JPH0421682A - ２―フルオロネプラノシンａおよびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は抗腫瘍作用を有する新規子プラノノンＡ誘導体
およびその製造法に関する。

〔従来の技術〕

ネプラノシン（Ｎｅｐ　１ａｎｏｓ　１ｎ）Ａは、式 で表され、ｉｎ　　ｖｉｔｒｏ細胞毒性および１ｎｖｉ
ｖｏ腹水移植マウス腫瘍に対する増殖抑制作用を有する
（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ　　ｏｆ　　１１ｔｈ　　１ｎ
ｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　　ＣＯｎｇｒｅｓｓ　　ｏｆ
　　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、Ｖ。

１、２．１５５９−１５６１　（１９７９））、文献１
〕が、その活性は抗腫瘍剤として使用するには充分では
ない。また、ネプラノシンＡ誘導体が種々合成されてい
る〔特開昭５７−１６３３８３、同５７−１０２８８９
、同５Ｂ−８５８９８、同５８−１１８５８６、同５Ｂ
−１８３６９１、同５９−２１９２８４、特開平２−４
０３６９）が、ネプラノシンＡより活性の優れた誘導体
は知られていない。

〔発明が解決しようとする課題〕

ネブラノシンＡの細胞毒性作用（抗腫瘍作用）は、６”
位水酸基が細胞のキナーゼの作用によりリン酸化を受け
た後に発現するとされている〔Ｃａｎｃｅｒ　　Ｒｅ５
ｅａｒｃｈ、４６．１０６３−１０６７　（１９８６）
、文献２〕ので、ネプラノシンＡを基質と認識するキナ
ーゼを有しない腫瘍に対しては、ネプラノシンＡは無効
であると考えられる。

また、ネプラノシンＡは、生体内に広く分布するアデノ
シンデアミナーゼの作用を受け、不活性な脱アミノ体（
ネプラノシンＤ）に速やかに変換される（文献１）ため
、ネプラノシンＡの１ｎｖｉｖｏでの抗腫瘍活性が低下
するものと推定される。

従って、アデノシンデアミナーゼにより不活化を受けな
い新規ネプラノシンＡ誘導体の出現が待たれる。

〔課題を解決するための手段〕

そこで、本発明者らは、ネプラノシンＡより優れた抗腫
瘍作用を有する新規ネプラノシンＡ誘導体を見出すべく
種々研究を続けた結果、で表される２−フルオロネプラ
ノシンＡがアデノシンデアミナーゼにより不活化を受け
ず、公知のネプラノシンＡより強い細胞毒性を有するこ
とを知った。

本発明は、上記の知見に基いて完成されたものである。

即ち、本発明は、２−フルオロネブランシンＡまたはそ
の塩およびその製造法を提供するものでる。

上記の塩としては、医薬上許容される非毒性塩である。

このような適当な塩としては、塩酸、硫酸、リン酸など
無機塩との塩、酢酸、プロピオン酸、酒石酸、クエン酸
、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、リンゴ酸、グ
ルタミン酸、アスパラギン酸、メタンスルホン酸などの
有機酸との塩が挙げられるが、上記の酸に限定されるこ
となく、その他の酸との非毒性塩も包含される。

２−フルオロネプラノシンＡは、 式 ％式％ （式中、Ｒ１およびＲ２は各々単独にてまたは一緒にて
水酸基の保ｉｉ基を示し、Ｒ１は水酸基の保護基を示し
、Ｘは反応により脱離される基を示す）で表される化合
物と２−フルオロアデニンを反応させて式 （式中、Ｒ，、Ｒ，およびＲ１は前記と同じ意味を有す
る）で表される化合物を得、次いで水酸基の保護基を脱
離することにより得られる。

上記化合物〔１〕の４位、５位および６位の水酸基とし
ては、核酸化学または炭水化物化学において使用される
公知の保護基が挙げられる。４位および５位の水酸基の
保護基としては、例えばホルミル、アセチル、メトキシ
アセチル、ベンゾイル、ｐ−クロロベンジルオキシアセ
チルなどのアシル基、ｔ−ブチル、ベンジル、トリチル
、αエトキシエチル、α−メトキシイソプロピル、テト
ラヒドロピラニル、メトキシテトラヒドロピラニル、０
−ニトロベンジル、ｔ−ブチルジフェニルシリル基など
が挙げられる。また４位および５位の水酸基は隣接する
酸素原子と共に環状アセタールを形成する形で保護され
る。このような保護基としては、イソプロピリデン、メ
トキシメチレン、メトキシエチリデン、エトキシメチレ
ン、エトキシエチリデン、ベンジリデン、シクロアルキ
リデン基などが挙げられる。これらの保護基は酸触媒の
存在下で相当するアルデヒドまたはケトン化合物を反応
させることにより導入される。

６位の水酸基の保護基としては、例えばホルミル、アセ
チル、クロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフル
オロアセチル、メトキシアセチル、ピバロイル、ベンゾ
イル、β−ベンゾイルプロピオニル、フェノキシアセチ
ル、トリチルオキシアセチルなどのアシル基、トリチル
、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、トリメ
トキシトリチルなどのトリチル基、メトキシメチル基、
ベンジル基などが挙げられる。

上記化合物〔１〕のＸは反応により脱離される基として
定義される。このような基としては、例えばメタンスル
ホニルオキシ、ｐ−）ルエンスルホニルオキシ、ハロゲ
ンなどが挙げられる。上記化合物〔１〕、例えばＸがメ
タンスルホニルオキシ、ｐ−トルエンスルホニルオキシ
基である化合物は、公知物質であって、Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃ
ｈｅｍ９．Ｖｏｌ、５３．Ｎｏ、２４．１９８８．５７
０９〜５７１４に記載の方法により製造される。

本発明で用いられる２−フルオロアデニンは、公知物で
あって、例えばＪ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、Ｖｏｌ
、８２．Ｊａｎ、２０，１９６０゜４６３〜４６８に記
載されている。

上記化合物〔１〕と２−フルオロアデニンとの反応は、
例えば、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド
、ジメチルアセトアミド、アセトニトリルなどの極性溶
媒中Ｋ　ｚ　ＣＯ１等の塩基とクラウンエーテルの触媒
存在下で行わせればよい。化合物〔１〕と２−フルオロ
アデニンの量的割合は理論的にはモル比が１：１である
が、通常は、２−フルオロアデニンの方が２〜３倍過剰
に使用される。反応は通常室温ないし１００℃程度の温
度条件下で行われる。

このようにして得られた化合物〔２〕を反応液から採取
するには、反応溶媒を留去した後、酢酸エチルなどの溶
媒を加え、不溶性物質を濾取して得た濾液を減圧濃縮す
ることにより得られる。さらに精製を必要とする場合に
は、シリカゲルなどの吸着剤を用いてカラムクロマトグ
ラフィーにより分離精製することができる。

次に化合物〔２〕の水酸基の保護基を脱離して目的の２
−フルオロネブラノシンＡを得るのであるが、これらの
水酸基の保護基の脱離は、核酸化学において用いられる
公知の脱離方法により行うことができる。例えば、４′
および５”位の水酸基の保護基がイソプロピリデン基で
あり、６′位の水酸基の保護基がベンジル基である場合
は、ジクロロメタンなどの非プロトン性非極性溶媒中Ｂ
”ｓ　、ＢＢｒ、などのルイス酸を冷却下作用させるこ
とにより脱離される。

このようにして得られた２−フルオロネプラノシンＡを
反応液から採取するには、反応溶媒を留去し、残渣をメ
タノールなどの溶媒に溶し、シリカゲルなどの吸着剤に
吸着させ、クロロホルムメタノール系などの溶出溶媒を
用いるカラムクロマトグラフィーにより分離精製するこ
とがきでる。

かくして得られた２−フルオロネプラノシンＡは、公知
の方法によって適当な塩を形成することができる。

２−フルオロネブラノシンＡをマウスに１０ｍｇ／ｋｇ
腹腔内投与しても死に至らなかった。２フルオロネブラ
ノシンＡは抗腫瘍剤として利用できる。その投与量は目
的とする治療効果、投与方法、治療期間、年令、体重な
どにより決められるが、通常は、患者においては、１日
当たり１０〜５００ｍｇを投与すればよい。投与方法と
しては経口投与または非経口投与で行われるが、非経口
投与の場合、静脈内、点滴静脈内、筋肉内投与などが挙
げられる。

〔発明の効果〕

次に、２−フルオロネプラノシンＡのＬ５１７８Ｙ細胞
に対する細胞増殖抑制作用およびアデノシンデアミナー
ゼに対する抵抗性について述べる。

（１）Ｌ５１７８Ｙ細胞に対する増殖抑制作用〔試験方
法〕 被検物を超音波処理により１０％牛血清を含むＲＰＭ１
１６４０培地に溶解または懸濁して希釈液を調製した。

一方、１．ｌＸｌ０’個／　ｍ　１２の細胞濃度のＬ５
１７８Ｙ細胞を１．８ｍｆづつ試験管に分注し、これに
前記の希釈液０．２ｍｉづつ添加後、密栓して３７℃、
４８時間培養した。

培養終了後、細胞数計測装置（コールタ−・エレクトロ
ニクス社製、コールタ−カウンター）を用いて細胞数を
測定し、増殖率を測定した。

〔試験結果〕

測定した結果を示すと第１表の通りである。

第１表　　Ｌ５１７８Ｙ細胞増殖抑制作用〔試験方法〕 被検物を０．５ｍＭの濃度となるよう０．０５Ｍトリス
−塩酸緩衝液（ｐＨ７，２）に溶解して被検液とした。

一方、アデノシンデアミナーゼ（Ｃａｌｆ　　　Ｉｎｔ
ｅｓｔｉｎｅ、４００Ｕ／ｍＪグリセリン、Ｂｏｅｈｒ
ｉｎｇｅｒ　　１０２０９１）を０．０５Ｍトリス−塩
酸緩衝液（ｐＨ７゜２）で１０倍に希釈してアデノシン
デアミナーゼ（ＡＤ）溶液とした。

上記の被験液０．５ｍｊ！にＡＤ溶液１０μｌを加えて
混合した。これを２５℃水浴中に放置し、０．３０分後
に各々４μｌを分取した後、次の条件による高速液体ク
ロマトグラフィー（ＨＰ　Ｌ　Ｃ）により残存被験物量
を測定した。

ＨＰＬＣ条件 カラム；５ｕｐｅｒｓｐｈｅｒ　　ＲＰ−１８−４溶出
溶媒；１５％メタノール 溶出速度；１．０ｍｆ／分 温度　　；５０℃ 〔試験結果〕 測定した結果を示すと第２表の通りである。

第２表　アデノシンデアミナーゼに対する残存率 上記の結果より、２−フルオロネブラノシンＡのＬ５１
７８Ｙ細胞に対する増殖抑制作用は、公知のネプラノシ
ンＡより３倍以上の活性を有し、しかもアデノシンデア
ミナーゼに対しては３０分後においても分解せず、公知
のネプラノシンＡと比較して極めて高い抵抗性を示して
おり、抗腫瘍側として有用である。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて本発明の製造例を具体的に説明する
が、これにより本発明の製造法を限定するものではない
。

実施例　１ （−）−９−Ｃ（ＩＲ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（ベンジル
オキシ）メチル−４，５−０−イソプロビリデン−２−
シクロペンテン−１−イル〕２−フルオロアデニン ２−フルオロアデニン４２７ｍｇ　（２，７９ｍモル）
　、Ｋｚ　ＣＯ３３８６ｍｇ　（２，７９ｍ−ｒ−ル）
、１６−クラウン−６（３６９ｍｇ、１．４ｍモル）を
アルゴンガス雰囲気下ジメチルホルムアミド３０ｍｌ中
７５℃で攪拌し、この反応液に（Ｉｓ、４Ｒ，５Ｓ）−
（−）３−　（ベンジルオキシ）メチル−４，５−０−
イソプロピリデン−２シクロペンテン−１−オルｐ−）
ルエンスルホネート６００ｍｇ　（１，４ｍモル）を加
え、７５℃で１時間攪拌した。反応後、ジメチルホルム
アミドを減圧上留去し、得られた残渣に酢酸エチル５　
ｍ　Ａを加えた。不溶物を濾別し、濾液を飽和食塩水で
洗浄し、Ｗｈａ　ｔｍａｎ−Ｉ　ＰＳ濾紙に通した後、
減圧濃縮した。残渣をシリカゲル（メルク社製、Ａｒｔ
９３８５．２０ｇ）のフラッシュカラムを用いたカラム
クロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール＝１０
０：１で溶出）により精製し、標題の化合物１７２ｍｇ
（収率３０％）の結晶を得た。ヘキサン−酢酸エチルよ
り再結晶して針状晶を得た。

ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１ｘ　）δ； １．３６．１．４７　（各Ｓ、各３Ｈ，ＣＨ，）、４．
２８　（ｂｓ、２Ｈ，Ｈ−５’　　ａ、ｂ）、４．６３
　（ｄ、Ｊ＝４．４ＨＭ、２Ｈ，０ＣＨ−Ｃ４Ｈ６）、 ４．７３　（ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、ＩＨ，Ｈ−５’　）
、５．４１　　（ｄ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、ＩＨ，、、Ｈ−
４’　）、５．４８　（ｂｓ、ＬＨ，Ｈ−１’　）、５
、　７８　（ｂ　ｓ、　２　Ｈ，、ＮＨｚ　）、７．３
６（ｍ、５Ｈ，フェニル）、 ７．６４　　（ｓ、ＬＨ，Ｈ−８）、 ＦＡＢ　　　Ｍａｓｓ；４１２（ＭＨ”）Ｒｆ；０．４
６　　（クロロホルム−メタノール−１０：１、メルク
社製Ａｒｔ ５７１５プレート） 実施例　２ ２−フルオロネプラノシンＡ 実施例１で得た（−）−９−Ｃ（ＩＲ１４Ｒ１５Ｓ）−
３−（ベンジルオキシ）メチル−４，５−〇−イソプロ
ピリデンー２−シクロペンテン１−イル〕−２−フルオ
ロアデニン１５０ｍｇ（０，３６５ｍモル）をジクロロ
メタン１５ｍｊ！中アルゴンガス雰囲気下−７５℃に冷
却下攪拌しつつＩＭ−ＢＣｊ！、　ヘキサン溶液２゜７
　ｍ　ｌを加えた後、−７５℃で３時間攪拌した。反応
液にメタノール３ｍｌを加えた後、減圧濃縮した。残渣
に再びメタノールを加え、減圧濃縮する操作を３回繰り
返した後、メタノール溶液とし７％アンモニア水でｐＨ
１０に調節した後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲル（
メルク社製、Ａｒｔ９３８５．１５ｇ）のフラッシュカ
ラムを用いたフラソシュカラムクロマトグラフィー（ク
ロロホルム：メタノール：濃アンモニア水＝２００：１
０：０．５→２００　：　４０　：　２で溶出）により
精製して粗製の２−フルオロネプラノシンＡ４１ｍｇを
得た。

これを分取高速液体クロマトグラフィー（カラム：ＬＴ
ＣＨＲＯ３ＯＲＢ　　ＲＰ１８−５．２０×２５０ｍｍ
、溶出溶媒；１０％メタノール）により精製して２３ｍ
ｇの結晶を得た。

’　Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ、ＯＤ）δ； ４．３１　　（ｂｒ、２Ｈ，Ｈ−６’　　ａ、ｂ）、４
．３７　（ｔ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、Ｈ−５’　）、４．６
２　（ｄ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、ＩＨ，Ｈ−４°）５．４０
　（ｂｓ、ＩＨ，Ｈ−１”）、５．８８　（ｄ、Ｊ＝２
Ｈｚ、Ｈ−２°）、８．０２　（ｓ、ＩＨ，Ｈ−８）、 ＦＡＢ　　Ｍａ　ｓ　ｓ　；　２８２　（ＭＨ’″）Ｒ
ｆ＝０．３５　　（クロロホルム−メタノール−水＝６
５：２５：３、メルク 社製、Ａｒｔ５７１５プレー ト） 手続補正書 平成３年３月１９日 ２゜ ３゜ ４゜ ５゜ 平成　２年　特許願　第１２２１７７号発明の名称 ２−フルオロネプラノシンＡおよびその製造法補正をす
る者 事件との関係　特許出願人 住所　静岡県田方郡大仁町三福６３２番地の１名称　東
洋醗造株式会社

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）、２−フルオロネプラノシンＡまたはその塩。
2. （２）、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１およびＲ＿２は各々単独にてまたは一緒
   にて水酸基の保護基を示し、Ｒ＿３は水酸基の保護基を
   示し、Ｘは反応により脱離される基を示す）で表される
   化合物と２−フルオロアデニンを反応させて式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１、Ｒ＿２およびＲ＿３は前記と同じ意味
   を有する）で表される化合物を得、次いで水酸基の保護
   基を脱離することを特徴とする２−フルオロネプラノシ
   ンＡまたはその塩の製造法。