CZ292323B6 - Benzodiazepinová sloučenina, způsob její přípravy, farmaceutický prostředek s jejím obsahem a jejich použití - Google Patents

Abstract

Jsou pops ny benzodiazepinov slou eniny obecn ho vzorce II, ve kter m R je vod k, alkyl, pop° pad substituovan² benzyl, (pivaloyl)methyl nebo (2-methyl-2-methoxypropanoyl)methyl, R.sup.3.n. je alkyl, alkenyl, Ar, Ar-alkyl, cykloalkyl, cykloalkylalkyl, Het nebo Het-alkyl, kde Ar je fenyl nebo naftyl a Het je v dy pop° pad substituovan² 5-, 6-, 9- nebo 10- lenn² kruh, X je vod k, pop° pad substituovan² alkyl, alkoxy- nebo alkylthioskupina, a jejich farmaceuticky p°ijateln soli, zp sob jejich p° pravy zpracov n m slou eniny obecn ho vzorce IV s inidlem (i) k odstran n chr nic aminoskupiny z R.sup.6.n.', (ii) k odstran n chr nic skupiny karboxylov skupiny z CO.sub.2.n.R a (iii) k p° prav jejich farmaceuticky p°ijateln²ch sol , d le farmaceutick² prost°edek obsahuj c tuto slou eninu a pou it benzodiazepinov slou eniny pro v²robu l iva.\

Description

Benzodiazepinová sloučenina, způsob její přípravy, farmaceutický prostředek s jejím obsahem a jejich použití

Oblast techniky

Tento vynález se týká nových benzodiazepinových sloučenin, které inhibují shlukování destiček, způsobů přípravy těchto sloučenin, farmaceutických prostředků obsahujících tyto sloučeniny a jejich použití k inhibici shlukování destiček.

Dosavadní stav techniky

Shlukování krevních destiček je pokládáno za zprostředkované především firrinogenním receptorem neboli komplexem receptoru GPIIb-IIIa krevních destiček, který je členem rodiny adhezních receptorů, označovaných jako integriny. Bylo zjištěno, že často přirozené ligandy integrinových receptorů jsou proteiny, které obsahují řetězec Arg-Gly-Asp. Von Willebrandův faktor a fibrinogen, které jsou pokládány za přirozené ligandy pro GPIIb-IIIa receptor, obsahují řetězec Arg-Gly-Asp (RGD v jednopísmenovém kódu aminokyselin) ve své primární struktuře. Funkčně tyto proteiny jsou schopné vázat a zesítit GPIIb-IIIa receptory na sousedících destičkách a tím působit shlukování krevních destiček.

Fibrinektin, vitronektin a trombospondin jsou proteiny obsahující RGD, u kterých bylo doloženo, že se váží k GPIIb-IIIa. Fibrinektin byl nalezen v plazmě a jako strukturní protein v intracelulámí základní hmotě. Vázání mezi strukturními proteiny a GPIIb-IIIa může fungovat tak, že způsobuje adhezi krevních destiček k poškozeným stěnám cév.

Lineární a cyklické peptidy, které se váží k vitronektinu a obsahují řetězec RGD, jsou uvedeny ve WO 89/05150 (PCT/US88/04403). EP 0 275 748 popisuje lineární tetra- a hexapeptidy a cyklické hexa- až oktapeptidy, které se váží k GPIIb-IIIa receptoru a inhibují shlukování krevních destiček. Jiné lineární a cyklické peptidy, jejichž popis se zahrnuje do dosavadního stavu techniky, jsou uvedeny v EP 0 341 915A. Avšak peptidy podobné struktury jako jsou inhibitory, často způsobují problémy, které například spočívají v uvolňování v léčivu, metabolické stabilitě a selektivitě. Inhibitory fibrinogenního receptoru, které nejsou konstruovány z přirozených řetězců aminokyselin, jsou popsány vEP0 372 486A, EP 0 381 033A aEP0 478 363A. WO 92/07568 (PCT/US91/08166) uvádí antagonisty fibrinogenního receptoru, které se podobají konformačnímu γ-ohybu v RGD řetězci tvorbou monocyklické kruhové struktury o sedmi členech. Trvá však potřeba nových antagonistů fibrinogrenního receptoru (například inhibitorů GPIIb-IIIa proteinu), které mají silné účinky in vivo a in vitro a peptidovou skeletovou strukturu řetězců aminokyseliny.

Určité 5-fenyl-l ,4-benzodiazepiny jsou známé jako skupina léčiv, která působí na centrální nervový systém a používají se jako anxiolytika, viz L. H. Stembach, J. Med. Chem. 22,2 /1979/. Bylo také zjištěno, že určité 5-fenyl-l,4-benzodiazepiny antagonizují účinky cholecystokininu, viz Friedinger, Med. Res. Rev. 9, 271 /1989/. Určité bicyklické sloučeniny, které mají fibrinogenní antagonistickou aktivitu, jsou popsány ve WO 93/08174 (PCT/US92/08788), WO 93/00095 (PCT/US92/05463) a WO 94/14776 (PCT/US93/12436). Tento vynález se zabývá novými bicyklickými sloučeninami včetně benzodiazepinů, které jsou inhibitory GPIIb-IIIa receptoru a inhibují shlukování krevních destiček. Jsou žádoucí nové sloučeniny, které jsou inhibitory GPIIb-IIIa receptoru a inhibují shlukování krevních destiček.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je benzodiazepinová sloučenina obecného vzorce II:

O

O co₂r (II), ve kterém

R je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, benzylová skupina, která je popřípadě substituována chlorem, bromem, nitroskupinou, methoxyskupinou nebo methylovou skupinou, (pivaloyl)methylová skupina nebo (2-methyl-2-methoxypropanoyl)methylová skupina,

R³ znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku, Ar-skupinu, Ar-alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, cykloalkylovou skupinu se 3 až 7 atomy uhlíku, cykloalkylalkylovou skupinu se 3 až 7 atomy uhlíku v cykloalkylové části a 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, Het-skupinu nebo skupinu Het-alkyl, kde alkylová část obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku, kde Ar znamená fenylovou nebo naftylovou skupinu a

Het znamená vždy popřípadě substituovaný pětičlenný nebo šestičlenný monocyklický kruh nebo devítičlenný nebo desetičlenný bicyklický kruh, který obsahuje 1 až 3 heteroatomy zvolené ze souboru zahrnujícího dusík, kyslík a síru, přičemž případnými substituenty jsou 1 až 3 substituenty zvolené z jakékoli možné kombinace X,

X je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku substituovaná třemi atomy fluoru, skupina N(R')₂, CO₂R', CON(R')₂, hydroxyskupina, atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu a kde R' znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, a její farmaceuticky přijatelné soli, za předpokladu, že jestliže X je atom vodíku, R³ není fenethyl.

Předmětem tohoto vynálezu je také způsob přípravy benzodiazepinové sloučeniny obecného vzorce II, jehož podstata spočívá v tom, že se zpracuje sloučenina obecného vzorce IV:

ve kterém

A¹ je skupina NH,

-2CZ 292323 B6

R je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, benzylová skupina, která je popřípadě substituována chlorem, bromem, nitroskupinou, methoxyskupinou nebo methylovou skupinou, (pivaloyl)methylová skupina nebo (2-methyl-2-methoxypropanoyl)methylová skupina,

R³ je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylová skupina se 3 až 6 atomy uhlíku, Aralkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, Het-alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, kde Ar a Het mají význam uvedený výše,

X je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku substituovaná třemi atomy fluoru, skupina N(R')₂, CO₂R', CON(R')₂, hydroxyskupina, atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu, kde R' znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, a

R⁶' j^e (4,4'-bipiperidin-l-yl)karbonyl, kde kterýkoli bazický atom dusíku je chráněn, s činidlem, v jakémkoli pořadí, (i) k odstranění chránící skupiny aminoskupiny z R⁶ a, pokud je to nezbytné, (ii) k odstranění chránící skupiny karboxylové skupiny z CO₂R a (iii) k vytvoření její farmaceuticky přijatelné soli.

Předmětem vynálezu je dále farmaceutický prostředek, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje svrchu vymezenou benzodiazepinovou sloučeninu obecného vzorce Π a farmaceuticky přijatelný nosič.

Předmětem tohoto vynálezu je rovněž použití svrchu vymezené benzodiazepinové sloučeniny obecného vzorce II pro výrobu léčiva k léčení infarktu myokardu, trombózy, embolie, mrtvice, poruch souvisejících s infarktem, restenózy po angioplastice a k zabránění reokluze arterie nebo vény po trombolytické terapii.

Podrobný popis vynálezu

Vynález je dále popsán v širších souvislostech.

Benzodiazepinové sloučeniny obecného vzorce II jsou také v popise tohoto patentu označovány jako sloučeniny podle tohoto vynálezu.

Benzodiazepinové sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou vhodné pro inhibici shlukování krevních destiček.

Způsob inhibice reokluze tepen nebo žil u savců po fíbrinolytické terapii nebo angioplastice zahrnuje bezprostřední podávání účinného množství sloučeniny podle tohoto vynálezu. Způsob ošetřování mrtvice, pomíjivých ischemických záchvatů nebo infarktu myokardu zahrnuje bezprostřední podávání účinného množství sloučeniny podle tohoto vynálezu. ^{I *}

I když není záměrem vázat se na nějaký zvláštní mechanizmus účinku, u sloučenin podle tohoto vynálezu se očekává, že inhibují vázání fibrinogenu k flbrinogennímu receptoru GPIIb-IIIa

-3CZ 292323 B6 vážícímu krevní destičky a mohou vzájemně působit s jinými adhezními proteiny cestou antagonizmu předpokládaných RGD vázacích míst.

Do vynálezu jsou také zahrnuty farmaceuticky přijatelné soli, komplexy nebo prekurzory léčiva. Za prekurzory léčiva se považují libovolné kovalentně vázané nosné látky, které uvolňují aktivní základní léčivou látku obecného vzorce Π in vivo.

Výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou benzodiazepinové sloučeniny obecného vzorce II, ve kterých R³ je atom vodíku, methyl nebo izopropyl.

Obecně se mezi sloučeniny podle tohoto vynálezu zahrnuje:

kyselina (R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-4-/2-(cyklohexyl)ethyl/-2,3,4,5-tetrahydro3-oxo-1 Η-1,4-benzodiazepin-2-octová, kyselina (R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l, 4benzodiazepi-2-octová, kyselina (+)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(fenethyl)-lH-

1,4-benzodiazepin-2-octová, kyselina (-)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(fenethyl)-lH-

1,4-benzodiazepin-2-octová, kyselina (R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-izopropyl-3-oxo-l H-

1,4-benzodiazepin-2-octová, kyselina (R)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-l H-l ,4benzodiazepin-2-octová, kyselina (S)-7-/(4,4'-bipiperidin-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-l H-l ,4benzodiazepin-2-octová a sodná sůl kyseliny (R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3oxo-1 H-l ,4-benzodiazepin-2-octové.

Zvláštní výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou:

(R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetát, sodná sůl kyseliny (R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3oxo-1 H-l,4-benzodiazepin-2-octové a kyselina (S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4benzodiazepin-2-octová.

V jedné podskupině A¹ je skupina vzorce NH a tvoří 1,4-benzodiazepin, který je výhodně substituován v poloze 8.

V jiné podskupině A¹ je skupina vzorce NH a tvoří 1,4-benzodiazepin, který je substituován v poloze 7.

R⁶ je (4,4'-bipiperidin-l-yl)karbonyl, kde bazický atom dusíku je chráněn.

-4CZ 292323 B6

Takové sloučeniny, kde X znamená atom vodíku a R³ představuje fenethyl nebo cyklohexylethyl, jsou popsány ve WO 94/14776 a nejsou součástí tohoto vynálezu.

Sloučeniny obecného vzorce IV se obecně dají připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce XI

(XI) (ΧΠ), v kterýchžto vzorcích

A¹ má význam definovaný výše,

R³ má význam definovaný u obecného vzorce Π, s chráněnými libovolnými funkčními skupinami,

R znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, benzylovou skupinu nebo skupinu chránící karboxyskupinu,

L¹ znamená skupinu vzorce CO₂H a

L² znamená atom dusíku z piperidylové skupiny.

L¹ a L² jsou funkční skupiny, které jsou schopné reagovat za vzniku amidové vazby. L² je atom dusíku z piperidylové skupiny. R⁶ -L² znamená 4-(4-piperidyl)piperidin, kde nereaktivní bazický atom dusíku z piperidylové skupiny je chráněn skupinou chránící aminoskupinu.

Sloučeniny obecného vzorce XI jsou benzodiazepiny a dají se připravit podle metod obecně známých v oboru, jako jsou popsány v WO 93/00095 (PCT/US92/05463) a WO 94/14776 (PCT/US93/12436), které se zde zahrnují do známého stavu techniky. Sloučeniny obecného vzorce XII běžně obsahují dva bazické středy, z nichž jeden je chráněn, a podobně jsou známy v oboru, viz například WO 94/14776 (PCT/US93/12436).

Kondenzačními reakčními činidly se zde označují reagencie, které se mohou používat za vzniku amidových vazeb. Běžné kondenzační metody používají karbodiimidy, aktivované anhydridy, estery a acylhalogenidy. Obvyklá jsou reakční činidla, jako EDC, DCC, DPPA, PPA, BOP a dále HOBt, N-hydroxysukcinimid a oxalylchlorid.

Kondenzační metody pro vytvoření amidových vazeb jsou běžně dobře známé v oboru. Metody syntézy peptidů, které v obecné formě uvádí Bodansky a kol. v The Practice of Peptíde Synthesis, Springer-Verlag, Berlín /1894/ a Ali a kol., v J. Med. Chem., 29, 984 /1986/ a v J. Med. Chem., 30. 2291 /1987/, jsou obecnou ilustrací technického postupu a zde se zahrnují do známého stavu techniky.

Řešení syntézy, které vede ke vzniku amidových vazeb, je spojeno s použitím obvyklých metod, používaných k vytvoření amidových vazeb. Běžně se amin nebo anilin kondenzuje přes svou

-5CZ 292323 B6 volnou aminoskupinu na vhodný substrát karboxylových kyselin, za použití příslušného karbodiimidového kondenzačního činidla, jako je Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiimid (DCC) nebo N-ethylN'-(dimethylaminopropyl)karbodiimid (EDC), popřípadě v přítomnosti katalyzátorů, jako je 1hydroxybenzotriazil (HOBt) a dimethylaminopyridin (DMAP). Také jsou vhodné jiné způsoby, které spočívají například v případě aktivovaných esterů, anhydridů nebo acylhalogenidů, z volného karboxylu vhodně chráněné kyseliny, a v následující reakci s volným aminem vhodně chráněného aminu, popřípadě v přítomnosti báze. Například chráněná Boc-aminokyselina nebo Cbzamidinobenzoová ky selina se zpracuje s bezvodým rozpouštědlem, jako je methylenchlorid nebo tetrahydrofuran (THF) v přítomnosti báze, jako je N-methylmorfolin, dimethylaminopyridin nebo trialkylamin, s izobutylchloroformiátem za vzniku „aktivovaného anhydridů“, který se následně nechá reagovat s volným aminem druhé chráněné aminokyseliny nebo anilinu.

Reaktivní funkční skupiny z bočního řetězce každého syntetického fragmentu jsou vhodně chráněné, jak je známo v oboru. Vhodné chránící skupiny uvádí Greene v Protective Groupis in Organic Chemistry, John Wiley and Sons, New York /1981/. Například Boc, Cbz, ftaloylová nebo Fmoc skupina se mohou použít k ochraně aminoskupiny (nebo atomu dusíku piperidylové skupiny) nebo amidinoskupiny. Boc skupině se obecně dává přednost při ochraně aminoskupiny. Pro ochranu karboxyskupiny se může použít methyl-, ethyl-, t-Bu-, cHex-, benzylsubstituovaný benzyl-, (pivaloyl)methyl- nebo (2-methyl-2-methoxypropanoyl)methylester. K ochraně merkaptoskupiny nebo hydroxyskupina se používá benzylová skupina nebo vhodně substituovaná benzylová skupina (například 4-methoxybenzyl nebo 2,4—dimethoxybenzyl). Tosylová skupina se může použít pro ochranu imidazolylové skupiny a tosylová skupina nebo nitroskupina se může použít k ochraně guanidinoskupiny. Vhodně substituovaná karbobenzyloxyskupina nebo benzylová skupina se může také použít pro hydroxyskupinu nebo aminoskupinu. Vhodnou substitucí karbobenzyloxyskupiny nebo benzylové skupiny je substituce atomem chloru, atomem bromu, nitroskupinou, methoxyskupinou nebo methylovou skupinou v poloze ortho nebo para a tyto skupiny se používají k úpravě reaktivity chránících skupin. S výjimkou Boc skupiny, chránící skupiny pro aminovou část jsou obvykle takové skupiny, které se odstraní zpracováním s mírnou kyselinou. Tyto chránící skupiny se odstraňují takovými metodami, jako je katalytická hydrogenace, působení sodíku v kapalném amoniaku nebo působení kyseliny fluorovodíkové, jak je známé v oboru.

Metody odstranění chránících skupin z karboxyskupiny nebo aminoskupiny jsou dobře známy v oboru. Například alkylester nebo cykloalkylester se může odstranit hydrolýzou za bazických podmínek, například působením hydroxidu alkalického kovu, jako je hydroxid sodný, draselný nebo lithný, ve vhodném rozpouštědle, jako je vodný alkohol. Benzylester se obvykle odstraňuje hydrogenací na palladiovém katalyzátoru. terc.-Butoxykarbonylová skupina nebo terc.-butylesterová skupina, které chrání bazický atom dusíku, se obvykle odstraňují zpracováním s kyselinou, jako je kyselina trifluoroctová nebo kyselina chlorovodíková, které jsou popřípadě zředěny rozpouštědlem, jako je methylenchlorid a/nebo dioxan. Benzyloxykarbonylová skupina se běžně odstraňuje hydrogenací v přítomnosti palladiového katalyzátoru. Trifluoracetylová skupina se obvykle odstraňuje hydrolýzou za bazických podmínek, jako zpracováním s hydroxidem alkalického kovu, ve vhodném rozpouštědle. Vhodná syntetická metoda pro ochranu bazického atomu dusíku piperidylové skupiny spočívá v ponechání skupiny během syntézy jako pyridylové skupiny, která se může redukovat v přítomnosti platinového katalyzátoru na konci syntézy k „odstranění“ chránící skupiny.

Adiční soli sloučenin s kyselinami se připravují normalizovanými způsoby ve vhodném rozpouštědle ze základní sloučeniny a přebytku kyseliny, jakou je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforečná, kyselina octová, kyselina maleinová, kyselina jantarová nebo kyselina methansulfonová. Většina sloučenin tvoří vnitřní soli nebo zwitterionty, které mohou být přijatelné. Kationtové soli se připravují zpracováním základní sloučeniny s přebytkem alkalického činidla, jako je hydroxid, uhličitan nebo alkoxid, které obsahují přijatelný kation, nebo s vhodným organickém aminem. Kationty, jako je Li⁺, Na⁺, K⁺, Ca⁺⁺, Mg⁺⁺ a NFL|⁺ jsou zvláštními příklady kationtů přítomných ve farmaceuticky přijatelných solích.

-6CZ 292323 B6

Sloučeniny podle tohoto vynálezu, ve kterých R³ znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, zejména atom vodíku, methyl nebo izopropyl, mají obzvláště příznivé farmakologické a farmakokinetické vlastnosti.

Význam kteréhokoli substituentu v případě jeho libovolného výskytu je nezávislý na dále uvedeném výkladu nebo výkladu jiných libovolných substituentů v případě jejich jakéhokoli jiného výskytu, pokud není uvedeno jinak.

V případě, že sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou mít jeden nebo více chirálních středů, pokud není upřesněno jinak, tento vynález zahrnuje každou jednotlivou neracemickou sloučeninu, která může být připravena synteticky a rozštěpena obvyklým technickým postupem. Z obecného hlediska jsou výhodné sloučeniny, jež mají S konfiguraci na chirálním uhlíku kruhu, ke kterému je připojena acetátová skupina.

Zkratky a symboly, které se používají v oboru peptidů a v oblasti chemie, používají se zde k popisu sloučenin podle tohoto vynálezu. Obecně zkratky aminokyselin sledují doporučení IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature, jak je popsáno v Eur. J. Biochem., 158, 9 /1984/.

Alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, jak se zde používá, zahrnuje popřípadě substituovaný methyl, ethyl, n-propyl, izopropyl, n-butyl, izobutyl a terc.-butyl. Alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku dodatkově zahrnuje pentyl, n-pentyl, izopentyl, neopentyl a hexyl a jeho jednoduché alifatické izomery. Alkylová skupina s 0 až 4 atomy uhlíku a alkylová skupina s 0 až 6 atomy uhlíku dodatkově označují, že nemusí být přítomna žádná alkylová skupina (například proto, že je přítomna kovalentní vazba).

Alkenylová skupina se 3 až 6 atomy uhlíku, jak se zde používá, znamená popřípadě substituovanou alkylovou skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku, ve které jednoduchá vazba uhlík-uhlík je nahrazena dvojnou vazbou uhlík-uhlík. Alkenylová skupina se 3 až 6 atomy uhlíku zahrnuje 1propen, 2-propen, 1-buten, 2-buten, izobuten a několik izomemích pentanů a hexanů. Jak cis-, tak trans-izomery jsou zahrnuty.

Ar nebo arylová skupina, jak se zde používá, znamená fenyl nebo naftyl, nebo fenyl nebo naftyl, které jsou substituovány jedním až třemi zbytky X. Přitom X může zvláště být atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupina s 1 až 4 atomy uhlíku, trifluoralkylová skupina, skupina vzorce N(R')₂, CO₂R', CON(R')2, OH nebo atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu.

Substituent na alkylové skupině s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkenylové skupině se 3 až 6 atomy uhlíku, tak jako X, mohou být na libovolném atomu uhlíku, což má za výsledek stabilní strukturu. Tento substituent je dostupný obvyklým technickým postupem syntézy.

Het nebo heterocyklická skupina označuje popřípadě substituovaný pětičlenný nebo šestičlenný monocyklický kruh, nebo devítičlenný nebo desetičlenný bicyklický kruh, obsahující jeden až tři heteroatomy zvolené ze souboru zahrnujícího atom dusíku, kyslíku a síry, které jsou stabilní a dostupné běžnou chemickou syntézou. Ilustrativními heterocykly jsou benzofuran, benzimidazol, benzopyran, benzothiofen, furan, imidazol, indolin, morfolin, piperidin, piperazin, pyrrol, pyrrolidin, tetrahydropyridin, pyridin, thiazol, thiofen, chinolin, izochinolin, tetrachinolin, perhydrochinolin a podobné sloučeniny. Jakékoli přístupné kombinace až tří substituentů, jako jsou zvoleny z X, na heterocyklickém kruhu, které jsou dostupné chemickou syntézou a jsou stabilní, spadají do rozsahu tohoto vynálezu.

Cykloalkylová skupina se 3 až 7 atomy uhlíku se vztahuje k popřípadě substituovanému karbocyklickému systému ze 3 až 7 atomů uhlíku, který může obsahovat až dvě nenasycené vazby

-7CZ 292323 B6 uhlík-uhlík. Obvyklými cykloalkylovými skupinami se 3 až 7 atomy uhlíku je cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cyklohexenyl a cykloheptyl. Jakákoli kombinace až do tří substituentů, jako jsou zvoleny z X, na cykloalkylovém kruhu, která je dostupná chemickou syntézou a je stabilní, spadá do rozsahu tohoto vynálezu.

Dále se vysvětlují některé zkratky a jejich obvyklé významy.

Případně použitá zkratka t-Bu znamená terciární butylovou skupinu, Boc znamená terc.-butoxykarbonylovou skupinu, Fmoc označuje fluorenylmethoxykarbonylovou skupinu, Ph znamená fenylovou skupinu, Cbz představuje benzyloxykarbonylovou skupinu, jako BrZ se označuje o-brombenzyloxykarbonylová skupina, C1Z představuje o-chlorbenzyloxykarbonylovou skupinu, Bzl znamená benzylovou skupinu a 4-MBzl označuje 4—methylbenzylovou skupinu. Me znamená methyl, Et znamená ethyl, Ac znamená acetyl, Alk se vztahuje k alkylové skupině s 1 až 4 atomy uhlíku, Nph se vztahuje k 1- nebo 2-naíitylu a cHex znamená cyklohexyl.

DCC označuje dicyklohexylkarbodiimid, DMAP označuje 4-(dimethylamino)pyridin, DIEA označuje diizopropylethylamin, EDC označuje N-ethyl-N'-(dimethylaminopropyl)karbodiimid. HOBt označuje 1-hydroxybenzotriazol, THF označuje tetrahydrofuran, DMF označuje dimethylformamid, NBS označuje N-bromsukcinimid, Pd/C označuje palladium na uhlí jako katalyzátor, PPA označuje cyklický anhydrid kyseliny 1-propanfosfonové, DPPA označuje difenylfosforylazid, BOP označuje benzotriazol-l-yloxy-tris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfát, jako HF se označuje kyseliny fluorovodíkové, TEA znamená triethylamin, TFA označuje kyselinu trifluoroctovou a PCC označuje pyridiniumchlorochromát.

Tento vynález, jak již bylo uvedeno výše, také poskytuje farmaceutické prostředky, které obsahují sloučeninu obecného vzorce II a farmaceuticky přijatelnou nosnou látku. Proto se sloučeniny obecného vzorce II mohou používat pro přípravu léčiv. Farmaceutické prostředky ze sloučenin obecného vzorce II, připravené jak již bylo zde popsáno, mohou být zpracovány na roztoky nebo lyofilizované prášky pro parenterální podání. Prášky se mohou rekonstituovat přidáním vhodného ředidla nebo jiné farmaceuticky přijatelné nosné látky před použitím. Kapalné prostředky mohou být pufrované, izotonické, vodné roztoky. Příklady vhodných ředidel jsou normální izotonický fyziologický roztok, normalizovaný 5% roztok dextrózy ve vodě nebo pufrovaný roztok octanu sodného nebo octanu amonného. Takové prostředky jsou zvláště vhodné pro parenterální podání, ale mohou se také používat pro orální podání nebo mohou být obsaženy v odměřované dávce inhalátoru nebo rozprašovače pro insuflaci. Může být žádoucí přidávat vehikula, jako je polyvinylpyrrolidon, želatina, hydroxycelulóza, arabská guma, polyethylenglykol, mannitol, chlorid sodný nebo citrát sodný.

Při jiném provedení se sloučeniny mohou enkapsulovat, tabletovat nebo připravovat v emulzi nebo sirupu pro orální podání. Farmaceuticky přijatelné tuhé nebo kapalné nosné látky se mohou přidávat ke zvýšení stability prostředku nebo k usnadnění přípravy takového prostředku. Mezi tuhé nosné látky se zahrnuje škrob, laktóza, dihydrát síranu vápenatého, bílá hlinka (terra alba), stearát hořečnatý nebo kyselina stearová, mastek, pektin, arabská guma, agar a želatina. Mezi kapalné nosné látky se zahrnuje sirup, podzemnicový olej, olivový olej, fyziologický roztok a voda. Nosné látky mohou také obsahovat materiál umožňující trvalé uvolňování, jako glyceiylmonostearát nebo glyceryldistearát, buď samotné nebo s voskem. Množství tuhé nosné láky se mění, ale výhodně bude mezi přibližně 20 mg a zhruba 1 g na dávkovou jednotku. Farmaceutické prostředky se připravují technickými postupy obvyklými ve farmacii a zahrnují mletí, míšení, granulaci a lisování, pokud je to nutně, pro přípravu tablet, nebo mletí, míšení a plnění, pro zhotovení tvrdých želatinových kapslí. Pokud se použije kapalné nosné látky, prostředek bude ve formě sirupu, elixíru, emulze nebo vodné nebo nevodné suspenze. Takové kapalné prostředky se mohou podávat přímo perorálně nebo plnit do měkkých želatinových kapslí.

Pro rektální podání se sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou také kombinovat s excipienty, jako je kakaové máslo, glycerin, želatina nebo polyethylenglykoly a tvarovat na čípky.

-8CZ 292323 B6

Sloučeniny podle tohoto vynálezu se mohou používat in vitro k inhibici shlukování krevních destiček v krvi a v krevních produktech, například při skladování, nebo pro manipulaci ex vivo, jako při diagnostickém, terapeutickém a výzkumném použití. Dalším znakem tohoto vynálezu je proto sloučenina podle tohoto vynálezu pro použití k inhibici shlukování krevních destiček.

Způsob inhibice shlukování krevních destiček a tvorby sraženiny u savců, zvláště u člověka, spočívá v tom, že se interně podává sloučenina obecného vzorce I a farmaceuticky přijatelná nosná látka. Indikace pro takovou terapii zahrnují akutní infarkt myokardu (AMI), hloubkovou trombózu žil, plicní embolii, sekční anurii, pomíjivý ischemický záchvat (TIA), mrtvici a jiné choroby příbuzné infarktu a nestabilní angínu.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou také vhodné pro prevenci restenózy tepen nebo žil u savců po angioplastice. K takovému ošetření jsou pravděpodobně citlivé chronické a akutní stavy schopné hyperagregace, jako je roztroušená intravaskulámí koagulace (DIC), septikémie, šok způsobený chirurgickým zákrokem nebo infekcí, pooperativní traumata a traumata post-partum, chirurgický kardiopulmonámí bypass, inkompatibilní krevní transfuze, abruptio placenta, trombotická trombocytopenová purpura (TTP), hadí jed a choroby imunity. Očekává se, že tyto sloučeniny jsou také vhodné k úpravě terapie po angioplastice. Kromě toho sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být vhodné při způsobu prevence metastatických stavů, prevenci nebo ošetřování infekcí vyvolaných houbami nebo bakteriemi včetně imunostimulace, ošetřování choroby buněk, při prevenci nebo ošetřování srpkovatosti buněk a při prevenci nebo ošetřování chorob, u kterých je faktorem resorpce kostní dřeně, jako je osteoporóza. Znakem vynálezu je proto také ošetřování infarktu myokardu, trombózy, embolie, mrtvice a chorob příbuzných infarktu nebo restenózy po angioplastice.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou také být přednostně podávány s jinými přípravky, které zamezují shlukování krevních destiček. Například sloučeniny podle tohoto vynálezu se mohou podávat se sloučeninami ze souboru cyklooxygenázových inhibitorů, tromboxanových antagonistů, inhibitorů tromboxan syntetázy, heparinů, trombinových inhibitorů, inhibitorů/antagonistů ADP receptoru a ticlopidinu. Příklady takových přípravků jsou aspirin, warfarin a clopidogrel.

Peptid se podává buď orálně nebo parenterálně pacientovi způsobem, při kterém koncentrace léčivé látky v plazmě je dostatečná k inhibici shlukování krevních destiček nebo k jiné takové indikaci. Farmaceutický prostředek obsahující peptid se podává v dávce od přibližně 0,2 do zhruba 50 mg/kg způsobem souhlasícím se stavem pacienta. Pro akutní terapii je výhodné parenterální podání. Pro přetrvávající stavy schopnosti hyperagregace je nejúčinnější intravenózní infuze peptidu v 5% dextróze ve vodě nebo v normálním fyziologickém roztoku, i když intramuskulámí bolus injekce může být dostačující.

Pro chronické, avšak nekritické stavy schopnosti shlukovat krevní destičky může být vhodné orální podání kapsle nebo tablety, nebo intramuskulámí bolus injekce a zahrnuje vnitřní podání sloučeniny obecného vzorce II a fíbrinolytického přípravku. Bylo nalezeno, že podávání sloučeniny při fíbrinolytické terapii buď zabraňuje reokluzi úplně nebo prodlužuje dobu k reokluzi.

Pokud se v souvislosti s tímto vynálezem používá výrazu fíbrinolytický přípravek, je tím míněna jakákoli sloučenina, která je buď přirozeným nebo syntetickým produktem a která je přímo nebo nepřímo příčinou lýzy fíbrinové sraženiny. Aktivátory plasminogenu jsou dobře známou skupinou íybrinolytických přípravků. Mezi vhodné aktivátory plasmogenu se zahrnuje například anistrepláza, urikináza (UK), pro-urokináza (pUK), streptokináza (SK), aktivátor tkáňového plasmogenu (tPA) a jeho mutanty a varianty, které uchovávají aktivitu aktivátoru plasmogenu, jako varianty, které jsou chemicky modifikovány nebo ve kterých je doplněna, vypuštěna nebo nahrazena alespoň jedna aminokyselina, nebo ve kterých je doplněna, vypuštěna nebo nahrazena alespoň jedna funkční oblast, jako kombinací aktivního místa jednoho aktivátoru plazminogenu s oblastí vázající fibrin z jiného aktivátoru plazminogenu nebo molekuly vážící fibrin. Jiné

-9CZ 292323 B6 ilustrativní varianty zahrnují tPA molekuly, ve kterých je změněno jedno nebo více glykosylačních míst. Výhodné z plazminových aktivátorů jsou varianty tPA, ve kterých primární aminokyselinový řetězec je změněn na oblast růstového faktoru tak, že se zvyšuje poloviční doba životnosti plazmogenového aktivátoru v séru. Varianty tPA růstového faktoru popisuje například Robinson a kol. v EP 0 297 589A a Browne a kol. v EP 0 240 344A. Mezi další varianty se zahrnují hybridové proteiny, jako jsou uvedeny v EP 0 028 489, EP 0 155 387 a EP 0 297 822, které všechny se zde zahrnují do dosavadního stavu techniky. Pro použití podle tohoto vynálezu je výhodným proteinem anistrepláza. Fibrinolytické přípravky se mohou izolovat z přírodních zdrojů, ale obecně se připravují běžnými způsoby genového inženýrství.

Vhodné prostředky ztPA, SK, UK a pUK jsou popsány například vEP0 211 592A, EP 0 092 182A a US patentu č. 4 568 543, z nichž všechny se zde zahrnují do dosavadního stavu techniky. Obvykle fybrinolytický přípravek může být zpracován na vodný, pufrovaný, izotonický roztok, jako je roztok pufrovaný octanem sodným nebo octanem amonným nebo adipátem, o hodnotě pH 3,5 až 5,5. Další vehikula, jako je polyvinylpyrrolidon, želatina, hydroxycelulóza, arabská guma, polyethylenglykol, mannitol a chlorid sodný, se mohou také přidat. Takové prostředky mohou být lyofilizovány.

Farmaceutické prostředky mohou být zpracovány se sloučeninou obecného vzorce II a fibrinolytickým přípravkem ve stejné nádobě, ale zpracování v různých nádobách se dává přednost. Pokud oba přípravky se dostanou ve formě roztoku, mohou být obsaženy v infuzním/injekčním systému pro současné podání nebo v uspořádání jeden za druhým.

Indikace pro takovou terapii zahrnují infarkt myokardu, hloubkovou trombózu žil, plicní embolii, mrtvici a jiné choroby související s infarktem. Sloučenina se podává právě před, současně nebo těsně po parenterálním podání tPA nebo jiného fibrinolytického přípravku. Může být žádoucí vyzkoušet pokračování ošetření se sloučeninou po vhodné časové období po reperfuzi, která vzniká k maximálně inhibiční post-terapeutické reokluzi. Účinná dávka tPA, SK, ÚK nebo pUK může být od 0,5 do 5 mg/kg a účinná dávka peptidu může být od přibližně 0,1 do 25 mg/kg.

Pro obvyklé podání inhibitoru a fibrinolytického přípravku ve stejných nebo rozdílných časech se připravuje souprava (kit), obsahující v jedné nádobě, jako v boxu, lepenkové krabici nebo v jiném zásobníku, jednotlivé lahvičky, pytlíčky, lékovky nebo jiné zásobníčky, z nichž každý obsahuje účinné množství inhibitoru pro parenterální podání, jak je popsáno výše, a účinné množství tPA nebo jiného fibrinolytického přípravku pro parenterální podání, jak je popsáno výše. Taková souprava zahrnuje například farmaceutické přípravky v oddělených nádobách nebo ve stejné nádobě, popřípadě jako lyofilizované látky a nádoby s roztoky pro rekonstituci. Variace zahrnuje roztok pro rekonstituci a lyofilizovanou látku ve dvou komorách jediné nádoby, které se mohou smíchat před použitím. S takovým uspořádáním se fíbrinolytický přípravek a sloučenina mohou uložit odděleně, jako dvě nádoby, nebo lyofilizované dohromady jako prášek, v jednom zásobníku.

Pokud oba přípravky jsou zajištěny ve formě roztoku, mohou být obsaženy v infuzním/injekčním systému pro současné podávání nebo pro postupné uspořádání. Například inhibitor shlukování krevních destiček může být v intravenózně injikovatelné formě nebo v infuzním pytlíčku, spojeném v sérii trubičkou vedoucí do fibrinolytického přípravku v druhém infuzním pytlíčku. Za použití takového systému pacient může dostat počáteční bolus injekci nebo infuzi inhibitoru a potom infuzi fibrinolytického přípravku.

Farmaceutická aktivita sloučenin podle tohoto vynálezu se předpokládá na základě jejich schopnosti inhibovat vázání ³H-SK&F 107260, známého RGD fibrinogenového antagonisty, k GPIIbIlla receptoru, na základě jejich schopnosti inhibovat shlukování krevních destiček in vitro a na základě jejich schopnosti inhibovat tvorbu trombu in vivo.

-10CZ 292323 B6

Inhibice RGD zprostředkovaného GPIIb-IIIa vázání

Inhibice RGD zprostředkovaného GPIIb-IIIa vázání se doloží stanovením schopnosti sloučenin inhibovat vázání ³H-SK&F 107260, známého RGD fibrinogenového antagonisty, k GPIIb-IIIa receptoru, podle způsobu popsaného ve WO 93/00095 (PCT/US92/05463).

Inhibice shlukování krevních destiček

Inhibice shlukování krevních destiček se doloží podle postupu uvedeného ve WO 93/00095 (PCT/US92/05463).

Sloučenina podle tohoto vynálezu obecně inhibuje shlukování lidských krevních destiček s ADP při dosažení hodnoty IC₅₀ menší než 0,1 μΜ. Sloučeniny z příkladů 7, 22, 23 a 26 mají hodnotu IC₅o od 0,2 do 11 μΜ a sloučenina z příkladu 4 má hodnotu IC₅₀ přibližně 75 μΜ. Výhodné sloučeniny mají hodnotu IC₅₀ menší než 0,04 μΜ.

Ke zkoušce stability sloučeniny k plazmové proteáze se sloučeniny inkubují po dobu 3 hodin (spíše než 3 minut) v PRP před přidáním agonisty.

Inhibice shlukování krevních destiček in vivo

Inhibice in vivo tvorby trombů je doložena záznamem systémových a hemodynamických účinků infuze sloučenin na anestetizovaných psech podle metody, kterou popsal Aiken a kol. v Prostaglandins, 19, 629 /1980/. Alternativně se inhibice tvorby trombů a biologická dostupnost mohou měřit metodou, kterou popsal Nicholas a kol. v J. Pharmacol. Exp. Ther., 270, 614 /1994/.

Dále uvedené příklady nejsou žádným způsobem zamýšleny k jakémukoli omezení rozsahu tohoto vynálezu, ale poskytují ilustraci jak připravit a používat sloučeniny podle tohoto vynálezu. Mnohá jiná ztělesnění budou snadno zřejmá a dostupná pro odborníka v oboru.

Příklady provedení vynálezu

V příkladech jsou teploty uváděny ve stupních Celsia. Hmotnostní spektra se stanovují za použití bombardování rychlými atomy (FAB) nebo ionizačním rozstřikováním v elektrickém poli (ES). Teploty tání se určují na aparáte s Thomas-Hooverovou kapilárou ke stanovení teploty tání a jsou nekorigované.

NMR se zaznamenávají při 250 MHz za použití spektrometru Bruker AM250, pokud není uvedeno jinak. Chemické posuny se uvádějí v ppm (δ) ve směru od tetramethylsilanu. Multiplicita pro NMR spektra se vyjadřuje takto: s = singlet, d = dublet, t = triplet, q = kvartet, m = multiplet, dd = dvojitý dublet, dt = dvojitý triplet atd. a výrazem „široký“ se označuje široký signál. J ukazuje NMR kopulační konstantu, vyjádřeno v hertzech.

Celite® je filtrační pomocná pomůcka, sestávající zpromyté rozsivkové zeminy, a je registrovanou ochrannou známkou firmy Mansville Corp., Denver, Colorado, USA. Florisil® je chromatografický nosič na bázi aktivovaného křemičitanu hořečnatého a je registrovanou ochrannou známkou firmy Floridon Co., Pittsburgh, Pennsylvania, USA. Analtech silica gel GF a EM jsou silikagelové desky pro chromatografií na tenké vrstvě, které se používají k naznačenému úseku. Jak velmi rychlá chromatografíe, tak gravitační chromatografíe se provádějí na silikagelu Měrek 60 (rozměr částic 0,038 až 0,066 mm). ODS označuje k oktadecylsilanem derivatizovaný silikagel jako chromatografický nosič. Výraz acetonitril/voda - kyselina trifluoroctová se vztahuje k izokratickému elučnímu systému s uvedeným procentuálním obsahem acetonitrilu ve vodě, kteiý obsahuje 0,1 % kyseliny trifluoroctové. 5μ Apex-ODS označuje oktadecylsilanem

-11 CZ 292323 B6 derivatizovaný silikagelový nosič, který má nominální velikost částic 5 pm, a je vy roben firmou Jones Chromatography, Littleton, Colorado, USA. YMC ODS-AQ® je ODS chromatografický nosič a jde o registrovanou ochrannou známku firmy YMC Co. Ltd., Kyoto, Japonsko. PRP-1® je polymemí (styren-divinylbenzenový) chromatografický nosič a je registrovanou ochrannou známkou firmy Hamilton Co., Reno, Nevada, USA.

Příprava 1

Způsob přípravy N-methyl-2-/N-(benzyloxykarbonyl)-4-piperidyl/ethanaminu

a) Způsob přípravy N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-methyl-2-(4~pyridyl)ethanaminu

Roztok 10 g (74 mmol) N-methyl-2-(4-pyridyl)ethanaminu ve 250 ml dichlormethan se míchá za teploty 0°C a zpracuje s 16 g (74 mmol) di-terc.-butyldikarbonátu a 10,2 ml (74 mmol) triethylaminu. Směs se míchá po dobu 24 hodin, zředí chloroformem a promyje 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze se vysuší a odpaří, aby se dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

b) Způsob přípravy N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-methyl-2-(4-piperidyl)ethanaminu

Roztok 4,4 g (18 mmol) sloučeniny z přípravy la) ve 30 ml ethanolu se ochladí na teplotu 0 °C, upraví na hodnotu pH 5 přidáním 6 ml 3-normální kyseliny chlorovodíkové, zpracuje s 350 mg oxidu platičitého a třepe s vodíkem po dobu 2 hodin. Směs se filtruje přes vrstvu rozsivkové zeminy (Celíte®) a filtrát zpracuje se 4 ml 10% roztoku hydroxidu sodného a odpař, aby se dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

c) Způsob přípravy N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-methyl-2-/N-(benzyloxykarbonyl)-4-piperidyl/ethanaminu

Směs 4,4 g (18 mmol) sloučeniny z přípravy lb) a 2,5 ml (18 mmol) triethylaminu ve 100 ml dimethylformamidu se míchá za teploty 0 °C a zpracuje s 4,4 g (18 mmol) N-(benzyloxykarbonyl)sukcinimidu. Vzniklá směs se míchá za teploty místnosti po dobu 15 hodin, odpaří a výsledná reakční směs se chromatografuje (silikagel, 80% ethylacetát v hexanu). Dostane se 5,2 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. Výtěžek odpovídá 77 % teorie.

d) Způsob přípravy N-methyl-2-/N-(benzyloxykarbonyl)-4—piperidyl/ethanaminu

Roztok 2,2 g (5,8 mmol) sloučeniny z přípravy lc) v 15 ml dichlormethanu se zpracuje s 5 ml kyseliny trifluoroctové a míchá po dobu 2,5 hodiny. Směs se zředí chloroformem, promyje 10% roztokem hydroxidu sodného a organická fáze se promyje, vysuší a odpaří. Odparek se zpracuje s toluenem a odpaří. Tak se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

Příprava 2

Způsob přípravy N-/N-(benzyloxykarbonyl)(aminoiminomethyl)/-3-fluor-N-methylaniIinu

a) Způsob přípravy 2-fluor-4-(methylamino)benzonitrilu

K roztoku 3,8 g (28 mmol) 2-fluor-4-aminobenzonitrilu (Ind. Chim. Belg., 39, 490-500 /1974/) v 50 ml bezvodého triethyl-orthoformiátu se přidá 0,16 g (1,4 mmol) kyseliny trifluoroctové. Roztok se vaří pod zpětným chladičem po dobu 45 minut, ochladí a odpaří na žlutou krystalickou tuhou látku. K roztoku této tuhé látky v 60 ml absolutního ethanolu se za teploty 0 °C přidá 3,2 g (84 mmol) natriumborhydridu. Výsledná suspenze se míchá za teploty místnosti po dobu

-12CZ 292323 B6 minut, vaří pod zpětným chladičem po dobu 1 hodiny, ochladí a odpaří na bezbarvou tuhou látku. Získaný odparek se rozdělí mezi ether a vodu a vodná vrstva se extrahuje etherem. Organické fáze se spojí, promyjí roztokem chloridu sodného a vysuší síranem sodný. Odpařením se dostane bílá tuhá látka, která se suspenduje ve 200 ml 35% ethylacetátu v hexanu a filtruje, aby se dostalo 3,7 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. Výtěžek odpovídá 88 % teorie. Sloučenina má teplotu tání 110 až 112 °C.

'HNMR spektrum (400 MHz, CDC1₃)5 7,35 (m, 1H), 6,4 (dd, 1H), 6,3 (dd, 1H), 2,9 (s, 3H) ppm.

b) Způsob přípravy 2-fluor-4-(methylamino)-/N-(benzyloxykarbonyl/benzamidu

K suspenzi 3,8 g (72 mmol) chloridu amonného ve 40 ml bezvodého toluenu se za teploty 0 °C přikape roztok 72 mmol 2,0-molámího trimethylhliníku v toluenu. Roztok se míchá za teploty místnosti po dobu 45 minut. K tomuto roztoku se najednou přidá 3,6 g (24 mmol) sloučeniny z přípravy 2a) a výsledný roztok se zahřívá na teplotu 80 °C po dobu 22 hodin, ochladí a vylije na suspenzi 120 g silikagelu ve 350 ml chloroformu. Vzniklá suspenze se míchá po dobu 45 minut, filtruje a filtrační koláč se promyje 700 ml methanolu. Filtrát se odpaří na žlutou tuhou látku, která se rozpustí ve vodném tetrahydrofuranu. K vzniklému roztoku se za teploty 0 °C přidá 14 ml 5-molámího (75 mmol) roztoku hydroxidu sodného a poté se během 5 minut přikape 4,1 g (24 mmol) benzyl-chloroformiátu. Studený roztok se míchá po dobu 30 minut a odpaří. Výsledná vodná suspenze se extrahuje dichlormethanem a potom ethylacetátem. Organické vrstvy se spojí, vysuší síranem sodným a odpaří. Dostane se žlutá tuhá látka, která se čistá chromatografií (silikagel, 2% methanol v dichlormethanu). Dostane se 2,6 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bílého prášku. Výtěžek odpovídá 34 % teorie. Sloučenina má teplotu tání 128 až 130 °C.

‘HNMR spektrum (400MHz, CDC1₃)5 8,2 (t, 1H), 7,5 -7,25 (m, 5H), 6,4 (dd, 1H), 6,25 (dd, 1H), 5,2 (s, 2H), 4,6 (široký signál, 1H), 2,8 (d, 3H) ppm.

Příprava 3

Způsob přípravy N²-(terc.-butoxykarbonyl)-7-amino-l ,2,3,4-tetrahydroizochinolinu

a) Způsob přípravy 7-nitro-l,2,3,4-tetrahydroizochinolinu

Ke směsi 1,50 g (7,8 mmol) 7-nitro-l,2,3,4~tetrahydroizochinolinu v 15 ml tetrahydrofuranu se přidá 9,0 ml 2-molámího (18 mmol) boran-methylsulfídu v tetrahydrofuranu. Poté co je přidávání úplné, čirý roztok se vaří pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin. Roztok se ochladí na teplotu místnosti a potom se tímto roztokem probublává suchý chlorovodík do hodnoty pH 2. Roztok se vaří pod zpětným chladičem po dobu 90 minut, ochladí na teplotu 0 °C a zředí etherem. Výsledná bílá tuhá látka se filtruje a vysuší za sníženého tlaku. Dostane se 1,62 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. Výtěžek odpovídá 76 % teorie. MS(ES) m/e 179 [M + H]⁺.

b) Způsob přípravy N²-(terc.-butoxykarbonyl)-7-nitro-l,2,3,4-tetrahydroizochinolinu

Roztok 1,0 g (5,6 mmol) sloučeniny z přípravy 3a), 1,8 g (88,4 mmol) di-terc.-butyldikarbonátu a 342 mg (2,8 mmol) 4-(dimethylamino)pyridinu v 50 ml dichlormethanu se upraví na hodnotu pH 8,0 přidáním triethylaminu. Po 4 hodinách se výsledný roztok odpaří a odparek se vyjme ethylacetátem.Vzniklý roztok se extrahuje 5% kyselinou citrónovou, promyje roztokem chloridu sodného a vysuší síranem hořečnatým. Organická fáze se zředí hexanem, filtruje a filtrát se vysuší za sníženého tlaku. Dostane se 1,41 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. Výtěžek odpovídá 93 % teorie. MS(ES) m/e 279 [M + H]⁺.

-13CZ 292323 B6

c) Způsob přípravy N²-(terc.-butoxykarbonyl)-7-amino-l ,2,3,4-tetrahydroizochinolinu

Směs 1,41 g (5,1 mmol) sloučeniny z přípravy 3b) a 100 mg palladia na síranu bamatém v 25 ml methanolu se třepe s vodíkem za tlaku 309 kPa po dobu 90 minut. Směs se filtruje a filtrát odpaří. Dostane se 1,23 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. Celkový výtěžek odpovídá 90 % teorie. MS(ES) m/e 249 [M + H]⁺.

Příprava 4

Způsob přípravy N-(terc.-butoxykarbonyl)-2-(4-piperidyl)ethanaminu

Sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane za použití postupu z přípravy la) a lb) stím rozdílem, že se nahradí N-methyl-2-(4-pyridyl)ethanamin 2-(4-pyridyl)ethanaminem.

Příprava 5

Způsob přípravy (5-jodpentyl)benzenu

a) Způsob přípravy /5-(methansulfonyloxy)pentyl/benzenu

4,3 ml (55 mmol) methansulfonylchloridu se přikape během 2 minut k roztoku 8,4 ml (50 mmol) 5-fenylpentanolu a 14 ml (100 mmol) suchého triethylaminu ve 100 ml bezvodého dichlormethanu za teploty 0 °C pod argonovou atmosférou. Po 45 minutách se reakční směs zředí etherem a postupně promyje studenou 1-normální kyselinou chlorovodíkovou, vodou a roztokem chloridu sodného. Organická fáze se vysuší síranem hořečnatým a odpaří, aby se dostalo 12,09 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle žlutého oleje, který se použije bez dalšího čištění. Výtěžek odpovídá 100 % teorie.

^lHNMR spektrum (250 MHz, CDC1₃)5 7,10 - 7,35 (m, 5H), 4,22 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 2,98 (s, 3H), 2,63 (7, J = 7,6 Hz, 2H), 1,37 - 1,85 (m, 6H) ppm.

b) Způsob přípravy (5-jodpentyl)benzenu

Roztok 12,09 g (50 mmol) sloučeniny z přípravy 5a) a 8,99 g (60 mmol) jodidu sodného v 250 ml acetonu se vaří pod zpětným chladičem. Po 3 hodinách se reakční směs ochladí a filtruje skleněnou fritou a filtrát se odpaří. Odparek se rozpustí v etheru a promyje 1-normálním roztokem thiosíranu sodného. Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, odpaří a chromatografuje (silikagel, hexan), aby se dostalo 11,5 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bezbarvého oleje. Výtěžek odpovídá 84 % teorie.

'HNMR spektrum (250 MHz, CDC1₃)5 7,O5- 740 (m, 5H), 3,18 (t, J= 7,0 Hz, 2H), 2,62 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,79 - 1,93 (m, 2H), 1,37 - 1,72 (m, 4H) ppm. IČ (CC1₄) 3020, 2930, 2850, 1495, 1451,1200 cm'¹. MS(DCI/NH₃) m/e 292,1 [M + NH₄]⁺.

Příprava 6

Způsob přípravy N-methyl-3-/N-(terc -butoxykarbonyl)piperid-4-yl/propanaminu

2,0 g (8,3 mmol) sloučeniny z přípravy la) se rozpustí v 25 ml dichlormethanu, zpracuje s 0,86 g (8,6 mmol) triethylaminu a míchá za teploty 0 °C. Výsledná směs se zpracuje s 2,5 g (8,9 mmol) anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové, míchá za teploty 0 °C po dobu 30 minut a pomalu

-14CZ 292323 B6 přidá k roztoku methylaminu v dichlormethanu za teploty 0 °C. Výsledná směs se míchá a nechá ohřát na teplotu místnosti během 1 hodiny. Reakční směs se potom odpaří a odparek se podrobí velmi rychlé chromatografii (silikagel, 5 až 20% methano) v chloroformu). Dostane se 2,8 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. MS(ES) m/e 257 [M + H]⁺.

Příprava 7

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-[7-[/4-(aminoiminomethyl)fenyl/amino]karbonyl]-4-(2-fenylethy 1)— 1,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

a) Způsob přípravy terc.-butyl-(3-methyl-4-nitrobenzoátu)

12,8 ml (100 mmol) benzensulfonylchloridu se rychle přidá k roztoku 9,06 g (50 mmol) kyseliny 3-methyl-4-nitrobenzoové ve 25 ml suchého pyridinu za teploty 40 °C. Reakce je mírně exotermická. Zakalený oranžo\ý roztok se míchá po dobu 5 minut a potom se přidá 4,7 ml (50 mmol, 1 ekvivalent) terc.-butanolu. Po 1 hodině se oranžová směs s odstínem do červena vylije na 200 ml ledu a vody a výsledná směs se energicky míchá po dobu 1 hodiny. Tuhá látka se zachytí při odsávání filtrací, promyje vodou a rozpustí ve 200 ml toluenu. Roztok se vysuší síranem hořečnatým a filtruje přes vrstvu silikagelu, která se promyje toluenem. Odpařením se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu, jako žlutý olej o hmotnosti 9,67 g, který krystaluje za sníženého tlaku. Výtěžek odpovídá 82 % teorie.

b) Způsob přípravy terc.-butyl-[4—nitro-3-/N-(2-fenethyl)aminomethyl/benzoátu]

Směs 4,75 g (20 mmol) sloučeniny z přípravy 7a), 3,92 g (2 mmol) N-bromsukcinimidu a 0,24 g (1 mmol) benzoylperoxidu v 50 ml chloridu uhličitého se vaří pod zpětným chladičem. Po 16 hodinách se směs filtruje k odstranění sukcinimidu a filtrát se odpaří na žlutý olej. Benzylbromid se použije bez čištění. Surový benzylbromid, získaný výše, se rozpustí v 50 ml suchého tetrahydrofuranu a k vzniklému roztoku se přidá 2,52 g (30 mmol) hydrogenuhličitanu sodného. Směs se energicky míchá a potom se přidá 3,8 ml (30 mmol) fenethylaminu. Barva roztoku slabě ztmavne na sytě žlutou. Po několika minutách se směs velmi zakalí. Za 4 hodiny se reakční směs odpaří a odparek se rozdělí mezi 50 ml vody a 100 ml diethyletheru. Oddělením fází, extrakcí diethyletherem, vysušením síranem hořečnatým a odpařením se dostane žlutý olej. Chromatografie (silikagel, 20% ethylacetát v hexanu) poskytne 2,86 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, která je ve formě žlutého oleje. Výtěžek odpovídá 40 % teorie.

c) Způsob přípravy terc.-butyl-[4-nitro-3-/N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(2-fenethyl)aminomethyl/benzoátu]

K roztoku 2,86 g (8,02 mmol) sloučeniny z přípravy 7b) ve 30 ml chloroformu se najednou přidá 2,10 g (9,62 mmol) di-terc.-butyldikarbonátu za teploty místnosti. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 2,5 hodiny a potom se 30 minut vaří pod zpětným chladičem. Odpařením a chromatografíí (silikagel, 15% ethylacetát v hexanu) se dostane 3,70 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, ve formě žlutého oleje.

d) Způsob přípravy terc.-butyl-[4-amino-3-/N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(2-fenethyl)aminomethyl/benzoátu]

Směs 2,66 g (5,83 mmol) sloučeniny z přípravy 7c), 0,62 g 10% palladia na uhlí (obsaženo 0,85 mmol palladia) a 60 ml ethylacetátu se třepe pod vodíkovou atmosférou za tlaku 344 kPa. Po 3 hodinách se směs filtruje k odstranění katalyzátoru a filtrát se odpaří do sucha. Chromatografie (silikagel, 20% ethylacetát v hexanu) poskytne sloučeninu pojmenovanou v nadpisu ve formě žlutého pěnovitého oleje, který pomalu částečně ztuhne. Dostane se 2,26 g sloučeniny. Výtěžek odpovídá 91 % teorie.

-15CZ 292323 B6

e) Způsob přípravy terc.-butyl-[(R,S)-4-/2-(l,4-dimethoxy-l,4-dioxo-2-butyl)amino/-3-/N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(2-fenethyl)aminomethyl/benzoátu]

Směs 1,98 g (4,64 mmol) sloučeniny z přípravy 7d), 1,14 ml (9,28 mmol) dimethylacetylendikarboxylátu a 9,3 ml methanolu se vaří pod zpětným chladičem pod argonovou atmosférou. Dostane se homogenní roztok, který se po 1 hodině odpaří na žlutý olej. Chromatografie (silikagel, směs ethylacetátu a hexanu v poměru 1:1) poskytne žlutý olej, který se použije bez dalšího Čištění. TLC Rf 0,61 (hlavní produkt), Rf 0,41 (vedlejší produkt) (30% ethylacetát v hexanu).

Žlutý olej získaný výše se rozpustí v 93 ml ethylacetátu a uvede do styku s 1,48 g (1,39 mmol palladia, 0,3 ekvivalentu) 10% palladia na uhlí. Směs se třepe za teploty místnosti pod vodíkovou atmosférou při tlaku 309 kPa po dobu 5 hodin a potom se katalyzátor odfiltruje. Odpařením filtrátu se dostane bezbarvý olej, kteiý se chromatografuje (silikagel, 20% ethylacetát v hexanech). Ve formě bezbarvého oleje se dostane 2,49 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. Výtěžek odpovídá 94 % teorie.

f) Způsob přípravy kyseliny methyl (R,S)-7-karboxy-4-(2-fenethyl)-l,3,4,5-tetrahydro-3oxo-2H-l ,4-benzodiazepin-2-octové ml kyseliny trifluoroctové se přidá najednou k roztoku 2,11 g (3,70 mmol) sloučeniny z přípravy 7e) v 9 ml suchého methylenchloridu za teploty 0 °C pod argonovou atmosférou. Výsledný světle žlutý roztok se ohřeje na teplotu místnosti, míchá po dobu 2 hodin a odpaří. Odparek se rozpustí v toluenu a znovu odpaří k odstranění zbytkové kyseliny trifluoroctové. Výsledný světle žlutý olej se rozpustí v 18,5 ml bezvodého methanolu a roztok se ochladí na teplotu 0 °C pod argonovou atmosférou. K získanému roztoku se během 5 minut přikape čerstvě připravený roztok

18.5 ml 1,0-molámího (18,5 mmol) methoxidu sodného v methanolu. Ledová lázeň se odstraní a žlutý roztok se nechá ohřát na teplotu místnosti během 10 minut a potom se vaří pod zpětným chladičem pod argonovou atmosférou. Po 90 minutách se reakční směs ochladí ledem a reakce se přeruší přidáním 2,1 ml (37 mmol) ledové kyseliny octové. Směs se odpaří a odparek se rozdělí mezi 50 ml ethylacetátu a 50 ml vody. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se důkladně extrahuje ethylacetátem v podílech o objemu 50 ml, až se veškerá tuhá látka rozpustí. Spojené organické vrstvy se vysuší síranem hořečnatým a odpařují, až začne krystalizace. Výsledná směs se důkladně ochladí ledem. Filtrací za odsávání se dostane 1,0 g sloučeniny pojmenované v nadpisu jako bezbarvých krystalů. Výtěžek odpovídá 71 % teorie.

Matečné louhy se odpaří a odparek se chromatografuje (silikagel, 10% methanol v chloroformu se stopami kyseliny octové), aby se dostal další surový materiál. Rekrystalizaci z ethylacetátu obsahujícího malé množství methanolu se dostane dodatečné množství čisté sloučeniny pojmenované v nadpisu, o hmotnosti 1,23 g. Celkový výtěžek izolované sloučeniny odpovídá 87% teorie.

g) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-[7-[/4-(N-(benzyloxykarbonyl)aminoiminomethyl)fenyl/amino]karbonyl]-l,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-2H-l,4-benzodiazepin-2-acetátu]

95.6 mg (0,25 mmol) sloučeniny z přípravy 7f) se vaří pod zpětným chladičem s 2,5 ml sulfonylchloridu po dobu 15 minut a žlutý roztok se odpaří do sucha. Získaná žlutá olej ovitá tuhá látka se rozpustí v 2,5 ml dichlormethanu a k vzniklému roztoku se přidá 134,7 mg (0,5 mmol) 4-/N(benzyloxykarbonyl)aminoiminomethyl/anilinu. Směs se ochladí na ledové lázni pod argonovou atmosférou a přikape se kní 0,061 ml (0,75 mmol) bezvodého pyridinu. Výsledná žlutá směs s odstínem do oranžova se ohřeje na teplotu místnosti. Po 90 minutách se reakce ukončí přidáním 5 ml 5% hydrogenuhličitanu sodného a reakční směs se důkladně extrahuje ethylacetátem. Vysušením síranem sodným, odpařením, chromatografií (silikagel, směs ethylacetátu a chloroformu v poměru 3:2, s obsahem 0,5 % methanolu) a preparativní TLC smíšených frakcí z chromatogra

-16CZ 292323 B6 fie (stejný rozpouštědlový systém) poskytne 110,2 mg sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle žlutého oleje. Výtěžek odpovídá 70 % teorie.

h) Způsob přípravy kyseliny (R,S)-[7-[/4-(aminoiminomethyl)fenyl/amino]karbonyl]-4-(2fenethyl)-l ,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

Roztok 87,0 mg (0,1373 mmol) sloučeniny z přípravy 7g) ve 4,6 ml směsi ethylacetátu a methanolu v poměru 1:1, obsahující 29,2 mg 10% (0,0275 mmol) palladia na uhlí a 0,011 ml (0,137 mmol) kyseliny trifluoroctové se energicky míchá pod vodíkovou atmosférou. Po 1 hodině se směs filtruje k odstranění katalyzátoru a filtrační vrstva se důkladně promyje ethylacetátem a směsí ethylacetátu s methanolem. Odpařením roztoku se dostane 83,0 mg žluté olejovité tuhé látky. Tato látka se rozpustí v 4,6 ml methanolu a ke vzniklému roztoku se přidá 0,41 ml 1,0— normálního (0,41 mmol) roztoku hydroxidu sodného. Světle žlutý roztok se míchá za teploty místnosti přes noc, ochladí na teplotu 0 °C a okyselí 0,106 ml (1,373 mmol) kyseliny trifluoroctové. Roztok se odpaří do sucha a poskytne žlutý olej s odstínem do oranžova. Tato látka se čistí preparativní vysokotlakou kapalinovou chromatografii (PRP-1®, gradient, A: 5 % acetonitrilu ve vodě, s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové, po dobu 5 minut, zvýšení na B: 23 % acetonitrilu ve vodě, s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové, po dobu 5 minut, A na B během 24 minut). Frakce obsahující čistou látku se spojí a odpařují, až se vyskytne sraženina. Tuhá látka se rozpustí přídavkem minimálního množství acetonitrilu a roztok se lyofilizuje. Dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu jako slabě nažloutlý prášek. Výtěžek odpovídá 50 % teorie.

Příprava 8

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-[[/4-(aminoiminomethyl)fenyl/methylamino]karbonyl]-

2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)^lH-2-benzazepin-4-octové

a) Způsob přípravy terc.-butyl-(3-brom-4-methylbenzoátu) ml (200 mmol) dimethylformamid-dimethylacetalu se přikape během 15 minut k suspenzi 10,75 g 85% (42,5 mmol) kyseliny 3-bronwF-methylbenzoové ve 100 ml toluenu za teploty 70 °C. Reakční směs se míchá za teploty 70 až 80 °C dalších 30 minut, potom se ochladí a postupně promyje vodou a 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vysuší síranem sodným. Směs se filtruje přes vrstvu silikagelu a filtrační vrstva se promyje toluenem. Filtrát se odpaří a dostane se 8,0 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, kterou tvoří žlutý olej. Výtěžek odpovídá 69 % teorie. TLC (toluen) Rf 0,68.

b) Způsob přípravy terc.-butyl-/3-brom-4-(brommethyl)benzoátu/

1,36 g (5 mmol) sloučeniny z přípravy 8a), 0,98 g (5,5 mmol) N-bromsukcinimidu a 61 mg (0,25 mmol) benzoylperoxidu v 25 ml chloridu uhličitého se vaří pod zpětným chladičem. Po 4 hodinách se směs ochladí a filtruje a filtrát se odpaří. Výsledná látka se použije bez čištění. TLC Rf 0,39 (směs ethylacetátu a hexanu v poměru 5:95).

c) Způsob přípravy terc.-butyl-[3-brom-4-[/(2-fenethyl)amino/methyl]benzoátu]

Sloučenina z přípravy 8b) se rozpustí ve 25 ml suchého etheru a ke vzniklému roztoku se přidá 1,9 ml (15 mmol) fenethylaminu. Přidávání je doprovázeno slabě exotermní reakcí a reakční směs se zakalí. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc, potom se zředí 75 ml etheru a postupně promyje 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a 25 ml roztoku chloridu sodného. Vysušením síranem sodným, odpařením a chromatografii na silikagelu (33% ethylacetát v hexanu) se dostane 1,26 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, která je ve formě světle žlutého oleje. Výtěžek odpovídá 65 % teorie. TLC R_f 0,42 (směs ethylacetátu a hexanu v poměru 30:70).

-17CZ 292323 B6

d) Způsob přípravy terc.-butyl-[3-brom-4-[/(N-(2-fenethyl)-N-terc.-butoxykarbonyl/amino]methyl]benzoátu]

845 mg (3,88 mmol) di-terc.-butyldikarbonátu se přidá najednou k roztoku 1,26 g (3,23 mmol) sloučeniny z přípravy 8c) v 16 ml chloroformu za teploty místnosti. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 90 minut a potom se vaří pod zpětným chladičem po dobu 30 minut. Odpařením a chromatografií (silikagel, 10% ethylacetát v hexanu) se dostane 1,57 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bezbarvého oleje, který za sníženého tlaku tuhne. Výtěžek odpovídá 99 % teorie. TLC Rf 0,49 (směs ethylacetátu a hexanu v poměru 10:90).

e) Způsob přípravy methyl-[3-methoxykarbonyl-4-[[5-(terc.-butoxykarbonyl)-2-/(N-(2fenethyl)-N-terc.-butoxykarbonyl)amino/methyl]fenyl]-2-butenoátu] a methyl-[3-methoxykarbonyl-4-[[5-(terc.-butoxykarbonyl)-2-/(N-(2-fenethyl}-N-terc.butoxykarbonyl)amino/methyl]fenyl]-3-butenoátu]

Směs 1,34 g (2,73 mmol) sloučeniny z přípravy 8d), 648 mg (4,10 mmol) dimethylitakonátu,

30,7 mg (0,14 mmol) octanu palladnatého, 83,2 mg (0,27 mmol) tri-o-tolylfosfinu, 0,76 ml (5,46 mmol) suchého triethylaminu a 27 ml suchého acetonitrilu se zbaví kyslíku v jediném cyklu snížení tlaku a propláchnutí argonem a potom se reakční směs vaří pod zpětným chladičem pod argonovou atmosférou. Po 6 hodinách se reakční směs ochladí a přidá se k ní dalších 30,7 mg (0,14 mmol) octanu palladnatého a 83,2 mg (0,27 mmol) tri-o-tolylfosfinu. Směs se zbaví kyslíku ve třech cyklech snížení tlaku a propláchnutí argonem a potom se reakční směs vaří pod zpětným chladičem pod argonovou atmosférou po dobu 16,5 hodiny. Reakční směs se odpaří, odparek se rozpustí v etheru a promyje vodou a roztokem chloridu sodného. Vysušení síranem hořečnatým, odpaření a chromatografie (silikagel, 15% ethylacetát v hexanu a potom 40% ethylacetát v hexanu) poskytne surovou sloučeninu pojmenovanou v nadpisu, jako žlutý olej. Odparek se znovu chromatografuje (silikagel, 25% ethylacetát v hexanu) a dostane se 1,36 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle žlutého oleje. Výtěžek odpovídá 88 % teorie. Tato sloučenina se použije bez oddělení z izomemích reakčních produktů.

f) Způsob přípravy methyl-[3-methoxykarbonyl-4-[5-(terc.-butoxykarbonyl)-2-[/(N-(2fenethyl)-N-terc.-butoxykarbonyl)amino/methyl]fenyl]butanoátu]

1,18 g (2,08 mmol) sloučeniny z přípravy 8e) se rozpustí v 21 ml bezvodého methanolu a k roztoku se přidá 0,21 g hydroxidu palladnatého na uhlí. Výsledná směs se třepe za teploty místnosti pod vodíkovou atmosférou při tlaku 323 kPa po dobu 2 hodin a potom se filtruje přes vrstvu rozsivkové zeminy (Celíte®). Filtrát se odpaří a znovu podrobí stejným reakčním podmínkám. Po dalších 5,5 hodinách se směs filtruje jak bylo uvedeno výše a filtrát se odpaří. Dostane se 1,13 g sloučeniny pojmenované v nadpisu ve formě bezbarvého oleje. Výtěžek odpovídá 95 % teorie.

g) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-lH2-benzazepin-4-acetátu]

K zakalenému roztoku 1,30 g (2,28 mmol) sloučeniny z přípravy 8f) v 11 ml dichlormethanu se přidá najednou 11 ml kyseliny trifluoroctové za teploty 0 °C pod argonovou atmosférou. Výsledný světle žlutý roztok se ohřeje na teplotu místnosti, míchá po dobu 2 hodin a odpaří. Odparek se ještě jednou odpaří z 1,2-dichlorethanu k odstranění zbytků kyseliny trifluoroctové a dostane se methyl-[3-methoxykarbonyl-4-[5-karboxy-2-/(N-(2-Ť2-fenethyl)amino)methyl/fenyljbutanoát], jako světle zelený olej.

-18CZ 292323 B6

Olej se rozpustí v 11 ml bezvodého methanolu a roztok se ochladí na teplotu 0 °C pod argonovou atmosférou. K roztoku se přidá 11 ml čerstvého 1,0-molámího (11 mmol) roztoku methoxidu sodného v methanolu a ledová lázeň se odstraní. Žlutý roztok se nechá ohřát na teplotu místnosti během 5 minut a vaří pod zpětným chladičem pod argonovou atmosférou. Po 3 hodinách se reakční směs ochladí na ledu a reakce se přeruší přidáním 1,3 ml (22,8 mmol) ledové kyseliny octové. Vzniklá reakční směs se zředí 100 ml ethylacetátu a promyje vodou. Spojené vodné vrstvy se znovu extrahují ethylacetátem a spojené ethylacetátové vrstvy se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří na světle zelený odparek. Chromatografie (silikagel, směs 10% methanolu, chloroformu a 0,1 % kyseliny octové) poskytne sloučeninu pojmenovanou v nadpisu jako žlutou pěnu. Krystalizací z methanolu obsahujícího malé množství chloroformu se dostane 528,2 mg sloučeniny pojmenované v nadpisu jako bělavé tuhé látky. Výtěžek odpovídá 61 % teorie. Sloučenina má teplotu tání 214 až 216 °C. TLC Rf 0,49 (směs methanolu a chloroformu v poměru 10:90).

h) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-[[/4-(N-(benzyloxykarbonyl)aminoiminomethyl)fenyl/methylamino]karbonyl]-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-lH-2-benzazepin-4acetátu]

117,9 mg (0,31 mmol) sloučeniny z přípravy 8g) se vaří pod zpětným chladičem s 3 ml thionylchloridu po dobu 15 minut a vzniklý žlutý roztok se odpaří. Odparek se dále odpaří se 3 ml suchého toluenu, aby se odstranily zbytky thionylchloridu. Výsledná látka se rozpustí v 0,5 ml suchého dichlormethanu a vzniklý roztok se přikape během 1 až 2 minut k roztoku 263 mg (0,93 mmol) 4-(methylamino)-(N-benzyloxykarbonyl)benzamidinu za teploty 0 °C pod argonovou atmosférou. Výsledná žlutá směs se ohřeje na teplotu místnosti a míchá po dobu 30 minut, zředí se ethylacetátem a promyje 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Vysušením síranem sodným, odpařením a chromatografií (silikagel, 10% ethylacetát v toluenu) se dostane 174,8 mg sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako slabě nažloutlého oleje. Výtěžek odpovídá 87 % teorie. TLC Rf 0,45 (směs toluenu a ethylacetátu v poměru 9:1).

i) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-[[/4-(aminoiminomethyl)fenyl/methylamino]karbonyl]-

2.3.4.5- tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-lH-2-benzazepin—4-acetátu] mg (0,054 mmol) 10% palladia na uhlí se přidá opatrně k roztoku 174,8 mg (0,27 mmol) sloučeniny z přípravy 8h) a 0,021 ml (0,27 mmol) kyseliny trifluoroctové v 9 ml směsi ethylacetátu a methanolu v poměru 1:1 a směs se energicky míchá pod vodíkovou atmosférou (tlaku balonu). Po 90 minutách se směs filtruje přes vrstvu rozsivkové zeminy (Celíte®) a filtrační vrstva se důkladně promyje ethylacetátem a methanolem. Odpařením se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

j) Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-[[/4-(aminoiminomethyl)fenyl/methylamino]karbonyl]-

2.3.4.5- tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-l H-2-benzazepin-4-octové

Sloučenina z přípravy 8i) se rozpustí v 9 ml methanolu a k vzniklému roztoku se přidá 0,81 ml 1,0-normálního (0,81 mmol) roztoku hydroxidu sodného. Vzniklý roztok se míchá za teploty místnosti přes noc a potom se odpaří. Odparek se rozpustí ve 3 ml vodného acetonitrilu, ochladí na teplotu 0 °C a okyselí 0,21 ml (2,7 mmol) kyseliny trifluoroctové. Slabě nažloutlý roztok se odpaří a odparek se čistí velmi rychlou chromatografií na reverzní fázi (C-18 silikagel, 25 % acetonitrilu ve vodě s obsahem kyseliny trifluoroctové). Odpařením a lyofílizací se dostane 123 mg sloučeniny pojmenované v nadpisu jako bezbarvého prášku. Výtěžek odpovídá 67 % teorie.

Dále uvedené příklady ilustrují způsob přípravy farmakologicky aktivních sloučenin a prostředků podle tohoto vynálezu.

-19CZ 292323 B6

Příklad 1

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-8-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

a) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-8-[[/2-(N-(benzyloxykarbonyl)-4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-2,3,4,5-tetrahydro~4-methyl-3-oxO“lH-l,4-benzodiazepin-2-acetátu]

2,0 mmol methyl-/(R,S)-8-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetátu/rozpuštěného ve 30 ml dimethylformamidu se zpracují s 2,2 mmol N-ethyl-N’(dimethylaminopropyl)karbodiimidu a 285 mg (2,1 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a výsledná reakční směs se upraví na hodnotu pH 7 působením triethylaminu. Směs se zpracuje s 2,4 mmol N-methyl-2-/N-(benzyloxykarbonyl)-4-piperidyl/ethanaminu, míchá za teploty místnosti po dobu 48 hodin, odpaří a odparek se čistí velmi rychlou chromatografíí, aby se dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

‘H NMR spektrum (DMSO-d₆) δ 6,5 - 7,5 (m, 7H), 2,6 - 4,1 (m, 24H), 0,9 - 1,8 (m, 7H) ppm. MS(ES) m/e 551 [Μ + H]⁺, [M + HCOf]- 595.

b) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-8-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino)karbonyl]-l H-l ,4-benzodiazepin-2-acetátu]

Roztok 0,06 mmol sloučeniny z příkladu la) v 25 ml methanolu, obsahující 0,6 ml 1,0-molámího chlorovodíku v etheru, se zpracuje s 10% palladiem na uhlí a směs se třepe ve vodíkové atmosféře za tlaku 275 kPa po dobu 1 hodiny. Vzniklá směs se filtruje a odpaří na sloučeninu pojmenovanou v nadpisu. MS(ES) m/e 417 [M + H]⁺.

c) Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-8-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

0,26 mmol sloučeniny z příkladu 1 lb) se rozpustí v 9 ml methanolu a ke vzniklému roztoku se přidá 0,81 ml 1,0-normálního (0,81 mmol) roztoku hydroxidu sodného. Roztok se míchá za teploty místnosti přes noc a odpaří. Odparek se rozpustí ve 3 ml vodného acetonitrilu, ochladí na teplotu 0 °C a okyselí 0,21 ml (2,7 mmol) kyseliny trifluoroctové. Roztok se odpaří a odparek čistí velmi rychlou chromatografíí na reverzní fázi (C-18 silikagel, směs acetonitrilu a vody s obsahem kyseliny trifluoroctové). Odpařením a lyofilizací se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

MS(ES) m/e 403 [M + H]⁺. ^JH NMR spektrum (DMSO-d₆) 5 8,1- 8,6 (m, 2H), 6,4- 7,0 (m,3H), 5,9- 6,0 (m, 1H), 5,4- 5,5 (d, 1H), 5,0- 5,1 (m, 1H), 3,7-3,9 (d, 1H), 1,0- 3,5 (m, 22H) ppm.

Analýza pro Ο₂₄Η₃₅ 25N4O8.875:

vypočteno: C 48,91 %, H 5,71 %, N 9,51 %, nalezeno: C 49,19 %, H 5,64 %, N 9,42 %.

Příklad 2

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-izopentyl-3-oxo-8-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

-20CZ 292323 B6

a) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-8-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-4-izopentyl-3-oxo-lH1,4-benzodiazepin-2-acetátu]

Bezvodým izopropylaminem se probublává 200 ml bezvodého dimethylformamidu za teploty 0 °C po dobu 15 minut. Ke studenému aminovému roztoku se přikape roztok 5,0 g (15,8 mmol) terc.-butyl-(4-brommethyl-3-nitrobenzoátu) (Int. J. Peptide Res., 36, 31 /1990/) v 10 ml dimethylformamidu. Roztok se míchá za teploty místnosti po dobu 30 minut a vylije se do vody. Směs se extrahuje ethylacetátem a spojené organické vrstev se promyjí vodou, vysuší síranem sodným a odpaří na žluto hnědý olej. Olej se čistí chromatografií na silikagelu. Dostane se terc.-butyl-/4-(izopentylamino)methyl-3-nitrobenzoát/.

Roztok 5,3 mmol terc.-butyl-/4-(izopentylamino)methyl-3-nitrobenzoátu/, 2,1 g (21 mmol) triethylaminu a 3,44g (15,8 mmol) di-terc.-butyldikarbonátu v 50 ml tetrahydrofuranu se míchá po dobu 24 hodin. Směs se odpaří a odparek se rozpustí ve 200 ml ethylacetátu. Vzniklý roztok se extrahuje vodou, vysuší síranem sodným a odpaří. Dostane se žlutý olej, který se čistí chromatograficky na silikagelu, aby se získal terc.-butyl-[4-/N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(izopentyl)aminomethyl/-3-nitrobenzoát).

Roztok 2,27 mmol terc.-butyl-[4-/N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(izopentyl)aminomethyl/-3nitrobenzoátu] ve 100 ml ethanolu, obsahující 0,5 g 10% palladia na uhlí, se hydrogenuje za tlaku vodíku 275 kPa. Po 30 minutách se směs filtruje a odpaří. Tak se dostane terc.-butyl-[3-amino4-/N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(izopentyl)aminomethyl/-3-nitrobenzoát].

K roztoku 2,7 mmol terc.-butyl-[3-amino-4-/N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(izopentyl)aminomethyl/-3-nitrobenzoátu] v 50 ml methanolu se přidá 0,34 g (2,4 mmol) dimethyl-acetylendikarboxylátu. Vzniklý roztok se vaří pod zpětným chladičem po dobu 1 hodiny, zpracuje s 0,17 g (1,2 mmol) dimethyl-acetylendikarboxylátu a vaří pod zpětným chladičem další 1 hodinu. Směs se ochladí, filtruje, odpaří a výsledný žlutý olej se chromatografuje na silikagelu. Získá se terc.-butyl-[(E,Z)-4-/N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(izopentyl)aminomethyl/-3-/2-( 1,4-dimethoxy-l,4-dioxo-2-butenyl)amino/benzoát].

Roztok terc.-butyl-[(E,Z)-4-/N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(izopentyl)aminomethyl/-3-/2(l,4-dimethoxy-l,4-dioxo-2-butenyl)amino/benzoátu] v 50 ml methanolu, obsahující 0,5 g 10% palladia na uhlí, se hydrogenuje za teploty místnosti při tlaku vodíku 309 kPa. Po 4 hodinách se suspenze filtruje a odpaří, aby se dostal světle žlutý olej. Odparek se čistí chromatograficky na silikagelu. Získá se terc.-butyl-[4-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(izopentyl)aminomethyl/-3-/2(1,4-dimethoxy-l ,4-dioxo-2-butyl)amino/benzoát].

K roztoku 0,3 mmol terc.-butyl-[4-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(izopentyl)aminomethyI/-3-/2(l,4-dimethoxy-l,4-dioxo-2-butyl)amino/benzoátu] v 10 ml dichlormethanu se přidá 50 ml kyseliny trifluoroctové. Směs se míchá po dobu 4 hodin a odpaří. Tak se dostane kyselina 4-/N(izopentyI)aminomethyl/-3-[N-/2-(l ,4-dimethoxy-l ,4-dioxo-2-butyl)-N-(methyl)amino/benzoová.

Kyselina benzoová se rozpustí ve 20 ml methanolu a zpracuje s 0,2 ml 25% roztoku (0,87 mmol) methoxidu sodného v methanolu. Směs se zahřívá na teplotu 50 °C po dobu 2 hodin, ochladí a zpracuje s 2 ml 1-molámího chlorovodíku v etheru. Směs se odpaří a dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

b) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-izopentyl-3-oxo-8-[/(2-(4-pyridyl)ethy l)methylamino/karbonyl]-1 Η-1,4-benzodiazepin-2-acetátu]

2,0 mmol sloučeniny z příkladu 2a) rozpuštěné ve 30 ml dimethylformamidu se zpracují se 2,2 mmol N-ethyl-N'-(dimethylaminopropyl)karbodiimidu a 285 mg (2,1 mmol) 1-hydroxy

-21 CZ 292323 B6 benzotriazolu. Získaná směs se zpracuje s 2,4 mmol N-methyl-2-(4-pyridyl)ethanaminu, míchá za teploty místnosti po dobu 48 hodin, odpaří a odparek se čistí velmi ry chlou chromatografií, aby se dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

c) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-A-izopentyl-3-oxo-8-[/2-(4-piperidyl)ethyl)methylamino/karbonyl]-1 Η-1,4-benzodiazepin-2-acetátu]

Roztok 0,2 mmol sloučeniny z příkladu 2b) a 0,6 ml 0,6-normální kyseliny chlorovodíkové ve 30 ml methanolu se uvede do styku s 5 mg oxidu platičitého a hydrogenuje za tlaku 309 kPa přes noc. Směs se filtruje a odpaří, aby se dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu. MS(ES) m/e 473 [M + H]⁺.

d) Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-izopentyl-3-oxo-8-[/(2-(4-piperidyl)ethyl)methylamino/karbonyl]-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

0,27 mmol sloučeniny z příkladu 2c) se rozpustí v 9 ml methanolu a přidá se 0,81 ml 1,0-normálního (0,81 mmol) roztoku hydroxidu sodného. Vzniklý roztok se míchá za teploty místnosti přes noc a potom se odpaří. Odparek se rozpustí ve 3 ml vodného acetonitrilu, ochladí na teplotu 0 °C a okyselí 0,21 ml (2,7 mmol) kyseliny trifluoroctové. Roztok se odpaří a odparek se čistí velmi rychlou chromatografií na reverzní fázi, aby se dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu. MS(ES) m/e 459 [M + H]⁺.

Příklad 3

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-8-[[/4-(aminoiminomethyl)-3-fluorfenyl/methylamino]karbonyl]-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-lH-l,4-benzodiazepin-2-octové

a) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-8-[[/4-(N-(benzyloxykarbonyl)aminoiminomethyl)-3fluorfenyl/methylamino]karbonyl]-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetátu]

Sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane za použití způsobu z přípravy 8h) s tím rozdílem, že se nahradí methyl-[(R,S)-8-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-lH-l,4benzodiazepin-2-acetátem] sloučenina z přípravy 8g) a 2-fluor-4-(methylamino)-(N-benzyloxykarbonyl)benzamidinem 4-(methylamino)-(N-benzyloxykarbonyl)benzamid.

‘HNMR spektrum (400 MHz, CDC1₃) δ 8,15 (t, 1H), 7,4 -7,15 (m, 8H), 7,1 (d, 2H), 6,9 (dd, 1H), 6,75 (dd, 1H), 6,65 (dd, 1H), 6,6 (d, 1H), 6,4 (d, 1H), 5,25 (d, 1H), 5,15 (s, 2H), 4,9 (q, 1H), 4,25 (d, 1H), 3,7 (s, 3H), 3,65 (m, 2H), 3,55 (d, 1H), 3,45 (s, 3H), 2,95 (dd, 1H), 2,7 (m, 2H), 2,6 (dd, 1H) ppm.

b) Způsob přípravy kyseliny (R,S)-8-[[/4-(aminoiminomethyl)-3-fluorfenyl/methylamino]karbonyl]-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-lH-l,4-benzodiazepin-2-octové

Roztok 0,06 mmol sloučeniny z příkladu 3a) ve 25 ml methanolu, obsahující 0,6 ml 1,0-molámího chlorovodíku v etheru, se uvede do styku s 0,06 g 10% palladia na uhlí a směs se třepe ve vodíkové atmosféře za tlaku 275 kPa po dobu 1 hodiny. Směs se potom filtruje a odpaří za vzniku methylesteru sloučeniny pojmenované v nadpisu.

0,27 mmol methylesteru se rozpustí v 9 ml methanolu a přidá se 0,81 ml 1,0-normálního (0,81 mmol) roztoku hydroxidu sodného. Roztok se míchá za teploty místnosti přes noc a potom odpaří. Odparek se rozpustí ve 3 ml vodného acetonitrilu, ochladí na teplotu 0 °C a okyselí 0,21 ml (2,7 mmol) kyseliny trifluoroctové. Roztok se odpaří a odparek se čistí velmi rychlou chromatografií na reverzní fázi, aby se dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

-22CZ 292323 B6 ’HNMR spektrum (400 MHz, CD₃OD) 5 7,75 (t, 1H). 7,4 (d. 1H), 7,25- 7,05 (m, 6H), 6,8 (d, 1H), 6,7 (s, 1H), 6,5 (d, 1H), 5,35 (d, 1H), 5,05 (m. 1H). 3,8 (d, 1H), 3,65 (m, 2H), 3,4 (s, 3H), 2,9 (dd, 1H), 2,7 (m, 2H), 2,6 (dd, 1H) ppm. MS(ES) m/e 518,0 [M + H]⁺.

Příklad 4

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-8-/( 1,2,3,4-tetrahydro-7-izochinolyl)amino/karbonyl-2,3,4,5tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

a) Způsob přípravy kyseliny methyl (R,S)-8-[/N-(terc.-butoxykarbonyl)-l,2,3,4-tetrahydro7-izochinolyl/amino]karbonyl]-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-lH-l,4-benzodiazepin-2-octové

2,0 mmol methyl-[(R,S)-8-karboxy-l ,2,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-3H-l ,4-benzodiazepin-2-acetátu] se rozpustí ve 30 ml dimethylformamidu a zpracuje s 2,2 mmol N-ethyl-N'(dimethylaminopropyl)karbodiimidu a 285 mg (2,1 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu. Směs se zpracuje s 2,4 N²-(terc.-butoxykarbonyl)-7-amino-l,2,3,4-tetrahydroizochinolinu, míchá za teploty místnosti po dobu 48 hodin a odparek se vyčistí velmi rychlou chromatografií na sloučeninu pojmenovanou v nadpisu.

b) Způsob přípravy kyseliny (R,S)-8-[/(l,2,3,4-tetrahydro-7-izochinolyl)amino/karbonyl]-

2.3.4.5- tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

0,56 mmol sloučeniny z příkladu 4a) se rozpustí ve směsi 25 ml dichlormethanu a 5 ml kyseliny trifluoroctové. Po 1 hodině se směs odpaří a dostane se methylester sloučeniny pojmenované v nadpisu.

0,27 mmol methylesteru se rozpustí v 9 ml methanolu a přidá se 0,81 ml 1,0-normálního (0,81 mmol) roztoku hydroxidu sodného. Roztok se míchá za teploty místnosti přes noc a potom se odpaří. Odparek se rozpustí ve 3 ml vodného acetonitrilu, ochladí na teplotu 0 °C a okyselí 0,21 ml (2,7 mmol) kyseliny trifluoroctové. Roztok se odpaří a odparek se čistí velmi rychlou chromatografií na reverzní fázi, aby se dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

Analýza pro C₂9H₃₀N4.0,6C₂HF₃O₂.l,5H₂O:

vypočteno: C 60,55 %, H 5,64 %, N 9,31 %, nalezeno: C 60,45 %, H 5,80 %, N 9,28 %.

Příklad 5

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-4-/2-(cyklohexyl)ethyl/-

2.3.4.5- tetrahydro-3-oxo-lH-l,4-benzodiazepin-2-octové

a) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-karboxy-4-/2-(cyklohexyl)ethyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3oxo-1 H-l ,4-benzodiazepin-2-acetátu]

Roztok 1,2 mmol methyl-/(R,S)-7-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-lH-l,4benzodiazepin-2-acetátu/ a 4,0 ml 0,6-normální kyseliny chlorovodíkové se uvede do styku se 120 mg oxidu platičitého a hydrogenuje za tlaku 309 kPa. Směs se filtruje a odpaří. Dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

-23CZ 292323 B6

b) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-/2-(cyklohexyl)ethyl/-

2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-l H-l ,4—benzodiazepin-2-acetátu]

2,0 mmol sloučeniny z příkladu 5a) rozpuštěné ve 30 ml dimethylformamidu se zpracují se 2,2 mmol N-ethyl-N'-(dimethylaminopropyl)karbodiimidu a 285 mg (2,1 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu. Získaná reakční směs se zpracuje s 2,4 mmol N-(terc.-butoxykarbonyl)-4,4'bipiperidinu, míchá za teploty místnosti po dobu 48 hodin, odpaří a odparek se čistí velmi rychlou chromatografií, aby se dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

c) Způsob přípravy kyseliny methyl (R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-4-/2-(cyklohexyl)ethy 17—2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-1 Η-1,4-benzodiazepin-2-octové

0,56 mmol sloučeniny z příkladu 5a) se rozpustí ve směsi 25 ml dichlormethanu a 5 ml kyseliny trifluoroctové. Po 1 hodině se směs odpaří a dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

d) Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-4-/2-(cyklohexyl)ethyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

0,3 mmol sloučeniny z příkladu 5c) se suspenduje ve 2 ml acetonu a vzniklý roztok se zpracuje s 25 mg hydrátu hydroxidu lithného ve 2 ml vody. Směs se míchá přes noc, uvede do styku s methanolem a přidá se dalších 5,5 mg hydrátu hydroxidu lithného ve dvou dílech během 9 hodin. Směs se odpaří a vodný zbytek se neutralizuje kyselinou chlorovodíkovou a poté odpaří. Odparek se umístí do chladničky přes noc a filtruje. Filtrační koláč se promyje studenou vodou, acetonem a etherem. Tak se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

Analýza pro C3oH44N404.2,5C₂HF₃0₂.2H₂0:

vypočteno: C 49,70 %, H 6,02 %, N 6,62 %, nalezeno: C 49,43 %, H 6,02 %, N 6,62 %.

Příklad 6

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-[/4~(2-aminoethyl)piperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-lH-l,4-benzodiazepin-2-octové

a) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-[/4-(N-terc.-butoxykarbonyl)-(2-aminoethyl)piperid-lyl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-lH-l,4—benzodiazepin-2-acetátu]

2,0 mmol methyl-[(R,S)-7-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetátu] se rozpustí ve 30 ml dimethylformamidu a zpracuje s 458 mg (2,2 mmol) Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiimidu a 285 mg (2,1 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a hodnota pH reakční směsi se potom upraví na 7 přidáním triethylaminu. Směs se zpracuje s 2,4 mmol N(terc.-butoxykarbonyl)-2-(4-piperidyl)ethanaminu, míchá po dobu 48 hodin a odpaří. Odparek se čistí velmi rychlou chromatografií na sloučeninu pojmenovanou v nadpisu.

b) Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-[/4-(2-aminoethyl)piperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

0,56 mmol sloučeniny z příkladu 6a) se rozpustí ve směsi 25 ml dichlormethanu a 5 ml kyseliny trifluoroctové. Po 1 hodině se směs odpaří a dostane se methylester sloučeniny pojmenované v nadpisu.

-24CZ 292323 B6

0,27 mmol methylesteru se rozpustí v 9 ml methanolu a přidá se 0,81 ml 1,0-normálního (0,81 mmol) roztoku hydroxidu sodného. Roztok se míchá za teploty místnosti přes noc a potom odpaří. Odparek se rozpustí ve 3 ml vodného acetonitrilu, ochladí na teplotu 0 °C a okyselí 0,21 ml (2,7 mmol) kyseliny trifluoroctové. Roztok se odpaří a odparek se čistí velmi rychlou chromatografií na reverzní fázi, aby se dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu. MS(ES) m/e 479 [M + H]⁺, 477 [Μ + H]^-.

Příklad 7

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-[/(l,2,3,4-tetrahydro-7-izochinolyl)amino/karbonyl]-2,3,4,tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-l H-1,4-benzodiazepin-2-octové

Sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane za použití způsobu z příkladu 4 s tím rozdílem, že se nahradí methyl-[(R,S)-8-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetát] methyl-[(R,S}-7-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-lH1,4-benzodiazepin-2-acetátem].

Analýza pro C29H₃₀N₄O₄.2C2HF₃O2.0,75H2O:

vypočteno: C 53,55 %, H 4,36 %, N 7,57 %, nalezeno: C 53,80 %, H 4,56 %, N 7,56 %.

Příklad 8

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4— methyl-3-oxo-l H-1,4-benzodiazepin-2-octové

a) Způsob přípravy terc.-butyl-(3-methyl-4-nitrobenzoátu)

500 mg (2,76 mol) kyseliny 3-methyl-4-nitrobenzoové se vnese do 1,25 litru pyridinu a míchá až do rozpuštění. K roztoku se rychle přidá 609g (3,45 mol) benzensulfonylchloridu, zatímco se udržuje vnitřní teplota nižší než 30 °C pomocí ledové lázně. Sraženina se vytvoří ku konci přidávání a přidá se 500 ml pyridinu, aby se zlepšilo míchání. Reakční směs se míchá po dobu 30 minut a poté se přikape 523 ml terc.-butanolu za teploty nižší než 30 °C během 30 minut. Směs se míchá po dobu 2 hodin, rozpustí ve 2,5 litru směsi hexanu a ethylacetátu v poměru 4:1 a výsledná směs se extrahuje vodou. Organická fáze se odpaří a dostane se světle žlutý olej, který krystaluje ochlazením. Získá se 635 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. Sloučenina má teplotu tání 56 až 58 °C. Výtěžek odpovídá 97 % teorie.

b) Způsob přípravy terc.-butyl-(3-brommethyl-4-nitrobenzoátu)

Roztok 635 g (2,68 mol) sloučeniny z příkladu 8a) v 6 litrech chloridu uhličitého se míchá a zpracuje s 476,5 g (2,68 mol) N-bromsukcinimidu. Vzniklá směs se ozařuje a vaří pod zpětným chladičem za použití 3 lamp s rozptýlením zářením, umístěných pod úrovní roztoku. Poté se ve čtyřech podílech přidá celkem 6 g benzoylperoxidu, zatímco se směs vaří pod zpětným chladičem. Poslední podíl se přidává jako zpětný tok po dobu 2 hodin. Směs se ozařuje za varu pod zpětným chladičem po dobu 12 hodin, ochladí, nechá se stát několik hodin, filtruje a odpaří na 870,7 g hnědého oleje. Olej se vyjme 3 litry hexanu a 500 ml vroucího etheru, filtruje a filtrát se částečně odpaří za varu. Výsledný roztok se nechá stát přes noc a bělavá krystalická tuhá látka, která vznikla, se odfiltruje, promyje hexanem a vysuší. Dostane se 396,6 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, která má teplotu tání 80 až 83 °C. Výtěžek odpovídá 46,8 % teorie.

-25CZ 292323 B6 'H NMR spektrum (250 MHz) δ 4,5 (2H). TLC Rf 0,7 (silikagel, směs ethylacetátu a hexanu v poměru 1:9).

Filtrát stáním poskytne druhý podíl sloučeniny pojmenované v nadpisu o hmotnosti 73 g. Takto získaná sloučenina má teplotu tání 61 až 65 °C.

c) Způsob přípravy terc.-butyl-/3-(methylamino)methyl-4-nitrobenzoátu/

623 ml 40% vodného methylaminu se vnese do 2,5 litru dimethylformamidu míchaného za teploty -5 °C na lázni ze suchého ledu (oxidu uhličitého) a acetonu. Potom se během 1 hodiny přikape roztok 238 g (0,753 mol) sloučeniny z příkladu 8b) v 600 ml ethylacetátu, přičemž se udržuje vnitřní teplota mezi 0 a -5 °C. Čirá žlutá reakční směs se míchá dalších 30 minut a potom se zředí rovným objemem vody. K reakční směsi se přidá hexan, organická fáze se oddělí a vodná fáze se extrahuje hexanem. Spojené organické extrakty se promyjí vodou a odpaří. Tak se dostane 217,8 g sloučeniny pojmenované v nadpisu ve formě světle nažloutlého oleje.

d) Způsob přípravy terc.-butyl-[3-/N-(terc.-butoxykarbonyl)-(methylamino)methyl/-4—nitrobenzoátu]

Roztok 0,753 mol sloučeniny z příkladu 8c) v 1 litru ethylacetátu se míchá a zpracuje se 180,0 g (0,828 mol) di-terc.-butyldikarbonátu, který se přidá po částech. Nastane bouřlivá reakce s rychlým vývojem plynu, který ustane po konečném přidání dikarbonátu. Reakční směs se míchá dalších 30 minut a potom se extrahuje 4% vodným roztokem uhličitanu sodného a vodou. Organická fáze se odpaří a dostane se světle žlutý olej, který se rozpustí v hexanu a ochladí na lázni ze suchého ledu a acetonu, aby se začala krystalizace. Směs se uloží v chladničce, filtruje a vysuší. Dostane se 129 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, která se použije v následujícím reakčním stupni. Sloučenina má teplotu tání 56 až 58 °C. Výtěžek odpovídá 47 % teorie.

’H NMR spektrum (CDC1₃) δ 8,05 (s, 2H), 7,95 (s, 1H), 4,8 (d, 2H), 2,9 (s, 2H), 1,6 (s, 9H) ppm. HPLC t_R 27 minut (Zorbax RX C_!8, gradient, 4,6 x 150 mm, A: methanol, B: voda s 0,1 % kyselina trifluoroctové, 50 až 90% methanol během 40 minut, UV detekce při 210 nm).

e) Způsob přípravy terc.-butyl-[4-amino-3-/N-(terc.-butoxykarbonyl)-(methylamino)methyl/benzoátu]

Roztok 129 g (0,352 mol) sloučeniny z příkladu 8d) v 1,5 litru směsi ethylacetátu s methanolem v poměru 1:1 se zpracuje se 40 g 10% palladia na uhlí zvlhčeného ethylacetátem pod argonovou atmosférou v hydrogenační láhvi. Ta se propláchne vodíkem a třepe, až se absorbuje teoretické množství vodíku. Směs se filtruje přes rozsivkovou zeminu (Celíte®) a filtrát, obsahující sloučeninu pojmenovanou v nadpisu, se použije v následujícím stupni.

f) Způsob přípravy terc.-butyl-[(E/Z)-3-/N-(terc.-butoxykarbonyl)-(methylamÍno)methyl/4-/2-( 1,4-dimethoxy-l ,4—dioxo-2-butenyl)amino/benzoátu]

Roztok 118,3 g (0,352 mol) sloučeniny z příkladu 8e) v 1,5 litru směsi methanolu s ethylacetátem se míchá za teploty místnosti pod argonovou atmosférou a během 30 minut se přikape 50 g (0,352 mol) dimethylacetylen-dikarboxylátu a směs se potom vaří pod zpětným chladičem po dobu 16 hodin. Směs se ochladí a najednou se přidá 6,0 ml (0,0488 mol) dimethylacetylendikarboxylátu. Reakční směs se potom vaří pod zpětným chladičem po dobu 2,5 hodiny. Výsledný roztok, obsahující sloučeninu pojmenovanou v nadpisu, se ochladí a použije v následujícím stupni.

-26CZ 292323 B6

g) Způsob přípravy terc.-butyl-[(R,S)-3-/N-(terc.-butoxykarbonyI)-(methylamino)methyl/4-/2-( 1,4-dimethoxy-l ,4-dioxobutyl)amino/benzoátu]

Roztok přibližně 168 g (0,352 mol) sloučeniny z příkladu 8f) v 1,5 litru směsi ethylacetátu s methanolem se přidá ke 20 g 10% palladia na uhlí zvlhčeného ethylacetátem pod argonovou atmosférou v hydrogenační láhvi. Směs se třepe ve vodíkové atmosféře a zahřívá na teplotu 48 °C, až se absorbuje teoretické množství vodíku. Směs se potom ochlad, odvzdušní, filtruje přes rozsivkovou zeminu (Celíte®) a filtrát se odpaří. Dostane se 173,4 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, která je ve formě žlutého oleje.

HPLC t_R 18,9 minut (Zorbax RX Cig, 4,6 x 150 mm, 1 ml/min, gradient: A: methanol, B: voda s 0,1 % kyseliny trifluoroctové, 50 až 90% methanol během 40 minut, UV detekce při 210 nm).

h) Způsob přípravy (R,S)-4-/2-(l,4-dimethoxy-l,4-dioxobutyl)amino/-3-/(methylamino)methyl/benzoátu

Roztok 0,348 mol sloučeniny z příkladu 8g) v 500 ml dichlormethanu se přidá během 30 minut k míchanému roztoku 684 ml kyseliny trifluoroctové a 1550 ml dichlormethanu při vnitřní teplotě činící od 18 do 25 °C. Roztok se míchá přes noc za teploty místnosti a odpaří. Dostane se 254,6 g sloučeniny pojmenované v nadpisu jako hnědého oleje.

HPLC t_R 19 minut (Zorbax RX C₁₈, 4,6 x 150 mm, gradient: 1 ml/min, A: methanol, B: voda s 0,1 % kyseliny trifluoroctové, 10 až 60% methanol během 50 minut, UV detekce při 210 nm).

i) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4benzodiazepin-2-acetátu]

Roztok 112,7 g (0,348 mol) sloučeniny z příkladu 8h) se 141,9 g kyseliny trifluoroctové ve 2 litrech methanolu se ochladí na teplotu mezi 0 a -5 °C a míchá pod argonovou atmosférou. K roztoku se během 2 hodin přidá 396 ml 25% (1,94 mol) methoxidu sodného v methanolu, při udržování vnitřní teploty od 0 do -5 °C. Poté co je přidávání ukončeno, teplota se nechá pomalu stoupat a směs se míchá po dobu 45 minut. K reakční směsi se přidá 42 ml ledové kyseliny octové a potom 1,5 litru vody. Začne se tvořit krystalická sraženina a hodnota pH se upraví na 4,5 opatrným přidáváním 12-normální kyseliny chlorovodíkové. Směs se míchá několik minut, filtruje a sraženina se promyje vodou a vysuší za sníženého tlaku. Dostane se 77,6 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. Výtěžek odpovídá 76 % teorie.

’HNMR spektrum (250 MHz, DMSO-d₆) δ 7,5 (m, 2H), 6,5 (m, 2H), 5,5 (d, 1H), 5,2 (m, 1H), 3,9 (d, 1H), 3,6 (s, 3H), 2,9 (s, 3H), 2,9-2,6 (m, 2H) ppm. Sloučenina má teplotu tání 276 až 277 °C. HPLC t_R 23,2 minut (Zorbax RX Ci₈,4,6 x 150 mm, gradient: 1 ml/min, A: methanol, B: voda s 0,1 % kyseliny trifluoroctové, 10 až 60% methanol během 50 minut, UV detekce při 210 nm).

Analýza pro C14H16N2O5:

vypočteno: C 57,53 %, H 5,52 %, N 9,58 %, nalezeno: C 57,27 %, H 5,41 %, N 9,17 %.

Sloučenina má teplotu tání 250 až 280,5 °C (rozklad).

-27CZ 292323 B6

j) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-/((r-terc.-butoxykarbonyl)-4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-

2.3.4.5- tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetátu]

Za použití způsobu z příkladu 5b) stím rozdílem, že se nahradí methyl-[(R,S)-7-karboxy-

2.3.4.5- tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetát] sloučeninou z příkladu 8i), dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

k) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4methyl-3-oxo-l H-l ,4-benzodiazepin-2-acetátu]

Za použití způsobu z příkladu 5c) s tím rozdílem, že se nahradí sloučenina z příkladu 5b) sloučeninou z příkladu 8j), se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

l) Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4methyl-3-oxo-l H-l ,4—benzodiazepin-2-octové

Za použití způsobu z příkladu 5d) s tím rozdílem, že se nahradí sloučenina z příkladu 5c) sloučeninou z příkladu 8k) a hydroxid lithný hydroxidem sodným, dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

Analýza pro C₂₃H₃₂N₄O4.2C₂HF₃O₂.2,5H₂O:

vypočteno: C 46,22 %, H 5,46 %, N 7,99 %, nalezeno: C 46,33 %, H 5,45 %, N 7,97 %.

Příklad 9

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-7-[[/2-(l-piperazinyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-lH-2-benzazepin-4-octové

a) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-[[/2-(4-(benzyloxykarbonyl)-l-piperazinyl)ethyl/methyíamino]karbonyl]-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-lH-l,4-benzodiazepin-2acetátu]

2,0 mmol methyl-/(R,S)-7-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-lH-2-benzazepin-4-acetátu/ se rozpustí ve 30 ml dimethylformamidu, zpracuje s 458 mg (2,2 mmol) Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiimidu a 285 mg (2,1 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a upraví na hodnotu pH 7 triethylaminem. Směs se zpracuje s 2,4 mmol 2-[l-/4-(benzyloxykarbonyl)piperazinyl/]-N-methyl/ethanaminu, míchá za teploty místnosti po dobu 48 hodin, potom se odpaří a odparek se čistí velmi rychlou chromatografií, aby se dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

b) Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-7-[[/2-(lpiperazinyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-lH-2-benzazepin-4-octové

0,3 mmol sloučeniny z příkladu 9a) se rozpustí ve 20 ml methanolu a k roztoku se přidá 100 mg hydroxidu palladia a 1 ml 3-normální kyseliny chlorovodíkové. Směs se hydrogenuje za tlaku 275 kPa po dobu 6 hodin. Reakční směs se filtruje, katalyzátor se promyje acetonitrilem a filtrát se odpaří.

200 mg (0,3 mmol) methylesteru se rozpustí ve 4 ml methanolu a 0,5 ml 1-normálního roztoku hydroxidu sodného, míchá, odpaří, zředí vodou, okyselí 3-normální kyselinou chlorovodíkovou a odpaří. Odparek se čistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií, aby se získala sloučenina pojmenovaná v nadpisu jako bílá tuhá látka.

-28CZ 292323 B6

Příklad 10

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2-butyl-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-7-[[/2-(piperid-4-yl)ethyl/methylaminojkarbonyl]-1 H-2-benzazepin-4-octové

1,19 g (6,23 mmol) hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu se přidá najednou k roztoku 1,44 g (5,19 mmol) (R,S)--7-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-lH-2benzazepin-4-acetátu, 2,7 ml (25,95 mmol) benzylalkoholu, 1,8 ml (10,38 mmol) diizopropylethylaminu a 761 mg (6,23 mmol) 4-(dimethylamino)pyridinu v 26 ml bezvodého dimethylformamidu při teplotě místnosti. Reakční směs se míchá po dobu 24 hodin a potom odpaří, aby se dostal světle žlutý olej. Olej se zředí 200 ml ethylacetátu a zakalená směs se postupně promyje

1-normální kyselinou chlorovodíkovou a vodou. Spojené vodné vrstvy se extrahují ethylacetátem a spojené organické vrstvy se vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Chromatografie na silikagelu poskytne 1,59 g methyl-/(R,S)-7-benzyloxykarbonyl-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-lH-2-benzazepin-4-acetátu/. Výtěžek odpovídá 83 % teorie.

220,4 mg (0,60 mmol) methyl-/(R,S)-7-benzyloxykarbonyl-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-lH-2benzazepin-4-acetátu/ se suspenduje v 5 až 10 ml toluenu a směs se opatrně odpaří, aby se odstranila voda a zbývající rozpouštědla. Výsledná tuhá látka se zředí 12 ml směsi tetrahydrofuranu a dimethylformamidu v poměru 1:1 a poté se přidají 3,0 mmol 1-jodbutanu. K reakční směsi se přidá 29 mg (0,72 mmol) natriumhydridu (60% v minerálním oleji), co způsobí vývoj plynu a slabé zvýšení teploty reakční směsi. Po 15 minutách se reakční směs ochladí na 0°C a reakce se přeruší přidáním 2 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného. Směs se zředí 50 ml etheru a promyje vodou. Spojené vodné vrstvy se extrahují etherem a spojené organické vrstvy se vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Chromatografie na silikagelu poskytne methyl-/(R,S)-7-benzyloxykarbonyl-2,3,4,5-tetrahydro-2-butyl-3-oxo-lH-2-benzazepin-4~ acetát/.

mg 10% (0,06 mmol) palladia na uhlí se opatrně vnese do roztoku 0,60 mmol methyl-/(R,S)7-benzyloxykarbonyl-2,3,4,5-tetrahydro-2-butyl-3-oxo-lH-2-benzazepin-4-acetátu/ ve 12 ml methanolu. Směs se profoukne vodíkem a intenzivně míchá za teploty místnosti pod vodíkovou atmosférou (tlak balonu). Po 15 hodinách se směs filtruje přes rozsivkovou zeminu (Celíte®) a filtrát se odpaří, aby se dostal methyl-/(R,S)-7-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-2-butyl3-oxo-l H-2-benzazepin-4-acetát/.

mg (0,47 mmol) hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyI)-3-ethylkarbodiimidu se přidá k roztoku 0,39 mmol methyl-/(R,S)-7-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-2-methyl-3-oxo-lH-2benzazepin-4-acetátu/, 64 mg (0,47 mmol) N-methyl-2-(pyrid-4-yl)ethanaminu, 63 mg (0,47 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a 0,14 ml (0,78 mmol) diizopropylethylaminu ve 2 ml dimethylformamidu za teploty místnosti. Reakční směs se míchá po dobu 23 hodin a odpař. Odparek se rozdělí mezi ethylacetát a vodu. Vrstvy se oddělí a organická vrstva se promyje vodou. Spojené vodné vrstvy se znovu extrahují ethylacetátem. Spojené organické vrstvy se vysuší síranem sodným a odpaří, aby se dostal žlutý olej. Spojené vodné vrstvy se odpaří a k odparku se přidá chlorid sodný. Výsledná směs se kvantitativně extrahuje chloroformem. Spojená organická fáze se vysuší síranem sodným a odpaří, aby se dostal žlutý olej, který se spojí s materiálem z ethylacetátové fáze. Chromatografie na silikagelu poskytne methyl-[(R,S)-

2,3,4,5-tetrahydro—butyl-3-oxo-7-[/(2-(pyrid-4-yl)ethyl)methylamino/karbonyl]-lH-2-benzazepin-4-acetát].

K roztoku 0,35 ml methyl-[(R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-2-butyl-3-oxo-7-[/(2-(pyrid-4-yl)ethyl)methylamino/karbonyl]-lH-2-benzazepin-4-acetátu] a 0,35 ml (0,35 mmol) kyseliny chlorovodíkové ve 3,5 ml methanolu se přidají 4 mg oxidu platičitého a směs se intenzivně míchá pod vodíkovou atmosférou (tlak balonu). Po 7 hodinách se směs filtruje přes vrstvu rozsivkové zeminy (Celíte®) a filtrát odpaří. Odparek se rozpustí v 3,5 ml methanolu. K roztoku se přidají

-29CZ 292323 B6 mg oxidu platičitého a směs se energicky míchá pod vodíkovou atmosférou (tlak balonu) po dobu 16,5 hodiny. Filtrací přes vrstvu rozsivkové zeminy (Celíte®) a odpařením se dostane methyl-[(R,S>-2,3,4,5-tetrahydro-2-butyl-3-oxo-7-[/(2-(piperid-4-yl)ethyl)methylamino/karbonyl]-l H-2-benzazepin-4-acetát].

Získaný methyl-[(R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-2-butyl-3-oxo-7-[/(2-(piperid—4-yl)ethyl)methylammo/karbonyl]-lH-2-benzazepin-4-acetát] se rozpustí ve 12 ml methanolu a ochladí na teplotu 0 °C. K roztoku se přikape 1,05 ml 1-normálního (1,05 mmol) roztoku hydroxidu sodného a vzniklý roztok se nechá ohřát na teplotu místnosti. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 24 hodin a odpaří. Odparek se odpaří ze 4 ml směsi acetonitrilu a vody v poměru 1:1 k odstranění methanolu, vzniklý odparek se rozpustí ve 4 ml směsi acetonitrilu a vody v poměru 1:1 a ochladí ledem. K reakční směsi se přidá 0,27 ml (3,5 mmol) kyseliny trifluoroctové a vše se odpaří. Odparek se čistí velmi rychlou chromatografií na reverzní fázi. Odpařením a lyofilizací se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu. MS(ES) m/e 444 [M + H]⁺.

Příklady 11 a 12

a) Za použití způsobu z příkladu 10 se alkyluje 2-aminoskupina a debenzyluje benzylester s tím rozdílem, že se nahradí jodbutan benzylbromidem nebo (5-jodpentyl)benzenem, a použije se způsob popsaný v příkladech la) a lb) s tím rozdílem, že se hydroxid palladia nahradí palladiem na uhlí. Dostanou se tyto sloučeniny:

11a) methyl-[2-benzyl-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-7-[[/2-(piperid-4-yl)ethyI/methylamino]karbonyl]-lH-2-benzazepin-4-acetát], MS(ES) m/e 492 [M + H]⁺,

12a) methyl-[2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(5-fenylpentyl}-7-[[/2-(piperid-4-yl)ethyl/methylamino]karbonyl]-lH-2-benzazepin-4-acetát], MS(ES) m/e 548 [M + H]⁺.

b) Za použití způsobu z příkladu lc) stím rozdílem, že se nahradí sloučenina z příkladu lc) sloučeninami z příkladů 1 la) a 12a), dostanou se tyto sloučeniny:

b) 2-benzyl-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-7-[[/2-(piperid-4-yl)ethyl/methylamino]karbonyl]-l H-2-benzazepin-4_acetát,

12b) 2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(5-fenylpentyl)-7-[[/2-(piperid-4-yl)ethyl/methylamino]karbonyl]-l H-2-benzazepin-4-acetát.

Příklad 13

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-[[/4-(aminoiminomethyl)fenyl/methylamino]karbonyl]-

2,3,4,5-tetrahydro-2-izopropyl-3-oxo-lH-2-benzazepin-4-octové

Za použití způsobu z příkladu 8c) až 8j), stím rozdílem, že se nahradí 2-fenylethylamin izopropylaminem v příkladu 8c) a methoxid sodný v methanolu 2,4,6-kollidinem ve způsobu popsaném v příkladu 8g), dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu. MS(ES) m/e 437 [M + H]⁺.

Příklady 14 až 17

Za použití způsobů z přípravy 8c) až 8g), s tím rozdílem, že se ve způsobu přípravy 8c) nahradí fenylethylamin a) izopropylaminem, b) izopentylaminem, c) 3,3-dimethylbutylaminem nebo d)

-30CZ 292323 B6 cyklohexylaminem, popřípadě se methoxid sodný ve způsobu přípravy 8g) nahradí 2,4,6kollidinem nebo triethylaminem v toluenu nebo diizopropylethylaminem v xylenu a následně se použijí způsoby z příkladů 2b) a 2d) stím rozdílem, že se popřípadě nahradí l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid benzotriazol-l-yloxy-tris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfátem, dostanou se tyto sloučeniny:

14. kyselina (R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-2-izopropyl-3-oxo-7-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methyl- amino]karbonyl]-lH-2-benzazepin-4-octová, MS(ES) m/e 430 [M + H]⁺,

15. kyselina (R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-2-izopentyl-3-oxo-7-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methyl- amino]karbonyl]-lH-2-benzazepin-4-octová, MS(ES) m/e 458 [M + H]⁺,

16. kyselina (R,S)-2-(3,3-dimethylbutyl)-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-7-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-lH-2-benzazepin-4-octová, MS(ES) m/e 472 [M + H]⁺,

17. kyselina (R,S)-2-cyklohexyl-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-7-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methyl’ amino]karbonyl]-lH-2-benzazepin-4-octová, MS(ES) m/e 470 [M + H]⁺.

Příklad 18

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2-/2-(4-fluorfenyl)ethyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-7-[[/2-(4piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-lH-2-benzazepin-4-octové

Za použití způsobu přípravy (8c) až 8g) s tím rozdílem, že se nahradí fenylethylamin 4-(fluor)fenethylaminem při způsobu z přípravy 8c) a diizopropylethylaminem v xylenu se nahradí methoxid sodný v methanolu při způsobu z přípravy 8g), a dále se použije způsobu popsaného v příkladu 1, dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu. MS(ES) m/e 510 [M + H]⁺.

Příklad 19

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-[[/4-(aminoiminomethyl)fenyl/karbonyl]amino]-2,3,4,5tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-lH-2-benzazepin-4-octové

a) Způsob přípravy methyl-/(R,S)-7-amino-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-lH-2benzazepin-4-acetátu/

Směs 2,67 mmol methyl-/(R,S)-7-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-lHbenzazepin-4-acetátu/, 0,42 ml (5,87 mmol) triethylaminu a 0,62 ml (2,80 mmol) difenylfosforylazidu ve 20 ml toluenu se zahřívá na teplotu 105 °C po dobu 30 minut. Poté se teplota sníží na 80 °C a směs se zpracuje s 0,60 ml (0,42 mmol) benzylalkoholu, míchá po dobu 14 hodin a odpaří. Odparek se čistí velmi rychlou chromatografíí a dostane se methyl-/(R,S)-7-(karbobenzyloxy)amino-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-lH-2-benzazepin-4-acetát/.

0,68 g (1,38 mmol) methyl-/(R,S)-7-(karbobenzyloxy)amino-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2fenethyl)-lH-2-benzazepin-4-acetátu/ se rozpustí v 10 ml methanolu a uvede do styku s 50 mg 5% palladia na uhlí. Směs se hydrogenuje po dobu 1 hodiny, filtruje přes vrstvu rozsivkové zeminy (Celíte®) a odpaří, aby se získala sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

b) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-[/(4-(N-benzyloxykarbonyl)-(aminoiminomethyl)fenyl)karbonyl/amino]-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-lH-2-benzazepin-4-acetátu]

2,0 mmol kyseliny 4-(N-benzyloxykarbonyl)-(aminoiminomethyl)benzoové se rozpustí ve 30 ml dimethylformamidu a zpracuje s 2,2 mmol l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbo

-31 CZ 292323 B6 diimidu a 285 mg (2,1 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu. Přidáním diizopropylethylaminu se hodnota pH reakční směsi upraví na 7. Směs se zpracuje s 2,4 mmol sloučeniny z příkladu 19a), a vzniklá směs se míchá za teploty místnosti po dobu 48 hodin. Reakční směs se odpaří a odparek se čistí velmi rychlou chromatografíí, aby se dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

c) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-[/(4-(aminoiminomethyl)fenyl)karbonyl/amino]-2,3,4,5tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-1 H-2-benzazepin-4-acetátu]

Roztok 0,15 mmol sloučeniny z příkladu 19b) a 20 mg 10% palladia na uhlí ve 40 ml methanolu s obsahem 8 kapek kyseliny octové se třepe ve vodíkové atmosféře za tlaku 309 kPa po dobu 30 minut. Směs se filtruje a filtrát odpaří za sníženého tlaku. Tak se získá sloučenina označená v nadpisu.

d) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-[/(4-(aminoiminomethyl)fenyl)karbonyl/amino]-2,3,4,5tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-1 H-2-benzazepin-4-acetátu]

Roztok 65 mg (0,12 mmol) sloučeniny z příkladu 19c) se míchá v roztoku hydroxidu lithného ve vodném tetrahydrofuranu za teploty místnosti pod argonovou atmosférou přes noc. Směs se potom zpracuje s 1 ml 3-normální kyseliny chlorovodíkové a odpaří za sníženého tlaku. Odparek se čistí vysokotlakou kapalinovou chromatografii. MS(ES) m/e 485 [M + H]⁺, 483 [Μ - H]~.

Příklad 20

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2-/2-(cyklohexyl)ethyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-7-[[/2-(4piperidyl)ethyl/karbonyl]amino]-lH-2-benzazepin-4-octové

a) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-7-[[/2-(4-pyridyl)ethyl/karbonyl]amino]-2-(2-fenethyl)-lH-2-benzazepin-4-acetátu]

Za použití způsobu z příkladu 19b) stím rozdílem, že se nahradí kyselina 4-(N-benzyloxykarbonyl)-(aminoiminomethyl)benzoová kyselinou 4-(pyridyl)propionovou, dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

b) Způsob přípravy (R,S)-2-/2-(cyklohexyl)ethyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-7-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/karbonyl]amino]-lH-2-benzazepin-4-acetátu

Za použití způsobu z příkladu 2c), stím rozdílem, že se nahradí sloučenina z příkladu 2b) sloučeninou z příkladu 20a) a v následujícím kroku se použije způsob z příkladu 2d) stím rozdílem, že se nahradí roztok hydroxidu sodného ve vodném methanolu roztokem hydroxidu lithného ve vodném tetrahydrofuranu, získá se sloučenina pojmenovaná v nadpisu. MS(ES) m/e 484 [M + H]⁺, 482 [M - H]~.

Příklad 21

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-8-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-

2-(2-fenethy 1)-1 H-2-benzazepin-4-octové

a) Způsob přípravy methyl-/(R,S)-8-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-lH-

1,4-benzodiazepin-4-acetátu/

Za použití způsobu z příkladů 8a) až 8g), stím rozdílem, že se nahradí kyselina 3-brom-4methylbenzoová kyselinou 4-brom-3-methylbenzoovou, se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

-32CZ 292323 B6

b) Způsob přípravy kyseliny (R,S)-8-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3oxo-4-(2-fenethyl)-lH-2-benzodiazepin-4-octové

Za použití způsobu z příkladů 5b) až 5d), s tím rozdílem, že se nahradí sloučenina z příkladu 5a) sloučeninou z příkladu 21a), dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

Analýza pro C31H39N3O4.H2O:

vypočteno: C 69,78 %, H 7,71 %, N 7,84 %, nalezeno: C 69,38 %, H 7,68 %, N 7,37 %.

Příklad 22

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-7-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-lH-2-benzazepin-4-propionové

a) Způsob přípravy ethyl-[5-/5-(terc.-butoxykarbonyl)-2-/((N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(2fenylethyl)amino)methyl)fenyl/-4-ethoxykarbonyl-4-pentenoátu] a

ethyl-[5-/5-(terc.-butoxykarbonyl)-2-/((N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(2-fenylethyl)amino)methyl)fenyl/-4-ethoxykarbonyl-3-pentenoátu]

Za použití způsobu z přípravy 8e), s tím rozdílem, že se nahradí dimethylitakonát diethyl-(2methylenglutarátem) (Tet. Lett., 30, 7381 /1989/), dostanou se sloučeniny pojmenované v nadpisu.

b) Způsob přípravy ethyl-[5-/5-(terc.-butoxykarbonyl)-2-/((N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(2fenylethyl)amino)methyl)fenyl/-4-(ethoxykarbonyl)pentanoátu]

Za použití způsobu z přípravy 8f), stím rozdílem, že sloučenina z přípravy 8e) se nahradí sloučeninou z příkladu 22a) a hydroxid palladia v methanolu se nahradí palladiem na uhlí ve směsi ethanolu a ethylacetátu, dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

c) Způsob přípravy ethyl-/(R,S)-7-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-l H-2benzazepin-4-propionátu/

Za použití způsobu z přípravy 8g), stím rozdílem, že sloučenina z přípravy 8f) se nahradí sloučeninou z příkladu 22b) a kyselina trifluoroctová se nahradí chlorovodíkem v dioxanu, dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

d) Způsob přípravy kyseliny (R,S)_2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-7-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-lH-2-benzazepin-4-propionové

Za použití způsobu z příkladu 1, s tím rozdílem, že se nahradí methyl-/(R,S)-8-karboxy-2,3,4,5tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetát/ sloučeninou z příkladu 22c), se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu. MS(ÉS) m/e 506 [M + H]⁺, 540 [Μ - H]'.

Analýza pro C30H39N3O4.HCI.3/8H2O:

vypočteno: C 65,68 %, H 7,48 %, N 7,66 %, nelezeno: C 65,67 %, H 7,55 %.

-33CZ 292323 B6

Příklady 23 a 24

a) Methyl-[(R,S)-7-/r-(terc.-butoxykarbonyl)-4,4'-bipiperid-l-yl/karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(fenethyl)-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetát] se podrobí vysokotlaké kapalinové chromatografií. HPLC t_R 16 minut a 19,8 minut (Chiracel® OD, 21,1 x 250 mm, lOml/min, methanol, UV detekce při 250 nm). Dostanou se tyto sloučeniny:

a) methyl-[(+)-7-/1 '-(terč -butoxykarbonyl)-4,4'-bipiperid-l -yl/karbony 1/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(fenethyl)-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetát] a

24a) methyl-[(-)-7-/r-(terc.-butoxykarbonyl)-4,4'-bipiperid-l-yl/karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(fenethyl}-l H-l ,4-benzodiazepin-2-acetát].

b) Za použití způsobu z příkladu 5c) a 5d), s tím rozdílem, že se nahradí sloučeninami z příkladu 23a) a 24a) sloučenina z příkladu 5b), dostanou se tyto sloučeniny:

23b) Kyselina (+)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-3-(fenethyl)-lH-l,4-benzodiazepin-2-octová, [a]_D +128 (c = 0,5, CH₃OH), [a]_D +80 (c = 0,5, voda).

Analýza pro C₃₀H_3gN4O4.2C₂HF₃O₂.l,5H₂O:

vypočteno: C 52,78 %, H 5,60 %, N 7,24 %, nalezeno: C 52,70 %, H 5,89 %, N 7,47 %.

24b) Kyselina (-)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(fenethyl)lH-l,4-benzodiazepin-2-octová, [a]_D-118 (c = 0,5, CH₃OH).

Analýza pro C₃oH_3gN404.2C₂HF₃0₂:

vypočteno: C 54,69 %, H 5,40 %, N 7,50 %, nalezeno: C 54,49 %, H 5,40 %, N 7,85 %.

Příklad 25

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-izopropyl-3-oxo-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

a) Způsob přípravy methyl-/(R,S)-7-karboxy-4-izopropyl-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-lH-

1,4-benzodiazepin-2-acetátu/

Za použití způsobu z přípravy 7b) až 7f), s tím rozdílem, že se fenethylamin v přípravě 7b) nahradí izopropylaminem a methoxid sodný v methanolu v přípravě 7f) nahradí diizopropylethylaminem, dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

b) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4izopropyl-3-oxo-l H-l ,4-benzodiazepin-2-acetátu]

Za použití způsobu z příkladu 5b) a 5c), s tím rozdílem, že se sloučenina z příkladu 5a) nahradí sloučeninou z příkladu 25a), dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

-34CZ 292323 B6

c) Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro4-izopropyl-3-oxo-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

Za použití způsobu z přípravy 8j), s tím rozdílem, že se nahradí sloučenina z přípravy 8i) sloučeninou z příkladu 25b), dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

HPLC k' 4,27 (PRP-1, 15% acetonitril ve vodě s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové), *H NMR spektrum (400 MHz, CD₃OD) δ 7,12 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,08 (dd, J = 8,3,1,9 Hz, 1H), 6,59 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 17,0 Hz, 1H), 5,17 (dd, J = 8,9, 5,2 Hz, 1H), 4,72 - 4,84 (m, 1H), 4,10 (d, J = 17,0 Hz, 1H), 3,34-3,45 (m, 2H), 2,70 - 3,15 (m, 5H), 2,63 (dd, J = 16,8, 5,2 Hz, 1H), 1,92 - 2,05 (m, 2H), 1,69 - 1,88 (m, 2H), 1,35 - 1,54 (m, 4H), 1,16 - 1,31 (m, 2H), 1,20 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,03 (d, J = 6,9 Hz, 3H) ppm, MS(ES) m/e 457,2 [M + H]⁺.

Analýza pro C₂₅H₃₆N₄O4.1,5CF₃CO₂H.1,5H₂O:

vypočteno: C 51,37 %, H 6,24 %, N 8,56 %, nalezeno: C 51,49 %, H 6,39 %, N 8,46 %.

Příklady 26 a 27

Způsob přípravy kyseliny (R)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-

3-oxo-1 H-l ,4-benzodiazepin-2-octové a

kyseliny (S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4benzodiazepin-2-octové

a) Sloučenina z příkladu 8j) se dělí chirální vysokotlakou kapalinovou chromatografií a dostanou se tyto sloučeniny:

26a) methyl-[(R)-7-/((r-terc.-butoxykarbonyl)-4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetát], [a]_D +140 (c = 1, CH₃OH), HPLC t_R 12,9 minut (Chiralcel OD, 21,2 x 250 mm, lOml/min, methanol, UV detekce při 325 nm),

27a) methyl-[(S}-7-/((r-terc.-butoxykarbonyl)-4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetát], [a]o -142,5 (c= 1, CH₃OH), HPLC t_R 15,1 minut (Chiralcel OD, 21,2 x 250 mm, 10 ml/min, methanol, UV detekce při 325 nm).

b) Za použití způsobu z příkladu 8k), s tím rozdílem, že se nahradí sloučenina z příkladu 8j) sloučeninami z příkladů 26a) a 27a), dostanou se tyto sloučeniny:

26b) methyl-[(R)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxolH-l,4-benzodiazepin-2-acetát], HPLC t_R 14,3 minut (Ultrasphere Cl8, 4,6 x 250 mm,

1,5 ml/min, gradient, A: acetonitril, B: voda obsahující 0,1 % kyseliny trifluoroctové, 5 až 60% acetonitril během 20 minut, UV detekce při 220 nm),

27b) methyl-[(S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxolH-l,4-benzodiazepin-2-acetát], HPLC t_R 14,61 minut (Ultrasphere C18, 4,6 x 250 mm,

1,5 ml/min, gradient, A: acetonitril, B: voda obsahující 0,1 % kyseliny trifluoroctové, 5 až 60% acetonitril během 20 minut, UV detekce při 220 nm).

-35CZ 292323 B6

c) Za použití způsobu z přípravy 8j), s tím rozdílem, že se sloučenina z přípravy 8i) nahradí sloučeninami z příkladu 26b) a 27b), se dostanou tyto sloučeniny:

26c) (R)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4benzodiazepin-2-acetát, [a]_D +92,4 (c = 0,5, CH₃OH), MS(ES) m/e 429 [M + H]⁺, 427 [Μ - H], HPLC t_R 12,7 minut (Ultrasphere C18, 4,6 x 250 mm, 1,5 ml/min, gradient, A: acetonitril, B: voda obsahující 0,1 % kyseliny trifluoroctové, 5 až 60% acetonitril během 20 minut, UV detekce při 220 nm).

Analýza pro C₂₃H₃₂N4O₄.4,5CF₃CO₂H.3,33H₂O:

vypočteno: C 37,44 %, H 4,16 %,N 5,29 %, nalezeno: C 37,43 %, H 3,81 %, N 5,20 %.

27c) (S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4benzodiazepin-2-acetát, [a]_D -105,9 (c = 0,6, CH₃OH), MS(ES) m/e 429 [M+ H]⁺, 427 [Μ - H]^_, HPLC t_R 12,6 minut (Ultrasphere C18, 4,6 x 250 mm, 1,5 ml/min, gradient, A: acetonitril, B: voda obsahující 0,1 % kyseliny trifluoroctové, 5 až 60% acetonitril během 20 minut, UV detekce při 220 nm).

Analýza pro C₂₃H₃₂N4O₄.3CF₃CO₂H.1,25H₂O:

vypočteno: C 43,92 %, H 4,77 %, N 7,06 %, nalezeno: C 44,09 %, H 5,00 %, N 7,29 %.

Příklad 28

Způsob přípravy kyseliny (S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl3-oxo-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

a) Způsob přípravy kyseliny 4-fluor-3-methylbenzoové

Roztok 250 ml 1,0-molámího (250 mmol) 4-fluor-3-methylfenylmagneziumbromidu vtetrahydrofuranu se přidává jako proud po dobu 5 minut do směsi 10 g pevného oxidu uhličitého (suchého ledu) ve 250 ml tetrahydrofuranu a reakční směs se nechá zahřát na teplotu místnosti a odpaří. Odparek se rozdělí mezi 500 ml vody a 250 ml etheru a vrstvy se oddělí. Vodná vrstva se dvakrát promyje vždy 250 ml etheru a okyselí na hodnotu pH 1 koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou. Výsledná směs se ochladí na ledové lázni a filtruje. Tuhá látka se propláchne vodou a vysuší, aby se dostalo 25,92 g sloučeniny pojmenované v nadpisu jako bělavé tuhé látky. Výtěžek odpovídá 67 % teorie.

*HNMR spektrum (400 MHz, CDC1₃) δ 7,90- 8,02 (m, 2H), 7,09 (t, J = 8,9 Hz, IH), 2,34 (d, J=l,7Hz, 3H) ppm. IČ (chloroform) 3400- 2300 (pás), 1694 cm^-1. MS(ES) m/e 155 [M + H]⁺, 153 [M-H]~.

b) Způsob přípravy terc.-butyl-(4-fluor-3-methylbenzoátu)

Suspenzí 3,08 g (20 mmol) sloučeniny z příkladu 28a) v 15 ml bezvodého etheru se probublává izobutylen za tlaku v baňce při teplotě -78 °C, až se dostane reakční objem 50 ml. K reakční směsi se přikape 0,09 ml (1 mmol) kyseliny trifluormethansulfonové a nádoba se těsně uzavře a ohřeje na teplotu místnost. Po 4 hodinách se reakční směs ochladí a nádoba se otevře. K reakční směsi se přidá 5% vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a směs se mích v horké vodní lázni k odstranění přebytku izobutylenu. K reakční směsi se přidá ether a vrstvy se oddělí. Etherová

-36CZ 292323 B6 vrstva se promyje 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného a potom vysuší síranem hořečnatým. Odpařením se dostane 3,83 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako žlutého oleje, který se použije bez dalšího čištění. Výtěžek odpovídá 91 % teorie.

TLC (toluen) R_f 0,73. ’H NMR spektrum (250 MHz, CDC1₃) 5 7,77- 7,89 (m, 2H), 7,01 (t, J = 8,9 Hz, 1H), 2,30 (d, J = 1,8 Hz, 3H), 1,59 (s, 9H) ppm. IČ (CC1₄) 1715, 1369, 1296, 1258, 1167, 1124, 1117, 1105 cm’¹. MS(ES) m/e 443 [2M + Naf, 421 [M+ H]⁺, 211 [M + H]⁺, 155 [M + H-C₄H₈]⁺.

c) Způsob přípravy terc.-butyl-[4-fluor-3-(methylaminomethyl)benzoátu]

Směs 3,83 g (18,22 mmol) sloučeniny z příkladu 28b). 3,57 g (20,24 mmol) N-bromsukcinimidu, 0,22 g (0,91 mmol) benzoylperoxidu a 90 ml chloridu uhličitého se vaří pod zpětným chladičem. Po 16 hodinách se reakční směs ochladí na ledové lázni, filtruje a filtrát se odpaří. Odparek se vede přes krátký sloupec silikagelu, který se potom promyje 20% ethylacetátem v hexanu. Filtrát se odpaří a odparek se rozpustí v 90 ml tetrahydrofiiranu a nato se ke vzniklému roztoku rychle přidá 7,9 ml 40% (91,1 mmol) vodného methylaminu. Reakční směs se míchá přes noc a odpaří. Odparek se zředí etherem a promyje postupně 1,0-normálním roztokem hydroxidu sodného, vodou a roztokem chloridu sodného. Organická fáze se vysuší síranem hořečnatým, odpaří a odparek se chromatografuje (silikagel, 10% methanol ve směsi ethylacetátu a chloroformu v poměru 1:1). Dostane se 2,58 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, kterou tvoří žlutý olej. Výtěžek odpovídá 59 % teorie.

TLC Rf 0,49 (silikagel, směs ethylacetátu s chloroformem v poměru 1:1, obsahující 10 % methanolu). *H NMR spektrum (250 MHz, CDC1₃) δ 7,97 (dd, J = 7,3, 2,3 Hz, 1H), 7,90 (ddd, J = 8,4, 5,2, 2,3 Hz, 1H), 7,07 (zřejmě t, 1H), 3,83 (s, 2H), 2,46 (s, 3H), 1,59 (s, 9H) ppm. IČ(CC1₄) 1714, 1368, 1297, 1248, 1164, 1106 cm’¹. MS(ES) m/e 240 [M + H]⁺, 184 [M + H-C₄H₈]⁺.

d) Způsob přípravy terc.-butyl-[(S)-4-fluor-3-[/(4-methoxy-l ,4-dioxo-2-((benzyloxykarbonyl)amino)butyl)methylamino/methyl]benzoátu]

453,9 mg (2,2 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu se přidá k roztoku 478,6 mg (2 mmol) sloučeniny z příkladu 28c), 618,8 mg (2,2 mmol) β-methylesteru kyseliny N-Cbz-L-asparagové (J.Am. Chem. Soc., 79, 5697 /1957/, J. Am. Chem. Soc., 85, 2483 /1963/) a 297,3 mg (2,2 mmol) hydrátu 1-hydroxybenzotriazolu v 5 ml bezvodého dimethylformamidu za teploty místnosti. Po 24 hodinách se směs zředí 25 ml etheru a filtruje. Filtrát se odpaří a odparek se zředí 50 ml etheru a dvakrát promyje vždy 10 ml vody a 10 ml roztoku chloridu sodného. Vysušením síranem hořečnatým, odpařením a chromatografii (silikagel, směs hexanu a ethylacetátu v poměru 2:1) se dosáhne 0,87 g sloučeniny pojmenované v nadpisu jako bezbarvého oleje. Výtěžek odpovídá 87 % teorie.

TLC Rf 0,44 (silikagel, směs hexanu a ethylacetátu v poměru 2:1). *H NMR spektrum (250 MHz, CDC1₃) (směs amidových rotamerů) δ 7,75 - 8,00 (m, 2H), 7,15 - 7,45 (m, 5H), 7,00 - 7,15 (m, 1H), 5,72 - 5,92 (m, 1H), 4,91 - 5,25 (m, 3H), 4,45 - 4,63 (m, 2H), 3,66 (s, 3H), 3,13 a 2,89 (2 x s, 2H), 2,58 - 2,94 (m, 2H), 1,56 (s, 9H) ppm. IČ (CC1₄) 3415, 3260, 1736, 1716, 1652, 1497, 1368, 1296, 1252, 1207, 1163, 1117, 1109 cm’¹. MS(ES) m/e 1027 [2M + Na]⁺, 1005 [2M + H]⁺, 503 [M + H]⁺, 447 [M + H - C₄H₈]⁺.

e) Způsob přípravy terc.-butyl-[(S)-4-fluor-3-[/(4-methoxy-l,4-dioxo-2-aminobutyl)methylamino/methyljbenzoátu]

Směs 0,87 g (1,73 mmol) sloučeniny z příkladu 28d), 184 mg (0,17 mmol) 10% palladia na uhlí a 17 ml methanolu se třepe za teploty místnosti pod vodíkovou atmosférou při tlaku 344 kPa. Po 90 minutách se reakční směs filtruje přes vrstvu rozsivkové zeminy (Celíte®) a odpaří.

-37CZ 292323 B6

Chromatografie (silikagel, směs ethylacetátu a chloroformu v poměru 1:1 s 10 % methanolu) poskytne 579,8 g sloučeniny pojmenované v nadpisu jako bezbarvého oleje. Výtěžek odpovídá 91 % teorie.

TLC R_f 0,50 (silikagel, směs ethylacetátu a chloroformu v poměru 1:1 s 10 % methanolu). ’H NMR spektrum (250 MHz, CDC1₃) (směs amidových rotamerů) δ 7,80 - 8,05 (m, 2H), 7,02 - 7,18 (m, 1H), 4,55 - 4,88 (m, 2H), 4,15 - 4,28 (m, 1H). 3,71 a 3,70 (2 x s, 3H), 3,11 a 2,95 (2 x s, 3H), 2,76 (dd, J = 16,3, 5,4 MHz, 1H), 2,48 - 2,67 (m. 1H), 1.74 a 1,57 (2 x s, 9H), ppm. IČ (CC1₄) 3380, 1735, 1717, 1653, 1370, 1298, 1253, 1164, 1112 cm'¹. MS(ES) m/e 369 [M + H]⁺, 313 [M + H-C₄H₈]⁺.

f) Způsob přípravy methyl-[(S)-(-)-2,3,4,5-tetrahydro-7-(terc.-butoxykarbonyl)-4-methyl3-oxo-l H-l ,4-benzodiazepin-2-acetátu]

Roztok 416,1 mg (1,13 mmol) sloučeniny z příkladu 28f) a 0,51 ml (2,26 mmol) 2,6-di-tercbutylpyridinu v 5,7 ml bezvodého dimethylsulfoxidu se zahřívá pod argonovou atmosférou na olejové lázni na teplotu 120 až 125 °C. Po 17,5 hodinách se reakční směs ochladí na ledové lázni a zředí vodou. Reakční směs se extrahuje ethylacetátem a spojené ethylacetátové vrstvy se promyjí vodou a roztokem chloridu sodného. Vysušením síranem hořečnatým, odpařením a chromatografií (silikagel, směs ethylacetátu a hexanu v poměru 3:2) se dostane 221,8 mg sloučeniny pojmenované v nadpisu jako takřka bezbarvé tuhé látky. Výtěžek odpovídá 56 % teorie.

TLC Rf 0,41 (směs ethylacetátu a hexanu v poměru 3:2). [a]p -202,7° (c = 1,0, CH3OH). 'H NMR spektrum (400 MHz, CDC1₃) δ 7,68 (dd, J = 8,5, 1.8 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 6,50 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,44 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,08 - 5,16 (m, 1H), 4,59 (široký dublet, J = 4,5 Hz, 1H), 3,76 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,08 (s, 3H), 3,00 (dd, J = 16,0, 6,9 MHz, 1H), 2,67 (dd, J= 16,0, 6,3 Hz, 1H), 1,57 (s, 9H) ppm. IČ (chloroform) 3560 - 3420 (široký), 1731, 1695, 1663, 1610, 1369, 1302, 1252, 1171, 1146, 1134 cm’¹. MS(ES) m/e 719 [2M+ Na]⁺, 697 [2M + H]⁺, 349 [M + H]⁺.

g) Způsob přípravy methyl-[(S)-(-)-7-karboxy-2,3,4.5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-

1,4-benzodiazepin-2-acetátu]

Roztok 176,4 mg (0,506 mmol) sloučeniny z příkladu 28f) v 2,5 ml bezvodého dichlormethanu se ochladí na teplotu 0 °C a zbaví kyslíku třemi cykly snížení tlaku a propláchnutí argonem. K reakční směsi se potom přikape 2,5 ml kyseliny trifluoroctové během 3 minut a výsledný roztok se míchá po dobu 2 hodin, během kterých teplota vystoupí na +15 °C. Reakční směs se odpaří za teploty 20 °C a odparek se znovu odpaří z toluenu za teploty 35 °C, aby se odstranila zbytková kyselina trifluoroctová a dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

h) Způsob přípravy methyl-[(S)-(-)-7-[l-/r-(terc.-butoxykarbonyI)-4,4'-bipiperidyl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-l H-l ,4-benzodiazepin-2-acetátu]

Sloučenina z příkladu 28g), hydrát 1-hydroxybenzotriazolu o hmotnosti 82 mg (0,607 mmol) a4-(terc.-butoxykarbonyl)-4,4'-bipiperidinu o hmotnosti 163 mg (0,607 mmol) se rozpustí ve

2,5 ml bezvodého dimethylformamidu a roztok se ochladí na teplotu 0 °C pod argonovou atmosférou. K reakční směsi se přidá 0,18 ml (1,01 mmol) diizopropylethylaminu, potom 116 mg (0,607 mmol) hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu a reakční směs se ohřeje na teplotu místnosti. Po 21 hodině se reakční směs odpaří a odparek se rozdělí mezi vodu a chloroform. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje chloroformem. Vysušením síranem hořečnatým, odpařením a chromatografií (silikagel, směs ethylacetátu s chloroformem v poměru 1:1, obsahujícím 10 % methanolu) se dostane 215,4 mg sloučeniny pojmenované v nadpisu jako žluté pěny. Výtěžek odpovídá 78 % teorie.

-38CZ 292323 B6

TLC Rf 0,50 (směs ethylacetátu a chloroformu v poměru 1:1, obsahující 10 % methanolu), [a]_D -140,2° (c = 1,0, CH₃OH). 'H NMR spektrum (400 MHz, CDC1₃) δ 7,08-7,15 (m, 2H), 6,52 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 5,44 (dd, J = 16,4 Hz, 1H), 5,06 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 3,90- 4,80 (široký multiplet, 4H), 3,75 (s, 3H), 3,73 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 3,08 (s, 3H), 2,99 (dd, J = 15,8,

6,6 MHz, 1H), 2,56 - 2,93 (m, 5H), 1,60 - 1,83 (m, 4H), 1,46 (s, 9H), 1,08 - 1,42 (m, 6H) ppm. IČ (CC1₄) 3290, 1735, 1689, 1669, 1610, 1436, 1426, 1365, 1286, 1173 cm’¹. MS(ES) m/e 1085 [2M + H]⁺, 565 [M + Na]⁺, 543 [M + H]⁺, 502, 487 [M + H - C₄H_g]⁺.

i) Způsob přípravy kyseliny (S)-7-[l-/l'-(terc.-butoxykarbonyl)-4,4'-bipiperidyl)karbonyl/-

2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4-benzodiazepin-2-octové

Za použití způsobu z příkladů 27b) a 27c) se sloučenina z příkladu 28h) převede na sloučeninu pojmenovanou v nadpisu.

Příklad 29

Způsob přípravy kyseliny (8)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl3-oxo-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

a) Způsob přípravy kyseliny 4-fluor-3-kyanbenzoové

Ke směsi 13,5 g (0,1 mol) 2-fluor-5-methylbenzonitrilu, 1,61 g (5 mmol) tetrabutylamoniumbromidu a 0,261 g (1 mmol) trihydrátu chloridu ruthenitého ve 150 ml dichlormethanu se přidá roztok 645 ml (0,45 mol) chlornanu sodného, který byl upraven na hodnotu pH 9 přidáním 20% kyseliny sírové. Reakční směs se míchá a udržuje na hodnotě pH 9 přidáváním 20% roztoku hydroxidu sodného za teploty místnosti. Po 3 hodinách se vodná fáze oddělí a upraví na hodnotu pH 2 přídavkem kyseliny sírové. Tuhá látka, která se vytvořila, se odfiltruje, aby se dostalo 3,4 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. Výtěžek odpovídá 20 % teorie. Sloučenina má teplotu tání 177 až 178 °C.

*H NMR spektrum (CDC1₃) δ 7,35 (t, J = 8,70 Hz, 1H), 8,38 (m, 1H), 8,42 (m, 1H) ppm.

b) Způsob přípravy terc.-butyl-(4-fluor-3-kyanbenzoátu)

K míchanému roztoku 100 mg (0,6 mmol) sloučeniny z příkladu 29a) ve 20 ml toluenu se za teploty 80 °C přidá roztok 1 ml (4 mmol) N,N-dimethylformamid-di-terc.-butylacetalu ve 2 ml toluenu během 10 minut. Reakční směs se zahřívá po dobu 1 hodiny, potom se ochladí, promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří, aby se dostalo 70 mg sloučeniny pojmenované v nadpisu. Výtěžek odpovídá 52 % teorie.

MS(ES) m/e 222 [M + H]⁺. ’HNMR spektrum (CDC1₃) δ 1,60 (9H, s), 7,29 (t, J = 8,62 Hz, 1H), 8,25 (m, 1H), 8,28 (m, 1H) ppm.

c) Způsob přípravy β-methylesteru kyseliny N-/(2-kyan-4-terc.-butoxykarbonyl)fenyl/-Lasparagové

Směs 6 g (27 mmol) sloučeniny z příkladu 29b), 6,1 g (33 mmol) hydrochloridu β-methylesteru kyseliny L-asparagové a 8,37 g (100 mmol) hydrogenuhličitanu sodného ve 20 ml vody a 80 ml dimethylsulfoxidu se zahřívá na teplotu 72 °C po dobu 24 hodin. Reakční směs se zředí zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, ochlazenou ledem, a extrahuje ethylacetátem. Spojené organické fáze se extrahují studeným nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Bazické extrakty se spojí, okyselí na hodnotu pH 2 studenou zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a extra

-39CZ 292323 B6 hují ethylacetátem. Spojené organické extrakty se vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Tak se dostane 7,1 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. Výtěžek odpovídá 75 % teorie.

MS(ES) m/e 349 [M+ H]⁺. ’HNMR spektrum (CDC1₃) δ 1,57 (s, 9H), 3,01 (m, 2H), 3,75 (s, 1H), 4,64 (m, 1H), 5,77 (d, J= 7,49 Hz, 1H), 6,71 (d, J= 8,93 Hz, 1H), 8,02 (dd, J= 8,93, 1,85 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 1,89 Hz, 1H) ppm.

d) Způsob přípravy β-methylesteru kyseliny N-/(2-formyl—4-terc.-butoxykarbonyl)fenyl/-Lasparagové

7,0 g (20 mmol) sloučeniny z příkladu 29c) se rozpustí v 65 ml kyseliny octové a umístí do hydrogenační nádoby. Po ochlazení se do nádoby vnese 14 g vlhkého Raney® niklu, 65 ml vody a 65 ml pyridinu. Výsledná směs se zbaví kyslíku tím, že se reakční nádoba proplachuje argonem po dobu 30 minut, a potom se třepe ve vodíkové atmosféře za tlaku 344 kPa při teplotě 60 °C po dobu 5 hodin. Směs se zbaví plynu, filtruje a filtrát se azeotropicky destiluje s toluenem při teplotě 50 °C za vysokého vakua. Výsledný olej se vyjme 300 ml ethylacetátu a promyje studenou zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Tak se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu, jako světle oranžová amorfní tuhá látka o hmotnosti 5,9 g. Výtěžek odpovídá 84 % teorie.

MS(ES) 352 [M + H]⁺. 'HNMR spektrum (CDC1₃) δ 1,59 (s, 9H), 3,00 (m, 2H), 3,74 (s, 1H), 4,77 (m, 1H), 6,73 (d, J = 8,88 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 8,85 Hz, 1H), 8,20 (d, J = 2,12 Hz, 1H), 9,20 (d, J = 8,31 Hz, 1H), 9,88 (s, 1H) ppm.

e) Způsob přípravy β-methylesteru kyseliny N-[/2-(N-methyl)aminomethyl-4-terc.-butoxykarbonyl/fenyl]-L-asparagové

Roztok 5,9 g (16,7 mmol) sloučeniny z příkladu 29d) ve 100 ml ethylacetátu se v hydrogenační nádobě zbaví kyslíku tím, že se nádoba proplachuje argonem po dobu 30 minut. Poté se přidá 0,6 g oxidu platičitého, 5,9 g (49 mmol) bezvodého síranu hořečnatého a 150 ml 3,2-molámího roztoku (480 mmol) methylaminu v methanolu. Výsledná směs se třepe za tlaku 344 kPa po dobu 5 hodin a poté nechá stát za teploty místnosti po dobu 18 hodin. Po přidání 75 ml kyseliny octové do reakční směsi za chlazení se směs znovu třepe ve vodíkové atmosféře za tlaku 344 kPa po dobu 2 hodin a potom se filtruje. Filtrát se odpaří a azeotropicky destiluje s toluenem. Odparek se odsolí v koloně naplněné 350 g XAD-2 a eluuje se 1,5 litru vody a potom 50% vodným acetonitrilem. Zachytí se dvě frakce vždy o objemu 300 ml, odpaří a odparek se lyofilizuje, aby se dostal bělavý prášek. Prášek se rozpustí ve 200 ml dichlormethanu, odpaří a odparek se azeotropicky destiluje s toluenem. Tak se dostane 5,2 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. Výtěžek odpovídá 85 % teorie. MS(ES) 367 [M + H]⁺.

f) Způsob přípravy methyl-/(S)-7-(terc.-butoxykarbonyl)-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4methyí-1 H-l ,4-benzodiazepin-2-acetátu/

K roztoku 5,2 g (14,2 mmol) sloučeniny z příkladu 29e) a 2,0 ml (14,4 mmol) triethylaminu ve 250 ml dichlormethanu se za teploty místnosti pod argonovou atmosférou přidá 6,5 g (14,7 mmol) benzotriazol-l-yloxy-tris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfátu. Reakční směs se míchá přes noc za teploty místnosti a potom promyje ledově chladnou zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, roztokem chloridu sodného a potom vysuší síranem hořečnatým. Roztok se filtruje, odpaří a odparek se chromatografuje (silikagel, 40% ethylacetát v hexanu). Dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu o hmotnosti 1,1 g. Výtěžek odpovídá 22 % teorie.

MS(ES) m/e 349,2 [M + H]⁺. ’HNMR spektrum (CDC1₃) δ 1,57 (s, 9H), 2,67 (dd, J = 15,93, 6,30 Hz, 2H), 3,00 (dd, J = 15,93, 6,77 Hz, 2H), 3,08 (s, 3H), 3,75 (s, 1H), 3,76 (d, J = 16,44 Hz, 1H), 4,51 (d, J = 4,61 Hz, 1H), 5,11 (m, 1H), 5,45 (d, J = 16,44 Hz, 1H), 6,50 (d, J = 8,44 Hz,

-40CZ 292323 B6

1H), 7,55 (d, J = 1,88 Hz, 1H), 8,20 (dd, J = 8,48, 1,88 Hz, 1H) ppm. [a]_D -255,1° (c= 1, CH₃OH).

g) Způsob přípravy methyl-/(S)-7-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-methyl-lH-l,4benzodiazepin-2-acetátu/

K roztoku 160 mg (0,46 mmol) sloučeniny z příkladu 29f) v 5 ml dichlormethanu se přidá 5 ml 4—molámího (20 mmol) chlorovodíku v dioxanu pod argonovou atmosférou za teploty místnosti. Reakční směs se míchá po dobu 18 hodin. Suspenze se odpaří a poskytne sloučeninu označenou v nadpise jako bělavou tuhou látku.

h) Způsob přípravy methyl-[(S)-7-/(4-terc.-butoxykarbonyl-4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-

2.3.4.5- tetrahydro-4-methyI-3-oxo-l H-1,4-benzodiazepin-2-acetátu]

Sloučenina z příkladu 29g, 75 mg (0,55 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a 4—terc.-butoxykarbonyl-4'-bipiperidinu se rozpustí v 2,5 ml bezvodého dimethylformamidu. K roztoku se přidá 0,16 ml (0,92 mmol) diizopropylethylaminu a potom 105 mg (0,55 mmol) hydrochloridu 1—(dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu a reakční směs se míchá za teploty místnosti pod argonovou atmosférou přes noc. Reakční směs se potom rozdělí mezi 50 ml ledové vody a 30 ml ethylacetátu. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se dvakrát extrahuje vždy 30 ml ethylacetátu. Spojené organické extrakty se vysuší síranem hořečnatým, odpaří a odparek se chromatografuje (silikagel, 2% methanol v dichlormethanu). Dostane se 162 mg sloučeniny pojmenované v nadpisu. Výtěžek odpovídá 59 % teorie.

MS(ES) m/e 559,0 [M + H]⁺. Ή NMR spektrum (CDC1₃) δ 1,45 (s, 9H), 1,20 (m, 6H), 1,70 (m, 4H), 2,66 (dd, J= 16,08, 6,04 Hz, 2H), 2,81 (široký singlet, 4H), 2,98 (dd, J= 16,08, 7,31 Hz, 2H), 3,06 (s, 3H), 3,71 (d, J = 16,44 Hz, 1H), 3,73 (s, 1H), 3,76 (d, J = 16,44 Hz, 1H), 4,13 (široký singlet, 4H), 5,07 (m, 1H), 5,45 (d, J= 16,44 Hz, 1H), 6,52 (d, J= 8,51 Hz, 1H), 7,09 (m, 2H) ppm. [a]_D -139,3° (c = 1, CH₃OH).

i) Způsob přípravy kyseliny (S)-7-[l-/r-(terc.-butoxykarbonyl)-4,4'-bipiperidyl/karbonyl]-

2.3.4.5- tetrahydro-4-methyl-3-oxo-l H-1,4-benzodiazepin-2-octové

Za použití způsobu z příkladů 27b) a 27c) se sloučenina z příkladu 29h) převede na sloučeninu pojmenovanou v nadpisu.

Příklad 30

Způsob přípravy kyseliny (S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl3-oxo-1 H-1,4-benzodiazepin-2-octové

a) Způsob přípravy kyseliny (S)-7-[/l'-(terc.-butoxykarbonyl}-4,4'-bipiperid-l-yl/karbonyl]-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-l H-1,4-benzodiazepin-2-octové

2,85 g (5,3 mmol) sloučeniny z příkladu 27a) se vnese do 30 ml směsi methanolu a tetrahydrofuranu v poměru 1:1, zbaví nežádoucí látky profouknutím argonem, ochladí a zpracuje s 6,3 ml (6,3 mmol) 1-normálního roztoku hydroxidu sodného. Výsledný roztok se míchá za teploty místnosti po dobu 16 hodin pod argonovou atmosférou. Roztok se odpaří, zředí 10 ml vody a upraví na hodnotu pH 5 přidáním 1-molámí kyseliny octové (lakmusový papírek). Roztok se filtruje a tuhá látka se vysuší za sníženého tlaku, aby se dostalo 2,46 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. Výtěžek odpovídá 87 % teorie.

-41 CZ 292323 B6

b) Způsob přípravy kyseliny (S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4methyl-3-oxo-1 Η-1,4-benzodiazepin-2-octové

1,46 g (2,77 mmol) sloučeniny z příkladu 30a) se zpracuje se 30 ml 4-molámího chlorovodíku ve 30 ml dioxanu během 1 hodiny pod argonovou atmosférou. Roztok se odpaří a odparek se vyjme vodou a upraví na hodnotu pH 9 (lakmusový papírek) koncentrovaným hydroxidem amonným. Výsledný roztok se vnese na kolonu XAD-2 (3 x 7,5 cm). Kolona se eluuje vodou a poté 50% vodným acetonitrilem. Frakce obsahující produkovanou látku se spojí a lyofilizují. Tak se dostane 910 mg sloučeniny pojmenované v nadpisu, která se rekrystaluje z vodného acetonu. Výtěžek odpovídá 77 % teorie. Sloučenina má teplotu tání 218 až 220 °C (smršťování 193 °C).

^lHNMR spektrum (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,0 - 3,9 (m, 26H), 6,5 - 8,5 (m, 5H) ppm. MS(ES) m/e 429,2 [M + H]⁺. HPLC k' 5,37 (Vydac C18, 4,5 x 250 mm, gradient, A: acetonitril, B: voda s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové, 5 až 60% acetonitril za 20 minut, UV detekce při 220 nm), [a]D -180,3° (c = 1, CH₃OH).

Analýza pro C2₃H₃₂N₄O₄.2,33H2O:

vypočteno: C 58,71 %, H 7,81 %, N 11,91 %, nalezeno: C 58,67 %, H 7,79 %, N 11,80 %.

Příklad 31

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-/(4,4’-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4methyl-3-oxo-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

Za použití způsobu z příkladu 30 s tím rozdílem, že se nahradí sloučenina z příkladu 27a) sloučeninou z příkladu 8j), dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu jako krystalická tuhá látka. Sloučenina má teplotu tání 219 až 220 °C (smršťování 193 °C). MS(ES) m/e 429 [M + H]⁺, HPLC k' 6,5 (Ultrasphere ODS, 4,5 x 250 mm, gradient, A: acetonitril, B: voda s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové, 5 až 60% acetonitril během 20 minut, UV detekce při 220 nm).

Příklad 32

Způsob přípravy sodné soli kyseliny (R,S)-7-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové mg (0,023 mmol) sloučeniny z příkladu 31 se vnese do 1 ml vody a přidá se 0,024 ml 1molámího (0,024 mmol) roztoku hydroxidu sodného. Výsledný roztok se lyofilizuje a prášek se krystaluje z vodného acetonu. Tak se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu, jako krystalická tuhá látka o hmotnosti 2 mg. Sloučenina má teplotu tání 220 až 223 °C (smršťování 204 °C).

Příklad 33 a 34

a) Sloučenina z příkladu la) se dělí chirální vysokotlakou kapalinovou chromatografíí a dostanou se tyto sloučeniny:

33a) methyl-[(R)-8-[[/2-(N-(benzyloxykarbonyl)-4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetát], HPLC t_R 30,4 minut (Chiralpak AS, 4,6 x 250 mm, 8 ml/min, směs hexanu a ethanolu v poměru 1:1 s obsahem 0,5 %

-42CZ 292323 B6 diethylaminu, UV detekce při 325 nm), HPLC t_R 25,8 minut (Ultrasphere Cl8, 4,6 x 250 mm, gradient, A: acetonitril, B: voda s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové, 5 až 60% acetonitril během 20 minut, UV detekce při 220 nm),

34a) methyl-[(S)-8-[[/2-(N-benzyloxykarbonyl)-4-piperidyl/ethyl]methylamino]karbonyl]-

2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetát], HPLC t_R 22,1 minuty (Chiralpak AS, 21,2 x 250 mm, 8 ml/min, směs hexanu a ethanolu v poměru 1:1 s obsahem 0,5 % diethylaminu, UV detekce při 254 nm), HPLC t_R 25,9 min (Ultrasphere Cl8, 4,6 x 250 mm, gradient, A: acetonitril, B: voda s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové, 5 až 60% acetonitril během 20 minut, UV detekce při 325 nm).

b) 100 mg sloučenin z příkladů 33a) a 34a) se odděleně rozpustí v 15 ml methanolu, který obsahuje 20 kapek koncentrované kyseliny octové, poté uvede do styku s 50 mg 10% palladia na uhlí a třepe ve vodíkové atmosféře po dobu 5 hodin. Směs se filtruje přes rozsivkovou zeminu (Celíte®), a odpaří, aby se dostaly dále uvedené sloučeniny.

33b) methyl-[(R)-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-8-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetát], HPLC t_R 15,6 minuty (Ultrasphere Cl8,

4,6 x 250 mm, gradient, A: acetonitril, B: voda s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové, 5 až 60% acetonitril během 20 minut, UV detekce při 220 nm),

34b) methyl-[(S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-8-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetát], HPLC t_R 15,5 minuty (Ultrasphere Cl8,

4,6 x 250 mm, gradient, A: acetonitril, B: voda s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové, 5 až 60% acetonitril během 20 minut, UV detekce při 220 nm).

c) Za použití způsobu z příkladu lc), stím rozdílem, že se nahradí sloučenina z příkladu lb) sloučeninami z příkladů 33b) a 34b), dostanou se tyto sloučeniny:

33c) kyselina (R)-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-8-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-lH-l,4-benzodiazepin-2-octová, *HNMR spektrum (DMSO-dé) 5 6,4-8,6 (m, 5H), 5,0-5,6 (m, 2H), 1,0-3,9 (m, 22H) ppm, [a]_D +82,3° (c =0,3, CH₃OH), MS(ES) m/e 403 [Μ + H]⁺, [Μ - Hf 401, HPLC k' 5,0, HPLC t_R 15,6 minuty (Ultrasphere C18, 4,6 x 250 mm, gradient, A: acetonitril, B: voda s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové, 5 až 60% acetonitril během 20 minut, UV detekce při 220 nm),

Analýza pro C₂iH₃₀N₄O4.2,25C₂HF₃O₂.2,75H₂O:

vypočteno: C 50,44 %, H 5,78 %, N 9,94 %, nalezeno: C 50,42 %, H 5,89 %, N 10,17 %,

34c) kyselina (S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-8-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-lH-l,4-benzodiazepin-2-octová, ’HNMR spektrum (DMSO-d₆) 5 6,4 - 8,6 (m, 5H), 5,0- 5,6 (m, 2H), 1,0- 3,9 (m, 22H)ppm, [a]_D -110° (c = 0,45, CH₃OH), MS(ES) m/e 403 [M+ H]⁺, 401 [M-H]’, HPLC k' 5,0, HPLC t_R 15,6 minuty (Ultrasphere C18,

4,6 x 250 nm, gradient, A: acetonitril, B: voda s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové, 5 až 60% acetonitril během 20 minut, UV detekce při 220 nm).

Analýza pro C₂iH₃oN₄04.1,5C₂HF₃0₂.1,25H₂0:

vypočteno: C 43,22 %, H 5,37 %, N 7,91 %, nalezeno: C 43,10 %, H 5,17 %, N 8,11 %.

-43CZ 292323 B6

Příklad 35

Způsob přípravy kyseliny (S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-8-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

a) Způsob přípravy terc.-butyl-[(S)-4-/(N-(terc.-butoxykarbonyl)-(methylamino)methyl/-3/2-( 1,4-dimethoxy-l ,4-dioxo-2-butyl)amino/benzoátu]

Roztok 10,4 g (0,03 mol) terc.-butyl-[3-amino-4-/N-(terc.~butoxykarbonyl)-N-(methyl)aminomethyl/benzoátu] v 75 ml dichlormethanu se zpracuje s roztokem 8,8 g (0,03 mol) dimethyl-/(R)-2-(trifluormethylsulfonyloxy)sukcinátu/ (Liebigs Ann. Chem., 314-333 /1986/) a 6 g (0,03 mol) di-terc.-butylpyridinu v 10 ml dichlormethanu a směs se míchá po dobu 4 dnů. Získaná směs se promyje zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a organická fáze se promyje vodným roztokem uhličitanu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Odparek se chromatografuje (silikagel, 10% ethylacetát v hexanu) a odpaří, čímž se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu. Výtěžek odpovídá 73 % teorie.

b) Způsob přípravy terc.-butyl-[(S)-4-(methylamino)methyl-3-/2-(l,4-dimethoxy-l,4dioxo-2-butyl)amino/benzoátu]

Roztok 13g (0,027 mol) sloučeniny z příkladu 35a) ve 25 ml dichlormethanu se zpracuje se 60 ml 4—molámího chlorovodíku v dioxanu. Reakční směs se míchá po dobu 45 minut a potom promyje 5% roztokem uhličitanu sodného. Organická fáze se vysuší síranem hořečnatým a odpaří, aby se dostalo 6,5 g sloučeniny pojmenované v nadpisu.

c) Způsob přípravy methyl-/(S)-8-(terc.-butoxykarbonyl)-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3oxo-1 H-l ,4-benzodiazepin-2-acetátu/

Roztok 6,5 g (0,015 mol) sloučeniny z příkladu 35b) ve lOOml xylenu se zahřívá na teplotu 130 °C po dobu 14,5 hodiny, potom se ochladí a odpaří. Odparek se míchá s etherem, filtruje a potom odpaří. Získaný odparek se chromatografuje (silikagel, 0,5 až 0,75% methanolu v dichlormethanu) a frakce obsahující připravovanou sloučeninu se spojí, odpaří, zředí etherem a skladují v chladu po dobu 3 dnů. Směs se potom filtruje a filtrát odpaří. Tak se dostane 2,7 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. Výtěžek odpovídá 52 % teorie.

d) Způsob přípravy hydrochloridu methyl-/(S)-8-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3oxo-1 H-l ,4-benzodiazepin-2-acetátu/

2,8 g sloučeniny z příkladu 35c) v 10 ml dichlormethanu se uvede do styku s 25 ml 4-molámího chlorovodíku v dioxanu a vše se míchá po dobu 16 hodin. Směs se odpaří a dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

e) Způsob přípravy methyl-[(S)-8-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-4--methyl-3-oxo-8-[[/2-(Ntrifluoracetyl-4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetátu]

310 mg (1,1 mmol) sloučeniny z příkladu 35a) a 285 mg (2,2 mmol) diisopropylethylaminu ve 2,5 ml dimethylformamidu se přidá ke směsi 300 mg (1,1 mmol) hydrochloridu N-methyl-2-(Ntrifluoracetyl-4-piperidyl)ethylaminu, 140 mg (1,1 mmol) diisopropylethylaminu a 150 mg (1,1 mmol) hydrátu 1-hydroxybenzotriazolu v 2,5 ml dimethylformamidu a potom se k reakční směsi přidá 220 mg (1,1 mmol) hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu. Vzniklá směs se míchá po dobu 16 hodin, odpaří a odparek se trituruje ethylacetátem a vodou. Spojená organická fáze se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Odparek se chromatografuje (silikagel, 0,5 až 1,5% methanol v dichlormethanu) a frakce obsahující připravovanou sloučeninu se spojí a potom odpaří. Dostane se 260 mg sloučeniny pojmenované v nadpisu. Výtěžek odpovídá 51 % teorie.

-44CZ 292323 B6 [a]_D -75,6° (c = 1, CH₃OH), MS (ES) m/e 513 [M + H]⁺, 557 (M + HCOff, HPLC t_R 8,22 minut, (WHELK-O, 4,6 x 25 mm, 1 ml/min, 10% methanol ve vodě, UV detekce při 220 nm).

Analýza pro C₂₄H₃₁F₃N₄O₅.1,5H₂O:

vypočteno: C 53,33 % H 6,34 %, N 10,36%, nalezeno: C 53,39 %, H 6,23 % N 9,98 %.

f) Způsob přípravy kyseliny (S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-8-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

Sloučenina z příkladu 35e) se míchá s roztokem hydroxidu sodného ve vodném methanolu. Získá se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

Příklad 36

Způsob přípravy methyl-/(S)-7-terc.-butoxykarbonyl-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-l H-2-benzazepin-4-acetátu/

a) Způsob přípravy methyl-[5-(terc.-butoxykarbonyl)-2-/N-(butoxykarbonyl)-N-(2-fenethyl)aminomethyl/cinnamátu]

K míchanému roztoku 4,9 g (10 mmol) sloučeniny z příprava 8d) v 15 ml suchého acetonitrilu se přidají 3 ml (40 mmol) methylakrylátu, 3,5 ml (20 mmol) diisopropylethylaminu, 304 mg (1 mmol) tri-o-tolylfosfinu a 112 mg (0,5 mmol) octanu palladia. Reakční směs se opakovaně evakuuje, propláchne argonem a potom zahřeje na teplotu 80 °C. Po jedné hodině se k reakční směsi přidá dalších 304 mg (1 mmol) tri-o-tolylfosfinu a 112mg (0,5 mmol) octanu palladia a vše se míchá po dobu 2 hodin. Reakční směs se potom ochladí na teplotu místnosti, odpaří a suspenduje ve směsi 100 ml etheru a 50 ml petroletheru, filtrací se zbaví nerozpustných látek a potom se odpaří. Výsledný olej se čistí velmi rychlou chromatografii (silikagel, 15% ethylacetát v hexanu). Získá se 4,91 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. Výtěžek odpovídá 99 % teorie.

’H NMR spektrum (CDC1₃, 400 MHz), (směs amidových rotamerů) δ 1,42 a 1,49 (2 široké singlety, 9H), 1,60 (s, 9H), 2,74 a 2,84 (2 široké singlety, 2H), 3,28 a 3,42 (2 široké singlety, 2H),

3.82 (s, 3H), 4,47 a 4,57 (2 široké singlety, 2H), 6,43 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 7,05 - 7,30 (m, 6H),

7.82 - 7,92 (m, 1H), 7,97 (dd, 1H), 8,15 (d, J = 14 Hz, 1H) ppm.

b) Způsob přípravy methyl-[5-(terc.-butoxykarbonyl)-2-/N-(butoxykarbonyl)-N-(2-fenethyl)aminomethyl/fenylpropionátu]

4,91 g (9,9 mmol) sloučeniny z příkladu 36a) se hydrogenuje při tlaku vodíku 378 kPa na 2,5 g palladia na uhlí ve 100 ml methanolu po dobu 7 hodin. Po filtraci přes vrstvu rozsivkové zeminy (Celite^(R)) a odpaření se zbývající olej čistí velmi rychlou chromatografii (silikagel, 15% ethylacetát v hexanu). Získá se 4,48 g sloučeniny pojmenované v nadpisu jako čirého oleje. Výtěžek odpovídá 91 % teorie.

^]HNMR spektrum (CDC1₃, 400 MHz) (směs amidových rotamerů) δ 1,42 a 1,49 (2 široké singlety, 9H), 1,60 (s, 9H), 2,58 (t, 2H), 2,77 a 2,82 (2 široké singlety, 2H), 2,92 (široký singlet, 2H), 3,31 a 3,42 (2 široké singlety, 2H), 3,70 (s, 3H), 4,38 a 4,47 (2 široké singlety, 2H), 7,07 - 7,31 (m, 6H), 7,78 (s, 1H), 7,81 (dd, 1H) ppm.

-45CZ 292323 B6

c) Způsob přípravy kyseliny 5-(terc.-butoxykarbonyl)-2-/N-(butoxykarbonyl)-N-(2-fenethyl)aminomethyl/fenylpropionové

4,48 g (9 mmol) sloučeniny z příkladu 36b) se zpracuje s 10 ml 1-normálního roztoku hydroxidu sodného v 50 ml dioxanu během 16 hodin za teploty místnosti. Po okyselení 10 ml 1-normální kyseliny chlorovodíkové se reakční směs dvakrát extrahuje vždy 100 ml ethylacetátu, promyje roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým, filtruje a odpaří. Získá se sloučenina pojmenovaná v nadpisu jako bílá tuhá látka o hmotnosti 4,12 g. Výtěžek odpovídá 95 % teorie. TLC Rf 0,5 (silikagel, směs chloroformu, methanolu a kyseliny octové v poměru 95:4:1).

d) Způsob přípravy 5-(terc.-butoxykarbonyl)-2-/N-(butoxykarbonyl)-N-(2-fenethyl)aminomethyl/fenylpropionylfluoridu

K míchanému roztoku 4,12 g (8,5 mmol) sloučeniny z příkladu 36c) v 25 ml suchého dichlormethanu pod argonovou atmosférou se přidá 0,73 ml (9 mmol) pyridinu a potom 0,56 ml (6,1 mmol) kyanurfluoridu. Vše se míchá po dobu 2 hodin, během kterých reakční směs přejde na hustou suspenzi. Reakční směs se potom odpaří, odparek se vyjme 100 ml etheru a filtruje přes vrstvu rozsivkové zeminy (Celíte^*) k odstranění nerozpustných látek. Filtrát se promyje studenou vodou, vysuší síranem hořečnatým, filtruje a odpaří. Získá se sloučenina pojmenovaná v nadpisu jako čirý olej o hmotnosti 4,21 g. Výtěžek odpovídá 96 % teorie.

e) Způsob přípravy 4(R)-benzyl-3-[3-[5-(terc.-butoxykarbonyl)-2-/N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(2-fenethyl)aminomethyl/fenyl]propionyl]-2-oxazolidinonu

K míchanému roztoku 1,8 g (10 mmol) (R)-4-benzyl-2-oxazolidinonu v 25 ml tetrahydrofuranu se za teploty -78 °C pod argonovou atmosférou injekční stříkačkou přikape 3,8 ml 2,5-normálního roztoku n-butyllithia v hexanu. Vše se míchá po dobu 15 minut a potom se během 5 minut přikape výše popsaný roztok k 4,21 g (8,5 mmol) sloučeniny z příkladu 36d) v 10 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá po dobu 1 hodiny za teploty -78 °C a reakce se nato přeruší přidáním 50 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti, extrahuje se ethylacetátem, vysuší síranem hořečnatým, filtruje a odpaří. Odparek se čistí velmi rychlou chromatografií (silikagel, 25% ethylacetát v hexanu). Získá se sloučenina pojmenovaná v nadpisu jako bílá tuhá látka o hmotnosti 5,13 g. Výtěžek odpovídá 89 % teorie.

*H NMR spektrum (CDCI3, 400 MHz) (směs amidových rotamerů) δ 1,42 a 1,49 (2 široké singlety, 9H), 1,59 (s, 9H), 2,75 (dd, 1H), 2,78 (m, 1H), 2,87 (m, 1H), 3,01 (m, 2H), 3,18 (m, 1H), 3,23 (dd, 1H), 3,31 (dd, 1H), 3,33 (m, 1H), 3,44 (m, 1H), 4,18 (m, 2H), 4,46 a 4,55 (2 široké singlety, 2H), 4,67 (m, 1H), 7,16 (m, 6H), 7,29 (m, 5H), 7,81 (d, 1H), 7,82 (s, 1H) ppm.

f) Způsob přípravy 4(R)-benzyl-3-[3-[5-(terc.-butoxykarbonyl)-2-/N-(terc.-butoxykarbonyl)-N-(2-fenethyl)aminomethyl/fenyl]-2(S)-(methoxykarbonylmethyl)propionyl]-2-oxazolidinonu

K míchanému roztoku 5,13 g (8 mmol) sloučeniny z příkladu 36e) v 75 ml suchého tetrahydrofuranu se z injekční stříkačky pod argonovou atmosférou za teploty -78 °C přikape 8,2 ml 1-normálního roztoku lithiumhexamethyldisilazanu v tetrahydrofuranu. Vše se míchá po dobu 15 minut a potom se najednou přidá 3,75 ml (40 mmol) methyl-bromacetátu. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu -28 °C a míchá další 2 hodiny. Reakce se přeruší přidáním nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a reakční směs se extrahuje ethylacetátem, promyje roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým, filtruje a odpaří. Odparek se čistí sloupcovou chromatografií (silikagel, 20% ethylacetát v hexanu). Dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu jako bílá tuhá látka o hmotnosti 3,00 g. Výtěžek odpovídá 53 % teorie.

-46CZ 292323 B6

HPLC k' 2,9, minoritní diastereomer k' 6,4, d.e. 88 % (Ultrasphare, 4,6 x 250 mm, 1,5 ml/min, 20% ethylacetát v hexanu, US detekce při 254 nm), 'H NMR spektrum (CDCI3, 400 MHz, 6 1,40 a 1,47 (2 široké singlety, 9H), 1,52 (s, 9H), 2,44 a 2,52 (široký singlet a široký dublet, 1H), 2,70 (dd, 1H), 2,80 (m, 2H), 2,88 (m, 2H), 3,00 (dd, 1H), 3,31 (dd, 1H), 3,39 (m, 2H), 3,67 (s, 3H), 3,79 (t, 1H), 4,00 (d, 1H), 4,30 a 4,38 (široký singlet a široký dublet, 1H), 4,55 (m, 3H), 7,10 - 7,35 (m, 11H), 7,72 (s, 1H), 7,79 (dd, 1H) ppm.

g) Způsob přípravy hydrochloridu kyseliny (S)-3-[3-/5-(terc.-butoxykarbonyl)-2-/N-(terc.butoxykarbonyl)-N-(2-fenethyl)aminomethyl/fenyl]-2-(methoxykarbonylmethyl)propionové

K míchanému roztoku 1,47 g (2 mmol) sloučeniny z příkladu 36f) v 16 ml směsi tetrahydrofuranu a vody v poměru 3:1 se za teplota 0 °C přikape lithiumhydroperoxid, připravený z 0,7 ml 30% peroxidu vodíku a 90 mg (2,1 mmol) hydrátu hydroxidu lithného ve 2,1 ml vody. Reakční směs se míchá za teploty 0 °C po dobu 1 hodiny a přebytek peroxidu se rozloží roztokem 1,28 g siřičitanu sodného v 6,2 ml vody, který se přikapává za chlazení. Reakční směs se potom okyselí 3-normální kyselinou chlorovodíkovou a dvakrát extrahuje vždy 50 ml dichlormethanu, vysuší síranem hořečnatým, filtruje a odpaří.

h) Způsob přípravy hydrochloridu kyseliny (S)-3-[5-(terc.-butoxykarbonyl-2-/N-(terc.butoxykarbonyl)-N-(2-fenethyl)aminomethyl/fenyl]-2-(methoxykarbonylmethyl)propionové

Sloučenina z příkladu 36a) se zpracuje s 15 ml 4-normálního roztoku chlorovodíku v dioxanu za míchání po dobu 10 minut při teplotě místnosti a odpaří bez zahřívání. Odparek se vyjme ethylacetátem a odpaří k odstranění přebytku chlorovodíku, a poté krystaluje ze směsi ethylacetátu a etheru. Dostane se 0,75 g sloučeniny pojmenované v nadpisu jako bílé tuhé látky. Výtěžek odpovídá 76 % teorie.

'HNMR spektrum (d₄-MeOH, 400 MHz) δ 1,60 (s, 9H), 2,68 (dd, 1H), 2,81 (dd, 1H), 2,98 - 3,18 (m, 5H), 3,42 (m, 2H), 3,68 (s, 3H), 4,44 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 4,51 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 7,32 (m, 5H), 7,58 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,90 (dd, 1H), 7,95 (d, J = 1,4 Hz, 1H), ppm.

i) Způsob přípravy methyl-/(S)-7-(terc.-butoxykarbonyl)-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2fenethyl)-l H-2-benzazepin-4-acetátu/

K. míchanému roztoku 0,35 g (0,71 mmol) sloučeniny z příkladu 36h) ve 20 ml N,N-dimethylformamidu se za teploty 0 °C vDewerově baňce přidá 200 ml (1,42 mmol) triethylaminu, 300 mg (3,57 mmol) hydrogenuhličitanu sodného a 250 ml (1,2 mmol) difenylfosforylazidu. Reakční směs se míchá za teploty 0 °C po dobu 24 hodin, potom se reakční směs odpaří, odparek se vyjme 100 ml ethylacetátu, promyje vodou, roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým filtruje a odpaří. Odparek se čistí chromatograficky (silikagel, 35% ethylacetát v hexanu). Dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu jako lepivá tuhá bílá pěna o hmotnosti 243 mg. Výtěžek odpovídá 78 % teorie.

HPLC k' 2,13, k' 1,28 (enantiomer) > 99,5 % optická čistota (Chiralpak AS, 0,46 x 250 mm, 1 ml/min, 20% ethanol v hexanu, UV detekce při 254 nm,) [a]_D -71,2° (c = 1,4 CH₃OH), *H NMR spektrum (CDC1₃,400 MHz) δ 1,60 (s, 9H), 2,42 (dd, 1H), 2,74 (t, 2H), 2,89 (dd, 1H), 3,02 (m, 2H), 3,60 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,81 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 3,81 (m, 1H), 5,20 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 7,00 - 7,23 (m, 6H), 7,69 (s, 1H), 7,71 (d, 1H) ppm.

-47CZ 292323 B6

Příklad 37

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-8-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-2methyl-3-oxo-l H-2-benzazepin-4-octové

a) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-8-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-2-methyl-3-oxo-lH-2benzazepin-4-acetátu]

Za použití způsobu z přípravy 8a) až 8g), s tím rozdílem, že se nahradí kyselinou 4-brom-3methylbenzoovou kyselina 3-brom-4-methylbenzoová a dále se nahradí methylaminem fenethylamin, dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

b) Způsob přípravy kyseliny (R,S)-8-/(4,4'-bipiperid-l-yl)karbonyl/-2,3,4,5-tetrahydro-2methyl-3-oxo-1 H-2-benzazepin-4-octové

Za použití způsobů z příkladu 25b) a 25c), stím rozdílem, že se sloučeninou z příkladu 37a) nahradí sloučenina z příkladu 25), dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

HPLC k' 3,23 (PRP-1, 15% acetonitril ve vodě s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové), ’H NMR spektrum (CD₃OD, 400 MHz) δ 7,21 - 7,30 (m, 3H), 5,37 (d, J = 16,6 Hz, 1H), 4,58 —4,74 (m, 1H), 4,07 (d, J = 16,6 Hz, 1H), 3,84 - 3,96 (m, 1H), 3,68 - 3,84 (m, 1H), 3,40 (široký dublet, J = 12,6 Hz, 2H), 3,17 (dd, J = 17,7 Hz, 1H), 2,69 - 3,17 (m, 6H), 3,01 (s, 3H), 2,69 - 3,17 (m, 6H), 3,01 (m, 3H), 2,47 (dd, J = 17,0 Hz, 1H), 1,10 - 2,10 (m, 10H) ppm, MS (ES) m/e 428,2 [M +H]⁺, 214,6, 205,4.

Analýza pro C₂4H₃₃N₃O4.2CF₃CO₂H.H₂O:

vypočteno: C 49,93 %, H 5,54 %, N 6,24 %, nalezeno: C 50,17 %, H 5,32 %, N 6,20 %.

Příklad 38

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-7-[l-/4-(4-pyridyl)piperazinyl)karbonyl/4-methyl-3-oxo-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

2,0 mmol methyl-/(R,S)-7-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetátu/ se rozpustí ve 30 ml dimethylformamidu a zpracuje s 2,2 mmol hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu, 285 mg (2,1 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a upraví na hodnotu pH 7 triethylaminem. Směs se zpracuje s 2,4 mmol 1—(pyrid—4—yl)piperidinu, míchá se za teploty místnosti po dobu 48 hodin, odpaří a odparek se čistí velmi rychlou chromatografií, aby se dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

HPLC k' 4,01 (PRP-1, 12% acetonitril ve vodě s obsahem 0,1% kyseliny trifluoroctové), Ή NMR spektrum (CD₃OD, 400 MHz), δ 8,17 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,12 - 7,24 (m, 4H), 6,63 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 5,59 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 5,21 (dd, J = 9,0, 5,1 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 3,72 - 3,90 (m, 8H), 3,04 (s, 3H), 2,94 (dd, J = 16,6,9,0 Hz, 1H),2,66 (dd, J = 16,8, 5,1 Hz, 1H) ppm. MS (ES) m/e 424,2 [M + H]⁺.

Analýza pro C₂₂H₂5N₅O4.2CF₃CO₂H:

vypočteno: C 47,93 %, H 4,18 %, N 10,75 %, nalezeno: C 47,86 %, H 4,40 %, N 10,87 %.

-48CZ 292323 B6

Příklad 39

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-[[/4-(aminoiminomethyl)fenyl/methylamino]karbonyí]2,3,4,5-tetrahydro-2-/2-(2-thienyl)ethyl/-3-oxo-lH-2-benzazepin-4-octové

Za použití způsobu z přípravy 8c) až 8j), s tím rozdílem, že ve způsobu přípravy 8c) se nahradí 2-(2-thienyl)ethanaminem 2-fenethylamin, ve způsobu přípravy 8f) se nahradí natriumborhydridem a hexahydrátem chloridu nikelnatého palladium na uhlí a vodík, ve způsobu přípravy 8g) se nahradí triethylaminem v toluenu za varu pod zpětným chladičem methoxid sodný v methanolu a ve způsobu přípravy 8j) se nahradí hydroxidem lithným ve vodném tetrahydrofuranu vodný hydroxid sodný v methanolu, dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

Příklad 40

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-(2-fenethyl)-7-[[/3-(4-piperidyl)propyl/methylamino]karbonyl]-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

2,0 mmol methyl-/(R,S)-7-karboxy-4-(2-fenethyl)-l,3,4,5-tetrahydro-3-oxo--2H-l,4-benzodiazepin-2-acetátu/ rozpuštěného ve 30 ml dimethylformamidu se zpracuje s 2,2 mmol benzotriazol-l-yloxy-tris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfátu a 285 mg (2,1 mmol) 1hydroxybenzotriazolu a hodnota pH se upraví na 7 přídavkem triethylaminu. Směs se zpracuje s 2,4 mmol N-methyl-3-/N-(terc.-butoxykarbonyl)piperid-4—yl/propanaminu, vše se míchá za teploty místnosti po dobu 48 hodin a odparek se čistí velmi rychlou chromatografii.

Získaná látka se rozpustí v 50 % kyseliny trifluoroctové v methylenchloridu za teploty místnosti a reakční směs se míchá po dobu 1 hodiny. Roztok se zahustí odpařením kyseliny trifluoroctové a methylenchloridu, znovu rozpustí v methylenchloridu a opět odpaří.

Podíl sloučeniny odpovídající 0,26 mmol se rozpustí v 9 ml methanolu a k roztoku se přidá 0,81 ml (0,81 mmol) 1,0-normálního roztoku hydroxidu sodného. Roztok se míchá za teploty místnosti přes noc a odpaří. Odparek se rozpustí ve 3 ml vodného acetonitrilu, ochladí na teplotu 0 °C a okyselí 0,21 ml (2,7 mmol) kyseliny trifluoroctové. Roztok se odpaří a odparek se čistí velmi rychlou chromatografíí na reverzní fázi (Cl8, silikagel, směs acetonitrilu a vody s obsahem kyseliny trifluoroctové). Odpařením a lyofílizací se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu. MS (ES) m/e 507 [M + H]⁺, 505 [Μ - H]'.

Příklad 41

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-7-[[/3-(4-piperidyl)propyl/methylamino]karbonyl]-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

Za použití způsobu z příkladu 40, stím rozdílem, že se nahradí sloučeninou z příkladu 8i) methyl-/(R,S)-7-karboxy-4-(2-fenylethyl)-l ,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2H-l ,4-benzodiazepin2-acetát/, dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

-49CZ 292323 B6

Příklad 42

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-isopropyl-3-oxo-8-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

a) Způsob přípravy methyl-/(R,S)-8-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-4-isopropyl-3-oxo-lH1,4-benzodiazepin-2-acetátu/

Za použití způsobu z příkladu 2a), s tím rozdílem, že se nahradí izopropylaminem izopentylamin a nahradí diizopropylethylaminem v xylenu za varu pod zpětným chladičem methoxid sodný v methanolu v cyklizačním stupni, dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

b) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-isopropyl-3-oxo-8-[[/2-(4-piperidy l)ethyl/methylamino]karbonyl]-l H-l ,4-benzodiazepin-2-acetátu]

Za použití způsobu z příkladu 2b), s tím rozdílem, že se nahradí sloučeninou z příkladu 42a) sloučenina z příkladu 2b), dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

c) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-isopropyl-3-oxo-8-[[/2-(4-piperidyl)ethy l/methylamino]karbonyl]-1 Η-1,4-benzodiazepin-2-acetátu]

Za použití způsobu z příkladu 2c), s tím rozdílem, že se nahradí sloučeninou z příkladu 42b) sloučenina z příkladu 2b), dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

d) Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-isopropyl-3-oxo-8-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

Za použití způsobu z příkladu 2d), s tím rozdílem, že se nahradí sloučeninou z příkladu 42c) sloučenina z příkladu 2c), dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

Příklad 43

Způsob přípravy kyseliny (S)-2,3,4,5-tetrahydro-4-(2-fenethyl)-3-oxo-8-[[/2-(4-piperidyl)ethyl/methylamino]karbonyl]-l H-l ,4-benzodiazepin-2-octové

Za použití způsobu z příkladu 35, s tím rozdílem, že se nahradí terc.-butyl-[3-amino-4-/(N(terc.-butoxykarbonyl)-N-(fenylethyl)aminomethyl/benzoátem] terc.-butyl-[3-amino-/N(terc.-butoxykarbonyl)-N-(methyl)aminomethyl/benzoát] v příkladu 35a), dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

Příklad 44

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-7-[[/4-aminoiminomethyl)fenyl/karbonyl]methylamino]2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-lH-2-benzazepin-4-octové

a) Způsob přípravy methyl-/(R,S)-7-(benzyloxykarbonyl)amino-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo2-(2-fenethyl)-lH-2-benzazepin-4~acetátu/

Směs 2,67 mmol methyl-/(RS)-7-karboxy-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-lH-2benzazepin-4-acetátu/, 0,42 ml (5,87 mmol) triethylaminu a 0,62 ml (2,80 mmol) difenylfosforylazidu ve 20 ml toluenu se zahřívá na teplotu 105 °C po dobu 30 minut. Potom se teplota

-50CZ 292323 B6 sníží na 80 °C a směs se uvede do styku s 0,60 ml (0,42 mmol) benzylalkoholu, míchá po dobu hodin a odpaří. Odparek se vyčistí velmi rychlou chromatografií a tak se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

b) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-/N-(benzyloxykarbonyl)methylamino/-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-lH-2-benzazepin-4-acetátu]

Sloučenina z příkladu 16a) se zpracuje se natriumhydridem a jodmethanem ve směsi tetrahydrofuranu a dimethylformamidu v poměru 4:1. Dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

JO

c) Způsob přípravy methyl-/(R,S)-7-methylamino-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-

H-2-benzazepin-4-acetátu/

Za použití způsobu z příkladu 19c), stím rozdílem, že se sloučenina z příkladu 16b) nahradí 15 sloučenina z příkladu 19b), dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

d) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-[[/4-(N-benzyloxykarbonyl)-(aminoiminomethyl)fenyl/karbonyl]methylamino]-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-lH-2-benzazepin-4acetátu]

Sloučenina z příkladu 16b) se zpracuje s kyselinou 4-7N-(benzyloxykarbonyl)-(aminoiminomethyl)/benzoovou, benzotriazol-l-yloxy-tris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfátem a triethylaminem ve směsi dichlormethanu a tetrahydrofuranu v poměru 5:4. Tak se získá sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

e) Způsob přípravy methyl-[(R,S)-7-[[/4-(aminoiminomethyl)fenyl/karbonyl]amino]-2,3,4,5tetrahydro-3-oxo-2-(2-fenethyl)-l H-2-benzazepin-4-acetátu]

Za použití způsobu z příkladů 19c) a 19d), stím rozdílem, že se sloučeninou z příkladu 169c) 30 nahradí sloučenina z příkladu 19b), získá se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

Příklad 45

Způsob přípravy kyseliny (R,S)-2,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-4-methyl-8-[[[2-/(2-amino)pyrid4-yl/ethyl]methylamino]karbonyl]-lH-l,4-benzodiazepin-2-octové

2,0 mmol methyl-[(R,S)-8-karboxy-4-methyl-l ,3,4,5-tetrahydro-3-oxo-lH-l ,4-benzodiazepin-2-acetátu] rozpuštěného ve 30 ml dimethylformamidu se zpracuje s 2,2 mmol benzotri40 azol-l-yloxy-tris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfátu a 285 mg (2,1 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a hodnota pH se upraví na 7 triethylaminem. Směs se uvede do styku s 2,4 mmol 2-/2-(amino)pyrid-4-yl/-4-(methyl)ethanaminu, míchá se za teploty místnosti po dobu 48 hodin, odpaří a odparek se čistí velmi rychlou chromatografií.

Podíl sloučeniny v rozsahu 0,25 mmol se rozpustí v 9 ml methanolu a k roztoku se přidá 0,81 ml (0,81 mmol) 1,0-normálního roztoku hydroxidu sodného. Roztok se míchá za teploty místnosti přes noc a odpaří. Odparek se rozpustí ve 3 ml vodného acetonitrilu, ochladí na teplotu 0 °C a okyselí 0,21 ml (2,7 mmol) kyseliny trifluoroctové. Roztok se odpaří a odparek se čistí velmi rychlou chromatografií na reverzní fázi (Cl8, silikagel, acetonitril ve vodě obsahující kyselinou 50 trifluoroctovou).

-51 CZ 292323 B6

Příklad 46

Parenterální prostředek ve formě dávkové jednotky

Prostředek, který obsahuje 20 mg sloučeniny z příkladu 1, se jako sterilní suchý prášek připraví takto: 20 mg sloučeniny se rozpustí v 15 ml destilované vody. Roztok se filtruje za sterilních podmínek do ampuli o objemu 25 ml pro větší počet dávek a lyofilizuje se. Prášek se rekonstituuje přidáním 20 ml 5% dextrózy ve vodě (D5W) pro intravenózní a intramuskulámí injekce. 10 Dávka je přitom stanovena objemem injekce. Následující ředění se může provést přidáním odměřeného objemu této dávkové jednotky do jiného objemu dextrózy ve vodě pro injekce nebo odměřená dávka se může přidat jiným mechanizmem pro dávkování léčivé látky, jako do lahvičky nebo vaku pro intravenózně kapanou infuzi nebo jiný injekčně infuzní systém.

Příklad 47

Orální prostředek ve formě dávkové jednotky

Kapsle pro orální podání se připraví smícháním a rozemletím 50 mg sloučeniny z příkladu 1 se 75 mg laktózy a 5 mg stearátu hořečnatého. Výsledný prášek se proseje a plní do tvrdých želatinových kapslí.

Příklad 48

Orální prostředek ve formě dávkové jednotky

Tableta pro orální podání se může připravit smícháním a granulací 20 mg sacharózy, 150mg 30 dihydrátu síranu vápenatého a 50 mg sloučeniny z příkladu 1 s 10% roztokem želatiny. Mokré granule se protlučou sítem, vysuší a smíchají s 10 mg škrobu, 5 mg mastku a 3 mg kyseliny stearové a slisují do tablet.

Test inhibice RGD zprostředkovaného GPIIb-IIIa vázání a test inhibíce shlukování krevních 35 destiček

Test inhibice RGD zprostředkovaného GPIIb-IIIa vázání a test inhibíce shlukování krevních destiček se provedou podle údajů ve WO 93/00095 (PCT/US92/05463).

Podle tohoto postupu se zkoušejí sloučeniny z dále uvedené tabulky, přičemž se dosáhnou tyto výsledky.

-52CZ 292323 B6

Tabulka

Při-

klad

1	NMeCO	NH	CH,CO;H	ch3		0,067	0,003
2	NMeCO	NH	CH,CO:H	iscpentyl		0,045	0,0019
3	NMeCO	NH	CH;CO;H	(CH2) 2Ph	F^^NMoCO hH	0,007	0,0015
4	NHCO	NH	CH:CO:H	(CH2)2Ph	W“	74,3	5,01
					O*»
	NCO	NH	CH;CO-H	(CH,) ,=-Hex	ZA	—	0,0012

-53CZ 292323 B6

Tabulka - pokračováni

Pří- U A- R² R³ R^£ IC₅₀(h) KJ260) klad μΜ

6	NCO	NH CHjCOjH	(CH2),Ph	Z NCO	0,085	0,018
7	NHCO	NH CH2CO2H	(CH2)2Ph		2,97	0,9
8	NCO	NH CH,CO,H	ch3		0,09	0,004
9	NMeCO	ch2 ch2co2h	(CH2)2Ph		0,034	0,0015
10	NMeCO	ch2 ch,co2h	n-Bu	ry^	0,031	0,0015
11	NMeCO	CH, CH,C02H	(CH2)2Ph		0,036	0,001
12	NMeCO	CH2 CH.CCkH	(CH2)5Ph		0,008	0,002
13	NMeCO	ch2 ch,co2h	isopropyl	NH	0,029	0,0015
14	NMeCO	CH, CH,CO2H	isopropyl		0,037	0,002
15	NMeCO	ch2 CH,CO,H	isopentyl		0,032	0,0015
16	NMeCO	CH, CH,CO2H			0,027	0,002
17	NMeCO	CH, CH,CO,H	cyklohexyl	0,049	0,0013
18	NMeCO	CH, CH,CO2H	(CH2),Ph-		0, 027	0,0017

-54CZ 292323 B6

Tabulka - pokračování

Příklad	U	A1	R2	R3 R6	IC59(h) K;	.(260) μΜ
19	CONH	CH,	CH,CO,H	(CH2) ,Ph		0,011	0,002
20	CONH	ch2	CHjCOíH	(CHZ) -cyklohexyl^ť^^”**1 0,077	0,013
21	NCO	ch2	CH2CO,H	(CH2)2Ph		0,007	0,0011
22	NMeCO	CH,	CH,CH,CO,H (CH,),Ph		7,9	0, 65
23	NCO	N	CH,COjH	(CH2)2Ph	Z^I*€O	3,1	0,28
24	NCO	N	CH,C0,H	(CH2) ;Ph		0,008	0,0005
25	NCO	N	CH,CO,H	isopropyl		0,18	0,0025
26	NCO	N	CH,CO,H	Me	.σ6	11,5	1,53
27	NCO	N	CH,CO,H	Me	ε'ικο	0,028	0,0025
28	NCO	N	CH,CO,H	Me	f^N-CO	0,028	0,0025
29	NCO	N	CH-CO,H	Me	HN^J	0,028	0,0025
30	NCO	N	CH2CO,H	Me	f**N-CO	0,028	0,0025
31	NCO	N	CH,CO,H	Me	f^N-CO r-A	0,090	0,004

-55CZ 292323 B6

Tabulka	- pokračování
Pří- U	A1 R2 R3	R*	IC«c(h) Ki<260)
klad			μΜ

32	NCO	N	CH.CO.H	Me		0,090	0,004
33	NMeCO	N	CH,CO,H	Me	HN^J		0,095
34	NMeCO	N	CHVOJI	Me		0,032	0,0019
35	NMeCO	N	CH,CO2H	Me		0,032	0,0019
36	OCO	N	ch,co2h	CH2CH,Ph	terc.-BuOCO	—	—
37	NCO	ch2	ch2co-,h	Me		0,070	0,0042
					jCj
38	NCO	N	ch,co2h	Me		0,055	0,008
39	NMeCO	N	ch2co,h		NH	0,018	0,0025
40	NMeCO	N	ch,co2h	CH2CH2Ph		0,060	0,008
41	NMeCO	N	ch;co2h	Me		0,036	0,0021
42	NMeCO	N	CH,CO,H	isopropyl	0,109	0,003
43	NMeCO	N	ch,co2h	CH2CH2Ph —-N*00		0,022
44	CONMe	CH	2 CH.CO.H	λ CH,CH,Ph * V “ Mi	0,036	0,0021

-56CZ 292323 B6

Výše uvedené údaje jsou ilustrací provedení a použití tohoto vynálezu. Tento vynález však není omezen na přesná ztělesnění, která jsou zde popsána, ale zahrnuje veškeré modifikace spadající do rozsahu patentových nároků, jak jsou uvedeny dále.

Claims (9)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Benzodiazepinová sloučenina obecného vzorce II (II), ve kterém

   R je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, benzylová skupina, která je popřípadě substituována chlorem, bromem, nitroskupinou, methoxyskupinou nebo methylovou skupinou, (pivaloyl)methylová skupina nebo (2-methyl—methoxypropanoyl)methylová skupina,

   R³ znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku, Ar-skupinu, Ar-alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, cykloalkylovou skupinu se 3 až 7 atomy uhlíku, cykloalkylalkylovou skupinu se 3 až 7 atomy uhlíku v cykloalkylové části a I až 6 atomy uhlíku v alkylové části, Het-skupinu nebo skupinu Het-alkyl, kde alkylová část obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku, kde Ar znamená fenylovou nebo naftylovou skupinu a

   Het znamená vždy popřípadě substituovaný pětičlenný nebo šestičlenný monocyklický kruh nebo devítičlenný nebo desetičlenný bicyklický kruh, který obsahuje 1 až 3 heteroatomy zvolené ze souboru zahrnujícího dusík, kyslík a síru, přičemž případnými substituenty jsou 1 až 3 substituenty zvolené z jakékoli možné kombinace X,

   X je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku substituovaná třemi atomy fluoru, skupina N(R')₂, CO₂R', CON(R')₂, hydroxyskupina, atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu a kde R' znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, a její farmaceuticky přijatelné soli, za předpokladu, že jestliže X je atom vodíku, R³ není fenethyl.
2. 2. Benzodiazepinová sloučenina podle nároku 1, obecného vzorce II ve kterém R³ je atom vodíku, methyl nebo isopropyl.

   -57CZ 292323 B6
3. 3. Benzodiazepinová sloučenina podle nároku 2, kterou je: (R,S)-7-[(4,4'-bipiperidin-l-yl)karbonyl]-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4-benzodiazepin-2-acetát nebo kyselina (S)-7-[(4,4'-bipiperidin-l-yl)karbonyl]-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4benzodiazepin-2-octová nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
4. 4. Benzodiazepinová sloučenina podle nároku 2, kterou je kyselina (S)-7-[(4,4'-bipiperidinl-yl)karbonyl]-2,3,4,5-tetrahydro-4-methyl-3-oxo-lH-l,4—benzodiazepin-2-octová nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
5. 5. Způsob přípravy benzodiazepinové sloučeniny podle některého z nároků 1 až 4, v y z n a čující se tím, že se zpracuje sloučenina obecného vzorce IV (IV), ve kterém

   A¹ je skupina NH,

   R je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, benzylová skupina, která je popřípadě substituována chlorem, bromem, nitroskupinou, methoxyskupinou nebo methylovou skupinou, (pivaloyl)methylová skupina nebo (2-methyl-2-methoxypropanoyl)methylová skupina,

   R³ je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylová skupina se 3 až 6 atomy uhlíku, Ar-alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, Het-alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, kde Ar a Het mají význam uvedený v nároku 1,

   X je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku substituovaná třemi atomy fluoru, skupina N(R')₂, CO2R', CON(R')2, hydroxyskupina, atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu, kde R' znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, a

   R⁶ je (4,4'-bipiperidin-l-yl)karbonyl, kde kterýkoli bazický atom dusíku je chráněn, s činidlem, v jakémkoli pořadí,

   -58CZ 292323 B6 (i) k odstranění chránící skupiny aminoskupiny z R⁶ a, pokud je to nezbytné, (ii) k odstranění chránící skupiny karboxylové skupiny z CO₂R a (iii) k vytvoření její farmaceuticky přijatelné soli.
6. 6. Způsob přípravy benzodiazepinové sloučeniny podle nároku 4 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, vyznačující se t í m, že se zpracuje sloučenina obecného vzorce ve kterém

   A¹ je skupina NH,

   R je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, benzylová skupina, která je popřípadě substituována chlorem, bromem, nitroskupinou, methoxyskupinou nebo methylovou skupinou, (pivaloyl)methylová skupina nebo (2-methyl-2-methoxypropanoyl)methylová skupina,

   R³ je methyl a

   X je atom vodíku,

   R⁶’ je (4,4'-bipiperidin-l-yl)karbonyl, kde bazický atom dusíku je chráněn, s činidlem, v jakémkoli pořadí, (i) k odstranění chránící skupiny aminoskupiny z R⁶ a, pokud je to nezbytné, (ii) k odstranění chránící skupiny karboxylové skupiny z CO₂R a (iii) k vytvoření její farmaceuticky přijatelné soli.
7. 7. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje benzodiazepinovou sloučeninu podle některého z nároků 1 až 4 a farmaceuticky přijatelný nosič.
8. 8. Použití benzodiazepinové sloučeniny podle některého z nároků 1 až 4 pro výrobu léčiva k léčení infarktu myokardu, trombózy, embolie, mrtvice a poruch souvisejících s infarktem nebo restenózy po angioplastice.
9. 9. Použití benzodiazepinové sloučeniny podle některého z nároků 1 až 4 pro výrobu léčiva k zabránění reokluze arterie nebo vény po trombolytické terapii.