.

'H-NMR (CDCb): δ 1,10 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,45 (m, 1H), 1,64 (m, 2H), 1,85 (m, 1H), 5 2,10 (m, 2H), 2,20 (s, 6H), 2,50 (br, 1H), 2,79 (m, 1H), 3,95 (m, 2H).

N,N-dimethyI-N-(((3R)-piperidin-3-yl)methyl)amin

Terc-butylester kyseliny (3 S)-3-(dimethylaminomethyl)piperidin-l -karboxylové (1,25 g, 5,15 mmol) se rozpustil v ethylacetátu (30 ml).Přidal se 2,7 M roztok hydrogenchloridu v ethylacetátu (75 ml, 203 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 45 minut při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu za vzniku 976 mg surové dihydrochloridové sole N,N-dimethyl-N-(((3R)-piperidin-3-yl)methyl)aminu, který se použije v dalším kroku, aniž se dále čistí.

H-NMR (CDCb): δ 1,42 (m, IH), 1,86 (m, 1H), 2,00 (m, 2H), 2,38 (m, 1H), 2,85 (t, 1H), 2,95 (s, 6H), 2,98 (m, 1H), 3,16 (m, 2H), 3,42 (m, 1H), 3,53 (m, 1H).

Terc-butylester kyseliny N-[(lR)-t-benzyl-2-((3S)-3-(dimethylaminomethyl)piperidin-l-yl)2-oxoethyl]-N-methylkarbamové

²⁵

Hydrochlorid N-(3-dimethylaminopropyl)-N^,-ethylkarbodÍimid (870 mg, 4,54 mmol) se přidal při teplotě 0 °C k roztoku kyseliny (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3fenylpropionové (1,27 g, 4,54 mmol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (617 mg, 4,54 mmol) v dichlormethanu (20 ml) a N,N-dimethylformamidu (10 ml). Reakční směs se může míchat po dobu 20 minut při teplotě 0 °C. Přidal se roztok surové dihydrochloridové sole N,N-diinethyl-N(((3R)-piperidin-3-yl)methyl)aminu (976 mg, 4,54 mmol) v dichlormethanu (20 ml) a N,Ndimethylformamidu (10 ml) a ethyldiisopropylaminu (3,9 ml, 22,7 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 3 dní, zatímco se zahřívala na teplotu místnosti. Přidal se ethylacetát (300 ml). Roztok se promyl saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (300 ml). Vodná fáze se extrahovala ethylacetátem (2 x 200 ml), Kombinované organické vrstvy se sušily za použití síranu hořeěnatého. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatografií za použití oxidu křemičitého (90 g) a směsi dichlormethanu/methanolu/25% vodného roztoku amoniaku (100:10:1) jako eluentu za vzniku 1,69 g terc-butylesteru kyseliny N-[(1R)-1benzyl-2-((3S)-3-(dimethylaminomethyl)piperidÍn-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methyl-karbamové.

-4fiCZ 299648 B6 ‘H-NMR (CDC1_3j vybrané hodnoty): δ 1,20, 1,24, 1,31 a 1,32 (všechny hodnoty odpovídají s, společně 9H), 2,12, 2,13 a 2,18 (všechny hodnoty odpovídají s, společně 6H), 2,81 (m, 3H), 4,97 a 5,30 (všechny hodnoty odpovídají s, společně 1H), 7,05 až 7,35 (m, 5H).

(2R)-l~((3S)-3-((dimethylamino)methyl)piperidín-l-yI)-2-methylamino-3-fenylpropan-l-on

K. roztoku terc-butylesteru kyseliny N-[(lR)-l-benzyl-2-((3S)-3-(dimethylaminomethyl)10 píperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methyl-karbamové (1,69 g, 4,2 mmol) v dichlormethanu (25 ml) reakční směs se míchala po dobu 30 minut při teplotě 0 °C. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Zbytek se rozpustil v dichlormethanu (100 ml) a rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Poslední krok se dvakrát opakoval. Surový produkt se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (90 g) za použití roztoku směsi dichlormethanu/methanoIu/25% vodného amoniaku (100:10:1) jako eluentu za vzniku 1,15 g (2R)-l-{(3S)-3-((dÍmethylammo)methyl)piperidin-l-yl)-2methylamino-3-fenylpropan-l-onu.

*H-NMR (CDCI3, vybrané hodnoty): 6 0,38, 1,11, 1,37 a 1,65 (všechny hodnoty odpovídají m, společně 4H), 2,11, 2,19, 2,25 a 2,31 (všechny hodnoty odpovídají m, společně 9H), 4,37 a

4,53 (obě hodnoty odpovídají m, společně 1H), 7,10 až 7,35 (m, 5H).

terc-butylester kyseliny N-((lR)-l-{N-[(lR)-l-benzyl-2-((3S}-3-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamové

K. roztoku kyseliny (2R)-2~(N“{terc-biitoxykarbonyl)-N-methylamino)-3-(2-naftyl)-propÍonové (651 mg, 1,98 mmol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (269 mg, 1,98 mmol) v dichlormethanu (10 ml) a Ν,Ν-dimethylfcrmamidu (5 ml) se přidal při teplotě 0 °C hydrochlorid N-(330 dimethylaminopropyl)-N'-ethyÍkarbodiimidu (379 mg, 1,98 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 20 minut při teplotě 0 °C. Přidal se roztok (2R)-l-((3S)-3-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-yl)-2-methylamino-3-fenylpropan-1 -onu (600 mg, 1,98 mmol) v dichlormethanu

-Δ.Ί .

(10 ml) a ethyldiisopropylaminu (0,51 ml, 2,97 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 3 dní, zatímco se zahřívala na teplotu místnosti. Přidal se ethylacetát (100 ml). Roztok se promýval saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml). Vodná fáze se extrahovala ethylacetátem (3 x 50 ml). Kombinované organické vrstvy se sušily za použití síranu hořečnaté5 ho. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatografií za použití oxidu křemičitého (90 g) za použití směsi dichlormethanu/methanolu/25% vodného roztoku amoniaku v poměru 100:10:1 jako eluentu za vzniku 1,18 g terc-butylester kyseliny N-((IR)- 1—{N—[(1R)— l-benzyl-2-((3S)“3-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-242-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamové.

'H-NMR (CDC1_3j vybrané hodnoty): δ 0,45 a 0,71 (obě hodnoty odpovídají m, společně 1H), 1,03, 1,05, 1,15, 1,20, 1,28, 1,36 a 1,42 (všechny hodnoty odpovídají s, společně 9H), 2,12, 2,15, 2,21, 2,26, 2,29, 2,85 (všechny hodnoty odpovídají s, společně 6H), 5,05, 5,44, 5,58, 5,71, 5,85 a 6,00 (všechny hodnoty odpovídají s, společně 2H), 7,10 až 7,80 (m, 12H).

(2R)-N-[(lR)-l-benzyl-2-((3S)-3-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-Ninethyl-2-(methylamino)-3-(2-naftyl)propionamid

K roztoku terc-butylester kyseliny N-((lR-l-{N-[1R)-l-benzy]-2-((3S)-3~((dimethyIamÍno)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methyl-karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methyIkarbamové (1,18 g, 1,92 mmol) v dichlormethanu (20 ml) se přidala při teplotě 0 °C kyselina trifluorooctová (20 ml). Reakční směs se míchala po dobu 50 minut při teplotě 0 °C, Roz25 pouštědlo se odstranilo ve vakuu. Zbytek se rozpustil v dichlormethanu (80 ml) a rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Tento krok se opakoval dvakrát. Surový extrakt se čistil chromatografií za použiti oxidu křemičitého (40 g) a směsi dichlormethanu/methanolu/25% vodného roztoku amoniaku (100:10:1) jako eluentu za vzniku 788 mg (2R)-N-[(lR)-l-benzyl-2-((3S)-3-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethy1]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naftyl)propion30 amidu.

’Η-NMR (CDCb, vybrané hodnoty): δ 2,01 a 2,25 (obě hodnoty odpovídají s, společně 9H), 3,72 (m, 2H), 3,95 a 4,27 (obě hodnoty odpovídají m, společně 1H), 5,77, 5,86 a 6,03 (t, m a dd, společně 1H), 7,10 a 7,85 (m, 12H).

terc-butylester kyseliny {(3E)-A-[N-((lR)-l-{N-[(lR)-l-benzyl-2-((3S)-3-((dimethylamino)methylpíperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2--(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamoyl]-!, l-dimethylbut~3-anyl}karbamové

-48CZ 299648 B6

K roztoku (2E)-5-(terc-butoxykarbonylamino)-5-methylhex-3-anove (136 mg, 0,55 mmol) a

1- hydroxy-7-azabenzotríazolu (74 mg, 0,55 mmol) v dichlormethanu (5 ml) se přidal hydro5 chlorid N-(3-dimethylamínopropyl)-N^,-ethylkarbodiimidu (105 mg, 0,55 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 20 minut při teplotě 0 °C. Přidal se roztok (2R)-N-[(lR)-l-benzyl-2-((3S)3-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methy l-2-(methylamino)-3-(2naftyl)propionamidu (281 mg, 0,55 mmol) v dichlormethanu (5 ml) a N,N-dimethylformamidu (5 ml) a ethyldiisopropylaminu (0,094 ml, 0,55 mmol). Reakční směs se míchala po dobu to 16 hodin, zatímco se zahřívala na teplotu místnosti. Reakční směs se naředila ethylacetátem (70 ml) a promyla se saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (70 ml). Vodná fáze se extrahovala ethylacetátem (3 x 50 ml). Kombinované organické vrstvy se sušily za použití síranu horečnatého, Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatografií za použití oxidu křemičitého (40 g) a směsi dichlormethanu/methanolu/25% vodného roztoku amoniaku v poměru 100:10:1 jako eluentu za vzniku 398 mg terc-butyle steru kyseliny {(3 E)-4-[N-(( 1R)-1-{Ν-[( 1 R)-l-benzy 1-2-((3 S)-3-((dimethylamino)methylpiperidÍn-l-yl)~

2- oxoethy l]-N-methy lkarbamoyl }-2-(2-naftyl)ethy l)-N-methy Ikarbamoyl]-1,1 -dimethy lbut3- enyl}karbamové.

^lH-NMR (CDC1₃, vybrané hodnoty): δ 1,44 (s, 9H), 5,58, 5,75 a 5,86 (všechny hodnoty odpovídají m, společně 2H), 6,09 a 6,17 (obě hodnoty odpovídají d, společně IH), 6,84 (m, 1H), 7,10 až 7,80 (m, 12H).

K roztoku terc-butylesterv kyseliny {(3 E)-4-[N-((lR)-l-{N-[(lR)-l-benzy 1-2-((3 S)-3-((dÍ25 methyl am i no)methy lpiperidin-1 -yl)-2-oxoethyl]-N-methy lkarbamoyl }-2-(2-naftyl)ethy 1)-Nmethylkarbamoyl]-l,l-dimethylbut-3-enyl}karbamové (398 mg, 0,54 mmol) v dichlormethanu (7 ml) se přidalo při teplotě 0 °C kyselina trifluoroctová (7 ml). Reakční směs se míchala po dobu 40 minut při teplotě 0 °C. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Zbytek se rozpustil v dichlormethanu (20 ml) a rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu, což se opakovalo dvakrát. Surový pro30 dukt se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (40 g) za použití směsi dichlormethanu/methanolu/25% vodného roztoku amoniaku (100:10:1) jako eluentu za vzniku 150 mg sloučeniny uvedené v názvu.

'H-NMR (CDC1₃, vybrané hodnoty): δ 1,08, 1,12, 1,14 a 1,15 (všechny hodnoty odpovídají s, společně 6H), 5,46, 5,59, 5,75 a 5,94 ((všechny hodnoty odpovídají m, společně 2H), 6,15 (m, IH), 6,93 (m, IH).

HPLC 27,55 min. (Al).

30,23 min. (Bl).

LC-MS: 640,4[M+l]⁺ při 8,54 minut

-dQ .

V případě biologického testování se sloučenina uvedená v názvu převedla na svou acetátovou sůl lyofi li žací s 0,5 M kyseliny octové (40 ml).

Příklad 3:

N-((lR)-l-{N-[(lR)-l-benzy 1-2-((3 S)-3-(dimethylaniinomethyl)pÍperÍdin-1-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N~methy]amid kyseliny (2E)-4( 1-aminocykloio butyl)but-2-anové

terc-butylester kyseliny (l-{(2E)-3-[N-((I R)-l-{N-[(IR)-1-benzy 1-2-((3S)-34(dimethýl15 amino)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-tnethylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-Nmethylkarbamoyl]alyl}cyklobutyl)karbamové

K roztoku (2E)-5-(terc-butoxykarbonylamíno)-5-methy1hex-2-anové kyseliny (113 mg, 0,44 mmol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (60 mg, 0,44 mmol) v dichlormethanu (5 ml) a

N, N-dimethy1formamidu (5 ml) se přidal při teplotě 0 °C hydrochlorid N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylkarbodiimidu (85 mg, 0,44 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 20 minut při teplotě 0 °C. Přidal se roztok (2 R)-N-[( IR)-1-benzy 1-2-((3 S)-3-((d i methy lamin o)methyl)p i pe25 ridin-l-yI)-2-oxoethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naftyl)propionamídu (228 mg,

O, 44 mmol) v dichlormethanu (10 ml) a ethyldiisopropylamín (0,07 ml, 0,44 mmol). Reakční

- snCZ 299648 B6 směs se míchala po dobu 16 hodin, zatímco se zahřívala na teplotu místnosti. Reakční směs se ředila ethylacetátem (70 ml) a promyla se saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (70 ml). Vodná fáze se extrahovala ethylacetátem (3 x 50 ml). Kombinované organické vrstvy se sušily za použití síranu hořečnatého. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatografií za použití oxidu křemičitého (40 g) a dichlormethan u/methanolu/25%vodného roztoku amoniaku (100:10:1) jako eluentu za vzniku 314mg tercbutylester kyseliny (l-{(2£>3-[N-((lR)-l-{N-[(lR)-l-benzyl-24(3S)-34(dimethylamino)methyl)piperidirt-l-yl)-2--oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamoy 1] aly I} cyklobutyl)karbamové.

'H-NMR (CDC1₃, vybrané hodnoty): δ 1,40 (m, 9H), 4,22 a 4,67 (obě hodnoty odpovídají m, společně 2H), 5,60, 5,75, 5,85 a 5,90 (dd, dd, mam, společně 2H), 6,10 a 6,19 (obě hodnoty odpovídají d, společně 1H), 6,73 a 6,87 (obě hodnoty odpovídají m, společně 1H), 7,22, 7,42 a 7,76 (všechny hodnoty odpovídají m, společně 12H).

K roztoku terc-butylesteru kyseliny (1 -{(2E)-3-[N-(( 1 R)-l-{N-[(IR)- 1-benzy 1-2-((3S)-3((dimethylamino)methyl)piperidin-I-yl)-2-oxoethyl]-N-methyl-karbamoyI}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamoyl]alyl}cyklobutyl)karbamové (314 mg, 0,42 mmol) v dichlormethanu (7 ml) se přidala při teplotě 0 °C kyselina trifluoroctová (7 ml). Reakční směs se míchala po dobu

20 minut při teplotě 0 °C. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu, aniž se musela reakční směs zahřívat. Zbytek se rozpustil v dichlormethanu (20 ml) a rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Tento postup se opakoval dvakrát. Surový produkt se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (40 g) za použití dichlormethanu/methanolu/amoniaku v poměru (100:10:1) jako eluentu za vzniku 180 mg sloučeniny uvedené v názvu.

'H-NMR (CDCI3, vybrané hodnoty): δ 0,40 a 0,74 (obě hodnoty odpovídají m, společně 2 H), 3,73 a 4,22 (obě hodnoty odpovídají m, společně 1H), 6,85 a 6,96 (obě hodnoty odpovídají m, společně 1H), 7,22, 7,92 a 7,74 (všechny hodnoty odpovídají m, společně 12H).

HPLC: 28,03 min. (A 1).

29,92 min. (Bl).

MS: 652,4 [M+l]⁺

V případě biologického testování se sloučenina uvedla v názvu vynálezu převedla na svou diace35 tátovou sůl lyofilizací s 0,5 M kyselinou octovou (40 ml).

Příklad 4:

N—((1 R)~]“{N-[(lR)-l-benzy]-2-((2S)-2-(dÍmethy!-airiino)methyl)pirolidin-l-yl)-2-oxoethy1]-N-methylkarbamoyl }-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E>5-amino-5methylhex-2-anové

-51 CZ 299648 B6

l-terc-butylester-2-ethylester kyseliny (2 S )-pyro lid i η-1,2-d i karboxylová

N-terc-butoxykarbonylprolin (24,38 g, 113 mmol) se rozpustil v dichlormethanu (60 ml). Přidat se ethanol (7,9 ml, 135 mmol) a 4-dimethylaminopyridin (1,52g, 12,5 mmol). Roztok se ochladil na teplotu 0 °C. Přidal se hydrochlorid N-(3~dimethylaminopropyl)-N'-ethylkarbodiimidu ío (23,88g, 125 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 16 hodin, zatímco se zahřívala na teplotu místnosti. Přidal se ethylacetát sodný (400 ml). Promyl se 10% vodným roztokem hydrogensíranu sodného (300 ml). Vodná fáze se extrahovala ethylacetátem (3 x 200 ml). Kombinované organické vrstvy se promyly saturovaným vodným roztokem hydrogenuhliěitanu sodného (300 ml) a sušily se za použití síranu hořečnatého. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatografií za použití oxidu křemičitého (400 g) a ethylacetátu v poměru 1:4 jako eluentu za vzniku 17,11 g l-terc-butylester-2-ethylesteru kyseliny (2S)-pyrolidín~l,2-dikarboxylové. ..... ......

'H-NMR (CDC1₃, vybrané hodnoty): δ 1,28 (m, 3H), 1,43 a 1,46 (obě hodnoty odpovídají s, 20 společně 9H), 2,95 (m, 3H), 2,22 (m, 1H), 3,50 (m, 2H), 4,18 a 4,30 (m a dd, společně 3H).

N-t“butyloxykarbonyl-(S)-prolinal

-52CZ 299648 B6

K roztoku I-terc-butylester-2-ethylester kyseliny (2S)-pyrolidin-1,2-dikarboxylové (4,02 g, 16,5 mmol) v diethyletheru (15 ml) se přidal 1,2 M roztok hydridu diisobutylhlinitého (31,7 ml, 38 mmol) v toluenu při teplotě -78 °C. Reakční směs se míchala po dobu 3 hodin při teplotě 78 °C. Přidala se po kapkách voda (9,9 ml). Reakční směs se zahřála na teplotu místnosti. Směs se filtrovala skrz celit. Celit se promyl terc-butylmethyletherem (3 x 100 ml). Kombinované organické vrstvy se sušily na síranu hořečnatém. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu za vzniku 2,34 g surového N-t-butyloxykárbonyl-(S}-prolinalu, který se použil v dalším kroku, aniž se čistil.

io ^]H-NMR (CDCI3): 8 1,42 a 1,47 (obě hodnoty odpovídají s, společně 9 H), 1,70 až 2,20 (m, 4H),

3,20 až 4,30 (m, 3H), 9,45 a 9,55 (obě hodnoty odpovídají s, společně 1H). terc-butylester kyseliny (2S)-2-((dimethylamino)methyl)pyrolÍdÍn-l-karboxylové

Surový N-t-buty1oxykarbonyl-(S)-prolinaI (2,34 g, 11,7 mmol) se rozpustil v dichlormethanu (90 ml). Přidal se 5,6 M roztok dimethylaminu v ethanolu (4,19 ml, 23,5 mmol). Přidalo se 0,4 nm sloučeniny Molsieves (10,0 g). Dále se přidal triacetoxyborohydrid sodný (7,47 g,

35,2 mmol) a ledová kyselina octová (1,34 ml, 23,5 mmol). Reakční směs se míchala po dobu dní a filtrovala se přes celit. Celit se promyl ethanolem (150 ml). Přidal se IN vodný roztok hydroxidu sodného (150 ml) a terc-butylmethylether (150 ml). Fáze se od sebe oddělily. Vodná fáze se extrahovala terc-butylmethyletherem (3 x 100 ml). Kombinované organické vrstvy se sušily za použití síranu horečnatého. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (90 g) za použití roztoku směsi dichlormethanu/methanolu/25% vodného amoniaku (100:10:1) jako eluentu za vzniku 1,29 g terc-butylesteru kyseliny (2S)-2-((dimethylamino)methyl)pyrolidin-l-karooxylové.

- 'H-NMR (CDCI3): 8 1,48 (s, 9H), 1,90 (m, 4H), 2,15 ff2,23-(AB, 2H), 2,26 (s, 6H), 3,31 (br,

2H), 3,85(br, 1H).

N-dimethyl-N-(((2 S)-pyrol idin-2-yl)rnethylamin

2,7 M roztok hydrogenchloridu v ethylacetátu (75 ml, 202 mmol) se přidal do roztoku terc-butylesteru kyseliny (2 S)—2—((d imethy lam i no)m ethy l)pyro lid i n-1 -karboxy lové (1,29 g, 5,65 mmol) v ethylacetátu (30 ml). Reakční směs se míchala po dobu 30 minut při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu za vzniku 1,36 g surové dihydrochloridové sole N-dimethyl-N40 (((2S)-pyrolidin-2-yl)methyl)aminu, která se použila v dalším kroku, aniž se čistila.

-53CZ 299648 B6 'H-NMR (CDCb): δ 1,90(m, 2H), 2,l7(m, 1H), 2,40(m, IH), 2,90(m, 2H), 3,14 (s, 6H), 3,55 (m, 2H), 4,35 (m, 1H).

terc-butylester kyseliny N-[(l R)-l-benzyl-2-((2S)-2-((dÍmethylamino)methyl)pyrolidin-l-

K roztoku kyseliny (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3-fenylpropionové (1,89 g, 6,76 mmol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,92g, 6,76 mmol) v dichlormethanu (10 ml). Reakční směs se míchala po dobu 20 minut při teplotě 0 °C. Přidal se roztok surové díhydrochloridové sole N-dimethyl-N-“(((2S)-pyrolidin-2-yl)methyl)aminu (1,36 g, 6,76 mmol) v dichlormethanu (10 ml) a Ν,Ν-dimethylformamidu (10 ml) a ethyldiisopropylaminu (5,75 ml, 33,8 mmol). Reakční směs se míchala 16 hodin, zatímco se zahřívala na teplotu místnosti, a naředila se ethylacetátem (100 ml) a promyla se saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml). Vodná fáze se extrahovala ethylacetátem (3 x 80 ml). Kombinované organické vrstvy se sušily za použití síranu hořečnatého. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (90 g) za použití směsi dichlormethanu/methanolu/25% vodného roztoku amoniaku v poměru 100:10:1 jako eluentu za vzniku

2,26 g terc-butylesteru kyseliny N-[(lR)-l-benzyl-2-((2S)-2-((dÍinethylamino)methyl)pyrolidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamové.

¹ H-NMR (CDC1₃, vybrané hodnoty): δ 1,20, 1,33 a 1,37 (všechny hodnoty odpovídají s, společně 9H), 2,22 a 2,28 (obě hodnoty odpovídají s, společně 6H), 2,82 a 2,84 (obě hodnoty odpovídají s, společně 3H), 4,25 (m, 1H), 4,80, 5,11 a 5,30 (dd, t a m, společně 1H), 7,10 až 7,30 (m, 5H).

C₂₂H₃₅N₃O₃ [389,5]

Vypočtená C67, 83 H9, 06 N10, 79

.. Zjištěná . , .. C67, 39 H9, 13 N10, 73..... 30 (2R)-l-((2S)-2-((dimethylamino)methyl)pyrolidin-l-yl)-2-methyIamino-3-fenylpropan-l-on

K roztoku terc-butylesteru kyseliny N-[(lR}-3-benzyl-2~((2S)-2~((dimethyl-amino)methyl)pyrolidín-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamové (2,26 g, 5,80 mmol) v dichlormethanu (8 ml) se přidala kyselina trifluoroctové (8 ml) při teplotě 0 °C.Reakční směs se míchala po dobu 20 minut při teplotě 0 °C. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Přidal se dichlormethan (70 ml) a rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu, což se opakovalo dvakrát. Surový produkt se čistil

-54CZ 299648 B6 chromatografií na oxidu křemičitém (90 g) za použití směsi dichlormethanu/methanolu/25% vodného roztoku amoniaku v poměru 100:10:1 jako eluentu za vzniku 1,24 g (2R)-1-((2S)2-((dimethylamino)methyl)pyrolidin-l-yl)-2-methylamino-3“fenylpropan-l-onu.

‘H-NMR (CDCh, vybrané hodnoty): δ 2,33 (s, 3H), 2,43 (s, ÓH), 3,25 (m, 3H), 4,17 (m, 1H), 7,25 (m, 5H).

terc-butylester kyseliny N-((lR)-l-{N-[(IR)-1-benzy 1-2-((2S)-2-((dimethylamíno)methyl)pyro1idin-l-yl)“2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamové

K roztoku kyseliny (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3-fenylpropionové (911 mg, 2,76 mmol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolii (376 mg, 2,76 mmol) v dichlormethanu (5 ml) se přidal při teplotě 0 °C hydrochlorid N^(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylkarbodiÍmidu (530 mg, 2,76 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 20 minut při teplotě 0 °C. Přidal se roztok (2R)-l-((2S)-2-((dÍmethylamino)methyl)pyroltdin-l-yl)-2-methytamino-3-fenylpropan-l-onu (800 mg, 2,76 mmol) v dichlormethanu (5 ml) aN,N~dimethylformamidu (5 ml) a ethyldiisopropylaminu (0,71 ml, 4,15 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 3 dní, zatímco se zahřívala na teplotu místnosti, a ředila ethylacetátem (100 ml) a promyla se saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml). Vodný roztok se extrahoval ethylacetátem (3 x 70 ml). Kombinované organické vrstvy se sušily na síranu hořečnatém. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (90 g) za použití směsi dichloromethanu/methanolu/25% vodného roztoku amoniaku v poměru 200:10:1 jako eluentu za vzniku 1,37 g terc-buty lester kyseliny.N-((lR)-l-{N4(lR)-l-benzyl-2-((2S)-2((dimethylamino)methyl)pyrolidin-l-yl)-2-oxoethyI]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamové ‘H-NMR (CDC1₃, vybrané hodnoty): δ 0,64 (m, 1H), 1,10, 1,29, 1,36 a 1,47 (všechny hodnoty odpovídají s, společně 9H), 4,99, 5,09, 5,45 a 5,53 (t,t, mat, společně 2H), 7,10 až 7,90 (m,

12H).

(2R)-N-[(lR)-l-benzyl-2-((2S)-2-((dimethylamino)methyl)pyrolidin-1-yl)-2-oxoethyl]-Nmethyl-2-(methyIammo)-3-(2-naftyl)propionamidu.

-55CZ 299648 B6

K roztoku terc-butylesteru kyseliny N-((IR)—1—{N—[(IR)-1 -benzy 1-2-((2S)~2—((dimethyl5 amino)met]iyl)pyrolidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoy]}-2-(2-naftyl)ethyl}-Nmethylkarbamové (1,37 g, 2,28 mmol) v dichlormethanu (10 ml) pří teplotě 0 °C se přidala kyselina trifluoroctová (10 ml). Reakční směs se míchala po dobu 75 minut při teplotě 0 °C. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Zbytek se rozpustil v dichlormethanu (70 ml) a rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu, což se opakovalo dvakrát. Surový produkt se čistil chromatografií na oxidu ío křemičitém (90 g) za použití směsi dichlormethan/methanol/25% vodný roztok amoniaku v poměru 100:10:1 jako eluentu za vzniku 692 mg (2R)-N-[(lR)-1-benzyl-2—((2S)-2((dimethylamino)methyl)pyrolidin-l-yl)-2-oxoethyI]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2-naftyl)propionamidu.

’ H-NMR (CDCb, selektivní hodnoty) : δ 1,85 a 2,01 (obě hodnoty odpovídají s, společně 3H),

2,20 a 2,31 (obě hodnoty odpovídají s, společně 6H), 3,65 a 3,80 (obě hodnoty odpovídají t, společně IH), 4,04 a 4,45 (obě hodnoty odpovídají m, společně 1H), 5,60 a 5,91 (ť a dd, společně 1H), 7,10 až 7,90 (m, 12H).

terc-butylester kyseliny {(3 E)-4-[N~(( IR)- 1-{N-[1R>1 -benzy 1-2-((2 S)-2-((dÍmethy lam i no)methyl)pyrolidin-l-yl)-2-oxoethy1]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarba-

K roztoku kyseliny (2E)-5-(terc-butoxykarbonyIamino)-5-methylhex-2-anové (168 mg, 0,69 mmol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (94 mg, 0,69 mmol) v dichlormethanu (5 ml) se přidal roztok hydrochloridu N-(3-dimethylamÍnopropyl)-N'-ethylkarbodiimidu (132 mg, 0,69 mmol). Reakční směs se míchala po dobu 20 minut při teplotě 0 ^ŮC. Přidal se roztok (2R)-56CZ 299648 B6

N-[(lR)-]-benzy!-2-(4-((dirnethyl-amino)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methyl-2(methyl-amino)-3-(2“naftyl)propionamÍdu (345 mg, 0,69 mmol) v dichlormethanu (10 ml) a N,N-dimethyIformamidu (5 ml) a ethyldiisopropylaminu. Reakční směs se míchala po dobu 16 hodin, zatímco se zahřívala na teplotu místností. Reakční směs se ředila ethylacetátem (70 ml) a promyla se saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (70 ml). Vodná fáze se extrahovala ethylacetátem (3 x 50 ml). Kombinované organické vrstvy se sušily za použití síranu horečnatého. Rozpouštědla se odstranila ve vakuu. Surový produkt se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (40 g) za použití směsi dichlormethan/methanol/25% vodný roztok amoniaku v poměru 100:10:1 jako eluentu za vzniku 491 g terc-butylesteru kyseliny {(3E)-4-[N-((lR)-l10 {N-[(lR)-l-benzyl-2-((2S)-2-((dimethylamino)methyl)pyrolidin-l-yl)-2^xoethyl]-Nmethylkarbamoyl }-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamoyl]-], 1 -dimethylbut-3-anyl} karbamové.

’Η-NMR (CDCb, selektivní hodnoty): δ 1,30 a 1,32 (obě hodnoty odpovídají s, společně 6H),

1,45 (s, 9H), 1,60 (m, 2H), 4,0 (m, 1H), 4,48 (m, 1H), 5,48 (dd, 1H), 5,92 (dd, 1H), 6,11 a

6,20 (obě hodnoty odpovídají d, společně 1H), 6,82 a 6,92 (obě hodnoty odpovídají m, společně 1H), 7,10 až 7,90 (m, 12H).

K roztoku terc-butylesteru kyseliny {(3E)-4-[N-((lR)-l-{N-[(l R)-l-benzyl-2-((2S)-2-((di20 methy lamino)methy 1 )py rol id in— 1 -y l)-2-oxoethyl]-N-methy lkarbamoy 1 }-2—(2—naftyl)ethyl)—N— methy lkarbamoyl]-l,l-dimethylbut-3-anyl}karbamové (491 mg, 0,68 mmol) v dichlormethanu (7 ml) se přidala při teplotě 0 °C kyselina trifluoroctová (7 ml). Reakční směs se míchala po dobu 60 minut při teplotě 0 ^PC. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Zbytek se rozpustil v dichlormethanu (100 ml) a rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Postup se dvakrát opakoval. Surový produkt se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (40 g) za použití směsi dichlormethan/methanol/25% vodný roztok amoniaku v poměru 100:10:1 jako eluentu za vzniku 285 mg sloučeniny uvedené v názvu.

‘H-NMR (CDCIj, selektivní hodnoty): δ 0,55 (m, 1H), 1,11, 1,12 a 1,17 (všechny hodnoty odpo30 vídají s, společné 6H), 2,25 (s, 6H), 2,45 (s, 3H), 2,85 (s, 3H), 4,02 (m, 1H), 5,48 (dd, 1H), 5,80 a 5,93 (m a dd, společně 1H), 6,10 a 6,18 (obě hodnoty odpovídají d, společně 1H) , 6,87 a 7,00 (obě hodnoty odpovídají m, společně 1H), 7,10 až 7,90 (m, 12H),

HPLC: 27,97 min. (AI).

27,80 min.(Bl).

MS: 626,4[M+1]⁺

V případě biologického testování se sloučenina uvedené v názvu převedla na svou acetátovou sůl lyofilizací s 0,5 M kyselinou octovou (40 ml).

Příklad 5:

N-((l R)-1-{N-[(1 R)-]-benzyl-2-((2S)-2-((dimethylamino)mcthyl)pyrolidin-l-yl)-2-oxo45 ethyl]-N-methylkarbamoyl}~2-(2-nafiy])ethyl)-N-methyl-3-((methylamÍno)methyI)benzamid

-57CZ 299648 B6

\ / I \=/ ch₃ terc-butylester kyseliny N-{3-[N-((lR)-l-{N-[(lR)-l-benzyl-2-((2S)-2-((dimethylamino)methyl)pyrolidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarba5 moyljbenzyl }-N-methyl-karbamové

K roztoku kyseliny 3-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)benzoové (183 mg,

0,69 mmol) a l-hydřoxy-7-azabenzotriazolu (94 mg, 0,69 mmol) v dichlormethanu (5 ml) se přidal hydrochlorid N-(3-dimethylaminopropyl)-N’-ethylkarbodiimidu (132 mg, 0,69 mmol) při teplotě 0 °C. Rěakěhí směs se míchala po dobu 20 niinut při teplotě 0 °C. Přidal se roztok (2R>N-[( 1 R)-l benzy l-2-((2S}-2-((dÍmethy Iamino)methy l)piperidin-l-y l}-2-oxoethy 1]-Nmethyl-2-(methylamino)-3-(2-naftyl)propionamidu (345 mg, 0,69 mmol) v dichlormethanu (10 ml) a N, N-d i methyl formám i du (5 ml) a ethyldiisopropylaminu (0,118 ml). Reakční směs se míchala po dobu 16 hodin, zatímco se zahřívala na teplotu místnosti, Reakční směs se ředila ethylacetátem a promyla se saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (70 ml). Vodná fáze se extrahovala ethylacetátem (3 x 50 ml). Kombinované organické vrstvy se sušily za použití síranu horečnatého. Rozpouštědla se odstranila ve vakuu. Surový produkt se čistil chro20 matografíí na oxidu křemičitém (40 g) za použití směsi dichlormethan/methanoI/25% vodný roztok amoniaku v poměru 100:10:1 jako eluentu za vzniku 524 mg terc-butylester kyseliny N{3-[N-((l R)-1-{N-[(1 R)-l-benzy 1-2-((2 S)-2-((dimethy lam ino)me-thvl)py rol tdin-l-yl)-2oxoethyl]-N-methylkarbamoy]}^2-(2-na“ftyl)ethyl)-N-methylkarbamoyl]benzyl}-N-rnethyb karbamové.

'H-NMR (CDCb, vybrané hodnoty): δ 0,72 (m, 1H), 1,45 (br, 9H), 3,18 (br, 6H), 4,05 (m, 1H), 4,32 a 4,40 (obě hodnoty odpovídají br, společně 2H), 5,60 (dd, 1H), 5,95 (m, 1H), 6,80 až 6,90 (m, 16H).

-58CZ 299648 B6

K. roztoku terc-butylesteru kyseliny N-{3-[N~((lR)-l-{N-[(lR)-l-benzyl-2-((2S}-2-((dimethylamino)me-thyl)pyrolidin-l-yl}-2-oxoethyl]-N-rriethylkarbamoyl}-2-(2-na-fty])ethyl)N-methylkarbamoyl]benzyl}-N-methylkarbamové (523 mg, 0,70 mmol) v dichlormethanu (7 ml) se přidala kyselina trifluoroctová (7 ml) při teplotě 0 °C. Reakční směs se míchala minut při teplotě 0 °C. Rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Zbytek se rozpustil v dichlormethanu (90 ml) a rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Postup se opakoval dvakrát. Surový produkt se čistil chromatografií na oxidu křemičitém (40 g) za použití směsi dichlormethan/methanol/25% vodný roztok amoniaku v poměru 100:10:1 jako eluentu za vzniku 436 mg sloučeniny uvedené v názvu.

¹ H-NMR (CDCb, vybrané hodnoty): δ 0,87 (m, 1H), l,22(m, 1H), l,45(m, 1H), 1,67 (m, 1H), 4,09 (m, 1H), 5,53 a 5,90 (dd a m, společně 2H), 6,80 až 7,90 (m, 16H).

HPLC: 28,43 min. (A 1).

30,63 min. (B1)?

MS: 648,4[M+lf ^T

Příkladů: ,

N-(( 1 R)-l-{N-[( 1 R)~l-benz\l-2-(4-((dimethyIamino)-mcthyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5-methylhex2-anové

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem, jak se popisuje v příkladu 1 za použití hydrochloridové sole 4-(dimethylamino)piperidinu, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3-fenylpropionové kyseliny, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3fenylpropionové kyseliny a (2E)-5-(butoxykarbonyÍamino)-5“methylhex-2-anové kyseliny.

'H-NMR (CDCb, vybrané hodnoty): δ 1,40 (s, 6H), 2,00 (s, 6H), 4,42 až 4,85 (2H), 5,45 až 5,90 (m, 2H), 6,28 (dd, 1H), 6,85 (m, 1H), 7,10 až 7,85 (m, 12H).

MS(ES): m/z 626,2 (M+H)⁺

-59CZ 299648 B6

Příklad 7:

.j i

N-methyl-N-[(lR)-l-(N-methyl-N-{(lR)-l-[N-methyl-N-(l-methylpiperidin-4-yl)karbamoyl]-2-fenylethyl}-karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid kyseliny (2E)-5“amino-5-methyl5 hex-2-anové

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem, jako v příkladu 1 za použití l-methyl~4io (methylamino)piperidinu, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarboriyI)-N-methylamino)-3-(2-naftyl))propionové kyseliny a (2E)-5-(butoxykarbonylamÍno)-5-methylhex-2-anové kyseliny.

’Η-NMR (CDCb, vybrané hodnoty): δ 5,50 až 6,08 (m, 2H), 6,20 až 6,70 (m, 2H), 7,10 až 7,85 (m, 12H).

Příklad 8:

3-am i nomethyl-N-(( 1 R)-l-{N-[( 1R)—1 -benzy l~2-(4-methy lpiperazin-1 -yI)-2-oxoethyl]-N20 methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylbenzamid

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1 za použití N25 methylpiperazinu, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3~fenylpropionové kyseliny, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3-(2-naftyl))propionové kyseliny a 3-((terc-butoxykarbonylamino)methyl)benzoové kyseliny.

-60CZ 299648 B6 ’Η-NMR (CDC1₃, vybrané hodnoty): δ 3,30 (m, 1H), 3,50 (dd, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,95 (s, 2H), 5,78 (t, 1H), 3,88 (m, IH), 7,0 až 7,80 (16H).

HPLC: 24,55 minut (Al).

26,52 minut (Bl).

MS (ES): m/z = 606,4[M+H]⁺.

Příklad 9:

N-(( 1 R}-1-{N-[( 1 R)-1-benzyl-2-(4-methy]piperazin-I-yl)-2-oxoethyf]-N-methylkarbamoyl }-2-(2-naftyl)ethyl)-N-rnethy lamid kyseliny (2E)-5-amino-5-methylhex-2-anové

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu l za použití Nmethylpiperazinu, . (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3-fenylpropionové kyseliny, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3-(2-naftyl))propionové kyseliny a (2E)-5-(butoxykarbonylamino)-5-methylhex-2-anové ‘H-NMR (CDC1,, vybrané hodnoty): δ 1,24 (s, 6H), 1,65 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,80 (s, 3H), 5,68 (dd,¹1H), 5,78 (dd, 1H), 6,18 (dd, 1H), 6,95 (m, IH), 7,15 až 7,80 (m, 12H)/

HPLC: 25,03 minut (A 1).

27,50 minut (Bl).

M$(ES): m/z = 598,4[M+H]⁺.

PříkladlO:

N-methyl-N-(( 1 R)-l-{N-methyl-N-[(l R)-2-feny 1-1-((2,2,6,6-tetramethylp íperidin-4-yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)amid

-61CZ 299648 B6

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1 za použití 4-amino2,2,6,6-tetramethyl-piperidinu. (2 R)-2-(N-(terc-butoxykar bony I)-N-m ethyl amin o)-3-fenyl5 propionové kyseliny, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylaniino)-3-(2-naftyl))propionové kyseliny a (2E)-5-(butoxykarbonylamino)-5-methylhex-2-anové kyseliny 'H-NMR (CDCI3, vybrané hodnoty): δ 1,25 (s, 6H), 1,40 (dvé s, 6H), 1,52 (dvě s, 6H), 2,92 (s, 3H), 3,02 (dvě s, 3H), 5,10 až 5,50 (dd, 1H), 6,15 (d, 1H), 6,75 (m, 1H), 7,0 až 8,00 (m, 12H).

HPLC: 29,27 minut (AI).

31,67 minut (Bl).

MS (ES): m/z = 654, 8[M+H]⁺.

Příklad 11:

3-am inomethy l-N-methyl-N-(( l R)-l -{N-methyl-N-[( 1 R)-2-fenyl-l -(2,2,6,6-tetramethylpiperidin^l-yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)benzamid

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1 za použití 4-amino2,2,6,6-tetramethyl-piperidinu, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamÍno)-3-fenyl25 propionové kyseliny, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3-(2-na-ftyl))propionové kyseliny a 3-((terc~butoxykarbonylamino)methyl)benzoové kyseliny

-62CZ 299648 B6 'H-NMR (CDCb, vybrané hodnoty): δ 3,60 až 3,85 (m, 2H), 3,90 až 4,30 (m, 1H), 5,25 až 5,95 (m, 2H), 6,70 až 7,90 (m, 16H).

HPLC: 29,27 minut (A 1).

31,55 minut (Bl).

MS(ES): m/z = 662,4[M+H]⁺.

ίο Příklad 12:

N-methykN-((l R)-l-{N-methyl-N-[(] R )-2-fenyl-1-((2,2,6,6)-tetramethyl piperidin-4-yl )karbamoyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)amÍd kyseliny (2E)-5-amino-3,5-dimethylhex2-anové

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1 za použití 4-amino2,2.6,6-tetramethylpiperidinu, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3-feny]pro20 pionové kyseliny, (2R}-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3-(2~haftyl))propionové . kyseliny a (2E)-5-(butoxykarbonylamino)-3,5-methylhex-2-anové kyseliny 'H-NMR (CDCb,“vybrané hodnoty): δ 3,92 až 4,30 (m, 1H), 5,05 až 5,88(m, 3H), 7,0 až 7,80 (m, 12H).

HPLC: 29,80 minut (Al),

32,43 minut (Bl).

MS(ES): m/z = 668,4[M+Hf.

Příklad 13:

N-((l R)-1-{N-[(1 R)-l-benzy 1-2-( 4-methy!piperazin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-242-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2 E )-4-( l-aminocyklobutyl)but-2-anové . 63 _

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1 za použití N-methylpiperainu, (2R)-2-(N-(terc~butoxykarbonyl)-N-methylamÍno)-3~fenyfpropionové kyseliny, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3-(2-naftyl))propionové kyseliny a (2E>4-(l-butoxykarbonylamino)-cyklobutyl)but-2“anová kyselina 'H-NMR (CDCIa, vybrané hodnoty): δ 1,62 (s, H), 2,35 (s, 3H), 2,80 (s, 3H), 5,70 (dd, IH), 5,80(dd, lH),6,22(d, lH),6,98(m, 1H),7,15až7,80(m, 12H).

HPLC: 25,88 minut (AI).

28,65 minut (Bl).

MS (ES): m/z = 610,4[M+H]⁺Příklad 14:

N-(( 1R)-1 -{N~[( 1 R)-l -benzyl-2-(4-methy Ipiperazin- l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-3,5-dimethy]hex-2-anové

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1 za použití Nmethylpiperazinu, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3-fenylpropionové kyseliny, (2R)-2-{N-(terc-butoxykarbonyI)-N-metliylamino-3-(2-naftyl))propionove kyseliny a (2E)-5-(butoxykarbonylamino)-3,5-methylhex-2-anové kyseliny

-64CZ 299648 B6 ¹ H-NMR (CDClj, vybrané hodnoty): δ 1,18 (s, 6H), 1,68 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,85 (s, 3H), 3,40 (dd, 1H), 3,54 až 3,75 (m, 2H), 5,68 až 5,85 (m, 3H), 7,15 až 7,80 (m, 12H).

HPLC: 25,70 minut (AI).

8,27 minut (Bl).

MS (ES): m/z = 612,4[M+H]⁺.

Příklad 15:

N-(( 1 R)-l -{N-[(lR)-l-benzyl-2-{4-hydroxypiperidin-l-yl)-2“Oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(bifenyl-4-yl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-4-( l-aminocyklobutyl)but-2-anové

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1, přičemž se jako počáteční materiál použil 4-hydroxypiperidin, (2R)-(N-(terc-butoxykarbonyl-N-methylamino)-3-fenylpropionová kyselina, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino~-3-(bi20 fenyM-naftyl))propionová kyselina a (2E)-4-(l-(terc-butoxy-karbonylamino)cyklobutyl)but2-anová kyselina ESMS:637,4 (M+H)⁺

HPLC: r_t = 33,58 minut (AI).

HPLC: r_t = 34,95 minut (Bl).

Příklad 16:

N-(( 1 R)-1-{N-[(1 R)-l-betizyl-2-(4~hydroxypiperidin-l-yd )-2Oxoethy!]-N-methylkarbamoyl}-2-(bÍfenyl-4-yl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5-methylhex-2-anové

- 65 CZ 299648 B6

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1, přičemž se jako počáteční materiál použil 4-hydroxypiperidin, (2R)-(N-(terc-butoxykarbonyl-N-methylami5 no)-3-fenylpropionová kyselina, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamÍno^3-(bifenyM-naftyl))propionová kyselina a (2 E)-5-(terc-butoxy karbony lamí no-5-m ethyl hex-2-anová kyselina.

ESMS: 625,4 (M+H)⁺ io HPLC: r_t = 32, 65 minut (AI).

HPLC: r_t = 34,02 minut (Bl).

Příklad 17:

N-(( 1R)—1—{N—[(1 R)-l -benzy l-2-(4-hvdroxypiperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-{bifenyl-4-yl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-3,5-dimethylhex-2-anové

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1, přičemž se jako počáteční materiál použil 4-hydroxypiperidin, (2 R)-(N-(terc-b utoxy karbony 1-N-methylamino)-3-fenylpropionová kyselina, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl-N-methylamino-325 (bifenyl-4-naftyl))propionová kyselina a (2E)-5-(terc-butoxykarbonylamino-3,5-dÍmethylhex_

2-anová kyselina.

--66---CZ 299648 B6

ESMS: 639,4 (M+H)⁺

HPLC: r, = 33,29 minut (A 1).

HPLC: r_t = 36,40 minut (Bl).

Příklad 18:

N-(( 1 R)-1-{N-[(1 R)-l-benzyl-2-(4-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarba10 moyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2Efy5-amino-5-methylhex-2-anové

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1, přičemž se jako 15 počáteční materiál použil 4-hydroxypiperidin, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl-N-methylamino)-3-fenylpropionová kyselina, (2 R)-2~4N--( terc-butoxy karbony l-N-methy lam i no-3-(2naftyl))propionová kyselina a (2E)-5-(terc-butoxykarbonylamino-5-methylhex-2-anová kyselina.

ESMS: 599,4 (M+H)⁺

HPLC: r_t = 29,88 minut (Al).

Příklad 19:

. , N-(( 1R)— 1 —{N—[(1 R)-l -benzyl-2-(4-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-3,5-dimethylhex-2-anové

OH

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1, přičemž se jako počáteční materiál použil 4-hydroxypiperidin, (2 R)-2-(N-( terc-butoxy karbony 1-N-methyl30

- 67 CZ 299648 B6 amino)-3-fenylpropionová kyselina a (2R)-2-(N-{terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino-3(2-naftyl))propionová kyselina a (2E)-5-(terc-butoxykarbonylamino-3,5-dimethylhex-2-anová kyselina.

ESMS: 613,4 (M+H)⁺

HPLC: r_t = 30,58 minut (Al).

Příklad 20:

N-((1R)-1-{N-[(1 R )-l-benzy 1-2-( 4-hydroxypi peridin-l-y I)-2-oxoethyl]-N-methy Ikarbamoyl }—2—(2—nafty l )ethyl)-N-methy lam id kyseliny (2E)-4-( 1 -amin ocykl obuty l)but-2-anové

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1, přičemž se jako počáteční materiál použil 4-hydroxypiperidin, (2R)-(N-(terc-butoxykarbonyl-N-methylamino)-3-(2-nafiyl)propíonová kyselina a (2É)-4~(l-(terc-butoxykarbonylammo)cyklobutyl)but-2-anová kyselina.

ESMS: 611,4 (M+H)⁺

HPLC: r_t = 30,82 minut (Al).

Příklad 21:

N-{(1 R)-1-{N-[(1 R)~l-(4-fluorbenzyl)-2-(4-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5-metylhex-2-anové

-68CZ 299648 B6

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1, přičemž se jako počáteční materiál použil 4-hydroxypiperidin, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl-N-methylamino)-3-(4-fluorfenyl)propionová kyselina a (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3-(2-naftyl))propionová kyselina a (2E)-5“(terc-butoxykarbonylammo-5-methylhex5 2-anová kyselina.

ESMS: 617,4 (M+H)⁺

HPLC: r, = 30,27 minut (AI).

HPLC: r_t = 31,60 minut (Bl).

Příklad 22:

N-(( 1R)- 1-{Ν-[( 1 R)-l-(4-fliiorbenzy 1)-2-(4-hydroxypiperidin-1 -yl)-2-oxoethyI]-N-methy115 karbamoyl}-2-(2-naftyI)ethyl}-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-3,5-<Iimethylhex-2anové

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1, přičemž se jako počáteční materiál použil 4-hydroxypiperidin. (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbony 1-N-methylamíno)-3-(4-fluorfenyl)propionová kyselina a (2R)~2-(N-(terc-butoxykarbonyl-N-methylamino)-3-(2-naftyl)propionová kyselina a (2E)-5-(terc-butoxykarbonylamino-3,5-dÍmethylhex-2-anová kyselina.

ESMS: 631,4 (M+H)⁺

HPLC: r_t = 30, 98 minut (AI).

HPLC: r, - 32,38 minut (Bl).

Příklad 23:

N-(( 1 R)-l-{N-[(l R)~l-benzyl-2-(4-(dimethylamino)ptperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-4-(l-aminocyklobutyl)but-235 anové

-69CZ 299648 B6

Sloučenina uvedená v názvu'se připravila způsobem popsaným v příkladu 1, přičemž se jako počáteční materiál použil 4-N,N-dimethylpiperazin, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl-N5 methylamino)-3-(4-fluorfenyl)propionová kyselina a (2R)-2_(N-(terc-butoxykarbonyl)-Nmethylamino)-3-(2-naftyl))propionová kyselina a (2 E )-4-(1 -(butoxy karbony lam i no)cyklobutyl)but-2-anová kyselina.

¹ H-NMR (CDCfi, vybrané hodnoty): δ 1,90 (s, 3H), 2,38 (s, 3H), 2,45 a 2,47 (dvě s, 3H), 2,78 a

2,80 (dvě s, 3 H), 6,32 (dd, 1H), 7,15 až 7,84 (m, 12H).

ESMS(ES): m/z = 638,4 (M+H)⁺

HPLC: 26,72 minut (A l).

Příklad 24:

N-((lR)-l-{N-[(2R)-2-(4-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxo-l--((2“thienyl)methyl)ethyl]-Nmethylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5-rnethylhex-220 anové

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu l, přičemž se jako 25 počáteční materiál použil 4-hydroxypiperidin, (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbonyl-N-methylamino)-3-(2-thienyl)propionová kyselina a (2R)-2-(N-(terc-butoxykarbony1-N-methylamino)-3“(2-naftyl)propionová kyselina a (2 E)-5-(terc-b utoxykar bony lamin o-5-methylhex-2anová kyselina.

ESMS: 605,4 (M+H)⁺

HPLC: r_t = 29,07 minut (A 1).

-70CZ 299648 Bó

Příklad 25:

N-(( 1 R)-l-{N-[(2R)-2-(4-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxo-l-((2-thienyl)methyl)ethyl]-Nmethylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamíd kyseliny (2E)-5-amino-3,5-dimethyl5 hex-2-anové

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1, přičemž se jako io počáteční materiál použil 4-hydroxypiperidin, (2R)-2-(N-terc-butoxykarbonyl-N-methylamino)-3-(2-thienyl)propionová kyselina a (2 R)-2-(N-(terc-butoxy karbony 1-N-m ethyl amino)-3-(2-naftyl)propionová kyselina a (2E)-5-(terc-butoxykarbonylamino-3,5-dimethylhex-2-anová kyselina.

ESMS: 619,4 (M+H)⁺

HPLC: η = 29, 76 minut (Al).

Příklad 26:

N-(( 1 R)-2-(bÍfenyl-4-yl)-l-{N-[(2R)-2-(4-hydroxypÍperidin-l-yl)-2-oxo-l-((thienyl)methyl)ethyl]-N-methylkarbamoyl }ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5methylhex-2-anové

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1, přičemž se jako počáteční materiál použil 4-hydroxypiperidin, (2R)-2-(N-terc-butoxy karbony l-N-methylamino)-3-(bÍfenyl-4-yl)propionová kyselina a (2E)-5-(terc-butoxykarbonylamino-5-dimethyl30 hex-2-anová kyselina.

ESMS: 631,2 (M+H)⁺

HPLC: r_t = 32,20 minut (Al).

-71 CZ 299648 B6

Příklad 27:

N-(( 1 R)-2-(bifenyl-4-yI)”l -{N-[( 1 R)-2-(4-hydroxypiperidin-1 -y l)-2-oxc^ 1 -((th ienyl)methyl)ethyl]-N-methylkarbamoyl}ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-3,5-di methy lhex-2-anové

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1, přičemž se jako počáteční materiál použil 4-hydroxypiperidin. (2R)-2-(N-terc~butoxykarbonyI-N-methylio amino)-3-(2-thienyl)propÍonová kyselina a (2R)-2-(N-terc-butoxykarbonyl-N-methylamino)3-(bifenyM_yl)propionová kyselina a (2E)-5-(terc-butoxykarbonylamino-3,5-dimethylhex-2• anová kyselina.

ESMS: 464,4 (M+H)⁺

HPLC: r_t = 32,89 minut (AI).

Příklad 28:

N-((lR)-l-{N-[(lR)-I-benzyl-2-(4-hydroxypiperidin-]-y])-2-oxoethy]]-N-methylkarbamoyl}-2-(bifenyl-4-yl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-methyl-5-(methylamino)hex-2anové

Sloučenina uvedená v názvu se připravila způsobem popsaným v příkladu 1, přičemž se jako počáteční materiál použil 4-hydroxypiperidin, (2R)-2-(N-terc-butoxykarbonyt-N-methylamino)-3-fenylpropionová kyselina a (2R)-2-(N-terc-butoxykarbonyl-N-methylamino)-3(bifenyl^L-yl)propionová kyselina a (2E)-5-{N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino)-530 methy lhex-2-anová kyselina.

MS: m/z: 639,4 (M+H)⁺

HPLC: způsob AI: r_t = 32,94 minut

-72CZ 299648 Bó

Příklad 29:

((1R) 1 ~{N-[( 1R)-1 -benzy l-2-(4-hydroxypiperidin-1 -y l)-2-oxoethyl]-N-methy Ikarbamoyl} 2-(bifenyl-4-yl)ethyí)amid kyseliny (2E)-4-(l-aminocyk!obutyl)but-2-anové

HPLC: Rt = 31,55 minut (AI) Rt = 33,11 minut (Bl)

LC-MS: 623,6 [M+I]⁺

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina obecného vzorce I:

Claims

15 1. Sloučenina obecného vzorce I:

\ 6 r-tv(^CHR) ^x(CR⁶R), M ve kterém

R¹ je vodík nebo C _]ó—alkyl, R²je Cj^-alkyl,

Lje

-73CZ 299648 B6 q, s, t, u jsou nezávisle na sobě 0, 1, 2 nebo 3, rjeO nebo 1

5 součet q + r + s + t + uje 2 nebo 3,

R⁹, R¹⁰, R¹¹ a R¹² jsou nezávisle na sobě vodík nebo C^,-alkyl, Qje >N-R¹³ nebo kde o je 0 nebo 2,

15 T je -N(R¹³) (R¹⁶) nebo hydroxyl,

R¹³, R¹⁵ a R¹⁶ jsou nezávisle na sobě vodík nebo C]_₆-alkyl, R¹⁴ je vodík,

G je

25 kde R¹⁷, R¹⁸, R¹⁹, R²⁰ a R²¹ jsou nezávisle na sobě vodík nebo aryl,

Jje nebo.

R²²

R²³ kde R²², R²³, R²⁴ R²⁵ a R²⁶ jsou nezávisle na sobě vodík nebo halogen, a je 1, bje 1, cjeO, dje 0, e je 0 nebo 1, fje 1,

R⁵ je vodík nebo Cm-alkyl, který je popřípadě substituován jedním nebo více hydroxyly, aryly 40 nebo heteroaryly,

-74CZ 299648 Bó

R⁶ a R⁷ jsou nezávisle na sobě vodík nebo

C]^-alkyl, nebo R⁶ a R⁷ tvoří -(CH2),-U-(CH2)j- kde i a j jsou nezávisle 1 nebo 2 a U je vazba,

5 R⁸ je vodík nebo C_t_6-alkyl, a

M je arylen nebo -CR²⁷=CR²⁸-, kde R²⁷ a R²⁸ jsou nezávisle na sobě vodík nebo Ci_₆—alkyl, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

2. Sloučenina nebo její farmaceuticky přijatelná sůl podle nároku 1, kde R¹ je C]_$-alkyl.

3. Sloučenina nebo její farmaceuticky přijatelná sůl podle nároku 1 nebo 2, kde R⁶ a R⁷ jsou nezávisle vodík nebo Ci_6-alky 1.

4. Sloučenina nebo její farmaceuticky přijatelná sůl podle nároku 1 nebo 2, kde R⁶ a R⁷ tvoří -(CH₂)i-V-(CH2)j- kde i a j jsou nezávisle 1 nebo 2 a U je vazba.

5. Sloučenina nebo její farmaceuticky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 vybraná

20 z: ’

N-(( 1 R)-1-{N-[(1 R)-1 -benžyl-2-(4-((dimethylamino)methyl)piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5~amino-5-methylhex2-enové

N-((l R)-l-{N-[( 1 R)-l₇benzy 1-2-((3 S)-3-(dimethy1aminomethyl)piperÍd i n-l-yl)-2-oxo₍ ethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-metliy lamid kyseliny (2E)-5-amino-5methylhex-2—enové

- 7S CZ 299648 B6

N-((lR)-i-{N-[(lR)-l-benzyl-2-((3S)-3-(dimethylaminomethyl)piperidin-l-yI)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-4-( 1-amínocyklobutyl)but-2-enové

N-(( 1 R)-l-{N-[( 1 R)-l-benzyl-2-((2S)-2-((dimethylamÍno)methyl)pyrolidin-]-yI)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)etliyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové

N-(( l.Rj-l-{N-[( 1 R)-l-benzyl-2-((2S)-2-((dimethylamino)methyl)pyrolidin-l -y l)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethy])-N-methyl-3-(methylamÍno)methyl)benzamÍd

-76CZ 299648 Bó

N-(( 1 R>l-{N-[( 1 R>l-benzyl-2-(4~(dimethylamino)piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové

3-aminomethyl-N-{(lR}-l-{N-[(l R)-í-benzy l-2-(4-methy Ipiperazin-l-yl)-2-oxoethvl]-Nmethylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylbenzamid

N-((l R)-l-{N-[( 1 R)~l-benzyI-2-(4-methylpiperazin-l-yl)-2-oxoethy|]-N-niethylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové

-77CZ 299648 B6

N-(( l R)-l -{N-[( 1R)- 1-benzy l-2-{4~methy lpiperazin-l-y l)-2-oxoethy l]-N-methy Ikarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methyIamid kyseliny (2E)-4-(l-arninocyklobutyl)but-2-enové

N-(( IR)-l-{N-[( IR)-1-benzy l-2-(4-methylpiperazi n-l-y l)-2-oxoethy l]-N-methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methy]arnid kyseliny (2E)-5-amino-3,5~dimethylhex-2-enové

N-(( 1 R)-l-{N-[( 1 R)-l-benzyl-2-ý4-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl }-24bi feny l-4-yl)ethyl)-N-methy (amid kyseliny (2E)-4-(l-aniinocyklobutyl)but-2enové

-78CZ 299648 B6

N-((lR)-l-{N-[(lR)-l-benzyl-2-(4-hy droxy piperidin-l-yl)-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}-2-(bifenyl-4-y l)ethyl)-N-methylarnid kyseliny (2E)-5~amino-5-methylhex-2-enové

N-(( 1 R)-l -{N-[(l R)-1 ~benzyl-2-(4-hydroxypÍperidin-l-yl)~2-oxoethyl]-N-methylkarbamovl}-2-(bifenyM-yl)ethy|)-N-methyIamid kyseliny (2E)-5-amino~3,5-dimethylhex-2enové

N-((lR)-l-{N-[(lR)~l-benzy]-2-(4-hydroxypiperidin-l-y1)-2““-oxoethyl]“-N~methylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl}-N-methylamid kyseliny (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové í

OH