CZ297022B6 - Rekombinantní psí herpesvirus exprimující alesponjeden antigen, zejména antigen psinky, vztekliny,parvoviru a parainfluenzy typu 2, a vakcína na bázi tohoto viru - Google Patents
Rekombinantní psí herpesvirus exprimující alesponjeden antigen, zejména antigen psinky, vztekliny,parvoviru a parainfluenzy typu 2, a vakcína na bázi tohoto viru Download PDFInfo
- Publication number
- CZ297022B6 CZ297022B6 CZ0428198A CZ428198A CZ297022B6 CZ 297022 B6 CZ297022 B6 CZ 297022B6 CZ 0428198 A CZ0428198 A CZ 0428198A CZ 428198 A CZ428198 A CZ 428198A CZ 297022 B6 CZ297022 B6 CZ 297022B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- virus
- canine
- chv
- heterologous nucleotide
- plasmid
- Prior art date
Links
- 241000680578 Canid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 title claims abstract description 86
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 18
- 241000701931 Canine parvovirus Species 0.000 title claims abstract description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims description 40
- 208000000655 Distemper Diseases 0.000 title claims description 7
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 title claims description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title abstract description 29
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 title description 2
- 208000014058 canine distemper Diseases 0.000 title 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 46
- 241000282465 Canis Species 0.000 claims abstract description 14
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 claims abstract description 12
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 49
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 49
- 101000768957 Acholeplasma phage L2 Uncharacterized 37.2 kDa protein Proteins 0.000 claims description 17
- 101000823746 Acidianus ambivalens Uncharacterized 17.7 kDa protein in bps2 3'region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000916369 Acidianus ambivalens Uncharacterized protein in sor 5'region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000769342 Acinetobacter guillouiae Uncharacterized protein in rpoN-murA intergenic region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000823696 Actinobacillus pleuropneumoniae Uncharacterized glycosyltransferase in aroQ 3'region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000786513 Agrobacterium tumefaciens (strain 15955) Uncharacterized protein outside the virF region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000618005 Alkalihalobacillus pseudofirmus (strain ATCC BAA-2126 / JCM 17055 / OF4) Uncharacterized protein BpOF4_00885 Proteins 0.000 claims description 17
- 102100020724 Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Human genes 0.000 claims description 17
- 101000967489 Azorhizobium caulinodans (strain ATCC 43989 / DSM 5975 / JCM 20966 / LMG 6465 / NBRC 14845 / NCIMB 13405 / ORS 571) Uncharacterized protein AZC_3924 Proteins 0.000 claims description 17
- 101000823761 Bacillus licheniformis Uncharacterized 9.4 kDa protein in flaL 3'region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000819719 Bacillus methanolicus Uncharacterized N-acetyltransferase in lysA 3'region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000789586 Bacillus subtilis (strain 168) UPF0702 transmembrane protein YkjA Proteins 0.000 claims description 17
- 101000792624 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YbxH Proteins 0.000 claims description 17
- 101000790792 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YckC Proteins 0.000 claims description 17
- 101000819705 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YlxR Proteins 0.000 claims description 17
- 101000948218 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YtxJ Proteins 0.000 claims description 17
- 101000718627 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki Putative RNA polymerase sigma-G factor Proteins 0.000 claims description 17
- 101000641200 Bombyx mori densovirus Putative non-structural protein Proteins 0.000 claims description 17
- 101000947633 Claviceps purpurea Uncharacterized 13.8 kDa protein Proteins 0.000 claims description 17
- 101000948901 Enterobacteria phage T4 Uncharacterized 16.0 kDa protein in segB-ipI intergenic region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000805958 Equine herpesvirus 4 (strain 1942) Virion protein US10 homolog Proteins 0.000 claims description 17
- 101000790442 Escherichia coli Insertion element IS2 uncharacterized 11.1 kDa protein Proteins 0.000 claims description 17
- 101000788354 Escherichia phage P2 Uncharacterized 8.2 kDa protein in gpA 5'region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000770304 Frankia alni UPF0460 protein in nifX-nifW intergenic region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000797344 Geobacillus stearothermophilus Putative tRNA (cytidine(34)-2'-O)-methyltransferase Proteins 0.000 claims description 17
- 101000748410 Geobacillus stearothermophilus Uncharacterized protein in fumA 3'region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000772675 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) UPF0438 protein HI_0847 Proteins 0.000 claims description 17
- 101000631019 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) Uncharacterized protein HI_0350 Proteins 0.000 claims description 17
- 101000768938 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 8.9 kDa protein in int-C1 intergenic region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000785414 Homo sapiens Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Proteins 0.000 claims description 17
- 101000782488 Junonia coenia densovirus (isolate pBRJ/1990) Putative non-structural protein NS2 Proteins 0.000 claims description 17
- 101000811523 Klebsiella pneumoniae Uncharacterized 55.8 kDa protein in cps region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000818409 Lactococcus lactis subsp. lactis Uncharacterized HTH-type transcriptional regulator in lacX 3'region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000878851 Leptolyngbya boryana Putative Fe(2+) transport protein A Proteins 0.000 claims description 17
- 101000758828 Methanosarcina barkeri (strain Fusaro / DSM 804) Uncharacterized protein Mbar_A1602 Proteins 0.000 claims description 17
- 101001122401 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus (isolate United Kingdom/H123990006/2012) Non-structural protein ORF3 Proteins 0.000 claims description 17
- 101001055788 Mycolicibacterium smegmatis (strain ATCC 700084 / mc(2)155) Pentapeptide repeat protein MfpA Proteins 0.000 claims description 17
- 101000740670 Orgyia pseudotsugata multicapsid polyhedrosis virus Protein C42 Proteins 0.000 claims description 17
- 101000769182 Photorhabdus luminescens Uncharacterized protein in pnp 3'region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000961392 Pseudescherichia vulneris Uncharacterized 29.9 kDa protein in crtE 3'region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000731030 Pseudomonas oleovorans Poly(3-hydroxyalkanoate) polymerase 2 Proteins 0.000 claims description 17
- 101001065485 Pseudomonas putida Probable fatty acid methyltransferase Proteins 0.000 claims description 17
- 101000711023 Rhizobium leguminosarum bv. trifolii Uncharacterized protein in tfuA 3'region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000948156 Rhodococcus erythropolis Uncharacterized 47.3 kDa protein in thcA 5'region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000917565 Rhodococcus fascians Uncharacterized 33.6 kDa protein in fasciation locus Proteins 0.000 claims description 17
- 101000790284 Saimiriine herpesvirus 2 (strain 488) Uncharacterized 9.5 kDa protein in DHFR 3'region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000936719 Streptococcus gordonii Accessory Sec system protein Asp3 Proteins 0.000 claims description 17
- 101000788499 Streptomyces coelicolor Uncharacterized oxidoreductase in mprA 5'region Proteins 0.000 claims description 17
- 101001102841 Streptomyces griseus Purine nucleoside phosphorylase ORF3 Proteins 0.000 claims description 17
- 101000708557 Streptomyces lincolnensis Uncharacterized 17.2 kDa protein in melC2-rnhH intergenic region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000649826 Thermotoga neapolitana Putative anti-sigma factor antagonist TM1081 homolog Proteins 0.000 claims description 17
- 101000827562 Vibrio alginolyticus Uncharacterized protein in proC 3'region Proteins 0.000 claims description 17
- 101000778915 Vibrio parahaemolyticus serotype O3:K6 (strain RIMD 2210633) Uncharacterized membrane protein VP2115 Proteins 0.000 claims description 17
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 13
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 13
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 13
- 101000621943 Acholeplasma phage L2 Probable integrase/recombinase Proteins 0.000 claims description 12
- 101000618348 Allochromatium vinosum (strain ATCC 17899 / DSM 180 / NBRC 103801 / NCIMB 10441 / D) Uncharacterized protein Alvin_0065 Proteins 0.000 claims description 12
- 101000781117 Autographa californica nuclear polyhedrosis virus Uncharacterized 12.4 kDa protein in CTL-LEF2 intergenic region Proteins 0.000 claims description 12
- 101000708323 Azospirillum brasilense Uncharacterized 28.8 kDa protein in nifR3-like 5'region Proteins 0.000 claims description 12
- 101000770311 Azotobacter chroococcum mcd 1 Uncharacterized 19.8 kDa protein in nifW 5'region Proteins 0.000 claims description 12
- 101000748761 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized MFS-type transporter YcxA Proteins 0.000 claims description 12
- 101000765620 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YlxP Proteins 0.000 claims description 12
- 101000916134 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YqxJ Proteins 0.000 claims description 12
- 101000754349 Bordetella pertussis (strain Tohama I / ATCC BAA-589 / NCTC 13251) UPF0065 protein BP0148 Proteins 0.000 claims description 12
- 101000827633 Caldicellulosiruptor sp. (strain Rt8B.4) Uncharacterized 23.9 kDa protein in xynA 3'region Proteins 0.000 claims description 12
- 101000947628 Claviceps purpurea Uncharacterized 11.8 kDa protein Proteins 0.000 claims description 12
- 101000686796 Clostridium perfringens Replication protein Proteins 0.000 claims description 12
- 101000788129 Escherichia coli Uncharacterized protein in sul1 3'region Proteins 0.000 claims description 12
- 101000788370 Escherichia phage P2 Uncharacterized 12.9 kDa protein in GpA 3'region Proteins 0.000 claims description 12
- 101000787096 Geobacillus stearothermophilus Uncharacterized protein in gldA 3'region Proteins 0.000 claims description 12
- 101000976889 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 19.2 kDa protein in cox-rep intergenic region Proteins 0.000 claims description 12
- 101000827627 Klebsiella pneumoniae Putative low molecular weight protein-tyrosine-phosphatase Proteins 0.000 claims description 12
- 101001130841 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus (isolate United Kingdom/H123990006/2012) Non-structural protein ORF5 Proteins 0.000 claims description 12
- 101000974028 Rhizobium leguminosarum bv. viciae (strain 3841) Putative cystathionine beta-lyase Proteins 0.000 claims description 12
- 101000756519 Rhodobacter capsulatus (strain ATCC BAA-309 / NBRC 16581 / SB1003) Uncharacterized protein RCAP_rcc00048 Proteins 0.000 claims description 12
- 101000948219 Rhodococcus erythropolis Uncharacterized 11.5 kDa protein in thcD 3'region Proteins 0.000 claims description 12
- 101000936711 Streptococcus gordonii Accessory secretory protein Asp4 Proteins 0.000 claims description 12
- 101000929863 Streptomyces cinnamonensis Monensin polyketide synthase putative ketoacyl reductase Proteins 0.000 claims description 12
- 101000788468 Streptomyces coelicolor Uncharacterized protein in mprR 3'region Proteins 0.000 claims description 12
- 101000845085 Streptomyces violaceoruber Granaticin polyketide synthase putative ketoacyl reductase 1 Proteins 0.000 claims description 12
- 101000711771 Thiocystis violacea Uncharacterized 76.5 kDa protein in phbC 3'region Proteins 0.000 claims description 12
- 101000711318 Vibrio alginolyticus Uncharacterized 11.6 kDa protein in scrR 3'region Proteins 0.000 claims description 12
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 9
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 9
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 241000589969 Borreliella burgdorferi Species 0.000 claims description 6
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 claims description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 4
- 108700006640 OspA Proteins 0.000 claims description 3
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 claims description 2
- 241001353878 Canine parainfluenza virus Species 0.000 claims 3
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 claims 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 claims 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 claims 1
- 241000712083 Canine morbillivirus Species 0.000 abstract description 41
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 37
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 abstract description 13
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 abstract description 6
- 241001559187 Human rubulavirus 2 Species 0.000 abstract 2
- 108700019832 Borrelia burgdorferi OspB Proteins 0.000 abstract 1
- 101001086191 Borrelia burgdorferi Outer surface protein A Proteins 0.000 abstract 1
- 101100135135 Borrelia burgdorferi ospB gene Proteins 0.000 abstract 1
- 101001062679 Phocine distemper virus Fusion glycoprotein F0 Proteins 0.000 abstract 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 94
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 75
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 40
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 26
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 20
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 18
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 11
- 101150039660 HA gene Proteins 0.000 description 11
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 11
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 101000976893 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 14.1 kDa protein in cox-rep intergenic region Proteins 0.000 description 9
- 101000786921 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 26.0 kDa protein in rep-hol intergenic region Proteins 0.000 description 9
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 9
- 101000770899 Orgyia pseudotsugata multicapsid polyhedrosis virus Uncharacterized 24.3 kDa protein Proteins 0.000 description 9
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 8
- 101000743335 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Probable terminase, endonuclease subunit Proteins 0.000 description 7
- 101000820589 Homo sapiens Succinate-hydroxymethylglutarate CoA-transferase Proteins 0.000 description 7
- 101000790838 Klebsiella pneumoniae UPF0053 protein in cps region Proteins 0.000 description 7
- 101000748499 Rhodobacter capsulatus Uncharacterized 104.1 kDa protein in hypE 3'region Proteins 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 101150034814 F gene Proteins 0.000 description 5
- 101150082239 G gene Proteins 0.000 description 5
- 102100021652 Succinate-hydroxymethylglutarate CoA-transferase Human genes 0.000 description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 101000833492 Homo sapiens Jouberin Proteins 0.000 description 4
- 101000651236 Homo sapiens NCK-interacting protein with SH3 domain Proteins 0.000 description 4
- 102100024407 Jouberin Human genes 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710159752 Poly(3-hydroxyalkanoate) polymerase subunit PhaE Proteins 0.000 description 3
- 101710130262 Probable Vpr-like protein Proteins 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 101000787133 Acidithiobacillus ferridurans Uncharacterized 12.3 kDa protein in mobL 3'region Proteins 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 101000666833 Autographa californica nuclear polyhedrosis virus Uncharacterized 20.8 kDa protein in FGF-VUBI intergenic region Proteins 0.000 description 2
- 101000977027 Azospirillum brasilense Uncharacterized protein in nodG 5'region Proteins 0.000 description 2
- 101000827603 Bacillus phage SPP1 Uncharacterized 10.2 kDa protein in GP2-GP6 intergenic region Proteins 0.000 description 2
- 101000962005 Bacillus thuringiensis Uncharacterized 23.6 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101000785191 Drosophila melanogaster Uncharacterized 50 kDa protein in type I retrotransposable element R1DM Proteins 0.000 description 2
- 241000710188 Encephalomyocarditis virus Species 0.000 description 2
- 101000747704 Enterobacteria phage N4 Uncharacterized protein Gp1 Proteins 0.000 description 2
- 101000861206 Enterococcus faecalis (strain ATCC 700802 / V583) Uncharacterized protein EF_A0048 Proteins 0.000 description 2
- 101000769180 Escherichia coli Uncharacterized 11.1 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 2
- 108091029795 Intergenic region Proteins 0.000 description 2
- 101000976301 Leptospira interrogans Uncharacterized 35 kDa protein in sph 3'region Proteins 0.000 description 2
- 101000977786 Lymantria dispar multicapsid nuclear polyhedrosis virus Uncharacterized 9.7 kDa protein in PE 3'region Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 101000658690 Neisseria meningitidis serogroup B Transposase for insertion sequence element IS1106 Proteins 0.000 description 2
- 101000748660 Pseudomonas savastanoi Uncharacterized 21 kDa protein in iaaL 5'region Proteins 0.000 description 2
- 101000584469 Rice tungro bacilliform virus (isolate Philippines) Protein P1 Proteins 0.000 description 2
- 101001113905 Rice tungro bacilliform virus (isolate Philippines) Protein P4 Proteins 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101000818096 Spirochaeta aurantia Uncharacterized 15.5 kDa protein in trpE 3'region Proteins 0.000 description 2
- 101000766081 Streptomyces ambofaciens Uncharacterized HTH-type transcriptional regulator in unstable DNA locus Proteins 0.000 description 2
- 101000804403 Synechococcus elongatus (strain PCC 7942 / FACHB-805) Uncharacterized HIT-like protein Synpcc7942_1390 Proteins 0.000 description 2
- 101000750910 Synechococcus elongatus (strain PCC 7942 / FACHB-805) Uncharacterized HTH-type transcriptional regulator Synpcc7942_2319 Proteins 0.000 description 2
- 101000644897 Synechococcus sp. (strain ATCC 27264 / PCC 7002 / PR-6) Uncharacterized protein SYNPCC7002_B0001 Proteins 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 101710136524 X polypeptide Proteins 0.000 description 2
- 101000916336 Xenopus laevis Transposon TX1 uncharacterized 82 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101001000760 Zea mays Putative Pol polyprotein from transposon element Bs1 Proteins 0.000 description 2
- 101000678262 Zymomonas mobilis subsp. mobilis (strain ATCC 10988 / DSM 424 / LMG 404 / NCIMB 8938 / NRRL B-806 / ZM1) 65 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 20-hydroxyecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@](C)(O)[C@H](O)CCC(C)(O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 0.000 description 1
- 101000787132 Acidithiobacillus ferridurans Uncharacterized 8.2 kDa protein in mobL 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000827262 Acidithiobacillus ferrooxidans Uncharacterized 18.9 kDa protein in mobE 3'region Proteins 0.000 description 1
- 241000700587 Alphaherpesvirinae Species 0.000 description 1
- 101000811747 Antithamnion sp. UPF0051 protein in atpA 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000977023 Azospirillum brasilense Uncharacterized 17.8 kDa protein in nodG 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000827607 Bacillus phage SPP1 Uncharacterized 8.5 kDa protein in GP2-GP6 intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101000961975 Bacillus thuringiensis Uncharacterized 13.4 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101000961984 Bacillus thuringiensis Uncharacterized 30.3 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000588779 Bordetella bronchiseptica Species 0.000 description 1
- 101000964407 Caldicellulosiruptor saccharolyticus Uncharacterized 10.7 kDa protein in xynB 3'region Proteins 0.000 description 1
- 241000711506 Canine coronavirus Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100031725 Cortactin-binding protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 101100364969 Dictyostelium discoideum scai gene Proteins 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000644901 Drosophila melanogaster Putative 115 kDa protein in type-1 retrotransposable element R1DM Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 101000747702 Enterobacteria phage N4 Uncharacterized protein Gp2 Proteins 0.000 description 1
- 101000758599 Escherichia coli Uncharacterized 14.7 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101000768777 Haloferax lucentense (strain DSM 14919 / JCM 9276 / NCIMB 13854 / Aa 2.2) Uncharacterized 50.6 kDa protein in the 5'region of gyrA and gyrB Proteins 0.000 description 1
- 101710126256 Hydrolase in agr operon Proteins 0.000 description 1
- 101000607404 Infectious laryngotracheitis virus (strain Thorne V882) Protein UL24 homolog Proteins 0.000 description 1
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 1
- 101000735632 Klebsiella pneumoniae Uncharacterized 8.8 kDa protein in aacA4 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000768930 Lactococcus lactis subsp. cremoris Uncharacterized protein in pepC 5'region Proteins 0.000 description 1
- 241000222697 Leishmania infantum Species 0.000 description 1
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 description 1
- 101000976302 Leptospira interrogans Uncharacterized protein in sph 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000778886 Leptospira interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae serovar Lai (strain 56601) Uncharacterized protein LA_2151 Proteins 0.000 description 1
- 241000710118 Maize chlorotic mottle virus Species 0.000 description 1
- 101100364971 Mus musculus Scai gene Proteins 0.000 description 1
- 101150009852 ORF2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150062176 ORF5 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 101710197985 Probable protein Rev Proteins 0.000 description 1
- 102000000505 Ribonucleotide Reductases Human genes 0.000 description 1
- 108010041388 Ribonucleotide Reductases Proteins 0.000 description 1
- 101001121571 Rice tungro bacilliform virus (isolate Philippines) Protein P2 Proteins 0.000 description 1
- 108050007496 Shikimate kinase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000818100 Spirochaeta aurantia Uncharacterized 12.7 kDa protein in trpE 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000818098 Spirochaeta aurantia Uncharacterized protein in trpE 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101001026590 Streptomyces cinnamonensis Putative polyketide beta-ketoacyl synthase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001037658 Streptomyces coelicolor (strain ATCC BAA-471 / A3(2) / M145) Glucokinase Proteins 0.000 description 1
- 241000709710 Swine vesicular disease virus Species 0.000 description 1
- 101000750896 Synechococcus elongatus (strain PCC 7942 / FACHB-805) Uncharacterized protein Synpcc7942_2318 Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 101150093578 VP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 101000916321 Xenopus laevis Transposon TX1 uncharacterized 149 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101000760088 Zymomonas mobilis subsp. mobilis (strain ATCC 10988 / DSM 424 / LMG 404 / NCIMB 8938 / NRRL B-806 / ZM1) 20.9 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/295—Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/01—DNA viruses
- C07K14/015—Parvoviridae, e.g. feline panleukopenia virus, human parvovirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16741—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/16743—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18411—Morbillivirus, e.g. Measles virus, canine distemper
- C12N2760/18422—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/20011—Rhabdoviridae
- C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
- C12N2760/20122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Resení se týká vakcín, výhodne pro psy, vyrábených z psích rekombinantních herpesviru. Konkrétne setýká rekombinantních psích herpesviru obsahujících expresní kazetu pro jeden nebo více cizorodých genu. Cizorodý gen pritom kóduje antigen vybraný zeskupiny sestávající z antigenu HA z viru psinky, F z viru psinky, G z viru vztekliny, VP2 z psího parvoviru, HA z viru psí parainfluenzy typu 2, F z viru psí parainfluenzy typu 2, OspA z Borrelia burgdorferi a OspB z Borrelia burgdorferi. Dále s týká vakcín, které obsahují alespon jeden herpesviruspodle resení.
Description
Předkládaný vynález se týká vakcín, výhodně vakcín pro psy, připravených ze psích rekombinantních herpesvirů (herpetických virů). Předkládaný vynález se konkrétně týká rekombinantních psích herpesvirů obsahujících expresní kazetu pro jeden nebo více cizorodých genů, a vakcín, které obsahují alespoň jeden herpesvirus podle vynálezu.
Dosavadní stav techniky
Psí herpesviróza je způsobena psím herpesvirem (CHV). Psí herpesvirus (CHV) je řazen do předčeledi Alphaherpesvirinae. Tento herpesvirus je hlavním patogenem pro novorozená štěňata. Psí herpesviróza se manifestuje hlavně hemoragickým onemocněním u štěňat a benigních onemocnění horní části respiračního traktu u dospělých psů. V současnosti neexistují žádné vakcíny pro štěňata na ochranu proti psí herpesviróze.
Kromě toho domácí psi trpí řadou jiných nemocí a vývoj vakcinačního vektoru schopného exprimovat různé antigeny psích patogenních agens by umožnil, že by se zjednodušily očkovací programy a zlepšila by se jejich účinnost. To je významné obzvláště pro štěňata v chovných stanicích. Z patogenních agens, která jsou pro psy nebezpečná, lze uvést virus psinky, virus Rubarthovy hepatitidy, virus vztekliny, virus psí parvovirózy, psí koronavirus, virus parainfluenzy typu 2, Bordetella bronchiseptica, Borrelia burgdorferi, Leptospira spp., Leishmania infantům.
Podstata vynálezu
O genomu viru CHV je toho dosud málo známo. Organizace genomu tohoto viru byla publikována teprve nedávno (Rémond M. et al., J. Gen. Virol., 1996, 77, 37^18) a byly popsány geny pro tři hlavní glykoproteiny gB, gC a gD, a také gen nazvaný CHV ORF2 (K. Limbách et al., J. Gen. Virol. 1994, 75, 2029-2039).
Na základě své práce na CHV byli původci úspěšní při určování několika úseků, které nejsou esenciální pro replikaci in vitro, což se ukázalo být použitelné pro konstrukci rekombinantních CHV virů. Původci jsou tudíž v pozici, kdy mohou poprvé navrhnout CHV virus jako vakcinační vektor, pro psa. Bylo zjištěno, že vakcinační vektory podle vynálezu byly obzvláště výhodné pro očkování psů. Ve skutečnosti je psí herpesvirus vysoce druhově specifický a má rozsáhlý genom obsahující několik potenciálních inzerčních míst a umožňujících současnou inzerci několika expresních kazet pro cizorodé geny. To poskytuje možnost očkování psů současně proti různým psím patogenním agens prostřednictvím jednoho rekombinantního viru.
Hlavním cílem vynálezu je poskytnout vakcinační vektor umožňující expresi imunogenů psích patogenů za účelem ochrany psů proti hlavním psím infekčním onemocněním.
Dalším cílem vynálezu je poskytnout takový vektoru umožňující očkování psů a obzvláště štěňat majících mateřské protilátky prostřednictvím způsobu podání přes sliznice, konkrétně perorální, nazální nebo konjuktivální cestou.
Ještě dalším cílem vynálezu je poskytnou takový vektor, který současně umožní očkování štěňat proti herpesviróze.
-1 CZ 297022 B6
Předmětem předkládaného vynálezu je tedy rekombinantní živá vakcína která používá jako vektor psí herpesvirus obsahující a exprimující alespoň jednu nukleotidovou sekvenci kódující polypeptid, tato sekvence je vložena do místa, které není esenciální pro replikaci in vitro.
Původci izolovali a analyzovali genomový fragment CHV viru, na kterém charakterizovali 5 otevřených čtecích rámců (ORF1 až ORF5, ožívaná zkratka OFR je z anglického „open reading frame“) a bylo prokázáno, že dva z nich (ORF3 a ORF5) nejsou esenciální pro replikaci in vitro. Kromě toho původci zjistili, že pro inzerci cizorodých genů mohou být také použity další úseky CHV genomu. Tato inzerční místa jsou: gen thymidinkinázy (ORF CHV TK) (Rémond M. et al., Virus Research, 1995, 39, 341-354). a sekvence umístěná mezi ORF CHV orfl9 (nebo ORF19) a ORF CHV orf22 (nebo ORF22) (Rémond M. et al., J. Gen. Virol. 1996, 76, 37-48). Tato místa jsou popsána přesněji v příkladech předkládaného vynálezu.
Výhodně vložená sekvence kóduje antigenní polypeptid a výhodněji antigenní polypeptid psího patogenního agens. Je také možné vložit sekvence kódující imunomodulační proteiny, jako jsou například cytokiny. Podle výhodné varianty je možné použít v kombinaci sekvenci kódující cytokin nebo analog, a sekvenci kódující antigen. Jestliže je zapotřebí, může být použito několik cytokinových sekvencí navzájem v kombinaci, volitelně v kombinaci s jednou nebo více sekvencí kódujících antigeny.
Inzerce do míst je prováděna jednoduchou inzercí (bez delece) nebo po parciální či totální deleci ORF použitých jako inzerční místa.
Jako výchozí virus pro konstrukci rekombinantních CHV virů je možné konkrétně použít kmen CHV F205, který byl izolován L. Carmichaelem (Proč. Soc. Exp. Biol. Med., 1965, 120, 644650).
Pro expresi cizorodých genů vložených do CHV podle předkládaného vynálezu genomu, bude výhodné použít silný eukaryotický promotor, jako je například nejvýhodněji brzký raný (IE) promotor cytomegaloviru (CMV). Rozumí se, že promotor CMV IE konkrétně znamená fragment, jaký je například uváděn v příkladu, a také jeho subfragmenty, které si udržely stejnou aktivitu promotoru. Promotor CMV IE může být lidský (HCMF IE) promotor nebo myší (MCMV IE) promotor nebo alternativně CMV IE promotor jiného původu, například CMV laboratorního potkana, morčete nebo prasečí CMV.
Do jednoho místa pod kontrolou různých promotorů mohou být vloženy alespoň dvě nukleotidové sekvence. Mohou to být konkrétně promotory CMV IE různého původu.
Podle výhodného provedení vynálezu se další promotor používá v kombinaci s CMV IE promotorem tak, že tyto dva promotory sousedí svými 5' konci a že se transkripce zahájená z těchto dvou promotorů uskutečňuje v opačných směrech. Toto konkrétní uspořádání umožňuje vložit dvě nukleotidové sekvence do stejného místa, jedna po kontrolu promotoru použitého s ním v kombinaci. Tato konstrukce je pozoruhodná faktem, že přítomnost promotoru CMV IE a obzvláště části jeho enhanceru, může aktivovat transkripci indukovanou promotorem použitým v kombinaci. Jako promotor použitý v kombinaci může být uveden například promotor CMV odlišných živočišných druhů od prvního promotoru. Je také možné si představit jiné promotory, jako je například promotor RNA1.8 viru Markovy nemoci (MDV) (G. Bradley et al., J. Virol., 1989, 63,2534-2542).
Nukleotidová sekvence vložená do vektoru CHV, aby byla exprimována, může být jakákoliv sekvence kódující antigenní polypeptid psího patogenního agens, která je schopná, když je exprimována za příznivých podmínek podle vynálezu, vyvolat imunizaci vedoucí k účinné ochraně očkovaného zvířete proti patogennímu agens. Nukleotidové sekvence kódující požadované antigeny pro dané onemocnění, konkrétně virové, bakteriální nebo parazitární nemoci uvedené výše, mohou tudíž být vloženy za podmínek popsaných předkládaným vynálezem.
-2CZ 297022 B6
Typickým provedením vynálezu je inzerce alespoň jedné nukleotidové sekvence kódující vhodné polypeptid viru psinky (canine distemper virus = CDV) a výhodně CDV polypeptid HA (Sidhu M. et al., Virology, 1993, 193, 66-72) nebo CDV polypeptid F (Barrett T. et al., Virus Research, 1987, 8, 373-386). Je také možné vložit oba tyto geny společně do vektoru CHV. Tímto je získána rekombinantní živá vakcína vyvolávající ochranu proti psince.
Dalším výhodným provedením vynálezu je inzerce nukleotidových sekvencí kódujících antigeny nebo fragmenty antigenů viru vztekliny, obzvláště genu G (patenty FR-A-2 515 685 a EP-A162 757), viru psí parvovirózy (VP2 gen) (Parrish C. et al., J. Virol., 1991, 65, 6544-6552) nebo virus parainfluenzy typu 2 (geny HA a/nebo F). Je také možné vložit sekvence Borrelia burgdorferi kódující antigeny, obzvláště geny kódující antigeny OspA a OspB (Bergstróm S. et al., Mol. Microbiol., 1989, 3, 479M86).
Typickým provedením vynálezu je vakcína obsahující nukleotidovou sekvenci kódující antigen viru psinky pod kontrolou CMVIE a nukleotidovou sekvenci kódující antigen dalšího psího virového onemocnění, obzvláště nemoci uvedených výše, pod kontrolu jiného promotoru.
Přirozeně, heterologní sekvence a jejich přidružené promotory mohou být vloženy obvyklejším způsobem na tandemu do místa inzerce, totiž podle stejného směru transkripce.
Exprese několika heterologních genů vložených do inzerčního místa může také být umožněna inzercí sekvence známé jako „IRES“ (vnitřní místo pro vstup ribozomu = místo vysoké afinity pro vazbu iniciačního komplexu) pocházející zejména z pikomaviru, jako je například virus verikulámí choroby prasat (swine vesicular disease virus, SVDS; B.-F. Chen et al., J. Virology, 1993, 67, 2142-2148), virus encefalomyokarditidy (EMCV; R. J. Kaufman et al., Nucleic Acids Research, 1991, 19, 4485-4490) nebo virus slintavky a kulhavky (FMDV; N. Luz a E. Beck, J. Virology, 1991, 65, 6486-6494) nebo eventuálně jiného původu. Obsah těchto tří článků je zahrnut formou odkazu. Kazeta pro expresi těchto dvou genů by tedy měla následující minimální strukturu: promotor - gen 1 - IRES - gen 2 - polyadenylační signál. Rekombinantní živá vakcína podle vynálezu může tedy obsahovat, vloženou do inzerčního místa, expresní kazetu obsahující postupně promotor, dva nebo více genů vždy vzájemně oddělených IRES a polyadenylační signál.
Kromě inzerce do místa podle vynálezu je možné uskutečnit jednu nebo více dalších inzercí, jednu nebo více mutací nebo jednu nebo více delecí na jiném místě genomu. Ve všech případech inzerce do místa jiného než toho popsaného ve vynálezu umožní jiným genům, aby byly exprimovány.
Použití rekombinantních virů podle vynálezu umožní to, že psi budou chráněni proti jedné nebo více nemocí uvedených výše a současně proti psí herpesviróze.
Předmětem předkládaného vynálezu je také formulace polyvalentní vakcíny obsahující, smíchané nebo pro smíchání, alespoň dvě rekombinantní živé vakcíny, jako byly definovány výše, tyto vakcíny obsahují různé vložené izolované sekvence, obzvláště z různých patogenů. Tyto formulace vakcíny obsahují dávky a/nebo vehikula, která jsou vhodná pro způsob podání.
Předmětem předkládaného vynálezu jsou také viry CHV modifikované v alespoň jednom označeném místě.
Jeho předmětem je také vakcinační metoda, zejména psů, při které je podáváno účinné množství vakcíny, jak byla definována výše, prostřednictvím jakékoliv parenterální nebo slizniční cesty, ale výhodně slizniční cestou, konkrétně perorální a/nebo nazální cestou. Vakcinační dávka bude výhodně mezi 102 CCID50 a 107 CCID50 (CCID50 = 50% infekční dávka pro buněčné kultury). Výhodně, dávka pro parenterální způsob podání bude mezi 104 CCID50 a 107 CCID50 a pro
-3CZ 297022 B6 perorální a/nebo nazální cestu mezi 102 CCID50 a 105 CCID50. Jak bylo definováno, vakcína je obecně účinná po jednom podání perorální a/nebo nazální cestou. Nicméně může být nezbytné opakované podávání.
Předmětem předkládaného vynálezu jsou také fragmenty DNA obsahující celou nebo část sekvence definované polohami 1 až 6216 na. sekv. id. č. 1 (obrázek 1), zejména celé nebo část definovaného místa ORF3 a/nebo hraniční sekvence lokalizované v protisměru a po směru od tohoto místa, tyto fragmenty budou použitelné jako hraniční ramena pro techniky homologní rekombinace s genomem viru CHV zvoleného jako výchozí virus. Vynález se přirozeně také týká variant těchto fragmentů, které odpovídají ekvivalentním sekvencím jiných kmenů CHV. Odborník si zcela volně může vybrat úseky sloužící jako hraniční ramena v souvislosti se zvoleným typem inzerce (s delecí nebo bez ní) nebo delece (parciální nebo totální). Obecně řečeno, hraniční ramena mohou tak mít 100 až 800 párů bází, ale mohou být větší, pokud je to zapotřebí.
Dalším předmětem vynálezu je způsob přípravy vektorů a vakcín podle vynálezu, jak se ukáže z popisu vakcín, inzercí požadovaných genů na inzerční místo.
Popis obrázků
Vynález bude nyní být detailněji popsán neomezujícími příklady realizace, přičemž se odkazuje na obrázky, kde:
| Obrázek 1: | Sekvence úseku CHV (6216 párů bází) a translace různých otevřených čtecích rámců (ORF) přítomných v této sekvenci (ORF1 až ORF5). |
| Obrázek 2: | Plazmid pPB200 (donorový plazmid pro inzerci expresních kazet do místa CHV ORF3). |
| Obrázek 3: | Konstrukce plazmidu pP3202 (donorový plazmid pro inzerci expresních kazet do místa CHV ORF5). |
| Obrázek 4: | Konstrukce plazmidu pPB204 (donorový plazmid pro inzerci expresních kazet do místa CHV TK). |
| Obrázek 5: | Konstrukce plazmidu pPB206 (donorový plazmid pro inzerci expresních kazet do místa umístěného mezi geny CHV ORF 19 a CHV ORF22). |
| Obrázek 6: | Konstrukce plazmidu pPB208 (expresní kazeta pro gen CDV HA). |
| Obrázek 7: | Konstrukce plazmidu pPB210 (expresní kazeta pro gen CDV F). |
| Obrázek 8: | Konstrukce plazmidu PPB213 (donorový plazmid pro inzerci kazety pro expresi genu CDV HA do místa CHV ORF3). |
| Obrázek 9: | Konstrukce plazmidu pPB214 (donorový plazmid pro inzerci kazety po expresi genu CDV F do místa CHV ORF3). |
Obrázek 10: Plazmid pPB200'.
Obrázek 11: Konstrukce plazmidu pPB212 (kazeta pro expresi genu G viru vztekliny).
Obrázek 12: Konstrukce plazmidu pPB125 (donorový plazmid pro inzerci kazety pro expresi genu G viru vztekliny do místa CHV ORF3).
Obrázek 13: Konstrukce plazmidu pPB216 (donorový plazmid pro inzerci kazety pro expresi genu CDV HA do místa CHV ORF5).
Obrázek 14: Konstrukce plazmidu pPB217 (donorový plazmid pro inzerci kazety pro expresi genu CDV HA do místa CHV TK).
Obrázek 15: Konstrukce plazmidu pPB218 (donorový plazmid pro inzerci kazety pro expresi genu CDV HA do místa umístěného mezi geny CHV ORF 19 a CHV ORF22).
-4CZ 297022 B6
Seznam sekvencí, které byly použity pro konstrukce v inzerčních místech vektoru CHV, a na které se v textu případně odkazuje:
sekv. id. č. 1 sekv. id. č. 2 sekv. id. č. 3 sekv. id. č. 4 sekv. id. č. 5 sekv. id. č. 6 sekv. id. č. 7 sekv. id. č. 8 sekv. id. č. 9 sekv. id. č. 10 sekv. id. č. 11 sekv. id. č. 12 sekv. id. č. 13 sekv. id. č. 14 sekv. id. č. 15 sekv. id. č. 16 sekv. id. č. 17 sekv. id. č. 18 sekv. id. č. 19 sekv. id. č. 20 sekv. id. č. 21 sekv. id. č. 22 sekv. id. č. 23 sekv. id. č. 24 sekv. id. č. 25 sekv. id. č. 26 sekv. id. č. 27 sekv. id. č. 28 sekv. id. č. 29 sekv. id. č. 30
Kompletní sekvence úseku CHV ORF 1 -> ORF5, v plné délce je uvedena na obrázku 1,
ORF1 aminokyselinová sekvence z obrázku 1,
ORF2 aminokyselinová sekvence z obrázku 1,
ORF3 aminokyselinová sekvence z obrázku 1,
ORF 4 aminokyselinová sekvence z obrázku 1, (Parciální) ORF5 aminokyselinová sekvence z obrázku 1,
Oligonukleotid JCA070,
Oligonukleotid JCA071,
Oligonukleotid JCA072,
Oligonukleotid JCA073,
Oligonukleotid JCA074,
Oligonukleotid JCA075,
Oligonukleotid JCA076,
Oligonukleotid JCA077,
Oligonukleotid JCA078,
Oligonukleotid JCA079,
Oligonukleotid JCA080,
Oligonukleotid JCA081,
Oligonukleotid JCA082,
Oligonukleotid JCA083,
Oligonukleotid JCA084,
Oligonukleotid JCA085,
Oligonukleotid JCA088,
Oligonukleotid PB089,
Oligonukleotid JCA086,
Oligonukleotid JCA087,
Oligonukleotid JCA088,
Oligonukleotid JCA089,
Oligonukleotid JCA090,
Oligonukleotid JCA091.
Příklady provedení vynálezu
Všechny konstrukce plazmidů byly prováděny s použitím standardních technik molekulární biologie popsaných autory Sambrook J. et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2<nd > Edition. Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor. N.Y. 1989). Všechny restrikční fragmenty použité pro předkládaný vynález byly izolovány pomocí soupravy „Geneclean“ (BIO 101 inc. La Jolla, Kalifornie).
Virus použitý jako výchozí virus je kmen F205 psího herpesviru (také známý jako Carmichaelův kmen). Tento kmen byl získán od Dr. L. Carmichaela (Comell University, NY), kdo izoloval a
-5CZ 297022 B6 popsal jeho biologické charakteristiky (Proč. Soc. Exp. Biol. Med., 1965, 120, 644-650). Podmínky kultivace tohoto viru jsou tyto: buňky MDCK (Madin-Darbyho buňky psích ledvin ATCC CCL34) pěstované v Eagleho minimálním esenciálním médiu (médium MEM) byly inokulovány kmenem F205 CHV tak, aby multiplicita infekce byla 1. Infikované buňky pak jsou inkubovány ve 37 °C po dobu přibližně 36 hodin, dokud není pozorován kompletní cytopatický účinek.
Příklad 1
Extrakce DNA psího herpesviru
Po kultivaci jsou supematant a lyžované buňky sklizeny a celá virová suspenze je centrifugována v 1000 g po dobu 10 minut v +4 °C, aby se odstranila buněčná debris. Virové částice jsou pak sklizeny ultracentrifugací ve 400 000 g po dobu 1 hodiny v +4 °C. Peleta je vybrána do minimálního objemu pufru (10 mM Tris, 1 mM EDTA). Tato virová koncentrovaná suspenze je ošetřena proteinázou K (konečná koncentrace 100 pg/ml) v přítomnosti dodecylsulfátu sodného (SDS) (konečná koncentrace 0,5%) po dobu 2 hodin ve 37 °C. Virová DNA je pak extrahována směsí fenolu/chloroformu a potom precipitována 2 objemy absolutního ethanolu. Po jedné noci v -20 °C po precipitované DNA stočena v 10 000 g po dobu 15 minut v +4 °C. DNA peleta je usušena a pak je nabrána do minimálního objemu sterilní ultračisté vody.
Příklad 2
Klonování a charakterizace úseku CHV ORF1-ORF5
Purifikovaná genomová DNA kmene F205 viru CHV byla štěpena restrikčními enzymy Scal a Xhol a fragment Scal-Xhol o velikosti přibližně 6200 bp byl klonován do vektoru pBlueScript SKII+ (Stratagene kat. č. 212205), předem štěpeného Scal a Xhol, za vzniku plazmidu pPB154.
Fragment Xhol-Scal klonovaný do plazmidu pPB 154 byl kompletně sekvencován na obou vláknech, což poskytlo sekvenci s 6216 bp z obrázku 1 (sekv. id. č. 1).
Na této sekvenci bylo identifikováno několik otevřených čtecích rámců větších než 65 aminokyselin (obrázek 1):
První čtecí rámec (ORF1) (polohy 1353-157) se vyskytuje na komplementárním vláknu a kóduje polypeptid z 398 aminokyselin (sek. id. č. 2).
Druhý čtecí rámec (ORF2) (polohy 1708-2970) kóduje polypeptid ze 420 aminokyselin (sekv. id. Č.3).
Třetí čtecí ráme (ORF3) (polohy 3040-4242) kóduje polypeptid ze 400 aminokyselin (sekv. id. č. 4)·
Čtvrtý čtecí rámec (ORF4) (polohy 4374-5753) kóduje polypeptid ze 459 aminokyselin (sekv. id. Č.5).
Pátý čtecí rámec (ORF5) (polohy 5872-6216) je neúplný a kóduje zkrácený protein ze 115 aminokyselin (sekv. id. č. 6).
Různé otevřené čtecí rámce jsou porovnány v tabulce uvedené níže:
-6CZ 297022 B6
| Otevřený čtecí rámec | Začátek-konec (polohy na obrázku 1) | Velikost (počet aminokyselin) |
| ORF 1 (Sekv. id. č. 2) | 1353 - 157 | 398 aa |
| ORF 2 (Sekv. id. č. 3) | 1708 - 2970 | 420 aa |
| ORF 3 (Sekv. id. č. 4) | 3040 - 4242 | 400 aa |
| ORF 4 (Sekv. id. č. 5) | 4374 - 5753 | 459 aa |
| ORF 5 (Sekv. id. č. 6) | 5872 - 6216 | 115 aa |
Příklad 3
Konstrukce plazmidu pPB200 pro inzerci expresních kazet do místa CIV ORF3 (obrázek 2)
Plazmid pPB154 (9121 bp) (příklad 2) byl štěpen HindlII a Spěl, aby se izoloval fragment HindlD-Spel o velikosti 620 bp (fragment A). Plazmid pPB 154 byl štěpen EcoRI a Spěl, aby se izoloval fragment EcoRI-Spel o velikosti 659 bp (fragment B). Fragment A a B byly ligovány společně s vektorem pGEM4Z (promega kat. č. P2161), předem štěpeným EcoRI a HindlII, za vzniku plazmidu pPB199 (4096 bp). Plazmid pPB199 pak byl štěpen Spěl, ošetřen alkalickou fosfatázou, a pak ligován s vícečetným klonovacím místem získaným hybridizací následujících 2 oligonukleotidů:
JCA070 (33 mer) (sekv. id. č. 7)
5' CTAGTCCAGCAAGGTGGATCGATATCGGGCCCA 3'
JCA071 (33 mer) (sekv. id. č. 8)
5' CTAGTGGGCCCGATATCGATCCACCTTGCTGGA 3' za vzniku plazmidu pPB200 (4129 bp).
Příklad 4
Konstrukce plazmidu pPB202 pro inzerci expresních kazet do místa CHV ORF5 (obrázek 3)
Sekvence genu CHV ORF5 byla publikována nedávno (Limbách K. et al., J. Gen. Virol., 1994, 75, 2029-2039). Reakce PCR byla prováděna s genomovou DNA kmene F205 viru CHV (příklad 1) a s následujícími oligonukleotidy:
JCA072 (22 mer) (sekv. id. č. 9)
5' CAGCTTTATGTTTTTATTGTTC 3'
JCA073 (29 mer) (sekv. id. č. 10)
5’ AAAGAATTCTACAACTGTTTAATAAAGAC 3' za vzniku fragmentu PCR o velikosti 751 bp obsahujícího kompletní gen CHV ORF2. Tento fragment byl štěpen BG1II a EcoRI, aby se izoloval fragment BglII-EcoRI o velikosti 709 bp. Tento fragment byl ligován s vektorem pGEM4Z (Promega kat. č. P2161), předem štěpeným EcoRI a BamHI, za vzniku plazmidu pPB201 (3559 bp). Plazmid pPB201 pak byl štěpen Scal a PvuII a potom ligován s vícečetným klonovacím místem získaným hydridizací následujících 2 oligonukleotidů:
JCA074 (36 mer) (sekv. id. č. 11)
5' ACTCCAGCTACATGGGATATCGGGCCCATCGATCAG 3'
JCA075 (36 mer) (sekv. id. č. 12)
5' CTGATCGATGGGCCCGATATCCCATGTAGCTGGAGT 3’ za vzniku plazmidu pPB202 (3395 bp).
Příklad 5
Konstrukce plazmidu pPB204 pro inzerci expresních kazet do místa CHV TK (obrázek 4)
Sekvence genu thymidinkinázy CHV (TK) byla publikována nedávno (Rémond M. et al., Virus Research, 1995, 39, 341-354). Reakce PCR byla prováděna s genomovou DNA kmene F205 viru CHV (příklad 1) a s následujícími oligonukleotidy:
JCA076 (35 mer) (sekv. id. č. 13)
5' AGCGTTAACCTCAAAAGCCAAATTTACACTTCCCG 3'
JCA077 (38 mer) (sekv. id. č. 14)
5’ CCCAAGCTTTTCTAAAGCCCATTTATAAATAATAAATG 3’ za vzniku fragmentu PCR o velikosti 1030 bp, obsahujícího kináza thymidin (TK) gen. Tento fragment byl štěpen Hpal a HindlII, aby se izoloval 1019 o velikosti bp Phal-HindlII fragment. Tento fragment byl ligován s vektorem pSP73 (Promega kat. č. P2221), předem štěpen EcoRV a HindlII, za vzniku plazmidu pPB203 (3423 bp).
Plazmid pPB203 pak byl štěpen EcoRI a Styl a potom ligován s vícečetným klonovacím místem získaným hybridizací následujících 2 oligonukleotidů:
JCA078 (36 mer) (sekv. id. č. 15)
5’ AATTCCCAGCTACATGGGATATCGGGCCCATCGATC 3'
JCA079 (36 mer) (sekv. id. č. 16)
5' CAAGGATCGATGGGCCCGATATCCCATGTAGCTGGG 3' za vzniku plazmidu pP204 (3399 bp).
-8CZ 297022 B6
Příklad 6
Konstrukce plazmidu pPB206 pro inzerci expresních kazet do místa umístěného mezi geny CHV ORF19 a ORF22 (obrázek 5).
Sekvence intergenového úseku odpovídající přirozené deleci genů kódujících velkou podjednotku (gen „RR1“) a malou podjednotku (gen „RR2“) ribonukleotidreduktázy byla nedávno publikována (Rémond M. et al., J. Gen. Virol., 1996, 77, 37-48). Podle názvosloví použitého autory Rémond et al., delece těchto dvou genů nastává mezi otevřenými čtecími rámci nazvanými CHV „orfl9“ a CHV „orf22“ [v tomto textu označenými ORF19 a ORF22, v daném pořadí]. Reakce PCR byla prováděna s genomovou DNA kmene F205 viru CHV (příklad 1) a s následujícími oligonukleotidy:
JCA080 (36 mer) (sekv. id. č. 17)
5' GGAGATCTAGTAAATTAAATAGTAATTCATTTAATG 3'
JCA081 (33 mer) (sekv. id. č. 18)
5’ CAGTCGCGAAGATGAAAATAAAATCCATCGAAG 3’ za vzniku fragmentu PCR o velikosti 720 bp obsahujícího intergenový úsek odpovídající přirozené deleci genů CHV ORF19 a ORF22. Tento fragment byl štěpen Spěl a Nrul, aby se izoloval fragment Spel-Nrul o velikosti 709 bp. Tento fragment byl ligo ván s vektorem pGEM4Z (Promega kat. č. P2161), předem štěpeným Smál a Xbal, za vzniku plazmidu pPB205 (3572 bp). Plazmid pPB205 pak byl štěpen Mfel a potom částečně štěpen SspI, aby se izoloval fragment Mfel-SspI o velikosti 3512 bp. Tento fragment pak byl ligován s vícečetným klonovacím místem získaným hybridizací následujících 2 oligonukleotidů:
JCA082 (38 mer) (sekv. id. č. 19)
5’ AATTGGCAGCTACATGGGATATCGGGCCCATCGATAAT 3'
JCA083 (34 mer) (sekv. id. č. 20)
5' ATTATCGATGGGCCCGATATCGGATGTAGCTGGC 3’ za vzniku plazmidu pPB206 (3548 bp).
Příklad 7
Izolace genomové RNA z kmene CDV Onderstepoort a klonování komplementární DNA kódující geny HA a F
Kmen CDV Onderstepoort (Mitchell W, et al., J. Virol., Meth., 1987, 18, 121-131) byl pěstován na buňkách MDCK (Madin-Darbyho buňky psích ledvin) v médiu DMEM (Gibco). Po purifikaci viru byla izolována genomová virová RNA s použitím techniky extrakce směsí guanidinium thiokyanátu a fenol-chloroformu (Chomczynski P. a Sacchi N., Anal. Biochem., 1987, 162, 156— 159). Specifické oligonukleotidy (obsahující restrikční místa na svých 5' koncích pro usnadnění klonování amplifikovaných fragmentů) byly syntetizovány tak, aby zcela pokryly kódující úseky genů, které měly být amplifikovány (geny HA a F, v daném pořadí). Reakce reverzní transkripce (RT) a amplifíkace polymerázovou řetězovou reakcí (PCR) byly prováděny podle standardních technik (Sambrook J. et al., 1989). Každá RT-PCR reakce byla prováděna s párem specifických amplimerů a jako templát použila extrahovanou virovu genomovou RNA. Amplifikovaná kom
-9CZ 297022 B6 plementámí DNA byla extrahována směsí fenol/chloroform/izoamylalkohol (25:24:1) před štěpením restrikčními enzymy a klonováním do vhodného vdctoru.
7.1. Konstrukce expresní kazety CDV HA (pPB208) (obrázek 6)
Plazmid pCMVB (Clontech kat. č. 6177-1) byl štěpen EcoRI a Notl, aby se izoloval fragment EcoRI-Notl o velikosti 818 bp obsahující úsek promotoru brzkého raného genu lidského cytomegaloviru (fragment A).
Reakce RT-PCR byla prováděna s genomovou RNA viru CDV (kmen Onderstepoort) a s následujícími oligonukleotidy:
JCAC84 (32 mer) (sekv. id. č. 21)
5' TTGCGGCCGCATGCTCCCCTACCAAGACAAGG 3’
JCA085 (28 mer) (sekv. id. č. 22)
5' TTGGTACCTTAACGGTTACATGAGAATC 3’ za vzniku fragmentu PCR o velikosti 1837 bp obsahujícího gen CDV HA. Tento fragment byl štěpen Notl a KpnI, aby se izoloval fragment Notl-KpnI o velikosti 1826 bp (fragment B).
Fragmenty A a B byly ligovány společně s vektorem pGEM-7Zf+ (Promega kat. č. P2251), předem štěpeným EcoRI a KpnI, za vzniku plazmidu pPB207 (5634 bp).
Reakce PCR byla prováděna s plazmidem pCMVB a s následujícími oligonukleotidy:
PB088 (30 mer) (sekv. id. č. 23)
5' TTGGGTACCGCCTCGACTCTAGGCGGCCGC 3’
PB089 (32 mer) (sekv. id. č. 24)
5' TTGGGTACCGGATCCGAAAAAACCTCCCACAC 3' za vzniku fragmentu PCR o velikosti 244 bp obsahujícího polyadenylační signál časného genu viru SV40. Tento fragment byl štěpen KpnI, aby se izoloval fragment KpnI-KpnI o velikosti 233 bp. Tento fragment pak byl ligován z plazmidem pPB207, předem štěpeným KpnI, za vzniku plazmidu pPB208 (5867 bp).
7.2. Konstrukce expresní kazety CDV F (pPB210) (obrázek 7)
Plazmid PCMVB (Clontech kat. č. 6177-1) byl štěpen EcoRI a Notl, aby se izoloval fragment EcoRI-Notl o velkosti 818 bp obsahující úsek promotoru brzkého raného genu lidského cytomegaloviru (fragment A).
Reakce RT-PCR byla prováděna s genomovou RNA viru CDV (kmen Onderstepoort) a s následujícími oligonukleotidy:
-10CZ 297022 B6
JCA086 (34 mer) (sekv. id. č. 25)
5' TTGCGGCCGCATGCACAGGGGAATCCCCAAAAGC 3’
JCA087 (28 mer) (sekv. id. č. 26)
5' TTGGTACCTCAGAGTGATCTCACATAGG 3* za vzniku fragmentu PCR o velikosti 2011 bp obsahujícího gen F CDV. Tento fragment byl štěpen Notl a KpnI, aby se izoloval fragment Notl-KpnI o velikosti 2000 bp (fragment B). Fragmenty A a B byly ligovány společně s vektorem pGEM-7Zf+ (Promega kat. č. P2251), předem štěpeným EcoRI a KpnI, za vzniku plazmidů pPB209 (5808 bp).
Reakce PCR byla prováděna s plazmidem pCMVB a s následujícími oligonukleotidy:
PB088 (30 mer) (sekv. id. č. 23)
5' TTGGGTACCGCCTCGACTCTAGGCGGCCGC 3'
PB089 (32 mer) (sekv. id. č. 24)
5’ TTGGGTACCGGATCCGAAAAAACCTCCCACAC 3' za vzniku fragmentu PCR o velikosti 244 bp obsahujícího polyadenylační signál časného genu viru SV40. Tento fragment byl štěpen KpnI, aby se izoloval fragment KpnI-KpnI o velikosti 233 bp. Tento fragment pak byl ligován s plazmidem pPB209, předem štěpeným KpnI, za vzniku plazmidů pPB210 (6041 bp).
Příklad 8
Konstrukce donorového plazmidů pPB213 pro inzerci expresní kazety HA CDV do místa CHV ORF3 (obrázek 8)
Plazmid pPB208 (příklad 7.1). byl štěpen Apal a Clal, aby se izoloval fragment Apal-Clal o velikosti 2920 bp obsahující kazetu pro expresi genu HA viru CDV. Tento fragment pak byl ligován s plazmidem pPB200 (příklad 3), předem štěpeným Apal a Clal, za vzniku plazmidů pPB213 (7043 bp). Tento plazmid umožní inzerci kazety pro expresi genu HA CDV do místa CHV ORF3.
Příklad 9
Konstrukce donorového plazmidů pPB214 pro inzerci expresní kazety F CDV do místa CHV ORF3 (obrázek 9)
Plazmid pPB210 (příklad 7.2) byl štěpen Apal a Clal, aby se izoloval fragment Apal-Clal o velikosti 3100 bp obsahující kazetu pro expresi genu F viru CDV. Tento fragment pak byl ligován s plazmidem pPB200 (příklad 3), předem štěpeným Apal a Clal, za vzniku plazmidů pPB214 (7217 bp). Tento plazmid umožní inzerci kazety pro expresi genu F CDV do místa CHV ORF3.
-11 CZ 297022 B6
Příklad 10
Konstrukce donorového plazmidu pPB215 pro inzerci kazety pro expresi genu G viru vztekliny do místa CHV ORF3 (obrázek 10, 11 a 12).
Plazmid pPB199 (příklad 3) byl štěpen Spěl, ošetřen alkalickou fosfatázou, a pak ligován s vícečetným klonovacím místem získaným hydridizací následujících 2 oligonukleotidů:
JCA088 (39 mer) (sekv. id. č. 27)
5' CTAGTCCAGCAAGGTGTCGACGGATCGATATCGGGCCCA 3'
JCA089 (39 mer) (sekv. id. č. 28)
5' CTAGTGGGCCCGATATCGATCCGTCGACACCTTGCTGGA 3' za vzniku plazmidu pPB200' (4135 bp) (obrázek 10). Plazmid pCMVB (Clontech kat. č. 6177-1) byl štěpen EcoRI a Notl, aby se izoloval fragment EcoRI-Notl o velikosti 818 bp obsahující úsek promotoru brzkého raného genu lidského cytomegaloviru (fragment A).
Podle technických postupů již popsaných pro virus CDV (příklad 7), RNA kmene ERA viru vztekliny byla extrahována a puntíkována z kultury Věro buněk infikovaných virem vztekliny. Pak byla prováděna reakce RT-PCR (viz příkladu 7) s genomovou RNA viru vztekliny (kmen ERA) a s následujícími oligonukleotidy:
JCA090 (31 mer) (sekv. id. č. 29)
5' TTGCGGCCGCATGGTTCCTCAGGCTCTCCTG 3ř
JCA091 (31 mer) (sekv. id. č. 30)
5’ TTGGTACCTCACAGTCTGGTCTCACCCCCAC 3' za vzniku fragmentu PCR o velikosti 1597 bp obsahujícího gen G viru vztekliny (patenty FR-A2 515 685 a EP-A-162 757). Tento fragment byl štěpen Notl a KpnI, aby se izoloval fragment Notl-Knpl o velikosti 1586 bp (fragment B). Fragmenty A a B byly ligovány společně s vektorem pSP73 (Promega kat. č. P2221), předem štěpeným EcoRI a KpnI, za vzniku plazmidu pPB211 (4852 bp).
Reakce PCR byla prováděna s plazmidem pCMVB a s následujícími oligonukleotidy:
PB088 (30 mer) (sekv. id. č. 23)
5' TTGGGTACCGCCTCGACTCTAGGCGGCCGC 3'
PB089 (32 mer) (sekv. id. č. 24)
5' TTGGGTACCGGATCCGAAAAAACCTCCCACAC 3' za vzniku fragmentu PCR o velikosti 244 bp obsahujícího polyadenylační signál časného genu viru SV40. Tento fragment byl štěpen KpnI, aby se izoloval fragment KpnI-KpnI o velikosti 233 bp. Tento fragment pak byl ligován s plazmidem pPB211, předem štěpeným KpnI, za vzniku plazmidu pPB212 (5085) bp (obrázek 11). Plazmid pPB212 byl štěpen EcoRV a Sáli, aby se izoloval fragment EcoRV-SalI o velikosti 2664 bp obsahující kazetu pro expresi genu G viru
-12CZ 297022 B6 vztekliny. Tento fragment pak byl ligován s plazmidem pPB200' (viz výše), předem štěpeným EcoRV a Sáli, za vzniku plazmidu pPB215 (6790 bp) (obrázek 12).
Příklad 11
Konstrukce donorového plazmidu pPB216 pro inzerci expresní kazety HA CDV do místa CHV ORF5 (obrázek 13)
Plazmid pPB208 (příklad 7.1.) byl štěpen Smál a Apal, aby se izoloval fragment Smal-Apal o velikosti 2909 bp obsahující kazetu pro expresi genu HA CDV. Tento fragment pak byl ligován s plazmidem pPB202 (příklad 4), předem štěpeným EcoRV a Apal, za vzniku plazmidu pPB216 (6291 bp). Tento plazmid umožní inzerci kazety pro expresi genu HA CDV do místa CHV ORF5.
Příklad 12
Konstrukce donorového plazmidu pPB217 pro inzerci expresní kazety EA CDV do místa CHV TK (obrázek 14)
Plazmid pPB208 (příklad 7.1.) byl štěpen Apal a Clal, aby se izoloval fragment o velikosti 2920 bp obsahující kazetu pro expresi genu HA CDV. Tento fragment byl ligován s plazmidem pPB204 (příklad 5), předem štěpeným Apal a Clal, za vzniku plazmidu pPB217 (6316 bp). Tento plazmid umožní inzerci kazety pro expresi CDV HA gen do místa CHV TK.
Příklad 13
Konstrukce donorového plazmidu pPB218 pro inzerci expresní kazety HA CDV do místa umístěného mezi geny CHV ORF19 a CHV ORF22 (obrázek 15).
Plazmid pPB208 (příklad 7.1) byl štěpen Apal a Clal, aby se izoloval fragment o velikosti 2920 bp obsahující kazetu pro expresi genu HA CDV. Tento fragment byl ligován s plazmidem pPB206 (příklad 6), předem štěpeným Apal a Clal, za vzniku plazmidu pPB218 (6462 bp). Tento plazmid umožní inzerci kazety pro expresi CDV HA gen do místa umístěného mezi geny CHV ORF19aCHV ORF22.
Příklad 14
Izolace rekombinantního viru vCHVOl obsahujícího kazetu pro expresi genu HA CDV v místě CHV ORF3.
Plazmid pPB213 (viz příklad 8) byl linearizován štěpením HindlII, extrahován směsí fenolu a chloroformu, precipitován absolutním ethanolem a pak nabrán do sterilní vody.
Buňky MDCK, které vytvořily ustálený buněčný porost na Petriho misce (Coming, průměr 4,5 cm), pak byly transfekovány následující směsí: 1 pg linearizovaného plazmidu pPB213 + 5 pg virové DNA z CHV ve 300 pl média MEM a 100 pg LipofescAMINE (Gibco-BRL, kat. č. 18324-012) naředěného ve 300 pl média (konečný objem směsi = 600 pl). Těchto 600 pl pak bylo naředěno ve 3 ml (konečný objem) média MEM a rozprostřeno přes 3.106 buněk MDCK. Směs byla ponechána v kontaktu s buňkami po dobu 5 hodin, pak odstraněna a nahrazena 5 ml kultivačního média. Buňky pak byly ponechány v kultuře po dobu 24 hodin ve +37 °C. Po 24 až 48 hodinách kultivace byl sklizen 1 ml tkáňového supematantu a několik ředění tohoto supema
- 13CZ 297022 B6 tantu bylo použito k infekci dalších buněk MDCK (pěstovaných na Petriho miskách (Coming, průměr 4,5 cm)) tak, aby vznikly izolované plaky, každá miska byla infikována 1 ml ředění výchozího supematantu. Po době kontaktu 1 hodina ve 37 °C, bylo infekční médium odstraněno a nahrazeno 5 ml média MEM obsahujícího 1% agarózu, které bylo udržováno ve 42 °C. Když agaróza ztuhla, misky byly inkubovány, pokud nebyly pozorovány plaky. Agarózová vrstva pak byla odstraněna a virové plaky byly přeneseny na sterilní nitrocelulózovou membránu stejného průměru, jaký má Petriho miska použitá pro kultivaci. Tato membrána byla sama přenesena na další nitrocelulózovou membránu tak, aby se získala invertovaná „kopie“ prvního přenosu. Plaky přenesené na tuto druhou kopii pak byly hybridizovány podle standardních technik odborníkům známých s Notl-Notl fragmentem genu HA CDV o velikosti 1842 bp, získaným štěpením plazmidu pPB208 (příklad 7.1), který byl značený digoxigeninem (souprava DNA Labelling kit, Boehringer Mannheim, kat. č. 1175033). Po hybridizaci, promytí a kontaktu s vizualizačním substrátem byla nitrocelulózová membrána exponována na autoradiograflcký film. Snímky pozitivní hybridizace na této membráně indikovaly, které plaky byly konkrétní plaky obsahující rekombinantní viry CHV s vloženou kazetou HA CDV. Plaky obsahující těmto pozitivních plakům byly vyřezány ze sterilních podmínek z první nitrocelulózové membrány, vloženy do mikrozkumavky typu Eppendorf obsahující 0,05 ml média MEM a sonikovány, aby se z membrány uvolnily viriony. Médium obsažené v mikrozkumavce typu Eppendorf pak bylo naředěno médiu MEM a tak získaná ředění byla použita pro infekci dalších kultur buněk MDCK. 100% čistý rekombinantní virus obsahující kazetu HCMV-IE/CDV HA/polyA vloženou do místa ORF3 byl tudíž izolován po 3 cyklech purifikace a byl nazván vCHVOl. Homologie rekombinace byla ověřena PCR s použitím oligonukleotidů umístěných na každé straně inzerčního místa. Nepřítomnost reogranizace na genomu rekombinantního viru vCHVOl, jiné než v úseku rekombinace, byla ověřena technikou Southemova blotu.
Příklad 15
Izolace rekombinantních virů CHV exprimující různé cizorodé geny
Podle postupu popsaného v příkladu 14 byla prováděna konstrukce různých rekombinantních virů CHV s použitím donorových plazmidů popsaných v příkladech 9 až 3.
Příklad 16
Příprava vakcín
Aby se připravila vakcína, byly rekombinantní viry získané v příkladech 14 a 15 pěstovány na buňkách MDCK. Sklízení rekombinantních virů se provádělo, když byl cytopatický účinek kompletní. Lyžované buňky a tkáňový supematant byly sklizeny. Po pročištění buněčného lyzátu, aby se odstranila buněčná debris, byl virový roztok titrován. Virový roztok pak byl naředěn stabilizačním roztokem pro lyofilizaci, distribuován do lahviček v množství jedné vakcinační dávky (102 CCID50 až 107 CCID50) a na závěr lyofilizován. Pokud je to zapotřebí, virový roztok pak může být zmražen.
Příklad 17
Způsoby očkování
Podle výhodného způsobu očkování je vakcína získaná podle vynálezu opět rozpuštěna nebo rozmražena, a pak podávána parenterální nebo slizniční cestou, ale výhodně slizniční cestou, konkrétně perorální a/nebo nazální cestou. Vakcinační dávka výhodně bude mezi 102 CCID50 a 107 CCID50. Výhodně bude dávka pro parenterální cestu mezi 104 CCID50 a 107 CCED50 a pro
-14CZ 297022 B6 perorální a/nebo nazální cestu mezi 102 CCID50 a 105 CCID50. Jak bylo výše popsáno, vakcína je obecně účinná po jednom podání prostřednictvím perorální a/nebo nazální cesty. Nicméně může být nezbytné opakované podávání.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (5)
1. Rekombinantní psí herpesvirus (CHV), který obsahuje a exprimuje alespoň jednu heterologní nukleotidovou sekvenci kódující antigen vybraný ze skupiny sestávající z antigenu HA z viru psinky, F z viru psinky, G z viru vztekliny, PV2 z psího parvoviru, HA z viru psí parainfluenzy typu 2, F z viru psí parainfluenzy typu 2, OspA z Borrelia burgdorferi a OspB z Borrelia burgdorferi, přičemž heterologní nukleotidové sekvence jsou vloženy alespoň do jednoho místa inzerce vybraného ze skupiny sestávající z ORF5 odpovídajícího sekvence id. č. 6 a genu hymidinkinázy.
2. Rekombinantní psí herpersvirus (CHV), který obsahuje a exprimuje alespoň jednu heterologní nukleotidovou sekvenci, která je vložena do ORF3 odpovídajícího sekvenci id. č. 4.
3. Virus podle nároku 2, který obsahuje alespoň jednu heterologní nukleotidovou sekvenci kódující antigen vybraný ze skupiny sestávající z antigenu HA z viru psinky, F z viru psinky, G z viru vztekliny, VP2 z psího parvoviru, HA z viru psí parainfluenzy typu 2, F z viru psí parainfluenzy typu 2, OspA z Borrelia burgdorferi a OspB z Borrelia burgdorferi.
4. Virus podle kteréhokoli z nároků 1 až 3, kde heterologní nukleotidová sekvence je vložena jen inzercí nebo po úplné nebo částečné deleci inzerčního úseku.
5. Virus podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, který obsahuje brzký raný promotor CMV.
6. Virus podle nároku 5, kde brzký raný promotor CMV je brzký raný promotor myšího nebo humánního CMV.
7. Virus podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, kde alespoň dvě heterologní nukleotidové sekvence jsou vloženy do stejného inzerčního úseku pod kontrolou různých promotorů.
8. Virus podle nároku 7, kde promotory jsou různé brzké rané promotory CMV.
9. Virus podle nároku 7 nebo 8, který obsahuje první heterologní nukleotidovou sekvenci spojenou s brzkým raným promotorem CMV a druhou heterologní nukleotidovou sekvenci spojenou s jiným promotorem, přičemž promotory navzájem sousedí svými 5 konci.
10. Virus podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, který kromě alespoň jedné heterologní nukleotidové sekvence dále obsahuje heterologní nukleotidovou sekvenci kódující imunomodulační polypeptid.
11. Virus podle nároku 10, kde imunomodulační polypeptid je cytokin.
12. Virus podle kteréhokoliv z nároků 1 až 11, který obsahuje expresní kazetu vloženou do inzerčního úseku, přičemž kazeta obsahuje, v uvedeném sledu, promotor, dvě nebo více heterologních nukleotidových sekvencí oddělených vzájemně IRES, a polyadenylační signál.
- 15 CZ 297022 B6
13. Živá rekombinantní vakcína, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden rekombinantní psí herpesvirus (CHV) podle kteréhokoliv z nároků 1 až 12.
5 14. Formulace polyvalentní vakcíny, vyznačující se tím, že obsahuje, smíchané nebo pro smíchání, alespoň dva psí herpesviry (CHV) podle kteréhokoliv z nároků 1 až 12, přičemž psí herpesviry obsahují odlišné heterologní nukleotidové sekvence.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9608242A FR2750865B1 (fr) | 1996-06-27 | 1996-06-27 | Vaccin vivant recombinant a base d'herpesvirus canin, notamment contre la maladie de carre, la rage ou le virus parainfluenza de type 2 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ428198A3 CZ428198A3 (cs) | 1999-04-14 |
| CZ297022B6 true CZ297022B6 (cs) | 2006-08-16 |
Family
ID=9493648
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ0428198A CZ297022B6 (cs) | 1996-06-27 | 1997-06-23 | Rekombinantní psí herpesvirus exprimující alesponjeden antigen, zejména antigen psinky, vztekliny,parvoviru a parainfluenzy typu 2, a vakcína na bázi tohoto viru |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6159477A (cs) |
| EP (1) | EP0910657B1 (cs) |
| JP (1) | JP2000512264A (cs) |
| KR (1) | KR20000022213A (cs) |
| AU (1) | AU737583B2 (cs) |
| BR (1) | BR9710012B1 (cs) |
| CA (1) | CA2258735C (cs) |
| CZ (1) | CZ297022B6 (cs) |
| FR (1) | FR2750865B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ333546A (cs) |
| PL (2) | PL196247B1 (cs) |
| WO (1) | WO1997049825A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA975619B (cs) |
Families Citing this family (48)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2750865B1 (fr) * | 1996-06-27 | 1998-12-04 | Rhone Merieux | Vaccin vivant recombinant a base d'herpesvirus canin, notamment contre la maladie de carre, la rage ou le virus parainfluenza de type 2 |
| FR2775601B1 (fr) * | 1998-03-03 | 2001-09-21 | Merial Sas | Vaccins vivants recombines et adjuves |
| US7906311B2 (en) | 2002-03-20 | 2011-03-15 | Merial Limited | Cotton rat lung cells for virus culture |
| JP2006516883A (ja) | 2002-09-19 | 2006-07-13 | アメリカ合衆国 | Ｐ．アリアシポリペプチド、ユウガイサシチョウバエポリペプチド、および使用法 |
| US7485306B2 (en) | 2002-10-29 | 2009-02-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Lutzomyia longipalpis polypeptides and methods of use |
| WO2004056390A1 (en) * | 2002-12-19 | 2004-07-08 | Akzo Nobel Patent Department | Trivalent vaccine with maternal antibody transfer via the milk |
| EP1606419A1 (en) | 2003-03-18 | 2005-12-21 | Quantum Genetics Ireland Limited | Systems and methods for improving protein and milk production of dairy herds |
| US7468273B2 (en) | 2003-05-01 | 2008-12-23 | Meial Limited | Canine GHRH gene, polypeptides and methods of use |
| WO2005021713A2 (en) | 2003-06-20 | 2005-03-10 | Protein Sciences Corporation | Vectors expressing sars immunogens, compositions containing such vectors or expression products thereof, methods and assays for making and using |
| US20050214316A1 (en) | 2003-11-13 | 2005-09-29 | Brown Thomas P | Methods of characterizing infectious bursal disease virus |
| JP2007525217A (ja) | 2004-02-19 | 2007-09-06 | ザ ガバナーズ オブ ザ ユニバーシティー オブ アルバータ | レプチンプロモーター多型及びその使用 |
| CN101208104B (zh) | 2005-04-25 | 2012-10-31 | 梅瑞尔有限公司 | Nipah病毒疫苗 |
| US20080241184A1 (en) | 2005-08-25 | 2008-10-02 | Jules Maarten Minke | Canine influenza vaccines |
| US8784843B2 (en) * | 2005-09-16 | 2014-07-22 | Merial Limited | Stabilizers for freeze-dried vaccines |
| US7771995B2 (en) | 2005-11-14 | 2010-08-10 | Merial Limited | Plasmid encoding human BMP-7 |
| EP3536704B1 (en) | 2005-11-14 | 2021-08-25 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Gene therapy for renal failure |
| US7682619B2 (en) | 2006-04-06 | 2010-03-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Canine influenza virus |
| US7862821B2 (en) | 2006-06-01 | 2011-01-04 | Merial Limited | Recombinant vaccine against bluetongue virus |
| ES2760004T3 (es) | 2008-05-08 | 2020-05-12 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Vacuna contra Leishmania utilizando un inmunnógeno salival de mosca de la arena |
| CN103585643A (zh) | 2009-04-03 | 2014-02-19 | 梅里亚有限公司 | 运载新城疫病毒的禽疫苗 |
| US20130197612A1 (en) * | 2010-02-26 | 2013-08-01 | Jack W. Lasersohn | Electromagnetic Radiation Therapy |
| ES2609847T3 (es) | 2010-08-31 | 2017-04-24 | Merial, Inc. | Vacunas de herpesvirus basadas en vectores del virus de la enfermedad de Newcastle |
| WO2012090073A2 (en) | 2010-12-30 | 2012-07-05 | The Netherlands Cancer Institute | Methods and compositions for predicting chemotherapy sensitivity |
| US20140296248A1 (en) | 2011-04-04 | 2014-10-02 | Stichting het Nederlands Kanker Instiuut-Antoni van Leeuwenhoek ziekenhuis | Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment |
| WO2012138789A2 (en) | 2011-04-04 | 2012-10-11 | Netherlands Cancer Institute | Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment |
| WO2012145577A1 (en) | 2011-04-20 | 2012-10-26 | Merial Limited | Adjuvanted rabies vaccine with improved viscosity profile |
| US10081658B2 (en) | 2011-04-25 | 2018-09-25 | Advanced Bioscience Laboratories, Inc. | Truncated HIV envelope proteins (ENV), methods and compositions related thereto |
| ES2674439T3 (es) | 2011-06-01 | 2018-06-29 | Merial, Inc. | Administración sin aguja de vacunas contra el VSRRP |
| HUE035774T2 (en) | 2011-08-12 | 2018-05-28 | Merial Inc | Biological substances, in particular vaccines, preserved by vacuum |
| WO2013093629A2 (en) | 2011-12-20 | 2013-06-27 | Netherlands Cancer Institute | Modular vaccines, methods and compositions related thereto |
| WO2013138776A1 (en) | 2012-03-16 | 2013-09-19 | Merial Limited | Novel methods for providing long-term protective immunity against rabies in animals, based upon administration of replication-deficient flavivirus expressing rabies g |
| US9556419B2 (en) | 2013-03-12 | 2017-01-31 | Merial Inc. | Reverse genetics Schmallenberg virus vaccine compositions, and methods of use thereof |
| WO2015077717A1 (en) | 2013-11-25 | 2015-05-28 | The Broad Institute Inc. | Compositions and methods for diagnosing, evaluating and treating cancer by means of the dna methylation status |
| WO2015085147A1 (en) | 2013-12-05 | 2015-06-11 | The Broad Institute Inc. | Polymorphic gene typing and somatic change detection using sequencing data |
| AU2014368898B2 (en) | 2013-12-20 | 2020-06-11 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Combination therapy with neoantigen vaccine |
| CA2966191A1 (en) | 2014-11-03 | 2016-05-12 | Merial, Inc. | Methods of using microneedle vaccine formulations to elicit in animals protective immunity against rabies virus |
| EP3234193B1 (en) | 2014-12-19 | 2020-07-15 | Massachusetts Institute of Technology | Molecular biomarkers for cancer immunotherapy |
| WO2016100977A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | The Broad Institute Inc. | Methods for profiling the t-cel- receptor repertoire |
| CR20200476A (es) | 2015-05-20 | 2020-12-02 | Dana Farber Cancer Inst Inc | ANTÍGENOS COMPARTIDOS (Divisional 2017-0584) |
| TWI750122B (zh) | 2015-06-09 | 2021-12-21 | 美商博德研究所有限公司 | 用於贅瘤疫苗之調配物及其製備方法 |
| NZ738957A (en) | 2015-06-23 | 2019-09-27 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Prrsv minor protein-containing recombinant viral vectors and methods of making and use thereof |
| US20190346442A1 (en) | 2016-04-18 | 2019-11-14 | The Broad Institute, Inc. | Improved hla epitope prediction |
| CN109310087A (zh) * | 2016-06-30 | 2019-02-05 | 贴近科学Ip控股私人有限公司 | 抗微生物的组合物和应用该组合物的方法 |
| EP3574116A1 (en) | 2017-01-24 | 2019-12-04 | The Broad Institute, Inc. | Compositions and methods for detecting a mutant variant of a polynucleotide |
| US20210382068A1 (en) | 2018-10-02 | 2021-12-09 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Hla single allele lines |
| WO2020131586A2 (en) | 2018-12-17 | 2020-06-25 | The Broad Institute, Inc. | Methods for identifying neoantigens |
| CN110302374B (zh) * | 2019-08-09 | 2023-04-14 | 黑龙江八一农垦大学 | 犬用疫苗及其制备方法和应用 |
| CN114790229B (zh) * | 2022-04-12 | 2024-07-12 | 北京慧德易科技有限责任公司 | 一种重组蛋白及其制备方法和应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4213965A (en) * | 1979-01-23 | 1980-07-22 | Cornell Research Foundation, Inc. | Small-plaque variant canine herpesvirus vaccine |
| EP0447303A1 (fr) * | 1990-03-12 | 1991-09-18 | Rhone Merieux S.A. | Virus herpès recombinants notamment pour la réalisation de vaccins, leur procédé de préparation, les plasmides réalisés au cours de ce procédé et les vaccins obtenus |
| WO1995026751A1 (en) * | 1994-03-30 | 1995-10-12 | Virogenetics Corporation | NUCLEOTIDE AND AMINO ACID SEQUENCES OF CANINE HERPESVIRUS gB, gC and gD AND USES THEREFOR |
| CN1117081A (zh) * | 1995-03-16 | 1996-02-21 | 高云 | 犬瘟热狂犬病细小病毒三联活疫苗、毒种及制造方法 |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5777095A (en) * | 1988-10-24 | 1998-07-07 | Symbicom Aktiebolag | Osp A and B Sequence of Borrelia burgdonferi strains ACA1 and IP90 |
| AU1423792A (en) * | 1991-02-12 | 1992-09-07 | Colorado State University Research Foundation | Reagents and methods for identification of vaccines |
| US5795768A (en) * | 1991-02-12 | 1998-08-18 | Heska Corporation | Filariid nematode cysteine protease proteins, nucleic acid molecules and uses thereof |
| US5639876A (en) * | 1991-02-12 | 1997-06-17 | Heska Corporation | Nucleic acid molecules encoding novel parasitic helminth proteins |
| US5843456A (en) * | 1991-03-07 | 1998-12-01 | Virogenetics Corporation | Alvac poxvirus-rabies compositions and combination compositions and uses |
| US5418137A (en) * | 1991-09-26 | 1995-05-23 | Paravax, Inc. | Flea membrane binding site proteins as screening tools |
| AU675214B2 (en) * | 1991-11-12 | 1997-01-30 | Colorado State University Research Foundation | Protease vaccine against heartworm |
| US5356622A (en) * | 1991-12-13 | 1994-10-18 | Paravax, Inc. | Flea midgut-supernatant vaccines |
| US5399485A (en) * | 1992-01-17 | 1995-03-21 | United States Of America | Methods and compositions for diagnosing cat scratch disease and bacillary angiomatosis caused by Rochalimaea henselae |
| US5492695A (en) * | 1992-05-14 | 1996-02-20 | Colorado State University Research Foundation | Vaccinating cats against Dirofilaria immitis with an L4 homogenate |
| US5541075A (en) * | 1993-02-05 | 1996-07-30 | Heska Corporation | Carbohydrate-based vaccine and diagnostic reagent for trichinosis |
| US5707817A (en) * | 1993-02-05 | 1998-01-13 | Colorado State University Research Foundation | Carbohydrate-based vaccine and diagnostic reagent for trichinosis |
| AU6172194A (en) * | 1993-02-08 | 1994-08-29 | Paravax, Inc. | Defective sindbis virus vectors that express (toxoplasma gondii) p30 antigens |
| US5569603A (en) * | 1994-03-08 | 1996-10-29 | Heska Corporation | Dirofilaria immitis GP29 proteins, nucleic acid molecules and uses thereof |
| WO1995032988A1 (en) * | 1994-05-26 | 1995-12-07 | Heska Corporation | Novel parasite protease genes and proteins |
| AU703794B2 (en) * | 1994-10-07 | 1999-04-01 | Heska Corporation | Novel ectoparasite saliva proteins and apparatus to collect such proteins |
| NZ296424A (en) * | 1994-10-18 | 1999-01-28 | Heska Corp | Flea serine protease and protease inhibitors and their use in protecting animals from infestation |
| US5789194A (en) * | 1995-05-23 | 1998-08-04 | Heska Corporation | Parasitic helminth venom allergen antigen 5-like genes and proteins |
| US5681724A (en) * | 1995-11-16 | 1997-10-28 | Heska Corporation | Parasitic helminth macrophage inhibitory factor nucleic acid molecules and uses thereof |
| US5753235A (en) * | 1996-02-15 | 1998-05-19 | Heska Corporation | Recombinant canine herpesviruses |
| FR2750865B1 (fr) * | 1996-06-27 | 1998-12-04 | Rhone Merieux | Vaccin vivant recombinant a base d'herpesvirus canin, notamment contre la maladie de carre, la rage ou le virus parainfluenza de type 2 |
-
1996
- 1996-06-27 FR FR9608242A patent/FR2750865B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-06-23 EP EP97930568A patent/EP0910657B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-23 PL PL330879A patent/PL196247B1/pl unknown
- 1997-06-23 WO PCT/FR1997/001115 patent/WO1997049825A1/fr active IP Right Grant
- 1997-06-23 JP JP09532942A patent/JP2000512264A/ja active Pending
- 1997-06-23 CZ CZ0428198A patent/CZ297022B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-06-23 NZ NZ333546A patent/NZ333546A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-06-23 CA CA2258735A patent/CA2258735C/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-23 PL PL380134A patent/PL196530B1/pl unknown
- 1997-06-23 KR KR1019980710632A patent/KR20000022213A/ko not_active Application Discontinuation
- 1997-06-23 BR BRPI9710012-9A patent/BR9710012B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1997-06-23 AU AU34474/97A patent/AU737583B2/en not_active Expired
- 1997-06-25 ZA ZA975619A patent/ZA975619B/xx unknown
-
1998
- 1998-12-16 US US09/213,053 patent/US6159477A/en not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-09-07 US US10/935,494 patent/US20060024329A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4213965A (en) * | 1979-01-23 | 1980-07-22 | Cornell Research Foundation, Inc. | Small-plaque variant canine herpesvirus vaccine |
| EP0447303A1 (fr) * | 1990-03-12 | 1991-09-18 | Rhone Merieux S.A. | Virus herpès recombinants notamment pour la réalisation de vaccins, leur procédé de préparation, les plasmides réalisés au cours de ce procédé et les vaccins obtenus |
| WO1995026751A1 (en) * | 1994-03-30 | 1995-10-12 | Virogenetics Corporation | NUCLEOTIDE AND AMINO ACID SEQUENCES OF CANINE HERPESVIRUS gB, gC and gD AND USES THEREFOR |
| CN1117081A (zh) * | 1995-03-16 | 1996-02-21 | 高云 | 犬瘟热狂犬病细小病毒三联活疫苗、毒种及制造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20000022213A (ko) | 2000-04-25 |
| US6159477A (en) | 2000-12-12 |
| CZ428198A3 (cs) | 1999-04-14 |
| FR2750865B1 (fr) | 1998-12-04 |
| PL196247B1 (pl) | 2007-12-31 |
| EP0910657B1 (fr) | 2013-02-27 |
| NZ333546A (en) | 2001-06-29 |
| PL330879A1 (en) | 1999-06-07 |
| ZA975619B (en) | 1998-12-28 |
| EP0910657A1 (fr) | 1999-04-28 |
| AU3447497A (en) | 1998-01-14 |
| JP2000512264A (ja) | 2000-09-19 |
| US20060024329A1 (en) | 2006-02-02 |
| FR2750865A1 (fr) | 1998-01-16 |
| BR9710012A (pt) | 1999-08-10 |
| BR9710012B1 (pt) | 2011-10-18 |
| AU737583B2 (en) | 2001-08-23 |
| CA2258735C (en) | 2011-06-21 |
| WO1997049825A1 (fr) | 1997-12-31 |
| CA2258735A1 (en) | 1997-12-31 |
| PL196530B1 (pl) | 2008-01-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ297022B6 (cs) | Rekombinantní psí herpesvirus exprimující alesponjeden antigen, zejména antigen psinky, vztekliny,parvoviru a parainfluenzy typu 2, a vakcína na bázi tohoto viru | |
| ES2320938T3 (es) | Vacuna viva recombinate a base de virus herpes felino de tipo 1, particularmente contra la peritonitis infeccion felina. | |
| ES2258970T3 (es) | Vectores y vacunas viricas a base de adenovirus porcinos recombinados. | |
| AU739374B2 (en) | Avian recombinant live vaccine using, as vector, the avian infectious laryngotracheitis virus | |
| KR100620302B1 (ko) | 개 질병, 특히 호흡기 및 소화성 질병 치료용폴리뉴클레오티드 백신 제제 | |
| AU734085B2 (en) | Recombinant live avian vaccine, using as vector the avian infectious laryngotracheitis virus. | |
| KR970011149B1 (ko) | 재조합 아비폭스 바이러스 | |
| ES2278382T3 (es) | Herpesvirus recombinante de pavos y sus usos. | |
| AU735265B2 (en) | Avian recombinant live vaccine using, as vector, the avian infectious laryngotracheitis virus | |
| Fischer et al. | Vaccination of puppies born to immune dams with a canine adenovirus-based vaccine protects against a canine distemper virus challenge | |
| JP2006348044A (ja) | 鳥類ヘルペスウイルスをベースとした組換型鳥類用生ワクチン、特にガンボロ病用ワクチン | |
| CZ301365B6 (cs) | Imunogenní kompozice pro vyvolání u savce celedi konovitých imunologické odezvy proti viru rinopneumonitidy, použití této kompozice pro výrobu léciva a souprava obsahující tuto kompozici | |
| JP4440347B2 (ja) | 組換えキメラウイルスとその使用 | |
| AU732885B2 (en) | Canine parvovirus DNA vaccines | |
| US20020081316A1 (en) | Novel avian herpes virus and uses thereof | |
| EP0720654A1 (en) | Novel proteins/polypeptides and cotransfection plasmids and live recombinant carriers therefor | |
| CA2626498C (en) | Recombinant chimeric virus | |
| Kleid | Vaccine Synthesis by Recombinant DNA Technology |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20170623 |