CZ278493B6 - Bis(hydroxymethyl)cyclobutyl purines and pyrimidines, process of their preparation and use - Google Patents

Description

(57) Anotace:

Bis(hydroxymethyl)cyklobutylpuriny a -pyrimidiny obecného vzorce I, ve kterém Ri znamená zbytky (a), (b), (c), (d) a (e), R2 je vodík nebo brom, a R3 Je Jod, vodík, methyl, trifluormethyl, ethyl, n-propyl, 2-fluorethyl, 2-chlorethyl nebo HC=CHBr (trans), které mají protlvirový účinek. Tyto sloučeniny se připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce II se sloučeninou RiH, popřípadě v chráněné formě, přičemž P je chránící skupina a X je odštěpitelná skupina.

(13) Druh dokumentu: B6 (51) Int. Cl.⁵:

C 07 D 487/04

A 61 K 31/52 // (C 07 D 487/04,

C 07 D 473:18, C 07 D 239:54)

CZ 278 493 B6

CHjO-P

Bis(hydroxymethyl)cyklobutylpuriny a -pirimidiny, způsob jejich přípravy a použití.

Oblast techniky

Vynález se týká nových bis(hydroxymethyl)cyklobutylpurinů a -pyrimidinů, způsobu přípravy těchto sloučenin a použití těchto sloučenin jako léčiv, konkrétně jako protivirových sloučenin. Do rozsahu uvedeného vynálezu rovněž náleží farmaceutické prostředky, obsahující tyto látky.

Podstata vynálezu

Podstatou uvedeného vynálezu jsou nové bis(hydroxymethyl)cyklobutylpuriny a -pyrimidiny obecného vzorce I hoch₂

H

(I) ve kterém znamená:

R^ zbytek vzorce

-1CZ .278493 B6

O

ve kterých

R₂ znamená atom vodíku nebo bromu, a

R₃ znamená atom jodu, vodíku, methylovou skupinu, trifluormethylovou skupinu, ethylovou skupinu, n-propylovou skupinu, 2-fluorethylovou skupinu, 2-chlorethylovou skupinu nebo skupinu vzorce

H (trans) a farmaceuticky přijatelné soli, odvozené od těchto sloučenin.

Výše uvedené bis(hydroxymethyl)cyklobutylpuriny a -pyrimidiny obecného vzorce I se podle vynálezu připraví tak, že se sloučenina obecného vzorce II

P chránící skupinu, a

X představuje odštěpítelnou skupinu, uvádí do reakce se sloučeninou obecného vzorce

R-jH ve kterém má R-j_ shora uvedený význam, popřípadě v chráněné ' formě, přičemž případně přítomná chránící skupina se odštěpí a výsledný produkt obecného vzorce I se popřípadě převede na svoji farmaceuticky přijatelnou sůl.

-2CZ 278493 B6

Do rozsahu uvedeného vynálezu rovněž náleží farmaceutický prostředek s protivirovým účinkem, který jako svou účinnou látku obsahuje alespoň jeden bis(hydroxymethyl)cyklobutylpurinový a/nebo -pyrimidinový derivát, obecného vzorce I, viz výše.

Sloučenin obecného vzorce I, t. zn. bis(hydroxymethyl)cyklobutylpurinové a/nebo pyrimidinové sloučeniny,je možno použít jako léčiv, konkrétně jako léčiv s protivirovým účinkem.

Podle uvedeného vynálezu jsou výhodné takové sloučeniny obecného vzorce I , ve kterém Rj_ představuje zbytek strukturního vzorce

Podle nejvýhodnějšího provedení podle uvedeného vynálezu jsou nejúčinnější sloučeniny obecného vzorce I , ve kterých Rj_ znamená zbytek

-3CZ 278493 B6

nebo

Sloučeniny obecného vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelné soli představují antivirové látky, které je možno použít pro léčení virových onemocnění u savců, jako jsou například domácí zvířata (například psi, kočky, koně a pod.), lidé a ptáci (například kuřata a krocani). Sloučeniny obecného vzorce I , ve kterém R-j_ představuje zbytek vzorce

-4CZ 278493 B6

jsou účinné proti jednomu nebo několika následujícím virům : herpex simplex virus 1 a 2 , viry varicella-zoster, cytomegalovirus, vaccinia virus, virus myší leukemie a virus lidské imunodeficience (HIV virus). Předpokládá se, že tato látky jsou rovněž účinné proti řadě dalších DNA virů a retrovirů.

Jako příklad DNA virů kromě těch, které byly již uvedeny výše, lze uvést další herpes viry (například Epstein-Barrův virus, pseudorabies virus, a podobně), další poxviry (například virus opičích neštovic a myonu), pápovaviry (například papilloma viry), virus hepatitidy B a adenoviry. Jako příklad retrovirů kromě těch, které již byly uvedeny výše, lze uvést viry, napadající člověka, jako jsou lymfotropní viry lidských T-buněk (HTLV) , a viry, napadající jiné živočichy, jako je virus kočičí leukemie a virus infekční anemie koní.

Předpokládá se, že všechny ostatní sloučeniny obecného vzorce I , s výjimkou těch, ve kterých R-]_ představuje zbytek

jsou účinné proti jednomu druhu nebo několika druhům virů ze skupiny : herpes simplex 1 a 2 , virus varicella-zoster, cytomegalovirus a dúA retroviry a další DNA viry, uvedené výše.

Dále se má za to, že sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém substituent R^ představuje zbytek

-5CZ 278493 B6

jsou účinné proti různým DNA virům a retrovirům, popsaným výše, s výjimkou herpes simplex virů 1 a 2 , viru varicella-zoster a cytomegaloviru.

Sloučeniny podle vynálezu je možno aplikovat parenterálně (například intravenózními, intraperitoneálními nebo intramuskulárními injekcemi), dále orálně nebo místně vzávislosti na tom, zda se preparát používá k léčbě vnitřní nebo vnější virové infekce.

V případě interních infekcí je možno popisované sloučeniny podávat orálně nebo parenterálně v množství, účinném k léčbě příslušné infekce. Používané dávkování pochopitelně závisí na závažnosti infekce, obvykle . se však podávaná dávka pohybuje v rozmezí zhruba od 1,0 do 50 mg/kg tělesné hmotnosti. Požadovanou dávku je možno aplikovat několikrát denně v příslušných intervalech.

Při infekcích oka nebo jiných externích tkání, například úst a kůže, je možno popisované prostředky aplikovat na infikovanou část těla pacienta místně ve formě masti, krému, aerosolu, gelu, prášku, lotionu, suspenze nebo roztoku (například oční kapky). Koncentrace účinné látky v nosném prostředí pochopitelně závisí na závažnosti infekce, obecně se však pohybuje v rozmezí zhruba od 0,1 do 7 % hmotnostních.

Sloučeninu obecného vzorce I , ve kterém substituent R-^ znamená zbytek „

je možno připravit z meziproduktu obecného vzorce II

X (II)

-6CZ 278493 B6 ve kterém znamená

P chránící skupinu, jako je například acylová skupina, benzylová skupina nebo silylová skupina, a

X znamená odštěpitelnou skupinu, jako je například chlor, brom, jod nebo arylsulfónátová nebo alkylsulfonátová skupina·, které se běžně používají pro tyto účely (například p-toluensulfonyloxyskupina nebo methansulfonyloxyskupina).

Výše uvedeným termínem acylová skupina se míní zbytky vzorce

R_g — C —

II kde Rg znamená přímou nebo rozvětvenou nižší alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů, nebo fenylovou skupinu.

Termínem silylová skupina se míní chránící silylové skupiny, známé v tomto oboru (jako je například terč, butyldimethylsilylová skupina, terč, butyldifenylsilylová skupina, (trifenylmethyl) dimethylsilylová skupina, methyldiisopropylsilylová skupina nebo triisopropylsilylová skupina).

Reakcí sloučeniny obecného vzorce II s chráněným guaninem, jako je například sloučenina obecného vzorce III

H (III) v přítomnosti bázické látky, jako je například uhličitan draselný, hydrid sodný nebo hydrid draselný v aprotickém polárním rozpouštědle, jako je například dimethylformamid, dimethylsulfoxid nebo sulfolan ( tetramethylensulfon), se získá odpovídající sloučenina obecného vzorce IV

-7CZ 278493 B6

CH₂O-P

Tuto výše uvedenou reakci je možno popřípadě uskutečnit v přítomnosti chelatačního katalyzátoru, jako je například 18-crowh-6(l,4,7,7,10,13,16-hexaoxacyklooktadekan) nebo 15-crown-5(1,4,7,10,13-pentaoxycyklopentadekan). Po odstranění chránících skupin ze sloučeniny obecného vzorce IV se získá produkt obecného vzorce I , ve kterém R-|_ představuje zbytek

Je-li chránící skupinou P ve sloučenině obecného vzorce IV acylová skupina, potom je možno tuto skupinu selektivně odstranit za použití například katalytického množství methoxidu sodného v methanolu nebo methanolického roztoku amoniaku. Následující odštěpení O-benzylové chránící skupina na purinovém zbytku je možno uskutečnit působením vodně-alkoholické minerální kyseliny (například roztok chlorovodíkové ve vodě a methanolu), nebo sodíkem v kapalném amoniaku, nebo hydrogenolýzou (provedenou například hydroxidem pyladnatým na aktivnímuhlí v cyklohexenu a ethanolu). V alternativním provedení je možno O-benzylovou chránící skupinu na purinovém zbytku odštěpit nejdříve a potom provádět teprve odštěpení acylové hránicí skupiny.

Je-li chránící skupinou P ve sloučenině obevného vzorce IV silylová chránící skupina, je možno ji odstranit působením fluoridových iontů (například působením tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu). O-benzylovou chránící skupinu, která je přítomna na purinovém zbytku, je potom možno odstranit působením vodně-alkoholické minerální kyseliny nebo hydrogenolýzou. Je-li chránící skupinou P ve sloučenině obecného vzorce IV benzylová skupina, potom je možno všechny benzylové chránící skupiny odště

-8CZ 278493 B6 pit bud působením sodíku v kapalném amoniaku, nebo hydrogenolyticky (například za použití hydroxidu paladnatého na aktivním uhlí v cyklohexanu. a ethanolu). V alternativním provedení je možno všechny benzylové chránící skupiny odštěpit působením chloridu boritého v dichlormethanu.

Reakcí sloučeniny obecného vzorce II se sloučenina obecného vzorce V

Cl

(V) za podmínek, analogických podmínkách, použitým k přípravě sloučeniny obecného vzorce IV, se získá sloučenina obecného vzorce VI

(VI)

Selektivní sloučenina obecného se potom získá odštěpením chránící skupiny vzorce Ia

HOCH

-9CZ 278493 B6

Je-li chránící skupinou P ve sloučenině obecného vzorce VI například acylová skupina, potom je možno tuto skupinu selektivně odštěpit například za použití katalytického množství methoxidu sodného v methanolu. Jestliže je chránící skupinou P ve sloučenině obecného vzorce VI silylová skupina, potom je možno tuto skupinu selektivně odstranit působením fluoridových iontů (jako například tetrabutylamoniumfluoridu). Benzylovou chránící skupinu P je možno ve slouenině obecného vzorce VI snadno selektivně odštěpit působením chloridu boritého.

Kyselou hydrolýzou (například za použití horkého roztoku kyseliny chlorovodíkové ve vodě) atomu chloru v této výše uvedené sloučenině obecného vzorce Ia se získá sloučenina- obecného vzorce I, ve kterém substituent Rj_ představuje zbytek

Sloučeninu obecného vzorce II je možno připravit následujícím spůsobem.

Reakcí diethylesteru kyseliny fumarové a ketendiethylacetalu v horkém terč, butanolu se získá sloučenina dále uvedeného obecného vzorce VII ve formě řacemické směsi (viz K. C. Brannock a kol., J. Org. Chem., 29, 940 /1964/). Na sloučeninu obecného vzorce VII se potom působí redukčním činidlem, jako je například lithiumaluminiumhydrid, v rozpouštědle,jako je například diethyleter nebo tetrahydrofuran, za vzniku diolu vzorce VIII. Hydroxylové skupiny je možno v tomto diolu chránit běžně známými metodami zavedením chránících skupin P , přičemž se získá sloučenina obecného vzorce IX . Deketalizací sloučeniny vzorce IX, což se provádí za použití například p-toluensulfonové kyseliny v acetonu nebo v prostředí vodné kyseliny sírové v acetonitrilu, se získá sloučenina vzorce X , která se potom uvede do reakce s redukčním činidlem (jako je například borohydrid sodný nebo kyanoborohydrid sodný v alkoholu, jako je například methanol, ethanol nebo isopropanol), přičemž tímto způsobem se získá jako minoritní produkt sloučenina vzorce XI současně s isomerní sloučeninou vzorce XII, která představuje hlavní produkt této reakce. Tyto produkty je možno navzájem oddělit chromátografickým postupem. Alternativně je možno na sloučeninu vzorce X působit nejprve tri-sek.butylborohydridem lithým nebo triisoamylborohydridem lithým v tetrahydrofuranu a potom vodným roztokem peroxidu vodíku a hydrogenuhličitanem sodným, přičemž se získá sloučenina obecného vzorce XI , která představuje hlavní produkt této reakce, a sloučenina obecného vzorce XII (je-li přítomna) jako produkt minoritní. Tyto produkty je možno v případě potřeby oddělit chromatografickým postupem.

-10CZ 278493 B6

Sloučeninu vzorce XI je možno převést na sloučeninu vzorce II běžně známým způsobem. Například je možno uvést, že reakcí sloučeniny vzorce XI s p-toliensulfonylchloridem nebo methansulfonylchloridem v pyridinu se získá sloučenina vzorce II , ve kterém X představuje p-toluensulfonyloxyskupinu nebo methánsulfonyloxyskupinu. Sloučeninu vzorce II , ve kterém X znamená p-toluensulfonyloxyskupinu nebo methansulfonyloxyskupinu, je možno rovněž připravit z isomerní sloučeniny vzorce XII působením p-toluensulfónové kyseliny nebo methansulfonové kyseliny v přítomnosti triethylaminu, trifenylfosfinu a diethylazodikarboxylátu nebo diisopropylazodikarboxylátu v rozpouštědle,, jako je například toulen, eter nebo dioxan.

V alternativním provedení se reakcí sloučeniny vzorce XII s methaltrifenoxyfosfoniumhalogenidem nebo methyltrifenylfosfoniumhalogenidem (to znamená chloridem, bromidem nebo jodidem) v rozpouštědle, jako je například dimethylformamod, získá sloučenina vzorce II , ve kterém X znamená chlor, brom nebo jod. Podle dalšího alternativního provedení je možno sloučeninu vzorce II, ve kterém X znamená chlor, brom nebo jod, připravit ze sloučeniny vzorce XII za použití trifenylfosfinu, diethylazodikarboxylátu nebo diisopropylazodikarboxylátu a zdroje halogenidových iontů, jako je například methyljodid, methylbromid nebo dichlormethan, a tento postup se provede běžně známým způsobem z dosavadního stavu techniky (viz například H. Loibner a kol., Helv. Chim. Acta, 59, 2100 /1976/).

Tento výše uvedený postup je možno znázornit následujícím reakčním schématem :

OCH₂CH₃

OCH₂CH₃ (VII)

CH₂O-P (IX)

-11(X)

(XI)

(XII)

Reakcí sloučeniny vzorce II s popřípadě chráněnou formou sloučeniny vzorce XVI

nh₂ (XVI) v přítomnosti báze, jako je například uhličitan draselný, hydrid sodný nebo hydrid draselný, v polárním aprotickém rozpouštědle (jako je například dimethylformamod, dimethylsulfoxid nebo sulfolanj, popřípadě v přítomnosti 18-crown-6 nebo 15-crown-5 , přičemž po odstranění chránících skupin se získá odpovídající sloučenina obecného vzorce I , ve kterém Rj_ znamená zbytek

Aminovou funkční skupinu je ucžno ve sloučenině vzorce XVI popřípadě chránit, například acylovou skupinou, tritylovou skupinou nebo substituovanou tritylovou skupinou.

V alternativním provedení se reakcí sloučeniny vzorce II se sloučeninou vzorce XVIa

-12CZ 278493 B6

(XVIa) postupem analogickým, jako je niny vzorce IV a následujícím sloučenina obecného vzorce I , postup, použitý k přípravě sloučeodštěpením chránících skupin získá ve kterém představuje zbytek

V alternativním provedení je možno sloučeninu obecného vzorce I připravit reakcí sloučeniny vzorce II se sloučeninou XVII

Cl

(XVII)

NH₂ jako je postup, použitý přičemž následující kyselou nebo následným odstraněním prováděnou k přípravě hydrolýzou chránících vzorce I .

analogickým způsobem, sloučeniny vzorce IV , atomu chloru a současným skupin pod významem symbolu P se získá konečný produkt

Reakcí sloučeniny vzorce II se sloučeninou vzorce XVIII

-13CZ 278493 B6

(XVIII) za použití metody, analogického postupu, používanému k přípravě sloučeniny vzorce IV s následujícím odstraněním chránících skupin, označených symbolem P, se získá odpovídající sloučenina obecného vzorce I , ve kterém R_x představuje zbytek

V alternativním provedení je možno tuto sloučeninu obecného vzorce I připravit reakcí sloučeniny vzorce XIX

Cl

H (XIX) se sloučeninou vzorce II za použití metod, analogických metodám, používaných pro přípravu sloučeniny obecného vzorce IV. Tímto způsobem se získá odpovídající sloučenina vzorce XX

(XX)

Působí-li se na sloučeninu obecného vzorce XX horkým rozto-, kem amoniaku v alkoholu (jako je například methanol nebo ethanol) se současným nebo následujícím odštěpením chránících skupin ve významu symbolu P , získá se odpovídající sloučenina vzorce I , ve kterém substituent R-j_ představuje zbytek vzorce

Sloučeninu obecného vzorce I , ve kterém R^ představuje zbytek vzorce

je možno připravit z odpovídající sloučeniny obecného vzorce I , ve kterém R₂ představuje atom vodíku, běžně známým způsobem. Aminoskupinu a /nebo hydroxylovou skupinu je možno popřípadě chránit acylovými skupinami.

Sloučeninu vzorce XXI nh₂

(XXI)

-15CZ 278493 B6 je.možno připravit běžně známým způsobem ze sloučeniny obecného vzorce I , ve kterém R-j_ znamená zbytek obecného vzorce

přičemž hydroxylové skupiny je možno popřípadě chránit zavedením acylových skupin.

Obecné metody přípravy 8-substituovaných purinových nukleosidů a analogů nukleosidů jsou popsány například v následujících půblikacích : M.J. Robins a kol., J. Med. Chem., 27, 1486 (1984), ; R.E Holmes a kol., J. Amer. Chem. Soc., 86, 1242 (1964) ; A.R. Long a kol., J. Org. Chem., 32, 2751 (1967) ; R.E. Holmes a kol., J. Amer. Chem. Soc., 87, 1772 (1965) ; M.Ikehara a kol., Tetrahedron, 26, 4251 (1970) ; H.J. Brentnall a kol., Tetrahedron Lett., 2595 (1972) ; M. Ikehara a kol., Chem. Pharm. Bull, 13, 1140 (1965) ; M. Ikehara a kol., Chem. Commun., 1509 (1968) .

Sloučenina obecného vzorce XXII ve kterém

(XXII)

R₃ znamená atom vodíku,jodu,methylovou skupinu,ethylovou skupinu, n-propylovou skupinu, 2-chlorethylovou skupinu nebo 2-fluorethylovou skupinu, je možno připravit reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce XXIII

-16CZ 278493 B6 (XXIII)

O

se sloučeninou obecného vzorce II v přítomnosti bazické látky, jako je například uhličitan draselný, hydrid sodný nebo hydrid draselný, v aprotickém polárním rozpouštědle (jako je například dimethylformamid, diethylsulfoxid nebo sulfolan), popřípadě přičemž se

(XXIV) a odstranění chránících skupin ve významu symbolu připraví odpovídající sloučenina obecného vzorce XXII

P se potom . Například acylovou skupinu ve významu symbolu P je možno odštěpit působením methoxidu sodného v methanolu nebo methanolického amoniaku, silylovou skupinu ve významu symbolu P je možno odštěpit působením fluoridových iontů. Benzylovou skupinu ve významu symbolu P je možno odštěpit hydrogenolýzou (například v přítomnosti hydroxidu paladnatého na uhlí v cyklohexenu a ethanolu) nebo působením chloridu boritého.

Sloučeninu vzorce XXIII , ve kterém R₃ znamená 2-chlorethylovou nebo 2-fluorethylovou skupinu, je možno připravit běžně známvmi metodami (viz například H. Griengl a kol., J. Med. Chem., 30, 1199 /1987/) ; J. Med. Chem., 28, 1679 /1985/).

Sloučeniny vzorce XXII , ve kterém R₃ představuje 2-chlorethylovou nebo 2-fluorethylovou skupinu, je možno rovněž připravit ze sloučeniny obecného vzorce XXV

-17CZ 278493. B6 (XXV)

CH₂O-P ve kterém P² a P jsou rozdílné chránící skupiny, přičemž P² lze selektivně odstranit v přítomnosti chránící skupiny P. Tak například znamená-li P², silylovou skupinu, tritylovou skupinu nebo substituovanou tritylovou skupinu, může P znamenat benzylovou skupinu nebo acylovou skupinu. Obdobné znamena-li P acylovou skupinu nebo benzylovou skupinu, může P představovat silylovou chránící skupinu. Selektivním odštěpením chránící skupiny ve významu symbolu P² se získá sloučenina vzorce XXIV, ve kterém R³ znamená 2-hydroxyethylovou skupinu. Reakcí této sloučeniny s trifenylfosfinem a tetrachlormehanem a následujícím odštěpením chránící skupiny ve významu symbolu P se získá sloučenina vzorce XXII , ve kterém R³ znamená 2-chlorethylovou skupinu. Analogickým zpracováním za použití kombinace trifenylfosfin/N-bromsukcinimid, nebo kombinace trifenylfosfin/N-bromsukcinimid/tetrabutylamoniumjodid místo kombinace trifenylfosfin/tetrachlormethan (viz například H. Griengl a kol., J. Med., Chem., 28, 1679 /1985/), se získají sloučeniny obecného vzorce XXIV , ve kterém R³ znamená 2-bromethylovou skupinu, resp. 2-jodethylovou skupinu. Následujícím působením fluoridových iontů a potom odštěpením chránících skupin ve významu symbolu P se získá sloučeninu vzorce XXII , ve kterém R₃ znamená 2-fluorethylovou skupinu. Znamená-li P silylovou skupinu, potom dochází při působení fluoridových iontů k odstranění této chránící skupiny. V alternativním provedení se reakcí sloučeniny vzorce XXIV , ve kterém R₃ představuje 2-hydroxy-etylovou skupinu, s diethylamonosulfurtrifluoridem se po následujícím odštěpení chránících skupin ve významu symbolu P získá sloučeninu vzorce XXII, ve kterém R₃ představuje 2-fluorethylovou skupinu.

Sloučeniny vzorce XXV je možno připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce XXVI

-18CZ 278493 B6 (XXVI)

O

H se sloučeninou vzorce II za použití metod, analogických metodách, používaných pro přípravu sloučeniny vzorce XXIV, ve kterém R₃ znamená například atom vodíku, methylovou skupinu nebo ethylovou skupinu. Sloučeninu vzorce XXVI je možno připravit z odpovídajícího volného alkoholu metodami, známými z dosavadního stavu techniky.

Sloučeninu obecného vzorce XXVII

HOCH

(XXVII) je možno připravit z odpovídající sloučeniny vzorce XXIV, ve kterém R₃ znamená atom vodíku a P znamená například acylovou chránící skupinu, běžně známými metodami viz například I. Wempner a kol., Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry , sv. 1, ed. W.W. Zorbach a R.S. Tipson, Interscience Publishers, N.Y., str. 299, 1968 ; T.S. Lin a kol., J. Med., 26, 1691 (1983) ; P— Heřdewijn a kol., J. Med. Chem., 28, 550 /1985/) . Odstraněním chránících skupin za použití methanolického amoniaku nebo methoxidu sodného v methanolu se získá odpovídající sloučenina vzorce XXVII.

V alternativním provedení je možno sloučeninu vzorce XXVII připravit reakcí odpovídající sloučeniny vzorce XXVIII

-19CZ 278493 B6 ^NH2

H (XXVIII) se sloučeninou vzorce II v přítomnosti báze, jako je například uhličitan draselný, hydrid sodný nebo hydrid. draselný v aprotickém rozpouštědle, například dimethylformamidu, dimethylsulfoxidu nebo sulfolanu, popřípadě v přítomnosti sloučeniny 18-crown-6 nebo 15-crown-5, přičemž potom následuje odstranění chránících skupin. Aminoskupina ve sloučenině vzorce XXVIII může být popřípadě chráněna, například acylovou skupinou. Odštěpení této chránící skupiny je možno uskutečnit působením methoxidu sodného v methanolu, nebo působením methanolického amoniaku.

Sloučeniny vzorců XXII a XXVII, ve kterých R₃ představuje atom jodu, je možno připravit z odpovídajících sloučenin vzorce XXII a XXVII, ve kterých R₃ znamená atom vodíku, běžně známými metodami (viz například Basic Principals in Nucleic Acid Chemistry, sv. 1, ed. P.O.P.Ts'O, Academie Press, N.Y., str. 146, 1974; P.K.Chang, Nucleic Acid Chemistry, část 3, ed. L.B. Townsedn a R.S. Tipson, John Wiley and Sons, N.Y. str. 46, 1986).

Sloučeniny vzorce XXVII a XXII, ve které R₃ představuje trifluormethylovou skupinu, je možno připravit z odpovídajících sloučenin vzorců XXVII a XXII, ve které R₃ znamená atom jodu a hydroxylová skupina a aminoskupina jsou chráněné, například acylovou skupinou, působením trifluormethyljodidu a médi, za použití o sobě známých postupů. Následujícím odštěpením chránících skupin za použití methanolického amoniaku, nebo methoxidu sodného v methanolu, se získá odpovídající sloučenina vzorce XXVII nebo XXII, ve které R₃ představuje trifluormethylovou skupinu (viz například Y. Kobayashi a kol., J. Chem. Soc.Perkin 1,2755 /1980/; S.Lin a kol., J.Med. Chem.,26,1691 /1983/.

Sloučeniny vzorců XXVII a XXII, ve kterém R₃ znamená skupinu vzorce

je možno připravit z odpovídajících sloučenina vzorce XXVII a XXII, kde R₃ znamená jod nebo skupinu -HgCl, přes organopaladiové meziprodukty. Sloučeniny vzorců XXVII a XXII, kde R₃ představuje

-20CZ 278493 B6 atom vodíku, se připraví běžně známým způsobem (viz například odkazy v publikaci E. DeClerqua a kol., Pharmac. Ther., 26, 1, (1984) a dále M.E. Perlman a kol., J.Med.Chem. 28, 741 (1985); P - Herdewijn a kol., J. Med. Chem., 28, 550 /1985/; E.D. Bergstrom a kol., J.· Med. Chem., 27, 279 /1984/).

Stereochemické uspořádání, uváděné pro sloučeniny podle vynálezu a pro meziprodukty, vedoucí ke sloučeninám podle uvedeného vynálezu, je uspořádáním relativním, nikoliv absolutním. Toto uspořádání je vyznačováno proto, aby se zdůraznilo, že ve sloučeninách podle vynálezu se bazický zbytek ve významu symbolu R^ nachází v trans-poloze k vicinálnímu substinentu -CH₂OH, a že vzájemné uspořádání substinentů -CH2OH je trans.

Sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R-j_ představuje zbytek

mohou tvořit adiční soli s anorganickými nebo organickými kyselinami. Jako ilustrativní příklady je možno uvést hydrohalogenidy (jako například hydrochloridy a hydrobromidy), alkylsulfonáty, sulfáty, fosfáty a soli s karboxylovými kyselinami.

Sloučeniny obecného vzorce I, tek ve kterém R^_ představuje zby-

mohou tvořit soli s anorganickými a organickými bázemi. Jako příklady je možno uvést soli s alkalickými kovy (například soli sodné a draselné), soli s kovy alkalických zemin (například soli vápenaté a hořečnaté), amonné soli a substituované amonné soli.

Příklady provedeni vynálezu

Sloučeniny podle uvedeného vynálezu a jejich,postup přípravy budou ilustrovány pomocí následujících příkladů, které nijak neomezují rozsah tohoto vynálezu. Rovněž bude ilustrována účinnost některých reprezentativních sloučenin podle vynálezu, jako protivirových látek.

Příklad 1 (Ια,2β,3a)-9-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]guanin

A. Keten-diethylacetal

Sloučenina, uvedená v názvu, se připraví za použití metody, popsané v Organic Syntheses, Coll. Vol. III, ed. E. C. Horning, John Wiley and Sons, N. Y. , str. 506 (1955). K roztoku 28,5 g (0,254 mol) terč.butoxidu draselného ve 150 ml suchého terč.butanolu, vysušeného nad molekulárním sítem (3 . 10~¹⁰m), se při teplotě 50 °C přidá 38,5 ml (0,254 mol) bromacetaldehyd-diethylacetalu. Na hrdlo reakční baňky se nasadí kolona (20 x 1,4 cm), naplněná skleněnými spirálkami, opatřená destilační hlavou, umožňující úplný reflux i odebírání destilátu. Teplota olejové lázně, v níž je baňka ponořena se pomalu zvýší na 100 ’C, reakční směs se 35 minut vaří pod zpětným chladičem, načež se z ní cca 16 hodin oddestilovává terč.butanol rychlostí 4,5 kapky/min., za udržování refluxního poměru v hlavě kolony 22 : 4,5 . Olejová lázeň se zchladí na 20 °C a destilační kolona se skleněnými spirálkami se nahradí sestupným chladičem. Destilací při teplotě 20 až 50 °C za tlaku 533 Pa se získá 26,96 g směsi, sestávající podle integrace píků v ^H-NMR spektru z 23,31 g keten-diethylacetalu a 3,66 g terč.butanolu.

B. Diethylester trans-3,3-diethoxy-l,2-cyklobutandikarboxylové kyseliny

Sloučenina uvedená v názvu, se připraví modifikací metody, kterou popsali K.C. Brannock a spol. v J. Org. Chem., 29., 840 (1964). K roztoku 25,27 g shora připravené směsi, obsahující 21,63 g (0,186 mol) keten-diethylacetalu v 60 ml suchého terč.butanolu, se přidá 28,28 ml .(0,173 mol) diethylfumarátu. Reakční směs se 7 dnů zahřívá na 82 °C, pak se zahustí ve vakuu a zbytek se rozdělí na dva podíly o hmotnosti 3 g (A) a 39 g (B). Podíl A se chromatografuje na sloupci silikagelu (1,5 x 30 cm) za použití směsi hexanu a ethylacetátu (19 : 1), jako elučního činidla. Frakce, obsahující produkt, se spojí a zahustí se, čímž se získá 567 mg materiálu. Podíl B se dvakrát chromátografuje na sloupci silikagelu (35 x 5 cm) za použití stejné směsi rozpouštědel. Frakce, obsahující produkt, se spojí a zahustí se, čímž se

-22CZ 278493 B6 získá 10,43 g materiálu. Celkový výtěžek žádaného produktu činí 10,99 g.

C. . trans-3,3-diethoxy-l,2-cyklobutandimethanol-dibenzoát

K suspenzi 2,38 g (0,0627 mol) lithiumaluminiumhydridu v 50 ml suchého tetrahydrofuranu se pomalu přidává 11,29 g (0,0392 mol) diethylesteru trans-3,3-diethoxy-l,2-cyklobutandikarboxylové kyseliny ve 25 ml tetrahydrofuranu tak, aby se udržel mírný var pod zpětným chladičem. Reakční směs se 4 hodiny zahřívá na 55 °C, pak se zředí 100 ml etheru a vylije se do 100 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného. Přidáním 3M kyseliny sírové se hodnota pH sníží na 4 a výsledná suspenze se extrahuje nejprve čtyřikrát vždy 100 ml etheru a pak třikrát vždy 100 ml chloroformu. Etherické extrakty se spojí, vysuší se síranem sodným, zfiltrují sě a zahustí. Získá se 5,613 g žádaného produktu. Chloroformové extrakty se rovněž spojí a po vysušení síranem sodným a filtrací se zahustí, čímž se získá 112 mg dalšího žádaného produktu.

D. trans-3,3-diethoxy-l,2-cyklobutandimethanol-dibenzoát

K roztoku 5,7 g (0,028 mol) trans-3,3-diethoxy-l,2-cyklobutandimethanolu ve 40 ml suchého pyridinu se v dusíkové atmosféře při teplotě 0 ^eC přidá během 5 minut 9,73 ml (0,0838 mol) benzoylchloridu. Směs se zahřeje na teplotu místnosti, přičemž se z ní vyloučí sraženina. Po dvou hodinách se přidá 20 ml vody a reakční směs se přes noc míchá. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí ve 400 ml ethylacetátu a roztok se promyje dvakrát vždy 150 ml vody, dvakrát vždy 150 ml 1N kyseliny chlorovodíkové a třikrát vždy 150 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organické vrstva se vysuší síranem sodným a po filtraci se zahusti. Získá se 10,97 g žádaného produktu.

E. trans-2,3-bis[(benzoyloxy)methyl])cyklobutanon

K roztoku 10,87 g (0,0263 mol) trans-3,3-diethoxy-l,2-cyklobutandimethanol-dibenzoátu ve 200 ml acetonu se přidá 250 mg (0,00132 mol) p-toluensulfonové kyseliny a směs se 3 hodiny zahřívá k varu pod zpětným chladičem. Reakční roztok se zahustí ve vakuu, zbytek se rozpustí ve 200 ml ethylacetátu a promyje se dvakrát vždy 200 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vodná fáze se zpětně extrahuje 50 ml ethylacetátu, organické vrstvy se spojí, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Získá se 8,7 g znečištěného produktu, který se vyčistí chromatografií na sloupci silikagelu (5 x 27 cm) za použití směsi hexanu a ethylacetátu (5 : 1) jako elučního činidla. Frakce, obsahující produkt, se spojí a pc nahuštění se z nich získá 6,71 g žádaného produktu.

Alternativní příprava trans-2,3-bis [(benzoyloxy)methyl]-cyklobutanonu

K roztoku 50 g (0,12 mol) trans-3,3-diethoxy-l,2-cyklobutandimethanol-dibenzoátu v 1,5 litru acetonitrilu se přidá 570 ml

-23CZ 278493 B6

O,5M vodné kyseliny sírové. Reakční směs se pod argonem 16 hodin míchá při teplotě 25 °C, pak se zředí 5 litry ethylacetátu a promyje se dvakrát vždy 1 litrem vody, dvakrát vždy 1 litrem nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát vždy 1 litrem vody a nakonec 1 litrem roztoku chloridu sodného. Organická fáze se vysuší síranem sodným a zahustí se na olejovitý zbytek, který triturací s hexanem poskytne 34 g surového produktu. Tento surový pevný se dále trituruje se 300 ml diethyletheru, čímž se získá 10 g žádaného produktu o teplotě tání 76 až 78 °C. Po čtyřhodinovém chlazení filtrátu na teplotu -30 °C se získá druhý podíl produktu, jehož hmotnost činí 12 g. Tento druhý podíl taje při 76 až 78 °C a je stejně čistý jako podíl první.

F. (Ια,2β,3β)-3-hydroxy-l,2-cyklobutandimethanol-l,2-dibenzoát a (Ια,2β—3a)-3-hydroxy-l,2-cyklobutandimethanol-l,2-dibenzoát

K roztoku 2,46 g (7,28 mmol) trans-2,3-bis[(benzoyloxy) methyl]cyklobutanonu ve 40 ml suchého methanolu se přidá 1,01 g (16 mmol) natriumkyanborohydridu a jako indikátor pH 3 mg bromkresolové zeleni. Když indikátor zmodrá, přidává se k směsi 1N methanolický chlorovodík až do zažloutnutí. Po 5 hodinách, kdy se barva již nemění a výchozí materiál je spotřebován, se rozpouštědlo odpaří, zbytek se rozpustí ve 100 ml ethylacetátu a roztok se promyje 50 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. Vodná vrstva se zpětně extrahuje 50 ml ethylacetátu, organické vrstvy se spojí, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Zbytek se vyčistí chromatografií na sloupci (5 x 55 cmj silikagelu.

Elucí sloupce směsí hexanu a ethylacetátu (7 : 3) se získá 521 mg (Ια,2 β,3 a)-3-hydroxy-1,2-cyklobutandimethanol-l,2-dibenzoátu.

Elucí sloupce směsí hexanu a ethylacetátu (6 : 3) se získá 1,78 g (Ια,2β,3a)-3-hydroxy-l,2-cyklobutandimethanol-l,2-dibenzoátu.

Alternativní příprava (Ια,2β,3β)-3-hydroxy-l,2-cyklobutandimethanol-l, 2-dibenzoátu a (Ια,2β,3a)-3-hydroxy-l,2-cyklobutandimethanol-l,2-dibenzoátu

K míchanému roztoku 12,0 g (0,0355 mol) trans-2,3-bis[(benzoyloxy) methyl] cyklobutanonu v. suchém tetrahydrofuranu se v dusíkové atmosféře při teplotě -78 ’C přidá během 3 minut 35,5 ml (0,0355 mol) 1M lithium-tri-sek.butylborohydridu v tetrahydrofuranu. Reakční směs se zahřeje na teplotu místnosti a za udržování teploty chlazením ve.rvodě š ledem na 30 ’C se k ní přidá nejprve 34 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, a pak po kapkách 13,0 ml (0,127 mol) 30% peroxidu vodíku. Reakční směs se nechá nabýt teploty místnosti, 30 minut se míchá, načež se zředí 400 ml ethylacetátu a 120 ml vody. Vrstvy se oddělí a organická vrstva se extrahuje 100 ml vody, přičemž se vytvoří emulze, která se rozrazí přidáním pevného chloridu sodného, čímž se vytvoří vodná a organická vrstva. Vodná fáze se spojí a extrahuje se ethylacetátem, všechny ethylacetátové vrstvy se

-24CZ 278493 B6 se a zahustí ve vakuu produktu o hmotnosti kapalinovou chromato500 (Waters) spojí, vysuší se síranem sodným, zfiltrují na zbytek o hmotnosti 12,5 g. část tohoto 7 g se vyčistí preparativní vysokotlakovou grafií za použití silikagelovývh náplní Prep Pak a za eluce 30 % ethylacetátem v hexanu při průtoku 250 ml/min.

V době 14 až butandimethanol-1,2-dibenzoát a v době 23 až 34 3-hydroxy-l,2-cyklobutandimethol-l,2-dibenzoát.

tografií zbývajícího podílu shora která se provádí ve ethylacetátu v hexanu ethylacetátu v hexanu 8,80 g zoátu a dibenzoátu.

% ethylacetátem v hexanu při minut se vymyje (Ια,2β,3a)-3-hydroxy-l,2-cyklominut (1α,2β,3α)Obdobnou chromázbytku (12,5 g), za za se získaného j ednou druhém případě činidel, použití 25 % použití 35 % získá celkem (Ια,2β,3β)-3-hydroxy-l,2-cyklobutandimethanol-l,2-diben2,6 g(la,3β,3α)-3-hydroxy-l,2-cyklobutandimethanol-l,2dvou šaržích, a ve jako elučních

Alternativní příprava (Ια,2β,3β)-3-hydroxy-l,2-cyklobutandimethanol-1,2-dibenzoátu

K roztoku 13,15 g (0,0389 mol) trans-2,3-bis[benzoyloxy)methyl]cyklobutanonu ve 180 ml tetrahydrofuranu se během 5 minut v dusíkové atmosféře při teplotě -78 °C přidá 38,9 ml (0,0389 mol) 1M lithium-triisoamylborohydridu v tetrahydrofuranu. Reakční směs se 10 minut míchá, pak se ohřeje na teplotu místnosti, přidá se k ní nejprve 36,9 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a pak pomalu, za udržování teploty chlazením v ledu na 30 °C, 14,19 ml (0,138 mol) 30% peroxidu vodíku. Reakční směs se zředí vodou (120 ml) a extrahuje se 400 ml ethylacetátu. Organická vrstva se přomyje 100 ml vody, vysuší se síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Získá se 17,8 g žádaného surového produktu ve formě zbytku, neobsahujícího žádný detekovatelný (Ια,2β,3a)-3-hydroxy1,2-cyklobutandimethanol-l,2-dibenzoát. Tento zbytek se vyčistí preparativní vysokotlakou kapalinovou chromatografií na dvou kolonách se silikagelem (Waters Prep 500) za použití 30 % ethylacetátu v hexanu jako elučního činidla. Získá se 9,17 g (Ια,2β,3β)-3-hydroxy-l,2-cyklobutandimethanol-l,2-dibenzoátu.

Alternativně se 42 g surového produktu, získaného shora popsanou redukcí 40,5 g (0,12 mol) trans-2,3-bis[(benzoyloxy)methyl ] cyklobutanonu 120 ml (0,12 mol) 1M lithium-triisoamylborohydridu rozpustí ve 100 ml směsi hexanu a ethylacetátu (2 : 1) a roztok se nanese na suchý sloupec 1,2 litru silikagelu. Sloupec se pak vymývá 5 litry stejné směsi rozpouštědel, přičemž se odebírají frakce o objemu 500 ml. Frakce, obsahující produkt, se spojí a odpaří se, čímž se získá 39,8 g žádaného materiálu ve formě bezbarvé kapaliny, která je dostatečně čistá pro použití v následujícím reakčním stupni.

G. (1α,3β,3β)-3-[[(4-methylfenyl)sulfonyl]oxy]-l,2-cyklobutandimethanol-dibenzoát

K roztoku 7,31 g (0,0215 mol)(Ια,2β,3β)-3-hydroxy-l,2-cyklobutandimethanol-1,2-dibenzoátu, předem vysušeného dvojnásobným odpařením vždy s 20 ml suchého pyridinu, ve 36 ml suchého pyridinu se přidá 6,56 g (0,0344 mol) p-toluensulfonylchloridu. Reakční směs se 16 hodin míchá pod dusíkem při teplotě 60 °C, načež se

-25CZ 278493 B6 pyridin odpaří ve vakuu.^- Poslední zbytky pyridinu se odstraní dvojnásobnou destilací vždy se 30 ml toluenu. Výsledný odparek se rozpustí ve 480 ml ethylacetátu a roztok se promyje nasyceným roztokem uhličitanu draselného. Organická vrstva se vysuší síranem sodným, zfiltruje se a zahustí se ve vakuu. Zbytek se vyčistí chromatografií na sloupci 1500 ml silikagelu·. Sloupec se vymyje nejprve 3000 ml směsi ethylacetátu a hexanu (1 : 5) a pak se vymývá směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 1 : 3, přičemž se odebírají frakce o objemu 50 ml. Příslušné frakce se spojí a zahustí se, čímž se získá 7,00 g (1α,2β,3β)-3-[[(4-methylfenyl) sulfonyl]oxy] -1,2-cyklobutandimethanol-dibenzoátu.

Alternativně je možno postupovat tak, že se po -zahřívání 39,0 g (117 mmol) (Ια,2β,3β)-3-hydroxy-l,2-cyklobutandimethanol-1,2-dibenzoátu a 24,65 g (128,5 mmol) p-toluensulfonylchloridu v 60 ml pyridinu na 60 °C, trvajícím 22 hodiny, teplota sníží na 40 °C a k směsi se přidají 2 ml vody. Po 2 hodinách se těkavé podíly odpaří a zbytek se roztřepe mezi ethylacetát a vodu. Organická vrstva se promyje 3% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se síranem sodným a rozpouštědlo se odpaří. Surový zbytek poskytne po trituraci s pentanem 39,4 g surového produktu, který se za mírného záhřevu rozpustí ve 120 ml ethylacetátu. Roztok se ochladí na teplotu místnosti, zředí se 120 ml pentanu a nechá se několik hodin stát při teplotě +5 °C. Vyloučené krystaly se odfiltrují a vysuší se, čímž se získá 32,6 g čistého žádaného produktu.

Alternativní příprava (Ια,2β,3β)-3-([(4-methylfenyl)sulfonyl]oxy] -1,2-cyklobutandimethanol-dibenzoátu

K roztoku 3,096 g (9,10 mmol) (Ια,2β,3a)-3-hydroxy-l,2-cyklobutandimethanol-dibenzoátu ve 25 ml suchého toluenu se přidá 2,08 g (10,9 mmol) monohydrátu p-toluensulfonové kyseliny, 1,51 ml (10,9 mmol) triethylaminu, 3,81 g (14,6 mmol) trifenylfosfinu a 2,87 ml (14,6 mmol) diisopropylazodikarboxylátu. Reakční směs se pod dusíkem zahřeje na 80 °C a po 1 hodině a potom znovu po 3 hodinách se k ní přidá vždy dalších 1,90 g (7,3 mmol) trifenylfosfinu a 1,43 ml (7,3 mmol) diisopropylazodikarboxylátu. Po dalším tříhodinovém zahřívání se přidá ještě dalších 0,95 g (3,65 mmol)trifenylfosfinu a 0,717 ml (3,65 mmol) diisopropylazodikarboxylátu. Reakční směs se ještě 1 hodinu zahřívá, pak se ochladí na teplotu místnosti a zfiltruje se. Vyloučená sraženina se promyje 20 ml toluenu, filtrát se spojí s promývacími kapalinami a zahustí se ve vakuu. Zbytek se rozpustí ve 100 ml ethylacetátu, ethylacetátový roztok se promyje dvakrát vždy 30 ml vody a po vysušení síranem sodným se zfiltruje a zahustí ve vakuu. Zbytek se vyčistí chromatografii na sloupci 300 ml silikagelu za použití směsi hexanu a ethylacetátu (5 : 1). Příslušné frakce se spojí a zahustí se na objem 20 ml. Koncentrát se zředí 30 ml hexanu a nechá se přes noc stát při teplotě místnosti. Vyloučené krystaly se odfiltrují a po promytí hexanem se vysuší. Získá se 2,18 g (podíl 1) čistého žádaného produktu.

Matečné louhy z izolace podílu 1 se zahustí na 40 ml a koncentrát se nechá přes noc stát při teplotě místnosti. Vyloučené krystaly (podíl 2) se odfiltrují, vysuší se ve vakuu a podrobí se chromatografii na 300 ml silikagelu za použití 2 %

-26CZ 278493 B6 ethylacetátu v toluenu jako elučního činidla. Získá se 1,02 g (podíl 3) stále ještě znečištěného žádaného produktu. Matečné louhy z izolace podílu 2 se chromatografují na 300 ml silikagelu za použití 2 % ethylacetátu v toluenu, čímž se získá 187 mg (podíl 4) stále ještě znečištěného žádaného produktu. Podíly 3 a 4 se spojí a překrystalují se na směsi hexanu a ethylacetátu, čímž se získá dalších 770 mg čistého žádaného produktu. Celkový výtěžek čistého žádaného produktu činí 2,95 g.

Η. (1α,2β,3a)-3-(2-amino-6-(fenylmethoxy)-9H-purin-9-y.l]-l,2cyklóbutandimethanol-1,2-dibenzoát

K roztoku 1,072 g (2,17 mmol) (Ια,2β,3a)-3-([(4-methylfenyl) sulfonyl]oxy]-2-cyklobutandimethanol-dibenzoátu ve 20ml dimethylformamidu se přidá 784 mg (3,25 mmol) 2-amino-6-(fenylmethoxy)9Hpurinu, 573 mg (2,17 mmol) 18-crown-6 a 600 mg (4,34 mmol) uhličitanu draselného. Reakční směs se 24 hodiny míchá pod dusíkem při teplotě 110 °C, pak se rozpouštědla odpaří ve vakuu a zbytek se chromatografuje na sloupci silikagelu (2,5 x 20 cm) za použití směsi ethylacetátu a hexanu (3 : 1) jako elučního činidla. Získá se 400 mg čistého žádaného produktu. Další frakce, obsahující znečištěný žádaný produkt, se spojí a po nové chromatografii na sloupci silikagelu (1,5 x 30 cm) za použití směsi ethylacetátu a hexanu (2 : 1) jako elučního činidla poskytnou dalších 52 mg žádaného produktu. Celkový výtěžek žádaného produktu tedy činí 452 mg.

I. (Ια,2β,3a)-3-(2-amino-6-(fenylmethoxy)-9H-purin-9-yl]-l,2cyklobutandimethanol

K roztoku 452 mg (0,803 mmol)(1α,2β,3α)-3-(2-amino-6-(fenylmethoxy)-9H-purin-9-yl]-1,2-cyklobutandimethanol-l,2-dibenzoátu ve 12 ml suchého methanolu se přidá 109 μΐ (0,482 mmol) 25 % methanolického roztoku methoxidu sodného. Reakční směs se pod dusíkem 1 hodinu míchá při teplotě 40 °C, pak se rozpouštědlo odpaří ve vakuu a k odparku se přidá 10 ml vody. Přidáním 1N kyseliny chlorovodíkové se hodnota pH sníží na 7., rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se trituruje dvakrát vždy s 20-ml etheru. Po vysušení se získá 358 mg surového žádaného produktu, který se používá v následujícím reakčním stupni.

J. (1α,2β,3α)-9-(2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobuty1]guanin

K suspenzi 358 mg (1,0 mmol) (1α,2β,3α)-3-(2-amino-6-(fenylmethoxy)-9H-purin-9-yl]-1,2-cyk-yl)-1,2-cyklobutandimethanolu v 5 ml methanolu se přidá 2,5 ml 3N kyseliny chlorovodíkové. Reakční směc ..-e 4 hodiny míchá při teplotě’ 45 °C, pak se rozpouštědla odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí ve 20 ml vody. Hodnota pH se 1N hydroxidem draselným zvýší na 7, ze směsi se odebere 10 % jako vzorek, z něhož se ve vakuu odpaří rozpouštědla. Odparek se třikrát odpaří vždy se 4 ml methanolu a dvakrát vždy se 4 ml ethylacetátu, pak se za záhřevu rozpustí ve 4 ml vody a nanese se na sloupec adsorbentu (1,1 x 20 cm; CHP-20P resin; Mitsubishi Chemical Industries Ltd. (75 - 150 μιη)]. Postupnou elucí sloupce vodou, 2 % acetonitrilem ve vodě a 4 % acetonitri

-27CZ 278493 B6 lem ve vodě se získá 11 mg žádaného produktu.

Zbývajících'90 % reakční směsi se zahustí ve vakuu a zbytek se odpaří, třikrát vždy s 20 ml methanolu a dvakrát vždy s 20 ml ethylacetátu. Odparek se za záhřevu rozpustí ve 30 ml vody a nanese se na sloupec adsorběntu CHP-20P (2,5 x 15 cm). Postupnou elucí sloupce vodou, 2 % vodným acetonitrilem, 4 % vodným acetonitrilem a 10 % vodným acetonitrilem se získá dalších 111 mg (Ια,2β,3α)-9-[2,3-bis(hydroxymethyl)-cyklobutyl]guaninu, taj ícího nad 220 °C. ’

Analýza: pro Cii^hi5N5°3.¹,43H2O vypočteno 45,40 % C, 6,18 % H, 24,08 % N, 8,83 % H20 nalezeno 45,66 % C, 5,95 % H, 23,82 % N, 8,83 % H₂0

Příklad 2 (Ια,2β,3a)-3-(6-amino-9H-purin-9-yl)-1,2-cyklobutandimentahol

A. (Ια,2β,3a)-3-(6-amino-9H-purin-9-yl)-1,2-cyklobutandimethanol-dibenzoát

K roztoku 988 mg (2 mmol) (1α,2β,3β)-3-[[(4-ΐηβΐ]Ίγ1ίεηγ1)3α1fonyl]oxy]-l,2-cyklobutandimethanol-dibenzoátu ve 20 ml suchého dimethylformamidu se pod dusíkem přidá 405 mg (3 mmol) adeninu, 538 mg (2 mmol) 18-crown-6 a 276 mg (2 mmol) uhličitanu draselného. Reakčnísměs se 16 hodin zahřívá na 110 °C, načež se rozpouštědlo odpaří ve vakuu. Zbytek se vyčistí chromatografií na sloupci 400 ml silikagelu. Postupnou elucí 0,1%, 05 %, 5 % a 10 % methanolem v ethylacetátu se získá 522 mg stále ještě znečištěného produktu. Tento produkt poskytne chromatografií na 400 ml silikagelu za_____použití směsi dichlormethanu v methanolu (20 : 1) jako elučního činidla 400 mg čistého (Ια,2β,3a)-3-(6-amino-9H-purin-9-yl)-1,2-cyklobutandimethanol-dibenzoátu.

B. (Ια,3 β,3a)-3-(6-amino-9H-purin-9-yl)-1,2-cyklobutandimetahol

K suspenzi 400 mg (0,899 mmol)(Ια,2β,3a)-3-(6-amino-9H-purin -9-yl)-l,2-cyklobutandimethanol-dibenzoátu ve 20 ml suchého methanolu se přidá 123 μΐ (0,539 mmol) 25 % methanolického roztoku methoxidu sodného. Směs se 45 minut míchá při teplotě 40 °C, pak se rozpouštědlo odpaří ve vakuu, zbytek se suspenduje ve 20 ml vody, pH se IN kyselinou chlorovodíkovou upraví na hodnotu 7,0 a těkavé podíly se odpaří. Zbytek se vyčistí chromatografií na sloupci pryskyřice CHP-20P. Postupnou elucí sloupce vodou, gradientem 0 až 20 % methanolu ve vodě, pak 20 % a nakonec 30 % vodným methanolem se získá 128 mg (1α,2β,3α)-3-(6-amino-9H-purin9-yl)-l,2-cyklobutandimethanolu ve formě pevné látky o teplotě tání 181 až 183 °C.

Analýza: pro ^C11^H15^N5°2-^O'^1H2° vypočteno 52,63 % C, 6,10 % H, 27,90 % N nalezeno 52,64 % C, 6,10 % H, 28,00 % N

-28CZ 278493 B6

Příklad ,3 (Ια,2β,3α)-1-(2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-5-methyl-2,4-(1Η, 3Η)-pyrimidindion

Α. (Ια,2β,3α)-1-[2,3-bis[(benzoyloxy)methyl]cyklobutyl])-5-methy1-2,4(1H,3H)-pyrimidindion

Směs 1,245 g (2,52 mmol) (Ια,2β,3β)-3-([(4-methylfenyl)sulfonyl]oxy]-l,2-cyklobutandimethanol-dibenzoátu,625 mg (4,96 mmol) thyminu, 1,39 g (10,1 mmol) uhličitanu draselného a 664 mg (2,51 mmol) 18-crown-6 ve 12,5 ml suchého dimethylformamidu se pod argonem zahřívá za. míchání nejprve 16 hodin na 105 °C a pak 1 hodinu na' 125 ^eC. Po přidání dalších 310 mg (2,2 mmol) thyminu a 354 mg (2,6 mmol) uhličitanu draselného se v zahřívání na 125 ’C pokračuje ještě 2 hodiny, pak se reakční směs ochladí, zfiltruje se a nerozpustné podíly se promyjí dimethylformamidem. Dimethylformamidové filtráty se spojí, odpaří se a zbytek se trituruje s ethylacetátem. Pevné podíly se odfiltrují, filtrát se odpaří, zbytek se rozpustí v malém objemu směsi zhruba stejných dílů ethylacetátu a hexanu a roztok se nanese na sloupec silikagelu (5 x 11,5 cm), nasypaný v hexanu. Elucí sloupce nejprve smě-, sí ethylacetátu a hexanu (4 : 1) a pak ethylacetátem se získá

219 mg částečně vyčištěného žádaného produktu. Tento materiál se chromátografuje na sloupci silikagelu, připraveném v dichlormethanu. Elucí sloupce 10 %, 20 %, 30 % a 50 % ethylacetátem v dichlormethanu se získá 166 mg čistého (1α,2β,3a)-l-(2,2-bis [(benzoyloxy)methyl]cyklobutyl]-5-methyl-2,4(1H,3H)pyrimidindionu ve formě bílé pevné látky.

B. (Ια,2β,3a)-1-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-5-methyl-2,4 (1H,3H)-pyrimidindion

K míchané suspenzi 146 mg (0,326 mmol) (la,2β,3a)—l-[2,3-bis [(benzoyloxy)methyl]cyklobutyl]-5-methyl-2,4(1H,3H)pyrimidindionu ve 4,9 ml suchého methanolu se v argonové atmosféře při teplotě 40 °C za míchání přidá 44,7 μΐ (0,196 mmol) 25 % roztoku methoxidu sodného v methanolu. Po 4 hodinách se vzniklý čirý roztok ochladí na teplotu místnosti a zahustí se ve vakuu. Zbytek se vyjme vodou, hodnota pH se zředěnou kyselinou chlorovodíkovou upraví na 7 a roztok se nanese na sloupec (1,5 x 21 cm) pryskyřice CHP-20P, připravený ve vodě. Elucí sloupce vodou, 2 %, 4 % a 10 % acetonitrilem ve vodě, odpařením příslušných frakcí a následující lyofilizací z vody se získá 58 mg (Ια,2β,3a)-l(2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-5-methyl-2,4(1H,3H)-pyrimidindionu ve formě hygroskopické pevné látky.

^H-NMR (270 MHz, perdeuterodimethylsulfoxid, tetramethylsilan, hodnoty Š) : 11,11 (široký singlet, 1H), 7,64 (dublet, J =1,1

Ηζ,ΙΗ), 4,56 (multiplet, 2H), 4,47 (multiplet, 2H), 4,47 (multiplet, 1H), 3,44 (multiplet, 4H), 2,5 (multiplet, CD₃S(O)CD₃ + 1H), 1,85 (multiplet, 1H), 1,84 (multiplet, 1H), 1,79 (dublet, J = 1,1 Hz, 3H)

-29CZ 278493 B6

Příklad 4 (Ια,2β,3α)-4-amino-l-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-2(1Η)-pyrimidinon

A. (Ια,2β—3a)-4-amino-l-[2,3-bis[(benzoyloxy)methyl]cyklobutyl]

-2(1H)-pyrimidinon

Směs 1,51 g (3,05 mmol) (1α,2β,3β)-3-[[(4-ιιΐθΐ1ιγ1ίβηγ1)3π1ίοnyl]oxy]-l,2-cyklobutandimethanol-dibenzoátu, 678 mg (6,10 mmol) cytosinu, 1,69 g (12,2 mmol) uhličitanu draselného a 804 mg (3,04 mmol) 18-crown-6 ve 12,5 ml suchého dimethylsulfoxidu se pod argonem 4,5 hodiny míchá při teplotě 112 °c. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a neutralizuje se přidáním 0,7 ml (12,2 mmol) ledové kyseliny octové. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, zbytek se vyjme ethylacetátem, pevné podíly se odfiltrují a filtrační koláč se promyje ethylacetátem. Ethylacetátový filtrát se zahustí, zbytek se rozpustí v toluenu a nanese se na sloupec silikagelu (2,5 x 28,5 cm), připravený v toluenu. Elucí sloupce isopropanolem v toluenu se získá 156 mg žádaného produktu.

B. (Ια,2β,3a)-4-amino-l-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl] -2- (1H)-pyrimidinon

K roztoku 151,3 mg (0,349 mmol) (1α,2β,3α)-4-αιηίηο-1-[2,3bis[(benzoyloxy)methyl]cyklobutyl]-2-(lH)-pyrimidinonu v 5,25 ml suchého methanolu se přidá -48 μΐ (0,209 mmol) 25% roztoku methoxidu sodného v methanolu. Reakční směs se 75 minut míchá při teplotě 40 C, pak se ochladí na teplotu místnosti, rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí ve vodě. Hodnota pH se 1N kyselinou chlorovodíkovou upraví na 7,05, vodný roztok se nanese na sloupec pryskyřice CHP-20P, připravený ve vodě, sloupec se propláchne 50 ml vody a pak se podrobí gradientově eluci 0 až 50 % vodným acetonitrilem. Po spojení příslušných frakcí a odpaření rozpouštědla ve vakuu se získá 52 mg žádaného produktu ve formě transparentní sklovité hmoty.

^H-NMR (270 MHz, perdeuterodimethylsulfoxid, tetramethylsilan, hodnoty 5) : 7,96 (dublet, J = 7 Hz, 1H), 6,98 (široký singlet,

2H), 5,71 (dublet, J = 7,6 Hz, 1H), 4,65 (široký multiplet, 2H), 4,37 (multiplet, 1H), 3,43 (multiplet, 4H), 2,43 (multiplet, 1H), 2,31 (multiplet,

1H), 2,20 (multiplet, 1H) 1,77 (multiplet, 1H).

Příklad 5 [1α(Ε),2β,3α]-1-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-5-(2-bromethe nyl)-2,4(1H,3H)-pyrimidindion

A. (Ια,2β,3a)-1-[2,3-bis[(benzoyloxy)methyl]cyklobutyl]-2,4-(1H, 3H)-pyrimidindion

K roztoku 1,26 g (11,23 mmol) uracilu, sušeného 16 hodin při teplotě 50 °C a 1,98 g (7,49 mmol) 18-crown-6 v 9 ml dimethyl

-30CZ 278493 B6 sulfoxidu se při 50 °C přidá 2,07 g (14,98 mmol) uhličitanu draselného a 3,7 g (7,49 mmol) (la,2P,3|3)-3-[[(4-methylfenyl)sulfonyl]oxy]-l,2-cyklóbutandimethanol-dibenzoátu. Po záhřevu na 100. ’C v dusíkové atmosféře se vytvoří emulze, k níž se přidají další 3 ml dimethylsulfoxidu a reakční směs se 24 hodiny míchá při teplotě 100 °C. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se vyčistí chromatografií na 700 ml silikagelu za použití gradientově eluce od toluenu do 3 % isopropylalkoholu v toluenu. Příslušné frakce se spojí a po odpaření se z nich zídká 850 mg čistého žádaného produktu. Frakce, obsahující znečištěný žádaný produkt, se spojí, zahustí se a zbytek se rozpustí v 1 ml toluenu. Vyloučené krystaly se shromáždí a vysuší, čímž se získá dalších 35 mg čistého žádaného produktu.

B. (Ια,2β,3a)-1-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-2,4(1H,3H)-pyrimidindion

K suspenzi 885 mg (2,04 mmol) (la,2P,3a)-l-[2,3-bis(benzoyloxy)methyl]cyklobutyl]-2,4(lH,3H)-pyrimidindionu ve 25 ml suchého methanolu se přidá 264 μΐ (1,22 mmol) 25% roztoku methoxidu sodného v methanolu. Reakční směs se 3 hodiny zahřívá pod dusíkem na 40 °C, pak se rozpouštědlo odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v 5 ml vody. IN kyselinou chlorovodíkovou se pH sníží na hodnotu 7 a výsledný roztok se nechá přes noc stát při teplotě 0 ’C. Vyloučená sraženina a kapalina nad usazeninou se vyčistí na jednom sloupci (200 ml) pryskyřice CHP-20P, který se postupně vymývá vodou, 2% vodným acetonitrilem a 4% vodným acetonitrilem, čímž se získá 423 mg žádaného produktu.

C. (Ια,2β,3 a)-l-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-5-j od-2,4(1H,

3H)-pyrimidindion

K suspenzi 423 mg (1,87 mmol) (1α,2β,3a)-1-(2,3-bis(hydroxymethyl ) cyklobutyl] -2,4 (lH,3H)-pyrimidindionu ve 38 ml dioxanu, vyčištěného na zásaditém oxidu hlinitém, se přidá 950 mg (3,74 mmol) jodu a 2,5 ml (2 mmol) .0,8M kyseliny dusičné. Výsledný roztok se 90 minut míchá při teplotě 95 °C, pak se ochladí na teplotu místnosti a přidává se k němu nasycený vodný roztok thiosíranu sodného až do vyblednutí červené barvy. Reakční směs se zahustí ve vakuu, čímž se získá nažloutlý zbytek, který se vyčistí chromatografií na 150 ml pryskyřice CHP-20P za použití gradientově eluce od vody do 50% vodného acetonitrilu. Získá se 557 mg žádaného produktu.

D. Methylester (1α(Ε),2β,3α]-3-(1-(2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl)-1,2,3,4-tetrahydro-2,4-dioxo-5-pyrimidinyl]-2-propenové kyseliny

Suspenze 17,5 mg (0,078 mmol) octanu paladnatého, 40,9 mg (0,15 mmol) trifenylfosfinu a 290 μΐ (2,08 mmol) triethylaminu ve 20 ml dioxanu, vyčištěného na zásaditém oxidu hlinitém, se pod dusíkem 15 minut zahřívá na 85 'C, načež se k ní přidá roztok 457 mg (1,3 mmol) (la,2β,3a)-1-(2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl] -5-jod-2,4(lH,3H)-pyrimidindionu a 468 μΐ (5,2 mmol) methylakrylátu v 10 ml dioxanu. Reakční směs se pod dusíkem zahřeje na

-31CZ 278493 B6 'C a po 4 hodinách se k ní přidá dalších 234 μΐ (2,7 mmol) methylakrylátu. Po dalším dvouhodinovém zahřívání není reakce stále ještě ukončena. K reakční směsi se přidá 300 mg křemeliny a směs se za tepla zfiltruje. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se vysuší dvojnásobným odpařením vždy s 10 ml suchého dioxanu a používá se k další reakci.

Shora popsaná reakce se opakuje s tím rozdílem, že se z dioxanu odstraní kyslík uváděním argonu. Po patnáctiminutovém zahřívání suspenze 17,5 mg (0,078 mmol) octanu paladnatého, 40,9 mg (0,15 mmol) trifenylfósfinu a 290 μΐ triethylaminu (2,08 mmol) ve 20 ml· dioxanu pod dusíkem na teplotu 85 °c se k výsledné směsi přidá 468 μΐ (5,2 mmol) methylakrylátu v 10 ml dioxanu, směs se 3 hodiny zahřívá na 85 ^eC, pak se k ní přidá 300 mg křemeliny, teplá reakční směs se zfiltruje a filtrát se po ochlazení na teplotu místnosti zahustí ve vakuu. Zbytek se nanese na sloupec 150 ml silikagelu, nasypaný v chloroformu, a vyčistí se postupnou elucí sloupce chloroformem, 5%, 7,5% a 10% methanolem v chloroformu. Příslušné frakce se spojí a zahustí se, čímž se získá 310 mg žádaného produktu, znečištěného triethylamoniovými solemi. Tato směs se rozpustí v 5 ml vody a 50 ml ethylacetátu, vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje čtyřikrát vždy 30 ml ethylacetátu. Ethylacetátové vrstvy se spojí, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí. Získá se 230 mg žádaného produktu.

E. [1α(E),2β,3α]-3-[1-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-1,2,3,

4-tetrahydro-2,4-dioxo-5-pyrimidinyl]-2-propenová kyselina

Roztok 230 mg (0,742 mmol) methylesteru (1α(Ε),2β,3α]-3-[ΙΕ 2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-1,2,3,4-tetrahydro-2,4-doixo-5-pyrimidinyl]-2-propanové kyseliny ve 3,7 ml (7,42 mmdl) 2M hydroxidu sodného se 1,5 hodiny míchá při teplotě místnosti, pak se reakční směs ochladí na 4 °C, její pH se 6N kyselinou chlorovodíkovou sníží na hodnotu 2 a směs se nechá 1 hodinu stát při teplotě 4 ^eC. Vyloučená sraženina se odfiltruje, promyje se vodou a ve vakuu se 16 hodin suší nad oxidem fesforečným. Získá se 120 mg žádaného produktu. Matečné louhy spolu s promývacími kapalinami se zahustí na objem 3 ml a nechají se 16 hodin stát při teplotě 4 °C. Vyloučené krystaly se shromáždí, promyjí se vodou a 4 hodiny se suší ve vakuu nad oxidem fosforečným, čímž se získá dalších 7 mg žádaného produktu.

F. [1α(Ε),2β,3α]-3- 1-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-5-(2-

-bromethenyl)-2,4(1H,3H)-pyrimidindion

K roztoku 127 mg (0,429 mmol) [1α(Ε),2β,3α]-3-[l-[2,3-bis (hydroxymethyl)cyklobutyl]-1,2,3,4-tetrahydro-2,4-dioxo-5-pyrimidinyl]-2-propenové kyseliny (vysušené dvojnásobným odpařením vždy se 3 ml dimethylformamidu) ve 2 ml dimethylformamidu se přidá nejprve 129 mg (1,29 mmol) hydrogenuhličitanu draselného, pak roztok 76 mg (0,429 mmol) N-bromsukcinimidu v 1 ml dimethylformamidu, reakční směs se 2,5 hodiny míchá při teplotě místnosti, pak se zfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. Zbytek se dvakrát odpaří vždy s 5 ml vody a pak se podrobí chromatografii na sloupci 110 ml pryskyřice CHP 20P za použití gradientově eluce od vody do 30 % vodného acetonitrilu. Po zahuštění eluátu ve vakuu se získá

-32CZ 278493 B6 mg [1α(Ε),2β,3al-l-[2,3-bis(hydroxýmethyl)cyklobutyl-5-(2bromethenyl)-2,4(lH,3H)-pyrimidindionu o teplotě tání 155 až 157 °C.

Analýza: pro C₁₂ ^Hi5^N2°4^Br’⁰'^31H2° vypočteno 42,79 % C, 4,68 % H, 8,32 % N nalezeno 42,85 % C, 4,69 % H, 8,26 % N

Příklad 6 (Ια.2β,3a)-2-amino-9-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-8-brom-1,9-dihydro-6H-purin-6-on

K míchané suspenzi 72 mg (0,272 mmol) (Ια,2β,3a)-9-[2,3-bis (hydroxymethyl)cyklobuty]guaninu v 9 ml vody se přidá 0,5 ml nasyceného vodného roztoku bromu. Po 25 minutách a pak znovu po 50 minutách se přidá vždy dalších 0,5 ml vodného roztoku bromu. Po dalším patnáctiminutovém míchání se vyloučený materiál odfiltruje, po promytí vodou se suspenduje ve 3 ml vody a nanese se na sloupec 24 ml pryskyřice CHP-20P, připravený ve vodě. Postupnou elucí sloupce vodou, 4 % vodným acetonitrilem a 8 % vodným acetonitrilem se získá 45 mg žádaného produktu. Tento materiál se spojí se 49 mg žádaného produktu z analogické reakce, prováděné se stejnými navážkami a směs se krystalizuje ze 7 ml vody. Získá se 74 mg (Ια,2B,3a)-2-amino-9-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl] -8brom-1,9-dihydro-6H-purin-6-onu o teplotě tání 130 °C.

NMR (270 hodnoty 5)

MHz, perdeuterodimethylsulfoxid, tetramethylsilan, : 10,67 (široký singlet, 1H) , 6,43 (široký singlet, 2H), 4,59 (kvartet, J = 9 Hz, 1Η), 4,55 (triplet, J =·5 Hz, 1H), 4,48 (triplet, J = 5 Hz, 1H), 3,59 (triplet, J = 6 Hz, 2H), 3,44 (triplet, J = 5 Hz,

2H), 2,56 (multiplet, 2H), 2,26 (multiplet, 1H),

2,21 (multiplet, 1H).

Příklad 7 (Ια,2 β,3a)-1-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-5-j od-2,4(1H,3H)-pyrimidindion

A. (Ια,2β,3a)-1-[2,3-bis[(benzoyloxy)methyl]cyklobutyl]-2,4(1H, 3H)-pyrimidindion

Směs 1,25 g (5,07 mmol) (1α,2β,3β)-3-[[(4-ιπε^γ^θηγ1)Ξη1ίοnyl]oxy]-l,2-cyklobutandimethanol-dibenzoátu, 0,567 g (5,07 mmol) uracilu, 1,40 g (10,2 mmol) uhličitanu draselného a 670 mg (2,54 mmol) 18-crown-6 ve 12,5 ml suchého dimethylsulfoxidu se 4,5 hodiny zahřívá na 110 ’C. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a polotuhý zbytek se dvakrát trituruje s ethylacetátem. Spojené ethylacetátové supernatanty se zahustí na malý objem, koncentrát se zředí stejným objemem hexanu a nanese se na sloupec (2,5 x 25 cm) silikagélu, připravený v hexanu. Sloupec se vymývá nejprve směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 4:1, pak směsí stejných rozpouštědel v poměru 1 : 1 a nakonec ethylacetátem, čímž se získá

250 mg částečně vyčištěného žádaného produktu. Chromatografií

-33CZ 278493 B6 tohoto materiálu na sloupci (1,5 x 24,5 cm) silikagelu, připraveném v methylenchloridu, za použití nejprve směsí ethylacetátu a methylenchloridu v poměru 4:1 a 1:1a nakonec samotným ethylacetátem se zbývající nečistoty nepodaří odstranit. Následující chromatografií na sloupci silikagelu (1,5 x 25 cm), připraveném v toluenu a vymývaném směsí isopropanolu a toluenu (4 : 96) se získá 56,5 mg žádaného produktu v čistém stavu, jakož i znečištěný žádaný produkt. Překrystalováním tohoto znečištěného produktu z toluenu se získá dalších 86,3 mg čistého žádaného produktu, takže celkový výtěžek tohoto produktu činí 143 mg.

B. (Ια,2β,3a)-1-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-2,4(1H,3H)pyrimidindion

Směs 142,9 mg (0,329 mmol) (la,2P,3a)-l-[2,3-bis-[(benzoyloxy)methyl]cyklobutyl]-2,4(lH,3H)-pyrimidindionu, 45 μΐ 25 % methanolického roztoku methoxidu sodného a 4,9 ml suchého methanolu se pod argonem 8,5 hodiny míchá při teplotě 40 °C. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti, rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, lepivý zbytek se parciálně rozpustí v několika mililitrech vody a hodnota pH se zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a hydrogenuhličitanem Sodným nastaví na 7,00. Tento roztok o objemu 7 až 8 ml se aplikuje na sloupec (1,5 x 23,5 cm) pryskyřice CHP-20P, připravený ve vodě. Po vymytí cca 50 ml vody se sloupec vymývá postupně 2 %, 4 %, a 10 % vodným acetonitrilem, čímž se získá

55,8 mg žádaného, produktu va formě bílé pevné látky.

C. (1α,2β,3α)-1-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-5-j od-2,4 (1H,3H)-pyrimidindion

Roztok 54,7 mg (0,242 mmol) (Ια,2β,3a)-l-[2,3-bis(hydroxymethyl) cyklobutyl]-2,4(1H,3H)-pyrimidindionu, 123 mg (0,484 mmol) jodu a 0,8N vodné kyseliny dusičné (0,256 mmol) v 5 ml dioxanu se 85 minut míchá při teplotě 105 ’C. Po ochlazení na teplotu místnosti se směs odbarví vodným roztokem thiosíranu sodného a zahustí se ve vakuu. Pevný zbytek se vyjme vodou a odpaří se ve vakuu. Toto zpracování se provede třikrát. Výsledný pevný materiál se částečně rozpustí ve vodě a nanese se na sloupec (1,5 x 20 cm) pryskyřice CHP-20P, připravený ve vodě. Po promytí cca 50 ml vody se sloupec podrobí gradientově eluci do vody do 50 % vodného acetonitrilu. Získá se 67,3 mg (Ια,2β,3a)-1-(2,3-bis(hydroxymethyl) cyklobutyl]-5-jod-2,4(lH,3H)-pyrimidindionu ve formě bílé pevné látky o teplotě tání 170 až 171 °C.

Analýza: pro ^cio^H13^IN2°4’⁰'^27H2° vypočteno 33,65 % C, 3,82 % H, 7,85 % N nalezeno 33,68 % C, 3,77 % H, 7,82 % N.

Příklad 8 (Ια,2β,3a)-5-amino-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-3,6-dihydro-7H-1,2,3“triazol[4,5-d]pyrimidin-7-on

-34CZ 278493 B6

A. 4-chlorbenzendiazoniumchlorid

K suspenzi 21,14 g (0,166 mol) 4-chloranilinu ve 156 ml vody a 46 ml 12N kyseliny chlorovodíkové se při teplotě 0 “C během 20 minut přidá za udržování teploty pod 10 C 12,62 g (0,182 mol) dusitanu sodného ve 156 ml vody. Vzniklý roztok 4-chlorbenzendiazoniumchloridu se zfiltruje, 30 minut se uchová při teplotě 0 °C a pak se použije v následujícím reakčním stupni.

B. 6-chlor-5-[(4-chlorfenyl)azo] -2,4-pyrimidindiamin

K suspenzi 21,68 g (0,150 mol) 4-chlor-2,6-diaminopyrimidinu v 750 ml vody a 750 ml kyseliny octové se přidá 300 g octanu sodného. Po dvacetiminutovém míchání přejde suspenze na roztok, k němuž se během 30 minut za chlazení přidá shora připravený roztok 0,166 mol 4-chlorbenzendiazoniumchloridu takovou rychlostí, aby se reakční teplota udržela na 18 ’C. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, pak se oranžově zbarvené krystaly odfiltrují, promyjí se čtyřikrát vždy 400 ml vody a vysuší se ve vakuu. Získá se 17,6 g 6-chlor-5-[(4-chlorfenyl)azo]-2,4-pyrimidindiaminu. Matečné louhy se 20 hodin chladí na 5 ’C, vyloučené krystaly se shromáždí a vysuší se ve vakuu, čímž se získá dalších 6,94 g 6-chlor-5-[ (4-chlorfenyl.)azo]-2,4-pyrimidindiaminu.

C. 6-chlor-2,4,5-pyrimidintriamin

Suspenze 24,55 g (0,0906 mol) 6-chlor-5[(4-chlorfenyl)azo]-2,4-pyrimidindiaminu v 640 ml ethanolu, 640 ml vody a 64 ml kyseliny octové se pod dusíkem zahřeje na 70 C, během 1 hodiny se k ní pomalu přidá 75 g zinkového prachu a směs se ještě další hodinu míchá při teplotě 70 °C. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti, pod dusíkem se zfiltruje, filtrát se ochladí na 0°C a jeho pH se přidáním 400 ml 10 % hydroxidu sodného zvýší na hodnotu 10. Vysrážený hydroxid zinečnatý se odfiltruje přes křemelinu, tmavě červeně zbarvený filtrát se neutralizuje ledovou kyselinou octovou na pH 7 a zahustí se na objem 300 ml. Po přidání 50 ml vody se výsledná směs ochladí na 0 ’C a její pH se 10 % hydroxidem sodným zvýší na hodnotu 9. Roztok se nechá 3 dny stát při teplotě 5 ’C, pak se vyloučené krystaly shromáždí, promyjí se nejprve 50 ml vody a potom 50 ml etheru a 16 hodin se suší při teplotě 35 ^eC ve vakuu, čímž se získá 10,94 g žádaného produktu.

D. 7-chlor-lH-l,2,3-triazolo[4,5-d]pyrimidin-5-amin

Roztok 10,94 g (0,0686 mol) 6-chlor-2,4-pyrimidintriaminu a 9,20 ml (0,0686 mol) isoamylnitritu v 500 ml dioxanu, čerstvě vyčištěného prolitím sloupcem zásaditého oxidu hlinitého, se pod dusíkem za míchání 2 hodiny zahřívá na 90 °C. Reakční směs se ochladí, vyčeří se aktivním uhlím, zfiltruje se a zahustí se na objem 150 ml. Po přidání 250 ml petroletheru (teplota varu 35 až 60 °C) se vyloučená sraženina odfiltruje, promyje se 50 ml petroletheru a 16 hodin se suší ve vakuu nad oxidem fosforečným při teplotě 40 °C. Získá se 9,23 g surového žádaného produktu, který se používá v následujícím reakčním stupni.

-35CZ 278493 B6

E. 7-(fenylmethoxy)1H-1,2,3-triazolo[4,5-d]pyrimidin-5-amin

Do 117 ml (1,13 mol) benzylalkoholu se pod dusíkem během 20 minut přidá po částech 3,7 g (0,162 mol) kovového sodíku. Směs se 90 minut zahřívá na 80 °C, přičemž se všechen kovový sodík rozpustí. Směs se nechá 16 hodin stát při teplotě místnosti,, načež se k ní přidá 9,23 g (0,0541 mol) 7-chlor-lH-l,2,3-triazolo [4,5-d]pyrimidin-5-aminu, reakční směs se 5 hodin zahřívá na 60 °C, pak se ochladí a nechá se 16 hodin stát při teplotě 5 ’C. Vyloučená sraženina se rozpustí přidáním 500 ml vody a směs se extrahuje třikrát vždy 200 ml etheru. Hodnota pH vodné vrstvy se sníží nejprve přidáním koncentrované kyseliny chlorovodíkové na 7,0 a pak přidáním 1N kyseliny chlorovodíkové na 5,5. Vyloučená sraženina se odfiltruje a vysuší se ve vakuu při teplotě místnosti nad oxidem fosforečným. Získá se 8,05 g žádaného produktu.

F. (1α,2β,3a)-3-[5-amino-7-(fenylmethoxy)-3H-l,2,3-triazolo[4,

5-d]-pyrimidin-3-yl]-1,2-cyklobutandimethanol-dibenzoát

K suspenzi 60 % natriumhydridu (78 mg; 1,96 mmol) ve 4 ml dimethylformamidu se pod dusíkem přidá 474 mg (1,96 mmol)

7-(fenylmethoxy)-lH-l,2,3-triazolo[4,5-d]pyrimidin-5-aminu. Po 10 minutách se přidá 880 mg (1,78 mmol) (la,2P,33)-3-[[(4-methylfenyl)sulfonyl]oxy]-l,2-cyklobutandimethanol-dibenzoátu a reakční směs se 24 hodiny zahřívá na 85 °C. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se třikrát trituruje vždy se 30 ml ethylacetátu, směs se zfiltruje, ethylacetátové extrakty se spojí a zahustí se na odparek, který se vyčistí chromatografií na sloupci 100 ml šilikagelu, který se podrobí gradientově eluci od 10 % ethylacetátu v. hexanu do 100 % ethylacetátu. Žádaný produkt se vymyje 50 % ethylacetátem v hexanu. Z příslušných frakcí se získá 205 mg (la, 2β,3a)-3-[5-amino-7-(fenylmethoxy)-3H-1,2,3-triazolo-[4,5-d]pyrimidin-3-yl]-l,2-cyklobutandimethanol-dibenzoátu.

G. (Ια,2β,3a)-3-[5-amino-7-(fenylmethoxy)-3H-1,2,3-triazolo[4,

5-d]pyrimidin-3-yl]-1,2-cyklobutandimethanol

K roztoku 205 mg (0,363 mmol) (Ια,2β,3a)-3-[5-amino-7-fenylmethoxy )-3H-1,2,3-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]-1,2-cyklobutandimethanol-dibenzoátu v 6 ml suchého methanolu se přidá 50 μΐ (0,218 mmol) 25 % methanolického roztoku methoxidu sodného. Směs se 1 hodinu zahřívá pod dusíkem na 40 °C, pak se k ní přidají 2 ml vody a hodnota pH se 1M kyselinou chlorovodíkovou upraví na 7. Po zahuštění reakční směsi ve vakuu se získá žádaný produkt v surovém stavu.

Η. (1α,2β,3á)-5-amino-3-[2,3-bis(hydroxymethyl)cyklobutyl]-3,6-dihydro-7H-l,2,3-triazolo[4,5-d]pyrimidin-7-on

Shora připravený surový (1α,2β,3α)-3-(5-amino-7-(fenylmethoxy )-3H-1,2,3-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl-l,2-cyklobutandimethanol se suspenduje v 1,5 ml methanolu a k suspenzi se přidá 600 μΐ 3N kyseliny chlorovodíkové. Reakční směs se 4 hodiny zahřívá na 45 °C, pak se nechá 16 hodin stát při teplotě místnosti, hodnota pH se 1N hydroxidem draselným zvýší na 7 a výsledný roztok

-36CZ 278493 B6 se zahustí ve vakuu. Zbytek poskytne chromatografií na 34 ml pryskyřice CHP-20P za použití gradientově eluce vody do 70 % vodného acetonitrilu 64mg (Ια,2β,3a)-5-amino-3-[2,3-bis-(hydroxymethyl)cyklobutyl]-3,6-dihydro-7H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-pyrimidin -7-onu, tajícího nad 200 °C.

Analýza: pro ^cio^h14ⁿ6°3·²'^5H2° vypočteno 38,57 % C, 6,15 % H, 26,99 % N, nalezeno 39,17 % C, 4,98 % H, 26,51 % N.

Příklad 9

Potírání virových infekcí v buněčných kulturách in vitro

Provádějí se testy v buněčných kulturách k stanovení koncentrací testovaných sloučenin, schopných preventivně působit proti několika typům virových infekcí. Provedení testů je popsáno níže, jejich výsledky jsou pak uvedeny v tabulce 1.

Pokusné viry se označují následujícími zkratkami:

HSV-1 herpes simplex virus typ 1, kmen Schooler

HSV-2 herpes simplex virus typ 2, kmen 18.6

VZV varicella zoster virus, kmen ELLEN HCMV lidský cytomegalovirus, kmen AD 169 MuLV virus myší leukemie, kmen CAS

Test na potlačení tvorby plaků

Virus (HSV-1, HSV-2, HCMV a VZV) se adsorbuje na buněčnou kulturu (WI-38) v monovrstvách, za použití kultivačních desek se 6 jamkami (Costar, Cambridge, MA), a to 1 hodinu před přidáním udržovacího prostředí, obsahujícího vždy dvojnásobně nižší koncentraci testované látky. Inhibice tvorby plaků se vyhodnocuje na fixovaných a obarvených monovrstvách po čtyřdenní inkubaci při teplotě 37 °C v případě HSV-1 a HSV-2 a po šesti- až sedmidenní inkubaci při teplotě 37 °C v případě HCMV a VZV. Ze zjištěných výsledků a koncentrací testovaných látek se vypočítávají hodnoty ID₅₀, což jsou koncentrace účinných látek, vedoucích k nejméně 50 % redukci vývoje plaků v porovnání s kontrolním pokusem.

Antivirové testy za použití MuLV se provádějí s určitou modifikací, jak popsali Rowe a spol. a Shannon a spol. [W. P. Rowe, W. E. Pugh a J. W. Hartley, Plaque Assay Tecniques for Murine Leukemia Viruses, Virology 42., str. 1136-1139 (1970); W. M. Shannon, R. W. Brockman, L. Westbrook, S. Shaddix a F. M. Shabel, Inhibition of Gross Leukemia Virus-Induced Plaque Formation in XC Cells by 3-DeazauriuJie, J. Nati., Cancer Inst. 52, str. 199 - 205 (1974)]. Na deskách se 6 jamkami se kultivují buňky SC-1 v množství zhruba 2x10 buněk na každou jamku. Po inkubaci, prováděné přes noc při teplotě 37 °C, se buněčné kultury 1 hodinu sensitizují při teplotě 37 °C DEAE-dextranem, propláchnou se a inokulují se MuLV. Ke kulturám se pak znovu přidá růstové prostředí, obsahující testovanou látku v různých koncentracích. Po dalších 3 dnech, kdy se kultury udržují při teplotě 37 ‘C, se

-37CZ 278493 B6 k nim znovu přidá čerstvé prostředí s testovanou látkou a inkubace se provádí další 3 dny při teplotě 37 °C. Kultury se pak promytím zbaví prostředí, ozáří se ultrafialovým zářením a přidá se k nim cca 5x1O⁵ XC-buněk na každou jamku, v prostředí vhodném pro růst buněk, obsahující testovanou látku v příslušné koncentraci. Kultury se pak inkubují další 4 dny, přičemž se k nim druhý den po zavedení XC-buněk znovu přidá růstové prostředí, obsahující testovanoulátku. Poukončení pokusu se kultury propláchnou, obarví se a spočítají se syncytiální plaky.

Výsledky shora popsaných testů jsou shrnuty do následující tabulky 1. Testované látky odpovídají obecnému vzorci

-38CZ 278493 B6

BCMV

MuLV

VZV

0,04-0,08

0-,08-0,24,0-8,0

0,03/0,06

Hodnoty IDjq (pM) pro viry

HSV-2

-39CZ 278493 B6

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (4)

1.. Bis(hydroxymethyl)cyklobutylpuriny a -pyrimidiny vzorce I obecného (I) ve kterém znamená

R^ zbytek vzorce

-nh₂ nebo kde R₂ znamená atom vodíku nebo bromu, a

-40CZ 278493 B6

R₃ představuje atom vodíku, jodu, methylovou skupinu, trifluormethylovou skupinu, ethylovou skupinu,n-propylovou skupinu, 2-fluorethylovou skupinu, 2-chlorethylovou skupinu, nebo skupinu vzorce a farmaceuticky přijatelné soli, odvozené od těchto sloučenin.

2. Způsob výroby bis(hydroxymethyl)cyklobutylpurinů a -pyrimidinů obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se tím, že se sloučenina obecného vzorce II (II)

CH₂O-P ve kterém znamená

P chránící skupinu a

X představuje odštěpitelnou skupinu, uvádí do reakce se sloučeninou obecného vzorce

R-jH ve kterém Rj_ má již shora uvedený význam popřípadě v chráněné formě, případně přítomné chránící skupiny se odštěpí a výsledný produkt obecného vzorce I se popřípadě převede na svoji farmaceuticky přijatelnou sůl.

3. Farmaceutický prostředek s protivirovým účinkem, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahuje přinejmenším jeden bis(hydroxymethyl)cyklobutylpurinový a/nebo -pyrimidinový derivát obecného vzorce I podle nároku 1.

4. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1 pro použití jako léčivo k potírání virových onemocnění.