CZ289407B6 - Sterolové deriváty pro výrobu léčiva k regulování meiózy - Google Patents
Sterolové deriváty pro výrobu léčiva k regulování meiózy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ289407B6 CZ289407B6 CZ19963725A CZ372596A CZ289407B6 CZ 289407 B6 CZ289407 B6 CZ 289407B6 CZ 19963725 A CZ19963725 A CZ 19963725A CZ 372596 A CZ372596 A CZ 372596A CZ 289407 B6 CZ289407 B6 CZ 289407B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- substituents
- use according
- sterol derivatives
- formula
- hydrogen
- Prior art date
Links
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 title claims abstract description 38
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 title claims abstract description 38
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 title claims abstract description 37
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 230000018046 regulation of meiosis Effects 0.000 title description 2
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 claims abstract description 44
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 29
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 27
- -1 phospho Chemical class 0.000 claims description 23
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 19
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 19
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 13
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 210000003794 male germ cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 5
- RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N Cyclopentane Chemical compound C1CCCC1 RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000004184 methoxymethyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC([H])([H])* 0.000 claims description 4
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 3
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 claims description 3
- YQTCQNIPQMJNTI-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropan-1-one Chemical group CC(C)(C)[C]=O YQTCQNIPQMJNTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 125000004744 butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004063 butyryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- DMEGYFMYUHOHGS-UHFFFAOYSA-N heptamethylene Natural products C1CCCCCC1 DMEGYFMYUHOHGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims 26
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims 5
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims 2
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 claims 2
- 125000002853 C1-C4 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000006577 C1-C6 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000005041 acyloxyalkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000004183 alkoxy alkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 claims 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 35
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 34
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 25
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 20
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 16
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N (3beta,5alpha)-4,4-Dimethylcholesta-8,24-dien-3-ol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21 CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 8
- CHGIKSSZNBCNDW-QGBOJXOESA-N 14-demethyllanosterol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@@H](CCC=C(C)C)C)CC[C@H]21 CHGIKSSZNBCNDW-QGBOJXOESA-N 0.000 description 7
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 7
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 7
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 7
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 6
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OGQJUYXFIOFTMA-PBJLWWPKSA-N 4,4-dimethyl-8,14-cholestadien-3beta-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC=C21 OGQJUYXFIOFTMA-PBJLWWPKSA-N 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000003433 contraceptive agent Substances 0.000 description 5
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 5
- 210000001733 follicular fluid Anatomy 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- UJELMAYUQSGICC-UHFFFAOYSA-N Zymosterol Natural products CC12CCC(O)CC1CCC1=C2CCC2(C)C(C(C)C=CCC(C)C)CCC21 UJELMAYUQSGICC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 4
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 4
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 4
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 4
- 210000004508 polar body Anatomy 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- CGSJXLIKVBJVRY-XTGBIJOFSA-N zymosterol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C[C@@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@@H](CCC=C(C)C)C)CC[C@H]21 CGSJXLIKVBJVRY-XTGBIJOFSA-N 0.000 description 4
- BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N (10S)-3c-Acetoxy-4.4.10r.13c.14t-pentamethyl-17c-((R)-1.5-dimethyl-hexen-(4)-yl)-(5tH)-Delta8-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren Natural products CC12CCC(OC(C)=O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 14alpha-methylzymosterol Natural products CC12CCC(O)CC1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 3beta-Hydroxy-lanostan Natural products C1CC2C(C)(C)C(O)CCC2(C)C2C1C1(C)CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N Gluanol Natural products CC(C)CC=CC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(O)C(C)(C)C4CC3 BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N Lanosterol Natural products CC(CCC=C(C)C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N Nerifoliol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 3
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 3
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 3
- 244000309464 bull Species 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 230000002254 contraceptive effect Effects 0.000 description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N dihydrolanosterol Natural products CC(C)CCCC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 210000004420 female germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 3
- CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N lanosterol Chemical compound C([C@]12C)C[C@@H](O)C(C)(C)[C@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@H]([C@H](CCC=C(C)C)C)CC[C@@]21C CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N 0.000 description 3
- 229940058690 lanosterol Drugs 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 3
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- HVXVNFNRJMVTAU-NLIKTBTLSA-N 4,4-dimethylcholest-8(14)-en-3beta-ol Chemical compound C1CC2C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2C1=C1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVXVNFNRJMVTAU-NLIKTBTLSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical group O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UCTLRSWJYQTBFZ-UHFFFAOYSA-N Dehydrocholesterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)CCCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 UCTLRSWJYQTBFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 108010057021 Menotropins Proteins 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DDIPOTFOPZLXDX-JKSOKBOYSA-N [(10s,13r,14r,17r)-15-hydroxy-4,4,10,13-tetramethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-1,2,3,5,6,7,11,12,14,15,16,17-dodecahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-yl] benzoate Chemical compound C([C@]1(C)C2=C(CCC1C1(C)C)[C@@H]3C(O)C[C@@H]([C@]3(CC2)C)[C@H](C)CCCC(C)C)CC1OC(=O)C1=CC=CC=C1 DDIPOTFOPZLXDX-JKSOKBOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 2
- UORVGPXVDQYIDP-UHFFFAOYSA-N borane Chemical compound B UORVGPXVDQYIDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- UCTLRSWJYQTBFZ-DDPQNLDTSA-N cholesta-5,7-dien-3beta-ol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 UCTLRSWJYQTBFZ-DDPQNLDTSA-N 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 229940124558 contraceptive agent Drugs 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 2
- 108700039708 galantide Proteins 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 230000027758 ovulation cycle Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N phosphoryl trichloride Chemical compound ClP(Cl)(Cl)=O XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 2
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 2
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 2
- 230000031877 prophase Effects 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000033458 reproduction Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 2
- AWBZPJQUWZBRII-UHFFFAOYSA-N (10S)-3c-Hydroxy-10r.13c-dimethyl-17c-((R)-1.5-dimethyl-hexyl)-(5tH)-Delta8.14-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren Natural products CC12CCC(O)CC1CCC1=C2CCC2(C)C(C(C)CCCC(C)C)CC=C21 AWBZPJQUWZBRII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYHRVINOXYETMN-LCHSQBAESA-N (3s,10s,13r,14r,17r)-4,4,10,13-tetramethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-1,2,3,5,6,7,11,12,14,15,16,17-dodecahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C(C)(C)C1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]21 FYHRVINOXYETMN-LCHSQBAESA-N 0.000 description 1
- YNOMASPNJHCVPH-XONHKMQKSA-N (5r,10s,13r,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,11,12,16,17-decahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthrene Chemical compound C([C@@]12C)CCC[C@@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC=C21 YNOMASPNJHCVPH-XONHKMQKSA-N 0.000 description 1
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- ROUYUBHVBIKMQO-UHFFFAOYSA-N 1,4-diiodobutane Chemical compound ICCCCI ROUYUBHVBIKMQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AWBZPJQUWZBRII-CXDHQSPESA-N 5alpha-cholesta-8,14-dien-3beta-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C[C@@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC=C21 AWBZPJQUWZBRII-CXDHQSPESA-N 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- AMIMRNSIRUDHCM-UHFFFAOYSA-N Isopropylaldehyde Chemical compound CC(C)C=O AMIMRNSIRUDHCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229910010082 LiAlH Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005684 Liebig rearrangement reaction Methods 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- MAECKNFQQCZMJC-CCTRLIJASA-N [(10s,13r,14r,17r)-4,4,10,13-tetramethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-1,2,3,5,6,7,11,12,14,15,16,17-dodecahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-yl] benzoate Chemical compound C([C@]1(C)C2=C(CCC1C1(C)C)[C@@H]3CC[C@@H]([C@]3(CC2)C)[C@H](C)CCCC(C)C)CC1OC(=O)C1=CC=CC=C1 MAECKNFQQCZMJC-CCTRLIJASA-N 0.000 description 1
- ZHGNFAXKDDMBSG-KHYKQYHXSA-N [(10s,13r,17r)-4,4,10,13-tetramethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-1,2,3,5,6,7,11,12,16,17-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-yl] acetate Chemical compound C([C@@]12C)CC(OC(C)=O)C(C)(C)C1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC=C21 ZHGNFAXKDDMBSG-KHYKQYHXSA-N 0.000 description 1
- NNIVXCLYMRREHT-PKGYEJRXSA-N [(10s,13r,17r)-4,4,10,13-tetramethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-1,2,3,5,6,7,11,12,16,17-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-yl] benzoate Chemical compound C([C@]1(C)C2=C(CCC1C1(C)C)C3=CC[C@@H]([C@]3(CC2)C)[C@H](C)CCCC(C)C)CC1OC(=O)C1=CC=CC=C1 NNIVXCLYMRREHT-PKGYEJRXSA-N 0.000 description 1
- GUMUXIUOAHPXSU-VEPILUDWSA-N [(3s,5s,10s,13r,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,11,12,16,17-decahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] ethyl carbonate Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC=C2C2=C1[C@@]1(C)CC[C@H](OC(=O)OCC)C[C@@H]1CC2 GUMUXIUOAHPXSU-VEPILUDWSA-N 0.000 description 1
- PUIDLBOGPALAES-WZKVZTQXSA-N [(8r,9r,10s,13r,14r,17r)-8,10,13,14-tetramethyl-17-[(2r)-6-methylhepta-4,6-dien-2-yl]-2,3,4,5,6,7,9,11,12,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] acetate Chemical compound C1CC(OC(C)=O)CC2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]([C@@H](CC=CC(C)=C)C)[C@@]4(C)CC[C@@H]3[C@]21C PUIDLBOGPALAES-WZKVZTQXSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- SMZOGRDCAXLAAR-UHFFFAOYSA-N aluminium isopropoxide Chemical compound [Al+3].CC(C)[O-].CC(C)[O-].CC(C)[O-] SMZOGRDCAXLAAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N benzoyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=CC=C1 PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SIPUZPBQZHNSDW-UHFFFAOYSA-N bis(2-methylpropyl)aluminum Chemical compound CC(C)C[Al]CC(C)C SIPUZPBQZHNSDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000085 borane Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000023752 cell cycle switching, mitotic to meiotic cell cycle Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- FZFAMSAMCHXGEF-UHFFFAOYSA-N chloro formate Chemical compound ClOC=O FZFAMSAMCHXGEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical class [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 125000001142 dicarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- MDKXBBPLEGPIRI-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;methanol Chemical compound OC.CCOCC MDKXBBPLEGPIRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 210000004186 follicle cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000003313 haploid nucleated cell Anatomy 0.000 description 1
- KWHDXJHBFYQOTK-UHFFFAOYSA-N heptane;toluene Chemical compound CCCCCCC.CC1=CC=CC=C1 KWHDXJHBFYQOTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BNTRVUUJBGBGLZ-UHFFFAOYSA-N hydron;pyridine-4-carbonyl chloride;chloride Chemical compound Cl.ClC(=O)C1=CC=NC=C1 BNTRVUUJBGBGLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014380 magnesium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 210000002394 ovarian follicle Anatomy 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 230000000624 ovulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 230000008775 paternal effect Effects 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LJCNRYVRMXRIQR-OLXYHTOASA-L potassium sodium L-tartrate Chemical class [Na+].[K+].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O LJCNRYVRMXRIQR-OLXYHTOASA-L 0.000 description 1
- LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N potassium tert-butoxide Chemical compound [K+].CC(C)(C)[O-] LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- HBEFYGYBMKPNSZ-UHFFFAOYSA-N s-phenyl chloromethanethioate Chemical compound ClC(=O)SC1=CC=CC=C1 HBEFYGYBMKPNSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000014639 sexual reproduction Effects 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 125000002328 sterol group Chemical group 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 239000012485 toluene extract Substances 0.000 description 1
- 238000001551 total correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- DBGVGMSCBYYSLD-UHFFFAOYSA-N tributylstannane Chemical compound CCCC[SnH](CCCC)CCCC DBGVGMSCBYYSLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000001665 trituration Methods 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J43/00—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
- C07J43/003—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not condensed
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J51/00—Normal steroids with unmodified cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not provided for in groups C07J1/00 - C07J43/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J53/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by condensation with a carbocyclic rings or by formation of an additional ring by means of a direct link between two ring carbon atoms, including carboxyclic rings fused to the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton are included in this class
- C07J53/001—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by condensation with a carbocyclic rings or by formation of an additional ring by means of a direct link between two ring carbon atoms, including carboxyclic rings fused to the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton are included in this class spiro-linked
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Pou it sterolov²ch deriv t obecn ho vzorce I, v n m substituenty maj specifick v²znamy, pro p° pravu l iva k regulov n mei zy pod v n m do z rode n bu ky ex vivo a in vitro, zejm na pod v n m do oocytu ex vivo a p°edev m do mu sk z rode n bu ky.\
Description
Vynález se týká použití sterolových derivátů pro výrobu léčiva k regulování meiózy podáváním do zárodečné buňky ex vivo a in vitro, zejména podáváním do oocytu ex vivo a především do mužské zárodečné buňky.
Dosavadní stav techniky
Meióza je jedinečnou a základní událostí zárodečných buněk, na které je založena sexuální reprodukce. Meióza zahrnuje dvě meiotická dělem'. Během prvního dělení dochází k výměně mezi mateřskými a otcovskými geny před tím, než se páry chromozomů rozdělí na dvě dceřinné buňky. Ty obsahují pouze polovinu (ln) chromozomů a 2c DNA. Druhé meiotické dělení probíhá bez DNA syntézy. Toto dělení tedy vede k tvorbě haploidních zárodečných buněk s pouze lc DNA.
Meiotické události jsou podobné u savčích i samičích zárodečných buněk, ale časový postup a diferenciační procesy, které vedou k vajíčkům a spermiím, se zásadně liší. Všechny samičí zárodečné buňky vstupují do profáze prvního meiotického dělení v časném stadiu života, často před narozením, ale všechny jsou později zadrženy jako oocyty v této profázi do evoluce po pubertě. Od velmi ranného období života má tedy samička zásobu oocytů, které se vyčerpávají tak dlouho, dokud zásoba není vyčerpána. Meióza u samiček není po oplodnění ukončena a vede pouze k jednomu vajíčku a dvěma abortivním polárním tělískům na zárodečnou buňku. Naproti tomu pouze některé samčí zárodečné buňky vstupují po pubertě do meiózy a ponechávají kmenovou populaci zárodečných buněk po celý život. Jakmile jednou meióza začne, potom v samčí buňce probíhá bez významného zpoždění a zredukuje 4 spermie.
O mechanismu, který reguluje iniciaci meiózy u samce a u samičky, je toho známo pouze málo. U oocytu nové studie ukazují na to, že by folikulámí puriny, hypoxanthin nebo adenosin mohly být zodpovědné za meiotické zadržení [Downs S. M. a spol.: Dev. Biol. 82, 454 (1985), Eppig J. J. a spol.: Dev. Biol. 119, 313 (1986) a Downs S. M.: Mol. Reprod. Dev. 35, 82 (1993).]. Přítomnost meiózu regulujících látek schopných difúze byla poprvé popsána Boskovem a spol. v kultivačním systému žláz fetálních myší [Byskov A. G. a spol.: Dev. Biol. 52. 193 (1976).]. Látka indukující meiózu (MIS) byla sekretována fetálním myším vaječníkem, u kterého meióza nastoupila, a látka zabraňující meiózu (MPS) byla uvolněna z morfologicky diferencovaných varlat s odpočívajícími nemiotickými zárodečnými buňkami. Bylo navrženo, že relativní koncentrace MIS a MPS regulovaly počátek, zadržení a opětné zahájení meiózy v samčích a samičích zárodečných buňkách [Byskov A. G. a spol. v „Tge Physiology of Reproduction“ (red. Knobil E., Neill J.D.), Raven Press, New York (1994)]. Je jasné, že jestliže je možné regulovat meiózu, lze regulovat reprodukci. Naneštěstí až do dnešní doby nebylo možné identifikovat látku indukující meiózu.
Podstata vynálezu
Překvapivě bylo zjištěno, že některé steroly, známé jako meziprodukty biosyntézy cholesterolu, a některé nové, strukturně příbuzné syntetické steroly lze použít pro regulaci meiózy.
Předložený vynález se tedy týká sterolových derivátů obecného vzorce I
-1CZ 289407 B6
v němž R1 a R2 znamenají nezávisle na sobě skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z atomu vodíku, nerozvětvené nebo rozvětvené alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, která může být substituována atomem halogenu nebo hydroxylovou skupinou, nebo Rf a R2 společně s atomem uhlíku, na který jsou navázány, tvoří cyklopentanový nebo cyklohexanový kruh,
R3 a R4 znamenají společně další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou navázány, v tomto případě R5 znamená atom vodíku a R6 a R7 znamenají buď atom vodíku, nebo společně znamenají další dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou navázány, nebo
R5 a R4 společně znamenají další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou navázány, v tomto případě R3 znamená atom vodíku a R6 a R7 znamenají buď atom vodíku, nebo společně znamenají další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou navázány, nebo
R6 a R4 společně znamenají další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou navázány, v tomto případě R, R5 a R7 znamenají atom vodíku,
R8 a R9 znamenají atom vodíku nebo společně znamenají další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou navázány a
R10 znamená buď atom vodíku, nebo Ci_2oacyl, fosfoskupinu nebo sulfonyl, nebo methyl, methoxymethyl, benzyl, pivaloylmethyl, nebo skupinu, která se zbývající částí molekuly tvoří C]_7ether, pro použití jako léčivý prostředek.
Podle dalšího aspektu se předložený vynález týká nových sterolových sloučenin obecného vzorce I.
V souvislosti s předloženým vynálezem výraz „regulující meiózu“ je chápán jako označení toho, že tyto sloučeniny se mohou používat pro stimulování meiózy in vitro, in vivo a ex vivo.
Podle podrobnějšího aspektu se předložený vynález týká použití sloučeniny shora uvedeného obecného vynálezu I pro regulaci meiózy.
-2CZ 289407 B6
Podle ještě dalšího aspektu se předložený vynález týká způsobu regulování meiózy v savčí zárodečné buňce, který se vyznačuje tím, že zahrnuje podávání efektivního množství sloučeniny shora uvedeného obecného vzorce I do zárodečné buňky, která takové léčení potřebuje.
V další části tohoto spisu bude předložený vynález popsán podrobněji.
Bylo zjištěno, že látky indukující meiózu extrahované z býčích varlat a z lidské folikulámí kapaliny jsou schopny jak indukovat opětné zahájení meiózy v kultivovaných myších oocytech (oocytový test), tak stimulovat meiózu v savčích zárodečných buňkách kultivovaných fetálních myších varlat (gonádový test). Látka indukující meiózu je produkována dospělými varlaty různých savců, včetně člověka. Nachází se také ve zralých vaječníkových folikulech některých druhů savců, včetně žen. Z příkladů 1 a 2 je zřejmé, že látkou indukující meiózu, která byla nalezena v býčích varlatech, je 4,4-dimethylzymosterol, zatímco látkou indukující meiózu, která byla nalezena v lidské folikulámí kapalině, je 4,4-dimethyl-5a-choIesta-8,14,24-trien-3fJ-ol.
Existence látek indukujících meiózu je nějaký čas známa. Avšak až do dneška nebyla známa identita látky indukující meiózu nebo látek. Podle nej lepších znalostí autorů předloženého vynálezu není až dosud v lékařství známo žádné praktické použití sloučenin obecného vzorce I. Zvláště pak není dosud známo použití žádné sloučeniny obecného vzorce I jako léčivového přípravku pro regulaci meiózy.
Perspektiva schopnosti ovlivňovat meiózu je několikerá. Podle výhodného provedení předloženého vynálezu se sloučeniny obecného vzorce I používají pro stimulování meiózy. Podle jiného výhodného provedení předloženého vynálezu se sloučeniny obecného vzorce I používají pro stimulování meiózy u lidí. Sloučeniny obecného vzorce I jsou tedy slibnými novými činidly regulujícími plodnost bez obvyklého vedlejšího účinku na somatické buňky, které jsou známy z dosud používaných hormonálních antikoncepčních činidel, které jsou založeny na eastogenech a/nebo gestagenech. Pro použití jako antikoncepční činidlo u žen se látka indukující meiózu může podávat tak, aby prematuračně indukovala opětovné zahájení meiózy v oocytech, které jsou ještě v rostoucím folikulu, před ovulačním maximem výskytu genadotropinů. U žen může být opětné zahájení meiózy indukováno například týden po tom, co skončila předchozí menstruace. Když dochází k ovulaci, výsledné přezrálé oocyty se nejpravděpodobněji neoplodní. Normální menstruační cyklus se pravděpodobně neovlivní. V této souvislosti je důležité si všimnout, že biosyntéza progesteronu v kultivovaných lidských granulozních buňkách (somatické buňky folikulu) není ovlivněna přítomností látky indukující meiózu, zatímco estrogeny a gestageny až dosud používané v hormonálních antikoncepčních prostředcích mají nepříznivý účinek na biosyntézu progesteronu.
Podle jiného aspektu tohoto vynálezu se látka indukující meiózu obecného vzorce I může používat při léčení některých případů neplodnosti u samiček, včetně žen, jejich podáváním těm, které, díky nedostatečné vlastní produkci MIS, nejsou schopny produkovat zralé oocyty. Jestliže se provádí oplodnění in vitro, dosáhne se také lepších výsledků, jestliže se látka indukující meiózu obecného vzorce I přidává k médiu, v němž jsou oocyty uchovávány.
Jestliže je neplodnost samců, včetně mužů, způsobena nedostatečnou vlastní produkcí látky indukující meiózu, potom podávání látky indukující meiózu obecného vzorce I může tento problém odstranit.
Způsobem podávání prostředků obsahujících sloučeninu obecného vzorce I může být jakýkoliv způsob, který efektivně dopravuje aktivní sloučeninu do místa jejího působení.
Jestliže se tedy sloučeniny podle tohoto vynálezu podávají savci, pak se s výhodou podávají ve formě farmaceutického prostředku, který obsahuje alespoň jednu sloučeninu obecného vzorce I společně s farmaceuticky přijatelným nosičem. Pro orální použití se připravuji tyto prostředky s výhodou ve formě tobolek nebo tablet.
-3CZ 289407 B6
Ze shora uvedeného bude zřejmé, že režim podávání bude záviset na stavu léčeného. Jestliže se používá pro léčení neplodnosti, podávání může být jenom jediné nebo po omezenou dobu, například do dosažení těhotenství. Jestliže se podává jako antikoncepční prostředek, látka indukující meiózu obecného vzorce I se musí brát buď kontinuálně, nebo cyldicky. Jestliže se používá jako antikoncepční činidlo u žen a nebere se kontinuálně, bude hrát důležitou roli čas podávání vzhledem k menstruačnímu cyklu.
Farmaceutické prostředky mohou obsahovat nosiče, ředidla, zesilovače absorpce, ochranná činidla, pufiy, činidla pro úpravu osmotického tlaku, činidla dezintegrující tabletu a další přísady, které se konvenčně používají v oblasti techniky. Mezi příklady pevných nosičů patří uhličitan hořečnatý, stearát hořečnatý, dextrin, laktóza, cukr, talek, želatina, pektin, tragant, methylcelulóza, sodná sůl karboxymethylcelulózy, nízkotající vosky a kakaové máslo.
Mezi kapalné prostředky patří sterilní roztoky, suspenze a emulze. Takové kapalné prostředky mohou být vhodné pro injekci nebo pro použití v souvislosti s ex vivo nebo in vitro oplodněním. Kapalné prostředky mohou obsahovat jiné přísady, které se konvenčně používají v oblasti techniky, seznam některý z nich je shora uveden.
Prostředek pro transderální podávání sloučeniny podle tohoto vynálezu se může připravit ve formě náplasti. Prostředek pro nosní podávání se může připravit ve formě spreje v kapalné nebo práškové formě určeného pro podávání do nosu.
Dávka sloučeniny podle vynálezu, která se používá, bude stanovena lékařem a bude, mimo jiné, záviset na příslušné použité sloučenině, na způsobu podávání a na účelu použití.
Výhodnými sloučeninami obecného vzorce I jsou následující sloučeniny:
cholest-7-en-3 β-οΐ, 4-methylcholest-7-en-3|3-ol, 4-ethylcholest-7-en-3 β-οΐ,
4.4- dimethylcholest-7-en-3 β-οΐ, 4a-methyl-4|3-methylcholest-7-en-3 β-οΐ,
4.4- diethylcholest-7-en-3 β-οΐ, 4-propylcholest-7-en-3 β-οΐ, 4-butylcholest-7-en-3 β-οΐ, 4-isobutylcholest-7-en-3p-ol,
4.4- tetramethylencholest-7-en-3 β-οΐ,
4.4- pentamethylencholest-7-en-3 β-οΐ, cholest-8-en-3 β-οΐ,
4-methylcholest~8-en-3 β-οΐ,
4-ethylcholest-8-en-3 β-οΐ,
4.4- dimethylcholest-8-en-3 β-οΐ, 4a-methyl-4p-ethylcholest-8-en-3 β-οΐ, 4a-ethyl-4|3-methylcholest-8-en-3 β-οΐ,
4.4- diethylcholest-8-en-3 β-οΐ, 4-propylcholest-8-en-3|3-ol,
4-butylcholest-8-en-3 β-οΐ,
4-isobutylcholest-8-en-3 β-οΐ,
4.4- tetramethylencholest-8-en-3 β-οΐ,
4.4- pentamethylencholest-8-en-3 β-οΐ, cholest-8( 14)-en-3 β-οΐ,
4-methylcholest-8( 14)-en-3 β-οΐ,
-4CZ 289407 B6
4-ethylcholest-8( 14)-en-3 β-οΐ,
4.4- dimethylcholest-8( 14)-en-3 β-οΐ, 4a-methyl-4p-ethylcholest-8( 14)-en-3 β-οΐ, 4a-ethy Μβ-methy lcholest-8( 14)-en-3 β-οΐ,
4.4- diethylcholest-81 (4)-en-3 β-οΐ, 4-propylcholest-8(l 4)-en-3 β-οΐ, 4-butylcholest-8( 14)-en-3 β-οΐ, 4-isobutylcholest-8( 14)-en-3 β-οΐ,
4.4- tetramethylencholest-8( 14)-en-3 β-οΐ,
4.4- pentamethy lencholest-8( 14)-en-3 β-οΐ, cholesta-8,14-dien-3 β-οΐ, 4-methylcholestar-8,14-dien-3 β-οΐ, 4-ethylcholesta-8,14-dien-3 β-οΐ,
4.4- dimethylcholesta-8,14-dien-3 β-οΐ, 4a-methyl-4[3-ethy lcholesta-8,14-dien-3 β-οΐ, 4a-ethyl-4|3-methylcholesta-8,14-dien-3 β-οΐ,
4.4- diethylcholesta-8,14-dien-3 β-οΐ, 4-propylcholesta-8,14-dien-3 β-οΐ, 4-butylcholesta-8,14-dien-3 β-οΐ, 4-isobutylcholesta-8,14-dien-3 β-οΐ,
4.4- tetramethylencholesta-8,14-dien-3 β-οΐ,
4.4- pentamethylencholesta-8,14-dien-3 β-οΐ, cholesta-8,24—dien-3 β-οΐ,
4—methylcholesta-8,24-dien-3[3-ol,
4-ethylcholesta-8,24-dien-3 β-ok,
4.4- dimethylcholesta-8,24-dien-3 β-οΐ, 4a-methyl-4[3-ethylcholesta-8,24-dien-3 β-οΐ, 4a-ethyl-4|3-methylcholesta-8,24—dien-3 β-οΐ,
4.4- diethylcholesta-8,24-dien-3 β-οΐ,
4-propylcholesta-8,24-dien-3 β-οΐ, 4-butylcholesta-8,24-dien-3 β-οΐ, 4-isobutylcholesta-8,24-dien-3 β-οΐ,
4.4- tetramethylencholesta-8,24-dien-3p-ol,
4.4- pentamethylencholesta-8,24-dien-3|3-ol, cholesta-8,14,24-trien-3 β-οΐ, 4-methylcholesta-8,14,24-trien-3 β-οΐ, 4-ethylcholesta-8,14,24-trien-3 β-οΐ,
4.4- dimethylcholesta-8,14,24-trien-3 β-οΐ, 4a-methy l-4|3-ethylcholesta-8,14,24-trien-3 β-οΐ, 4a-ethyl-4P-methylcholesta-8,14,24-trien-3 β-οΐ,
4.4- diethylcholesta-8,14,24-trien-3 β-οΐ, 4-propy lcholesta-8,14,24-trien-3 β-οΐ, 4-butylcholesta-8,14,24-trien-3 β-οΐ, 4-isobutylcholesta-8,14,24-trioen-3 β-οΐ,
4.4- tetramethylencholesta-8,14,24-trien-3 β-οΐ,
4.4- pentamethylencholesta-8,14,24-trien-3|3-ol a jejich estery a ethery.
Výhodnými estery obecného vzorce I jsou ty estery, v nichž R10 znamená acylovou skupinu karboxylové kyseliny, která může být rozvětvená, nerozvětvená nebo cyklická a může obsahovat popřípadě substituovanou aminovou skupinu a/nebo 1 nebo 2 atomy kyslíku vedle karbonylového atomu kyslíku esterové skupiny, který váže skupinu R10 na sterolový skelet. Jestliže R10 znamená acylovou skupinu, pak s výhodou znamená skupinu s 1 až 20 atomý uhlíku, výhodněji
-5CZ 289407 B6 s 1 až 12 atomy uhlíku, výhodněji s 1 až 10 atomy uhlíku ještě výhodněji s 1 až 7 atomy uhlíku. Kyselina, od níž je R10 odvozena, může znamenat dikarboxylovou skupinu. Mezi příklady R10 patří acetylová, benzoylová, pivaloylová, butyrylová, nikotinoylová, isonikotinoylová, hemisukcinoylová, hemiglutaroylová, hemimalonylová, hemiftaloylová, butylkarbamoylová, fenylkarbamoylová, butoxykarbonylová, terc.butoxykarbonylová, ethoxykarbonylová, 4dimethylaminomethylbenzoylová, 4-diethylaminomethylbenzoylová, 4-dipropylaminomethylbenzoylová, 4-(morfolinomethylj-benzoylová, 4-(4-methyl-l-piperazinylmethyl)-benzoylová, 3-dimethylamino-methylbenzoylová, 3-diethylaminomethylbenzoylová, 3-dipropylaminomethylbenzoylová, 3-(morfolinomethyl)-benzoylová, 3-(4-methyl-l-piperazinylmethyl)benzoylová, sulfonová (v tomto případě sloučeniny obecného vzorce I znamená sulfátový ester nebo jeho sůl) nebo fosfonová skupina (v tomto případě sloučenina obecného vzorce I znamená fosfátový ester nebo jeho sůl).
Výhodnými ethery obecného vzorce I jsou ty ethery, v nichž R10 znamená methylovou skupinu, methoxymethylovou skupinu, benzylovou skupinu nebo pivaloyloxymethylovou skupinu.
Přirozeně se vyskytující sloučeniny podle předloženého vynálezu se mohou získávat z přírodních zdrojů známými způsoby. Mohou se také - podobně jako strukturně příbuzné syntetické steroidy podle přirozeného vynálezu - získávat syntézou známými způsoby.
Předložený vynález je dále ilustrován následujícími příklady, které však nejsou konstruovány jako omezující rozsah ochrany. Vlastnosti popsané v předcházejícím popisu a v následujících příkladech mohou, jak odděleně tak v jakékoliv jejich kombinaci, znamená materiál pro realizování vynálezu v jeho různých formách.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Izolace, čištění a identifikace látky indukující meiózu (MIS) z býčích varlat
Ihned po porážce byla odebrána varlata býka starého 6 let (Danish Landrace). Bělavý obal byl odstraněn a testikulární tkáň byla dána do suchého ledu a skladována při -80. Zmrazená testikulámí tkáň (92 g) byla rozdrcena na kousky menší než 1 mm3 a sušena vymražováním v temnotě do úplného vysušení, přibližně 90 h. Tkáň vysušená vymražením byla extrahována 24 h 400 ml heptanu (LiChrosolv, Měrek 4390, Německo) pod dusíkem za míchání při 20 °C. Suspenze byla zfiltrována a pevný materiál byl ještě jednou extrahován stejným postupem. Spojené organické fáze se odpaří dosucha na rotačním odpařováku za teploty místnosti. Získá se 981 g extrahovaného materiálu. Tento materiál se rozpustí v heptanu a rozdělí se do 15 lékovek, z nichž se odpaří heptan. Lékovky se skladují pod dusíkem při 4 °C ve tmě.
Extrakty byly čištěny třístupňovou HPLC.
V prvním stupni se obsah lékovky rozpustí v 50 μΐ 50% (obj.) tetrahydrofuranu (THF) ve vodě a nanese se na HPLC kolonu s obrácenou fází (LiChroSpher 100 RP-8, 5 pm, 250 krát 4 mm vnitřní průměr, Měrek). Eluce se provádí 15 minut při 40 °C lineárním gradientem THF od 50 % do 100 % (obj.) (průtok: 1 ml/min). Bylo sebráno 18 frakcí po 1 ml. Tyto frakce byly testovány na MIS aktivitu.
V druhém stupni byly ty frakce z prvního stupně, které byly v oocytovém testu zjištěny jako aktivní, rozpuštěny v 50 až 100 μΐ 70% (obj.) THF a naneseny na kolonu podobně jako v prvním stupni. Eluce se provádí 16 minut při 40 °C lineárním gradientem THF od 60 do 78 % (obj.) (průtok 1 ml/min). Bylo odebráno 8 frakcí po 1 ml. Tyto frakce byly testovány na MIS aktivitu.
-6CZ 289407 B6
V třetím stupni se frakce, které byly zjištěny jako aktivní v oocytovém testu, rozpustí ve 100 μΐ směsi heptanu s 2-propanolem (98:2, obj. díly) a nanesou na semipreparativní HPLC kolonu (ChrmoSpher Si 5 pm, 250 x 10 mm vnitřní průměr, Chrompack). Eluce se provádí za teploty místnosti mobilní fází, která obsahuje heptan/2-propanol v poměru 98:2 (obj.), průtok 5 ml/min. Bylo odebráno 5 frakcí po 2,5 ml a tyto frakce byly testovány na MIS aktivitu.
Ve všech třech stupních byla eluce sledována UF-detekcí při 220 nm.
Materiál, kteiý se získá shora popsaným třístupňovým čištěním, byl použit pro studie molekulární struktury aktivní sloučeniny NMR spektrometrií a hmotnostní spektrometrií.
Pro NMR spektrum se přibližně 1 mg vyčištěného materiálu rozpustí v 0,6 ml deuterochloroformu. 23C-H NMR spektrum, ’H NMR spektrum (s a bez resoluce) a 2D TOCSX spektra byly změřeny na spektrometru Bruker AMX2 400, který má inverzní širokopásmovou 5mm hlavu sondy s gradientovou cívkou. 13C NMR chemické posuny v ppm (δ) izolované MIS jsou uvedeny v tabulce 1 a srovnány s odpovídajícími daty zymosterolu [Taylor U. F. a spol.: J. Lipid Res. 22.171 (1981).] a lanosterolu [Emmons G. T. a spol.: Mang. Res. Chem. 27.1012 (1979).].
Tabulka 1
| atom uhlíku č. | zymosterol | lanosterol | MIS |
| 1 | 35,1 | 35,5 | 35,8 |
| 2 | 31,5 | 27,8 | 28,0 |
| 3 | 70,9 | 79,0 | 79,0 |
| 4 | 38,2 | 38,9 | 38,9 |
| 5 | 40,7 | 50,4 | 50,2 |
| 6 | 25,5 | 18,2 | 18,4 |
| 7 | 27,1 | 26,5 | 28,5 |
| 8 | 128,0 | 134,4 | 128,0 |
| 9 | 134,8 | 134,4 | 135,8 |
| 10 | 35,6 | 37,0 | 37,0 |
| 11 | 22,8 | 21,0 | 22,1 |
| 12 | 36,9 | 30,9 | 29,7 |
| 13 | 42,0 | 44,4 | 42,1 |
| 14 | 51,8 | 49,8 | 51,9 |
| 15 | 23,7 | 30,8 | 23,8 |
| 16 | 28,7 | 28,2 | 28,8 |
| 17 | 54,7 | 50,4 | 54,8 |
| 18 | 11,2 | 15,7 | 11,3 |
| 19 | 17,8 | 19,1 | 19,8 |
| 20 | 36,0 | 36,2 | 36,0 |
| 21 | 18,6 | 18,6 | 18,6 |
| 22 | 36,0 | 36,3 | 36,1 |
| 23 | 24,7 | 24,9 | 24,8 |
| 24 | 125,0 | 125,2 | 125,2 |
| 25 | 130,6 | 130,9 | 130,9 |
| 26 | 17,6 | 17,6 | 17,6 |
| 27 | 25,7 | 25,7 | 25,7 |
| 28 | 15,4 | 15,4 | |
| 29 | 27,9 | 27,9 | |
| 30 | 24,2 |
Hmotnostní spektra byla měřena na přístroji VG Trio 1000 LC/MS s LINC interfází svazku částic a softwarem LAB-BASE 2.1 (Fisons Instruments) s HPLC systémem s kolonou ChromSpher Si, 3 pm, kolona 100 krát 4,6 m (Chrompack). HPLC byla prováděna za teploty místnosti heptanem s 2-propanolem v poměru 98:2 (obj.) jako mobilní fází (průtok: 0,6 ml/min). Vzorek MIS byl 5 injektován po rozpuštění v heptanu. Hmotnostní spektrometr pracoval způsobem elektronimpaktu (El). Výsledky jsou uvedeny v tabulce 2, ve které jsou relativní výšky maxim izolovaného produktu srovnány s daty pro 4,4-dimethylzymosterol (viz odkaz 1). Pod sloupcem odkaz 2 označení „+“ znamená, že odpovídající maximum bylo v této studii také popsáno. Označení ve sloupečku odkaz 1 nebo odkaz 2 znamená, že v těchto studiích nebylo odpovídající maximum ío popsáno.
Tabulka 2
| m/z | interpretace | MIS | odkaz 1 | odkaz 2 |
| 412 | [ΜΊ | 100 | 100 | + |
| 397 | [M-CH3]+ | 60 | 42 | + |
| 379 | [M-CHr-H2O]+ | 24 | 17 | + |
| 301 | [M-SC]+ | 11 | - | + |
| 299 | [M-SC-2H]+ | 22 | 13 | - |
| 274 | [M-SC-C2H3]+ | 8 | 8 | - |
| 259 | [M-SC-CjHef | 21 | 33 | + |
| 241 | [M-SC-C3H6-H2O]+ | 44 | 33 | + |
SC znamená postranní řetězec
C2H3 je poloha 16 a 17
C3H6 je poloha 15,16 a 17 odkaz 1: Baloch a spol.: Phytochemistry 23.2219 (1984) odkaz 2: Morimoto a spol.: Liebigs Ann. Chem. 708. 230 (1967).
Na základě nC-NMR spektra a molekulové hmotnosti 412, jak byla stanovena hmotnostní spektroskopií (MS), byla navržena struktura MIS izolované z býčích varlat jako 4,4-dimethyl5a-cholesta-8,24-dien-3p-ol, označovaný také jako 4,4-dimethylzymosterol (DMZ). Chemické 25 posuny jednotlivých atomů uhlíku MIS aktivního materiálu z třetího čistícího HPLC stupně byly srovnány se strukturně velmi příbuznými sloučeninami lanosterolem a zymosterolem. Pozorované chemické posuny, interakční konstanty a TOCSY korelace plně podporují zjištění, že izolovaná sloučenina je 4,4-dimethylzymosterol.
Příklad 2
Izolace, čištění a identifikace látky indukující meiózu (MIS) z lidské folikulámí kapaliny
Lidská folikulámí kapalina (FF) byla získána z folikulů odebraných z oocytů sebraných při léčení neplodnosti in vitro oplodnění. Kapalina byla vysušena vymražením a extrahována heptanem. Extrakt byl vyčištěn stejnými postupy jako shora popsáno v příkladu 1. Sloučenina aktivního maxima měla molekulární ion m/z 410. Hmotnostní spektrum ukazuje na to, že chemická spektra FF-MIS molekuly je 4,4-dimethyl-5a-cholesta-8,14,24-trien-3|3-ol.
Způsoby: Hmotnostní spektra byla měřena na přístroji VG Trio 1000 LC/MS s LINC interfází svazku částic a softwarem LAB-BASE 2.1 (Fisons Instruments) spojeným sHPLC systémem s přímou fází sestávajícím z kolony Chrom Spher Si, 3 pm, 100 krát 4,6 mm (Chrompack) se směsí heptanu s 2-propanolem, methanolem a amoniakem v poměru 68:30:2:0,2 (obj.) jako 45 mobilní fází (průtok: 0,5 ml/min) za teploty místnosti. Vzorek MIS byl injektován po rozpuštění
-8CZ 289407 B6 v heptanu. Hmotnostní spektrometr pracoval způsobem elektronimpaktu (El). Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.
Tabulka 3
| m/z | interpretace | |
| 410 | = M | [Ml |
| 395 | M-15 | [M-CH3]+ |
| 392 | M-18 | [M-H20]+ |
| 377 | M-33 | [M-CH3-H2O]+ |
| 349 | M-61 | [M-43-H2O]+ |
| 281 | M-129 | [M-SC-H2O]+ (SC=111) |
| 279 | M-131 | [M-SC-2H-H2O]+ |
| 257 | M-153 | [M-SC-42]+ |
| 255 | M-155 | [M-154-H]+ |
| 239 | M-171 | [M-SC-42-H2O]+ |
SC znamená postranní řetězec.
Příklad 3
Příprava 4[3-methylzymosterolu fermentací
Stupeň A
Kvasinkový kmen Kluyveromyces bulgaricus A3410 se naočkuje na YPG šikmý agar a nechá se růst 3 dny při 30 °C v termostatovaném inkubátoru. K šikmé půdě se přidá 5 ml sterilního YE média. Kvasinkové kolonie se suspendují v kapalném médiu třepáním zkumavky na vířivém mixéru. Suspenze buněk se nebere do 5ml sterilní injekční stříkačky a přidá se do ŠOOml třepatí baňky s dvěma narážecími přepážkami na dně. Baňka obsahovala 200 ml média ZYM. Baňka se upevní na rotační desku a kultivuje se 24 h při 250 otáčkách za minutu při 30 °C. Do baňky se teď přidají 0,4 ml sterilního zfiltrovaného roztoku emfotericinu Bav kultivaci se pokračuje dalších 25 h. Kvasinkové buňky se izolují odstřeďováním (Beckman model J6, 5 °C, 10 minut, 4000 otáček za minutu) a jednou se promyjí vodou. Kaše buněk se izoluje v malé plastikové nádobě. Před konečnou extrakcí sterolů se skladuje při -18 °C.
Živné médium se shora uvedený roztok amfotericinu B mají následující složení:
YP agar: kvasinkový extrakt, Difco hydrogenfosforečnan draselný heptahydrát síranu hořečnatého glukóza agar deionizovaná voda před autoklavováním 20 minut na 121 °C bylo pH upraveno na hodnotu 5,8
YE médium: kvasinkový extrakt, Difco deionizovaná voda autoklavování 20 minut při 121 °C
4g lg
0,5 g g
g 1000 ml
10g 1000 ml
-9CZ 289407 B6
| ZYM médium: | |
| kvasinkový extrakt, Difco | 20 g |
| pepton, Bacto | 10 g |
| vodovodní voda | 1000 ml |
| před autoklavováním 20 minut na 121 °C bylo pH upraveno na hodnotu 6,5 až 6,6 glukóza (přidána odděleně po autoklavování) | 60 g |
roztok amfotericinu B:
mg Fungizonu(R) (lyofilizovaný koláč 50 mg anfotericinu B, 41 mg deoxycholátu sodného a 20,2 mg fosforečnanu sodného od Squibb) rozpuštěný v 1 ml deionizované vody
Stupeň B
Kultivované buňky ze stupně A se suspendují v 10 ml vody. Přidá se 10 ml 40% (hmotn.) KOH v methanolu. Směs se zahřívá 4 h pod zpětným chladičem, nechá se stát přes noc za teploty místnosti a potom se extrahuje dvakrát 20 ml heptanu. Spojené extrakty se promyjí 10% (hmotn.) roztokem chloridu sodného. Potom se promývají vodou do neutrální reakce (pětkrát) a vysuší. Odpařením rozpouštědla se získá 40 mg surových sterolů.
Stupeň C
Surové steroly ze stupně B se rozpustí v 1 ml směsi heptan/2-propanol (98:2 obj. dílům), třepou se na vířivém mixéru, odstřeďují 10 minut při 5000 otáčkách za minutu a potom se podrobí HPLC:
kolona: LichroSorb DIOL 10 pm, 250 x 4 mm (vnitřní průměr) (Měrek) eluent: heptan/2-propanol (98:2 obj. dílům) průtok: 1,1 ml/min, 20 °C detekce: UF při 220 nm
Maximum, které se eluuje po 6,8 minuty, bylo spojeno z několika chromatografií. Ze spojených frakcí bylo oddestilováno rozpouštědlo. Zůstal odparek, který byl podroben hmotností spektrometrií a testován v oocytovém testu.
Data z hmotnostní spektrometrie, která jsou uveden v tabulce 4, jsou identická s daty 4βmethylzymosterolu, jak jsou zaznamenána v knihovně National Bureau of Standards.
Tabulka 4
| m/z | interpretace | |
| 398 | = M | [M+] (mol. hmotn. 4[3-methylzymosterolu) |
| 383 | M-15 | [M-CH3]+ |
| 380 | M-18 | [M-H20]+ |
| 365 | M-33 | [M-CH3-H2O]+ |
| 269 | M-129 | [M-SC-H2O]+ (SC = 111) |
| 267 | M-131 | [M-SC-H2O-2H]+ |
| 245 | M-153 | [M-SC-C3H6]+ |
| 227 | M-171 | [M-SC-C3H6-H2O]+ |
| 213 | M-185 | [M-SC-C4Hír-H2or |
SC znamená postranní řetězec.
-10CZ 289407 B6
Příklad 4
Příprava 4,4-dimethylcholesta-8,14-dien-3 β-olu
Tato sloučenina byla připravena jak popisuje Schroepfer a spol.: Chemistry and Physics of Lipids 47.187 (1988). Fyzikální konstanty jsou shodné s konstantami uvedenými v literatuře.
Příklad 5
Příprava 4,4-dimethylcholest-8-en-3 β-olu
Stupeň A
2,48 g 4,4-dimethylcholesta-8,14-dien-3-olu (příklad 4) se rozpustí ve 20 ml pyridinu při 0 °C. Přidá se 1,7 g benzoylchloridu a směs se míchá za teploty místnosti přes noc. Po odpaření dosucha se přidá 25 ml toluenu a po standardním zpracování, odpaření a rozetření s acetonem se získají 2,3 g (74 % hmotn.) krystalického benzoátu. ’Η-NMR spektrum (CDCI3, δ) vykazovalo charakteristické signály u 8,1 (d, 2H), 7,55 (t, 1H), 7,4 (t, 2H), 5,4 (s, široký signál, 1H), 4,2 (dd, 1H).
Stupeň B
2,04 g 3-benzoyloxy-4,4-dimethylcholesta-8,14-dienu (stupeň A) se rozpustí v 50 ml THF. Při 0 °C se přikape 360 ml 1M boranu v THF. Směs se míchá za teploty místnosti, ochladí se na 0 °C, přikape se 140 ml vody, 360 ml 10% (hmotn.) hydroxidu sodného a 378 ml 30% (hmotn.) peroxidu vodíku. Po 90 minutách míchání se ke směsi přidá 100 ml diethyletheru a vodná fáze se extrahuje dvakrát diethyletherem. Spojené organické fáze se promyjí dvakrát roztokem siřičitanu sodného a potom vodou. Po odpaření se produkt vyčistí chromatografií na oxidu křemičitém (eluce 2 % (obj.) diethyletheru v toluenu). Získá se 0,62 g 3-benzoyloxy-4,4-dimethylcholest8-en-15-olu. Hmotnostní spektrum: 534,4 (molekulový ion). ‘H-NMR spektrum (CDC13, δ) vykazovalo charakteristické signály u 8,0 (d, 2H), 7,5 (t, 1H), 7,4 (t, 2H), 4,75 (m, 1H), 4,1 (m, 1H).
Stupeň C
0,54 g 3-benzoyloxy-4,4-dimethylcholest-8-en-15-olu se rozpustí ve 2,7 ml pyridinu při 0 °C. Opatrně se přidá 33 mg dimethylaminopyridinu a 287 mg fenylchlorthiomravenčanu. Směs se míchá 20 h za teploty místnosti. Po přidání 25 ml diethyletheru se směs 6krát promyje nasyceným roztokem síranu měďnatého, vodou, dvakrát 10% (hmotn.) hydroxidem sodným, vodou a solným roztokem. Odpařením se získá 0,68 g surového 3-benzoyl-4,4-dimethylcholest8-en-15-fenylthiokarbonátu, kteiý se dále zpracuje po rozpuštění ve 20 ml toluenu zreagováním s 370 mg tributylcínhydridu a 20 mg azo-isobutyronitrilu. Tato směs se zahřívá 20 minut na 90 °C, stejné zpracování se zopakuje, směs se odpaří a zhruba se vyčistí chromatografií na oxidu křemičitém (eluce heptan s methylenchloridem: 70:30 (obj.)). Získá se 150 mg surového 3benzoyloxy-4,4-dimethylcholest-8-enu znečištěného odpovídajícím 8,14-dienem (stupeň A).
Stupeň D
150 mg směsi připravené ve stupni C se rozpustí ve 2 ml methylenchloridu, ochladí na 0°C a přikape se 0,7 ml diisobutylaluminiumhydridu. Po 15 minutách se opatrně přidá 0,15 ml vody. Potom se přidá 25 ml diethyletheru a organická fáze se dvakrát promyje nasyceným roztokem vínanu sodnodraselného, vodou a solným roztokem. Odpařením se získá 130 mg směsi, která se
-11CZ 289407 B6 chromatografuje na oxidu křemičitém s dusičnanem stříbrným [připraveným jak popsáno v Chem. and Phys. of Lipids 63. 155 (1992).] a eluuje se toluenem. Krystalizací se směsi etheru smethanolem se získá 49 mg titulní sloučeniny. Teplota tání 154 až 155 °C. Hmotnostní spektrum: 414,4 (molekulový ion). 13C-NMR spektrum (CDC13, 100,6 MHz) vykazovalo charakteristické signály při 78,49 (C3), 127,49 (Cg) a 135,35 (C9).
Příklad 6
Příprava 3-acetoxy-4,4-dimethy lcholesta-8,14-dienu
1,3 g 4,4-dimethylcholesta-8,14-dien-3-olu [Schroepfer a spol.: Chemistiy and Physics of Lipids 47.187 (1988).] se rozpustí v 7,5 ml pyridinu a 7,5 ml anhydridu kyseliny octové a míchá se přes noc při teplotě 22 °C. Směs se pak odpaří ve vakuu, přidá se toluen a znovu se odpaří a tento postup se ještě jednou zopakuje. Potom se směs vyčistí bleskovou chromatografií na oxidu křemičitém (toluen). Prvních 300 ml eluátu se odpaří a produkt se překiystaluje z diethyletheru. Získá se tak 140 mg 3-acetoxy-8,14-dimethylcholestadienu. Teplota tání: 120 až 125 °C (za rozkladu). Hmotnostní spektrum: 454,4 (molekulární ion). ’Η-NMR spektrum (CDCI3, δ) vykazovalo charakteristické signály u 5,4 (s, široký signál, 1H), 4,5 (dd, 1H) a 2,0 (s, 3H).
Příklad 7
Příprava cholesta-8,14-dien-3[3-olu
770 mg dehydrocholesterolu se rozpustí ve směsi 2,7 ml benzenu, 19 ml ethanolu a 2,7 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Směs se vaří pod zpětným chladičem 3 h. Tato směs se pak ochladí v ledové lázni. Získá se tak první podíl krystalů (110 mg). Odpařením filtrátu dosucha a krystalizací ze směsi etheru s methanolem se získá druhý podíl krystalů (220 mg), který se spojí s prvním podílem a zchromatografuje se na oxidu křemičitém s dusičnanem stříbrným (připraveným jako ve stupni D příkladu 5). Elucí 2,5 % (obj.) acetonu v toluenu se získá 94 mg čistého cholesta-8,14-dien-3|3-olu. T.t. 113 až 114,5°C. Hmotnostní spektrum: 384,4 (molekulární ion). ’Η-NMR spektrum (CDCI3, δ) vykazovalo charakteristické signály u 5,35 (s, široký signál, 1H), a 3,6 (m, 1H). 13C-NMR spektrum (CDCI3, 50,3 MHz) vykazovalo charakteristické signály u 70,99 (C3), 117,42 (C15), 123,1 (Cg), 140,8 (C9) a 151,1 (C14).
Příklad 8
Příprava 4,4-tetramethylencholesta-8,14-dien-3-olu
Stupeň A
1,15 g dehydrocholesterolu se rozpustí v 15 ml 2-butanonu. Ke směsi se přidá 0,34 g isopropylátu hlinitého a směs se vaří 75 minut pod zpětným chladičem. Po ochlazení v ledové lázni se přidá 15 ml 2N kyseliny chlorovodíkové, fáze se oddělí a organická fáze se promyje dvakrát 7,5 ml 2N kyseliny chlorovodíkové. Vodná fáze se extrahuje toluenem. Spojené organické fáze se promyjí vodou a solným roztokem, vysuší a rozpouštědlo se odpaří. Získá se 1,18 g surového cholesta-5,7-dien-3-onu jako viskózní olej. ’Η-NMR spektrum (CDCI3, δ) vykazovalo charakteristické signály u 5,8 (s, 1H), 5,2 (m, 1H), 3,2 (d, 1H) a 2,7 (dd, 1H).
-12CZ 289407 B6
Stupeň B
0,67 g terc.butoxidu draselného se rozpustí v 16 ml terc.butanonu při 45 °C. Přidá se 0,57 g cholesta-5,7-dien-3-onu a směs se míchá 10 minut. Přidá se 0,47 g 1,4-dijodbutanu a směs se míchá 30 minut. Rozpouštědlo se odpaří a odparek se znovu rozpustí v toluenu a vodě. Přidá se malé množství roztoku chloridu sodného, aby se indukovalo oddělení fází. Organická fáze se čtyřikrát promyje vodou a spojené vodné fáze se jednou extrahují toluenem. Spojené toluenové extrakty se vysuší a odpaří. Získá se 0,45 g pěny, která krystalizaci ze směsi diethylether/methanol poskytne 0,35 g krystalického 4,4-tetramethylencholesta-5,7-dien-3-onu. Hmotnostní spektrum: 436,4 (molekulární ion). *H-NMR spektrum (CDCI3, δ) vykazovalo charakteristické signály u 5,75 (d, 1H) a 5,5 (m, 1H).
Stupeň C
130 mg LiAlH, se suspenduje v 6 ml THF. Během 30 minut se přikape 1,97 g 4,4-tetramethylencholesta-5,7-dien-3-onu rozpuštěných ve 40 ml THF. 15 minut po ukončení přidávání zůstal ještě nějaký nezreagovaný materiál (podle TLC), proto bylo přidáno dalších 65 mg L1AIH4. Po 30 minutách míchání byla reakce ukončena. K reakční směsi se přikape 0,9 ml vody a 5 ml THF. Po 30 minutách míchání se přidá síran hořečnatý a směs se míchá dalších 30 minut, zfiltruje a odpaří se dosucha. Odparek se rozpustí ve 25 ml diethyletheru a 25 ml methanolu a ether se pečlivě odstraní ve vakuu. Mícháním přes noc se získá 1,75 g krystalického 4,4tetramethylencholesta-5,7-dien-3-olu, který se odfiltruje. Hmotnostní spektrum: 438,4 (molekulární ion). 'Η-NMR spektrum (CDCI3, δ) vykazovalo charakteristické signály u 5,8 (d, 1H), 5,5 (m, 1H) a3,5(m, 1H).
Stupeň D
770 mg sloučeniny, která byla připravena ve stupni C, se rozpustí ve směsi 2,38 ml benzenu, 17,5 ml ethanolu a 2,38 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Tato směs se vaří 16 h pod zpětným chladičem. Potom se odpaří ve vakuu. Odparek se opět rozpustí v 5 ml toluenu, zfiltruje a chromatografuje se na středotlaké koloně s oxidem křemičitým s dusičnanem stříbrným (heptan-toluen v poměru 10:90 (obj.)). Získá se tak 35 mg 4,4-tetramethylencholesta-8,14-dien3-oIu. Hmotnostní spektrum: 438,4 (molekulární ion). ’Η-NMR spektrum (CDCI3, δ) vykazovalo charakteristické signály u 5,35 (s, široký signál, 1H) a 3,3 (dd, 1H). 13C-NMR spektrum (CDCI3, 100,6 MHz) vykazovalo charakteristické signály u 79,0 (C3), 117,4 (C15), 122,9 (Cg), 141,3 (C9) a 151,1 (CM).
Příklad 9
Příprava 4,4-dimethylcholest-8( 14)-en-3 β-olu
580 mg 4,4-dimethylcholest-8-en-3 β-olu se rozpustí ve 20 ml diethyletheru a 20 ml kyseliny octové. Přidá se 60 mg 10% (hmotn.) paladia na uhlí a směs se míchá přes noc pod vodíkem při 0,35 MPa. Katalyzátor se odstraní a filtrát se zahustí na 10 ml, při čemž začne krystalovat. Přidá se 10 ml methanolu. Krystaly se izolují po 16 h. Rekrystalizací z methanolu se získá 230 mg materiálu, o kterém bylo podle *H- a 13C-NMR prokázáno, že je směsí 8(9)- a 8(14)-izomerů.
Tato směs se znovu rozpustí v 10 ml diethyletheru a 10 ml kyseliny octové. Přidá se 75 mg 5% (hmotn.) pT na uhlí a směs se nechá zreagovat s vodíkem přes noc za atmosférického tlaku. Katalyzátor se odstraní, rozpouštědlo se odpaří a krystalický zbytek se rozetře s 5 ml methanolu. Získá se 190 mg čistého 4,4-dimethylcholest-8(14)-en-3 β-olu. Hmotnostní spektrum: 414,4 (molekulární ion). I3C-NMR spektrum (CDCI3,100,6 MHz) vykazovalo charakteristické signály u 79,24 (C3), 126,11 (Cg) a 142,2 (C14).
-13CZ 289407 B6
Příklad 10
Test látek indukujících meiózu v oocytovém testu
Zvířata
Nedospělé myší samičky (B6D2-F1, kmen C57B1/2J) se udržuje pod kontrolovaným osvětlením (14 h světlo, 10 h tma) a teplotou s potravou a vodou podle libosti. Když zvířata dosáhla hmotnosti 13 až 16 g (což odpovídá stáří 20 až 22 dnů), byla jim podána jedna injekce (i.p.) lidského menopauzálního gonadotropinu (Humegon, Organon, Holandsko) obsahujícího přibližně 20 j. FSH a 20 j. LH [Ziebe S. a spol.: Hum. Reprod. 8, 385 (1993).]. Po 48 h byla zvířata cervikální dislokací usmrcena.
Sebrání a kultivace oocytů
Vaječníky byly odebrány, byly umístěny do HX média (viz níže) a byla z nich odstraněna cizorodá tkáň. Médium pro sbírání a kultivaci sestávalo zEMEM média (Eagles minimum essential médium, Flow, USA), které obsahovalo 4mM hypoxanthin, 3 mg/ml hovězího sérového albuminu, 0,23mM 2-oxopropanoát sodný, 2mM glutamin, 100 j./ml penicilinu a 100pg/ml streptomycinu (všechno od firmy Sigma, USA). Toto médium se označuje jako HX-médium. Stejné médium, ale bez HX, bylo používáno jako kontrolní médium.
Antrální folikuly vaječníků byly pod mikroskopem pro pitvání propíchnuty jehlou (27 gauge). Oocyty s obklopujícími buňkami (CEO) stejné velikosti byly vybrány a třikrát promyty čerstvým HX-médiem.
Oocyty bez obklopujících buněk, tj. obnažené oocyty, DO, byly získány mírným promýváním CEO obyčejnou pipetou s jemným otvorem. CEO a DO byly kultivovány ve více miskách se čtyřmi jamkami (Nucleon, Dánsko), které obsahovaly 0,5 ml HX-média vyjma kontrol, které byly kultivovány v kontrolním médiu. Každá jamka obsahovala 35 až 50 oocytů. Testované kultury byly připraveny s různými koncentracemi sloučenin, které mají být testovány, jak je uvedeno v tabulce 5.
Kultivace byly prováděny při 37 °C a 1000 (hmotn.) vlhkosti s 5 % (obj.) CO2 ve vzduchu. Doba kultivace byla 24 h.
Zkoumání oocytů
Na konci kultivační doby byl v inverzním mikroskopu s diferenčním interferenčním kontrastním zařízením spočítán počet oocytů se zárodečným váčkem (GV) nebo s rozpadnutým zárodečným váčkem (GVBD) a oocyty s polárním tělesem (PB). Byla spočítána procenta oocytů s GVBD na celkový počet oocytů a procenta oodytů s PB na GVBD. Výsledky pro DO a CEO, vypočtené jako jednotky MIS aktivity, jsou uvedeny v tabulce 5. Jedna jednotka MIS aktivity je definována jako:
% GVDDkontrola/2 a počet jednotek MIS aktivity se vypočte jako:
2((% GVBDtest - % GVBDfcontrola)/0/» GVBDkontrola)
-14CZ 289407 B6
Tabulka 5
| látka | DO | CEO | koncentrace (pg/ml) |
| 4,4-dimethylzymosterol | 2,7 | 2,9 | 1,2 |
| 1,8 | 2,7 | 0,3 | |
| 0,6 | 1,3 | 0,2 | |
| 1,5 | 1,3 | 0,02 | |
| 0,9 | 1,0 | 0,002 | |
| 4,4-dimethyl-5a-cholesta-8,14,24-trien-3 β-οΐ | 0,6 | 2,3 | 0,3 |
| 1,6 | 0,5 | 0,03 | |
| zymosterol | 1,2 | 1,1 | 0,1 |
| 0,6 | 0,4 | 0,01 | |
| 0,2 | 0,001 | ||
| 4|3-methylzymosterol | 6,2 | 3,5 | 3,9 |
| 0,8 | 2,4 | 0,13 | |
| 4,4-dimethylchoIest-8-en-3 β-οΐ | 0,8 | 12,8 | 0,03 |
| 4,4—dimethylcholesta-8,14-dien-3 β-οΐ | 2,25 | 0 | 3,0 |
Příklad 11
Test látek indukujících meiózu v gonádovém testu
Gonádový test se provádí v podstat tak, jak popsali Byskov A.G. a spol.: Mol. Reprod. Dev. 34, 47 (1993). Výsledky uvedené v tabulce 6 byly vyhodnoceny semikvantitativně jako popsali Westergaard L. a spol.: Fertil. Steril. 41.377 (1984).
Tabulka 6 _____________________látka_______________________
4.4- dimethylzymosterol
4.4- dimethyl-5a-cholesta-8,14,24-trien-3 β-οΐ koncentrace (pg/ml) výsledek ++ +
Příklad 12
Příprava mono(5a-cholesta-8,14-dien)-3 β-sukcinátu
V 10 ml THF se rozpustí 0,50 g 5a-cholesta-8,14-dien-3p-olu. Přidá se 0,39 g anhydridu kyseliny jantarové a 16 ml 4-dimethylaminopyridinu. Tento roztok se vaří pod zpětným chladičem přes noc. Potom se odpaří dosucha. Odparek se suspenduje v 10 ml vody. Sraženina se odfiltruje, promyje vodou a vysuší. Získá se 0,48 g titulní sloučeniny, která může být dále vyčištěna rozpuštěním ve směsi vodného hydrogenuhličitanu sodného a ethanolu, přidá se kyselina chlorovodíková do pH 2 a zahuštěním se roztok začne srážek. Teplota tání 128 až 131 °C. Hmotnostní spektrum: 484,4 (molekulární ion). *H-NMR spektrum (CDC13, 5) vykazovalo charakteristické signály u 5,36 (s, 1H), 4,75 (m, 1H), 2,67 (m, 2H) a 2,6 (m, 2H). nC-NMR spektrum (CDCI3, 100,6 MHz) vykazovalo charakteristické signály u 73,4, 117,1, 122,7,140,0,150,5, 171,2 a 177,2.
-15CZ 289407 B6
Příklad 13
Příprava 3p-ethoxykarbonyloxy-5a-cholesta-8,14-dienu
0,50 g 5a-cholesta-8,14-dien-3|3-olu se rozpustí ve směsi 5 ml toluenu a 5 ml pyridinu za chlazení v ledové lázni. Během 5 minut se přidají 2,3 ml ethylesteru kyseliny chlormraveněí rozpuštěné v 5 ml toluenu. Po 30 minutách se ledová lázeň odstraní. V míchání se pokračuje 20 h za teploty místnosti a 2h při 60°C. Reakční směs se odpaří dosucha a rozetře se s 10ml ethanolu. Získá se tak 0,505 g titulní sloučeniny, která se může dále čistit rekrystalizací z ethanolu. Teplota tání 101 až 106 °C. Hmotnostní spektrum: 456,3 (molámí ion). H-NMR spektrum (CDC13, δ) vykazovalo charakteristické signály u 5,30 (s, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,12 (q, 2H) a 1,24 (t, 2H). 13C-NMR spektrum (CDC13, 100,6 MHz) vykazovalo charakteristické signály u62,6,116,6,122,2,139,4,150,0 a 153,6.
Příklad 14
Příprava 3 p-fosfonooxo-4,4-dimethyl-5a-cholesta-8,14-dienu
2,00 g 4,4-dimethyl-5a-cholesta-8,14-dien-3|3-olu se rozpustí v 10 ml suchého pyridinu a během 5 minut se přidá k roztoku 1,66 g oxychloridu fosforečného v 10 ml suchého acetonu za chlazení ledovou lázní. Po 30 minutách míchání za teploty místnosti se sraženina odfiltruje a promyje se suchým acetonem. Odparek se suspenduje v 70 ml vody a vaří se 1 1/4 h pod zpětným chladičem. Po ochlazení na teplotu místnosti se sraženina odfiltruje, promyje vodou a vysuší. Získá se tak 0,93 g surového produktu. 0,70 g tohoto surového produktu se rozpustí v 75 ml 0,1 M vodného hydroxidu draselného a tento roztok se zfiltruje 10 g piyskyřice Amberlit IR-120(H). Filtrát se ve vakuu odpaří dosucha. Odparek se rozetře s 10 ml vody, sraženina se odfiltruje, promyje vodu a vysuší. Získá se tak 0,48 g titulní sloučeniny. Teplota tání 183 až 185 °C. ’Η-NMR spektrum (CDCI3 + 2 kapky CD3OD) produktu vykazovalo charakteristické signály u 5,36 (s, 1H) a 3,89 (m, 1H). nC-NMR spektrum (CDCI3 a 2 kapky CD3OD, 100,6 MHz) produktu vykazovalo charakteristické signály u 85,1,116,9, 122,3,140,9 a 150,5.
Příklad 15
Příprava 3 (3-isonikotinoyl-5cc-cholesta-8,14-dienu
0,50 g 5a-cholesta-8,14-dien-3|3-ohi se rozpustí v 5 ml pyridinu. K roztoku se přidá 1,16 g hydrochloridu isonikotinoylchloridu. Suspenze se vaří přes noc pod zpětným chladičem. Potom se odpaří dosucha. Odparek se suspenduje ve 100 ml vody za chlazení v ledové lázni. Sraženina se odfiltruje a promyje vodou. Vysušením se získá 0,97 g surového produktu, který se překrystaluje ze směsi aceton/voda. Získá se tak 0,40 g titulní sloučeniny. Teplota tání 129 až 131 °C. ’Η-NMR spektrum (CDC13, δ) produktu vykazovalo charakteristické signály u 8,77 (d, 2H), 7,84 (d, 2H), 5,39 (s, 1H) a 4,49 (m, 1H). ’3C-NMR spektrum (CDClj, 50,3 MHz) vykazovalo charakteristické signály u 75,0,117,7,122,8,138,0,140,3,150,5,150,9 a 164,6.
Claims (28)
1. Použití sterolových derivátů obecného vzorce I v němž
R1 a R2 jsou jednotlivě vybrány ze skupiny zahrnující vodík, přímý nebo rozvětvený Cj^alkyl, popřípadě substituovaný halogenem nebo hydroxylem, nebo R1 a R2 společně s atomem uhlíku, na který jsou vázané, tvoří cyklopentanový nebo cyklohexanový kruh,
R3 a R4 značí společně další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou vázané, v tomto případě R5 je vodík a R6 a R7 značí jednotlivě vodík nebo společně tvoří další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou vázané, nebo
R4 a R5 společně tvoří další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou vázané, v tomto případě R3 je vodík a R6 a R7 značí jednotlivě vodík nebo společně tvoří další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou vázané, nebo
R4 a R6 tvoří další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou vázané, v tomto případě R3, R5 a R7 značí jednotlivě vodík,
R8 a R9 značí jednotlivě vodík nebo společně tvoří další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou vázané, a
R10 značí buď vodík, nebo Ci_2oacyl, sulfonyl a fosfoskupinu, nebo methyl, methoxymethyl, benzyl nebo pivaloylmethyl, které se zbývající částí molekuly tvoří Ci-7ether, pro přípravu léčiva k regulování meiózy podáváním do zárodečné buňky ex vivo a in vitro, zejména podáváním do oocytu ex vivo a především do mužské zárodečné buňky.
-17CZ 289407 B6
2. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů uvedeného obecného vzorce I, v němž R1 je vodík nebo methyl a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1, s vyloučením sulfonylu a fosfoskupiny ve významu R10.
3. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R1 je skupina vybraná ze souboru zahrnujícího ethyl a přímý nebo rozvětvený Cí-ealkyl a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
4. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R1 je přímý nebo rozvětvený Ci-^hydroxyalkyl a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
5. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R1 je přímý nebo rozvětvený C^a-hydroxyalkyl a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
6. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R1 je přímý nebo rozvětvený C^alkyl substituovaný halogenem a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
7. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R* je trifluormethyl a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
8. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R2 je vodík nebo methyl a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
9. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R2 je vybrán ze skupiny zahrnující ethyl a přímý nebo rozvětvený C3_6alkyl a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
10. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R2 je přímý nebo rozvětvený Cj^hydroxyalkyl a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
11. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R2 je přímý nebo rozvětvený C^a-hydroxyalkyl a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
12. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R2 je přímý nebo rozvětvený Ci_6alkyl substituovaný halogenem.
13. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R2 je trifluormethyl a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
14. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R1 a R2 společně s atomem uhlíku, na který jsou vázané, tvoří cyklopentanový kruh a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
15. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R1 a R2 společně s atomem uhlíku, na který jsou vázané, tvoří cyklohexanový kruh a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
16. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R3 a R4 společně tvoří další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou vázané, R5 je vodík a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
17. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R4 a R5 společně tvoří další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou vázané, a R3 je vodík a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
-18CZ 289407 B6
18. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R4 a R6 společně tvoří další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou vázané, a R3, R5 a R7 značí jednotlivě vodík a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
19. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R6 a R7 značí jednotlivě vodík a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
20. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R6 a R7 společně tvoří další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou vázané, a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
21. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R8 a R9 značí jednotlivě vodík a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
22. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R8 a R9 společně tvoří další vazbu mezi atomy uhlíku, na které jsou vázané, a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
23. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R10 je vodík a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
24. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R10 je Ci_ioacyl, s výhodou Ci_7acyl a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
25. Použití podle nároku 24, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R10 je acyl vybraný ze skupiny zahrnující acetyl, benzoyl, pivaloyl, butyryl, nikotinoyl, isonikotinoyl, hemisukcinoyl, hemiglutaroyl, butylkarbamoyl, fenylkarbamoyl, butoxykarbonyl, terc.butoxykarbonyl a ethoxykarbonyl a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
26. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R10 je alkyl, aralkyl, alkyloxyalkyl nebo alkanoyloxyalkyl, všechny tyto skupiny s až 10 atomy uhlíku, s výhodou s až 8 atomy uhlíku, tvořící společně se zbývající částí molekuly ether, a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
27. Použití podle nároku 26, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž R10 je methoxymethyl nebo pivaloylmethyl a ostatní substituenty jsou jako v nároku 1.
28. Použití podle nároku 1, sterolových derivátů obecného vzorce I, v němž všechny substituenty jsou jako v nárocích 2 až 27, pro přípravu léčiva k regulování meióze podáváním do zárodečné buňky ex vivo a in vitro, zejména podáváním do oocytu ex vivo a především do mužské zárodečné buňky.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK75394 | 1994-06-23 | ||
| DK24195 | 1995-03-09 | ||
| PCT/DK1995/000265 WO1996000235A1 (en) | 1994-06-23 | 1995-06-23 | Sterol derivatives used for regulation of meiosis |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ372596A3 CZ372596A3 (en) | 1997-07-16 |
| CZ289407B6 true CZ289407B6 (cs) | 2002-01-16 |
Family
ID=26063596
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19963725A CZ289407B6 (cs) | 1994-06-23 | 1995-06-23 | Sterolové deriváty pro výrobu léčiva k regulování meiózy |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5716777A (cs) |
| EP (1) | EP0767798B1 (cs) |
| JP (1) | JP3987105B2 (cs) |
| KR (1) | KR100408369B1 (cs) |
| CN (1) | CN1068333C (cs) |
| AT (1) | ATE248852T1 (cs) |
| AU (1) | AU694240B2 (cs) |
| BG (1) | BG101067A (cs) |
| BR (1) | BR9508074A (cs) |
| CA (1) | CA2192941C (cs) |
| CZ (1) | CZ289407B6 (cs) |
| DE (1) | DE69531682T2 (cs) |
| DK (1) | DK0767798T3 (cs) |
| ES (1) | ES2204955T3 (cs) |
| FI (1) | FI117159B (cs) |
| HU (1) | HUT76343A (cs) |
| IL (1) | IL114294A (cs) |
| IS (1) | IS4404A (cs) |
| MX (1) | MX9700174A (cs) |
| NO (1) | NO314534B1 (cs) |
| PL (1) | PL186688B1 (cs) |
| RU (1) | RU2194510C2 (cs) |
| SI (1) | SI9520077A (cs) |
| SK (1) | SK165596A3 (cs) |
| UA (1) | UA51622C2 (cs) |
| WO (1) | WO1996000235A1 (cs) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ279797A3 (cs) * | 1995-03-06 | 1998-01-14 | Novo Nordisk A/S | Způsob stimulace miózy zárodečné buňky a použití sloučeniny, která způsobuje akumulaci látky aktivující endogenní miózu |
| US6645953B2 (en) * | 1995-06-23 | 2003-11-11 | Novo Nordisk A/S | Meiosis regulating compounds |
| WO1997000883A1 (en) * | 1995-06-23 | 1997-01-09 | Novo Nordisk A/S | Meiosis regulating compounds |
| ATE254628T1 (de) * | 1995-06-23 | 2003-12-15 | Novo Nordisk As | Meiose regulierende verbindungen. |
| ATE238339T1 (de) | 1996-12-20 | 2003-05-15 | Novo Nordisk As | Verbindungen zur regulierung der meiose |
| DE69809905T2 (de) * | 1997-05-16 | 2003-08-28 | Akzo Nobel N.V., Arnheim/Arnhem | 20-aralkyl-5,alpha,-pregnan derivate |
| CN1259138A (zh) * | 1997-06-04 | 2000-07-05 | 阿克佐诺贝尔公司 | 调节减数分裂的17β－烯丙氧基(硫代)烷基－雄甾烷衍生物 |
| ES2181321T3 (es) | 1997-12-18 | 2003-02-16 | Akzo Nobel Nv | Derivados 17beta-aril(arilmetil)oxi(tio)alquilandrostano. |
| ATE256144T1 (de) * | 1998-05-13 | 2003-12-15 | Novo Nordisk As | Verwendung von verbindungen mit der fähigkeit die meiose zu regulieren |
| IL139241A0 (en) * | 1998-05-13 | 2001-11-25 | Novo Nordisk As | Meiosis regulating compounds |
| AU5408999A (en) * | 1998-05-26 | 1999-12-13 | Schering Aktiengesellschaft | Treatment of infertility with camp-increasing compounds alone or in combination with at least one meiosis-stimulating compound |
| JP2003521444A (ja) * | 1998-06-19 | 2003-07-15 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 減数分裂調節化合物 |
| JP2002532511A (ja) * | 1998-12-11 | 2002-10-02 | アクゾ・ノベル・エヌ・ベー | 減数分裂調節活性を有する２２ｓ−ヒドロキシコレスタ−８，１４−ジエン誘導体 |
| AU3118200A (en) * | 1998-12-14 | 2000-07-03 | Merck & Co., Inc. | Hiv integrase inhibitors |
| KR20010101820A (ko) * | 1999-02-10 | 2001-11-14 | 에바-마리아 시마-메이어, 얼설라 멜져, 마거, 하르트만 | 불포화 콜레스탄 유도체 및 감수분열 조절 약제 제조에있어서 그의 용도 |
| DE60034662T2 (de) * | 1999-02-24 | 2008-01-03 | Novo Nordisk A/S | Behandlung von unfruchtbarkeit |
| EP1156822B1 (en) | 1999-02-24 | 2006-02-08 | Novo Nordisk A/S | Iin vitro method for synchronisation of oocyte maturation |
| MXPA01008657A (es) * | 1999-02-26 | 2003-06-24 | Novo Nordisk As | Aumento de la proporcion de implante por esterol que activa la meiosis. |
| JP2002539134A (ja) * | 1999-03-09 | 2002-11-19 | アクゾ・ノベル・エヌ・ベー | 減数分裂の阻害のための２２ｒ−ヒドロキシコレスタ−８，１４−ジエン誘導体 |
| CN1222319C (zh) * | 1999-09-16 | 2005-10-12 | 诺沃挪第克公司 | 用于体外受精的组合物 |
| EP1127890A1 (en) | 2000-02-22 | 2001-08-29 | Schering Aktiengesellschaft | Steroid derivatives with an additional ring annulated to ring A and use of these derivatives for the preparation of meiosis regulating medicaments |
| AU3376501A (en) * | 2000-02-25 | 2001-09-03 | Novo Nordisk A/S | Improvement of implantation rate |
| EP1257279A2 (en) * | 2000-02-25 | 2002-11-20 | Schering Aktiengesellschaft | Improvement of implantation rate using ff-mas |
| MXPA02011271A (es) * | 2000-05-18 | 2003-04-25 | Schering Ag | Fertilizacion de oocitos envejecidos. |
| EP1245572A1 (en) | 2001-03-26 | 2002-10-02 | Schering Aktiengesellschaft | Aminosterol compounds, their use in the preparation of meiosis-regulating medicaments and method for their preparation |
| WO2003070766A2 (en) * | 2002-02-22 | 2003-08-28 | Novo Nordisk A/S | A transducer of mas signalling |
| US9376462B2 (en) | 2010-10-01 | 2016-06-28 | Indiana University Research And Technology Corporation | Process for preparing delta-7,9(11) steroids from Ganoderma lucidum and analogs thereof |
| US9165822B2 (en) | 2013-03-11 | 2015-10-20 | Taiwan Semiconductor Manufacturing Company, Ltd. | Semiconductor devices and methods of forming same |
| EA024619B1 (ru) * | 2014-11-21 | 2016-10-31 | Эльвин Гаджи оглы Керимли | ФРАКСИНОСТЕРИН - 24β-ЭТИЛХОЛЕСТА-20-КАРБОКСИ-6(7),8(9)-ДИЕН 3β-ОЛА И ЕГО ПРОИЗВОДНОЕ |
-
1995
- 1995-05-23 US US08/448,217 patent/US5716777A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-23 ES ES95922448T patent/ES2204955T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-23 JP JP50272496A patent/JP3987105B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-23 DK DK95922448T patent/DK0767798T3/da active
- 1995-06-23 AU AU27343/95A patent/AU694240B2/en not_active Ceased
- 1995-06-23 PL PL95317830A patent/PL186688B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1995-06-23 HU HU9603584A patent/HUT76343A/hu not_active Application Discontinuation
- 1995-06-23 AT AT95922448T patent/ATE248852T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-06-23 RU RU97101087/14A patent/RU2194510C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-06-23 DE DE69531682T patent/DE69531682T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-23 CA CA002192941A patent/CA2192941C/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-23 WO PCT/DK1995/000265 patent/WO1996000235A1/en active IP Right Grant
- 1995-06-23 SI SI9520077A patent/SI9520077A/sl unknown
- 1995-06-23 MX MX9700174A patent/MX9700174A/es not_active IP Right Cessation
- 1995-06-23 CN CN95193731A patent/CN1068333C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-23 BR BR9508074A patent/BR9508074A/pt not_active IP Right Cessation
- 1995-06-23 CZ CZ19963725A patent/CZ289407B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-06-23 UA UA96124771A patent/UA51622C2/uk unknown
- 1995-06-23 IL IL11429495A patent/IL114294A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-06-23 EP EP95922448A patent/EP0767798B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-23 SK SK1655-96A patent/SK165596A3/sk unknown
- 1995-06-23 KR KR1019960707361A patent/KR100408369B1/ko not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-12-18 BG BG101067A patent/BG101067A/xx unknown
- 1996-12-20 NO NO19965516A patent/NO314534B1/no unknown
- 1996-12-20 FI FI965144A patent/FI117159B/fi active IP Right Grant
- 1996-12-23 IS IS4404A patent/IS4404A/is unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ289407B6 (cs) | Sterolové deriváty pro výrobu léčiva k regulování meiózy | |
| EP0857173B1 (en) | Meiosis regulating compounds | |
| EP0946584B1 (en) | Meiosis regulating compounds | |
| EP1163258B1 (en) | 22r-hydroxycholesta-8,14-diene derivatives for the inhibition of meiosis | |
| US20050222098A1 (en) | Regulation of meiosis | |
| US6528501B1 (en) | 22s-hydroxycholesta-8, 14-diene derivatives with meiosis regulating activity | |
| HUP0102704A2 (hu) | Meiózist befolyásoló szteroidok és alkalmazásuk | |
| KR20020013541A (ko) | 14β-Ｈ-스테롤, 그를 포함하는 제약 조성물, 및 감수분열조절 약제 제조에 있어서 그의 유도체의 용도 | |
| CZ291308B6 (cs) | Sterolové deriváty regulující meiózu a způsob regulace | |
| EP1127890A1 (en) | Steroid derivatives with an additional ring annulated to ring A and use of these derivatives for the preparation of meiosis regulating medicaments | |
| CZ20004566A3 (cs) | Nové sloučeniny, jejich použití, způsob regulace meiózy a nový znak | |
| KR20010101820A (ko) | 불포화 콜레스탄 유도체 및 감수분열 조절 약제 제조에있어서 그의 용도 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20100623 |