SI20361A

SI20361A - Visoko selektivni fosfodiesterazni (PDE) encimski inhibitorji

Info

Publication number: SI20361A
Application number: SI200000107A
Authority: SI
Inventors: Jefrey Thomas EMMICK; Kenneth Michael Bv Ferguson; William Ernest Pullman; John Steven Whitaker
Original assignee: Lilly Icos Llc
Priority date: 1999-04-30
Filing date: 2000-04-26
Publication date: 2001-04-30
Also published as: CA2371684C; EA005416B1; HU0001632D0; KR20020008396A; SG98384A1; EP1173181A2; FR2795646A1; IL146098A0; ZA200108900B; JP2000336043A; HUP0200912A3; HK1041204B; ES2187234A1; ITMI20000922A1; KR20010020779A; EA200000355A3; FI20000976A; HRP20010778B1; NZ504163A; UA72248C2

Abstract

Predloženi izum se nanaša na visoko selektivne fosfodiesterazne (PDE) encimske inhibitorje in na njihovo uporabo v farmacevtskih izdelkih priprave. Zlasti se predloženi izum nanaša na močne inhibitorje fosfodiesteraze tipa 5 (PDE5), specifične za cikličen gvanozin 3',5'-monofosfat, ki so, kadar jih vdelamo v farmacevtski produkt pri enotskem doziranju okoli 1 do okoli 20 mg, uporabni za zdravljenje seksualne disfunkcije. Tukaj opisani izdelki priprave so označeni s selektivno PDE5 inhibicijo in so torej ugodni na terapevtskih področjih, kjer je zaželeno inhibiranje PDE5, z minimiziranjem ali eliminiranjem škodljivih stranskih učinkov, ki izhajajo iz inhibicije drugih fosfodiesteraznih encimov.ŕ

Description

Visoko selektivni fosfodiesterazni (PDE) encimski inhibitorji

Področje izuma

Predloženi izum se nanaša na visoko selektivne fosfodiesterazne (PDE) encimske inhibitorje in na njihovo uporabo v farmacevtskih izdelkih priprave. Zlasti se predloženi izum nanaša na močne inhibitorje fosfodiesteraze tipa 5 (PDE5), specifične za cikličen gvanozin 3',5'-monofosfat, ki so, vdelani v farmacevtski produkt, koristni za zdravljenje seksualne disfunkcije. Tukaj opisane izdelke priprave označuje selektivna PDE5 inhibicija in so torej koristni na terapevtskih področjih, kjer je zaželena inhibicija PDE5, ob minimiziranju ali eliminiranju škodljivih stranskih učinkov, ki izhajajo iz inhibicije drugih fosfodiesteraznih encimov.

Ozadje izuma

Biokemični, fiziološki in klinični učinki inhibitorjev fosfodiesteraz, specifičnih za cikličen gvanozin 3',5'-monofosfat (cGMP-specifične PDE), so uporabni pri številnih bolezenskih stanjih, pri katerih je zaželeno moduliranje funkcije mehkega mišičja, renalne funkcije, hemostatične funkcije, vnetne funkcije in/ali endokrine funkcije. cGMP-specifična fosfodiesteraza tipa 5 (PDE5) je glaven encim, ki hidrolizira cGMP v vaskulamem gladkem mišičju in poročali so o njeni ekspresiji v corpus cavemosum penisa (Taher et al., J. Urol., 149:2&5N (1993)). Tako je PDE5 zanimiv cilj pri zdravljenju seksualne disfunkcije (Murray, DN&P <5(3): 150-56 (1993)).

Farmacevtski produkt, ki zagotavlja PDE5 inhibitor, je trenutno dosegljiv in je na tržišču pod blagovno znamko VIAGRA®. Aktivna sestavina v VIAGRI® je sildenafil. Produkt se prodaja kot izdelek priprave, ki vključuje 25, 50 in 100 mg tablete sildenafila in navodila za uporabo. V navodilih piše, daje sildenafil močnejši inhibitor PDE5 kot drugih znanih fosfodiesteraz (več kot 80-kraten za PDE1 inhibicijo, več kot 1000-kraten za PDE2, PDE3 in PDE4 inhibicijo). Poročali so, daje IC50 za sildenafil proti PDE5 3 nm (Drugs of the Future, 22(2), str. 128-143 (1997)) in 3,9 nm (Boolell et al., Int. J. of Impotence Res., 8 str. 47-52 (1996)). Opisali so, da ima sildenafil 4000kratno selektivnost za PDE5 proti PDE3 in le 10-kratno selektivnost za PDE5 proti PDE6. Po teoriji je njegovo pomanjkanje selektivnosti za PDE6 osnova za nenormalnosti v zvezi z barvnim vidom.

Čeprav je imel sildenafil znaten tržni uspeh, je razočaral zaradi svojih znatnih škodljivih stranskih učinkov, vključno kot je zardevanje (10% pojavna stopnja). Škodljivi stranski učinki omejujejo uporabo sildenafila pri pacientih, ki trpijo zaradi nenormalnosti vida, hipertenzije in najbolj pomembno pri posameznikih, ki uporabljajo organske nitrate (Welds et al., Amer. J. of Cardiology, 83(5A), str. 21(C)28(C) (1999)).

Smatra se, da uporaba sildenafila pri pacientih, ki uživajo organske nitrate, povzroči klinično pomemben padec krvnega tlaka, ki bi lahko spravil pacienta v nevarnost. Tako so v navodilih za uporabo za sildenafil navedene striktne kontraindikacije proti njegovi uporabi v kombinaciji z organskimi nitrati (npr. kot so nitroglicerin, izosorbid mononitrat, izosorbid dinitrat, eritritil tetranitrat) in drugimi donorji dušikovih oksidov v katerikoli obliki, bodisi redno ali s prekinitvami, ker sildenafil ojača hipotenzivne učinke nitratov. Glej C.R. Conti et al., Amer. J. of Cardiology, 83(5A), str. 29C-34C (1999). Tako celo z dostopnostjo sildenafila ostaja potreba po identifikaciji izboljšanih farmacevtskih produktov, ki so koristni pri zdravljenju seksualne disfunkcije.

Pri predloženem izumu gre za izdelek priprave za humano farmacevtsko uporabo, ki obsega navodila za uporabo, vsebnik in oralno dozirno obliko, ki obsega selektivni

PDE5 inhibitor pri enotskih doziranjih med okoli 1 in okoli 20 mg/dozimo obliko. Ugodne učinke predloženega izuma smo opazovali pri kliničnih študijah in z odkritjem, da selektivni PDE5 inhibitor, izpolnjuje naslednje kriterije, omogoča učinkovito oralno dajanje okoli 1 do okoli 20 mg/dozimo obliko brez kontraindikacij, ki so na splošno potrebne za PDE5 inhibitorske produkte, kot opozorila, usmerjena na nenormalnosti vida. Selektiven PDE5 inhibitor v smislu predloženega izuma ima:

1) vsaj 100-kratno razliko v IC50 vrednosti za inhibicijo PDE5 proti PDE6 za posamezen PDE5 inhibitor (t.j. IC50 vrednost proti PDE5 je vsaj 100-krat manjša kot IC50 vrednost proti PDE6);

2) vsaj 1000-kratno razliko v IC₅₀ vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDElc; in

3) IC50 vrednost manj kot 10 nM.

Signifikantno so klinične študije tudi pokazale, da lahko zagotovimo učinkovit produkt z zmanjšano tendenco, da bi povzročil zardevanje pri dovzetnih posameznikih. Najbolj nepričakovano lahko produkt tudi dajemo s klinično nesignifikantnimi stranskimi učinki, povezanimi s kombiniranimi učinki PDE5 inhibitorja in organskega nitrata. Tako je kontraindikacija, ki so jo nekoč smatrali za nujno za produkt, ki vsebuje PDE5 inhibitor, nepotrebna, kadar uporabimo selektiven PDE5 inhibitor, kot je definiran zgoraj in kot je tukaj opisano. Tako gre pri predloženem izumu za učinkovito terapijo za seksualno disfunkcijo pri posameznikih, ki se jih preje ni dalo zdraviti ali so trpeli zaradi nesprejemljivih stranskih učinkov, vključno pri posameznikih s kardiovaskularno boleznijo, kot pri posameznikih, ki potrebujejo nitratno terapijo, so doživeli srčni infarkt več kot tri mesece pred začetkom terapije seksualne disfunkcije in trpijo zaradi kongestivne srčne odpovedi razreda 1, kot jo je definirala New York Heart Association (ΝΥΗΑ), ali pri posameznikih, ki trpijo zaradi nenormalnosti vida.

Povzetek izuma

Pri predloženem izumu gre za izdelek priprave za humano farmacevtsko uporabo, ki obsega navodila za uporabo, vsebnik in oralno dozirno obliko, ki obsega okoli 1 do okoli 20 mg selektivnega PDE5 inhibitorja na dozirno obliko.

Pri predloženem izumu gre nadalje za metodo za zdravljenje stanj, kjer je zaželena inhibicija PDE5, ki obsega dajanje pacientu, ki zdravljenje potrebuje, oralne dozirne oblike, ki vsebujejo okoli 1 do okoli 20 mg selektivnega PDE5 inhibitorja, po potrebi, do celotne doze 20 mg/dan. Pri izumu gre nadalje za uporabo oralne dozirne oblike, ki obsega selektiven PDE5 inhibitor pri doziranju okoli 1 do okoli 20 mg za zdravljenje seksualne disfunkcije.

Specifična stanja, ki jih lahko zdravimo z metodo in izdelkom v smislu predloženega izuma, vključujejo, vendar niso nanje omejeni, moško erekcijsko disfunkcijo in žensko seksualno disfunkcijo, zlasti žensko motnjo vzbuijenja, tudi znano kot žensko seksualno motnjo vzburjenja.

Zlasti gre pri predloženem izumu za izdelek priprave za humano farmacevtsko uporabo, ki obsega:

a) oralno dozirno obliko, ki obsega okoli 1 do okoli 20 mg selektivnega PDE5 inhibitorja, ki ima (i) vsaj 100-kratno razliko v IC50 vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDE6, (ii) vsaj 1000-kratno razliko v IC₅₀ vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDElc, (iii) IC50 ^manj kot 10 nM in (iv) zadostno biorazpoložljivost, da je učinkovit pri okoli 1 do okoli 20 mg enotskih oralnih doziranjih;

(b) navodila za uporabo, v katerih je navedeno, da je PDE5 inhibitor uporaben za zdravljenje seksualne disfunkcije pri pacientu, ki zdravljenje potrebuje, in da je brez kontraindikacij, povezanih z dajanjem organskih nitratov; in

c) vsebnik.

Pri predloženem izumu gre nadalje za izdelek priprave za humano farmacevtsko uporabo, ki obsega:

a) oralno dozirno obliko, ki obsega okoli 1 do okoli 20 mg selektivnega PDE5 inhibitorja, ki ima (i) vsaj 100-kratno razliko v IC50 vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDE6, (ii) vsaj 1000-kratno razliko v IC₅₀ vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDElc, (iii) IC₅₀ manj kot 10 nM in (iv) zadostno biorazpoložljivost, daje učinkovit pri okoli 1 do okoli 20 mg enotskih oralnih doziranjih;

(b) navodila za uporabo, kjer je navedeno, da je PDE5 inhibitor uporaben za zdravljenje seksualne disfunkcije pri pacientu, ki zdravljenje potrebuje, in ki uporablja organski nitrat; in

c) vsebnik.

Pri predloženem izumu gre tudi za izdelek priprave za humano farmacevtsko uporabo, ki obsega:

a) oralno dozirno obliko, ki obsega okoli 1 do okoli 20 mg selektivnega PDE5 inhibitorja, ki ima (i) vsaj 100-kratno razliko v IC50 vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDE6, (ii) vsaj 1000-kratno razliko v IC₅₀ vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDElc, (iii) IC₅₀ manj kot 10 nM in (iv) zadostno biorazpoložljivost, da je učinkovit v okoli 1 do okoli 20 mg enotskih oralnih doziranjih;

(b) navodila za uporabo, kjer je navedeno, da je PDE5 inhibitor uporaben za zdravljenje seksualne disfunkcije pri pacientu, ki zdravljenje potrebuje, in ki trpi zaradi stanja, izbranega iz skupine, ki obstoji iz retinalne bolezni, nagnjenosti k zardevanju, nagnjenosti k nenormalnostim vida, kongestivne odpovedi srca razreda 1, srčnega infarkta 90 dni ali več pred nastopom zdravljenja seksualne disfunkcije in njihovih kombinacij; in

c) vsebnik.

Podroben opis

Za namene predloženega izuma, kot je tukaj razloženo in opisano, so naslednji izrazi in okrajšave definirane, kot sledi:

Izraz vsebnik pomeni katerokoli posodo in zapiralo zanjo, primemo za shranjevanje, transport, razdeljevanje in/ali manipulacijo farmacevtskega produkta.

Izraz IC50 je merilo učinkovitosti spojine za inhibiranje posameznega PDE encima (npr. PDElc, PDE5 ali PDE6). IC₅₀ je koncentracija spojine, s katero dosežemo 50 % encimsko inhibicijo pri ekperimentu ena sama doza-odziv. Določevanje IC50 vrednosti za spojino zlahka izvajamo z znano in vitro metodologijo, ki je na splošno opisana v Y. Cheng et al., Biochem. Pharmacol., 22, str. 3099-3108 (1973).

Izraz navodila za uporabo pomeni informacijo, ki spremlja produkt, in je v njej navedeno, kako dajati produkt skupaj z varnostnimi in učinkovitostnimi podatki, ki so potrebni, da omogočijo zdravniku, farmacevtu in pacientu, da pridejo do utemeljene odločitve glede uporabe produkta. Navodila za uporabo se na splošno smatrajo kot etiketa za farmacevtski produkt.

Izraz oralna dozirna oblika se uporablja v splošnem smislu za označevanje farmacevtskih produktov, ki jih dajemo oralno. Strokovnjaki vedo, da oralne dozirne oblike vključujejo take oblike, kot so tekoči pripravki, tablete, kapsule in želatinske kapsule.

Izraz selektiven PDE5 inhibitor je definiran kot PDE5 inhibitor, ki ima:

1) IC₅₀ vrednost za inhibicijo PDE5 vsaj 100-krat manjšo kot IC50 vrednost za inhibicijo PDE6;

2) IC₅o vrednost za inhibicijo PDE5 vsaj 1000-krat manjšo kot IC₅₀ vrednost za inhibicijo PDElc; in

3) IC₅o vrednost za inhibicijo PDE5 manjšo kot 10 nM.

Selektivni PDE5 inhibitorji znatno variirajo v kemični strukturi in njihova uporaba pri predloženem izumu ni odvisna od kemične strukture, pač pa od tukaj opisanih parametrov selektivnosti in učinkovitosti.

Izraz nenormalnosti vida pomeni nenormalen vid, ki ga označuje modro-zelen vid, za katerega smatramo, da ga povzroči PDE6 inhibicija.

Izraz zardevanje pomeni naključno pordečitev obraza in vratu, ki jo pripisujemo vazodilataciji, povzročeni z jemanjem zdravila, ki jo običajno spremlja občutek toplote preko obraza in vratu in včasih znojenje.

Izraz prosto zdravilo pomeni trdne delce zdravila, ki niso tesno vdelani v polimerni ko-precipitat.

Kot je preje navedeno, je predloženi izum usmerjen na izdelek priprave za humano farmacevtsko uporabo, ki obsega navodila za uporabo, vsebnik in dozirno obliko, ki obsega okoli 1 do okoli 20 mg selektivnega PDE5 inhibitorja na enotsko dozirno obliko. Selektiven PDE5 inhibitor, koristen pri predloženem izumu, je PDE5 inhibitor, ki ima:

1) vsaj 100-kratno razliko v IC50 vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDE6;

2) vsaj 1000-kratno razliko v IC50 vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDElc; in

3) IC50 vrednost manj kot 10 nM;

in je zadosti biorazpoložljiv, da je učinkovit v okoli 1 do okoli 20 mg enotskih doziranjih.

Razlika je izražena kot PDE6/PDE5 razmerje IC₅₀ vrednosti, tj. razmerje IC₅₀vrednosti vs. PDE6 proti IC₅o vrednosti vs. PDE5 (PDE6/PDE5) je večje kot 100, bolj prednostno večje kot 300 in najbolj prednostno večje kot 500.

Podobno je razmerje IC₅o vrednosti vs. PDElc proti IC₅q vrednosti vs. PDE5 (PDElc/PDE5) večje kot 1000. Prednostni PDE5 inhibitorji imajo lahko več kot 3000kratno razliko med inhibicijo PDE5 in PDElc, bolj prednostno več kot 5000-kratno razliko med IC₅₀ vrednostjo proti PDE5 in PDElc. Učinkovitost inhibitorja, kot ga predstavlja IC₅o vrednost proti PDE5, je manjša kot 10 nM, prednostno manjša kot 5 nM, bolj prednostno manjša kot 2 nM in najbolj prednostno manjša kot 1 nM.

Navodila za uporabo vsebujejo opis, kako dajati farmacevtski produkt skupaj z varnostnimi in učinkovitostnimi podatki, ki so potrebni, da omogočijo zdravniku, farmacevtu in pacientu, da pride do utemeljene odločitve glede uporabe produkta. Navodila za uporabo se na splošno smatrajo kot etiketa farmacevtskega produkta. V navodilih za uporabo, ki so vključena v predloženi izdelek priprave, je navedeno, daje selektivni PDE5 inhibitor koristen pri zdravljenju stanj, kjer je želena inhibicija PDE5. Navodila za uporabo tudi vsebujejo instrukcije za dajanje ene ali več okoli 1 do okoli 20 mg enotskih dozirnih oblik, kot je potrebno, do maksimalne celotne doze 20 mg/dan. Prednostno je dajana doza okoli 5 do okoli 20 mg/dan, bolj prednostno okoli 5 do okoli 15 mg/dan in najbolj prednostno okoli 5 mg ali okoli 10 mg dozirna oblika, dajana enkrat dnevno, kot je potrebno.

Prednostna stanja, ki naj bi jih zdravili, so seksualna disfunkcija (vključno moška erekcij ska disfunkcija; in ženska seksualna disfunkcija, bolj prednostno ženska motnja vzburjenja (FAD)). Prednostno stanje, ki ga je treba zdraviti, je moška erekcijska disfunkcija.

Signifikantno navodila za uporabo podpirajo uporabo produkta za zdravljenje seksualne disfunkcije pri pacientih, ki trpijo zaradi retinalne bolezni, npr. diabetske retinopatije ali retinitis pigmentosa, ali pri pacientih, ki uporabljajo organske nitrate.

Tako so navodila za uporabo prednostno brez kontraindikacij, povezanih s temi stanji, in zlasti dajanje dozirne oblike z organskim nitratom. Bolj prednostno so navodila za uporabo tudi brez kakršnihkoli opozoril ali svaril, oboje v zvezi z retinalnimi boleznimi, zlasti retinitis pigmentosa, in v zvezi s posamezniki, ki so nagnjeni k nenormalnostim vida. Prednostno so v navodilih za uporabo tudi navedeni pojavi zardevanja pod 2 %, prednostno pod 1 % in najbolj prednostno pod 0,5 % pacientov, ki smo jim dali dozirno obliko. Pojavna stopnja zardevanja prikazuje znatno izboljšanje glede na znane farmacevtske produkte, ki vsebujejo PDE5 inhibitor.

Vsebnik, ki se uporablja pri predloženem izdelku priprave, je običajen v farmaciji. Na splošno je vsebnik blister embalaža, embalaža iz folije, steklena ali plastična steklenička in spremljajoči pokrov ali zapiralo ali drug tak izdelek, primeren za uporabo za pacienta ali farmacevta. Prednostno je vsebnik take velikosti, daje v njem 1-1000 trdnih dozirnih oblik, prednostno 1 do 500 trdnih dozirnih oblik in najbolj prednostno 5 do 30 trdnih dozirnih oblik.

Strokovnjaki vedo, da oralne dozirne oblike vključujejo npr. take oblike, kot so tekoči pripravki, tablete, kapsule in želatinske kapsule. Prednostno so dozirne oblike trdne dozirne oblike, posebno tablete, ki obsegajo okoli 1 do okoli 20 mg selektivnega PDE5 inhibitorja. Katerikoli farmacevtsko sprejemljivi nosilci za oralno uporabo so primerni za pripravo takih dozirnih oblik. Primerne farmacevtske dozirne oblike so koprecipitatne oblike, opisane, npr. v Butler, US patent 5,985,326, kije vključen tukaj kot referenca. Pri prednostnih izvedbah je enotska dozirna oblika v smislu predloženega izuma trdna snov brez koprecipitatne oblike PDE5 inhibitorja, pač pa vsebuje trden PDE5 inhibitor kot prosto zdravilo.

Prednostno tablete obsegajo farmacevtske nosilce, ki so na splošno znani kot vami, kot so laktoza, mikrokristalna celuloza, škrob, kalcijev karbonat, magnezijev stearat, stearinska kislina, smukec in koloidni silicijev dioksid, in jih pripravimo s standardnimi farmacevtskimi izdelovalnimi tehnikami, kot je opisano v RemingtorTs

Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mačk Pubiishing Co., Easton, PA (1990). Take tehnike so npr. mokra granulacija, ki ji sledi sušenje, mletje in stiskanje v tablete z ali brez preslojitve s filmom; suha granulacija, ki ji sledi mletje, stiskanje v tablete z ali brez preslojitve s filmom; suho mešanje, ki mu sledi stiskanje v tablete z ali brez preslojitve s filmom; ulite tablete; mokra granulacija, sušenje in polnjenje v želatinske kapsule; suha zmes, polnjena v želatinske kapsule; ali suspenzija in raztopina, polnjena v želatinske kapsule. Na splošno imajo trdne dozirne oblike identifikacijske oznake, ki so vtisnjene ali natisnjene na površini.

Predloženi izum temelji na podrobnih poskusih in kliničnih testih ter na nepričakovanih ugotovitvah, da lahko stranske učinke, za katere se je preje smatralo, da so indikativni za PDE5 inhibicijo, zmanjšamo na klinično nepomembne nivoje z izbiro selektivnega PDE5 inhibitorja s tukaj navedenimi specifičnimi karakteristikami, namreč:

1) vsaj 100-kratno razliko v IC₅o vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDE6;

3) IC50 vrednost za inhibicijo PDE5 manjšo kot 10 nM.

Ta nepričakovana ugotovitev je omogočila razvoj izdelkov priprave, ki vsebujejo selektiven PDE5 inhibitor v okoli 1 v okoli 20 mg enotskih dozirnih oblikah, ki, kadar jih dajemo oralno, minimizirajo neželene stranske učinke, za katere se je preje smatralo, da so neizogibni. Ti stranski učinki so zardevanje, nenormalnosti vida in znatno zmanjšanje krvnega tlaka, kadar PDE5 inhibitor dajamo sam ali v kombinaciji z organskim nitratom. Minimalen učinek predloženega PDE5 inhibitorja, dajanega v okoli 1 v do okoli 20 mg enotskih dozirnih oblikah, na PDE6 tudi omogoča dajanje selektivnega PDE5 inhibitorja pacientom, ki trpijo zaradi retinalne bolezni, kot diabetske retinopatije ali retinitis pigmentosa.

En tak selektivni PDE5 inhibitor, t.j. (6R-trans)-6-(l,3-benzodioksol-5-il)2,3,6,7,12,12a-heksahidro-2-metilpirazino[ 1 ',2': 1,6]pirido [3,4-b]indol-1,4-dion, alternativno poimenovan (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-heksahidro-2-metil-6-(3,4metilendioksifenil)pirazino[2',r:6,l]pirido[3,4-b]indol-l,4-dion, je opisan v Dauganovem US patentu 5,859,006 in ga predstavlja strukturna formula (I)

Za spojino s formulo (I) se je pokazalo pri humanih kliničnih študijah, da ima minimalen vpliv na sistoličen krvni tlak, kadar jo dajemo skupaj z organskimi nitrati. Nasprotno pa sildenafil, kadar ga dajejo z nitrati, kaže celo 4-krat večje zmanjšanje sistoličnega krvnega tlaka v primerjavi s placebom, kar vodi do kontraindikacij na navodilih za VIAGRO in do svaril za določene paciente.

Selektivni PDE5 inhibitorji znatno variirajo v kemični strukturi in uporaba selektivnega PDE5 inhibitorja, kot je definirano v predloženem izumu, ni odvisna od posamične kemične strukture, pač pa od tukaj navedenih kemičnih parametrov. Vendar lahko prednostne spojine z zahtevano učinkovitostjo in selektivnostjo zlahka identificiramo s testi, ki so tukaj opisani, od tistih, opisanih v Dauganovem US patentu 5,859,006, US patentu 5,981,527 Daugan et al., in US patentu 6,001,847, Daugan et al., od katerih je vsak vključen tukaj kot referenca.

Prednostne spojine Dauganovega US patenta 5,859,006 in US patenta 5,981,527

Daugan et al. predstavlja strukturna formula (II):

(II) kjer R° izberemo iz skupine, ki obstoji iz vodika, halogena in Cj.₆alkila;

R¹ izberemo iz skupine, ki obstoji iz vodika, Ci.₆alkila, C₂-6alkenila, C₂.6alkinila, halo-Ci.₆alkila, C₃.₈cikloalkila, C₃.₈cikloalkilCi_₃alkila, arilCi_₃alkila, kjer je aril fenil ali fenil, substituiran z enim do tremi substituenti, izbranimi iz skupine, ki obstoji iz halogena, Ci.₆alkila, Ci.₆alkoksi, metilendioksi in njihovih zmesi, in heteroarilCi_₃alkila, kjer je heteroaril tienil, furil ali piridil, od katerih je vsak po želji substituiran z enim do tremi substituenti, izbranimi iz skupine, ki obstoji iz halogena, Ci.₆alkila, Ci.₆alkoksi in njihovih zmesi;

R² predstavlja po želji substituiran monocikličen aromatski obroč, izbran izmed benzena, tiofena, furana in piridina, ali po želji substituiran bicikličen obroč

vezan na ostanek molekule preko enega od benzenovih obročnih atomov ogljika, in kjer je kondenziran obroč A 5- ali 6-členski obroč, nasičen ali delno ali popolnoma nasičen, in obsega atome ogljika in po želji enega ali dva heteroatoma, izbrana iz skupine, ki obstoji iz kisika, žvepla in dušika;

R³ predstavlja vodik ali Ci_₃alkil ali R¹ in R³ predstavljata skupaj 3- ali 4-člensko alkilno ali alkenilno verigo; in njihove soli in solvati.

Druge prednostne spojine so tiste s formulo (II), kjer je:

R° vodik, halogen ali Ci^alkil;

R¹ vodik ali C^alkil;

'S

Rje bicikličen obroč

kije lahko po želji substituiran z eno ali več skupinami, izbranimi izmed halogena in Cf_3alkila; in je

R³ vodik ali Ci-₃alkil.

Naslednja tabela 1 prikazuje PDE5 in PDE6 IC₅o vrednosti za reprezentativne selektivne PDE5 inhibitorje, opisane v US patentu 5,859,006, kot je določeno po tukaj opisanih postopkih.

Tabela 1
Spojina	PDE5 IC₅₀ (nM)	PDE6IC₅₀ (nM)	PDE6/PDE5
1	5	663	133
2	2	937	469
3	2	420	210
4	5	729	146
5	2,5	3400	1360

Spojina 5 v tabeli 1 ima strukturno formulo (I) in dodatno kaže IC50 proti PDElc 10000 in razmerje PDElc/PDE5 4000.

Strukture spojin št. 1-5 v tabeli 1 so kot v strukturni formuli (II), kjer so R°, R¹, R² in R³, kot sledi:

Spojina	R^a	R¹	R^J	R¹
1	H	— CHg—NH-SO₂.CF₃	X		H
2	H	CH3	X		H
3.	H	—CH^—(PjT		i( \ CH, JL t	H
4	H	H		JL /^CHz	CH,
5	H	®3		[ /^h2 ^0	H
...

Podatki v tabeli 1 kažejo, da je posebno prednostna spojina s strukturno formulo (I), kjer je R¹ vodik ali Ci^alkil, R² je in R³ vodik. Prednostno je A

Prednostne spojine so:

(6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-heksahidro-2-metil-6-(3,4metilendioksifenil)pirazino[2',1' ;6,l]pirido[3,4-b]indol-1,4-dion; in (3 S,6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-heksahidro-2,3 -dimetil-6-(3,4metilendioksifenil)pirazino[2', Γ:6,1 ] -pirido[3,4-b] indol-1,4-dion;

ter njihove fiziološko sprejemljive soli in solvati (npr. hidrati).

Druge tipične spojine, uporabne pri predloženem izumu, so tiste, opisane v Daugan et al. US patentu 6,001,847 in WO 97/43287, kar je vključeno tukaj kot referenca.

Nadaljnje tipične spojine za uporabo pri predloženem izumu so tiste, opisane v PCT prijavi PCT/EP98/06050, designirani za US, z naslovom Chemical Compounds, avtorjev A. Bombruna in F. Gelliberta, katerih opis je specifično vključen tukaj kot referenca. Ta razred spojin ima strukturno formulo (III):

(III) ter soli in solvati (npr. hidrati), kjer

C predstavlja 5- ali 6-člensko heteroarilno skupino, ki vsebuje vsaj en heteroatom, izbran iz skupine, ki obstoji iz kisika, dušika in žvepla;

R¹² predstavlja vodik ali halogen;

R¹³ izberemo iz skupine, ki obstoji iz vodika, nitro (NO₂), trifluorometila, trifluorometoksi, halogena, ciano (CN),

5- ali 6-členske heterociklične skupine, ki vsebuje vsaj en heteroatom, izbran izmed skupine, ki obstoji iz kisika, dušika in žvepla, kije po želji substituiran s C(=O)OR^a ali Ci.₄alkilom,

Ci₆alkil, po želji substituiran z OR^h,

Ci.₃alkoksi,

C(=O)R^h,

OC(=O)OR^h,

C(=O)OR^h,

Ci^alkilenHet,

Ci.₄alkilenC(=O)OR^h,OCi.₄alkilenC(-O)OR^h,

Ci.₄alkilenOCi.₄alkilenC(=O)OR^h,

C(=O)NRⁱSO₂Rⁱ,

C(=O)C i_₄alkilenHet,

C,.₄alkilenNR^hRⁱ,

C₂.6alkenilenNR^hR‘,

C(=O)NR^hRⁱ,

C(=O)NR^hR‘,

C(=O)NR^hC₁.₄alkilenORⁱ,

C(=O)NR^hCi.₄alkilenHet,

OR¹,

OC₂.₄alkilenNR^hR¹,

OCi.₄alkilenCH (OR^h) CH^R¹,

OCi.₄alkilenHet,

OC₂.₄alkilenOR^h,

OC₂.₄alkilenNR^hC (=O)OR^h,

NR^hR\

NR^hCi.₄alkilenNR^hR',

NR^hC(=O)R‘,

NR^hC(=O)NR^hR¹,

N(SO₂C_Malkil)₂,

NR^h(SO₂C_Malkil),

SO₂NR^hR', in OSO₂trifluorometil;

R¹⁴ izberemo iz skupine, ki obstoji iz vodika, halogena, OR^h, Ci.₆alkila, NO₂ in NR^hR‘;

ali R¹³ in R¹⁴ skupaj tvorita 3- ali 4-člensko alkilensko ali alkenilensko verižno komponento 5- ali 6-členskega obroča, ki po želji vsebuje vsaj en heteroatom;

R¹⁵ izberemo iz skupine, ki obstoji iz vodika, halogena, NO₂, trifluorometoksi, C^alkila, OC^alkila, in C(=O) OR^h;

R¹⁶je vodik, ali R¹⁵ in R¹⁶ skupaj tvorita 3- ali 4-člensko alkilensko ali alkenilensko verižno komponento 5- ali 6-členskega obroča, ki po želji vsebuje vsaj en heteroatom;

Het predstavlja 5- ali 6-člensko heterociklično skupino, ki vsebuje vsaj en heteroatom, izbran iz skupine, ki obstoji iz kisika, dušika in žvepla in je po želji substituiran s Ci.₄-alkilom;

R^h in R' sta lahko enaka ali različna in ju neodvisno izberemo izmed vodika in Ci^alkila;

R^J predstavlja fenil ali C₄.₆cikloalkil, kjer je lahko fenil ali C₄.₆cikloalkil po želji substituiran z enim ali več atomi halogenov, enim ali več C(=O)OR^h, ali enim ali več OR^h;

nje celo število 1, 2, ali 3; in je m celo število 1 ali 2.

Pripravki

Humani PDE5 pripravek

Rekombinantno proizvodnjo humane PDE5 smo izvedli v bistvu tako, kot je opisano v primeru 7 US 5,702,936, ki je vključen tukaj kot referenca, razen da je uporabljeni kvasni transformacijski vektor, izveden iz bazičnega ADH2 plazmida, opisanega v V.

Priče et al., Methods in Encymology, 1985, str. 308-318 (1990), vseboval kvasni

ADH2 promotor in terminatorske sekvence, ne pa ADH1 promotor in terminatorske sekvence, in Saccharomyces cerevisiase gostitelj je bil proteazno deficientni soj BJ254, deponiran 31. avgusta 1998 pri American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, pod pristopno številko ATCC 74465. Transformirane celice gostiteljice smo gojili v 2X SC-Ieu mediju, pH 6,2, z elementi v sledovih in vitamini. Po 24 urah smo dodali ΥΕΡ medij, ki je vseboval glicerol, do končne koncentracije 2X ΥΕΡ/3 % glicerola. Približno 24 ur kasneje smo celice poželi, izprali in shranjevali pri -70 °C.

Celične pelete (29 g) smo odtajali na ledu z enakim volumnom liznega pufra (25 mM Tris-Cl, pH 8, 5 mM MgCl₂, 0,25 mM ditiotreitol, 1 mM benzamidin in 10 pm ZnSO^. Celice smo lizirali v mikrofluidizerju z N₂ pri 1400 bar. Lizat smo centrifugirali in filtrirali skozi 0,45 pm fdtre za enkratno uporabo. Filtrat smo nanesli na 150 ml kolono Q Sepharose Fast Flow (Pharmacia). Kolono smo izprali z 1,5 volumni pufra A (20 mM bis-tris propan (pH 6,8), 1 mM MgCl₂, 0,25 mM ditiotreitol, 10 pM ZnSO4) in eluirali s stopenjskim gradientom 125 mM NaCl v pufru A, nato pa z linearnim gradientom 125-1000 mM NaCl v pufru A.

Aktivne frakcije iz linearnega gradienta smo nanesli na 180 ml hidroksiapatitno kolono v pufru B (20 mM bis-tris propan, (pH 6,8), 1 mM MgCl₂, 0,25 mM ditiotreitol, 10 pM ZnSO₄ in 250 mM KC1). Po naložitvi smo kolono izprali z 2 volumnoma pufra B in eluirali z linearnim gradientom 0-125 mM kalijevega fosfata v pufru B. Aktivne frakcije smo zbrali, oborili s 60 % amonijevim sulfatom in resuspendirali v pufru C (20 mM bis-tris propan, pH 6,8, 125 mM NaCl, 0,5 mM ditiotreitol in 10 pM ZnSO₄). Pool smo nanesli na 140 ml kolono Sephacryl S-300 HR in eluirali s pufrom C. Aktivne frakcije smo razredčili na 50 % glicerola in shranili pri -20 °C. Dobljeni pripravki so bili okoli 85 % čisti s SDS-PAGE.

Test za PDE aktivnost

Aktivnost PDE5 lahko merimo s standardnimi testi, znanimi iz stroke. Npr. specifično aktivnost katerekoli PDE lahko določimo, kot sledi. PDE teste ob uporabi ogljene separacijske tehnike smo izvedli v bistvu, kot je opisano v Loughney et al., (1996), The Journal of Biological Chemistry, 271:796-806. V tem testu PDE5 aktivnost pretvori [³²P]cGMP v [³²P]5'GMP v deležu glede na količino prisotne PDE5 aktivnosti. [ P]5'GMP nato kvantitativno pretvorimo v prost [ Ρ] fosfat in nemarkiran adenozin z učinkom 5'-nukleotidaze kačjega strupa. Zato je količina sproščenega [³²P] fosfata proporcionalna encimski aktivnosti. Test izvedemo pri 30 °C v 100 μΐ reakcijski zmesi, ki vsebuje (končne koncentracije) 40 mM tris-Cl (pH 8,0), 1 μΜ ZnSO₄, 5 mM MgCl₂ in 0,1 mg/ml govejega serumskega albumina. PDE5 je prisotna v količinah, ki dajejo <30 % celotno hidrolizo substrata (linearni testni pogoji). Test sprožimo z dodatkom substrata (1 mM [ PjcGMP) in zmes inkubiramo 12 minut. Nato dodamo 75 pg Crotalus atrox strupa in z inkubacijo nadaljujemo še 3 minute (skupaj 15 minut). Reakcijo ustavimo z dodatkom 200 ml aktivnega oglja (25 mg/ml suspenzije v 0,1 M NaH₂PO₄, pH 4). Po centrifugiranju (750 x g 3 minute) za usedanje oglja vzamemo vzorec supernatanta za radioaktivnostno določitev v scintilacijskem števcu in izračunamo PDE5 aktivnost. Pripravki so imeli specifične aktivnosti okoli 3 pmole cGMP, hidroliziranega na minuto na mg proteina.

Goveji PDE6 pripravek

Goveji PDE6 je dobavil dr. N. Virmaux, INSERM U338, Strasbourg. Goveje retine smo pripravili, kot je opisano v Virmaux et al., FEBS Letters, 12(6), str. 325-328 (1971), glej tudi A. Sitaramayya et al., Exp. Eye Res., 25, str. 163-169 (1977). Na kratko, če ni drugače navedeno, smo vse operacije izvedli v hladnem in v motno rdeči svetlobi. Oči smo držali na hladnem in v temi do 4 ure po zakolu.

Preparacija govejega retinalnega zunanjega segmenta (ROS) je v osnovi sledila proceduram, opisanim v Schichi et al., J. Biol. Chem., 224:529 (1969). V tipičnem poskusu smo 35 govejih retin zdrobili v možnarju s 35 ml 0,066 M fosfatnega pufra, pH 7,0, dopolnili do 40 % s saharozo, nato pa homogenizirali v Potteijevem homogenizatorju (20 udarcev gor in dol). Suspenzijo smo centrifugirali 20 minut pri

25000 χ g. Pelet smo homogenizirali v 7,5 ml 0,006 M fosfatnega pufra (40% v saharozi) in previdno položili pod 7,5 ml fosfatnega pufra (ki ne vsebuje saharoze). Centrifugiranje smo izvajali v zasukljivem rotorju pri 45000 x g 20 minut in proizvedli pelet, ki je črn na dnu, in tudi rdeč trak pri fazni meji 0,066 M fosfat-40% saharoza/0,066 M fosfat (surovi ROS). Rdeč material pri fazni meji smo odstranili, razredčili s fosfatnim pufrom, zvrtinčili v pelet in ponovno porazdelili v zapufrani 40% saharozi, kot je opisano zgoraj. Ta postopek smo ponovili 2- ali 3-krat, dokler se ni tvoril noben pelet. Očiščen ROS smo izprali v fosfatnem pufru in končno zvrtinčili v pelet pri 25000 x g v času 20 minut. Vse materiale smo nato vzdrževali zmrznjene do uporabe.

Hipotonične ekstrakte smo pripravili s suspendiranjem izoliranega ROS v 10 mM trisC1 pH 7,5, 1 mM EDTA in 1 mM ditioeritritolu, nato pa centrifugirali pri 100000 x g 30 minut.

Za pripravek so poročali, da ima specifično aktivnost okoli 35 nmolov cGMP, hidrolizirano na minuto na mg proteina.

PDElc pripravek iz Spodoptera fugiperda celic (Sf9)

Celične pelete (5 mg) smo tajali na ledu z 20 ml liznega pufra (50 mM MOPS pH 7,4, 10 μΜ ZnSO4, 0,1 mM CaCl₂, 1 mM DTT, 2 mM benzamidin HCI, po 5 pg/ml pepstatina, levpeptina in aprotenina). Celice smo lizirali s pasažo skozi francosko tlačno celico (SLM-Aminco) ob vzdrževanju temperatur pod 10 °C. Dobljeni celični homogenat smo centrifugirali 45 minut pri 36000 obr/min pri 4 °C v Beckmanovi ultracentrifugi ob uporabi rotorja tipa TI45. Supernatant smo zavrgli in dobljeni pelet resuspendirali s 40 ml solubilizacijskega pufra (lizni pufer, ki vsebuje IM NaCI, 0,lM MgCl₂, 1 mM CaCl₂, 20 μg/ml kalmodulina in 1% sulfobetaina SB12 (Z3-12) s sonifikacijo ob uporabi VibraCell tuneija z mikrokonico v času 3x30 sekund. To smo izvedli v zdrobljenem ledu/zmesi soli za hlajenje. Po sonifikaciji smo zmes počasi mešali 30 minut pri 4 °C, da smo dokončali solubiliziranje membransko vezanih proteinov. To zmes smo centrifugirali v Beckmanovi ultracentrifugi ob uporabi rotorja tipa TI45 pri 36000 obr/min 45 minut. Supematant smo razredčili z liznim pufrom, ki je vseboval 10 pg/ml kalpainskega inhibitorja I in II. Oborjeni protein smo centrifugirali 20 minut pri 9000 obr/min v Beckmanovem JA-10 rotorju. Rekuperirani supematant smo nato podvrgli kromatografiji na Mimetic Blue AP Agarose.

Za obratovanje kolone Mimetic Blue AP Agarose smo smolo v začetku zaščitili z aplikacijo 10 volumnov blazine 1 % polivinilpirolidona (t.j. m.m. 40000), da smo blokirali nespecifična vezavna mesta. Rahlo vezan PVP-40 smo odstranili z izpiranjem z 10 volumni blazine 2M NaCI in 10 mM natrijevega citrata, pH 3,4. Tik pred dodatkom solubiliziranega PDElc vzorca smo kolono ekvilibrirali s 5 volumni blazine kolonskega pufra A (50 mM MOPS pH 7,4, 10 μΜ ZnSO₄, 5 mM MgCl₂, 0,1 mM CaCl₂, 1 mM DTT, 2 mM benzamidin HCI).

Solubiliziran vzorec smo nanesli na kolono s pretočno hitrostjo 2 ml/min z recikliranjem, tako da smo celoten vzorec nanesli 4- do 5-krat v 12 urah. Po končanem nalaganju smo kolono izprali z 10 volumni kolone kolonskega pufra A, nato pa s 5 volumni kolone kolonskega pufra B (kolonski pufer A vsebuje 20 mM 5'AMP), zatem pa s 5 volumni kolone kolonskega pufra C (50 mM MOPS pH 7,4, 10 μΜ ZnSO₄, 0,1 mM CaCl₂, 1 mM ditiotreitol in 2 mM benzamidin HCI). Encim smo eluirali v tri zaporedne poole. Prvi pool je obstajal iz encima iz izpiranja s 5 volumni blazine s kolonskim pufrom C, kije vseboval 1 mM cAMP. Drugi pool je obstajal iz encima iz izpiranja z 10 volumni blazine s kolonskim pufrom C, ki je vseboval 1 M NaCI. Končni pool encima je obstojal iz izpiranja s 5 volumni blazine s kolonskim pufrom C, kije vseboval 1 M NaCI in 20 mM cAMP.

Aktivne poole encima smo zbrali in odstranili ciklični nukleotid z običajno gelno filtracijsko kromatografijo ali kromatografijo na hidroksi-apatitnih smolah. Po odstranitvi cikličnih nukleotidov smo encimske poole dializirali proti dializnemu pufru, ki je vseboval 25 mM MOPS pH 7,4, 10 μΜ ZnSO₄, 500 mM NaCI, 1 mM

CaCl₂, 1 mM ditiotreitol, 1 mM benzamidin HCI, nato pa z dializo proti dializnemu pufru, kije vseboval 50% glicerola. Encim smo hitro zamrznili s pomočjo suhega ledu in skladiščili pri -70 °C.

Dobljeni pripravki so bili okoli >90% čisti po SDS-PAGE. Ti pripravki so imeli specifične aktivnosti okoli 0,1 do 1,0 pmol cAMP, hidrolizirano na minuto na mg proteina.

Določitve IC₅₀ vrednosti

Pomemben parameter pri ocenjevanju učinkovitosti kompetitivnega encimskega inhibitorja PDE5 in/ali PDElc in PDE6 je inhibicijska konstanta, t.j. Ki. Ta parameter lahko aproksimiramo z določitvijo IC50, ki je inhibitorska koncentracija, s katero dosežemo 50% inhibicijo encima v eksperimentu enojne doze-odziva ob naslednjih pogojih.

Koncentracija inhibitorja je vedno precej večja kot koncentracija encima, tako da koncentracijo prostega inhibitorja (ki ni znana) aproksimiramo s koncentracijo celotnega inhibitorja (kije znana).

Izberemo primemo območje inhibitorskih koncentracij (t.j. v eksperimentu so prisotne inhibitorske koncentracije vsaj večkrat večje in večkrat manjše kot Kj). Tipično so bile inhibitorske koncentracije v območjih od 10 nM do 10 μΜ.

Koncentracije encima in substrata izberemo tako, da se manj kot 20% substrata porabi v odsotnosti inhibitorja (pod pogojem, da je npr. maksimalna substratna hidroliza od 10 do 15%), tako daje encimska aktivnost približno konstantna ves test.

Koncentracija substrata je manjša kot ena desetina Michaelisove konstante (K_m). Ob teh pogojih se bo IC₅₀ tesno približala Kj. To je zaradi Cheng-Prusoff-ove enačbe, ki vsebuje ta dva parametra: IC₅o=Kj (1+S/K_m), z (1+S/K_m) približno 1 pri nizkih vrednostih S/K_m.

IC₅o vrednost ocenimo iz podatkovnih točk s prilagoditvijo podatkov primernemu modelu encimske inhibitorske interakcije. Kadar je znano, da ta interakcija vključuje preprosto kompeticijo inhibitorja s substratom, lahko uporabimo dvoparametrski model:

y=a/(i+x/b) kjer je y encimska aktivnost, merjena pri inhibitorski koncentraciji x, A je aktivnost v odsotnosti inhibitorja in B je IC50. Glej Y. Cheng et al., Biochem. Pharmacol., 22:3099-3108 (1973).

Učinke inhibitorjev v smislu predloženega izuma na encimatsko aktivnost PDE5 in PDE6 pripravkov, kot je opisano zgoraj, smo ocenili v vsakem od dveh testov, ki se razlikujeta drug od drugega načelno na osnovi skale in dajeta v bistvu iste rezultate kot IC₅o vrednosti. Oba testa sta vključevala modifikacijo procedure v Wells et al., Biochim. Biphys. Acta, 384-.43(1 (1975). Prvega od testov smo izvedli v celotnem volumnu 200 μΐ, ki je vseboval 50 mM Tris pH 7,5, 3 mM Mg acetat, 1 mM EDTA, 50 pg/ml nukleotidaze kačjega strupa in 50 nM [³H]-cGMP (Amersham). Spojine v smislu izuma smo raztopili v DMSO, končno prisotne pri 2% v testu. Teste smo inkubirali 30 minut pri 30 °C in ustavili z dodatkom 800 μΐ 10 mM tris pH 7,5, 10 mM EDTA, 10 mM teofilina, 0,1 mM adenozina in 0,1 mM gvanozina. Zmesi smo naložili na 0,5 ml QAE Sephadex kolone in eluirali z 2 ml 0,1 M formata (pH 7,4). Eluirano radioaktivnost smo merili s scintilacijskim s štetjem v Optiphase Hisafe 3.

Drugi mikroploščni PDE test smo razvili ob uporabi Multiscreen plošč in vakumskega razdelilnika. Test (100 μΐ) je vseboval 50 mM tris pH 7,5, 5 mM Mg acetat, 1 mM

EDTA in 250 pg/ml nukleotidaze kačjega strupa. Druge komponente reakcijske zmesi so bile, kot je opisano zgoraj. Na koncu inkubacije smo celotni volumen testov naložili na QAE Sephadex mikrokolonsko ploščo s filtracijo. Prosto radioaktivnost smo eluirali z 200 μΐ vode, iz katere smo 50 μΐ alikvote analizirali s scintilacijskim štetjem, kot je opisano zgoraj.

Naslednji primeri so za nadaljnjo ilustracijo priprave v smislu predloženega izuma. Obsega predloženega izuma se ne sme smatrati, kot da obstoji le iz naslednjih primerov.

Primer 1

Spojino s strukturno formulo (I) pripravimo, kot je opisano v US patentu 5,859,006, in formuliramo v tablete ob uporabi mokre granulacije. Povidon raztopimo v vodi, da dobimo 10 % raztopino. Aktivno spojino, mikrokristalno celulozo, kroskarmeloza natrij in natrijev lavril sulfat dodamo v visokostrižni mešalnik in mešamo 2 minuti. Praške mokro granuliramo s povidonsko raztopino in dodatno vodo, kot je potrebna za dokončanje granulacije. Dobljeno zmes sušimo v sušilniku s fluidizirano blazino z vstopnim zrakom pri 70 °C±5 °C, dokler izguba pri sušenju ni bila pod 2,5 %. Granule prehajajo skozi Comil s primemo mrežo (ali sito) in jih damo v primeren mešalnik. Ekstragranulami kroskarmeloza natrij in natrijev lavril sulfat ter koloiden brezvoden silicijev dioksid prehajajo skozi primemo sito (npr. 500 pm), jih dodamo v mešalnik in mešamo 5 minut. Dodamo magnezijev stearat in mešamo 2 minuti. Zmes stisnemo do ciljne kompresije/mase 250 mg ob uporabi 9 mm okroglega normalnega konkavnega orodja.

Jedra tablet preslojimo z vodno suspenzijo Opadry OY-S-7322 ob uporabi Accelacota (ali podobne preslojilne ponve) ob uporabi vstopnega zraka pri 50 °C do 70 °C, dokler se masa tablete ne poveča za približno 8 mg. Opadry OY-S-7322 vsebuje metilhidroksipropilcelulozo Ph.Eur., titanov dioksid Ph. Eur., triacetin USP. Opadry poveča maso vsake tablete na okoli 258 mg. Količina preslojitve s filmom, aplicirana na tableto, je lahko manjša kot ta navedena v odvisnosti od učinkovitosti postopka.

Tablete polnimo v blister omote, spremljajo pa jih navodila za uporabo, ki opisujejo varnost in učinkovitost spojine.

Komponenta	Pripravki (mg na tableto)
Selektivni PDE5 inhibitor¹	1	5
Hidroksipropilmetil- celulozni ftalat	1	5
Mikrokristalna celuloza	221,87	213,87
Kroskarmeloza natrij	5,00	5,00
Natrijev lavril sulfat	2,50	2,50
Sulfat povidon K30	9,38	9,38
Očiščena voda, USP (voda za irigacijo)	q.s.	q.s.
Kroskarmeloza natrij	5,00	5,00
Natrijev lavril sulfat	2,50	2,50
Koloiden brezvoden silicijev dioksid	0,50	0,50
Magnezijev stearat	1,25	1,25
Celotna delna vsota jedra	250,00	250,00
(preslojitev s filmom Opadry OY-S-7322)	okoli 8 mg	okoli 8 mg

Spojina s strukturno formulo (I)

Primer 2

Naslednji predpis uporabimo pri pripravi izgotovljene dozirne oblike, ki vsebuje 10 mg spojine s strukturno formulo (I)

Sestavina	Količina (mg)
Granulacija
Selektivni PDE5 inhibitor¹	10,00
Laktoza monohidrat	153,80
Laktoza monohidrat (razpršilno sušen)	25,00
Hidroksipropilceluloza	4,00
Kroskarmeloza natrij	9,00
Hidroksipropilceluloza (EF)	1,75
Natrijev lavril sulfat	0,70
	35,00
Zunanji praški
Mikrokristalna celuloza (granulirana 102)	37,50
Kroskarmeloza natrij	7,00
Magnezijev stearat (rastlinski)	1,25
	Skupaj 250 mg
Preslojitev s filmom (približno) 11,25

Očiščeno vodo USP uporabimo pri izdelavi tablet. Vodo odstranimo med predelavo in v izgotovljenem produktu ostanejo minimalni nivoji.

Tablete izdelamo ob uporabi mokrega granulacijskega postopka. Stopenjski opis postopka je, kot sledi. Drogo in nosilce, ki jih je treba granulirati, varnostno presejemo. Selektiven PDE5 inhibitor suho mešamo z laktozo monohidratom (razpršilno sušenim), hidroksipropilcelulozo, kroskarmelozo natrijem in laktoza monohidratom. Dobljeno praškasto zmes granuliramo z vodno raztopino hidroksipropilceluloze in natrijevega lavril sulfata ob uporabi Powrex ali drugega primernega visoko strižnega granulatorja. Za dosego želene končne točke lahko dodamo dodatno vodo. Lahko uporabimo mlin za razbitje grudic mokre granulacije in za olajšanje sušenja. Mokro granulacijo sušimo bodisi ob uporabi sušilnika s fluidizirano blazino ali sušilne peči. Ko je material posušen, ga lahko razporedimo po velikosti, da eliminiramo kakršnekoli velike aglomerate. Mikrokristalno celulozo, kroskarmeloza natrij in magnezijev stearat varnostno sejemo in dodamo k suhim sortiranim granulam. Te ekscipiente in suho granulacijo mešamo do enakomernega stanja ob uporabi prevračalne posode, mešalnika s trakovi ali druge primerne mešalne opreme. Mešalni postopek lahko ločimo v dve fazi. Mikrokristalno celulozo, kroskarmeloza natrij in sušeno granulacijo dodamo v mešalnik in mešamo med prvo fazo, temu pa sledi dodatek magnezijevega stearata k tej granulaciji in druga mešalna faza.

Mešano granulacijo nato stisnemo v tablete ob uporabi rotacijskega stiskalnega stroja. Tabletna jedra preslojimo s filmom z vodno suspenzijo primerne barvne zmesi v preslojevalni ponvi (npr. Accela Cota). Preslojene tablete lahko rahlo naprašimo s smukcem, da izboljšamo karakteristike tablete za rokovanje.

Tablete polnimo v plastične posode (30 tablet/posodo), spremljajo pa jih navodila za uporabo, ki opisujejo varnost in učinkovitost spojine.

Primer 3

Naslednji predpis uporabimo pri pripravi izgotovljene dozirne oblike s 5 mg spojine s strukturno formulo (I):

Sestavina	Količina (mg)
Granulacija
Selektivni PDE5 inhibitor⁰	2,50
Laktoza monohidrat	79,395

Laktoza monohidrat (razpršilno posušen)	12,50
Hidroksipropilceluloza	2,00
Kroskarmeloza natrij	4,50
Hidroksipropilceluloza (EF)	0,875
Natrijev lavril sulfat	0,35

Zunanji praški
Mikrokristalna celuloza (granulirana 102)	18,75
Kroskarmeloza natrij	3,50
Magnezijev stearat (rastlinski)	0,63
	Skupaj 125 mg
preslojitev s filmom (približno) 6,875

Dozirno obliko iz primera 3 pripravimo na enak način kot dozirno obliko primera 2.

Primer 4

Raztopinska kapsula
Sestavina	mg/kapsulo	odstotek (%)
Selektivni PDE5 inhibitor¹	10	2
PEG400NF	490	98
Masa polnitve	500	100

Želatinske kapsule natančno polnimo s črpanjem točnega polnilnega volumna predhodno raztopljenega pripravka droge v delno zaprto votlino kapsule. Takoj po injekcijskem polnjenju pripravka raztopine droge kapsulo popolnoma toplotno zapremo.

Kapsule polnimo v plastične vsebnike, kijih spremljajo navodila za uporabo.

Primer 5

Ta študija je bila naključna, dvojno slepa, s placebom kontrolirana, dvosmerna križna modelna klinična farmakološka zdravilna interakcijska študija, ki je ocenila hemodinamične učinke hkratnega dajanja droge študije selektivnega PDE5 inhibitorja (t.j. spojine s strukturno formulo (I)) in nitratov s kratkotrajnim učinkom na zdrave prostovoljce moškega spola. V tej študiji so osebki prejeli bodisi drogo študije pri dozi 10 mg ali placebo dnevno 7 dni. Šestega ali sedmega dne so osebki prejeli sublingvalno nitroglicerin (0,4 mg), pri čemer so ležali vznak na nagibni mizi. Nitroglicerin smo dali 3 ure po doziranju droge študije in vsi osebki so obdržali tableto nitroglicerina pod svojim jezikom, dokler se ni popolnoma raztopila. Osebke smo nagnili do 70° z glavo navzgor vsakih 5 minut skupaj 30 minut z merjenjem krvnega tlaka in srčnega utripa. Ni bilo prekinitev med 22 zdravimi moškimi osebki (starosti 19 do 60 let), ki so sodelovali v tej študiji.

Pri preliminarni analizi te študije je bila droga študije dobro tolerirana in ni bilo resnih škodljivih dogodkov. Ni bilo sprememb v zvezi z drogo študije pri laboratorijskih varnostnih ocenitvah ali 12-lead FCG. Najbolj običajni škodljivi dogodki so bili glavobol, dispepsija in bolečina v hrbtu. Študija je pokazala minimalne učinke na povprečen sistoličen krvni tlak na povprečno maksimalno, z nitroglicerinom inducirano zmanjšanje v sistoličnem krvnem tlaku in maksimalno, z nitroglicerinom inducirano zmanjšanje v sistoličnem krvnem tlaku med vsemi pacienti.

Primer 6

V dveh naključnih, dvojno slepih, s placebom kontroliranih študijah smo dali pacientom, ki so potrebovali zdravilo, spojino s strukturno formulo (I) v območju doz tako za dnevno doziranje in za terapijo na zahtevo za seksualne stike in občevanje v domačem okolju. Doze od 5 do 20 mg spojine s strukturno formulo (I) so bile učinkovite in niso pokazale zardevanja kot tudi ni bilo poročil o nenormalnostih vida.

Ugotovili smo, da je bila 10 mg doza spojine s strukturno formulo (I) popolnoma učinkovita in je imela minimalne stranske učinke (nič zardevanja in nič poročanja o modrem vidu).

Erekcij sko funkcijo smo ocenili z mednarodnim indeksom erekcij ske funkcije (IIEF) (Rosen et al., Urology, 49, str. 822-830 (1997)) z dnevniki seksualnih poskusov in z vprašanjem globalnega zadovoljstva. Spojina s strukturno formulo (I) je znatno izboljšala erekcijsko funkcijo, ocenjeno z vseh ključnih točk. Tako pri režimu na zahtevo in režimu dnevne doze je spojina s strukturno formulo (I) znatno izboljšala erekcijsko funkcijo v dozah med 1 in 20 mg.

Primer 7

Tretja klinična študija je bila naključna, dvojno slepa, s placebom kontrolirana študija ob uporabi spojine s strukturno formulo (I) (droga študije), dajana na zahtevo pacientom z moško erekcijsko disfunkcijo. Drogo študije smo dajali 8 tednov pri zdravljenju moške erekcijske disfunkcije (ED). Erekcijska disfunkcija (ED) je definirana kot trajna nesposobnost, da bi dosegli in/ali vzdrževali erekcijo, ki je primerna, da se doseže zadovoljivo spolno obnašanje. Doziranje na zahtevo je definirano kot občasno dajanje droge študije pred pričakovano spolno aktivnostjo.

Študijska populacija je obstajala iz 212 moških starosti vsaj 18 let z rahlo do resno erekcijsko disfunkcijo. Drogo študije smo dajali oralno kot tablete koprecipitata, izdelane v skladu z Butlerjevim US patentom 5,985,326. Drogo študije smo dajali v dozah 2 mg, 5 mg, 10 mg in 25 mg, na zahtevo in ne več kot enkrat vsakih 24 ur. Pri kateremkoli času med študijo ni bilo dovoljeno tretiranje z vsemi nitrati, azolnimi protiglivičnimi sredstvi (npr. ketokonazolom ali itrakonazolom), warfarinom, eritromicinom ali antiandrogeni. Niso bile dovoljene druge odobrene ali eksperimentalne medikacije, tretiranja ali naprave, uporabljene za tretiranje ED. 41 osebkom smo dali placebo.

Obe primarni učinkovitostni spremenljivki sta bili sposobnost osebka, da penetrira svojo partnerico, in njegova sposobnost, da vzdržuje erekcijo med občevanjem, kot se meri z mednarodnim indeksom erekcijske funkcije (IIEF). IIEF vprašalnik vsebuje 15 vprašanj in je kratka, zanesljiva meritev erekcijske funkcije. Glej R.C. Rosen et al., Urology, 49, str. 822-830 (1997).

Sekundarne učinkovitostne spremenljivke so bile IIEF rezultati za erekcij sko funkcijo, orgazmično funkcijo, spolno željo, zadovoljstvo pri občevanju in splošno zadovoljstvo; pacientova sposobnost za dosego erekcije, sposobnost za vstavljanje njegovega penisa v vagino svoje partnerice, dokončanje občevanja z ejakulacijo, zadovoljstvo s trdoto svoje erekcije in splošno zadovoljstvo, kot se vse meri z dnevnikom profila spolnih stikov (SEP); in globalno ocenitveno vprašanje, ki se postavi na koncu obdobja zdravljenja. SEP je pacientov dnevniški instrument, ki dokumentira vsak spolni stik med potekom študije.

Varnostna analiza študije je vključevala vse registrirane osebke in je bila ocenjena z ovrednotenjem vseh navedenih škodljivih dogodkov ter spremembami kliničnih laboratorijskih vrednosti, vitalnimi znaki, rezultati fizične preiskave in rezultati elektrokardiograma.

Na koncu so bili pacienti, ki so ocenili svojo penetracijsko sposobnost (IIEF vprašanje 3) kot skoraj vedno ali vedno, kot sledi: 17,5 % v placebo skupini, 38,1 % v 2 mg skupini, 48,8 % v 5 mg skupini, 51,2 % v 10 mg skupini in 83,7 % v 25 mg skupini. Primerjave so odkrile statistično bistvene razlike v spremembi v penetracijski sposobnosti med placebom in vsemi nivoji doz droge študije.

Na koncu so bili pacienti, ki so ocenili svojo sposobnost za vzdrževanje erekcije (IIEF vprašanje 4) med občevanjem kot skoraj vedno ali vedno, kot sledi: 10,0 % v placebo skupini, 19,5 % v 2 mg skupini, 32,6 % v 5 mg skupini, 39,0 % v 10 mg skupini in 69,0 % v 25 mg skupini. Primerjava je odkrila statistično bistvene razlike v spremembi v penetracij ski sposobnosti med placebom in vsemi tremi višjimi nivoji doz droge študije.

V celoti je ta študija pokazala, da so vse 4 doze droge študije, namreč 2 mg, 5 mg, 10 mg in 25 mg, vzete na zahtevo, proizvedle znatno izboljšavo glede na placebo pri spolnem obnašanju moških z erekcijsko disfunkcijo, kot je bila ocenjena z IIEF, z dnevniki pacientov, ki so ocenili pogostnost uspešnega občevanja in zadovoljstva pri občevanju in z globalno ocenitvijo. Ta izboljšava se je pokazala v široki študijski populaciji, ki je vključevala paciente, ki so kazali vse resnosti erekcijske disfunkcije. Najbolj škodljivi dogodki so bili mili ali zmerni v resnosti. Signifikantno noben pacient ni poročal o škodljivih dogodkih v zvezi z motnjami barvnega vida.

Kombinirani rezultati iz kliničnih študij so pokazali, da dajanje spojine s strukturno formulo (I) učinkovito zdravi moško erekcijsko disfunkcijo.

IIEF erekcijska funkcijska domena
	(sprememba od osnovne linije)
enotska doza	n	povprečje ± SD	P
placebo	131	0,8 ± 5,3
2 mg	75	3,9 ±6,1	<0,001
5 mg	79	6,6 ±7,1	< 0,001
10 mg	135	7,9 ± 6,7	<,0001
25 mg	132	9,4 ± 7,0	<0,001
50 mg	52	9,8 ± 5,5	<0,001
100 mg	49	8,4 ±6,1	<0,001

nje število osebkov, SD je standardna deviacija

Vendar pa smo iz kombiniranih kliničnih študij opazili, da se je povečal odstotek škodljivih dogodkov, ki so izhajali iz zdravljenja, z naraščajočo enotsko dozo spojine s strukturno formulo (I), kot je prikazano v naslednji tabeli.

Škodljivi dogodki, ki so izvirali iz zdravljenja (%)
Enotska doza (mg)
Dogodek	Placebo	2	5	10	25	50	100
glavobol	10	12	10	23	29	34	46
dispepsija	6	3	14	13	19	20	25
bolečine v hrbtu	5	3	3	15	18	24	22
mialgija	3	0	3	9	16	20	29
rinitis	3	7	3	4	4	0	2
konjunktivitis	1	0	1	1	0	2	5
edemi očesne veke	0	0	0	1	1	2	3
zardevanje	0	0	0	<1	0	3	7
nenormalnosti vida	0	0	0	0	0	0	0

Gornja tabela kaže povečanje škodljivih dogodkov pri enotskih dozah 25 mg do 100 mg. Torej čeprav smo opazili učinkovitost pri zdravljenju ED pri dozah 25 mg do 100 mg, je treba upoštevati škodljive dogodke, ki smo jih opazili pri dozah od 25 mg do 100 mg.

V skladu s predloženim izumom enotska doza okoli 1 do okoli 20 mg, prednostno okoli 2 do okoli 20 mg, bolj prednostno okoli 5 do okoli 20 mg in najbolj prednostno okoli 5 do okoli 15 mg, ki jo dajemo do največ 20 mg v obdobju 24 ur, tako učinkovito zdravi ED kot tudi minimizira ali eliminira pojav škodljivih stranskih učinkov. Pomembno je, da niso poročali o nenormalnostih vida in zardevanja v bistvu ni bilo. Presenetljivo poleg zdravljenja ED pri posameznikih z okoli 1 do okoli 20 mg enotsko dozo spojine s strukturno formulo (I) z minimalnimi škodljivimi stranskimi učinki lahko tudi zdravimo posameznike, ki imajo nitratno terapijo, za ED po metodi in s sestavkom v smislu predloženega izuma.

V predhodnem opisu so bila opisana načela, prednostne izvedbe in načini delovanja predloženega izuma. Izum, ki naj bi ga zaščitili, pa se ne sme smatrati, daje omejen na posamezne opisane oblike, ker jih je treba smatrati kot ilustrativne, ne pa kot restriktivne. Strokovnjaki lahko izvedejo variacije in spremembe, ne da bi se oddaljili od duha izuma.

Za

Lilly ICOS LLC:

PATENTNA PISARNA, <1.0.0.

LJUBLJANA, ČOPOVA 14

27554-vi-00-mn

Claims

Patentni zahtevki

1. Izdelek priprave za humano farmacevtsko uporabo, označen s tem, da obsega:

a) oralno dozirno obliko, ki obsega okoli 1 do okoli 20 mg selektivnega PDE5 inhibitorja, ki ima (i) vsaj 100-kratno razliko v IC₅₀ vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDE6, (ii) vsaj 1000-kratno razliko v IC₅₀ vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDElc, (iii) IC₅o manj kot 10 nM in (iv) zadostno biorazpoložljivost, da je učinkovit pri okoli 1 do okoli 20 mg enotskih oralnih doziranjih;

(b) navodila za uporabo, kjer je navedeno, da je PDE5 inhibitor uporaben za zdravljenje seksualne disfunkcije pri pacientu, ki zdravljenje potrebuje,, in daje brez kakršnihkoli kontraindikacij glede dajanja PDE5 inhibitorja pacientu, ki trpi zaradi retinalne bolezni; in

c) vsebnik.
2. Izdelek po zahtevku 1, označen s tem, daje retinalna bolezen diabetska retinopatija.
3. Izdelek po zahtevkih 1 in 2, označen s tem, da oralna dozirna oblika obsega okoli 5 mg, okoli 10 mg ali okoli 20 mg selektivnega PDE5 inhibitorja.
4. Izdelek po zahtevkih 1, 2 in 3, označen s tem, da je v navodilih za uporabo navedeno maksimalno doziranje selektivnega PDE5 inhibitorja okoli 20 mg v 24umem obdobju.
5. Izdelek po zahtevkih 1, 2, 3 in 4, označen s tem, da ima selektivni PDE5 inhibitor strukturo
6. Uporaba izdelka priprave po kateremkoli od zahtevkov 1 do 5 za pripravo zdravila za zdravljenje seksualne disfunkcije
7. Izdelek po zahtevku 1, označen s tem, daje retinalna bolezen retinitis pigmentosa.
8. Izdelek priprave za humano farmacevtsko uporabo, označen s tem, da obsega:

a) oralno dozirno obliko, ki obsega okoli 1 do okoli 20 mg selektivnega PDE5 inhibitorja, ki ima (i) vsaj 100-kratno razliko v IC₅₀ vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDE6, (ii) vsaj 1000-kratno razliko v IC₅₀ vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDElc, (iii) IC50 manj kot 10 nM in (iv) zadostno biorazpoložljivost, da je učinkovit pri okoli 1 do okoli 20 mg enotskih oralnih doziranjih;

(b) navodila za uporabo, v katerih je navedeno, da je PDE5 inhibitor uporaben za zdravljenje seksualne disfunkcije pri pacientu, ki zdravljenje potrebuje, in da je odstotek pacientov, ki poročajo o zardevanju po zdravljenju s PDE5 inhibitorjem, pri nivoju pod 10 odstotkov; in

c) vsebnik.
9. Izdelek priprave za humano farmacevtsko uporabo, označen s tem, da obsega:

a) oralno dozirno obliko, ki obsega okoli 1 do okoli 20 mg selektivnega PDE5 inhibitorja, ki ima (i) vsaj 100-kratno razliko v IC₅₀ vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDE6, (ii) vsaj 1000-kratno razliko v IC₅₀ vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDElc, (iii) IC₅o manj kot 10 nM in (iv) zadostno biorazpoložljivost, da je učinkovit pri okoli 1 do okoli 20 mg enotskih oralnih doziranjih;

(b) navodila za uporabo, v katerih je navedeno, da je PDE5 inhibitor uporaben za zdravljenje seksualne disfunkcije pri pacientu, ki zdravljenje potrebuje, in da je odstotek pacientov, ki poročajo o zardevanju po zdravljenju s PDE5 inhibitorjem, manjši kot odstotek pacientov, ki poročajo o zardevanju na etiketi sildenafila; in c) vsebnik.
10. Izdelek priprave za humano farmacevtsko uporabo, označen s tem, da obsega:

a) oralno dozirno obliko, ki obsega okoli 1 do okoli 20 mg selektivnega PDE5 inhibitorja, ki ima (i) vsaj 100-kratno razliko v IC₅₀ vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDE6, (ii) vsaj 1000-kratno razliko v IC₅₀ vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDElc, (iii) IC₅₀ manj kot 10 nM in (iv) zadostno biorazpoložljivost, da je učinkovit pri okoli 1 do okoli 20 mg enotskih oralnih doziranjih;

(b) navodila za uporabo, v katerih je navedeno, da je PDE5 inhibitor uporaben za zdravljenje seksualne disfunkcije pri pacientu, ki zdravljenje potrebuje, in da je odstotek pacientov, ki poročajo o nenormalnem vidu po zdravljenju s PDE5 inhibitorjem, pri nivoju, ki je manjši kot odstotek pacientov, ki poročajo o nenormalnem vidu na etiketi sildenafila; in

c) vsebnik.
11. Izdelek po zahtevku 10, označen s tem, da je na navodilih za uporabo navedeno, da je odstotek pacientov, ki poročajo o nenormalnem vidu po zdravljenju s PDE5 inhibitorjem, okoli nič.
12. Uporaba selektivnega PDE5 inhibitorja za pripravo zdravila z navodili za uporabo, kjer je navedeno, daje PDE5 inhibitor uporaben za zdravljenje seksualne disfunkcije pri pacientu, ki zdravljenje potrebuje, in da je brez kakršnihkoli kontraindikacij glede dajanja PDE5 inhibitorja pacientu, ki trpi zaradi retinalne bolezni.
13. Uporaba selektivnega PDE5 inhibitorja za pripravo zdravila z navodili za uporabo, kjer je navedeno, daje PDE5 inhibitor uporaben za zdravljenje seksualne disfunkcije pri pacientu, ki zdravljenje potrebuje, in da je odstotek pacientov, ki poročajo o zardevanju po zdravljenju s PDE5 inhibitorjem, pri nivoju pod 10 odstotkov.
14. Uporaba selektivnega PDE5 inhibitorja za pripravo zdravila z navodili za uporabo, kjer je navedeno, daje PDE5 inhibitor uporaben za zdravljenje seksualne disfunkcije pri pacientu, ki zdravljenje potrebuje, in da je odstotek pacientov, ki poročajo o zardevanju po zdravljenju s PDE5 inhibitorjem, manjši kot odstotek pacientov, ki poročajo o zardevanju na etiketi sildenafila.
15. Uporaba selektivnega PDE5 inhibitorja za pripravo zdravila z navodili za uporabo, kjer je navedeno, daje PDE5 inhibitor uporaben za zdravljenje seksualne disfunkcije pri pacientu, ki zdravljenje potrebuje, in da je odstotek pacientov, ki poročajo o nenormalnem vidu po zdravljenju s PDE5 inhibitorjem, pri nivoju, ki je manjši kot odstotek pacientov, ki poročajo o nenormalnem vidu na etiketi sildenafila.
16. Uporaba selektivnega PDE5 inhibitorja za pripravo zdravila z navodili za uporabo, kjer je navedeno, daje PDE5 inhibitor uporaben za zdravljenje seksualne disfunkcije pri pacientu, ki zdravljenje potrebuje, in daje brez kakršnihkoli kontraindikacij glede dajanja PDE5 inhibitorja pacientu, ki trpi zaradi zaradi stanja, izbranega iz skupine, ki obstoji iz kongestivne odpovedi srca razreda 1, srčnega infarkta 90 dni ali več pred nastopom zdravljenja seksualne disfunkcije in njihovih kombinacij.
17. Izdelek priprave za humano farmacevtsko uporabo, označen s tem, da obsega:

a) oralno dozirno obliko, ki obsega okoli 1 do okoli 20 mg selektivnega PDE5 inhibitorja, ki ima (i) vsaj 100-kratno razliko v IC50 vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDE6, (ii) vsaj 1000-kratno razliko v IC₅₀ vrednostih za inhibicijo PDE5 proti PDElc, (iii) IC₅₀ manj kot 10 nM in (iv) zadostno biorazpoložljivost, daje učinkovit pri okoli 1 do okoli 20 mg enotskih oralnih doziranjih;

(b) navodila za uporabo, v katerih je navedeno, da je PDE5 inhibitor uporaben za zdravljenje seksualne disfunkcije pri pacientu, ki zdravljenje potrebuje, in da je brez kakršnekoli kontraindikacije glede dajanja PDE5 inhibitorja pacientu, ki trpi zaradi stanja, izbranega iz skupine, ki obstoji iz kongestivne odpovedi srca razreda 1, srčnega infarkta 90 dni ali več pred nastopom zdravljenja seksualne disfunkcije in njihovih kombinacij; in (c) vsebnik.