CZ296534B6

CZ296534B6 - Farmaceutická jednotková dávková forma a lék pro lécbu stavu, pri nemz je zádoucí inhibice fosfodiesterasy PDE5

Info

Publication number: CZ296534B6
Application number: CZ20013879A
Authority: CZ
Inventors: Ernest Pullman@William; Steven Whitaker@John
Original assignee: Lilly Icos Llc
Priority date: 1999-04-30
Filing date: 2000-04-26
Publication date: 2006-04-12
Also published as: DE60005940D1; SG98384A1; DE60005940T3; PE20010071A1; PT102457A; HUP0200912A3; LV12560B; CA2371684A1; KR20010020779A; HK1041204A1; HRP20010778A2; UA72248C2; EP1173181A2; NO20015275D0; BR0003046A; HUP0001632A2; HRP20010778B1; NO322013B3; HUP0001632A3; IE20000315A1

Abstract

Farmaceutická jednotková dávkový forma, která obsahuje 1 az 20 mg slouceniny strukturního vzorce I,kde uvedená dávková forma je vhodná pro perorálnípodávání. Sloucenina vzorce I je vysoce selektivním inhibitorem fosfodiesterasy typu 5 (PDE5) specifické pro cyklický guanosin-3',5'-monofosfát. Pouzití jednotkové dávky obsahující 1 az 20 mg slouceniny strukturního vzorce I pro výrobu léku pro lécbu stavu, pri nemz je zádoucí inhibice PDE5, jako je sexuální dysfunkce u muzu i zen.

Description

Farmaceutická jednotková dávkový forma, která obsahuje 1 až 20 mg sloučeniny strukturního vzorce I, kde uvedená dávková forma je vhodná pro perorální podávání. Sloučenina vzorce I je vysoce selektivním inhibitorem fosfodiesterasy typu 5 (PDE5) specifické pro cyklický guanosin-3',5'-monofosfát. Použití jednotkové dávky obsahující 1 až 20 mg sloučeniny strukturního vzorce I pro výrobu léku pro léčbu stavu, při němž je žádoucí inhibice PDE5, jako je sexuální dysfunkce u mužů i žen.

Farmaceutická jednotková dávková forma a lék pro léčbu stavu, při němž je žádoucí inhibice fosfodiesterasy PDE5

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká farmaceutické jednotkové dávkové formy a léku pro léčbu stavu, při němž je žádoucí inhibice fosfodiasterasy PDE5, jako je léčení sexuální dysfunkce u mužů i žen. Účinnou složkou tohoto léku je vysoce selektivní inhibitor fosfodiasterasy specifické pro cyklický guanosin-3',5'-monofosfát. Zde popsaná forma je výhodná v terapeutických aplikacích, ve kterých je žádoucí inhibice PDE5 s minimalizací nebo eliminací nežádoucích účinků vznikajících v důsledku inhibice jiných fosfodiesteras.

Dosavadní stav techniky

Biochemické, fyziologické a klinické účinky inhibitorů fosfodiasterasy specifického pro cyklický guanosin-3',5'-monofosfát (cGMP specifické PDE) ukazují na jejich použitelnost u mnoha onemocnění,u kterých je žádoucí modulace funkce hladkého svalu, ledvin, hemostázy, zánětu a/nebo endokrinního systému. Fosfodiasterasa specifická pro cGMP typu 5 (PDE5) je hlavním enzymem hydrolyzujícím cGMP v hladkém svalu cév a byla popsána její exprese v corpus cevamosum penisu (Taher et al., J. Urol. 149, str. 285A (1993)). Proto je PDE5 atraktivním cílem pro léčbu sexuální dysfunkce (Murray, DnandP 6(3), str. 150-56 (1993)).

Farmaceutický prostředek, který poskytuje inhibitor PDE5, je v sou časnosti prodáván pod obchodním názvem Viagra^(R). Aktivní složkou v prostředku Viagra^(R) je sildenafíl. Produkt je prodáván ve formě balení obsahující tablety obsahující 25, 50 a 100 mg sildenafilu a příbalový leták. V příbalovém letáku je uvedeno, že sildenafíl je účinnějším inhibitorem PDE5 než jiných známých fosfodiasteras (více než 80-násobně ve srovnání s inhibici PDE1, více než 1000-násobně ve srovnání s inhibici PDE2, PDE3 a PDE4). IC₅₀ pro sildenafíl pro PDE5 byla určena jako 3 nM (Drugs and the Future, 22(2), str. 138-143 (1997)) a jako 3,9 nm (Boolel et al., Int. J. of Impotence, 8, str. 47-52 (1996)). Pro sildenafíl se uvádí, že má 4000-násobnou selektivitu pro PDE5 versus PDE3, a pouze 10-násobnou selektivitu pro PDE5 versus PDE6. Předpokládá se, že relativní chybění selektivity pro PDE6 je příčinou abnormalit souvisejících s barevným viděním.

Ačkoliv sildenafíl dosáhl významného komerčního úspěchu, brzy selhal v důsledku nežádoucích vedlejších účinků, včetně obličejové „flushe“ (incidence 10%). Nežádoucí účinky limitují použití sildenafilu u pacientů s abnormalitami zraku, hypertensí a - což je nejvýznamnější - u jedinců užívajících organické nitráty (Weld et al., Amer. J. of Cardiology, 85 (5A), str. 21(C)-28(C) (1999)).

Použití sildenafilu u pacientů užívajících organické nitráty způsobuje klinicky významný pokles tlaku krevního, který může být pro pacienta nebezpečný. Proto uvádí příbalový letákk sildenafilu přísnou kontraindikaci jeho použití současně s organickými nitráty (například nitroglycerinem, isosorbidmononitrátem, isosorbidnitrátem, erythrityltetranitrátem) a jinými organickými donory oxidu dusnatého v jakékoliv formě, které jsou užívané pravidelně nebo nárazově, protože sildenafil potencuje hypotenzní účinky nitrátů. Viz C.R. Conti et al., Amer. J. of Cardiology, 83 (5A), str. 29C-34C (1999). Proto zůstává, i přes dostupnost sildenafilu, potřeba nových farmaceutických přípravků vhodných pro léčbu sexuální dysfunkce.

Dauganův patent US 5 859 006 popisuje některé tetracyklické deriváty, které jsou účinnými inhibitory PDE specifické pro cGMP, nebo PDE5. IC₅₀ sloučenin popsaných v patentu US 5 859 006 je v rozmezí od 1 nM do 10 μΜ. Orální dávka takových sloučenin je 0,59 mg denně pro průměrného dospělého pacienta (70 kg). Proto jsou popsány dávkové jednotky (tablety nebo kapsle) obsahující 0,2 až 400 mg aktivní sloučeniny. Významné nežádoucí účinky pro sloučeniny popsané v patentu US 5 859 006 nejsou uvedeny. WO 97/03 675 popisuje použití tetracyklických derivátů podle patentu US 5 859 006 pro léčení impotence.

Podstata vynálezu

Přihlašovatel nyní zjistil, že jeden takový tetracyklický derivát (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6—/3,4-methylendioxyfenyl)-pyrazino[2', 1' :6,1 ]pyrido[3,4-b]indol-l ,4-diol, alternativně označovaný jako (6R-trans)-6-(l,3-benzodioxol-5-yl)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro2-methylpyrazmo-[l',2':l,6]pyrido[3,4-b]indol-l,4-dion, a zde označovaný jako sloučenina I, může být podáván v dávkové jednotce, která poskytuje účinnou léčbu bez nežádoucích účinků asociovaných s nyní prodávaným inhibitorem PDE5, sildenafilem. Před předkládaným vynálezem se předpokládalo, že takové nežádoucí účinky jsou způsobeny inhibicí PDE5.

Studie provedené přihlašovatelem také ukázaly, že může být připraven účinný prostředek mají sníženou incidenci „flushe“ u vnímavých jedinců. Neočekávaně může být prostředek také podáván bez klinicky významných nežádoucích účinků spojených s kombinovanými účinky inhibitoru PDE5 a organických nitrátů. Proto nejsou kontraindikace, u kterých se předpokládalo, že jsou nutné u prostředku obsahujícího inhibitor PDE5, přítomny, když je sloučenina vzorce I podávána v dávkové jednotce obsahující přibližně 1 až přibližně 2Q mg, jak je zde popsáno. Tak poskytuje předkládaný vynález účinnou terapii sexuální dysfunkce u jedinců, kteří byly dříve neléčitelní nebo u kterých byly přítomny významné nežádoucí účinky, včetně jedinců s kardiovaskulárním onemocněním, jako jsou jedinci léčení nitráty, jedinci po infarktu myokardu více než tři měsíce před nasazením terapie sexuální dysfunkce a jedinci s městnavým srdečním selháním 1 stupně, nebo jedinci s abnormalitami zraku.

Předmětem vynálezu je farmaceutická jednotka dávková forma, jejíž podstata spočívá v tom že obsahuje 1 až 20 mg (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6-(3,4-methylendioxyfenyl)-pyrazmo[2',l':6,l]pyrido[3,4-b]indol-l,4-dionu strukturního vzorce I

kde uvedená dávková forma je vhodná pro perorální podávání.

Při léčení onemocnění, při kterých je žádoucí inhibice PDE5, je pacientovi, který potřebuje takovou léčbu, podána orální dávková forma obsahující přibližně 1 až přibližně 20 mg selektivního inhibitoru PDE5, do celkové dávky 20 mg na den. Vhodná dávka pro léčbu sexuální dysfunkce je s výhodou od 1 mg do přibližně 20 mg.

Mezi onemocnění, která mohou být léčena způsobem podle předkládaného vynálezu, patří například erektilní dysfunkce u mužů a sexuální dysfunkce u žen, zejména porucha vzrušivosti u žen, též známý jako porucha sexuální vzrušivosti u žen.

-2CZ 296534 B6

Předmětem vynálezu je dále také použití jednotkové dávky obsahující 1 až 20 mg sloučeniny strukturního vzorce I

pro výrobu léku pro léčbu stavu, při němž je žádoucí inhibice fosfodiasterázy PDE5, jako je léčba sexuální dysfunkce

V popisu předkládaného vynálezu jsou použity následující termíny a zkratky.

Termín „zásobní“ označuje jakoukoliv nádobu a víko vhodnou pro skladování, transport, odebírání a/nebo manipulaci s farmaceutickým prostředkem.

Hodnota „IC₅₀“ je hodnota měřící účinnost sloučeniny v inhibici konkrétního PDE enzymu (například PDE1, PDE5 nebo PDE6). IC₅₀je koncentrace sloučeniny, která vede k 50% inhibici enzymu v pokusu podání jedné dávky - reakce. Určení hodnoty IC₅₀ pro sloučeninu je snadno provedeno způsobem in vitro, který je obecně popsán v Y. Cheng et al., Biochem. Pharmacol. 22, str. 3099-3108(1973).

Termín „příbalový leták“ označuje informaci přiloženou k výrobku, která popisuje způsob podání výrobku a data týkající se bezpečnosti a účinnosti nutná pro informované rozhodování lékaře, farmaceuta a pacienta o výrobku.

Termín „orální dávková forma“ označuje obecně farmaceutické prostředky podávané orálně. Mezi orální dávkové formy patří kapalné prostředky, tablety, kapsle a geloxé kapsle.

Termín „abnormality zraku“ označuje abnormality vidění, charakterizované modro-zeleným viděním, o kterém se soudí, že je způsobeno inhibici PDE6.

Termín „flush“ označuje epizodické zarudnutí obličeje a krku způsobené vazodilatací způsobenou lékem, obvykle v kombinaci s pocitem tepla v obličeji a krku a někdy doprovázené pocením.

Termín „volný lék“ označuje pevné částice léku nezanořené v polymemí ko-sraženině.

Dávková forma podle předkládaného vynálezu je výhodně balena jako prostředek pro farmaceutické použití u člověka, který obsahuje příbalový leták, zásobník a dávkovači formu obsahující přibližně 1 až přibližně 20 mg sloučeniny I.

Příbalový leták popisuje způsob podání výrobku a data týkající se bezpečnosti a účinnosti nutná pro informované rozhodování lékaře, farmaceuta a pacienta o výrobku. Příbalový leták je obvykle považován za návod k farmaceutickému prostředku. Příbalový leták přiložený k výrobku uvádí, že sloučenina je použitelná pro léčbu onemocnění, při kterých je žádoucí inhibice PDE5. Příbalový leták také uvádí návod pro podání jedné nebo více přibližně 1 až přibližně 20 mg dávkových jednotek, podle potřeby, do maximální celkové denní dávky 20 mg. Výhodně je podanou dávkou přibližně 5 mg až přibližně 20 mg/den, lépe přibližně 5 mg až přibližně 15 mg/den. Nejlépe je 10 mg dávková forma podána jednou za den.

-3CZ 296534 B6

Výhodným onemocněním, které je léčeno způsobem podle předkládaného vynálezu, je sexuální dysfunkce (včetně erektilní dysfunkce u mužů a sexuální dysfunkce (včetně erektilní dysfunkce u mužů a sexuální dysfunkce u žen, zejména poruchy vzrušivosti u žen (FAD)). Nejvhodnějším léčeným onemocněním je erektilní dysfunkce u mužů.

Významné je, že příbalový leták doporučuje použití prostředku pro léčbu sexuální dysfunkce u pacientů trpících onemocnění sítnice nebo retinitis pigmentosa, nebo u pacientů užívajících organické nitráty. Příbalový leták tedy neuvádí kontraindikace spojené s těmito stavy, zejména nekontraindikuje podávání dávkové formy s organickými nitráty. Příbalový leták také neuvádí varování kontraindikující užívání léku u pacientů s onemocněním sítnice, zejména retinitis pigmentosa, a u jedinců s abnormalitami zraku. Příbalový leták také popisuje incidenci flushe u pacientů užívajících tuto dávkovači formu nižší než 2%, výhodně nižší než 1 % a nejlépe nižší než 0,5 %. Incidence flushe ukazuje na značené zlepšení ve srovnání se známými farmaceutickými prostředky obsahujícími inhibitor PDE5.

Zásobník použitý pro výrobek je běžný zásobník. Obvykle se jedná o blistrové balení, foliové balení, skleněnou nebo plastovou lékovku s uzávěrem, nebo o jiný vhodný zásobník pro použití pacientem nebo lékařem. Výhodně má zásobník velikost vhodnou pro 1 až 1000 pevných dávkových jednotek, lépe pro 1 až 500 pevných dávkových jednotek a nejlépe pro 5 až 30 pevných dávkových jednotek.

Mezi orální dávkové formy patří kapalné prostředky, tablety, kapsle a gelové kapsle. Výhodně jsou dávkovými formami pevné dávkové formy, konkrétně tablety obsahující přibližně 1 až přibližně 20 mg sloučeniny I. Jakékoliv farmaceuticky přijatelné přísady pro orální aplikaci jsou vhodné pro přípravu takových dávkových forem. Vhodné farmaceutické dávkové formy zahrnují ko-precipitované formy popsané v, například, Butlerově patentu US 5 985 326, který je zde uveden jako odkaz. Ve výhodných provedeních je dávkovou jednotkou podle předkládaného vynálezu současně vysražená forma sloučeniny I neobsahující volnou pevnou sloučeninu, ale lépe obsahuje dávková jednotka podle předkládaného vynálezu pevnou sloučeninu jako volný lék.

Výhodně obsahují tablety farmaceutické přísady obecně považované za bezpečné, jako je laktosa, mikrokrystalická celulosa, škrob, uhličitan vápenatý, magnesium-stearát, kyselina stearová, talek a koloidní oxid křemičitý, a tyto tablety jsou připraveny standardními farmaceutickými způsoby, jak jsou popsány v Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. vydání, Mack Publishing Co., Easton, PA (1990). Mezi takové techniky patří, například, granulování za vlhka, po kterém následuje sušení, mletí a lisování do tablet s nebo bez potahování filmem; granulování za sucha, po kterém následuje mletí a lisování do tablet s nebo bez potahování filmem; míšení za sucha, po kterém následuje lisování do tablet, s nebo bez potahování filmem; odlívání tablet; granulování za vlhka, sušení a plnění do želatinových kapslí; míšení za sucha a plnění do želatinových kapslí; nebo příprava suspenzí a roztoků a plnění do želatinových kapslí. Obvykle obsahují pevné dávkové formy identifikační značky, které jsou vylisovány nebo vytlačeny na povrchu

Předkládaný vynález je založen na podrobných pokusech a klinických studiích, ve kterých bylo neočekávaně zjištěno, že vedlejší účinky, o kterých se dříve předpokládalo, že jsou způsobeny inhibici PDE5, mohou být redukovány na klinicky nevýznamnou úroveň pomocí výběru sloučeniny a dávkové jednotky. Toto neočekávané zjištění umožnilo vývoj dávkové jednotky obsahující sloučeninu I v dávce přibližně 1 až přibližně 20 mg, která po orálním podání minimalizuje nežádoucí vedlejší účinky, o kterých se dříve soudilo, že jsou nevyhnutelné. Mezi takové vedlejší účinky patří obličejový „flush“, abnormality zraku a významné snížení krevního tlaku, ke kterým dochází tehdy, když je sloučenina vzorce I podána samostatně nebo v kombinaci s organickými nitráty. Minimální efekt sloučeniny I, podané v dávce dávkové jednotce obsahující přibližně 1 až přibližně 20 mg, na PDE6, také umožňuje podání selektivního inhibitoru PDE5 pacientům s onemocněním sítnice, jako je diabetická retinopatie nebo retinitis pigmentosa.

-4CZ 296534 B6 (I)

Sloučenina I má následující strukturální vzorec:

V klinických studiích na člověku bylo prokázáno, že sloučenina strukturálního vzorce I má minimální vliv na systolický krevní tlak, když je podávána současně s organickými nitráty. Naopak, sildenaíil vykazuje 4-násobně vyšší snížení systolického krevního tlaku ve srovnání s placebem, což vede ke kontraindikacím Viagrý^R) a k opatrnosti u některých pacientů.

Následující tabulka ilustruje IC₅₀ hodnoty pro PDE5 a PDE6 pro sloučeninu strukturálního vzorce I, které byly určeny zde popsaným způsobem.

Sloučenina	IC_5OPDE5 (nM)	IC₅₀ PDE6 (nM)	PDE6/PDE5
I	2,5	3400	1360

Sloučenina strukturálního vzorce I dále vykazuje IC₅₀ pro PDElc 10000 a poměr PDElc/PDE5 4000.

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady ilustrují předkládaný vynález, jeho rozsah není uvedenými příklady nijak omezen.

Přípravy

Příprava lidské PDE5

Rekombinantní produkce lidské PDE5 byla provedena způsobem popsaným v příkladu 7 patentu US 5 702 936, který je zde uveden jako odkaz, s výjimkou použitého kvasinkového transformačního vektoru, který byl odvozen od základního ADH2 plasmidu popsaného v V. Price et al., Methods in Enzymology, 1985, strany 308-318 (1990), který obsahoval kvasinkový ADH2 promotor a terminátor místo ADH1 promotoru a terminátoru, a s tím rozdílem, že použitý kmen Saccharomyces cerevisiae byl proteasa-defícientní kmen BJ2-54 uložený 31.8. 1998 v Američan Type Culture Collection, Manassas, Virginia, pod přírůstkovým číslem ATCC 74465. Transformované hostitelské buňky byly kultivovány ve 2x SC-leu médiu, pH 6,2, se stopovými prvky a vitamíny. Po 24 hodinách se přidalo YEP médium obsahující glycerol v konečné koncentraci 2x YEP/3% glycerol. O přibližně 24 hodin později se buňky odebraly, promyly a uskladnily se při teplotě -70 °C.

Buněčné pelety (29 g) se rozpustily na ledu stejným způsobem lyzačního pufru (25 mM Tris-Cl, pH 8, 5 mM MgCl₂, 0,25 mM dithiothreitol, 1 mM benzamid a 10 μΜ ZnSO₄). Buňky se lyžují v mikrofluidizačním zařízení pomocí N₂ při 20000 psi. Lyzát se odstředí a přefiltruje se přes 0,45 μιη vyjmutelné filtry. Filtrát se vnese do 150 ml kolony Q Sepharose Fast Flow (Pharmacia). Kolona se promyje 1,5 objemem pufru A (20 mM Bis-Tris propan, pH 6,8, 1 mM MgCl₂, 0,25 mM dithiothreitolu, 10 μΜ ZnSO₄) a eluuje se krokovým gradientem 125 mM NaCl v pufru a potom lineárním gradientem 125 až 1000 mM NaCl v pufru A.

Aktivní frakce z lineárního gradientu se aplikují do 180 ml keramické hydroxyapatitové kolony vpufru B (20 mM Bis-Tris propan, pH 6,8, 1 mM MgCl₂, 0,25 mM dithiothreitolu, 10 μΜ ZnSO₄ a 250 mM KC1). Po naplnění se kolona promyje 2 objemy pufru B a eluuje se lineárním gradientem 0 až 125 mM fosforečnanu draselného v pufru B. Aktivní frakce se odeberou, vysráží se 60% síranem amonným a resuspendují se vpufru C ((20mM Bis-Tris propan, pH 6,8, 125 mM NaCl, 0,5 mM dithiothreitolu, 10 μΜ ZnSO₄). Odebraný materiál se vnese do 140 ml kolony Sephacryl S-300 HR a tato se eluuje pufrem C. Aktivní frakce se naředí na 50% glycerolem a uskladní se při teplotě -20 °C. Získané přípravky měly přibližně 85% čistotu podle SDSPAGE.

Test na PDE aktivitu

Aktivita PDE5 může být měřena standardními používanými testy. Například může být specifická aktivita PDE určena následujícím způsobem PDE testy využívající techniky separace naaktivním uhlí se provedou v podstatě způsobem popsaným vLoughney et al., (1996), The Joumal od Biological Chemistry, 271: 796-806. V tomto testu aktivita PDE5 konvertuje [³²P]cGMP na [³²P]5'GMP úměrně množství přítomné aktivity PDE5. [³²P]5'GMP se potom kvantitativně přemění na volný [³²P] fosfát a neznačený adenosin působením 5'-nukleotidasy hadího jedu. Proto je množství [³²P] fosfátové aktivity úměrné aktivitě enzymu. Test se provádí při 30 °C ve 100 μΐ reakční směsi obsahující (konečné koncentrace) 40 mM Tris-Cl (pH 8,0), 1 μΜ ZnSO4, 5 mM MgCl2 a 0,1 mg/ml hovězího sérového albuminu. PDE5 je přítomna v množství, které vede k <30% celkové hydrolýze substrátu (lineární testovací podmínky). Test se zahájí přidáním substrátu (1 mM [³²P]cGMP) a směs se inkubuje po dobu 12 minut. Potom se přidá 75 pgjedu Crotalus atrox a inkubace pokračuje po dobu 3 dalších minut (celkem 15 minut). Reakce se ukončí přidáním 200 ml aktivního uhlí (suspenze 25 mg/ml v 0,1 M NaH2PO₄, pH 4). Po odstředění (750 x g, 3 minuty) za účelem sedimentování aktivního uhlí se odebere vzorek supematantu pro stanovení radioaktivity ve scintilačním počítači a vypočte se aktivita PDE5. Přípravky měly specifické aktivity okolo 3 pmol cGMP hydrolyzovaných za minutu na mg proteinu.

Příprava hovězí PDE6

Hovězí PDE6 byla získána od Dr. N. Virmaux, INSERM U338, Strasboug. Hovězí sítnice byly připraveny způsobem popsaným v Virmaux et al., FEBS Letters, 12(6), str. 325-328 (1971) a též v A. Sitaramayya et al., Exp. Eye Res, 25, str. 163-169 (1977). Stručně, všechny úkony byly provedeny v chladu a v tmavě červeném světle. Oči byly uchovávány v chladu a temnu do čtyř hodin po porážce.

Příprava zevního segmentu hovězí sítnice (ROS) byla provedena v podstatě způsobem popsaným ve Schichi et al., J. Biol. Chem. 224: 529 (1969). V typickém experimentu se 35 hovězích sítnic rozdrtilo ve třetí misce s 35 ml 0,066 M fosfátového pufru, pH 7,0, obsahujícího 40 % sacharosy, a potom se provedla homogenizace v Potterově homogenizačním zařízení (20 pohybů nahoru a dolů). Suspenze se odstředí při 25000 x g během 20 minut. Peleta se homogenizuje v 7,5 ml 0,006 M fosfátového pufru (40 % v sacharose) a opatrně se převrství 7,5 ml fosfátového pufru (neobsahujícího sacharosu). Odstředění se provede na vyklápěcí odstředivce při 45000 x g během 20 minut a získá se peleta, která je naspodu černá, a také červený proužek na rozhraní 0,066 M fosfátu - 40 % sacharosy/0,066 M fosfátu (surový ROS). Červený materiál na rozhraní se odstraní, naředí se fosfátovým pufrem, odstředí se na peletu a redistribuuje se vpufrované 40% sacharose způsobem popsaným výše. Tento proces se opakuje 2- až 3-krát , dokud se netvoří žádná peleta. Přečištěný ROS se promyje ve fosfátovém pufru a nakonec se odstředí při 25000 x g během 20 minut za zisku pelety. Všechen materiál se uchovává zmražený do použití.

Hypotetické extrakty se připraví suspendováním izolovaného ROS v lOmM Tris-Cl, pH 7,5, 1 mM EDTA a 1 mM dithiothreitolu a potom odstředěním při 100000 x g po dobu 30 minut.

-6CZ 296534 B6

Přípravky měly specifické aktivity okolo 35 nmol cGMP hydrolyzovaných za minutu na mg proteinu.

Příprava PDElc z buněk Spodoptera frugiperda (SÍ9)

Buněčné pelety (5 g) se rozpustily na ledu 20 ml lyzačního pufru (50 mM MOPS, pH 7,4, 10 μΜ ZnSO₄, 0,1 mM CaCl₂, 1 mM DTT, 2mM benzamidin-HCl, 5 pg/ml pepstaninu, 5 pg/ml leupeptinu a 5 pg/ml aprotininu). Buňky se lyžovaly protlačením přes Frenchův buněčný lis (SLC-Aminco) za udržování teploty pod 10 °C. Získaný homogenizát buněk se odstředil při 36000 rpm při 4 °C během 45 minut v Beckmannově ultraodstředivce za použití rotoru typu TI45. Supematant se odstranil a získaná peleta se resuspendovala v 40 ml solubilizačního pufru (lyzační pufr obsahující 1M NaCl, 0,1 M MgCl₂, 1 mM CaCl₂, 20 pg/ml kalmodulinu a 1% sulfobetain SB12 (Z3-12) sonikací za použití VibraCell přístroje smikrohrotem po dobu 3 x 30 sekund. Toto se provedlo ve směsi drcený led/sůl pro chlazení. Po sonikaci se směs pomalu mísila po dobu 30 minut při 4 °C pro dokončení solubilizace proteinů navázaných na membránu. Tato směs se odstředila na Beckman ultraodstředivce za použití rotoru typu TI45 při 36000 rpm během 45 minut. Supematant se naředil lyzačním pufrem obsahujícím 10 pg/ml kalpainového inhibitoru I a II. Vysrážený protein se odstředil během 20 minut při 9000 rpm na Beckman JA-10 odstředivce. Získaný supematant se potom zpracoval Mimetic Brue AP agarosovou chromatografií.

Pro zpracování na Mimetic Blue AP agarosové koloně se pryskyřice nejprve chránila aplikace 10 objemů kolony 1% polyvinylpyrrolidinu (tj. molekulová hmotnost 40000) pro blokování nespecifických vazebných míst. Slabě navázaný PVP-40 se odstranil promytím 10 objemy kolony 2m NaCl a 10 mM natrium-citrátu, pH 3,4. Těsně před přidáním vzorku solubilizované PDElc3 se kolona uvedla do rovnováhy 5 objemy kolony kolonového pufru A (50 mM MOPS, pH 7,4, 10 μΜ ZnSO₄, 5 mM MgCl₂, 0,1 mM CaCl₂, 1 mM DTT, 2 mM benzamidin-HCl).

Solubilizovaný vzorek se aplikoval do kolony při průtoku 2 ml za minutu s recyklací, takže byl vzorek aplikován celkem 4 až 5-krát během 12 hodin. Po ukončení plnění se kolona promyla 10 objemy kolony kolonového pufru A a potom 5 objemy kolony kolonového pufru B (kolonový pufr A obsahující 20mM 5-AMP) a potom 5 objemy kolony kolonového pufru C (50 mM MOPS, ph 7,4, 10 μΜ ZnSO₄, 0,1 mM CaCl₂, 1 mM dithothreitol a 2 mM benzamidin-HCl). Enzym se eluoval do tří postupných frakcí. První frakce se skládala z enzymu z promytí 5 objemy kolony kolonového pufru C obsahujícího 1 mM cAMP. Druhá frakce se skládala z enzymu z promytí 10 objemy kolony kolonového pufru C obsahujícího 1 mM NaCl. Třetí frakce se skládala z enzymu z promytí 5 objemy kolony kolonového pufru C obsahujícího 1 M NaCl a 1 mM cAMP.

Aktivní enzymové frakce se odebraly a cyklický nukleotid se odstranil pomocí běžně gelové filtrační chromatografíe nebo chromatografíe na hydroxypatitové pryskyřici. Po odstranění cyklický nukleotidů se enzymové frakce dialyzovaly proti dialyzačnímu pufru obsahujícímu 25 mM ΜΟΡΑ, ph 7,4, 10 μΜ ZnSO₄, 500 mM NaCl, 0,1 mM CaCl₂, 1 mM dithiothreitolu a 1 mM benzamidin-HCl, a potom se provedla dialýza proti dialyzačnímu pufru obsahujícímu 50 % glycerilu. Enzym se rychle zmrazila pomocí suchého ledu a uskladnil se při teplotě-70 °C.

Získané přípravky měly přibližně > 90% čistotu podle SDS-PAGE. Tyto přípravky měly specifické aktivity přibližně 0,1 až 1,0 pmol cAMP hydrolyzovaného za minutu na mg proteinu.

Určení IC₅₀

Důležitým parametrem při hodnocení účinnosti kompetitivního inhibitoru enzymu PDE5 a/nebo PDElc a PDE6 je inhibiční konstanta, tj. Kj. Tento parametr může být přibližně určen stanovením IC₅₀, což je inhibiční koncentrace, která vede k 50% inhibici aktivity enzymu, v pokusu jedna dávka-reakce provedeném za následujících podmínek.

-7CZ 296534 B6

Koncentrace inhibitoru je mnohem vyšší než koncentrace enzymu, takže koncentrace volného inhibitoru (která je neznámá) je přibližně stejná jako celková koncentrace inhibitoru (která je známá).

Je vybrán vhodný rozsah koncentrací inhibitoru (tj. v pokusu jsou použity koncentrace alespoň několikrát vyšší a několikrát nižší než Kj). Obvykle jsou koncentrace inhibitoru v rozmezí od 10 mM do 10 μΜ.

Koncentrace enzymu a substrátu jsou vybrány tak, aby byly méně než 20 % substrátu spotřebovaného za nepřítomnosti inhibitoru (při - například - maximální hydrolýze substrátu od 10 do 15 %), takže aktivita enzymu je během testu přibližně konstantní.

Koncentrace substrátu je menší než 1/10 michaelisovi konstanty (K_m). Za těchto podmínek se bude IC₅₀ velmi blížit K;. Toto vyplývá z Cheng-Presuffovi rovnice týkající se těchto dvou parametrů: IC₅₀ = Kj (1 + S/K_ni), kde (1 + S/K_m) je přibližně 1 při nízkých hodnotách výrazu S/K^

Hodnota IC₅₀ je vyhodnocena z dat pomocí vhodného modelu interakce enzym-inhibitor. Pokud je známo, že tato interakce zahrnuje prostou kompetici inhibitoru se substrátem, může být použit dvouparametrový model:

Y = A/(l+x/B) kde Y je aktivita enzym měřena při koncentraci x inhibitoru, A je aktivita za nepřítomnosti inhibitoru a B je IC₅₀. Viz Y. Chentg et al., Biochem. Pharmacol. 22: 3099-3108 (1973).

Vlivy inhibitorů podle předkládaného vynálezu na enzymatickou aktivitu PDE5 a PDE6 v přípravcích popsaných výše byly hodnoceny ve dvou testech, které se od sebe lišily v rozsahu a které vedly k v podstatě stejným výsledkům ve smyslu hodnot IC₅o· Oba testy byly modifikacemi postupu podle Well set al., Biochim. Biopohys. Acata, 384: 430 (1975). První test byl proveden v celkovém objemu 200 μΐ obsahujícím 50 mM Tris, pH 7,5, 3 mM Mg acetátu, 1 mM EDTA, 50 pg/ml nukleotidasy z hadího jedu a 50 nM [³H]-cGMP (Amarsham). Sloučeniny podle předkládaného vynálezu se rozpustily v DMSO a v testu byly použity v konečné koncentraci 2 %. Testy se inkubovaly po dobu 30 minut při 30 °C a ukončily se přidáním 800 μΐ 10 mM Tris, pH 7,5, 10 mM EDTA, 10 mM theofyllinu, 0,1 mM adanosinu a 0,1 mM guanosinu. Směsi se vnesly do 0,5 ml QAE Sephadex kolon, které se eluovaly 2 ml 0,1 M formiátu (pH 7,4). Eluovaná radioaktivita se měřila scintilačním počítačem vOptiphase Hisafe 3.

Druhý PDE test provedený na mikroplotně se provedl za použití Multiscreene ploten a vakuového rozdělovače. Testovací směs (100 μΐ) obsahovala 50 mM Tris, pH 7,5, 5 mM Mg acetátu, 1 mM EDTA a 250 pg/ml nukleotidasy z hadího jedu. Další složky reakční směsi byly stejné jako výše. Na konci inkubace se celý objem směsi vnesl filtrací do QAE Sephadex mikrokolony. Volná radioaktivita se eluovala 200 μΐ vody, za kterých se 50 μΐ podíly analyzovaly na scintilačním počítači na způsobem popsaným výše.

Příklad 1

Sloučenina I se připravila způsobem popsaným v patentu US 5 859 006 a připravila se ve formě tablet za použití granulování za vlhka. Povidon se rozpustil ve vodě za zisku 10% roztoku. Aktivní sloučenina, mikrokrystalická celulosa, krosmarmelosa sodná a laurylsíran sodný se přidají do mísícího zařízení s vysokým střihem a mísí se po dobu 2 minut. Prášek se granuluje za vlhka s roztokem povidonu a voda se přidává podle potřeby pro dokončení granulace. Získaná směs se suší v sušičce s fluidním ložem při teplotě vstupního vzduchu 70 °C ± 5 °C dokud nejsou ztráty při sušení menší než 2,5 %. Granule se prosejí přes Comil s vhodným sítem a přidají se do vhodného mísícího zařízení. Extragranulámí kroskarmelosa sodná a laurylsíran sodný, a koloidní

-8CZ 296534 B6 bezvodý oxid křemičitý se prosejí přes vhodné síto (například 500 mikronové) a přidají se do mísícího zařízení a směs se mísí po dobu 5 minut. Přidá se magnesium-stearát a směs se mísí po dobu 2 minut. Směs se lisuje na požadovanou kompresi/hmotnost 250 mg za použití 9 mm kulatého normálního konkávního razidla.

Tabletová jádra se potahují vodnou suspenzí Opadry OY-S-7322 za použití Accelacota (nebo podobné potahovací pícky) za použití teploty vstupního vzduchu 50 °C až 70 °C, dokud se hmotnost tablety nezvýší o přibližně 8 mg. Opadry OY-S-7322 obsahuje methylhydroxypropylcelulosu podle Evropského lékopisu, oxid titaničitý podle Evropského lékopisu, Triacetin USP. Opadry zvyšuje hmotnost každé tablety na 258 mg. Množství potahovacího filmu aplikované na tabletu může být nižší než uvedené množství, podle účinnosti procesu.

Tablety se vloží do blistrových balení a přiloží se k nim příbalový leták popisují bezpečnost a účinnost sloučeniny.

Složka	Prostředky (mg na tabletu)
Selektivní inhibitor PDE 5¹	1	5
Hydroxypropylmethylcelulosaftalát	1	5
Mikrokrystalická celulosa	221,87	213,87
Kroskarmelosa sodná	5,00	5,00
Laurylsíran sodný	2,50	2,50
Povidon K30	3,38	9,38
Přečištěná voda, USP (voda pro irrigaci)	q.s.	q.s.
Kroskarmelosa sodná	5,00	5,00
Laurylsíran sodný	2,50	2,50
Koloidní bezvodý oxid křemičitý	0,50	0,50
Magnesium-stearát	1,25	1,25
Jádro tablety celkem	250,0	250,0
(Potahovací film Opadry OY-S-7322)	přibližně 8 mg	přibližně 8 mg

Sloučenina (I)

Příklad 2

Následující složky se použijí pro přípravu dávkové formy obsahující 10 mg sloučeniny I.

Složka	Množství (mg)
Granulace
Selektivní inhibitor PDE5¹	10,00
Monohydrát laktosy	153,80
Monohydrát laktosy (sušený postřikem)	25,00
Hydroxypropylcelulosa	4,00
Kroskarmelosa sodná	9,00
Hydroxypropylcelulosa (EF)	1,75
Laurylsíran sodný	0,70
Extragranulámí prášky
Mikrokrystalická celulosa (granulámí-102)	37,50
Kroskarmelosa sodná	7,00
Magnesium-stearát (rostlinný)	1,25
Celkem	250 mg
Potahovací film	přibližně 11,25

Při výrobě tablet se použije přečištěná voda, USP. Voda se odstraňuje během zpracování a v konečném produktu zůstává minimální koncentrace.

-9CZ 296534 B6

Tablety se připraví procesem granulování za vlhka, který se provede následujícím způsobem. Lék a granulované přísady se prosejí. Selektivní inhibitor PDE5 se smísí za sucha s monohydrátem laktosy (sušeným postřikem), hydroxypropylcelulosou, kroskamelosou sodnou a monohydrátem 5 laktosy. Získaná prášková směs se granuluje s vodným roztokem hydroxypropylcelulosy a laurylsíranu sodného za použití Powrex nebo jiného vhodného granulačního zařízení s vysokým střihem, další voda může být přidávána pro dosažení konečného výsledku. Mlýnek může být použit pro z rozdrcení hrudek vlhkého granulátu a pro usnadnění sušení. Materiál získaný vlhkou granulací se suší za použití buď sušičky s fluidním ložem, nebo sušicí pícky. Po usušení může být 10 materiál proset pro eliminaci větších aglomerátů. Mikrokrystalická celulosa, kroskarmelosa sodná a magnesium-stearát se prosejí a přidají se k suchým prosetým granulím. Tyto přísady a suché granule se mísí do zisku uniformní směsi za použití mísícího bubnu, lopatkové míchačky nebo jiného vhodného mísícího zařízení. Míšení může být rozděleno do dvou fází. Mikrokrystalická celulosa, kroskarmelosa sodná a suché granule se přidají do míchacího zařízení a mísí se v první 15 fázi, a potom se přidá k této směsi magnesium-stearát a proveden se míšení ve druhé fázi.

Promísená směs se potom lisuje do tablet za použití rotačního lisovacího přístroje. Tabletová jádra se potáhnou filmem za použití vodné suspenze vhodné barvy v potahovací pícce (např. Accela Cota). Potažené tablety mohou být lehce poprášeny talkem pro zlepšení manipulace 20 s tabletami.

Tablety se plní do plastových zásobníků (30 tablet/zásobník) a přiloží se k nim příbalový leták popisující bezpečnost a účinnost sloučeniny.

Příklad 3

Následující složky se použijí pro přípravu dávkové formy obsahující 5 mg sloučeniny I.

Složka	Množství (mg)
Granulace
Selektivní inhibitor PDE5¹	2,50
Monohydrát laktosy	79,395
Monohydrát laktosy (sušený postřikem)	12,50
Hydroxypropylcelulosa	2,00
Kroskarmelosa sodná	4,50
Hydroxypropylcelulosa (EF)	0,875
Laurylsíran sodný	0,35
Extragranulámí prášky
Mikrokrystalická celulosa (granulámí-102)	18,75
Kroskarmelosa sodná	3,50
Magnesium-stearát (rostlinný)	0,63
Celkem	125 mg
Potahovací film	přibližně 6,875

Dávková forma z příkladu 3 se připraví stejným způsobem jako dávková forma zpříkladu 2.

Příklad 4

Kapsle obsahující roztok
Složka	mg/kapsli	Procento (%)
Selektivní inhibitor PDE5¹	10	2
PEG40 NF	490	98
Hmotnost náplně	500	100

-10CZ 296534 B6

Dutina želatinové kapsle se naplní přesným objemem náplně tvořené rozpuštěným přípravkem léku. Ihned po injikování roztoku léku do kapsle se kapsle uzavře teplem.

Kapsle se plní do plastového zásobníku a přiloží se k nim příbalový leták.

Příklad 5

Tato studie byla nahodilá, dvojitě slepá, placebem kontrolovaná, dvojitě překřížená klinická farmakologická studie interakcí léku, která hodnotila hemodynamické účinky současného podávání selektivního inhibitoru PDE5 (tj. sloučeniny I a krátkodobě působících nitrátů na zdravé dobrovolníky mužského pohlaví. V této studii byla jedincům denně po dobu 7 dnů podávána buď sloučenina I v dávce 10 mg, nebo placebo. V den 6 nebo 7 byl jedincům podán subliguálně nitroglycerin (0,4 mg), když leželi na zádech na sklopném stole. Nitroglycerin byl podán 3 hodiny po aplikaci sloučeniny I všichni jedinci se podrželi nitroglycerinovou tabletu po jazykem, dokud se nerozpustila. Jedinci se nakláněli do sklonku 70° hlavou nahoru každých 5 minut po dobu 30 minut za měření krevního tlaku a pulsu. U 22 jedinců (ve věku 19 až 60 let) nedošlo k vyřazení ze studie.

Podle předběžné analýzy této studie byly sloučenina I dobře tolerována a nebyly pozorován závažně nežádoucí účinky. Nebyly pozorovány změny způsobené sloučeninou I v laboratorním vyšetření ani ve 12-svodovém EKG. Nejčastějšími nežádoucími účinky byly bolest hlavy, dyspepsie a bolesti v zádech. Sloučenina I vykazovala minimální, pokud nějaký, vliv na průměrný systolický tlak a průměrné maximální nitroglycerinemindukované snížení systolického kevního tlaku.

Příklad 6

Ve dvou nahodilých, dvojitě zaslepených, placebech kontrolovaných studiích byla sloučenina I podávána pacientům potřebujícím takovou léčbu v různých dávkách, jak v denní terapii, tak podle potřeby pro sexuální styk mimo nemocnici. Dávky od 5 do 20 mg sloučeniny I byly účinné a měly incidenci méně než 1% flushe a nebyly popsány abnosmality vidění. Bylo zjištěno, že dávka 10 mg sloučeniny I je plně účinná a má minimální nežádoucí účinky.

Zlepšení erektilní funkce bylo zjištěno podle Mezinárodního indexu erektilní funkce (IIEF) (Rosen et al., Urology 49, str. 822-830 (1997)), diáře sexuálních pokusů a dotazníků celkového uspokojení. Sloučenina I významně zlepšovala procento úspěšných sexuálních styků včetně schopnosti dosáhnout a udržet erekci jak při „příležitostném“, tak při pravidelném denním podávání.

Příklad 7

Třetí klinická studie byla nahodilá, dvojitě zaslepená, placebem kontrolovaná studie, při které byla sloučenina I podávána příležitostně mužům s erektilní dysfunkcí. Sloučenina I byla podávána při léčbě mužské erektilní dysfunkce (ED) po dobu 8 týdnů. Erektilní dysfunkce (ED) je definována jako přetrvávající neschopnost dosáhnout a/nebo udržet erekci dostatečně pro uspokojivou sexuální výkonnost. „Příležitostné“ podávání je definováno jako občasné podávání sloučeniny I před očekávanou sexuální aktivitou.

Studovaná populace se skládala z 212 mužů ve věku alespoň 18 let, se střední až těžkou erektilní dysfunkcí. Sloučenina I se podávala orálně ve formě tablet ko-sraženiny vyrobených podle Butlerova patentu US 5 983 326. Sloučenina I se podávala v dávkách 2 mg, 5 mg, 10 mg a 25 mg, „příležitostně“ a ne častěji než 1—krát za 24 hodin. Během studie nebylo povoleno užívání nitrátů, azolových antimykotik (například ketokenazolu nebo itrakonazolu), warfarinu, erythromycinu nebo antiandrogenů. Nebylo povoleno užívání žádné jiné schválené medikace, léčby nebo prostředků. 41 jedincům bylo podáváno placebo.

- 11 CZ 296534 B6

Dvěma primárními sledovanými hodnotami účinnosti byly schopnost jedince sexuálně se stýkat s partnerem a schopnost jedince udržet erekci během sexuálního styku, jak je měřena Mezinárodním indexem erektilní funkce (IIEF). IIEF dotazník obsahuje 15 otázek a jedná se o stručně a spolehlivé měření erektilní funkce. Viz Rosen et al., Urology 49, str. 822-830 (1997).

Sekundárními parametry byly IIEF skóre pro erektilní funkci, orgasmus, sexuální žádostivost, uspokojení ze sexuálního styku a celková spokojenost; schopnost pacienta dosáhnout erekce, schopnost zasunout penis do vagíny partnery, dokončení sexuálního styku s ejekulací, spokojenost s tvrdostí erekce a celková spokojenost, stejně jako hodnocení pomocí diáře Profilu sexuálío ního života (SEP); a pomocí celkového pohovoru na konci léčby. SEP je diář dokumentující každý sexuální sty během studie.

Bezpečnostní aspekty studie zahrnovaly všechny jedince zahrnuté do studie a byly hodnoceny pomocí hodnocení všech zaznamenaných nežádoucích účinků, vitálních příznaků, výsledků fyzi15 kálního vyšetření a výsledků elektrokardiografu.

Na konci studie bylo procento pacientů hodnotících svou schopnost penetrace do vagíny (IIEF otázka 3) jako „téměř vždy nebo vždy“ následující: 17,5 % v placebo skupině, 38,1 % ve skupině 2 mg, 48,8 % ve skupině 5 mg, 51,2 % ve skupině 10 mg a 83,7 % ve skupině 25 mg. Srovnání 20 ukázalo statisticky významný rozdíl ve schopnosti penetrace mezi placebem a všemi dávkami sloučeniny I.

Na konci studie bylo procento pacientů hodnotících svou schopnost udržet erekci (IIEF otázka 4) jako „téměř vždy nebo vždy“ následující: 10,0 % v placebo skupině, 19,5 % ve skupině 2 mg, 25 32,6 % ve skupině 5 mg, 39,0 % ve skupině 10 mg a 69,0 % ve skupině 25 mg. Srovnání ukázalo statisticky významný rozdíl ve schopnosti udržení erekce mezi placebem a všemi dávkami sloučeniny I.

Tato studie také obsahovala hodnocení bezpečnosti. Nežádoucí účinek vyvolaný léčbou je defi30 nován jako stav nepřítomný za normálního stavu a přítomný po základním stavu, nebo jako stav přítomný ze základního stavu, který se zhorší po základním stavu. Nejčastěji popisovanými nežádoucími účinky byly bolesti hlavy, dyspepsie a bolesti zad. Zdálo se, že incidence nežádoucích účinků souvisejících s léčbou souvisela s dávkou.

Celkově tato studie prokázala, že všechny čtyři dávky sloučeniny I, konkrétně 2 mg, 5 mg, 10 mg a 25 mg, podávané „příležitostně“, vedle k dosažení významného zlepšení, ve srovnání s placebem, sexuální výkonnosti u mužů s erektivní dysfunkcí, jak je hodnocena IIEF, podle diáře pacientů hodnotících frekvenci a úspěšných sexuální styků a uspokojení ze sexuálního styku, a podle celkového hodnocení.

Dohromady výsledky z klinických studií ukazují, že podávání sloučeniny I účinně léčí mužskou erektivní dysfunkci, jak je uvedeno v následující tabulce.

IIEF hodnocení erektilní dysfunkce (změna od základní hodnoty)
Dávková jednotka sloučeniny I	n	Průměr ± SD	P
placebo	131	0,8 ± 5,3
2 mg	75	3,9 ±6,1	<0,001
5 mg	79	6,6 ±7,1	< 0,001
10 mg	135	7,9 ±6,7	<0,001
25 mg	132	9,4 ± 7,0	< 0,001
50 mg	52	9,8 ±5,5	< 0,001
100 mg	49	8,4 ±6,1	< 0,001
n je počet jedinců, SD je standardní ode	lylka

- 12CZ 296534 B6

Nicméně, z klinických studií bylo také zřejmé, že procento nežádoucích účinků souvisejících s léčbou se zvyšuje se stoupající dávkou sloučeniny I, jak je patrno z následující tabulky.

Nežádoucí účinky související s léčbou (%)
	Dávková jednotka s	oučeniny (I) (mg)
Nežádoucí účinek	Placebo	2	5	10	25	50	100
Bolest hlavy	10	12	10	23	29	34	46
Dyspepsie	6	3	14	13	19	20	25
Bolesti zad	5	3	3	15	18	24	22
Myalgie	3	0	3	9	16	20	29
Rhinitis	3	7	3	4	4	0	2
Conjuctivitis	1	0	1	1	0	2	5
Otok očních víček	0	0	0	1	1	2	3
Flush	0	0	0	<1	0	3	7
Abnormality zraku	0	0	0	0	0	0	0

Výše uvedená tabulka ukazuje zvyšování nežádoucích účinků při dávkách 25 mg až 100 mg. Proto, ačkoliv byla léčba ED účinná při použití dávek 25 mg až 100 mg, musí být brány v úvahu nežádoucí účinky pozorované při dávkách 25 mg až 100 mg.

Podle předkládaného vynálezu je dávková jednotka obsahující přibližně 1 mg až přibližně 20 mg, výhodně přibližně 2 mg až přibližně 20 mg, lépe přibližně 5 mg až přibližně 15 mg, sloučeniny I, podávaná v maximální dávce 20 mg za 24 hodin, účinná v léčbě ED a minimalizuje nebo eliminuje výskyt nežádoucích vedlejších účinků. Významné je to, že nebyly pospány abnormality zraku a flush. Překvapivě mohou být dávkami přibližně 1 mg až přibližně 20 mg sloučeniny I léčeni pro ED s minimálními nežádoucími účinky také jedinci léčení nitráty.

Principy, výhodná provedení a způsoby provedení vynálezu byly popsány v uvedené přihlášce. Vynález však není omezen popsanými konkrétním provedeními, které jsou pouze ilustrativní. Existují různé variace a modifikace, které spadají do rozsahu vynálezu.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Farmaceutická jednotková dávková forma, vyznačující se tím, že obsahuje 1 až

2. Dávková forma podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje 2 až 20 mg sloučeniny strukturního vzorce I.

3. Dávková forma podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje 5 až 20mg sloučeniny strukturního vzorce I.

4. Dávková forma podle nároku 2, vyznačující niny strukturního vzorce I.

tím, že obsahuje 2,

5 mg slouče5. Dávková forma podle nároku 3,vyznačující strukturní vzorce I.

tím, že obsahuje 5 mg sloučeniny

6. Dávková forma podle nároku 3, niny strukturního vzorce I.

vyznačující že obsahuje 10 mg slouče7. Dávková forma podle nároku 3, niny strukturního vzorce I.

vyznačující tím, že obsahuje 20 mg slouče-

7 vybraná ze skupiny sestávající

8. Dávková forma podle kteréhokoliv z nároků 1 z kapaliny, tablety, kapsle a gelové kapsle.

až

9. Dávková forma podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 ve formě tablety.

10. Dávková forma podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 pro použití pro léčbu stavu, při kterém je žádoucí inhibice PDE5.

11. Dávková forma pro použití podle nároku 10, kde stavem je sexuální dysfunkce.

12. Dávková forma pro použití podle nároku 11, kde sexuální dysfunkcí je mužská erektilní dysfunkce.

13. Dávková forma pro použití podle nároku 11, kde sexuální dysfunkcí je porucha vzrušivosti u žen.

- 13 CZ 296534 B6

14. Použití jednotkové dávky obsahující 1 až 20 mg sloučeniny strukturního vzorce 1 pro výrobu léku pro léčbu stavu, při němž je žádoucí inhibice fosfodiesterázy PDE5.

15. Použití pode nároku 14, kde léčivo je pro podání až do maximální celkové dávky 20 mg sloučeniny strukturního vzorce I za den.

16. Použití podle nároku 14, kde léčivo je pro podávání ve formě jedné nebo více jednotkových dávek obsahujících 1 až 20 mg sloučeniny strukturního vzorce I až do maximální celkové dávky 20 mg sloučeniny strukturního vzorce I za den.

-14CZ 296534 B6

17. Použití podle některého z nároků 14 až 16, kde jednotková dávka obsahuje 2 až 20 mg sloučeniny strukturního vzorce I.

18. Použití podle některého z nároků 14 až 16, kde jednotková dávka obsahuje 5 až 20 mg sloučeniny strukturního vzorce I.

19. Použití podle některého z nároků 14 až 16, kde jednotková dávka obsahuje 2,5 mg sloučeniny strukturního vzorce I.

20. Použití podle některého z nároků 14 až 16, kde jednotková dávka obsahuje 5 mg sloučeniny strukturního vzorce I.

20 mg sloučeniny strukturního vzorce I (I)_z kde uvedená dávková forma je vhodná pro perorální podávání.

21. Použití podle některého z nároků 14 až 16, kde jednotková dávka obsahuje 10 mg sloučeniny strukturního vzorce I.

22. Použití podle některého z nároků 14 až 16, kde jednotková dávka obsahuje 20 mg sloučeniny strukturního vzorce I.

23. Použití podle nároku 14 nebo 15, kde jednotková dávka obsahuje 10 mg sloučeniny strukturního vzorce laje pro podání jednou za den.

24. Použití podle některého z nároků 14 až 23, kde jednotková dávka je ve formě zvolené ze souboru sestávajícího z kapaliny, tablety, kapsle a gelové kapsle.

25. Použití podle některého z nároků 14 až 23, kde jednotková dávka je ve formě tablety.

26. Použití podle některého z nároků 14 až 25, kde stavem je sexuální dysfunkce.

27. Použití podle nároku 26, kde sexuální dysfunkcí je erektilní dysfunkce u mužů.

28. Použití podle nároku 26, kde sexuální dysfunkcí je porucha vzrušivosti u žen.