CZ274896A3 - Process for preparing immunoglobulin preparation with a high titer - Google Patents
Process for preparing immunoglobulin preparation with a high titer Download PDFInfo
- Publication number
- CZ274896A3 CZ274896A3 CZ962748A CZ274896A CZ274896A3 CZ 274896 A3 CZ274896 A3 CZ 274896A3 CZ 962748 A CZ962748 A CZ 962748A CZ 274896 A CZ274896 A CZ 274896A CZ 274896 A3 CZ274896 A3 CZ 274896A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- virus
- solution
- plasma
- precipitate
- ligands
- Prior art date
Links
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 title claims abstract description 24
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 title claims abstract description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 32
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 9
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 35
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 18
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims abstract description 14
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 36
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 35
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 29
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 17
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 13
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 12
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 8
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 claims description 7
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical group CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 5
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims description 5
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 5
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 5
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- -1 ICAM Proteins 0.000 claims description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 4
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 3
- 102100025218 B-cell differentiation antigen CD72 Human genes 0.000 claims description 2
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 108010084313 CD58 Antigens Proteins 0.000 claims description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 2
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 claims description 2
- 101000934359 Homo sapiens B-cell differentiation antigen CD72 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000934341 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD5 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 claims description 2
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 2
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 claims description 2
- 102100022339 Integrin alpha-L Human genes 0.000 claims description 2
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 claims description 2
- 102100025244 T-cell surface glycoprotein CD5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 claims description 2
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims description 2
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 claims description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 claims description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 claims description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 2
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 2
- 239000010755 BS 2869 Class G Substances 0.000 claims 1
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 claims 1
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 claims 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 claims 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 claims 1
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 claims 1
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 claims 1
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 claims 1
- 241000702617 Human parvovirus B19 Species 0.000 claims 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 claims 1
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 claims 1
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 claims 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 claims 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 claims 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 28
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 abstract description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 26
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 19
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 16
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 16
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 11
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 10
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 9
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 9
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 9
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 6
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 6
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 4
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 4
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 4
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 108010075016 Ceruloplasmin Proteins 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000002096 anti-tetanic effect Effects 0.000 description 3
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 3
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 3
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001994 activation Methods 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000015961 delipidation Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YIWGJFPJRAEKMK-UHFFFAOYSA-N 1-(2H-benzotriazol-5-yl)-3-methyl-8-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carbonyl]-1,3,8-triazaspiro[4.5]decane-2,4-dione Chemical compound CN1C(=O)N(c2ccc3n[nH]nc3c2)C2(CCN(CC2)C(=O)c2cnc(NCc3cccc(OC(F)(F)F)c3)nc2)C1=O YIWGJFPJRAEKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010032597 Cohn fraction II Proteins 0.000 description 1
- 102000020856 Copper Transport Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091004554 Copper Transport Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000867232 Escherichia coli Heat-stable enterotoxin II Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 208000034767 Hypoproteinaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010021137 Hypovolaemia Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 1
- 235000004789 Rosa xanthina Nutrition 0.000 description 1
- 241000109329 Rosa xanthina Species 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 description 1
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002155 anti-virotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940105778 coagulation factor viii Drugs 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 208000009429 hemophilia B Diseases 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000737598 recombinant Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M sodium thiocyanate Chemical compound [Na+].[S-]C#N VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 229940043517 specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
- C07K16/082—Hepadnaviridae, e.g. hepatitis B virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1267—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria
- C07K16/1282—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria from Clostridium (G)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Virology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Oblast techn i ky
Vynález se týká způsobu získávání imunog1obu1 inů z kterých se při dnes běžné frakcionací plasmy k výrobě kl preparátů nepoužívá, nebo alespoň nepřipadají v úvahu při výrobě imunog1obu1 i nových preparátů.
Dosavadní stav techniky i Η ϋ 0 frakcí, ' i ni ckýcřr-3
CZ)
V lidské krevní plasmě se nachází je než stovka různých proteinů. Některých z nich je možno použít z terapeutických produktů po frakciovaném dárcovské plasmy jako vyčištění. Jsou známy následující příklady: Albumin se nasazuje k vyrovnání onkotického při hypovolemii (sníženém nebo Faktor srážlivosti krve VIII, deficitu při hypoproteinemii nebo zvýšeném množství bílkovin v krvi) případně IX se podává k profylaxi a terapii krvácení při hemofilii A, případně B. Při nemocech s nedostatečnými protilátkami se používají imunogiobuiíny k profylaxi a terapii infekcí i při idiopatické thrombocytové růži. Imunogiobu1 iny od vybraných dárců s vysokými titry specifických imunog1obu1 inů se nasazují jako hyper i munog i o bu 1 i no vé preparáty k profylaxi a k ošetřování specifických infekcí, jako je například hepatitis A nebo B.
Izolace terapeuticky použitelných plasmaproteinů může probíhat například podle známých metod ethanolové frakcionace (Cohn, Am. Chem. Soc., 68, str. 459, 1946, a Kistler P.
Vox Sang., 7, str. 414, 1962). Oběma způsoby je možno izolovat velká množství funkčních plasmaproteinů, jako jsou albumin nebo imunoglobu1 iny, které je možno s klinickým užitkem nasazovat ve vhodných prostředcích. Při zpracování podle těchto metod vznikají však sraženiny případně přebytky, kterých nelze při konvenčním zpracování použít. Složení těchto frakcí je velmi
E. G. a kol., J a Nitschmann H rozdílné.
Zatímco je například lidský apo1 op ipoprotein A-l (Apo A-l) při vysrážení krevní plasmy 19% ethanolem při hodnotě pH 5,8 v přibližně stejných dílech v přebytku a (asi 50 X ρ1asma-ApoA-1) a ve sraženině A (asi 40%), je stejný protein po následujících frakctonačních krocích podle Kistlera a Nitschmanna pak v těch frakcích, kterých nebylo dosud komerčně využito: straženina IV a sraženina B (po přibližně 40 %) (Lerch a kol., Protides of the Biological Fluids, 36, str. 409, 1989).
Podobný obraz rozdělení se jeví také u caeruloplasminu, který je transportním proteinem mědi. Po frakcionaci výchozího materiálu je 20 % ve sraženině IV a 40 % ve sraženině B.
Příkladem plasmového proteinu je transferin, který se při stejném postupu frakcionace hromadí až prakticky do 100 % ve sraženině IV, zatímco albumin lze nalézt až v 80 % ve dnes využívané sraženině C.
Imunog1obu1 iny je možno Kist1er-Nitschmannovou nebo Cohnovou frakcionaci získávat až z 50 až 60 % ve sraženině GG. Zbývajících 30 až 40 % se po těchto postupech rozdělí na sraženinu IV (5 %), sraženinu B (30 %) a filtrát GG (5 %) .
Uvedená procenta mají ilustrovat řádově rozdělení a nemají být považována za omezení; mění se podle použitých podmínek a podle metody.
Tyto příklady ukazují, že částečně značná množství terapeuticky využitelných proteinů se nacházejí ve frakcích sraženiny IV, sraženiny B, přebytku c a přebytku GG nebo v odpovídajících frakcích plasmové frakcionace podle Cohna (frakce OV-1, frakce II+III, přebytek V a přebytek 11-1,2). Z ethických důvodů, ale také vzhledem ke světovému nedostatku lidské krevní plasmy a určitých složek plasmy, je třeba se snažit o zlepšení dosud nepříliš velkého výtěžku imunog1 obu1 inů.
Imunog1obu1 iny mají v boji proti infekcím hlavní úlohu. Buď blokují pro viry specifické, neutralizující protilátky, které za- 3 braňují absorpci virů na buněčné receptory a zabraňují tak infekci, nebo pak opsonizují pro bakterie specifické protilátky, budiče a umožňují tak jejich eliminaci a odeznívání vlivem neutrofilů a makrofágů. Soubory plasmy od několika tisíc dárců obsahují imunoglobuliny velmi rozdílných specifik a imunoglobulinové preparáty z těchto souborů plasmy obsahují v důsledku také měřitelné titry imunog1obu1 inů, zaměřených proti epitopům na virech, bakteriích, toxinech, ale také proti autoanti genům. Jsou proto účinné proti mnoha infekcím a v dalších nejrůznějších pathologických stavech. Za určitých okolností je však nyní žádoucí používat imunoglobul i nový preparát s vysokými titry specifických protilátek, tak zvaný hyper imuong1obu1 inový preparát. Dosud se takové preparáty připravovaly velmi náročně a za cenu vysokých nákladů ze specifických souborů plasmy od dárců se zvýšenými titry specifických protilátek. To je z různých důvodů spojeno s obtížemi. Pokud existují uznávané způsoby očkování, jako v případě preparátu proti hepatitis B, musejí se dárci očkovat, vybrat a darovaná krev se musí odděleně zpracovávat. U mnoha jiných indikací nemůže však dojít k imunizaci dárců z ethických důvodů. Jen vzácně je možno náročným výběrem dárců (například po prodělání specifické nemoci) najít předanou krev s vysokými titry a jejím zpracováním získat příslušný preparát.
Je tedy úkolem vynálezu vyvinout způsob, kterým je možno zpřístupnit a izolovat cenné imunoglobulinové preparáty z uvedených, dosud sotva využitelných frakcí a sraženin vznikajících při průmyslových postupech frakcionace plasmy. Tyto preparáty, odpovídající hyper imuong1obu1 i novému preparátu, musejí být dále zpracovatelné na snášenlivý, zejména i.v. snášenlivý, proti virům bezpečný, tekutý nebo 1yofi 1 izovaný preparát.
Nyní se s překvapením zjistilo, že je možná výroba hyperimuong1obu1 i nových preparátů, popřípadě imuong1obu1 i nových preparátů s vysokými titry rozličnými cestami jedním z dosavadních postupů. Tento nový způsob používá imunog1obu1 inů z obecných sou4 borů plasmy, zlepšuje použitím odpadních” frakcí využití cenné suroviny krevní plasmy a umožňuje dokonce výrobu imuong1obu1 i no vých preparátů s daleko vyšší mi specifickými aktivitami, než jaké vykazují dosavadní preparáty. To znamená, že je možno malým vpraveným objemem a nepatrným množstvím vpravených proteinů, to je odpovídajícím nepatrnému zatížení příjemce, podávat v krátkém čase vysoké dávky specifických imunog1 obu1 inů. Umožňuje to způsob podle vynálezu podáváním specifických imunog1 obu1 inů absorpcína imobi 1 izované antigeny, tedy použitím odpadních frakcí zpracovaných afinitní chromatografii.
Podstata vynálezu
Způsob přípravy imunog1 obu1 i nového preparátu s vysokým, titrem spočívá podle vynálezu v tom, že se provádějí postupně následující operace:
a) frakcionuje se krevní plasma ze souboru plasmy, přičemž se oddělí alespoň jedna průmyslově zhodnotite1ná frakce obsahující v podstatě polyklonální imunoglobulin G, za získání alespoň jedné zbytková frakce,
b) připraví se proteinový roztok z proteinových složek získaných ze zbytkové frakce podle odstavce a) nebo z jejích podfrakcí,
c) výsledný roztok proteinů se podrobuje alespoň jednou afinitní chromatografii s imobi 1 izovanými ligandy alespoň jednoho ligandověho typu, přičemž se specifické proteiny plasmy vážou na ligandy a uvolňují se vázané proteiny plasmy, které se převádějí jako aktivní složky do imunog1 obu1 i nového preparátu s vysokým titrem.
Způsobem podle vynálezu se zpracuje napřed frakce získaná při postupu plasmové f rakc ionace, obzvláště odpadní frace tak, aby jí bylo možno použít v afinitní chromatografi i . Podle původu frakce může toto zpracování vypadat velmi rozdílně. Může se například zkoncentrovat přebytek GG, dialyzovat vůči vhodnému pufru a zfiítrovat. Sraženiny, nebo filtrační koláče (seznam příkladů takových výchozích materiálů obsahují tabulky I a II) musejí být naproti tomu suspendovány, to je například měněním iontové síly, hodnoty pH, teploty, přidáním detergencií a solí, tak, aby imunoglobuliny byly cíleně učiněny rozpustnými. Mohou se například přes noc míchat v rozmezí hodnot pH 3,0 až 9,0 při vodivosti 5 až 20 mS/cm při teplotě 4 ’C a vyčeřit následně odstředěním a/nebo filtrací. Jak supernatanty, tak suspense se mohou v tomto stupni podrobit postupu aktivizace virů systémem rozpouštěd1o/detergent Horowitzovým způsobem (Thrombosis and Haemostasis, 65, str. 1163, 1991), způsobem používajícím methylenovou modř (Mohr a kol. Infusionther. Infusi onsmed. 20, str. 19, 1993) nebo jiným způsobem. Imunog1obu1 iny je možno po suspendování podrobit také předběžnému čištění předběžnou adsorpcí na matrici sloupce nebo zpracováním vhodným pomocným filtračním prostředkem nebo adsorbentem, jako je hydroxid hlinitý, chromatografií přes protein A nebo 6 k obohacení nebo k několika vysrážením běžnými způsoby síranem amonným, polyethylenovému a/nebo ethalonovému vysrážení nebo jejich kombinaci k obohacení, koncentraci nebo ochuzení o rušivé složky.
Ta bu1ka I:
Příklady možných výchozích podle Kistlera a Nitschmanna které připadají v úvahu při plasmových produktů materiálů pocházejících z frakcionace nebo z dalších přípravných operací, výrobě i.v. snášenlivých stabilních
| supernatant | sraženiny | a zbytky |
| supernatant c | sraženina | B |
| supernatant 66 | sraženi na | IV |
| zbytek po | zpracování DEAE | |
| zbytek po | zpracování hydroxidem hlinitým | |
| zbytky po | vyčeřovacích filtracích I, II |
Tabuika II:
Příklady možných výchozích materiálů pocházejících z · frakcíonace podle Cohna v úvahu při duktů nebo z dalších přípravných operací, která připadají výrobě i.v. snášenlivých stabilních plasmových prosupernatanty supernatant V supernatant 11-1,2 sraženiny nebo zbytky sraženina II+III sraženina I V-1 zbytek po zpracování DEAE zbytek po zpracování hydroxidem hlinitým zbytky po vyčeřovacích filtracích I, II a III
| Následují | cí seznam obsahuje | možné 1 i gandy |
| chromatograf i i | podle vynálezu. | |
| Antigenové determinanty z | ||
| Haemophilus influenza b | ||
| Staphy1ococus | aureus | |
| Staphy1ococus | e p i d e r m i s | |
| Staphy1ococus | aga 1ac t i ae | |
| Staphy1ococus | pneumon i ae | |
| Staphylococus | pyogenes |
pro afinitní a další pathogenní bakteriální kmeny
Tetanus Toxin Staphy1ococus aureus a další pathogenní toxi ny toxický šokový toxin bakterie nebo jiné
Hepatitis Hepatitis Hepatitis virus Var i
A v i rus B virus C virus zella Coster
Cytomegalo virus respiračNÍ syncytial virus parvov i rus B 19
Herpes Simplex virus 1 Herpes Simplex virus 2 virus vztekliny a další pathogenní viry
CD2, CD3, CD4 CD5, CD28, CD4O, CD72 ICAM, LFA-1, LFA-3 DNA a další potenciální lidské autoanti geny.
Po vyrobení afinitních gelů imobi 1 izováηím modifikovaných nebo nemodifikovaných ligandů (příklady takových ligandů jsou v uvedeném seznamu) známými způsoby se na ně nanesou připravené supernatanty a suspenze v koncentrované nebo zředěné formě, popřípadě opakovaným průtokem. Popřípadě mohou být různé afinitní gely naplněny postupně stejnou suspensí. Gely se pak promyjí tak, že se v převážné nebo v postačující míře odstraní nespecificky vázající proteiny. K tomu může dojít například zvýšením koncentrace soli, přidáním detergentu a/nebo různou hodnotou pH vymývacího roztoku. Vázané proteiny se od ligandů uvolní, například elucí při nízké nebo vysoké hodnotě pH přidáním, chaotropních solných roztoků jako natriumthiokyanátu nebo chloridu hořečnatého, denaturujících činidel jako SDS a nebo močoviny, rozpouštědel jako ethylenglyko1u, změnou teploty nebo kombinací těchto opatření.
Za jistých okolností může být žádoucí modifikace ligandů, určených k imobilizaci mutagenesí nebo chemickými nebo fyzikálními způsoby tak, že se sice mohou ještě vázat imunog1obu1 iny na epitopy, avšak se sníženou afinitou, takže eluce může probíhat za mírnějších podmínek než s nezměněnými ligandy. Modifikací ligandů má také dojít k usnadnění a zlepšení jejich imobilizace a/nebo k presentaci jejich eitopu. Technické podrobnosti a podklady afinitní chromatografiě jsou všeobecně popsány v literatuře: Cuatrecasas, P. a Anfinsen, C.B.(1971) Ann.Rev.Biochem. 40, str. 259; Kuli, F.C. a Cuatrecasas, P. (1981) J.Immunol. 126, str. 1279; Liebing a kol. (1994) Vox Sang. 67, str. 117.
Specifické uvolněné imunog1obu1 iny se zpracovávají popřípadě dodatečnou filtrací k vyloučení virů na konečné produkty, kterých lze použít s výhodou i.v. a jsou prosté pyrogenů, s protivirovým zajištěním a s přísadou nebo bez přísady stabilizátorů, jako jsou albumin, aminokyseliny nebo uhlovodíky v tekutém nebo 1yofilizovaném stavu a které jsou stabilní. Použít se dá také prostředků, jež umožňují použití i.m. nebo topické použití.
Vynález blíže objasňují, nijak však neomezují, následující příklady praktického provedení.
Příklady provedení_vyná lezu
Přikladl
Připraví se HBsAg-sepharosa tím, že se 5 mg rekombinantního povrchového antigenů viru Hepatitis B (HBsAg, Abbott Diagnostics) imobilizuje kopulací primárních aminoskupin na 1 ml aktivované CH-sepharosy podle předpisu výrobce (Pharmacia Biotech, Uppsala, Švédsko). Připraví se sepharosa placebo tím, že se provede stejný kopulační postup s dalším gelovým alikvotem, avšak bez přidání HBsAg. Hotové gely se uskladní při teplotě 4 ’C v PBS s 0,02 % NaN3.
Přes noc se při teplotě 4 ’C suspenduje na přístroji RotaryMix 70 g sraženiny B z plasmové frakcionace podle Kist1er-Nitschmanna (NB šarže 4 030, 216) ve 210 ml 100mM kyseliny citrónové s hodnotou pH 4,0, 0,25 % Tritonu X-100, 10 mM N-ethylma1ei midu (NEM), 1 mM fenylmethylsu1fony 1f1uoridu (PMSF). Po oddělení nerozpustných složek odstředěním (5000 g, 4 ’C, 10 minut) a filtraci (velikost pórů 1,2 pm) se při neutrální hodnotě pH přidá podle Horowitze a kol. (Thrombosis and Haemostatís, 65, str. 1163, 1991) 1 % tri-n-buty1fosfátu (Merck, Darmstadt, Německo) a 1 % Tritonu X-100 a za stálého míchání se inkubuje 4 hodiny při teplotě 30 ’C. Nato se přes noc provede při teplotě 37 ’C oddělení fází, čirá spodní část se oddělí, zfiltruje se filtrem 0,45 pm a uskladní se při teplotě 4 * C.
130 ml takové NB-suspense se zředí 280 ml PBS (fosfátem pufrovaný solný roztok: 150 mM chloridu sodného, 10 mM natriumfosfátu, hodnota pH 7,1) a čerpá se při teplotě 4 ’C přes placebo a následně přes sloupec HBsAg-sepharosy tak, že po průtoku sloupcem se dostane zpět do zásobní nádrže. Průtočná rychlost je 8 ml/h po dobu 144 hodin. NB-suspense se pak celkově prožene oběma sloupci. Po 90 hodinách se zaplnění přeruší a sloupce se promývají jednotlivě napřed PBS a pak 200 mM chloridu sodného, 50 mM kyseliny tris-chrorovodíkové pH 7,4 až vykáže promývací roztok optickou hustotu při 280 nm (OD28O) menší než 0,01. Po ukončeném zaplnění se opět promyje PBS a 200 mM chl or i du. sodného, 50 mM Tris-HCI pH 7,4. Vázané proteiny se uvolní 5 ml systému 200 mM g1ycin-kyse1 i na chlorovodíková, pH 2,5, okamžitě se zneutra1 izuje a zpracuje. Výsledky jsou uvedeny v tabulce III.
Tabu 1ka 111
Afinitní chromatografie anti-HBsAg s NB-suspensí Gel HBsAg placebo
Ce1kové nap 1 není :
| protein | 1775 mg | 1775 mg |
| 1 gG | 450 mg | 4 50 mg |
| anti-HBs 1gG | 4560 mlU | 4560 mlU |
Průběh: anti-HBs IgG
1140 mlU
1140 mi U
Ε1uát:
I gG anti-HBs 1gG
0,13 mg 5603 mlU
0,08 mg 114 mlU
Příklad 2
Při výchozí Cohnově frakci II+III (místo krevní plasmy jako výchozího materiálu) se provede frakcionace podle Kist1er-Nitschmanna. 70 g sraženiny B (NB šarže 4 044488) z této frakcionace podle Kist1er-Nitschmanna se suspenduje přes noc při teplotě 4 ’C ve 210 ml 100 mM citrónové kyseliny, pH 4,0, 0,25 % Tritonu X-100, 10 mM NEM, 1 mM PMSF v přítroji RotaryMix. Po vyčeření a částečné delipidaci u1traodstředěním (100 000 g, 3 h, 4 ’C, čirá fáze se odejme bočním zavedením trubičky kanylou) se suspense zfiltruje (0,45 um) a uskladní se při teplotě 4 *C.
125 ml této NB-suspense se zředí 375 ml PBS, nastavené na hodnotu pH 7,1 0,1M NaOH, zfiltruje se a obdobně jako podle příkladu 1 se přečerpává rychlosti 14,5 ml/h napřed přes placebo a pak přes gely HBsAg-sepharosy, které byly připraveny obdobně jako podle příkladu 3. Nakonec se gely promyjí odděleně PBS a 200 mM chloridu sodného, 50 mM Tris-HCl s hodnotou pH 7,4. Vázané proteiny se uvolní 5 ml 200 mM systému gy1cin-kyse1 i na chlorovodíková s hodnotou pH 2,5. Výsledky jsou shrnuty v tabulce IV.
Tabulka IV
Afinitní chromatografie anti-HBsAg s NB-suspensř (Cohn II+III) Gel HBsAg placebo
Celkové naplnění:
| protein | 1400 mg | 1400 mg |
| 1 gG | 6 19 mg | 6 19 mg |
| ant i-HBs 1gG | 10 1 U | 10 1 U |
1 U
P r ůbě h: anti-HBs IgG Ε1uát:
gG O,18 mg O,35 mg anti-HBs 1gG 3,3 1U 0,08 1U
Příklad 3
1 supernatantu GG (šarže č. X95.31.286.1) se diafiltruje v PBS a zkoncentruje se na 500 ml. Obdobným způsobem jako podle příkladu 1 se přečerpá koncentrát rychlostí 21 ml/h během H8 hodin přes placebo a přes sloupec HBsAg. Sloupce se promyjí a vázané proteiny se uvolní rovněž obdobně jako podle příkladu 1, provede se však přídavná promývací operace 500 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl s hodnotou pH 7,4. Výsledky obsahuje tabulka V.
Tabul ka V ·.
Afinitni chromatografie anti-HBsAg se supernatantem GG koncentrátu
| NG: průkazní mez | ||||
| Gel | HBsAg | placebo | ||
| Ce 1 kové | naplnění: | |||
| protein | 8800 | mg | 8800 mg | |
| 1 gG | 320 | mg | 320 mg | |
| ant i-HBs | 1 gG | 5000 | ml U | 5000 mlU |
| Průběh: | ||||
| ant i-HBs | lgG | <NG | <NG | |
| E1uát: | ||||
| 1 gG | 0,05 | mg | 0,14 mg | |
| ant i-HBs | 1 gG | 3035 | ml U | 7 mlU |
Příklad 4
Suspenduje a zpracuje se 17,5 g filtračního koláče DEAE (šarže 4.422.006.0) v 52,5 ml suspensního pufru podle příkladu 1. 40 ml suspense se zředí 160 ml PBS a hodnota pH se nastaví na 7,1, načež se zfiltruje. Obdobným způsobem jako podle příkladu 3 se přečerpá suspense rychlostí 21 ml/h během 97 hodin přes pla12 cebo a přes sloupec HBsAg. Sloupce se promyjí a vázané proteiny se uvolní obdobně jako podle příkladu 1. Výsledky obsahuje tabulka VI .
Tabulka VI
Afinitní chromatografie anti-HBsAg se suspensí filtračního koláče DEAE
NG: průkazní mez
Ge 1 HBsAg placebo
Ce1kové naplnění:
| protein | 5 48 mg | 5 48 mg |
| 1 gG | 2 80 mg | 280 mg |
| ant i-HBs 1gG | 400 mlU | 400 mlU |
| Průběh: | ||
| ant i-HBs 1gG | < NG | <NG |
| E 1 uát: | ||
| 1 gG | 0,07 mg | 0,11 mg |
| anti-HBs 1gG | 331 mlU | 14 ml U |
Příklad 5
Připraví se Tetanus toxoid-C-separosa tím, že se 11,5 mg vyčištěného Tetanus toxoidu (TT) imobilizuje kopulací karboxyskupin na 1 ml EAH-sepharosy (Pharmacia Biotech, Uppsala, Švédsko) pomocí 0,1M systému N-ethy1-N'-(3-dimethy1aminopropy 1)karbod i i mid-kyselina chlorovodíková podle předpisu výrobce. Hotové gely se uskladní při teplotě 4 ’C v PBS
Obdobně jako podle příkladu supernatantu a použije se ho k afinitní chromátografi i TT-separosou obdobně jako podle příkladu 2. Naplnění se provede rychlostí 23,5 ml/h během 159 hodin při teplotě 4 eC. Výsledky jsou v tabu 1 ce VI I .
s 0,02 % NaN33 se připraví koncentrát z GG13
Tabulka VII
Afinitní chromatografie anti-tetanového toxoidu s supernatantem
| GG-koncentrátu | ||
| Ge 1 | Tetanus toxoid C | |
| Celkové | naplnění: | |
| protein | 15000 mg | |
| lgG | 3 20 mg | |
| ant i-TT | 1 gG | 35 pg |
| Průběh: | ||
| anti-TT | 1 gG | 1 6 pg |
| Eluát: | ||
| 1 gG | 0,16 mg | |
| ant i-TT | 1 gG | 76 pg |
Příklad 6
Připraví se Tetanus toxoid-N-separosa tím, že se 11,5 mg vyčištěného Tetanus toxoidu (TT) imobilizuje kopulací primárních amínoskupin na 1 ml aktivované CH-sepharosy podle předpisu výrobce (Pharmacia Biotech, Uppsala, Švédsko). Připraví se placeboseparosa tím, že se stejný koputační postup provede s dalším gelovým alikvotem, avšak bez přísady TT. Hotové gely se uskladní při teplotě 4 ‘C v PBS s 0,02 % NaN3.
Obdobně jako podle příkladu 2 se suspenduje sraženina. Po filtraci (1,2 pm) se 115 ml této suspense zředí 200 ml PBS, hodnota pH se nastaví na 7,1 a rychlostí 3,5 ml/h se během 165 hodin přečerpá napřed přes ρ1acebo-separosu tak, že po okamžitě následujícím průtoku sloupcem TT-N-sepharosy se dostane zpět do zásobní nádrže. Sloupce se promývají jednotlivě napřed PBS a pak 0,5M chloridu sodného, 50 mM Tris-HCl pH 7,1 až vykáže promývací roztok optickou hustotu při 280 nm (OD2 80) menší než 0,01. Výsledky jsou v tabulce VIII.
T a b u 1 k a v 111
Afínitní chromatografie anti-teta nového toxoidu se suspensí NB
| Ge 1 | Tetanus | toxoid N | placebo |
| Celkové naplnění: protein | 1334 | mg | 1334 mg |
| 1 gG | 333 | mg | 333 mg |
| anti-TT lgG | 0, 509 | mg | 0,509 mg |
| Průběh: anti-TT 1gG | 0,213 | mg | 0,213 mg |
| E1uát: lgG | 0, 35 | mg | 0,004 mg |
| anti-TT lgG | 0,09 1 | mg | 0, 003 mg |
| Příklad 7 |
Obdobně jako podle příkladu 2 se suspenduje sraženina B. Po filtraci (1,2 pm) se 115 ml této suspense zředí 200 ml PBS, hod5 ml/h se během 165 hodin tak, že po okamžitě náslese dostaňezpět do zásobní napřed PBS a pak O,5M až nota pH se nastaví na 7,1 a rychlostí přečerpá napřed přes p1acebo-separosu dujícím průtoku sloupcem TT-sepharosy nádrže. Sloupce se promývají jednotlivě chloridu sodného, 50 mM Tris-HCi pH 7,1 vykáže promývací roztok optickou hustotu při 280 nm (OD28O) menší než 0,01. Výsledky jsou v tabulce IX.
Tabulka IX
Afínitní chromatografie anti-HBsAg a anti-tetánového toxoidu se suspensí NB
HBs Ag
Ge 1
Celkové naplnění
Tetanus toxoid
| protein | 1 334 | mg | 133 4 | mg |
| 1 gG | 333 | mg | 333 | mg |
| ant i-HBsAg | 945 | ml U | 945 | m t U |
| anti-TT lgG | 0,509 | mg | 0,509 | mg |
| Průběh: | ||||
| ant i-HBsAg | 535 | ml U | 536 | ml U |
| anti-TT 1 gG | 0, 255 | mg | 0,265 | mg |
| Eluát: 1 gG | 0, 13 | mg | 0,25 | mg |
| anti-HBsAg anti-TT lgG | 1 152 | ml U | 0,18 | mg |
| Příklad 8 | ||||
| 15 kg sraženiny B | z frakcí podle | Kistler-Nitschn |
č. 5.043.303) se suspenduje přes noc při teplotě 4 *C vibračním mísičem ve 45 litrech 0,1 M kyseliny citrónové s hodnotou pH 4,0, s 0,25 % Tritonu X-100, 10 mM NEM, 1 mM PMSF. Po oddělení nerozpustných složek přidáním pomocných filtračních činidel a po filtraci (velikost pórů 1,2 pm) se přidá při neutrální hodnotě pH k delipidaci a k inaktivaci virů podle Horowitze 1 % tri-n-butylfosfátu a 1 % Tritonu X-100 a směs se inkubuje za míchání přes noc při teplotě 37 ’C. Nato se přes noc při teplotě 37 *C fáze oddělí, čirý podklad se odčerpá, zfiltruje se přes filtr 0,45 μιη a uskladní se při teplotě 4 ’ C.
Hodnota pH 40 litrů této NB suspense se upraví louhem sodným na 7,1 a při teplotě 4 ’C se přečerpá přes HBsAg a přes Affiprepsloupec Tetanus toxoidu tak, že po průtoku sloupci se suspense vrátí do zásobní nádrže. Affiprep-s1oupce (50x13 mm) se připraví kopulací 250 mg rekombinantních HBsAg případně Tetanus toxoidu na 250 ml Affiprep-ge! (BioRad Lab. Inc. Hercules CA 94547). Průtočná rychlost je 6 1/h po dobu 62 hodin. NS-suspense se tak celkově přečerpá třikrát přes sloupce. Po ukončeném zaplnění se sloupce promývají jednotlivě napřed PBS a pak 500 mM chloridu sodného, 50 mM Tris-HCl pH 7,4 až vykáže promývací roztok optickou hustotu při 280 nm (OD280) menší než 0,01. Vázané proteiny se uvolní systémem 200 mM giycin-kyse1 i na chlorovodíková, pH 2,5, a hodnota pH
Výsledky jsou uvedeny v tabulstabilní preparáty se provede frakcí se okamžitě nastaví na 5,2 ce X. Příprava imunog1 obuli nu na spojením frakcí Obsahujících lgG, diařiltrací a koncentrací se 20 mM chloridu sodného na roztoky 100 1U/ml, případně 2,5 mg antiTT-lgG/ml. Přidá se 10 % sacharosy a roztoky v jednotkách po 200 1 U, případně 5 mg anti-TT-lgG se lyofilizují.
P ř í k 1 a d 9
V 500 ml vody se suspenduje 50 g sraženiny IV z plasmové frakcionace podle Kist1er-Nitschmanna. Kyselinou citrónovou se upraví hodnota pH na 5,0 a vodivost se nastaví chloridem sodným na 13 mS. Po míchání přes noc při teplotě 4 ’C se dosáhne odstředěním během 30 minut při 30 000 g a 4 °C vyčeření a částečné delipidace. Zjistí se obsah rozpuštěných proteinů, lgM, lgA, lgG, transferinu a caeru1 op 1asminu v suspensi. Obsahy jsou v tabulce XI.
Tabulka X A f i n i t η í se
Ge l
Ce1kové nap lnění :
prote i n lgG ant i-HBs1gG anti-TT lgG P r ůbě h: ant i-HBs1gG anti-TT 1gG E1uá t:
gG ant i-HBslgG anti-TT lgG chromatograf i e suspensi
NB ant i-HBsAg a
HBsAg
448 g 204 g 1120 lU 3 17 mg
1 1 U
172 mg
39,8 mg 1368 1U anti-tetanového toxoidu
Tetanus toxoid
448 g 204 g 1120 1U 317 mg
1 1 U
2 mg
1 mg mg
Tabulka XI
Suspense ze sraženiny IV (všechny údaje v mg/ml)
Proteiny celkem lgM 1gA IgG Transferin Caeruloplasmin 5,5 0,063 0,628 0,488 2,582 0,09
Příklad 10 g sraženiny B z frakcí podle Ki st 1 er-Nitschmanna (šarže č. 4.030.204.0) se míchá přes noc ve 100 mM citrónové kyseliny při různých hodnotách pH při teplotě 4 *C, vyčeří se ultraodstředěním při 100 000 g a 4 eC v průběhu tří hodin a částečně se delipiduje. Čirá střední fáze se odebere a stanoví se její obsah rozpuštěných proteinů lgM, lgA, IgG, transferinu a caeruíoplasminu (tabulka XII).
| Tabulka XII | |||||||
| Suspense ze | sraženiny | B (všechny údaje v mg/ml); | <NG: pod mezí | ||||
| průkaznost i | |||||||
| Proteiny | 1 gM | 1 gA | 1 gG | Transferi | n Caeruloplasmin | ||
| celkem pH 4,0 4,9 | 1,2 | 1,3 | 1,9 | <NG | 0, 06 | ||
| pH 5,0 6,1 | 1,2 | 1,0 | 2, 1 | <NG | <NG | ||
| Stanoví | se titr | 1gG vůč i | určitým virovým (tabulka XIII) a | ||||
| bakteriálním | (tabulka | XIV) antigenům | a porovná | se s | titry výchozí | ||
| plasmy a existujících | imunog1obu1 i nových preparátů. | ||||||
| Tabulka XIII | |||||||
| Prot i vi rové | 1 gG v | souborech plasmy, v | SAGL a v | NB-suspe ns í ch | |||
| p1asma | p1asma | SAGL | NB | NB | |||
| 102 | 1 03 | pH 4,0 | pH 5 | ,0 | |||
| An t-HBs Ag | 0,02 | 0, 05 | 0,01 | 0, 05 | 0,05 | lU/mg IgG | |
| Anti-CMV | 0,28 | 0, 1 6 | 0,30 | 0, 52 | 0,34 | PElE/mg IgG | |
| Anti-VZV | 0,08 | 0,09 | n. b. | 0,21 | 0, 10 | lU/mg IgG |
Ant i-spa1ničkyO,9 0,20
Anti-HSV1 1037 n.b.
O, 02 n. b
1 n *· t ' 'S
1 7
0,81 lU/mg IgG 749 AU/mg IgG
Plasma 102/103:plas mo vé soubory; SAGL:Sandog1obu1 i η; NB pH 4,0/ 5,0; suspense ze sraženiny B při pH 4,0, resp. 5,0; IU: mezinárodní jednotky; PEIE: jednotky institutu Paul Ehrlicha; AU; arbitrální jednotky; n.b.: nestanoveno
Tabulka XIV
| Protibakteriá1 ní IgG | v souborech p 1 a srna 103 | p 1 asmy, SAGL | v SAGL a v NB- | s us pe ns í c h 0 | |||
| plasma 102 | NB 4A | NB 14 pH 4, | |||||
| anti-HIBOAg | 162 | 286 | 436 | 100 | 283 | úg/g | 1 gG |
| anti-TT | 1855 | 4 159 | 2740 | 2928 | 2923 | pg/g | 1 gG |
| anti-SEB | 4 12 | 689 | 783 | 9 1 8 | 670 | AU/g | IgG |
Plasma 102/103: plasmové soubory; SAGL: Sandog1obu1 inR; NB 4A suspense ze sraženiny B při pH 4,0; NB 14 pH 4,0: suspense ze sraženiny B při pH 4,0 s aktivizací viru; HIBOAg: o 1 igosacharidový antigen Haemophilius influenza Β; TT: Tetanus Toxoid SEB; Staphylococcus enterotoxin B; AU: arbitrální jednotky.
Průmyslová využitelnost
Způsob přípravy imunog1obu1 i nového preparátu s vysokým titrem z frakcí, kterých se při dnes běžné frakcionaci plasmy k výrobě klinických preparátů nepoužívá, nebo které alespoň nepřipadají v úvahu při výrobě imunog1obu1 i nových preparátů.
tr iyw-% 35 .IX L o 0153a i H G 0 5
Způsob přípravy imunog1obu1 i nového preparátu s vysokým tíť-ít t í m, že se provádějí postup-
Claims (14)
- PATENTOVE rem, vyznačující se ně následující operace:a) frakcionuje se krevní plasma ze souboru plasmy, přičemž se oddělí alespoň jedna průmyslově zhodnotite1ná frakce obsahující v podstatě polyklonální imunog1obulin G, za získání alespoň jedné zbytková frakce,b) připraví se proteinový roztok z proteinových složek získaných ze zbytkové frakce podle odstavce a) nebo z jejích podfrakcí,c) výsledný roztok proteinů se podrobuje alespoň jednou afinitní s imobi 1 izovanými ligandy alespoň jednoho lipřičemž se specifické proteiny plasmy vážou na ligandy a uvolňují se vázané proteiny plasmy, které se převádějí jako aktivní složky do imunog1 obu1 i nového preparátu s vysokým titrem.chromatograf i i gandového typu,
- 2. Způsob podle nároku 1, v y z n a č u j í c í se tím, že se frakcionace krevní plasmy provádí v průmyslovém měřítku, přičemž je zbytková frakce frakcí odpadní.
- 3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se t í m , že zbytkovou frakcí podle stupně a) je sraženina nebo filtrační koláč a proteinové složky se uvádějí do roztoku, přičemž se sraženina nebo filtrační koláč zpracovává vodným pufrovým roztokem s iontovou silou <5M a s hodnotou pH 3,0 až 9,0 za vytváření roztoku nebo suspense.
- 4. Způsob podle nároku 3, v y z n a č u j í c í se tím, že pufrovým roztokem je fosfátový pufr, pufr Tris-HCl nebo citrátový pufr.
- 5. Způsob podle nároku 3 nebo 4, v y z n a č u j í c í se t í m, že pufrový roztok obsahuje detergent, alespoň jeden pro20 teázový zpomalovač a/nebo sůl.
- 6. Způsob podle nároku 3 až 5, v y z n a č u j í c í se t í m, že roztok nebo suspense se filtruje nebo předběžně zpracovává adsorbentem jako je hydroxid hlinitý nebo adsorbentem, který obsahuje skupiny DEAE.
- 7. Způsob podle nároku 3 až 5, vyznačující se t í m , že roztok nebo suspense se za vytváření sraženiny směšuje se síranem amonným, po 1yethy1eng1yko1em nebo ethanolem a kapalina nebo sraženina se dále zpracovává.
- 8. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se t í m, že zbytkovou frakcí podle odstavce a) je kapalina a roztok proteinů se vyrábí filtrací a koncentrací, například diafiltrací.
- 9. Způsob podle nároku 8, v y z n a č u j í c í se tím, že se kapalina předem filtruje nebo se předem zpracovává adsorbentem, jako je hydroxid hlinitý nebo s adsorbentem, který obsahuje skupiny DEAE.
- 10. Způsob podle nároku 1 až 9, v y z n a č u j í c í se t í m , že imobi 1 izovanými ligandy jsou přírodní nebo rekombinantní virové, bakteriové nebo buněčné antigeny.
- 11. Způsob podle nároku 10, vyznačující se t í m, že ligandy jsou voleny ze souboru antigenových determinantů Haemophilus influenza b, Staphylococus aureus, Staphylococus epidermis, Staphy1ococus agalactiae, Staphylococus pneumoniae, Staphy1ococus pyogenes, Tetanus toxinu, Staphylococus aureus toxický šokový toxin. Hepatitis A virus. Hepatitis B virus, Hepatitis C virus, virus Varizella Zoster, Cytomegalo virus, respiračni virus syncytial, Parvovirus B 19, Herpes Simplex virus 1, Herpes Simplex virus 2, virus vztekliny, CD2, CD3, CD4, CD5, CD28, CD40, CD72, ICAM, LFA-1, LFA-3, DNA a fosfolipidů.
- 12. Způso-b podle nároku 10 nebo 11, vyznačující se t í m , že ligandy se modifikují mutagenesí nebo chemickými nebo fyzikálními způsoby.
13 . Způsob podle nároku 1 až 12, vyznačují c í s e t í m , že získaný vysokotitrový preparát imunog1obu1 i nu sestává pouze z imunog1obu1 inů třídy G nebo A nebo M nebo z jejich libovolné kombinace. 14. Způsob podle nároku 1 až 13, vyznačuj í c í se t í m, že se získaný vysokotitrový preparát imunoglobu1 i nu podrobuje virové aktivaci a popřípadě se stabilizuje, přičemž se přidává stabilizátor jako albumin, aminokyseliny nebo uhlohydráty a/ nebo se produkt lyofilizuje. - 15. Způsob podle nároku 1 až 13, vyznačující· se t í m, že se získaný vysokotitrový preparát imunog1 obu1 i nu převádí na farmaceuticky přijatelný produkt, například na preparát podávaný například i.v., i.m. nebo topicky.
- 16. Způsob výroby imunoglobu1 i nového preparátu s vysokým titrem, vyznačující se t í m, že se provádějí postupně následující operace:a) připravuje se proteinový roztok z proteinových složek zbytkové frakce po frakcionaci krevní plasmy nebo jejích podfrakcí,b) výsledný roztok proteinů se podrobuje alespoň jednou afinitní chromatografi i s imobilizovanými ligandy alespoň jednoho ligandového typu, přičemž se specifické proteiny plasmy vážou na ligandy a vázané proteiny plasmy se převádějí jako aktivní složky do imunog1obu1 i nového preparátu s vysokým titrem.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP95810596A EP0764658B1 (de) | 1995-09-22 | 1995-09-22 | Verfahren zur Gewinnung von Immunglobulinen aus Fraktionen, die bei der Fraktionierung von menschlichem Blutplasma entstehen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ274896A3 true CZ274896A3 (en) | 1997-04-16 |
| CZ286885B6 CZ286885B6 (en) | 2000-07-12 |
Family
ID=8221797
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19962748A CZ286885B6 (en) | 1995-09-22 | 1996-09-18 | Process for preparing immunoglobulin preparation with high titer |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0764658B1 (cs) |
| JP (1) | JP2952572B2 (cs) |
| KR (1) | KR100236762B1 (cs) |
| CN (1) | CN1089609C (cs) |
| AT (1) | ATE211486T1 (cs) |
| AU (1) | AU715427B2 (cs) |
| BR (1) | BR9603826A (cs) |
| CA (1) | CA2185617A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ286885B6 (cs) |
| DE (1) | DE59509979D1 (cs) |
| DK (1) | DK0764658T3 (cs) |
| ES (1) | ES2170788T3 (cs) |
| FI (1) | FI963719A (cs) |
| HU (1) | HUP9602570A3 (cs) |
| MX (1) | MX9604256A (cs) |
| NO (1) | NO963952L (cs) |
| NZ (1) | NZ299394A (cs) |
| PL (1) | PL316126A1 (cs) |
| PT (1) | PT764658E (cs) |
| RO (1) | RO117921B1 (cs) |
| RU (1) | RU2157240C2 (cs) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1293119B1 (it) * | 1997-06-12 | 1999-02-11 | Mini Ricerca Scient Tecnolog | Processo per la separazione di immunoglobuline specifiche da plasma standard e loro utilizzo per trattamenti terapeutici |
| PT911037E (pt) * | 1997-10-23 | 2002-12-31 | Mitsubishi Pharma Corp | Preparacao de imunoglobulina armazenavel a temperatura ambiente para injeccao intravenosa |
| MX2007002085A (es) * | 2004-08-20 | 2007-07-19 | Prometic Biosciences Ltd | Esquemas de aislamiento y purificacion consecutivos de proteinas mediante cromatografia de afinidad. |
| EP2233499A1 (en) * | 2009-03-26 | 2010-09-29 | CSL Behring AG | Antibody composition with altered Fab sialylation |
| WO2010148117A1 (en) * | 2009-06-17 | 2010-12-23 | Scantibodies Laboratory, Inc. | Therapeutic and diagnostic affinity purified specific polyclonal antibodies |
| ITRM20090558A1 (it) * | 2009-11-03 | 2011-05-04 | Michele Pitaro | Procedimento per la produzione di immunoglobuline estratte da plasma umano ad uso terapeutico neutralizzanti il virus di epstein barr e farmaco contenente dette immunoglobuline |
| GB201006753D0 (en) | 2010-04-22 | 2010-06-09 | Biotest Ag | Process for preparing an immunolobulin composition |
| EA201390156A1 (ru) * | 2010-07-23 | 2014-01-30 | Бакстер Интернэшнл Инк. | ПРОИЗВОДСТВО ИНТЕР-АЛЬФА-ИНГИБИТОРНЫХ БЕЛКОВ (IaIp) ИЗ ПЛАЗМЫ |
| ES2531459B1 (es) * | 2013-06-10 | 2015-12-28 | Antonio VILA SANJURJO | Método para la separación física de "traductomas" convolucionados |
| FR3018450B1 (fr) * | 2014-03-11 | 2016-04-15 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation de proteines plasmatiques humaines |
| KR20150115639A (ko) * | 2014-04-04 | 2015-10-14 | 전숙영 | 치료용 면역글로불린 제제 제조에 사용되는 산성 완충액, 이를 이용한 치료용 면역글로불린 제제 제조방법 및 이 제조방법으로 제조된 치료용 면역글로불린 제제 |
| GB201413227D0 (en) * | 2014-07-25 | 2014-09-10 | Bioproducts Lab Ltd | Process |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4232004A (en) * | 1977-09-21 | 1980-11-04 | American National Red Cross | Antibody-specific solid phase immunoadsorbent, preparation thereof, and antibody purification therewith |
| DE3516119A1 (de) * | 1985-05-04 | 1986-11-06 | Biotest Pharma GmbH, 6000 Frankfurt | Polyvalentes hyperimmunglobulin-praeparat |
| IL90281A (en) * | 1988-06-06 | 1994-10-07 | Miles Inc | Preparations containing MGI antibodies |
-
1995
- 1995-09-22 DE DE59509979T patent/DE59509979D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-22 DK DK95810596T patent/DK0764658T3/da active
- 1995-09-22 AT AT95810596T patent/ATE211486T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-09-22 PT PT95810596T patent/PT764658E/pt unknown
- 1995-09-22 ES ES95810596T patent/ES2170788T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-22 EP EP95810596A patent/EP0764658B1/de not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-09-16 CA CA002185617A patent/CA2185617A1/en not_active Abandoned
- 1996-09-16 NZ NZ299394A patent/NZ299394A/en unknown
- 1996-09-18 KR KR1019960040589A patent/KR100236762B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-09-18 CZ CZ19962748A patent/CZ286885B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-09-18 PL PL96316126A patent/PL316126A1/xx unknown
- 1996-09-19 HU HU9602570A patent/HUP9602570A3/hu unknown
- 1996-09-19 RO RO96-01839A patent/RO117921B1/ro unknown
- 1996-09-19 AU AU65725/96A patent/AU715427B2/en not_active Ceased
- 1996-09-19 FI FI963719A patent/FI963719A/fi unknown
- 1996-09-20 NO NO963952A patent/NO963952L/no unknown
- 1996-09-20 BR BR9603826A patent/BR9603826A/pt active Search and Examination
- 1996-09-21 CN CN96122771A patent/CN1089609C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-09-23 RU RU96118916/14A patent/RU2157240C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1996-09-23 MX MX9604256A patent/MX9604256A/es unknown
- 1996-09-24 JP JP8251895A patent/JP2952572B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2170788T3 (es) | 2002-08-16 |
| JP2952572B2 (ja) | 1999-09-27 |
| BR9603826A (pt) | 1998-06-02 |
| RO117921B1 (ro) | 2002-09-30 |
| HU9602570D0 (en) | 1996-11-28 |
| NO963952L (no) | 1997-03-24 |
| AU6572596A (en) | 1997-04-10 |
| KR100236762B1 (ko) | 2000-01-15 |
| HUP9602570A2 (en) | 1997-08-28 |
| DE59509979D1 (de) | 2002-02-07 |
| KR970015745A (ko) | 1997-04-28 |
| AU715427B2 (en) | 2000-02-03 |
| EP0764658B1 (de) | 2002-01-02 |
| JPH09124508A (ja) | 1997-05-13 |
| PL316126A1 (en) | 1997-04-01 |
| FI963719A0 (fi) | 1996-09-19 |
| CN1089609C (zh) | 2002-08-28 |
| NO963952D0 (no) | 1996-09-20 |
| CZ286885B6 (en) | 2000-07-12 |
| HUP9602570A3 (en) | 1998-01-28 |
| RU2157240C2 (ru) | 2000-10-10 |
| FI963719A (fi) | 1997-03-23 |
| NZ299394A (en) | 1997-12-19 |
| CN1153063A (zh) | 1997-07-02 |
| MX9604256A (es) | 1998-04-30 |
| CA2185617A1 (en) | 1997-03-23 |
| ATE211486T1 (de) | 2002-01-15 |
| EP0764658A1 (de) | 1997-03-26 |
| DK0764658T3 (da) | 2002-04-22 |
| PT764658E (pt) | 2002-06-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5886154A (en) | Chromatographic method for high yield purification and viral inactivation of antibodies | |
| KR100501263B1 (ko) | 정맥 주사용 면역글로불린의 제조 방법 및 그 외의 면역글로불린 제품 | |
| US7186410B2 (en) | Method for preparing human immunoglobulin concentrates for therapeutic use | |
| CZ287186B6 (en) | Process for preparing concentrate free of aggregation of immunoglobulins G | |
| KR20070009995A (ko) | 바이러스 안전성 면역글로불린을 제조하는 방법 | |
| KR101917197B1 (ko) | 면역글로불린의 정제방법 | |
| EP2822965B1 (en) | Process for enriching iga | |
| KR102382662B1 (ko) | 방법 | |
| TWI579301B (zh) | 多價免疫球蛋白之濃縮物之製造方法 | |
| KR20230136582A (ko) | 개선된 면역글로불린의 정제방법 | |
| CZ274896A3 (en) | Process for preparing immunoglobulin preparation with a high titer | |
| JPH07206708A (ja) | 抗ｄ−免疫グロブリンｇの濃縮物の製造方法、それを含む製薬的調剤 | |
| CN107849086B (zh) | 用于制备源自血浆的乙型肝炎免疫球蛋白的方法 | |
| MXPA96004256A (en) | Method of recovery of immunoglobulin from fractions produced during the fractionation of plasma sanguineo hum | |
| US7041798B1 (en) | Method for the chromatographic fractionation of plasma or serum, preparations, so obtained, and their use | |
| TW388763B (en) | Method of producing a hyper immunoglobulin preparation from fractions produced druing fractionation of human blood plasma |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20040918 |