DE60005940T3

DE60005940T3 - Zusammensetzung zur behandlung sexueller funktionsstoerungen die phosphodiesterase-5 inhibitoren enthaltend

Info

Publication number: DE60005940T3
Application number: DE60005940.5T
Authority: DE
Inventors: William Pullman; John Whitaker
Original assignee: Icos Corp
Current assignee: Icos Corp
Priority date: 1999-04-30
Filing date: 2000-04-26
Publication date: 2015-08-27
Anticipated expiration: 2020-04-27
Also published as: PL339897A1; SE0001518D0; PT102457A; HRP20000243A2; SK285415B6; EA200101008A1; HK1041204B; EP1173181A2; WO2000066099A3; EA200000355A2; NL1015027C2; NO322013B3; FR2795646A1; ES2208317T3; EP1415652A2; NZ514882A; LU90569B1; DZ3171A1; GR20000100153A; ITMI20000922A1

Description

Diese Erfindung beansprucht den Vorteil der Provisional Patent Application Serial No. 60/132,036, eingereicht am 30. April 1999.
GEBIET DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft einen hochselektiven Phosphodiesterase-Enzyminhibitor (PDE-Enzyminhibitor) und seine Verwendung in einer pharmazeutischen Einheitsdosisform. Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung einen potenten Inhibitor von cyclischer Guanosin-3',5'-monophosphat-spezifischer Phosphodiesterase Typ 5 (PDE5), der, wenn er eingearbeitet wird in ein pharmazeutisches Produkt, nützlich ist für die Behandlung sexueller Dysfunktion. Die Einheitsdosisform, die hierin beschrieben ist, ist gekennzeichnet durch selektive PDE5-Inhibition und liefert demgemäß einen Vorteil in therapeutischen Bereichen, wo die Inhibition von PDE5 gewünscht ist, mit einer Minimierung oder Eliminierung nachteiliger Nebenwirkungen, die aus der Inhibition anderer Phosphodiesterase-Enzyme resultieren.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Die biochemischen, physiologischen und klinischen Wirkungen von Inhibitoren von cyclischer Guanosin-3',5'-monophosphat-spezifischer Phosphodiesterase (cGMP-spezifischer PDE) legen ihre Nützlichkeit bei einer Vielzahl von Krankheitszuständen nahe, bei denen die Modulation der Glattmuskel-, Nieren-, Hämostase-, entzündlichen und/oder endokrinen Funktion gewünscht ist. cGMP-spezifische Phosphodiesterase Typ 5 (PDE5) ist das wichtigste cGMP-hydrolysierende Enzym im Gefäßglattmuskel und seine Expression im Penisschwellkörper ist beschrieben worden (Taher et al., J. Urol., 149, S. 285A (1993)). Somit ist PDE5 ein attraktives Target bei der Behandlung sexueller Dysfunktion (Murray, DN&P 6(3), S. 150–156 (1993)).
Ein pharmazeutisches Produkt, das einen PDE5-Inhibitor bereitstellt, ist gegenwärtig verfügbar und wird vermarktet unter der Marke VIAGRA^®. Der Wirkstoff in VIAGRA^® ist Sildenafil. Das Produkt wird als ein Handelsartikel vertrieben, der Sildenafil-Tabletten mit 25, 50 und 100 mg und eine Packungsbeilage einschließt. Die Packungsbeilage gibt an, dass Sildenafil ein potenterer Inhibitor von PDE5 als von anderen bekannten Phosphodiesterasen ist (mehr als das 80-fache für PDE1-Inhibition, mehr als das 1000-fache für PDE2-, PDE3- und PDE4-Inhibition). Die IC₅₀ für Sildenafil gegen PDE5 ist als 3 nM (Drugs of the Future, 22(2), S. 138–143 (1997)) und als 3,9 nM (Boolel et al., Int. J. of Impotence, 8, S. 47–52 (1996)) berichtet worden. Von Sildenafil wird beschrieben, dass es eine 4000-mal höhere Selektivität für PDE5 gegenüber PDE3 und nur eine 10-mal höhere Selektivität für PDE5 gegenüber PDE6 besitzt. Es wird die Theorie vertreten, dass sein relativer Mangel an Selektivität für PDE6 die Basis für Abnormitäten in Zusammenhang mit dem Farbsehvermögen ist.
Obgleich Sildenafil einen signifikanten wirtschaftlichen Erfolg gehabt hat, ist es wegen seiner signifikanten nachteiligen Nebenwirkungen, einschließlich Gesichtsröte (10% Auftretensrate), hinter den Erwartungen zurückgeblieben. Nachteilige Nebenwirkungen beschränken die Verwendung von Sildenafil bei Patienten, die an Sehabnormitäten oder Bluthochdruck leiden und am signifikantesten bei Patienten, die organische Nitrate verwenden (Welds et al., Amer. J. of Cardiology, 83(5A), S. 21(C)–28(C) (1999)).
Die Verwendung von Sildenafil bei Patienten, die organische Nitrate nehmen, bewirkt einen klinisch signifikanten Abfall des Blutdrucks, der Patienten in Gefahr bringen könnte. Demgemäß gibt der Verpackungsaufdruck für Sildenafil strenge Kontraindikationen gegen seine Verwendung in Kombination mit organischen Nitraten (z. B. Nitroglycerin, Isosorbidmononitrat, Isosorbidnitrat, Erythrityltetranitrat) und anderen Stickoxid-Donoren in jeglicher Form, entweder regelmäßig oder intermittierend, an, weil Sildenafil die blutdrucksenkenden Wirkungen von Nitraten potenziert. Siehe C. R. Conti et al., Amer. J. of Cardiology, 83(5A), S. 29C–34C (1999). Verschiedene Fragen um die Verwendung des Arzneistoffes Sildenafil herum sind auch diskutiert in Israel, M.: „Viagra: The First Oral Treatment for Impotence”, Pharmaceutical Journal, Pharmaceutical Society, London, GB, Vol. 261, S. 164–165 (1998). So bleibt, selbst mit der Verfügbarkeit von Sildenafil, ein Bedürfnis bestehen, verbesserte pharmazeutische Produkte zu identifizieren, die zur Behandlung sexueller Dysfunktion nützlich sind.
Daugan, U.S.-Patent 5,859,006 , offenbart bestimmte tetracyclische Derivate, die potente Inhibitoren von cGMP-spezifischem PDE oder PDE5 sind. Die IC₅₀ der Verbindungen, die in U.S.-Patent Nr. 5,859,006 offenbart sind, wird im Bereich von 1 nM bis 10 μM berichtet. Die orale Dosis für solche Verbindungen beträgt 0,58 mg täglich für einen durchschnittlichen erwachsenen Patienten (70 kg). So wird berichtet, dass Einheitsdosisformen (Tabletten oder Kapseln) 0,2 bis 400 mg aktive Verbindung enthalten. Signifikante Nachteile wie Nebenwirkungen, die Verbindungen zugeschrieben werden, die in U.S.-Patent Nr. 5,859,006 offenbart sind, sind nicht offenbart. WO 97/03675 offenbart die Verwendung tetracyclischer Derivate von U.S.-Patent Nr. 5,859,006 bei der Behandlung von Impotenz.
Die Anmelder haben entdeckt, dass ein solches tetracyclisches Derivat, (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-Hexahydro-2-methyl-6-(3,4-methylendioxyphenyl)-pyrazino[2',1':6,1]pyrido[3,4-b]indol-1,4-dion, alternativ bezeichnet als (6R-trans)-6-(1,3-Benzodioxol-5-yl)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methylpyrazino[1',2':1,6]pyrido[3,4-b]indol-1,4-dion, und hierin als Verbindung (I) bezeichnet, in einer Einheitsdosis verabreicht werden kann, die eine wirksame Behandlung bereitstellt, ohne die mit dem gegenwärtig vermarkteten PDE5-Inhibitor, Sildenafil, assoziierten Nebenwirkungen. Vor der vorliegenden Erfindung wurden solche Nebenwirkungen als inhärent mit der Inhibition von PDE5 angesehen.
Signifikanterweise haben die klinischen Studien der Anmelder auch gezeigt, dass ein wirksames Produkt mit einer verringerten Neigung, ein Erröten bei Anfälligen hervorzurufen, bereitgestellt werden kann. Am unerwartetsten war, dass das Produkt auch mit klinisch nichtsignifikanten Nebenwirkungen verabreicht werden kann, die mit den kombinierten Wirkungen eines PDE5-Inhibitors und eines organischen Nitrats assoziiert sind. So ist die Kontraindikation, von der man einmal geglaubt hat, dass sie für ein Produkt, das einen PDE5-Inhibitor enthält, erforderlich ist, nicht notwendig, wenn Verbindung (I) als Einheitsdosis wie etwa 1 bis etwa 20 mg, wie hierin offenbart, verabreicht wird. So offenbart die vorliegende Erfindung eine wirksame Therapie für sexuelle Dysfunktion bei Personen, die zuvor nicht-behandelbar waren oder an unannehmbaren Nebenwirkungen litten, einschließlich Personen mit kardiovaskulären Erkrankungen, wie etwa bei Personen, die eine Nitrat-Therapie benötigen, die an einem Myocardinfarkt mehr als drei Monate vor dem Beginn der Therapie auf sexuelle Dysfunktion litten und an kongestivem Herzversagen der Klasse 1 leiden, oder Personen, die an Sehabnormitäten leiden.
Die vorliegende Erfindung betrifft Verbindung (I) in einer Einheitsdosisform. Das heißt, die vorliegende Erfindung betrifft eine pharmazeutische, zur oralen Verabreichung geeignete Einheitsdosisform, die etwa 1 bis etwa 20 mg Verbindung (I) umfasst.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung offenbart eine pharmazeutische Dosisform zum menschlichen pharmazeutischen Gebrauch, die etwa 1 bis etwa 20 mg (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-Hexahydro-2-methyl-6-(3,4-methylendioxyphenyl)-pyrazino[2',1':6,1]pyrido[3,4-b]indol-1,4-dion in einer zur oralen Verabreichung geeigneten Einheitsdosisform umfasst,
Die vorliegende Erfindung offenbart weiter ein Verfahren zur Behandlung von Zuständen, bei denen die Inhibition von PDE5 erwünscht ist, welches die Verabreichung einer oralen Dosisform, die etwa 1 bis etwa 5 mg eines selektiven PDE5-Inhibitors, nach Erfordernis bis zu einer Gesamtdosis von 5 mg pro Tag, an einen Patienten, der derselben bedarf, umfasst. Die Erfindung offenbart weiter die Verwendung einer oralen Dosisform, die einen selektiven PDE5-Inhibitor umfasst, in einer Dosierung von etwa 1 bis etwa 5 mg zur Behandlung sexueller Dysfunktion.
Spezifische Bedingungen, die mit der vorliegenden Erfindung behandelt werden können, schließen männliche Erektionsstörung und weibliche sexuelle Dysfunktion, insbesondere Störung der sexuellen Erregung bei der Frau, auch bekannt als Störung der sexuellen Erregung bei der Frau, ein, sind aber nicht hierauf beschränkt.
Insbesondere stellt die vorliegende Erfindung eine pharmazeutische Einheitsdosiszusammensetzung zur Verfügung, die 1 bis 5 mg einer Verbindung mit der Strukturformel:
umfasst, wobei die besagte Einheitsdosisform geeignet ist zur oralen Verabreichung bis zu einer maximalen Gesamtdosis von 5 mg pro Tag.
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird auch die Verwendung einer Dosiseinheit, die 1 bis 5 mg einer Verbindung mit der obigen Struktur enthält, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Verabreichung bis zu einer maximalen Gesamtdosis von 5 mg besagter Verbindung pro Tag in einem Verfahren zur Behandlung sexueller Dysfunktion bei einem Patienten, der dieser bedarf, zur Verfügung gestellt.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG
Für die Zwecke der vorliegenden Erfindung, wie hierin offenbart und beschrieben, sind die folgenden Begriffe und Abkürzungen wie folgt definiert.
Der Begriff „Behälter” bedeutet jedes Gefäß und jeden Verschluss dafür, das bzw. der geeignet ist zu Aufbewahrung, Transport, Abgabe und/oder Handhabung eines pharmazeutischen Produktes.
Der Begriff „IC₅₀” ist das Maß für die Potenz einer Verbindung, um ein bestimmtes PDE-Enzym zu inhibieren (z. B. PDE1c, PDE5 oder PDE6). Die IC₅₀ ist die Konzentration einer Verbindung, die zu 50% Enzyminhibition in einem Einzeldosis-Reaktions-Experiment führt. Die Bestimmung des IC₅₀-Wertes für eine Verbindung wird mit einer bekannten In-vitro-Methodik leicht durchgeführt, die allgemein beschrieben ist in Y. Cheng et al., Biochem. Pharmacol., 22, S. 3099–3108 (1973).
Der Begriff „Packungsbeilage” bedeutet eine das Produkt begleitende Information, die eine Beschreibung bereitstellt, wie das Produkt verabreicht werden soll, zusammen mit den Sicherheits- und Wirksamkeitsdaten, die erforderlich sind, um dem Arzt, Apotheker und Patienten zu ermöglichen, eine informierte Entscheidung im Hinblick auf die Verwendung des Produktes zu treffen. Die Packungsbeilage wird im Allgemeinen als das „Label” für ein pharmazeutisches Produkt angesehen.
Der Begriff „orale Dosisform” wird in einem allgemeinen Sinn verwendet, um pharmazeutische Produkte zu bezeichnen, die oral verabreicht werden. Es ist für den Fachmann erkennbar, dass orale Dosisformen solche Formen einschließen wie flüssige Formulierungen, Tabletten, Kapseln und Gelatinekapseln.
Der Begriff „Sehabnormität” bedeutet abnormes Sehvermögen, gekennzeichnet durch Blau-Grün-Sicht, bei der man glaubt, dass sie durch PDE6-Inhibition verursacht wird.
Der Begriff „Erröten” bedeutet eine episodische Röte des Gesichtes und des Nackens, die einer Gefäßerweiterung zugeschrieben wird, die durch Aufnahme eines Arzneistoffes hervorgerufen wird, üblicherweise begleitet von einem Wärmegefühl über das Gesicht und den Nacken und manchmal begleitet von Perspiration.
Der Begriff „freier Arzneistoff” bedeutet feste Teilchen aus Arzneistoff, die nicht innig in einem polymeren Kopräzipitat eingebettet sind.
Die vorliegend beanspruchte Dosisform wird vorzugsweise als ein Handelsartikel für menschlichen und pharmazeutischen Gebrauch verpackt, umfassend eine Packungsbeilage, einen Behälter und eine Dosisform, die von etwa 1 bis etwa 5 mg Verbindung (I) umfasst.
Die Packungsbeilage liefert eine Beschreibung, wie ein pharmazeutisches Produkt verabreicht werden soll, zusammen mit den Sicherheits- und Wirksamkeitsdaten, die erforderlich sind, um dem Arzt, Apotheker und Patienten zu ermöglichen, eine informierte Entscheidung im Hinblick auf die Verwendung des Produktes zu treffen. Die Packungsbeilage wird im Allgemeinen als das Label des pharmazeutischen Produkts angesehen. Die Packungsbeilage, die in den Handelsartikel einbezogen wird, gibt an, dass Verbindung (I) bei der Behandlung von Zuständen nützlich ist, bei denen die Inhibition von PDE5 gewünscht ist. Die Packungsbeilage liefert auch Anweisungen, eine oder mehrere Einheitsdosisformen mit etwa 1 bis etwa 5 mg, nach Erfordernis, bis zu einer maximalen Gesamtdosis von 5 mg pro Tag zu verabreichen.
Bevorzugte Zustände, die behandelt werden können, schließen sexuelle Dysfunktion (einschließlich männlicher Erektionsstörung; und weiblicher sexueller Dysfunktion und bevorzugter Störung der sexuellen Erregung bei der Frau (FAD)) ein. Der bevorzugte Zustand, der behandelt werden kann, ist männliche Erektionsstörung.
Signifikanterweise unterstützt die Packungsbeilage die Verwendung des Produktes, um sexuelle Dysfunktionen bei Patienten zu behandeln, die an einer Retina-Erkrankung leiden, z. B. diabetischer Retinopathie oder Retinitis pigmentosa, oder bei Patienten, die organische Nitrate verwenden. So ist die Packungsbeilage vorzugsweise frei von Kontraindikationen, die mit diesen Zuständen assoziiert sind, und insbesondere der Verabreichung der Dosisform mit einem organischen Nitrat. Bevorzugter ist die Packungsbeilage auch frei von irgendwelchen Warnhinweisen oder Warnungen, die sowohl assoziiert sind mit einer Retina-Erkrankung, insbesondere Retinitis pigmentosa, als auch assoziiert sind mit Personen, die zu Sehabnormitäten neigen. Vorzugsweise berichtet die Packungsbeilage auch über das Auftreten von Erröten unter 2%, vorzugsweise unter 1% und am bevorzugtesten unter 0,5%, der Patienten, denen die Dosisform verabreicht wird. Die Auftretensrate von Erröten zeigt merkbare Verbesserung gegenüber bisherigen pharmazeutischen Produkten, die einen PDE5-Inhibitor enthalten.
Der beim Handelsgegenstand verwendete Behälter ist herkömmlich in der pharmazeutischen Technik. Im Allgemeinen ist der Behälter eine Blister-Packung, Folienpackung, Glas- oder Kunststoff-Flasche und eine damit verbundene Kappe oder ein damit verbundener Verschluss oder ein anderer solcher Gegenstand, der zur Verwendung durch den Patienten oder Apotheker geeignet ist. Vorzugsweise ist der Behälter so bemessen, dass er 1 bis 1000 feste Dosisformen, vorzugsweise 1 bis 500 feste Dosisformen und am bevorzugtesten 5 bis 30 feste Dosisformen aufnimmt.
Es ist für den Fachmann erkennbar, dass orale Dosisformen zum Beispiel solche Formen einschließen wie flüssige Formulierungen, Tabletten, Kapseln und Gelatinekapseln. Vorzugsweise sind die Dosisformen feste Dosisformen, insbesondere Tabletten, die etwa 1 bis etwa 5 mg Verbindung (I) umfassen. Alle pharmazeutisch annehmbaren Hilfsstoffe für orale Verwendung sind zur Herstellung solcher Dosisformen geeignet. Geeignete pharmazeutische Dosisformen schließen Kopräzipitatformen ein, die zum Beispiel bei Butler, U.S.-Patent Nr. 5,985,326 beschrieben sind, das hierin durch Bezugnahme mit einbezogen ist. In bevorzugten Ausführungsformen ist die Einheitsdosisform der vorliegenden Erfindung ein Feststoff, der frei von einer Kopräzipitatform von Verbindung (I) ist, aber stattdessen die feste Verbindung (I) als einen freien Arzneistoff enthält.
Vorzugsweise umfassen die Tabletten pharmazeutische Hilfsstoffe, die allgemein als sicher anerkannt sind, wie etwa Lactose, mikrokristalline Cellulose, Stärke, Calciumcarbonat, Magnesiumstearat, Stearinsäure, Talkum und kolloidales Siliciumdioxid, und werden hergestellt mit standardmäßigen pharmazeutischen Herstellungstechniken, wie beschrieben in Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. Auflage, Mack Publishing Co., Easton, PA (1990). Solche Techniken schließen zum Beispiel Nassgranulation, gefolgt von Trocknung, Vermahlung und Verpressung zu Tabletten mit oder ohne Filmbeschichtung; Trockengranulation, gefolgt von Vermahlung, Verpressung zu Tabletten mit oder ohne Filmbeschichtung; Trockenmischung, gefolgt von Verpressung zu Tabletten mit oder ohne Filmbeschichtung; ausgeformte Tabletten; Nassgranulation, getrocknet und abgefüllt in Gelatinekapseln; Trockengemisch, abgefüllt in Gelatinekapseln; oder Suspension und Lösung, abgefüllt in Gelatinekapseln, ein. Im Allgemeinen haben die festen Dosisformen Identifizierungsmarkierungen, die auf der Oberfläche eingeprägt oder aufgedruckt sind.
Die vorliegende Erfindung beruht auf detaillierten Experimenten und klinischen Versuchen und die unerwarteten Beobachtungen, dass Nebenwirkungen, von denen man früher geglaubt hat, dass sie ein Anzeichen von PDE5-Inhibition sind, durch die Auswahl einer Verbindung und Einheitsdosis auf klinisch nicht-signifikante Niveaus verringert werden können. Diese unerwartete Beobachtung ermöglichte die Entwicklung einer Einheitsdosisform, die Verbindung (I) in etwa 1 bis etwa 5 mg pro Einheitsdosisform enthält, was, wenn sie oral verabreicht wird, unerwünschte Nebenwirkungen minimiert, von denen man bisher geglaubt hat, dass sie unvermeidbar seien. Diese Nebenwirkungen schließen Gesichtsrötung, Sehabnormitäten und eine signifikante Abnahme des Blutdruckes ein, wenn Verbindung (I) allein oder in Kombination mit einem organischen Nitrat verabreicht wird. Die minimale Wirkung von Verbindung (I), verabreicht in Einheitsdosisformen mit etwa 1 bis etwa 5 mg, auf PDE6 ermöglicht auch die Verabreichung eines selektiven PDE5-Inhibitors an Patienten, die an einer Retina-Erkrankung leiden, wie diabetischer Retinopathie oder Retinitis pigmentosa. Verbindung (I) hat die folgende Strukturformel:
In klinischen Studien an Menschen wurde gezeigt, dass die Verbindung mit Strukturformel (I) eine minimale Auswirkung auf den systolischen Blutdruck ausübt, wenn sie zusammen mit organischen Nitraten verabreicht wird. Im Gegensatz dazu zeigt Sildenafil eine viermal größere Abnahme des systolischen Blutdruckes gegenüber einem Placebo, was zu den Kontraindikationen im VIAGRA^®-Beipackzettel und zu Warnungen an bestimmte Patienten führt.
Das Folgende veranschaulicht die PDE5- und PDE6-IC₅₀-Werte für die Verbindung mit Strukturformel (I), bestimmt mit den hierin beschriebenen Verfahren.

Verbindung PDE5 IC₅₀ (nM) PDE6 IC₅₀ (nM) PDE6/PDE5

I 2,5 3400 1360
Die Verbindung mit Strukturformel (I) zeigt zusätzlich eine IC₅₀ gegen PDE1c von 10.000 und ein Verhältnis PDE1c/PDE5 von 4000.
ZUBEREITUNGEN
Human-PDE5-Zubereitung
Die rekombinante Herstellung von Human-PDE5 wurde im Wesentlichen durchgeführt, wie beschrieben in Beispiel 7 von U.S.-Patent Nr. 5,702,936 , das hierin durch Bezugnahme mit einbezogen ist, mit der Ausnahme, dass der eingesetzte Hefetransformationsvektor, der abgeleitet ist vom basischen ADH2-Plasmid, beschrieben in V. Price et al., Methods in Enzymology, 1985, S. 308–318 (1990), Hefe-ADH2-Promotor- und -Terminator-Sequenzen umfasste statt ADH1-Promotor- und -Terminator-Sequenzen und dass der Saccharomyce-scerivisiae-Wirt der Protease-defizitäre Stamm BJ2-54 war, hinterlegt am 31. August 1998 bei der American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, unter Zugangsnummer ATCC 74465. Transformierte Wirtszellen wurden in 2 × SC-leu-Medium, pH 6,2, mit Spurenmetallen und Vitaminen, gezüchtet. Nach 24 Stunden wurde YEP-Medium, das Glycerol enthielt, bis zu einer Endkonzentration von 2 × YEP/3% Glycerol zugegeben. Ungefähr 24 Stunden später wurden die Zellen geerntet, gewaschen und bei –70°C aufbewahrt.
Zellpellets (29 g) wurden auf Eis mit einem gleichen Volumen von Lyse-Puffer (25 mM Tris-Cl, pH 8, 5 mM MgCl₂, 0,25 mM Dithiothreitol, 1 mM Benzamidin und 10 μM ZnSO₄) aufgetaut. Die Zellen wurden in einem Mikrofluidizer mit N₂ bei 137.895,14 kPa (20.000 psi) lysiert. Das Lysat wurde zentrifugiert und durch Einwegfilter mit 0,45 μm filtriert. Das Filtrat wurde auf eine 150 ml große Säule aus Q Sepharose Fast Flow (Pharmacia) aufgebracht. Die Säule wurde mit 1,5 Volumenteilen Puffer A (20 mM Bis-Tris-Propan, pH 6,8, 1 mM MgCl₂, 0,25 mM Dithiothreitol, 10 μM ZnSO₄) gewaschen und mit einem Stufengradienten von 125 mM NaCl in Puffer A, gefolgt von einem linearen Gradienten von 125–1000 mM NaCl in Puffer A eluiert.
Aktive Fraktionen aus dem linearen Gradienten wurden auf eine 180 ml große keramische Hydroxyapatit-Säule in Puffer B (20 mM Bis-Tris-Propan (pH 6,8), 1 mM MgCl₂, 0,25 mM Dithiothreitol, 10 μM ZnSO₄ und 250 mM KCl) aufgebracht. Nach Beladen wurde die Säule mit zwei Volumenteilen Puffer B gewaschen und mit einem linearen Gradienten von 0 bis 125 mM Kaliumphosphat in Puffer B eluiert. Aktive Fraktionen wurden gepoolt, ausgefällt mit 60% Ammoniumsulfat und resuspendiert in Puffer C (20 mM Bis-Tris-Propan, pH 6,8, 125 mM NaCl, 0,5 mM Dithiothreitol und 10 μM ZnSO₄). Der Pool wurde auf eine 140 ml große Säule aus Sephacryl S-300 HR aufgebracht und mit Puffer C eluiert. Aktive Fraktionen wurden auf 50% Glycerol verdünnt und bei –20°C aufbewahrt. Die resultierenden Zubereitungen waren etwa 85% rein nach SDS-PAGE.
Test auf PDE-Aktivität
Die Aktivität von PDE5 kann mit Standardtests aus dem Stand der Technik gemessen werden. Die spezifische Aktivität von irgendeinem PDE kann zum Beispiel wie folgt bestimmt werden. PDE-Tests, die eine Kohletrenntechnik einsetzen, wurden im Wesentlichen durchgeführt, wie es in Loughney et al. (1996), The Journal of Biological Chemistry, 271: 796–806, beschrieben wird. In diesem Test wandelt die PDE5-Aktivität [³²P]cGMP im Verhältnis zur Menge der vorhandenen PDE5-Aktivität zu [³²P]5'GMP um. Die [³²P]5'GMP wird dann quantitativ durch die Wirkung von Schlangengift-5'-Nucleotidase in freies [³²P]-Phosphat und nicht-markiertes Adenosin umgewandelt. Daher ist die Menge an freigesetztem [³²P]-Phosphat proportional zur Enzymaktivität. Der Test wird durchgeführt bei 30°C in einer 100-μl-Reaktionsmischung, die (Endkonzentrationen) 40 mM Tris-Cl (pH 8,0), 1 μM ZnSO₄, 5 mM MgCl₂ und 0,1 mg/ml Rinderserumalbumin enthält. PDE5 liegt in Mengen vor, die < 30% Gesamthydrolyse des Substrats liefern (lineare Testbedingungen). Der Test wird eingeleitet durch Zugabe von Substrat (1 mM [³²P]cGMP) und die Mischung wird für 12 Minuten inkubiert. Fünfundsiebzig (75) μg Crotalus-atrox-Gift wurde dann zugegeben und die Inkubation wird für 3 weitere Minuten fortgesetzt (15 Minuten insgesamt). Die Reaktion wird durch Zugabe von 200 ml Aktivkohle gestoppt (25 mg/ml Suspension in 0,1 M NaH₂PO₄, pH 4). Nach Zentrifugation (750 × g für 3 Minuten) zum Absetzenlassen der Kohle wird eine Probe des Überstands für Radioaktivitätsbestimmung in einem Szintillationszähler abgenommen und die PDE5-Aktivität wird berechnet. Die Zubereitungen hatten spezifische Aktivitäten von etwa 3 μmol cGMP, hydrolysiert pro Minute pro Milligram Protein.
Rinder-PDE6-Zubereitung
Rinder-PDE6 wurde geliefert von Dr. N. Virmaux, INSERM U338, Straßburg. Rinder-Retinas wurden präpariert, wie beschrieben von Virmaux et al., FEBS Letters, 12(6), S. 325–328 (1971) und siehe auch A. Sitaramayya et al., Exp. Eye Res., 25, S. 163–169 (1977). Kurz gesagt wurden, sofern nicht anders angegeben, alle Operationen in der Kälte und in gedämpftem Rotlicht durchgeführt. Die Augen wunden in der Kälte und im Dunkeln für bis zu vier Stunden nach der Schlachtung gehalten.
Die Präparation von Rinder-Retinaaußensegment (ROS) folgte grundsätzlich Verfahren, die beschrieben sind von Schicht et al., J. Biol. Chem., 224:529 (1969). In einem typischen Experiment wurden 35 Rinder-Retinas in einem Mörser mit 35 ml 0,066 M Phosphatpuffer, pH 7,0, auf 40% gebracht mit Saccharose, in einem Mörser vermahlen, gefolgt von Homogenisierung in einem Potter-Homogenisator (20 Hoch- und Runterbewegungen). Die Suspension wurde bei 25.000 × g für 20 Minuten zentrifugiert. Der Pellet wurde in 7,5 ml 0,006 M Phosphatpuffer (40% in Saccharose) homogenisiert und vorsichtig unter 7,5 ml Phosphatpuffer (der keine Saccharose enthielt) geschichtet. Die Zentrifugation wurde durchgeführt in einem Swing-Out-Rotor bei 45.000 × g für 20 Minuten und erzeugte einen Pellet, der am Boden schwarz ist, und auch ein rotes Band an der Grenzfläche zwischen 0,066 M Phosphat –40% Saccharose/0,066 M Phosphat (rohes ROS). Das rote Material an der Grenzfläche wurde entfernt, mit Phosphatpuffer verdünnt, zu einem Pellet heruntergeschleudert und erneut verteilt in gepufferter 40%iger Saccharose, wie oben beschrieben. Dieses Verfahren wunde 2- oder 3-mal wiederholt, bis kein Pellet gebildet wurde. Gereinigtes ROS wurde in Phosphatpuffer gewaschen und schließlich bei 25.000 × g für 20 Minuten zu einem Pellet heruntergeschleudert. Alle Materialien wurden anschließend eingefroren, bis sie verwendet wurden.
Hypotonische Extrakte wurden hergestellt durch Suspension von isoliertem ROS in 10 mW Tris-Cl, pH 7,5, 1 mM EDTA und 1 mM Dithioerythritol, gefolgt von Zentrifugation bei 100.000 × g für 30 Minuten.
Es wurde berichtet, dass die Zubereitung eine spezifische Aktivität von etwa 35 nmol cGMP, hydrolisiert pro Minute pro Milligramm Protein, hatte.
PDE1c-Zubereitung aus Zellen von Spodontera fugiperda (Sf9)
Zellpellets (5 g) wurden auf Eis mit 20 ml Lyse-Puffer (50 mM MOPS, pH 7,4, 10 μM ZnSO₄, 0,1 mM CaCl₂, 1 mM DTT, 2 mM Benzamidin-HCl, jeweils 5 μg/ml Pepstatin, Leupeptin und Aprotenin) aufgetaut. Zellen wurden durch Durchgang durch eine French-Druckzelle (SLM-Aminco) lysiert, während die Temperaturen unter 10°C gehalten wurden. Das resultierende Zellhomogenat wurde bei 36.000 U/min bei 4°C für 45 Minuten in einer Beckman-Ultrazentrifuge unter Verwendung eines Rotors Typ TI45 zentrifugiert. Der Überstand wurde verworfen und das resultierende Pellet wurde mit 40 ml Löslichmachungs-Puffer (Lyse-Puffer, der 1 M NaCl, 0,1 M MgCl₂, 1 mM CaCl₂, 20 μg/ml Calmodulin und 1% Sulfobetain SB12 (Z3-12) enthielt) resuspendiert durch Beschallung unter Verwendung eines Vibracell-Tuners mit einer Mikrospitze für 3 × 30 Sekunden. Dies wurde durchgeführt in einer Mischung aus zerstoßenem Eis und Salz zum Abkühlen. Im Anschluss an die Beschallung wurde die Mischung langsam für 30 Minuten bei 4°C durchmischt, um die Löslichmachung von membrangebundenen Proteinen abzuschließen. Diese Mischung wurde in einer Beckman-Ultrazentrifuge unter Verwendung eines Rotors Typ TI45 bei 36.000 U/min für 45 Minuten zentrifugiert. Der Überstand wurde mit Lyse-Puffer, der 10 μg/ml Calpain-Inhibitor I und II enthielt, verdünnt. Das ausgefällte Protein wurde für 20 Minuten bei 9000 U/min in einem Beckman-JA-10-Rotor zentrifugiert. Der rückgewonnene Überstand wurde anschließend einer Mimetic-Blue-AP-Agarose-Chromatographie unterzogen.
Um die Mimetic-Blue-AP-Agarose-Säule laufen zu lassen, wurde das Harz zunächst durch das Aufbringen von 10 Bettvolumenteilen 1% Polyvinylpyrrolidon (d. h. MG von 40.000) abgeschirmt, um nicht-spezifische Bindungsstellen zu blockieren. Das lose gebundene PVP-40 wurde entfernt durch Waschen mit 10 Bettvolumenteilen von 2 M NaCl und 10 mM Natriumzitrat, pH 3,4. Unmittelbar vor Zugabe der löslich gemachten PDE1c3-Probe wurde die Säule mit 5 Bettvolumenteilen Säulen-Puffer A (50 mM MOPS, pH 7,4, 10 μM ZnSO₄, 5 mM MgCl₂, 0,1 mM CaCl₂, 1 mM DTT, 2 mM Benzamidin-HCl) äquilibriert.
Die löslich gemachte Probe wurde auf die Säule mit einer Durchflussgeschwindigkeit von 2 ml/min unter Rückführung aufgebracht, so dass die gesamte Probe 4- bis 5-mal in 12 Stunden aufgebracht wurde. Nachdem die Beladung abgeschlossen war, wurde die Säule mit 10 Säulenvolumenteilen Säulen-Puffer A, gefolgt von 5 Säulenvolumenteilen Säulen-Puffer-B (Säulen-Puffer A, der 20 mM 5'-AMP enthielt) und gefolgt von 5 Säulenvolumenteilen Säulen-Puffer C (50 mM MOPS, pH 7,4, 10 μM ZnSO₄, 0,1 mM CaCl₂, 1 mM Dithiothreitol und 2 mM Benzamidin-HCl) gewaschen. Das Enzym wurde in drei aufeinanderfolgende Pools hinein eluiert. Der erste Pool bestand aus einem Enzym aus einer Waschung mit 5 Bettvolumenteilen mit Säulen-Puffer C, der 1 mM cAMP enthielt. Der zweite Pool bestand aus einem Enzym aus einer Waschung mit 10 Bettvolumenteilen mit Säulen-Puffer C, der 1 M NaCl enthielt. Der letzte Pool mit Enzym bestand aus einer Waschung mit 5 Bettvolumenteilen mit Säulen-Puffer C, der 1 M NaCl und 20 mM cAMP enthielt.
Die aktiven Pools mit Enzym wurden gesammelt und das cyclische Nucleotid über herkömmliche Gelfiltrationschromatographie oder Chromatographie auf Hydroxyapatitharzen entfernt. Im Anschluss an die Entfernung von cyclischen Nucleotiden wurden die Enzympools gegen Dialyse-Puffer, der 25 mM MOPS, pH 7,4, 10 μM ZnSO₄, 500 mM NaCl, 1 mM CaCl₂, 1 mM Dithiothreitol, 1 mM Benzamidin-HCl enthielt, dialysiert, gefolgt von einer Dialyse gegen Dialyse-Puffer, der 50% Glycerol enthielt. Das Enzym wurde mit Hilfe von Trockeneis schnellgefroren und bei –70°C aufbewahrt,
Die resultierenden Zubereitungen waren etwa > 90% rein nach SDS-PAGE. Diese Zubereitungen hatten spezifische Aktivitäten von etwa 0,1 bis 1,0 μmol cAMP, hydrolysiert pro Minute pro Milligramm Protein.
IC₅₀-Bestimmungen
Der interessierende Parameter bei der Bewertung der Potenz eines konkurrierenden Enzyminhibitors von PDE5 und/oder PDE1c und PDE6 ist die Inhibitionskonstante, d. h. K_i. Dieser Parameter kann annähernd bestimmt werden durch Bestimmung der IC₅₀, die die Inhibitorkonzentration ist, die zu 50% Enzyminhibition in einem Einzeldosis-Reaktions-Experiment unter den folgenden Bedingungen führt.
Die Inhibitorkonzentration ist immer viel höher als die Enzymkonzentration, so dass die freie Inhibitorkonzentration (die unbekannt ist) annähernd bestimmt wird durch die Gesamtinhibitorkonzentration (die bekannt ist).
Ein geeigneter Bereich von Inhibitorkonzentrationen wird ausgewählt (d. h. Inhibitorkonzentrationen, die wenigstens mehrfach höher und mehrfach niedriger sind als die K_i, sind im Experiment vorhanden). Typischerweise schwanken Inhibitorkonzentrationen von 10 nM bis 10 μM.
Die Konzentrationen von Enzym und Substrat werden so ausgewählt, dass weniger als 20% des Substrats in Abwesenheit des Inhibitors verbraucht werden (was z. B. eine maximale Substrat-Hydrolyse von 10 bis 15% liefert), so dass die Enzymaktivität über den ganzen Test ungefähr konstant ist.
Die Substratkonzentration ist niedriger als ein Zehntel der Michaelis-Konstante (K_m). Unter diesen Bedingungen wird sich die IC₅₀ nahe an die K_i annähern. Dies beruht auf der Cheng-Prusoff-Gleichung, die diese zwei Parameter ins Verhältnis setzt: IC₅₀ = K_i(1 + S/K_m), wobei (1 + S/K_m) bei niedrigen Werten von S/K_m ungefähr 1 ist.
Der IC₅₀-Wert wird aus den Datenpunkten abgeschätzt, indem die Daten an ein geeignetes Modell der Enzyminhibitorwechselwirkung angepasst werden. Wenn von dieser Wechselwirkung bekannt ist, dass sie eine einfache Konkurrenz des Inhibitors mit dem Substrat umfasst, kann ein Zwei-Parameter-Modell verwendet werden: Y = A/(1 + x/B), wobei das y die Enzymaktivität, gemessen bei einer Inhibitorkonzentration von x, ist, A die Aktivität in Abwesenheit des Inhibitors ist und B die IC₅₀ ist. Siehe Y. Cheng et al., Biochem. Pharmacol., 22: 3099–3108 (1973).
Wirkungen von Inhibitoren der vorliegenden Erfindung auf die enzymatische Aktivität von PDE5- und PDE6-Zubereitungen, wie oben beschrieben, wurden in einem von zwei Tests bestimmt, die sich voneinander grundsätzlich auf Basis der Größenordnung unterschieden und im Wesentlichen dieselben Ergebnisse in Bezug auf IC₅₀-Werte lieferten. Beide Tests umfassten die Modifikation des Verfahrens von Wells et al., Biochim. Biophys. Acta, 384:430 (1975). Der erste Test wurde durchgeführt in einem Gesamtvolumen von 200 μl, enthaltend 50 mM Tris, pH 7,5, 3 mM Mg-Acetat, 1 mM EDTA, 50 μg/ml Schlangengift-Nucleotidase und 50 nM [³H]cGMP (Amersham). Verbindungen der Erfindung wurden in DMSO gelöst, letztendlich mit 2% im Test vorhanden. Die Tests wurden für 30 Minuten bei 30°C inkubiert und durch Zugabe von 800 μl von 10 mM Tris, pH 7,5, 10 mM EDTA, 10 mM Theophyllin, 0,1 mM Adenosin und 0,1 mM Guanosin gestoppt. Die Mischungen wurden auf 0,5 ml QAE-Sephadex-Säulen geladen und mit 2 ml 0,1 M Formiat (pH 7,4) eluiert. Die eluierte Radioaktivität wurde durch Szintillationszählung in Optiphase Hisafe 3 gemessen.
Ein zweiter Mikroplatten-PDE-Test wurde unter Verwendung von Multiscreen-Platten und einem Vakuum-Verteiler entwickelt. Der Test (100 μl) enthielt 50 mM Tris, pH 7,5, 5 mM Mg-Acetat, 1 mM EDTA und 250 μg/ml Schlangengift-Nucleotidase. Die anderen Komponenten der Reaktionsmischung waren wie oben beschrieben. Am Ende der Inkubation wurde das Gesamtvolumen der Tests auf eine QAE-Sephadex-Mikrosäulenplatte durch Filtration geladen. Die freie Radioaktivität wurde mit 200 μl Wasser eluiert, aus dem 50 μl-Aliquote durch Szintillationszählung analysiert wurden, wie oben beschrieben.
Die folgenden Beispiele werden vorgelegt, um die Herstellung der beanspruchten Erfindung weiter zu veranschaulichen. Der Schutzumfang der vorliegenden Erfindung soll nicht als nur aus den folgenden Beispielen bestehend angesehen werden.
Beispiel 1
Verbindung (I) wurde hergestellt, wie beschrieben in U.S.-Patent 5,859,006 , und unter Verwendung von Nassgranulation zu Tabletten formuliert. Povidon wurde in Wasser gelöst, um eine 10%ige Lösung herzustellen. Die aktive Verbindung, mikrokristalline Cellulose, Croscarmellose-Natrium und Natriumlaurylsulfat wurden zu einem Mischer mit hoher Scherung zugegeben und für 2 Minuten vermischt. Die Pulver wurden mit der Povidon-Lösung und Extrawasser, wie erforderlich, nassgranuliert, um die Granulation abzuschließen. Die resultierende Mischung wurde in einem Fließbetttrockner mit Einlassluft bei 70°C ± 5°C getrocknet, bis der Trocknungsverlust unter 2,5% lag. Die Körner wurden durch einen Comil mit einem geeigneten Gitter (oder einem Sieb) hindurchgegeben und zu einem geeigneten Mischer zugegeben. Das extrakörnige Croscarmellose-Natrium und Natriumlaurylsutfat und die kollodiale wasserfreie Kieselsäure wurden durch ein geeignetes Sieb (z. B. 500 Mikrometer) hindurchgegeben und zum Mischer zugegeben und für 5 Minuten eingemischt. Magnesiumstearat wurde zugegeben und für 2 Minuten eingemischt. Das Gemisch wurde bis zu einer Ziel-Verdichtung/Gewicht von 250 mg unter Verwendung eines 9 mm großen runden normalen konkaven Werkzeugs verpresst.
Die Kerntabletten wurden mit einer wässrigen Suspension von Opadry OY-S-7322 unter Verwendung einer Accelacota (oder einer ähnlichen Beschichtungspfanne) unter Verwendung von Einlassluft bei 50°C bis 70°C beschichtet, bis das Tablettengewicht auf ungefähr 8 mg erhöht war. Opadry OY-S-7322 enthält Methylhydroxypropylcellulose Ph. Eur., Titandioxid Ph. Eur., Triacetin USP. Opadry erhöht das Gewicht jeder Tablette auf etwa 258 mg. Die Menge des Filmüberzugs, die pro Tablette aufgebracht wird, kann weniger sein als angegeben, in Abhängigkeit von der Verfahrenseffizienz.

Die Tabletten werden in Blisterpackungen abgefüllt und eine Packungsbeilage wird beigefügt, die die Sicherheit und Wirksamkeit der Verbindung beschreibt.

Komponente	Formulierungen (mg pro Tablette)
Selektiver PDE5-Inhibitor¹⁾	1	5
Hydroxypropylmethylcellulosephthalat	1	5
Mikrokristalline Cellulose	221,87	213,87
Croscarmellose-Natrium	5,00	5,00
Natriumlaurylsulfat	2,50	2,50
Povidon K30	9,38	9,38
Gereinigtes Wasser, USP (Wasser für Irrigation)	q. s.	q. s.
Croscarmellose-Natrium	5,00	5,00
Natriumlaurylsulfat	2,50	2,50
Kolloidale wasserfreie Kieselsäure	0,50	0,50
Magnesiumstearat	1,25	1,25
Zwischensumme für den gesamten Kern	250,00	250,00
(Filmüberzug Opadry OY-S-7322)	ungefähr 8 mg	ungefähr 8 mg

¹⁾ Verbindung (I)

Beispiel 2

Die folgende Formel wird bei der Herstellung der letztendlichen Dosisform verwendet, die 10 mg Verbindung (I) enthält.

Inhaltsstoff	Menge (mg)
Granulat	Menge (mg)
Selektiver PDE5-Inhibitor¹⁾	10,00
Lactose-Monohydrat	153,80
Lactose-Monohydrat (sprühgetrocknet)	25,00
Hydroxypropylcellulose	4,00
Croscarmellose-Natriurn	9,00
Hydroxypropylcellulose (EF)	1,75
Natriumlaurylsulfat	0,70
	35,00
Pulver auf der Außenseite
Mikrokristalline Cellulose (körnig-102)	37,50
Croscarmellose-Natrium	7,00
Magnesiumstearat (pflanzlich)	1,25
	Gesamt 250 mg
Filmüberzug (ungefähr) 11,25

Gereinigtes Wasser, USP, wird bei der Herstellung der Tabletten verwendet. Wasser wird während der Verarbeitung entfernt und minimale Gehalte verbleiben im Endprodukt.
Tabletten werden unter Verwendung eines Nassgranulationsverfahrens hergestellt. Eine stufenweise Beschreibung des Verfahrens ist wie folgt. Der Arzneistoff und die Hilfsstoffe, die granuliert werden können, werden sicherheitsgesiebt. Der selektive PDE5-Inhibitor wird mit Lactose-Monohydrat (sprühgetrocknet), Hydroxypropylcellulose, Croscarmellose-Natrium und Lactose-Monohydrat trocken vermischt. Das resultierende Pulvergemisch wird mit einer wässrigen Lösung von Hydroxypropylcellulose und Natriumlaurylsulfat unter Verwendung eines Powrex-Granulators oder eines anderen geeigneten Granulators mit hoher Scherung granuliert. Zusätzliches Wasser kann zugesetzt werden, um den gewünschten Endpunkt zu erreichen. Eine Mühle kann verwendet werden, um das Nassgranulat aufzubrechen und die Trocknung zu erleichtern. Das Nassgranulat wird unter Verwendung entweder eines Wirbelschichttrockners oder eines Trocknungsofens getrocknet. Nachdem das Material getrocknet ist, kann es klassiert werden, um alle großen Agglomerate zu eliminieren. Mikrokristalline Cellulose, Croscarmellose-Natrium und Magnesiumstearat werden sicherheitsgesiebt und zum trockenen klassierten Granulat zugegeben. Diese Hilfsstoffe und das trockene Granulat werden unter Verwendung eines Taumelzylinders, Bandmischers oder einer anderen geeigneten Mischausrüstung bis zur Gleichförmigkeit vermischt. Der Mischprozess kann in zwei Phasen aufgetrennt werden. Die mikrokristalline Cellulose, Croscarmellose-Natrium und das getrocknete Granulat werden zum Mischer zugegeben und während der ersten Phase vermischt, gefolgt von der Zugabe des Magnesiumstearats zu diesem Granulat und einer zweiten Mischphase.
Das Mischgranulat wird anschließend unter Verwendung einer Rotationspressmaschine zu Tabletten verpresst. Die Kerntabletten werden mit einer wässrigen Suspension mit der geeigneten Farbmischung in einer Beschichtungspfanne (z. B. Accela Cota) filmbeschichtet. Die beschichteten Tabletten können leicht mit Talkum bestäubt werden, um die Tablettenhandhabungseigenschaften zu verbessern.
Die Tabletten werden in Plastikbehälter abgefüllt (30 Tabletten/Behälter) und eine Packungsbeilage wird beigefügt, die die Sicherheit und Wirksamkeit der Verbindung beschreibt.
Beispiel 3

Die folgende Formel wird zur Herstellung einer endgültigen Dosisform verwendet, die 5 mg Verbindung (I) enthält.

Inhaltsstoff	Menge (mg)
Granulat	Menge (mg)
Selektiver PDE5-Inhibitor¹⁾	2,50
Lactose-Monohydrat	79,395
Lactose-Monohydrat (sprühgetrocknet)	12,50
Hydroxypropylcellulose	2,00
Croscarmellose-Natrium	4,50
Hydroxypropylcellulose (EF)	0,875
Natriumlaurylsulfat	0,35

Pulver auf der Außenseite
Mikrokristalline Cellulose (körnig-102)	18,75
Croscarmellose-Natrium	3,50
Magnesiumstearat (pflanzlich)	0,63
	Gesamt 125 mg
Filmüberzug (ungefähr) 6,875

Die Dosisform von Beispiel 3 wurde in einer identischen Art und Weise wie die Dosisform von Beispiel 2 hergestellt.
Beispiel 4

Lösungskapsel
Inhaltsstoff	mg/Kapsel	Prozent (%)
Selektiver PDE5-Inhibitor¹⁾	10	2
PEG400 NF	490	98
Füllgewicht	500	100

Die Gelatinekapseln werden präzise gefüllt, indem ein genaues Füllvolumen der vorgelösten Arzneistoffformulierung in den teilweise verschlossenen Hohlraum einer Kapsel gepumpt wird. Unmittelbar im Anschluss an die Einspritzfüllung der Arzneistofflösungsformulierung wird die Kapsel vollständig wärmeversiegelt.
Die Kapseln werden in Kunststoffbehältern abgefüllt und eine Packungsbeilage wird beigefügt.
Beispiel 5
Diese Studie war eine randomisierte, Placebo-kontrollierte, klinische, pharmakologische Arzneistoff-Doppelblind-Wechselwirkungsstudie mit Zwei-Weg-Crossover-Design, die die hämodynamischen Wirkungen der gleichzeitigen Verabreichung eines selektiven PDE5-Inhibitors (d. h. Verbindung (I)) und kurzwirkender Nitrate auf gesunde männliche Freiwillige bewertete. In dieser Studie erhielten die Probanden entweder Verbindung (I) in einer Dosis von 10 mg oder ein Placebo, täglich über sieben Tage. Am sechsten oder siebten Tag erhielten die Probanden sublingual Nitroglycerin (0,4 mg), auf dem Rücken liegend auf einem schrägen Tisch. Das Nitroglycerin wurde 3 Stunden nach der Dosierung von Verbindung (I) verabreicht und alle Probanden behielten die Nitroglycerin-Tablette unter ihrer Zunge, bis sie vollständig aufgelöst war. Die Probanden wurden alle 5 Minuten für insgesamt 30 Minuten auf 70° mit dem Kopf nach oben unter Messung von Blutdruck und Herzrate gekippt. Es gab keine Unterbrechungen bei den zweiundzwanzig gesunden männlichen Probanden (Alter 19 bis 60 Jahre), die mit dieser Studie begannen.
In einer vorläufigen Analyse dieser Studie wurde Verbindung (I) gut toleriert und es gab keine schwerwiegenden nachteiligen Vorkommnisse. Es gab keine Verbindung-(I)-Veränderungen bei Laborsicherheitsbewertungen oder 12-Kanal-EKGs, Die häufigsten nachteiligen Vorkommnisse waren Kopfschmerz, Dyspepsie und Rückenschmerzen. Verbindung (I) zeigte eine minimale, wenn überhaupt, Wirkung auf den mittleren systolischen Blutdruck und mittlere maximale Nitroglycerin-induzierte Abnahme des systolischen Blutdrucks.
Beispiel 6
In zwei randomisierten, Placebo-kontrollierten Doppelblindstudien wurde Verbindung (I) Patienten, die ihrer bedurften, in einem Bereich von Dosen, in sowohl täglicher Dosierung als auch für Therapie nach Bedarf, für sexuelle Begegnungen und Geschlechtsverkehr im häuslichen Umfeld verabreicht. Dosen von 5 bis 20 mg Verbindung (I) waren wirksam und zeigten weniger als 1% Gesichtsrötung und keine Berichte über Sehabnormitäten. Es wurde festgestellt, dass eine 10-mg-Dosis von Verbindung (I) vollständig wirksam war und minimale Nebenwirkungen zeigte.
Eine verbesserte Erektionsfunktion wurde mit denn International Index of Erectile Function (IIEF) (Rosen et al., Urology, 49, S. 822–830 (1997)), Tagebucheintragungen sexueller Versuche und einer globalen Befriedigungsfrage bestimmt. Verbindung (I) verbesserte den Prozentanteil erfolgreicher Geschlechtsverkehrsversuche signifikant, einschließlich der Fähigkeit, eine Erektion sowohl bei Regimes „bei Bedarf” als auch bei täglicher Dosierung zu erreichen und zu halten.
Beispiel 7
Eine dritte klinische Studie war eine randomisierte, Placebo-kontrollierte Doppelblindstudie von Verbindung (I), verabreicht „bei Bedarf” an Patienten mit männlicher Erektionsstörung. Verbindung (I) wurde über einen Zeitraum von 8 Wochen bei der Behandlung männlicher Erektionsstörung (ED) verabreicht. Die Erektionsfunkionsstörung (ED) ist definiert als die andauernde Unfähigkeit, eine Erektion, die angemessen ist, um befriedigende sexuelle Leistung auszuführen, zu erreichen und/oder zu halten. Die Dosierung „bei Bedarf” ist definiert als intermittierende Verabreichung von Verbindung (I) vor erwarteter sexueller Aktivität.
Die Population der Studie bestand aus 212 Männern, wenigstens 18 Jahre alt, mit milder bis schwerer Erektionsstörung. Verbindung (I) wurde oral verabreicht als Tabletten aus Kopräzipitat, hergestellt gemäß Butler, U.S.-Patent Nr. 5,985,326 . Verbindung (I) wurde in Dosen von 2 mg, 5 mg, 10 mg und 25 mg „bei Bedarf” und nicht häufiger als einmal alle 24 Stunden verabreicht. Eine Behandlung mit allen Nitraten, Azol-Antipilzmitteln (z. B. Ketoconazol oder Itraconazol), Warfarin, Erythromycin oder Antiandrogenen wurde zu keinem Zeitpunkt während der Studie erlaubt. Keine anderen zugelassenen oder experimentellen Medikationen, Behandlungen oder Vorrichtungen, die verwendet werden, um ED zu behandeln, wurden erlaubt. Einundvierzig Patienten wurde ein Plazebo verabreicht.
Die zwei primären Wirksamkeitsvariablen waren die Fähigkeit eines Patienten, seinen Partner zu penetrieren, und seine Fähigkeit, eine Erektion während des Geschlechtsverkehrs aufrechtzuerhalten, gemessen mit dem International Index of Erectile Function (IIEF). Der IIEF-Fragebogen enthält fünfzehn Fragen und ist ein kurzes, verlässliches Maß der Erektionsfunktion. Siehe R. C. Rosen et al., Urology, 49, S. 822–830 (1997).
Sekundäre Wirksamkeitsvariablen waren IIEF-Domänenbewertungen für Erektionsfunktion, Orgasmusfunktion, sexuelle Begierde, Befriedigung beim Geschlechtsverkehr und Gesamtbefriedigung; die Fähigkeit des Patienten, eine Erektion zu erreichen, die Fähigkeit, seinen Penis in die Vagina seiner Partnerin einzuführen, die Vollendung des Geschlechtsverkehrs mit Ejakulation, Befriedigung mit der Härte seiner Erektion und Gesamtbefriedigung, alle gemessen mit dem Sexual-Encounter-Profile-Tagebuch (SEP-Tagebuch); und eine globale Bewertungsfrage, die am Ende des Behandlungszeitraums gestellt wurde. Das SEP ist ein Patiententagebuchinstrument, das jede sexuelle Begegnung während des Verlaufs der Studie dokumentiert.
Der Sicherheitsaspekt der Studie schloss alle beteiligten Patienten ein und wurde durch Bewertung aller berichteten nachteiligen Ereignisse und Veränderungen in klinischen Laborwerten, vitalen Anzeichen, physischen Untersuchungsergebnissen und Elektrokardiogrammergebnissen bewertet.
Am Ende waren Patienten, die ihre Penetrationsfähigkeit (IIEF-Frage 3) als „fast immer oder immer” bewerteten, wie folgt: 17,5% in der Placebo-Gruppe, 38,1% in der 2-mg-Gruppe, 48,8% in der 5-mg-Gruppe, 51,2% in der 10-mg-Gruppe und 83,7% in der 25-mg-Gruppe. Vergleiche zeigten statistisch signifikante Unterschiede in der Veränderung in der Penetrationsfähigkeit zwischen Placebo und allen Dosisniveaus von Verbindung (I).
Am Ende sind Patienten, die ihre Fähigkeit, eine Erektion während des Geschlechtsverkehrs zu halten (IIEF-Frage 4), als „fast immer oder immer” bewerteten, wie folgt: 10,0% in der Plazebo-Gruppe, 19,5% in der 2-mg-Gruppe, 32,6% in der 5-mg-Gruppe, 39,0% in der 10-mg-Gruppe und 69,0% in der 25-mg-Gruppe. Ein Vergleich zeigte statistisch signifikante Unterschiede in der Veränderung der Penetrationsfähigkeit zwischen Placebo und den drei höheren Dosisniveaus von Verbindung (I).
Diese Studie schloss auch eine Sicherheitsbeurteilung ein. Ein bei der Behandlung auftretendes nachteiliges Ereignis ist definiert als ein bei der Basislinie nicht vorhandener Zustand, der nach der Basislinie auftrat, oder ein bei der Basislinie vorhandener Zustand, der in der Schwere nach der Basislinie anstieg. Die am häufigsten berichteten, bei der Behandlung auftretenden nachteiligen Ereignisse waren Kopfschmerzen, Dyspepsie und Rückenschmerzen. Das Auftreten von bei der Behandlung auftretenden nachteiligen Ereignissen schien im Zusammenhang mit der Dosis zu stehen.
Insgesamt zeigte diese Studie, dass alle vier Dosen von Verbindung (I), nämlich 2 mg, 5 mg, 10 mg und 25 mg, eingenommen „bei Bedarf”, eine signifikante Verbesserung, relativ zu Placebo, bei der sexuellen Leistung von Männern mit Erektionsstörung zeigten, bewertet mit dem IIEF, durch Patienten-Tagebücher, die die Häufigkeit von erfolgreichem Geschlechtsverkehr und Geschlechtsverkehrsbefriedigung bestimmten, und durch eine globale Bewertung.

Die kombinierten Ergebnisse aus klinischen Studien zeigten, dass die Verabreichung von Verbindung (I) männliche Erektionsstörung wirksam behandelt, wie veranschaulicht in der folgenden Tabelle.

IIEF-EREKTIONSFUNKTION-DOMANE (Veränderung von Basislinie)
Einheitsdosis von Verbindung (I)	n	Mittelwert ± SD	P
Placebo	131	0,8 ± 5,3
2 mg	75	3,9 ± 6,1	< 0,001
5 mg	79	6,6 ± 7,1	< 0,001
10 mg	135	7,9 ± 6,7	< 0,001
25 mg	132	9,4 ± 7,0	< 0,001
50 mg	52	9,8 ± 5,5	< 0,001
100 mg	49	8,4 ± 6,1	< 0,001
n ist die Anzahl der Patienten, SD ist die Standardabweichung.

Es wurde jedoch aus den kombinierten klinischen Studien auch beobachtet, dass der Prozentanteil der bei der Behandlung auftretenden nachteiligen Ereignisse mit einer ansteigenden Einheitsdosis von Verbindung (I) anstieg, wie veranschaulicht in der folgenden Tabelle:

Bei der Behandlung auftretende nachteilige Ereignisse (%)
Einheitsdosis von Verbindung (I) (mg)
Ereignis	Placebo	2	5	10	25	50	100
Kopfschmerzen	10	12	10	23	29	34	46
Dyspepsie	6	3	14	13	19	20	25
Rückenschmerzen	5	3	3	15	18	24	22
Myalgien	3	0	3	9	16	20	29
Rhinitis	3	7	3	4	4	0	2
Konjunktivitis	1	0	1	1	0	2	5
Augenlidödem	0	0	0	1	1	2	3
Gesichtsrötung	0	0	0	< 1	0	3	7
Sehabnormitäten	0	0	0	0	0	0	0

Die obige Tabelle zeigt einen Anstieg der nachteiligen Ereignisse bei den Dosiseinheiten von 25 mg bis 100 mg. Demgemäß müssen die nachteiligen Ereignisse, die bei Dosen von 25 mg bis 100 mg beobachtet werden, obgleich Wirksamkeit bei der Behandlung von ED bei den Dosen von 25 mg bis 100 mg beobachtet wurde, berücksichtigt werden.
Gemäß der vorliegenden Erfindung behandelt eine Einheitsdosis von etwa 1 bis etwa 5 mg von Verbindung (I), verabreicht bis zu einem Maximum von 5 mg pro 24-stündigem Zeitraum, wirksam ED und minimiert oder eliminiert das Auftreten von nachteiligen Nebenwirkungen. Es ist wichtig, dass keine Sehabnormitäten berichtet wurden und die Gesichtsrötung im Wesentlichen eliminiert wurde. Überraschenderweise können Individuen, die eine Nitrat-Therapie durchlaufen, zusätzlich zur Behandlung von ED, mit einer Einheitsdosis von etwa 1 ist etwa 5 mg von Verbindung (I), mit einem Minimum an nachteiligen Nebenwirkungen, auch mit dem Verfahren und der Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung auf ED behandelt werden.

Claims

Pharmazeutische Einheitsdosiszusammensetzung, die 1 bis 5 mg einer Verbindung mit der folgenden Strukturformel umfasst:
wobei die Einheitsdosisform zur oralen Verabreichung von bis zu einer maximalen Gesamtdosis von 5 mg täglich geeignet ist.
Dosisform nach Anspruch 1, die 2,5 mg der Verbindung in Einheitsdosisform umfasst.
Dosisform nach Anspruch 1, die 5 mg der Verbindung in Einheitsdosisform umfasst.
Dosisform nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die Einheitsdosis in einer Form ist, die aus einer Flüssigkeit, einer Tablette, einer Kapsel oder einer Gelatinekapsel ausgewählt ist.
Dosisform nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die Einheitsdosis in der Form einer Tablette ist.
Dosisform nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung beim Behandeln eines Leidens, bei dem eine Hemmung von PDE5 wünschenswert ist.
Dosisform nach Anspruch 6, wobei das Leiden eine sexuelle Dysfunktion ist.
Dosisform nach Anspruch 7, wobei die sexuelle Dysfunktion eine Erektionsstörung beim Mann ist.
Dosisform nach Anspruch 7, wobei die sexuelle Dysfunktion eine Störung der sexuellen Erregung bei der Frau ist.
Verwendung einer Einheitsdosis, die 1 bis 5 mg einer Verbindung mit der folgenden Struktur umfasst:
zur Herstellung eines Arzneimittels zur Verabreichung von bis zu einer maximalen Gesamtdosis von 5 mg der Verbindung täglich in einem Verfahren zum Behandeln einer sexuellen Dysfunktion bei einem Patienten, der dieser Behandlung bedarf.
Verwendung nach Anspruch 10, wobei das Arzneimittel zur Verabreichung mit einer oder mehreren Einheitsdosen, die 1 bis 5 mg der Verbindung umfassen, von bis zu einer maximalen Gesamtdosis von 5 mg der Verbindung täglich ist.
Verwendung nach Anspruch 10 oder 11, wobei die Einheitsdosis 2,5 mg der Verbindung enthält.
Verwendung nach Anspruch 10 oder 11, wobei die Einheitsdosis 5 mg der Verbindung enthält.
Verwendung nach einem der Ansprüche 10 bis 13, wobei die Einheitsdosis in einer Form ist, die aus einer Flüssigkeit, einer Tablette, einer Kapsel oder einer Gelatinekapsel ausgewählt ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 10 bis 13, wobei die Einheitsdosis in der Form einer Tablette ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 10 bis 15, wobei die sexuelle Dysfunktion eine Erektionsstörung beim Mann ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 10 bis 15, wobei die sexuelle Dysfunktion eine Störung der sexuellen Erregung bei der Frau ist.