CZ20001536A3 - Orální léčivo - Google Patents

Abstract

Toto řešení se týká vysoce selektivních inhibitorů enzymu fosfodiesterásy (PDE)ajejich použití ve farmaceutických výrobcích. Zejména se předložený vynález týká potentních inhibitorů cyklické guanosin 3', 5'-monofosfát specifické fosfodiestrerasy typu 5 (PDE5), které jsou, pokud se zabudují do farmaceutického produktu v jednotkové dávce asi 1 až asi 20 mg, vhodné pro léčení sexuální dysfunkce. Výrobky zde popsané jsou charakterizovány selektivní PDE5 inhibici, a tedy poskytují využití v terpaeutických oblastech, kde je požadována inhibice PDE5, s minimalizací nebo eliminací CO nežádoucích účinků vyplývajících z inhibice jiných fosfodiesterasových enzymů.

Description

Orální léčivo

Oblast techniky:

Tento vynález se týká vysoce selektivních inhibitorů enzymu fosfodiesterasy (PDE) a jejich použití ve farmaceutických výrobcích. Konkrétně se předložený vynález týká potentních inhibitorů cyklické guanosin 3',5'-monofosfat specifické fosfodiesterasy typu 5 (PDE5), které jsou, pokud se zabudují do farmaceutického produktu, vhodné pro léčení sexuálních dysfunkcí. Výrobky zde popsané jsou charakterizovány selektivní PDE5 inhibici, a tedy poskytují využití v terapeutických oblastech, kde je požadována inhibice PDE5, s minimalizací nebo eliminací nežádoucích účinků vyplývajících z inhibice jiných fosfodiesterasových enzymů.

Dosavadní stav techniky:

Biochemické, fyziologické a klinické účinky inhibitorů cyklické guanosin 3',5'-monofosfat specifické fosfodiesterasy (cGMP-specifická PDE) předpokládají jejich využití v řadě chorobných stavů, v nichž je požadována modulace hladkého svalstva, renální, hemostatická, protizánětlivá a /nebo endokrinní funkce. Typ 5 cGMP-specifická fosfodiesterasa (PDE5) je hlavní cGMP hydrolyzující enzym ve vaskulárním hladkém svalstvu, a byla popsána jeho exprese v corpus cevernosum penisu (Taher a kol., J. Urol., 149:285A (1993)). Proto je PDE5 atraktivním prostředkem v léčení sexuální dysfunkce (Murray, DN&P 6 (3) : 150-56 (1993)).

Farmaceutický produkt, který poskytuje PDE5 inhibitor, je běžně /

β · • · dostupný a je prodáván pod obchodní známkou VIAGRA® . Účinnou složkou ve VIAGRA® je sildenafil. Produkt je prodáván jako výrobek zahrnující 25, 50 a 100mg tablety sildenafilu a příbalový leták. Příbalový leták uvádí, že sildenafil je silnějším inhibitorem PDE5 než jiné známé fosfodiesterasy (více než 80násobně pro PDE1 inhibici, více než 1000násobně pro PDE2, PDE3 a PDE4 inhibici). Hodnota IC₅₀ u sildenafilu byla uvedena proti PDE5 jako 3 nM (Drugs of the Future, 22 (2), str. 128-143 (1997)), a jako 3,9 nM (Boolell a kol, Int.J. of Impotence Res., 8 str. 47-52 (1996)). Soldenafil je popsán, že má 4000násobnou selektivitu pro PDE5 proti PDE3, a pouze 10násobnou selektivitu pro PDE5 proti PDE6. Jeho relativní nedostatek selektivity pro PDE6 je teoreticky zdůvodněn tím, že je základem pro abnormality vztažené k barevnému vidění.

Ačkoliv sildenafil získal výrazný komerční úspěch, tento opadl vzhledem k výrazným vedlejším účinkům, včetně rudnutí v obličeji (10% rozsah výskytu). Nežádoucí vedlejší účinky omezují použití sildenafilu u pacientů trpících vizuálními abnormalitami, hypertenzí, a nejvýznamněji u osob, které používají organické nitráty (Welds a kol., Amer. J. of Cardiology, 83 (5A), str. 21(C)-28(C) (1999)).

Předpokládá se, že použití sildenafilu u pacientů, kteří užívají organické nitráty, způsobuje klinicky významný pokles krevního tlaku, který může být pro pacienta nebezpečný. Proto obsahuje etiketa balení sildenafilu striktní kontraindikace proti jeho užívání v kombinaci s organickými nitráty (jako je nitroglycerin, isosorbid mononitrat, isosorbid dinitrat, erythrityl tetranitrat) a jiné donory oxidu dusnatého v jakékoliv formě, buď pravidelně nebo občasně, protože sildenafil potenciuje hypotenzní účinky nitrátů. Viz C.R.Conti a kol., Amer. J. of Cardiology, 83(5A), str. 29C-34C (1999). Existuje tudíž potřeba, i přes • · • · dostupnost sildenafilu, nalézt vylepšené farmaceutické produkty, které jsou vhodné pro léčení sexuální dysfunkce.

Předložený vynález poskytuje výrobek pro farmaceutické použití u lidí, zahrnující příbalový leták, zásobník, a orální dávkovou formu, která obsahuje selektivní PDE5 inhibitor v jednotkových dávkách mezi asi 1 a asi 20 mg/dávkovou formu. Výhodné účinky předloženého vynálezu byly pozorovány v klinických studiích a skrze zjištění, že selektivní PDE5 inhibitor splňující následující kritéria umožní účinné orální podávání asi 1 až asi 20 mg/dávkovou formu bez kontraindikací obvykle vyžadovaných u produktů PDE5 inhibitoru, jako je varovaní směrované na abnormality týkající se vidění. PDE5 inhibitor podle předloženého vynálezu vykazuje:

1) alespoň 10Onásobný rozdíl v hodnotách IC₅₀ pro inhibici PDE5 proti PDE6 pro konkrétní PDE5 inhibitor (tedy hodnota IC₅₀ proti PDE5 je alespoň 10Okrát menší než hodnota IC₅₀ proti PDE6);

2) alespoň 1000násobný rozdíl v hodnotách IC₅₀ pro inhibici PDE5 proti PDE1c; a

3) hodnotu IC₅₀ menší než 10 nM.

Je významné, že klinické studie rovněž odhalily, že může být poskytnut účinný produkt, který má snížený sklon způsobovat u citlivých osob rudnutí. Nejvíce bylo neočekávané, že produkt může být rovněž podáván s klinicky nevýznamnými vedlejšími účinky spojenými s kombinovanými účinky PDE5 inhibitoru a organického nitrátu. Lze tudíž předpokládat, že kontraindikace nezbytná u produktu obsahujícího PDE5 inhibitor není nezbytná, pokud se použije selektivní PDE5 inhibitor, definováný výše, jak je zde uvedeno. Předložený vynález tedy poskytuje účinnou terapii sexuální dysfunkce u osob, které byly předtím neléčitelné, nebo trpěly nepřijatelnými vedlejšími • · * · účinky, včetně osob, které trpí kardiovaskulární chorobou, jako jsou osoby vyžadující léčbu nitráty, které mají infarkt myokardu více než tři měsíce před zahájením léčby sexuální dysfunkce, a osob trpících kognestivním srdečním selháním třídy 1, jak je definováno asociací „New York Heart Association“ (NYHA), nebo osob trpících abnormalitami vidění.

Podstata vynálezu

Předložený vynález poskytuje výrobek pro farmaceutické použití u lidí, který zahrnuje příbalový leták, zásobník, a orální dávkovou formu obsahující asi 1 až asi 20 mg selektivního PDE5 inhibitoru na dávkovou formu.

Předložený vynález dále poskytuje způsob léčení stavů, kde je požadována inhibice PDE5, který zahrnuje podávání pacientovi, který to potřebuje, orální dávkové formy obsahující asi 1 až asi 20 mg selektivního PDE5 inhibitoru, jak je třeba, do celkové dávky 20 mg/den. Vynález dále popisuje použití orální dávkové formy zahrnující selektivní PDE5 inhibitor v dávce asi 1 až asi 20 mg pro léčení sexuálnín dysfunkce.

Specifické stavy, které mohou být léčeny postupem a výrobkem podle předloženého vynálezu zahrnují, ale neomezují se na ně, mužskou erektilní dysfunkci a ženskou sexuální dysfunkci, zejména ženskou poruchu vzrušivosti, také známou jakou porucha ženské sexuální vzrušivosti.

Zejména předložený vynález poskytuje výrobek pro humánní farmaceutické použití obsahující;

• 9

a) orální dávkovou formu obsahující asi 1 až asi 20 mg selektivního PDE5 inhibitoru majícího (i) alespoň 10Onásobný rozdíl v hodnotách IC₅₀ pro inhibici

PDE5 proti PDE6, (ii) alespoň 1000násobný rozdíl v hodnotách IC₅₀ pro inhibici

PDE5 proti PDE1c, (iii) hodnotu IC₅₀ menší než 10 nM, a (iv) postačující biodostupnost k poskytnutí účinnosti v asi 1 až asi 20 mg jednotkových orálních dávek;

b) příbalový leták uvádějící, že PDE5 inhibitor je vhodný pro léčení sexuální dysfunkce u pacientů, kteří léčbu potřebují, a že je bez kontraindikací spojených s podáváním organických nitrátů; a

c) zásobník.

Předložený vynález dále poskytuje výrobek pro humánní farmaceutické použití zahrnující:

a) orální dávkovou formu obsahující asi 1 až asi 20 mg selektivního PDE5 inhibitoru majícího (i) alespoň 100násobný rozdíl v hodnotách IC₅₀ pro inhibici

PDE5 proti PDE6, (ii) alespoň 1000násobný rozdíl v hodnotách IC₅₀ pro inhibici

PDE5 proti PDE1c, (iii) hodnotu IC₅₀ menší než 10 nM, a (iv) postačující biodostupnost k poskytnutí účinnosti v asi 1 až asi 20 mg jednotkových orálních dávek;

b) příbalový leták uvádějící, že PDE5 inhibitor je vhodný pro léčení sexuální dysfunkce u pacienta, který léčbu potřebuje, a který užívá organický nitrát; a

c) zásobník.

Předložený vynález dále poskytuje výrobek pro humánní farmaceutické použití zahrnující:

a) orální dávkovou formu obsahující asi 1 až asi 20 mg selektivního PDE5 inhibitoru majícího (i) alespoň 100násobný rozdíl v hodnotách IC₅₀ pro inhibici

PDE5 proti PDE6, (ii) alespoň 1000násobný rozdíl v hodnotách IC₅₀ pro inhibici

PDE5 proti PDE1c, (iii) hodnotu IC₅₀ menší než 10 nM, a (iv) postačující biodostupnost k poskytnutí účinnosti v asi 1 až asi 20 mg jednotkových orálních dávek;

b) příbalový leták uvádějící, že PDE5 inhibitor je vhodný pro léčení sexuální dysfunkce u pacienta, který léčbu potřebuje, a který trpí stavem vybraným ze skupiny sestávající z retinální nemoci, náchylnosti k červenání, náchylnosti k abnormalitám vidění, kognestivního srdečního selhání třídy 1, infarktu myokardu 90 dní nebo více před zahájením léčby sexuální dysfunkce, a jejich kombinací; a

c) zásobník.

Podrobný popis vynálezu:

Pro účely předloženého vynálezu, jak je popisován dále, budou používány následující termíny a zkratky.

Termín „zásobník“ („kontejner“) označuje jakoukoliv nádobu a uzávěr vhodné pro skladování, přepravu, přípravu a /nebo nakládání s farmaceutickým produktem.

Termín „IC₅₀“ je hodnota „síly“ sloučeniny inhibovat konkrétní PDE enzym (jako PDE1c, PDE5 nebo PDE6). IC₅₀ je koncentrace sloučeniny, která zajistí 50% enzymovou inhibici v experimentu • · ·· · • «· odpovídajícím jediné dávce. Stanovení IC₅₀ hodnoty sloučeniny se provádí snadno známou in vitro metodologií obecně popsanou v Y. Cheng a kol., Biochem.Pharmacol., 22, str. 3099-3108 (1973).

Termín „příbalový leták („etiketa balení“) znamená informace doplňující produkt, která poskytuje popis, jak podávat produkt, spolu s údaji o bezpečnosti a účinnosti potřebnými k tomu, aby lékař, farmaceut i pacient mohl učinit dané rozhodnutí týkající se užívání produktu. Příbalový leták je u farmaceutických produktů obvykle označován jako „štítek“.

Termín “orální dávková forma“ se používá v obecném smyslu jako odkaz na farmaceutické produkty podávané orálně. Orální dávkové formy jsou určeny odborníky ze stavu techniky, že zahrnují takové formy, jako jsou tekuté formulace, tablety, kapsle a gelové kapsle.

Termín „selektivní PDE5 inhibitor“ je definován jako PDE5 inhibitor mající:

1) IC₅₀ hodnotu pro inhibici PDE5 alespoň 100krát menší než je I

C50 hodnota pro inhibici PDE6,

2) IC₅₀ hodnotu pro inhibici PDE5 alespoň 1000krát menší než je hodnota IC₅₀ pro inhibici PDE1c; a

3) IC₅₀ hodnotu pro inhibici PDE5 menší než 10 nM.

Selektivní PDE5 inhibitory se výrazně mění v chemické struktuře a jejich použití v předloženém vynálezu není závislé na chemické struktuře, ale spíše na selektivitě a parametrech potence, zde popsaných.

Termín „abnormality vidění“ označuje abnormální vidění charakterizované modro-zeleným viděním, o němž se předpokládá, že je způsobeno PDE6 inhibici.

Termín „zrudnutí“ označuje záchvatové červenání tváře a krku, přičítané rozšíření cév způsobenému požití léčiva, obvykle doplněnému pocitem horka v tváři a na krku a někdy spojenému s pocením.

Termín “volné léčivo“ označuje pevné částice léčiva, které nejsou dokonale zapuštěny do polymerního koprecipitátu.

Jak bylo dříve uvedeno, je předložený vynález veden na výrobek pro farmaceutické použití u lidí, obsahující příbalový leták, zásobník, dávkovou formu obsahující asi 1 až asi 20 mg selektivního PDE5 inhibitoru na jednotkovou dávkovou formu. Selektivním PDE5 inhibitorem vhodným pro předložený vynález je PDE5 inhibitor mající:

1) alespoň 100násobný rozdíl v hodnotách IC₅₀ pro inhibici

PDE5 proti PDE6;

2) alespoň 1000násobný rozdíl v hodnotách IC₅₀ pro inhibici

PDE5 proti PDE1c; a

3) hodnotu IC₅₀ menší než 10 nM;

a postačující biodostupnost k účinnosti v asi 1 až asi 20mg jednotkových dávkách.

Rozdíl je vyjádřen jako poměr PDE6/PDE5 hodnot IC₅₀, tedy poměr IC₅₀ hodnoty versus PDE6 k IC₅₀ hodnotě versus PDE5 (PDE6/PDE5) je vyšší než 100, výhodněji vyšší než 300 a nejvýhodněji vyšší než 500.

Obdobně poměr IC₅₀hodnoty versus PDE1c k IC₅₀ hodnotě versus PDE5 (PDE1c/PDE5) je vyšší než 1000. Preferované PDE5 inhibitory mají více než 3000násobný rozdíl mezi inhibici PDE5 a PDE1c, výhodněji vyšší než 5000násobný rozdíl mezi IC₅₀ hodnotou versus PDE5 a PDE1c. Potence („síla“) inhibitoru, jak je prezentována IC₅₀ hodnotou versus PDE5, je potom menší než 10 nM, přednostně menší než 5 nM, ještě výhodněji menší než 2 nM a nejvýhodněji menší než 1 nM.

Příbalový leták poskytuje popis, jak podávat farmaceutický výrobek, spolu s údaji o bezpečnosti a účinnosti potřebnými k tomu, aby lékař, farmaceut i pacient mohl učinit dané rozhodnutí týkající sě užívání produktu. Příbalový leták je obvykle označován jako „štítek“ farmaceutického produktu. Příbalový leták připojený k uvedenému výrobku dokládá, že selektivní PDE5 inhibitor je vhodný pro léčení stavů, kde je požadována inhibice PDE5. Příbalový leták rovněž poskytuje instrukce k podávání jedné nebo více asi 1mg až asi 20mg jednotkových dávkových forem dle potřeby, do maximální celkové dávky 20 mg na den. Přednostně je podávanou dávkou asi 5 až asi 20 mg/den, ještě výhodněji asi 5 až asi 15 mg, a nejvýhodněji asi 5 mg nebo asi 10 mg v dávkové formě podávané jednou denně, dle potřeby.

Preferované stavy, které se léčí, zahrnují sexuální dysfunkci (včetně mužské erektilní dysfunkce; a ženské sexuální dysfunkce, a vhodněji ženskou poruchu vzrušivosti (FAD - female arousal disorder)). Preferovaným léčeným stavem je mužská erektilní dysfunkce.

Je významné, že příbalový leták rovněž podporuje použití produktu pro léčení sexuální dysfunkce u pacientů, trpících retinální chorobou, například diabetickou retinopatií nebo retinitis pigmentosa, • «« nebo u pacientů, kteří užívají organické nitráty. Příbalový leták je tedy přednostně bez kontraindikací spojených s těmito stavy a konkrétně podávání dávkové formy s organickým nitrátem. Ještě výhodněji je také příbalový leták prostý jakýchkoliv upozornění nebo varování spojených s retinální chorobou, zejména retinitis pigmentosa, a spojených s náchylnosti jednotlivců k abnormalitám vidění. Přednostně také příbalový leták uvádí případy rudnutí pod 2 %, výhodně pod 1 %, a nejvýhodněji pod 0,5 % u pacientů, kterým je dávková forma podávána. Poměr případů rudnutí demonstruje významné zlepšení u farmaceutických produktů obsahujících PDE5 inhibitor.

Zásobník použitý v uvedeném výrobku je v oblasti farmacie běžný. Obvykle je kontejnerem blistrový obal, foliové balení, skleněná nebo plastová lahvička a k tomu zátka nebo uzávěr, nebo jiný takový výrobek vhodný pro použití pacientem nebo farmaceutem. Přednostně má zásobník velikost na uchovávání 1-1000 pevných dávkových forem, přednostně 1 až 500 pevných dávkových forem, a ještě výhodněji 5 až 30 pevných dávkových forem.

Odborníky uznávané orální dávkové formy zahrnují například takové formy, jako jsou kapalné přípravky, tablety, kapsle a gelové kapsle. Přednostně jsou dávkové formy pevné dávkové formy, konkrétně tablety obsahující asi 1 až asi 20 mg selektivního PDE5 inhibitoru. Jakékoliv farmaceuticky přijatelné excipienty pro orální použití jsou vhodné pro přípravu takových dávkových forem. Vhodné farmaceutické dávkové formy zahrnují formy koprecitátu popsané například v patentu autora Butlera US 5 985 326, který je zde uveden jako odkaz. Ve výhodných provedeních je jednotková dávková forma předloženého vynálezu pevná prostá koprecipitátu PDE5 inhibitoru, ale spíše obsahuje pevný PDE5 inhibitor jako volné léčivo.

• · · » *0 00 00 • 0 0 0 0 ·0 0 0 · · • 000 0 000 0 0 0

Přednostně obsahují tablety farmaceutické excipienty obecně uznávané jako bezpečné, jako je laktoza, mikrokrystalická celulóza, škrob, uhličitan vápenatý, stearát hořečnatý, kyselina stearová, talek a kolodní oxid křemičitý, a jsou připravovány standardními farmaceutickými výrobními metodami, jak jsou popsány v Remingtonů Pharmaceutical Sciences, 18.vyd., Mack Publishing Co., Easton, Pa (1990). Tyto postupy zahrnují například granulaci za mokra , po níž následuje sušení, mletí a lisování do tablet s nebo bez potahování filmem; granulaci za sucha, po níž následuje mletí, lisování do tablet s nebo bez potahování filmem; míšení za sucha, po němž následuje lisování do tablet, s nebo bez potahování filmem; formované tablety; granulaci za mokra, sušení a plnění do želatinových kapslí; plnění suché směsi do želatinových kapslí; nebo plnění suspenze a roztoku do želatinových kapslí. Obvykle mají pevné dávkové formy identifikační označení, kterými jsou opatřeny na povrchu nebo jsou na povrch natištěna.

Předložený vynález je založen na důkladných experimentech a klinických zkouškách, a neočekávaných zjištění, že vedlejší účinky předtím předpokládané, že jsou příznačné pro PDE5 inhibici, mohou být redukovány na klinicky nevýznamné hladiny výběrem selektivního PDE5 inhibitoru, majícího specifické charakteristiky uvedené dále, zejména:

1) alespoň 10Onásobný rozdíl v hodnotách IC₅₀ pro inhibici

PDE5 versus PDE6;

2) alespoň 1000násobný rozdíl v hodnotách IC₅₀ pro inhibici

PDE5 versus PDE1c; a

3) hodnotu IC₅₀ pro inhibici PDE5 menší než 10 nM.

* 9 • 9

·· «· ♦ ♦ · • · ·

Tato neočekávaná zjištění umožnila vývoj výrobků s inkorporovaným selektivním PDE5 inhibitorem v asi 1 až asi 20mg jednotkových dávkových formách tak, že pokud se podávají orálně, minimalizují nežádoucí vedlejší účinky, o nichž se dříve uvažovalo, že jsou nevyhnutelné. Tyto vedlejší účinky zahrnují rudnutí tváří, abnormality vidění a výrazný pokles krevního tlaku, když se podává PDE5 inhibitor samotný nebo v kombinaci s organickým nitrátem. Minimální účinek předloženého PDE5 inhibitoru, podávaného v asi 1 až asi 20mg jednotkových dávkových formách, na PDE6, rovněž umožňuje podávání selektivního PDE5 inhibitoru pacientům trpícím retinální chorobou, jako je diabetická retinopatie nebo retinis pigmentosa.

Jeden takový selektivní PDE5 inhibitor, např. (6R-trans)-6-(1,3-benzodioxol-5-yl)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methylpyrazino[1 ',2':1,6]pyrido[3,4-b]indol-1,4-dion, jinak nazývaný (6R, 12aR)- 2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6-(3,4-methylendioxyfenyl)pyrazino[2', 1 ':6,1 ]pyrido[3,4-b]indoI-1,4-dion, je diskutován v patentu autora Daugab v US 5 859 006, a je znázorněn strukturním vzorcem I:

U sloučenin vzorce I bylo v humánních klinických studiích prokázáno, že uplatňují při podávání spolu s organickými nitráty minimální vliv na systolický krevní tlak. Naopak sildenafil, pokud se podává s nitráty, vykazuje čtyřnásobně vyšší snížení systolického • to • ·· to to to ·· krevního tlaku oproti placebu, což vede k uvádění kontraindikací na etiketě VIAGRY® a ohrožení některých pacientů.

Selektivní PDE5 inhibitory se výrazně odlišují v chemické struktuře, a použití selektivního PDE5 inhibitoru, jak je definováno v předloženém vynálezu, není závislé na konkrétní chemické struktuře, ale spíše na zde uvedených kritických parametrech. Nicméně výhodné sloučeniny mající požadovanou potenci a selektivitu mohou být snadno identifikovány testy popsanými v popisech patentů: Daugan, US 5 859 006; Daugan a kol., US 5 981 527; a Daugan a kol., US 6 001 847, přičemž všechny jsou uvedeny jako odkazy.

Výhodné sloučeniny v patentech Daugan, US 5 859 006; a Daugan a kol., US 5 981 527 jsou charakterizovány strukturním vzorcem II:

kde

R° je vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, halogenu a C·,. ₆alkylu;

R¹ je vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, C-,_₆alkylu, C₂.₆. aikenylu, C₂.₆alkinylu, halogenC^alkylu, C₃._scykloalkylu, C₃.₈cykloalkylC-i^alkylu, arylC^alkylu, přičemž aryl je fenyl nebo fenyl substituovaný jedním až třemi substituenty vybranými ze skupiny sestávající z halogenu, C^alkylu, C₁.₆alkoxyskupiny, methylendioxyskupiny, a jejich směsí, a heteroarylC-^alkylu, kde heteroarylem je thienyi, furyl, nebo pyridyl, každý popřípadě • · • tt • tttt • · • tttt • tt substituovaný jedním až třemi substituenty vybranými ze skupiny sestávající z halogenu, (/^alkylu, Cvgalkoxyskupiny, a jejich směsí;

R² znamená popřípadě substituovaný monocyklický aromatický kruh vybraný z benzenu, thiofenú, furanu a pyridinu, nebo popřípadě substituovaný bicyklický kruh

A připojený na zbytek molekuly přes jeden z atomů uhlíku benzenového kruhu a kde kondenzovaný kruh A je 5- nebo 6-členný kruh, nasycený nebo částečně nebo zcela nenasycený, a obsahuje atomy uhlíku a popřípadě jeden nebo dva heteroatomy vybrané ze skupiny sestávající z kyslíku, síry a dusíku;

R³ znamená vodík nebo C^galkyl, nebo R¹ a R³ dohromady tvoří

3- nebo 4-členný alkylový nebo alkenylový řetězec; a jejich soli a solváty.

Jinými výhodnými sloučeninami jsou ty vzorce II, kde:

R° je vodík, halogen nebo C^galkyl;

R¹ je vodík nebo Cggalkyl;

R² je bicyklický kruh

který může být popřípadě substituován jednou nebo více skupinami vybranými z halogenu a C-^alkylu; a

R³ je vodík nebo C^alkyl.

Φ · 9 9 9 · ·* ·· 99

9« 99

Následující tabulka 1 ilustruje PDE5 a PDE6 IC₅₀ hodnoty pro vybrané selektivní PDE5 inhibitory popsané v patentu US 5 859 006, jak byly stanoveny zde uvedenými postupy .

Tabulka 1

Sloučenina	PDE5 IC50 (nM)	PDE6 IC50 (nM)	PDE6/PDE5
1	5	663	133
2	2	937	469
3	2	420	210
4	5	729	146
5	2,5	3400	1360

Sloučenina 5 v tabulce 1 má strukturní vzorec l a dále dokládá IC₅₀ proti PDE1c je 10 0000 a poměr PDE1c/PDE5 je 4000.

Struktury sloučenin č. 1-5 v tabulce 1 jsou stukturního vzorce II, kde R°, R¹, R² a R³ jsou následující:

Sloučenina	R°	R1	R2	R3
1	H		Ό		H
2	H	CH,			H
3	H		Tj		H
4	H	H	Ό	OH!	CHj
5	H	CH3	Ό	CCHi	H

• · · #» • « • tt * tt tt • tt tt· « · tt ·· « ·· • tt · • · tt • tt tt

Hodnoty z tabulky 1 dokládají, že sloučenina kde R¹ je vodík nebo C.,_₆alkyl, R² je strukturního vzorce I a R³ je vodík, je zejména výhodná. Přednostně je A je

Výhodnými sloučeninami jsou:

(6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6-(3,4-methylendioxyfenyl)pyrazino[2',1':6, 1]pyrido[3,4-b]indol-1,4-dion; a (3S, 6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2, 3-dimethyl-6-(3,4methylen-dioxyfenyl)pyrazino[2',1 ':6, 1 ]pyrido[3,4-b] indol-1,4-dion; a jejich fyziologicky přijatelné soli a solváty (jako hydráty).

Jiné příkladné sloučeniny vhodné pro předložený vynález jsou popsány v patentu autora Daugan a kol., US 6 001 847 a WO97/43287, začleněných zde jako odkaz.

Další příkladné sloučeniny pro použití v předloženém vynálezu jsou popsány v PCT přihlášce PCT/EP98/06050, která designuje US, pod názvem „Chemické sloučeniny“, vynálezci A. Bombrun a F. Gellibert, jejíž popis je zde specificky začleněn ve formě odkazu. Tato třída sloučenin má strukturní vzorec III:

(ft^l«)_n (III) a soli a solváty (jako hydráty), kde

C znamená 5- nebo 6-člennou heteroarylovou skupinu obsahující alespoň jeden heteroatom vybraný ze skupiny sestávající z kyslíku, dusíku a síry;

R¹² znamená vodík nebo halogen;

R¹³ je vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, nitroskupiny (NO₂), trifluormethylu, trifluormethoxyskupiny, halogenu, kyanoskupiny (CN),

5- nebo 6-členné heterocyklické skupiny obsahující alespoň jeden heteroatom vybraný ze skupiny sestávající z kyslíku, dusíku a síry, popřípadě substituovaný C(=O)OR^a nebo C₁_₄alkylem,

C-i.galkylu popřípadě substituovaného OR^h,

C₁_₃alkoxyskupiny,

C(=O)R^h,

OC(=O)OR^h,

C(=O)OR^h,

C₁.₄alkylenHet,

C₁.₄alkylenC(=O)OR^h,

OC₁.₄alkylenC(=O)OR^t1,

C₁.₄alkylenOC₁.₄alkylenC(=O)OR^h,

C(=O)NR¹SO₂R³,

C(=O)C₁.₄alkylenHet,

C₁.₄alkyíenNR^hR¹,

C₂.₆alkylenNR^hR¹,

C(=O)NR^hR¹,

C(=O)NR^hR¹,

99

9 9 9

9 9 9

9 9 9

9 9 9

9 99 • 9 · 4 • · · «

99 » ·· • 9 9 9

9 99

9 9 9 • 9 9 9

9 9

C(=O)NR^hC₁.₄alkylenORⁱ,

C(=O)NR^h C^alkylenHet,

Or’,

OC₂.₄alkylenNR^hR¹,

OC₁.₄alkylenCH(OR^h)CH₂NR^hRⁱ,

OC₁.₄alkylenHet,

OC₂.₄alkylenOR^h,

OC₂.₄alkylenNR^hC(=O)OR^h,

NR^hR'

NR^hC₁.₄alkylenNR^hR',

NR^hC(=O)R',

NR^hC(=O)NR^hRⁱ,

N(SO₂C₁.₄alkyl)₂,

NR^h(SO₂C₁.₄alkyl),

SO₂NR^hR', a OSO₂trifluormethyl;

R¹⁴ je vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, halogenu OR^h, C.,.₆. alkylu, NO₂ a NR^hR';

nebo R¹³ a R¹⁴ tvoří dohromady 3- nebo 4-členný alkylenový nebo alkenylenový řetězec tvořící část 5- nebo 6-členného kruhu, popřípadě obsahující alespoň jeden heteroatom;

R¹⁵ je vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, halogenu, NO₂, trifluormethoxyskupiny, C^galkylu, OCi.ealkylu, a C(=O)OR^h;

R¹⁴ je vodík, nebo R¹⁵ a R¹⁶ dohromady tvoří 3- nebo 4-členný alkylenový nebo alkenylenový řetězec tvořící část 5- nebo 6-členného kruhu, popřípadě obsahující alespoň jeden heteroatom;

Het označuje 5- nebo 6-člennou heterocyklickou skupinu »· ·· »· ·· *· ·« • · · · · · · · ..,, • · ·· ···. . , · · • * · · . · .« . . . !; ζ ···· ··»» · « , .

·· ·· ·· *· ·« ·· obsahující alespoň jeden heteroatom vybraný ze skupiny sestávající z kyslíku, dusíku, a síry, a popřípadě substituovaný s C^alkylem;

R^h a R¹ mohou být stejné nebo různé a jsou nezávisle vybrány z vodíku a C-,_₆alkylu;

R^f označuje fenyl nebo C₄.₆cykloalkyl, přičemž fenyl nebo C₄.₆ cykloalkyl mohou být popřípadě substituovány jedním nebo více atomy halogenu, jedním nebo více C(=O)OR^h, nebo jedním nebo více OR^h;

n je celé číslo 1, 2, nebo 3 ; a m je celé číslo 1 nebo 2.

PŘÍPRAVA

Příprava lidského PDE5

Rekombinantní produkce lidského PDE5 se prováděla v podstatě jak je popsáno v příkladu 7 patentu US 5 702 936, začleněného zde jako odkaz, s tou výjimkou, že použitý vektor transformace kvasinek, odvozený ze základního ADH2 plasmidu popsaného v V. Price a kol., Methods in Enzymology, 1985, str. 308-318 (1990), zabudoval ADH2 promotor kvasinek a terminanční sekvence spíše než ADH1 promotor a terminační sekvence, a hostitelem Saccharomyces cerevisiase byl proteasou-deficitní řetězec BJ2-54 uložený 31. srpna, 1988 v americké sbírce American Type Cultur Collection, Manassas, Virginia, pod přírůstkovým číslem ATCC 74465. Transformované hostitelské buňky byly kultivovány ve 2X SC-leu mediu, pH 6,2, se stopami kovů a vitaminů. Po 24 hodinách bylo přidáno YEP medium obsahující glycerol na finální koncentraci 2X YEP/3% glycerol. O přibližně 24 hodin později byly buňky usmrceny, promyty a uloženy při -70 °C.

Buněčné pelety (29 g) byly dány rozmrazit na ledu s odpovídajícím objemem pufru pro lýzu (25 mM Tris-CI, pH 8, 5 mM MgCI₂, 0,25 mM dithiothreitolu, 1 mM benzamidínu, a 10 μΜ ZnSO₄).

• ft • ftft ft · ft ftft • ftft ftft • ft • ft *c • · ft • ft • ftft • · • ftft ft ftft • ft • ft •

• ft • ft ft ftft • ft • ft ft · ft · ft ft • ft ftft ft ft

Buňky byly lýzovány v mikrofluidizeru s N₂ při tlaku 20 000 psi (1 psi -6895 Pa). Lysát byl odstředěn a filtrován přes 0,45 pm filtry pro jedno použití. Filtrát byl převeden do 150ml kolony „Q Sepharose Fast Flow“ (Pharmacia). Kolona byla promyta 1,5 objemy pufru A (20 mM Bis-Tris propan, pH 6,8, 1 mM MgCI₂, 0,25 mM dithiothreitolu, 10 pM ZnSO₄ ), a eluována s krokovým gradientem 125 mM NaCL v pufru 1, následně s lineárním gradientem 125-1000 mM NaCl v pufru A.

Aktivní frakce z lineárního gradientu byly použity ve 180mL hydroxyapatitové koloně v pufru B (20 mM Bis-Tris propan (pH 6,8), 1 mM MgCI₂, 0,25 mM dithiothreitol, 10 pM ZnSO₄, a 250 mM KCI). Po naplnění byla kolona promyta 2 objemy pufru B a eluována s lineárním gradientem 0-125 mM fosfátu draselného v pufru B. Aktivní frakce byly spojeny, vysráženy 60% síranem amonným, a resuspendovány v pufru C (20 mM Bis-Tris propan, pH 6,8, 125 mM NaCl), 0,5 mM dithiothreitol, a 10 pM ZnSO₄ ). Shromážděná hotovost byla aplikována do 140mL kolony Sephacryl S-300 HR a eluována pufrem C. Aktivní frakce byly zředěny na 50 % glycerolem a uloženy při -20 °C. Výsledné preparáty měly asi 85% čistotu podle SDS-PAGE.

Testy účinnost PDE

Účinnost PDE5 lze měřit standardními testy známými ze stavu techniky. Například specifická účinnost jakéhokoliv PDE může být stanovena následovně; PDE testy využívající techniku separace na dřevěném uhlí se prováděly v podstatě tak, jak je posáno v publikaci od Loughney a mkol., (1996), The Journal of Biological Chemistry, 271:796-806. V této zkoušce aktivita PDE5 konvertuje [³²P]cGMP na [³²P]5'GMP v poměru k množství přítomné PDE5 aktivity. [³²P]5'GMP se potom kvantitativně konvertuje na volný [³²P]fosfát a neoznačený • ·· adenosin působením 5'-nukleotidasy z hadího jedu. Z tohoto důvodu je množství uvolněného [³²P] fosfátu úměrné aktivitě enzymu. Test se prováděl při 30 °C ve 100 pl reakční směsi obsahující (finální koncentrace) 40 nM Tris-CI (pH 8,0), 1 μΜ ZnSO4, 5 mM MgCI2, a 0,1 mg/ml albuminu bovinního sera. PDE5 je přítomen v množstvích s výtěžkem < 30 % celké hydrolýzy substrátu (lineární podmínky testu). Test se iniciuje přidáním substrátu (1 mM [³²P]c GMP). a směs se inkubuje po 12 minut. Potom se přidá sedmdesátpět (75) pg jedu Crotalux atrox a inkubace pokračuje po další 3 minuty (celkově 15 minut). Reakce se zastaví přidáním 200 ml aktivního dřevěného uhlí (25 mg/ml suspenze v 0,1 M NaH2PO₄, pH 4). Po odstředění (750 x g po 3 minuty), aby sedimentovalo uhlí, se vzorek supernatantu odebere na stanovení radioaktivity ve scintilačním počítači a vypočte se PDE5 aktivita. Přípravky měly specifické aktivity asi 3 pmoly cGMP hydrolyzované za minutu na miligram proteinu.

Příprava bovinního RDE6

Bovinní PDE6 byl dodán dr.N.Virmaux, INSERM U338, Štrasburg. Bovinní retiny byly připraveny tak, jak popsal Virmoux a kol., FEBS Letters, 12(6), str. 325-328 (1971) a viz také A.Sitaramayya a kol.,

Exp. Eye Res., 25, str. 163-169 (1977). Stručně řečeno, pokud nebude uvedeno jinak, všechny operace byly prováděny za chladu a ve tlumeném červeném světle. Oči byly uchovávány v chladu a ve tmě po čtyři hodiny po poražení dobytka.

Příprava bovinního retinálního vnějšího segmentu (ROS) v podstatě odpovídá postupům popsaným autorem Schichi a kol., J. Biol. Chem., 224:529 (1969). V typickém experimentu bylo 35 hovězích retin (sítnic) rozdrceno v třecí misce s 35 ml 0,066 M fosfátového pufru, pH «> ·

7,0, tvořeného do 40 % sacharozou, následovala homogenizace v Potterově homogenizeru (20 pohybů nahoru a dolu). Suspenze byla odstředěna při 25 000 x g po 20 minut. Peleta byla homogenizována (40% v sacharoze) a opatrně vrstvena pod 7,5 ml fosfátového pufru (neobsahujícího žádnou sacharozu). Odstřelování probíhalo v otáčivém rotoru při 45 000 x g po 20 minut, a byla získána peleta, černá vespod a také s červeným pásem na povrchu 0,066 M. fosfát40% sacharoza/0.066 M fosfát (surový ROS). Červený materiál na povrchu byl odstraněn, zředěn fosfátovým pufrem, odstředěn ke dnu na peletu, a znovu rozdělen v pufrové 40% sacharoze, jak bylo popsáno výše. Tento postup byl opakován 2 nebo 3krát, až nebyla vytvořena žádná peleta. Purifikovaný ROS byl promyt ve fosfátovém pufru a nakonec odtředěn ke dnu na peletu při 25 000 x g po 20 minut. Všechny materiály byly uchovávány až do použití zmrazené.

Hypotonické extrakty byly připraveny suspendováním isolovaného ROS v 10 mM Tris-Cl pH 7,5, 1 mM EDTA, a 1 mM dithioerythritolu, následovalo odstředování při 100 000 x g po 30 minut.

U přípravku bylo zjištěno, že má specifickou aktivitu asi 35 nmolů cGMP hydrolyzovaných za minutu na miligram proteinu.

Příprava PDE1c z buněk Spodoptera fuqiperda (Sf9)

Buněčné pelety (5 g) byly ponechány roztát na ledu s 20 ml pufru pro lýzu (50 mM MOPS pH 7,4, 10 μΜ ZnSO₄, 0,1 mM CaCI₂, 1 mM DTT, 2 mM benzamidinu Hel, po 5 pg/ml pepsatinu, leupeptinu a aproteinu). Buňky byly lýzovány průchodem přes francouzský buněčný lis (SLM-Aminco), zatímco teplota byla udržována pod 10 °C. Získaný buněčný homogenát byl odstředěn při 36 000 otáčkách za minutu při °C po 45 minut v Beckmanově ultracentrifuze s použitím rotoru typu TI45. Supernatan byl vypuštěn a zbylá peleta byla resuspendována s 40 ml solubilizačního pufru /pufr pro lýzu obsahujícího 1M NaCl, 0,1 M MgCI₂, 1 mM CaCI₂, 20 pg/ml calmodulinu, a 1 % sulfobetainu SB12 (Z3-12) pomocí ultrazvuku za použití tuneru VibraCell s mikrotipem po 3 x 30 sekund. Toto probíhalo v chladící směsi drceného ledu /soli . Následovalo zpracování ultrazvukem, směs byla pomalu míchána po 30 minut při 4 °C až do ukončení solubilizace proteinů vázaných na membráně. Tato směs byla odstředěna v Beckmanově ultracentrifuze za použití rotoru typu TI45 při 36 000 otáčkách za minutu po 45 minut. Supernatant byl zředěn pufrem pro lýzu obsahujícím 10 pg/ml calpain inhibitoru I a II. Vysrážený protein byl odstřeďován po 20 minut při 9 000 otáčkách za minutu v Beckmanově JA-10 rotoru. Odebraný supernatant byl potom podroben chromatografií, „Mimetic Blue AP Agarose Chromatografy“.

Aby kolona, „Mimetic Blue AP Agarose Column“, pracovala, byla nejprve pryskyřice pokryta aplikováním 10 základních objemů 1% polyvinylpyrrolidonu (např. MW 40 000), aby se zablokovala nespecifická vazebná místa. Volně vázaný PVP-40 byl odstraněn promytím 10 základními objemy 2M NaCl a 10 mM citrátu sodného pH 3,4. Právě před přidáním solubilizovaného PDE1c vzorku byla kolona uvedena do rovnováhy 5 základními objemy kolonového pufru A (50 mM MOPS pH 7,4, 10 pM ZnSO₄, 5 mM MgCI₂, 0,1 mM CaCI₂, 1 mM DTT, 2 mM benzamidinu HCI).

Solubilizovaný vzorek byl vnášen do kolony průtokovou rychlostí 2 ml/min s recyklací tak, že celý vzorek byl vnesen 4 až 5krát ve 12 hodinách. Po ukončení plnění byla kolona promyta 10 objemy kolony kolonového pufru A, potom 5 objemy kolony kolonového pufru B

·* (kolonový pufr A obsahující 20 mM 5'-AMP), a následně 5 objemy kolony kolonového pufru C (50 mM MOPS pH 7,4, 10 μΜ ZnSO₄, 0,1 mM CaCI₂, 1 mM dithiothreitolu, a 2 mM benzamidinu HCI). Enzym byl eluován do tří po sobě jdoucích lázní. První lázeň sestávala z enzymu z promývacího roztoku 5 základních objemů kolonovým pufrem C obsahujícím 1 mM cAMP. Druhá lázeň sestávala z enzymu z 10 základních objemů promývacího roztoku s kolonovým pufrem C obsahujícím 1 M NaCl. Finální lázeň enzymu sestávala z promývacího roztoku 5 základních objemů s kolonovým pufrem C obsahujícím 1 M NaCl a 20 mM cAMP.

Aktivní lázně enzymu byly spojeny a cyklický nikleotid byl odstraněn běžnou gelovou filtrační chromatografií nebo chromatografií na hydroxa-apatitových pryskyřicích. Po následném odstranění cyklických nukleotidů byly enzymové lázně dialyzovány proti dialyzačnímu pufru obsahujícímu 25 mM MOPS pH 7,4, 10 pM ZnSO₄, 500 mM NaCl, 1 mM CaCI₂, 1 mM dithiothreitolu, 1 mM benzamidinu HCI. Následovala dialýza proti dialyzačnímu pufru obsahujícímu 50% glycerol. Enzym byl rychle zchlazen pomocí suchého ledu a uložen při -70 °C.

Získané přípravky měly čistotu asi > 90% stanovenou SDSPAGE. Tyto přípravky měly specifické účinnosti asi 0,1 až 1,0 pmol cAMP hydrolyzovaného za minutu na miligram proteinu.

Stanovení hodnot IC^n

Zajímavým parametrem při hodnocení potence kompetitivního enzymového inhibitoru PDE5 a /nebo PDE1c a PDE6 je inhibiční konstanta, tedy Κ_Η Tento parametr může být přibližně stanoven )

• · • ·· • · • β určením IC₅₀, což je koncentrace inhibitoru, která rezultuje v 50% inhibici enzymu, v experimentu odpovídajícím jednotlivé dávce za následujících podmínek.

Koncentrace inhibitoru je vždy mnohem vyšší než koncentrace enzymu, takže koncentrace volného inhibitoru (která není známá) je dána přibližně celkovou koncentrací inhibitoru (která je známá).

Je vybráno výhodné rozmezí koncentrací inhibitoru (tedy v experimentu jsou inhibiční koncentrace alespoň několikanásobně vyšší a několikanásobně nižší než Κ_|} Typicky jsou inhibiční koncentrace v rozmezí od 10 nM do 10 μΜ.

Koncentrace enzymu a substrátu jsou vybrány tak, že je za nepřítomnosti inhibitoru (poskytujícího např. maximum hydrolýzy substrátu od 10 do 15%) spotřebováno méně než 20% substrátu tak, že aktivita enzymu je přibližně konstantní po dobu celého testu.

Koncentrace substrátu je menší než jedna desetina Michaelisovy konstanty (K_m). Za těchto podmínek se bude IC₅₀ těsněji blížit ke Kj. To je proto, že reakce Cheng-Prusoffa se týká těchto dvou parametrů;

IC₅₀ = K,(1 + S/K_m), s (1 + S/K_m) přibližně 1 při nízkých hodnotách S/K_m.

Hodnota IC₅₀ je předběžně stanovena z datových údajů vnesením dat do vhodného modelu interakce enzymového inhibitoru. Pokud je tato interakce známá, že zahrnuje jednoduché soutěžení inhibitoru se substrátem, lze použít model se dvěma parametry:

Y = A /(1 + x/B) kde Y je aktivita enzymu měřená při koncentraci inhibitoru x, A je aktivita za nepřítomnosti inhibitoru a B je IC₅₀. Viz Z. Cheng a kol., Biochem Pharmacol., 22:3099-3108 (1973).

Účinky inhibitorů z předloženého vynálezu na enzymatickou aktivitu PDE5 a PDE6 přípravků, popsaných výše, byly posuzovány dvěma testy, které se navzájem lišily hlavně rozsahem a v postatě poskytly stejné výsledky v IC₅₀ hodnotách. Oba testy zahrnovaly modifikaci postupu podle Wellse a kol., Biochim. Biophys. Acta, 384:430 (1975). První z těchto testů probíhal v celkovém objemu 200 pl obsahujících 50 mM Tris pH 7,5, 3 mM acetatu Mg, 1 mM EDTA, 50 pg/ml nukleotidasy hadího jedu a 50 nM [³H]-cGMP (Amersham). Sloučeniny podle vynálezu byly rozpuštěny v DMSO nakonec přítomném ve vzorku ve 2%. Vzorky byly inkubovány po 30 minut při 30 °C a inkubace byla zastavena přídavkem 800 pl 10 mM Tris pH 7,5, 10 mM EDTA, 10 mM theofylinu, 0,1 mM adenosinu, a 0,1 mM guanosinu. Směsi byly naneseny na 0,5 ml QAE Sephadex kolony, a eluovány 2 ml 0,1 M mravenčanu (pH 7,4). Vyvolaná radioaktiovita byla měřena scintilačnfm čítačem v Optiphase Hisafe 3.

Druhá, mikrodesková PDE zkouška se prováděla použitím Multiscreen- ploten a vakuové soustavy trubek. Vzorek (100 μΙ) obsahoval 50 mM Tris pH 7,5, 5 mM acetatu Mg, 1 mM EDTA a 250 pg/ml nukleotidasy hadího jedu. Další složky reakční směsi byly stejné, jako je uvedeno výše. Na konci inkubace byl celkový objem vzorků nanesen filtrací na QAE Sephadex desku mikrokolony. Volná radioaktivita byla eluována 200 μΙ vody, z nichž 50 μΙ podíly byly analyzovány scintilačním čítačem, jak je popsáno výše.

• · · * ·· ·· to· ·· « · · toto · • to · • ·· · to « · ·

Následující příklady jsou uvedeny pro další ilustraci přípravy nárokovaného vynálezu. Rozsah předloženého vynálezu nemá být vázán pouze na následující příklady provedení.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Sloučenina strukturního vzorce I byla připravena postupem podle patentu US 5 859 006 a formulována do tablet použitím granulace za mokra. Povidon byl rozpuštěn ve vodě za vzniku 10% roztoku. Účinná složka, mikrokrystalická celulóza, kroskarmeloza sodná a laurylsulfát sodný byly přidány do vysokostřihového mixeru a míšeny po 2 minuty. Prášky byly granulovány za mokra s povidonovým roztokem a zvlášť vodou, jak bylo požadováno pro dokončení granulace. Výsledná směs byla sušena v sušičce s fluidním ložem se vstupem vzduchu při 70 °C ± 5 °C, až byla ztráta sušením pod 2,5%. Granule byly protlačeny skrz Comil s vhodnou mřížkou (nebo sítem) a přidány do vhodného mísiče. Extragranulovaná kroskarmeloza sodná a laurylsulfát sodný, a koloidní bezvodá silika byly prošity přes vhodné síto (např. 500 mikrometrů) a přidány do mísiče a míchány 5 minut. Byl přidán stearát hořečnatý a míchán po 2 minuty. Směs byla slisována na cílové slisování/hmotnost 250 mg použitím 9 mm kruhové normální konkávní lisovací formy.

Jádra tablet byla potažena vodnou suspenzí Opadry OY-S-7322 s použitím Accelacota (nebo podobné povlékací nádoby) s využitím vstupního vzduchu při 50 °C až 70 °C, až byla hmotnost tablety zvýšena o přibližně 8 mg. Opadry OY-S-7322 obsahuje methylhydroxypropylcelulozu dle Lék.Evr., oxid titaničitý dle Lék.Evr., triacetin dle USP. Opadry zvyšuje hmotnost každé tablety • ·· na asi 258 mg. Obsah potahového filmu naneseného na tabletu může být menší než je uvedeno s ohledem na účinnost postupu.

Tablety jsou plněny do blistrových balení a doplněny příbalovým letákem (nálepkou) popisujícím bezpečnost a účinnost sloučeniny.

Složka	Složení (mg na tabletu)
Selektivní PDE5 inhibitor1	i	5
Hydroxypropylmethylceluloza- ftalát	1	5
Mikrokrystalická celulóza	221,87	213,87
Kroskarmeloza sodná	5,00	5,00
Lurylsulfát sodný	2,50	2,50
Sulfát-Povidon K30	9,38	9,38
Purifikovaná voda, USP (voda pro oplach)	q.s.	q.s.
Kroskarmeloza sodná	5,00	5,00
Laurylsulfát sodný	2,50	2,50
Koloidní bezvodá silika	0,50	0,50
Stearát hořečnatý	1,25	1,25
Celkově jádro neúplné	250,00	250,00
(Filmový potah Opadry OY-S7322)	asi 8 mg	asi 8 mg

¹) Sloučenina strukturního vzorce (I).

«0 ··

0 0

Příklad 2

Následující složení bylo použito pro přípravu výsledné dávkové formy obsahující 10 mg sloučeniny strukturního vzorce (I).

Složka	Množství (mg)
Granulace
Selektivní PDE5 inhibitor1	10,00
Laktoza monohydrát	153,80
Laktoza monohydrát (sprejově sušená)	25,00
Hydroxypropylceluloza	4,00
Kroskarmeloza sodná	9,00
Hydroxypropylceluloza /EF)	1,75
Laurylsulfát sodný	0,70
Vnější prášky
Mikrokrystalická celulóza (granulární-102)	37,50
Kroskarmeloza sodná	7,00
Stearát hořečnatý (rostlinný	1,25
	celkem 250 mg
Potahový film (průměrně)	11,25

·» ·· ·· ·* ·* ·♦

Při výrobě tablet se použije purifikovaná voda, USP. Voda se odstraní v průběhu výroby a minimální množství zůstává ve finálním produktu.

Tablety se vyrábějí za použití postupu granulace za mokra. Popis postupu krok za krokem je následující. Léčivo a excipienty, které mají být granulovány, se opatrně prošijí. Selektivní PDE5 inhibitor je míšen za sucha s laktózou monohydrátem (sprejově sušená), hydroxypropylcelulózou, kroskarmelózou sodnou a laktózou monohydrátem. Výsledná prášková směs se granuluje s vodným roztokem hydroxypropylcelulozy a laurylsulfátem sodným použitím Powrexu nebo jiného vhodného vysokostřihového granulátoru. Pro získání požadovaného konečného stavu je možno přidat další vodu. Může být použit mlýn k rozdrobení hrudek vlhkého granulátu a k zajištění úspěšného sušení. Vlhký granulát se suší použitím buď sušičky s fluidním ložem nebo sušící pece. Jakmile se materiál usuší, může být rozdělen podle velikosti, aby se vyloučily velké aglomeráty. Mikrokrystalická celu lóza, kroskarmelóza sodná a stearát hořečnatý jsou opatrně prošity a přidány do roztříděných suchých granulí. Tyto excipienty a suchý granulát jsou míšeny až k dosažení homogenity použitím bubnové komory, pásového mísiče nebo i jiných vhodných mísících zařízení. Proces míšení lze rozdělit do dvou fází. Mikrokrystalická celulóza, kroskarmeloza sodná a sušený granulát jsou přidány do mísiče a míšeny během první fáze, následuje přidání stearátu hořečnatého to tohoto granulátu a druhá fáze míšení.

Potom je smísený granulát lisován do tablet použitím rotačního lisovacího zařízení. Jádra tablet jsou potažena vodnou suspenzí příslušně zbarvené směsi v povlékací nádobě (např. Accela Cota). Potažené tablety mohou být lehce poprášeny talkem, aby se zlepšily manipulační charakteristiky tablet.

• * • ·· • 0

Tablety jsou plněny do plastických zásobníčků (30 tablet / zásobník) a doplněny příbalovým letákem - štítkem popisujícím bezpečnost a účinnost sloučeniny.

Příklad 3

Následující složení je použito pro přípravu výsledné dávkové formy 5 mg sloučeniny strukturního vzorce I.

Složka	Množství (mg)
Granulace
Selektivní PDE5 inhibitor1	2,50
Laktoza monohydrát	79,395
Laktoza monohydrát (sprejově sušená)	12,50
Hydroxypropylceluloza	2,00
Kroskarmeloza sodná	4,50
Hydroxypropylceluloza /EF)	0,875
Laurylsulfát sodný	0,35
Vnější prášky
Mikrokrystalická celulóza (granulární-102)	18,75
Kroskarmeloza sodná	3,50
Stearát hořečnatý (rostlinný)	0,63
	celkem 125 mg
Potahový film (průměrně) 6,875

·· ί» ·# *»

Dávková forma z příkladu 3 byla připravena stejným postupem, jako dávková forma z příkladu 2.

Příklad 4

Roztok kapsle
Složka	mg/kapsli	Procenta (%)
Selektivní PDE5 inhibitor 1	10	2
PEG400 NF	490	98
Plněná hmotnost	500	100

Želatinové kapsle jsou přesně naplněny čerpáním správného objemu pro plnění předem rozpuštěné léčivé formulace do částečně utěsněné dutiny kapsle. Bezprostředně po naplnění vstřikováním roztokem léčiva následuje úplné tepelné utěsnění kapsle.

Kapsle jsou naplněny do plastických kontejnerů a doplněny příbalovým letákem-štítkem.

Příklad 5

Tato studie byla nahodilou, s dvojím slepým pokusem, s kontolou placebem, dvojsměrnou křížovou klinickou farmakologickou studií interakce léčiva, která hodnotila hemodynamické účinky doprovázející podávání selektivního PDE5 inhibitoru jako studovaného léčiva (tedy sloučeniny obecného vzorce I) a krátce působících nitrátů na zdravé dobrovolníky-muže. V této studii přijímaly subjekty buď studované léčivo v dávce 10 mg nebo placebo, denně po sedm dní. Šestého nebo sedmého dne přijaly subjekty sublingválně nitroglycerin (0,4 mg), přičemž ležely naznak-tváří vzhůru na nakláněcím stole. Nitroglycerin byl podáván 3 hodiny po dávce studovaného léčiva a všechny subjekty • » • φ • φ ·· • φ·· φ · φ φ • · φ · φφ ·· • φ ♦ · > · · φφ ·φ ·♦ držely nitroglycerinovou tabletu pod jazykem až do úplného rozpuštění. Potom byly subjekty nakloněny o 70 ⁰ hlavou nahoru každých 5 minut po celkově 30 minut při současném měření krevního tlaku a srdečního tepu. Mezi dvacetidvěma zdravými mužskými subjekty ( ve věku 19 až 60 let), kteří podstoupily tuto studii, nedošlo k žádnému přerušení.

Z předběžné analýzy této studie vyplývá, že studované léčivo bylo velmi dobře tolerováno a nedošlo k žádné vážné nežádoucí události. Nebyly zjištěny žádné změny spojené se studovaným léčivem, v laboratorních odhadech bezpečnosti nebo 12-příkladech ECG. Nejběžnějším nežádoucím účinkem byla bolest hlavy, dyspepsie a bolest v zádech. Studie demostrovala minimální účinky na střední systolický krevní tlak a na střední maximální nitroglycerinem indukované snížení u systolického tlaku a maximální nitroglycerinem indukované snížení systolického krevního tlaku u všech pacientů.

Příklad 6

Ve dvou nahodilých studiích kontrolovaných dvěma slepými pokusy s placebem byla podávána sloučenina strukturního vzorce I pacientům, kteří tuto léčbu potřebovali, v rozmezí dávek v denním dávkování a pro požadovanou terapii v sexuálních setkáních a styku v domácím prostředí. Dávky od 5 do 20 mg sloučeniny strukturního vzorce I byly účinné a demonstrovaly, že nedochází k žádnému zrudnutí ani abnormalitám vidění. Bylo zjištěno, že dávka 10 mg sloučeniny strukturního vzorce I byla plně účinná a demonstrovala minimální vedlejší účinky (žádné zrudnutí a žádné údaje o modrém vidění).

Erektilní funkce byla odhadnuta podle International Index of « ·· * ♦ ♦ · * · ♦ · ♦ ♦ »·« »··« »♦»» • · · ··· »· · · · » · · *·· ·· ·· ·* ·* ·♦

Erectile Function (HEF) (Rosen a kol., Urology, 49, str. 822-830 (1997)), diářů sexuálních pokusů a celkově otázky ukojení. Sloučenina strukturního vzorce I výrazně zlepšila erektilní funkci, jak bylo posouzeno ze všech konečných výsledků. V obou režimech, „ v případě potřeby“ a denních dávkách, sloučenina strukturního vzorce I výrazně vylepšila erektilní funkci v dávkách mezi 1 a 20 mg.

Příklad 7

Třetí klinická studie byla nahodilou, se dvěma slepými pokusy, kontrolovanou placebem, pří níž se sloučenina strukturního vzorce I (studované léčivo) podávala „dle potřeby“ pacientům s mužskou erektilní dysfunkcí. Studované léčivo bylo podáváno po dobu 8 týdnů při léčení mužské erektilní dysfunkce (ED). Erektilní dysfunkce (ED) je definována jako přetrvávající neschopnost docílit a/nebo udržet erekci postačující k umožnění uspokojivého sexuální výkonu. Dávkování „dle potřeby“ je definováno jako občasné podávání studovaného léčiva před očekávanou sexuální aktivitou.

Studovaná populace se skládala z 212 mužů ve věku nejméně 18 let, se střední až těžkou erektilní dysfunkcí. Studované léčivo bylo podáváno orálně jako tablety koprecipitátu vyrobeného podle patentu autora Butler US 5 985 326. Studované léčivo bylo podáváno v dávkách 2 mg, 5 mg, 10 mg a 25 mg, „dle potřeby“, a ne častěji než jedenkrát za 24 hodin. Léčení všemi nitráty, azolovými antifungálními prostředky (jako je ketoconazol nebo itraconazol), warfarin, erythromycin, nebo antiandrogeny), nebylo v průběhu této studie povoleno. Žádné další schválené nebo experimentální medikamenty, léčení nebo zařízení, používaná k léčení ED, nebyla povolena. Čtyřicetijednomu subjektu bylo podáváno placebo.

tt tt · tt • tttt · tttt tttt • tt tttt * tttt 1 tt tttt 1

Dvěma primárními proměnnými s ohledem na účinnost byly schopnost subjektu proniknout do partnera a jeho schopnost udržet erekci během styku, měřeno podle International Index of Erectile Function (IIEF). Dotazník 11EF obsahuje patnáct otázek a je krátkým spolehlivým stanovením erektilní funkce. Viz R.C. Rosen a kol., Urology, 49, str. 822-830 (1977).

Druhými proměnnými s ohledem na účinnost byly výsledky z IIEF týkající se erektilní funkce, orgasmu, sexuální potřeby, ukojení při styku, a celkového uspokojení; schopnosti pacienta dosáhnout erekce, schopnosti zavést svůj penis do vagíny partnerky, zakončení styku ejakulací, spokojenost s tvrdostí erekce, a celkové uspokojení, vše, jak je posuzováno podle záznamů „Sexual Encounter Profile (SEP); a celkové zhodnocení zadaných dotazů na konci období léčení. SEP je pacientův denní „nástroj“ dokumentující každý sexuální styk v průběhu studovaného období.

Spolehlivost analýzy studie zahrnovala všechny přihlášené subjekty, a byla posuzována podle hodnocení všech popsaných nepříznivých událostí a změn klinických laboratorních údajů, vitálních příznaků, výsledků fyzikálních vyšetření a výsledků z elektrokardiogramu.

Na konci pacienti, kteří ohodnotili svou schopnost pronikání (IIEF otázka 3) jako „většinou vždy nebo vždy“, byli následující: 17,5 % ve skupině s placebem, 38,1 % ve skupině se 2 mg, 48,8 % ve skupině s 5 mg, 51,2 % ve skupině s 10 mg, a 83,7 % ve skupině s 25 mg. Porovnáními se objevily statisticky významné rozdíly ve změně schopnosti průniku mezi skupinou s placebem a skupinami se všemi ostatními hladinami dávek studovaného léčiva.

·· ·· ·♦ ·· ·* ·· • · · · ♦··· · »* · ···· .»·· » · · · • »· «·· ·♦ »·· ♦· · • ·♦ · « ·· · · · · · ·· ·· ·· ·· . ·· ·*

Na konci pacienti, kteří ohodnotili svou schopnost udržet erekci (IIEF otázka 4) při styku jako „většinou vždy nebo vždy“ jsou následující: 10,0 % ve skupině s placebem, 19,5 % ve skupině se 2 mg, 32,6 % ve skupině s 5 mg, 39,0 % ve skupině s 10 mg, a 69,0 % ve skupině s 25 mg. Porovnáním se objevily statisticky významné rozdíly ve změně schopnosti průniku mezi skupinou s placebem a skupinami se třemi vyššími hladinami dávek studovaného léčiva.

Celkově tato studie demonstrovala, že všechny čtyři dávky studovaného léčiva, zejména 2 mg, 5 mg, 10 mg a 25 mg, brané „dle potřeby“, poskytly výrazné zlepšení, vztaženo na placebo, sexuálních výkonů u mužů s erektilní dysfunkcí, jak je posuzováno podle IIEF na základě deníků pacientů hodnotících frekvenci úspěšnosti styku a ukojení při styku, a celkového hodnocení. Toto zlepšení bylo doloženo studií široké populace, která zahrnovala pacienty, kteří vykazovali všechny potíže erektilní dysfunkce. Nejnepříznivější účinky byly mírné nebo upraveny ve své síle. Významné je, že žádným pacientem nebyly uváděny obtíže týkající se poruch v barevném vidění.

Kombinované výsledky z klinických studií prokázaly, že podávání sloučeniny strukturního vzorce (I) účinně léčí mužskou erektilní dysfunkci, jak je doloženo následující tabulkou.

DOMÉNA EREKTILNÍ FUNKCE IIEF (změna ze základní linie)
Jednotková dávka	n	střed +SD	P
placebo	131	0,8 ± 5,3
2 mg	75	3,9 ± 6,1	< ,001
5 mg	79	6,6 ± 7,1	<,001
10 mg	135	7,9 ± 6,7	<,001
25 mg	132	9,4 ± 7,0	< ,001
50 mg	52	9,8 ± 5,5	< ,001
100 mg	49	8,4 ± 6,1	< ,001

> · · • ♦ * n je počet subjektů

SD je standardní odchylka

Nicméně bylo z kombinovaných klinických studií také zjištěno, že se zvyšovalo procento naléhavého léčení nežádoucích případů se zvyšující se jednotkovou dávkou sloučeniny strukturního vzorce I, jak je doloženo následující tabulkou:

Léčení naléhavých nežádoucích stavů (%)
Jednotková dávka (%)
Stav	Placeb o	2	5	10	25	50	100
Bolesti hlavy	10	12	10	23	29	34	46
Dyspepsie	6	3	14	13	19	20	25
Bolest v zádech	5	3	3	15	18	24	22
Myalgie	3	0	3	9	16	20	29
Rinitida	3	7	3	4	4	0	2
Konjunktivitida	1	0	1	1	0	2	5
Edem očního víčka	0	0	0	1	1	2	3
Rudnutí	0	0	0	<1	0	3	7
Abnormality vidění	0	0	0	0	0	0	0

Výše uvedená tabulka ukazuje zvýšení nežádoucích případů u jednotkových dávek 25 mg až 100 mg. Proto, i když byla u dávek 25 mg až 100 mg pozorována účinnost při léčení ED, je třeba brát v úvahu nežádoucí účinky pozorované u dávek od 25 do 100 mg.

V souladu s předloženým vynálezem jednotková dávka asi 1 až asi 20 mg, přednostně asi 2 až asi 20 mg, výhodněji asi 5 až asi 20 mg, a nejvýhodněji asi 5 až asi 15 mg, podávaná do maximální dávky 230 mg za období 24 hodin, účinně léčí ED a rovněž tak minimalizuje nebo omezuje výskyt nežádoucích vedlejších účinků. Důležité je, že nebyly zaznamenány žádné abnormality vidění, a rudnutí bylo podstatně * · • · ·· ·· • t · · • · ·· • ·· · ·· ·· ·· ·· • ·· · • ·· · ·· ♦♦ • ·· · • ·· · ·· ·· omezeno. Překvapivě bylo zjištěno, že spolu s léčením ED u osob, asi 1 až asi 20 mg jednotkovými dávkami sloučeniny strukturního vzorce I, s minimálními nežádoucími vedlejšími účinky, mohou být proti ED metodou a prostředkem podle předloženého vynálezu rovněž léčeny osoby, které se podrobují léčbě nitráty.

Principy, výhodná provedení a typy operací předloženého vynálezu jsou popsány v předchozím popisu. Vynález, který má být chráněn, však nemá být považován za omezený konkrétě popsanými formami, protože ty jsou předkládány pouze jako ilustrativní spíše než omezující. Úpravy a změny může odborník z dané oblasti techniky provést bez toho, že by se odchýlil od podstaty vynálezu.

Claims (40)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Výrobek pro humánní farmaceutické použití vyznačující se tím, že zahrnuje:

   a) orální dávkovou formu obsahující asi 1 až asi 20 mg selektivního PDE5 inhibitoru majícího (i) alespoň lOOnásobný rozdíl v hodnotách IC50 pro inhibici

   PDE5 proti PDE6, (ii) alespoň lOOOnásobný rozdíl v hodnotách IC50 pro inhibici

   PDE5 proti PDElc, (iii) hodnotu IC50 pro inhibici PDE5 menší než 10 nM, a (iv) postačující biodostupnost k poskytnutí účinnosti v asi 1 až asi 20mg jednotkových orálních dávkách;

   b) příbalový leták uvádějící, že PDE5 inhibitor je vhodný pro léčení sexuální dysfunkce u pacienta, který léčbu potřebuje, a že je prostý kontraindikací týkajících se podávání PDE5 inhibitoru pacientovi, který trpí retinální nemoci; a

   c) zásobník.
2. 2. Výrobek podle nároku 1 vyznačující se tím, že retinální nemocí je diabetická retinopatie.
3. 3. Výrobek podle nároku 1 vyznačuj ící se tím, že retinální nemocí je retinis pigmentosa.
4. 4. Výrobek pro humánní farmaceutické použití vyznačující se tím, že zahrnuje:

   a) orální dávkovou formu obsahující asi 1 až asi 20 mg selektivního PDE5 inhibitoru majícího (i) alespoň lOOnásobný rozdíl v hodnotách IC50 pro inhibici PDE5 proti PDE6,

   II

   111

   7 17

   Ί Ί 11' (ii) alespoň lOOOnásobný rozdíl v hodnotách IC50 pro inhibici

   PDE5 proti PDElc, (iii) hodnotu IC50 pro inhibici PDE5 menší než 10 nM, a (iv) postačující biodostupnost k poskytnutí účinnosti v asi 1 až asi 20mg jednotkových orálních dávkách;

   b) příbalový leták uvádějící, že PDE5 inhibitor je vhodný pro léčení sexuální dysfunkce u pacienta, který léčbu potřebuje, a že procentické množství pacientů uvádějících zrudnutí po léčení PDE5 inhibitorem je na úrovni menší než deset procent; a

   c) zásobník.
5. 5. Výrobek pro humánní farmaceutické použití vyznačující se tím, že zahrnuje:

   a) orální dávkovou formu obsahující asi 1 až asi 20 mg selektivního PDE5 inhibitoru majícího (i) alespoň lOOnásobný rozdíl v hodnotách IC50 pro inhibici

   PDE5 proti PDE6, (ii) alespoň lOOOnásobný rozdíl v hodnotách IC50 pro inhibici

   PDE5 proti PDElc, (iii) hodnotu IC50 pro inhibici PDE5 menší než 10 nM, a (iv) postačující biodostupnost k poskytnutí účinnosti v asi 1 až asi 20mg jednotkových orálních dávkách;

   b) příbalový leták uvádějící, že PDE5 inhibitor je vhodný pro léčení sexuální dysfunkce u pacienta, který léčbu potřebuje, a že procentické množství pacientů uvádějících zarudnutí po léčení PDE5 inhibitorem je menší než procentické množství pacientů uvádějících zarudnutí na štítku u sildenafilu; a

   c) zásobník.
6. 6. Výrobek pro humánní farmaceutické použití vyznačuj ící se tím, že zahrnuje:

   a) orální dávkovou formu obsahující asi 1 až asi 20 mg selektivního PDE5 inhibitoru majícího

   III (i) alespoň lOOnásobný rozdíl v hodnotách IC50 pro inhibici

   PDE5 proti PDE6, (ii) alespoň lOOOnásobný rozdíl v hodnotách IC50 pro inhibici

   PDE5 proti PDElc, (iii) hodnotu IC50 pro inhibici PDE5 menší než 10 nM, a (iv) postačující biodostupnost k poskytnutí účinnosti v asi 1 až asi 20mg jednotkových orálních dávkách;

   b) příbalový leták uvádějící, že PDE5 inhibitor je vhodný pro léčení sexuální dysfunkce u pacienta, který léčbu potřebuje, a že procentické množství pacientů uvádějících abnormality vidění s PDE5 inhibitorem je na úrovni nižší než procentické množství pacientů uvádějících abnormality vidění na štítku u sildenafilu; a

   c) zásobník.
7. 7. Výrobek podle nároku 6 vyznačuj ící se tím, že příbalový leták uvádí, že procentické množství pacientů uvádějících abnormality vidění po léčení PDE5 inhibitorem je kolem nuly.
8. 8. Výrobek pro humánní farmaceutické použití vyznačuj ící se tím, že zahrnuje:

   a) orální dávkovou formu obsahující asi 1 až asi 20 mg selektivního PDE5 inhibitoru majícího (i) alespoň lOOnásobný rozdíl v hodnotách IC50 pro inhibici

   PDE5 proti PDE6, (ii) alespoň lOOOnásobný rozdíl v hodnotách IC50 pro inhibici

   PDE5 proti PDE1 c, (iii) hodnotu IC50 pro inhibici PDE5 menší než 10 nM, a (iv) postačující biodostupnost k poskytnutí účinnosti v asi 1 až asi 20mg jednotkových orálních dávkách;

   b) příbalový leták uvádějící, že PDE5 inhibitor je vhodný pro léčení sexuální dysfunkce u pacienta, který léčbu potřebuje, a že je prostý kontraindikací týkajících se podávání PDE5 inhibitoru pacientovi, který trpí stavem vybraným ze skupiny sestávající z kognestivního srdečního selhání třídy 1, infarktu myokardu v 90 dnech nebo více před zahájením léčby sexuální dysfunkce, a jejich kombinace; a

   c) zásobník.
9. 9. Výrobek podle některého z nároků 1 až 8 vyznačující se tím, že orální dávková forma obsahuje asi 5 mg, asi 10 mg, nebo asi 20 mg selektivního PDE5 inhibitoru.
10. 10. Výrobek podle některého z nároků 1 až 9 vyznačuj ící se tím, že příbalový leták uvádí maximální dávku selektivního PDE5 inhibitoru asi 20 mg za období 24 hodin.
11. 11. Výrobek podle některého z nároků 1 až 10 vyznačující se tím, že selektivní PDE5 inhibitor má strukturu vzorce
12. 12. Výrobek jak je v podstatě popsán v předchozím popise.
13. 13. Způsob léčení sexuální dysfunkce zahrnující použití výrobku podle některého z nároků 1 až 12.
14. 14. Použití selektivního PDE5 inhibitoru pro výrobu léčiva pro léčení sexuální dysfunkce, kde léčivo má příbalový leták uvádějící, že PDE5 inhibitor je vhodný pro léčení sexuální dysfunkce u pacienta, který léčbu potřebuje, a že je prostý jakýchkoliv kontraindikací týkajících se φ i 'c i

    3 η z, c podávání PDE5 inhibitoru pacientovi, který trpí retinálním onemocněním.
15. 15. Použití selektivního PDE5 inhibitoru pro výrobu léčiva pro léčení sexuální dysfunkce, kde léčivo má příbalový leták uvádějící, že PDE5 inhibitor je vhodný pro léčení sexuální dysfunkce u pacienta, který léčbu potřebuje, a že procentické množství pacientů uvádějících zrudnutí po léčení PDE5 inhibitorem je na úrovni menší než deset procent.
16. 16. Použití selektivního PDE5 inhibitoru pro výrobu léčiva pro léčení sexuální dysfunkce, kde léčivo má příbalový leták uvádějící, že PDE5 inhibitor je vhodný pro léčení sexuální dysfunkce u pacienta, který léčbu potřebuje, a že procentické množství pacientů uvádějících zrudnutí po léčení PDE5 inhibitorem je menší než procentické množství pacientů uvádějících zarudnutí na štítku u sildenafilu.
17. 17. Použití selektivního PDE5 inhibitoru pro výrobu léčiva pro léčení sexuální dysfunkce, kde léčivo má příbalový leták uvádějící, že PDE5 inhibitor je vhodný pro léčení sexuální dysfunkce u pacienta, který léčbu potřebuje, a že procentické množství pacientů uvádějících abnormality vidění po léčení PDE5 inhibitorem je na úrovni nižší než procentické množství pacientů uvádějících abnormality vidění na štítku u sildenafilu.
18. 18. Použití selektivního PDE5 inhibitoru pro výrobu léčiva pro léčení sexuální dysfunkce, kde léčivo má příbalový leták uvádějící, že PDE5 inhibitor je vhodný pro léčení sexuální dysfunkce u pacienta, který léčbu potřebuje, a že je prostý jakýchkoliv kontraindikací týkajících se podávání PDE5 inhibitoru pacientovi, který trpí stavem vybraným ze skupiny sestávající z kognestivního srdečního selhání třídy 1, infarktu myokardu v 90 dnech nebo více před zahájením léčby sexuální dysfunkce, a jejich kombinací.

    1 3

    VI
19. 19. Selektivní PDE5 inhibitor mající (i) hodnotu IC50 pro inhibici PDE5, která je alespoň lOOnásobně nižší než hodnota IC50 pro inhibici PDE6;

    (ii) hodnotu IC50 pro inhibici PDE5, která je alespoň lOOOnásobně nižší než hodnota IC50 pro inhibici PDElc; a (iii) hodnotu IC50 pro inhibici PDE5 menší než 10 nM.
20. 20. Selektivní PDE5 inhibitor podle nároku 19 mající strukturu:
21. 21. Farmaceutický prostředek pro léčení sexuální dysfunkce vyznačuj ící se tím, že obsahuje jako účinnou složku selektivní PDE5 inhibitor podle nároku 19 nebo 20.
22. 22. Farmaceutický prostředek v podstatě jak je popsán výše.
23. 23. Selektivní PDE5 inhibitor podle nároku 19 nebo 20, nebo prostředek podle nároku 22, pro použití pro léčení sexuální dysfunkce.
24. 24. Selektivní PDE5 inhibitor nebo prostředek podle nároku 23, kde sexuální dysfunkcí je mužská erektilní dysfunkce.
25. 25. Selektivní PDE5 inhibitor nebo prostředek podle nároku 23, kde sexuální dysfunkce je ženská sexuální dysfunkce.

    > ·5 1 *> > 9 » > Ί ί 1 5 ¹ Ί 1 ί ¹ τι -)11

    VII φ · · · ->

    • * Φ Ί Λ * · · · τ ->

    • · * Λ * *

    Φ · Φ 11

    111 » Φ 11
26. 26. Použití selektivního PDE5 inhibitoru podle nároku 19 nebo 20, nebo prostředku podle nároku 21 nebo 22, pro výrobu léčiva pro léčení sexuální dysfunkce.
27. 27. Použi.tí podle nároku 26, kde sexuální dysfunkce je mužská erektilní dysfunkce.
28. 28. Použiti podle nároku 26, kde sexuální dysfunkce je ženská sexuální dysfunkce.
29. 29. Použití podle některého z nároků 26 až 28, kde léčivo je prosté jakýchkoliv kontraindikací týkajících se podávání selektivního PDE5 inhibitoru pacientovi, trpícímu retinální nemocí.
30. 30. Použití podle nároku 29, kde retinálním onemocněním je diabetická retinopatie nebo retinis pigmentosa.
31. 31. Použití podle některého z nároků 26 až 28, kde léčivo zajistí, že procentické množství pacientů uvádějících zrudnutí po léčení selektivním PDE5 inhibitorem je na úrovni menší než deset procent.
32. 32. Použití podle některého z nároků 26 až 28, kde léčivo zajistí, že procentické množství pacientů uvádějících zrudnutí po léčení selektivním PDE5 inhibitorem je menší než procentické množství pacientů uvádějících zarudnutí na štítku u sildenafilu.
33. 33. Použití podle některého z nároků 26 až 28, kde léčivo zajistí, že procentické množství pacientů uvádějících abnormality vidění po léčení selektivním PDE5 inhibitorem je na úrovni nižší než procentické množství pacientů uvádějících abnormality vidění na štítku u sildenafilu

    VIII

    • · • ··· ···· • • 99 9 9 9 9 9 9 • • • • • · · • • • • · • Φ ·!* ·· • 99 99
34. 34. Použití podle nároku 33, kde léčivo zajistí, že procentické množství pacientů uvádějících abnormality vidění po léčení selektivním PDE5 inhibitorem je kolem nuly.
35. 35. Použití podle některého z nároků 26 až 28, kde léčivo je prosté jakýchkoliv kontraindikací týkajících se podávání selektivního PDE5 inhibitoru pacientovi, který trpí stavem vybraným ze skupiny sestávající z kognestivního srdečního selhání třídy 1, infarktu myokardu v 90 dnech nebo více před zahájením léčby sexuální dysfunkce, a jejich kombinací.
36. 36. Použití selektivního PDE5 inhibitoru pro výrobu léčiva pro léčení sexuální dysfunkce u pacientů majících sklon k abnormalitám vidění, s náchylností k Červenání, trpících retínální nemocí, trpících kognestivním srdečním selháním třídy 1, nebo kteří utrpěli infarkt myokardu 90 dní nebo více před zahájením léčby sexuální dysfunkce.
37. 37. Použití podle některého z nároků 14 až 18 nebo 26 až 36, kde léčivo je pro podávání v dávkové jednotce asi 1 až asi 20 mg selektivního PDE5 inhibitoru.
38. 38. Použití podle některého z nároků 14 až 18 nebo 26 až 36, kde selektivní PDE5 inhibitor má postačující biodostupnost k poskytnutí účinnosti v asi 1 až asi 20mg jednotkových dávkách.
39. 39. Použití podle některého z nároků 14 až 18 nebo 26 až 36, kde léčivo je pro podávání v maximální dávce asi 20mg selektivního PDE5 inhibitoru po období 24 hodin.
40. 40. Jakýkoliv nový znak nebo kombinace znaků, jak jsou zde popsány.