CZ258598A3 - Inhibitor neovaskularizace - Google Patents

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká farmaceutické kompozice, která je použitelná jako inhibitor neovaskularizace.

Zejména léčení nemocí jako aktivní antranilovou podle vzorce se vynález týká činidla pro prevenci nebo spojených s neovaskularizací, které obsahuje přísadu kyselinu N-(3,4-dimetoxy cinnamoyl) ch₃o.

CH₃O'

CONH.

HOOC (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli.

Jako nemoci spojené s neovaskularizací je možno uvést různé nemoci, které se podílejí na neovaskularizací jako jedna z jejích příčin, například diabetická retinopatie, stařecká diskoidní makulární degenerace, dětská retinopatie, retinopatie při abnormalitě krvinek, okluze cév sítnice, neovaskularizace po transplantaci rohovky nebo po operaci šedého zákalu, neovaskulární glaukom, rubeosis iridis, reumatická artritida, psoriáza, scleredema, nádory, nadbytek kapilárních krevních vlásečnic při aterbskleróze adventitia a neovaskularizace rohovky zapříčiněná dlouhodobým nošením kontaktních čoček.

Dosavadní stav techniky

Neovaskularizace obecně je jev doprovázející degradaci • φφ φφ ΦΦΦ· φ φφφφ φ φ φ · φ φ · φ φφ φ φ φφ

ΦΦΦ· · · · · φ · φφφ φ φ φ φφφφ φφφ φ ·· φφ φφ φφ proteolytickými enzymy, chemotaxi buněk endotelu, vytváření vlásečnic endotelu a reorganizací krevních neovaskularizaci dochází fyziologicky při a při růstu placenty, a patologicky při výše základu membrány a proliferaci růstu diferenciaci vlásečnic. K luteinizaci buněk popsaných nemocích. Například při retinopatii degraduje stávající tkáň sítnice, ležící mezi základní membránou kolem vlásečnic v sítnici a sklivcem. Pak migrují buňky endotelu stávajících vlásečnic z míst degradované tkáně sítnice a buňky endotelu proliferují pro zaplnění mezer mezi buňkami endotelu, a buňky endotelu migrující do vitreoretina se reorganizují do nových vlásečnic, což vede k neovaskularizaci.

Neovaskularizace souvisí s různými nemocemi, například hraje velkou roli v procesu vzniku a rozvoje výše uvedených nemocí. Byly intenzivně rozvíjeny rozsáhlé výzkumy pro nalezení sloučenin, majících inhibiční aktivitu při neovaskularizaci, pro prevenci a léčení těchto nemocí. Ačkoliv jsou známy například inhibitory neovaskularizace jako například analogy fumagillinu, což jsou mikrobiální metabolity mající inhibiční aktivitu při proliferaci růstu buněk endotelu, tetracyklinová antibiotika, která mohou inhibovat aktivitu kolagenázy,

D-gluko-galaktansulfát, jenž angiogenních faktorů receptorům, neexistuje a mikroorganizmy upravený interferuje s vazbou s heparinovou» vazbou k jejich klinicky uspokojivé léčivo. Kromě toho neexistuje postup dostatečný pro léčení výše uvedených nemocí. Zvláště jestliže pacient s diabetickou retinopatii nepodstoupí chirurgický zákrok, nelze pozorovat involuci nově vytvořených vlásečnic a ztráta vidění zapříčiněná dodávkou krve z nově vytvořených vlásečnic se stává problémem. Je tedy velmi žádoucí vývoj léčiva s vynikajícím • · ΦΦΦΦ ΦΦΦΦ

9 9 9 9 9 9 9 9 9 •99 9 9 99 9 9 99

ΦΦΦΦ Φ · Φ φ Φ Φ ΦΦΦ φ Φ Φ Φ ΦΦΦΦ ΦΦΦ

ΦΦΦ Φ ΦΦ ΦΦ ΦΦ ΦΦ účinkem na neovaskularizaci.

Kyselina N-(3,4-dimetoxycinnamoyl)antranilová (generický název Tranilast) podle vzorce (I) podle předloženého vynálezu má široké použiti jako léčivo pro léčení alergických nemocí, jako bronchiálního astmatu, alergické rhinitity, konjuktivitidy, a a hypertrofické jizvy.

atopické dermatitidy a alergické kožních nemocí jako keloidní

Je například známo, že Tranilast má inhibiční aktivitu proti uvolňování chemických mediátorů způsobenému alergickou reakcí, nadměrné akumulaci kolagenu fibroplastovými buňkami v kožní tkáni a nadměrné proliferaci buněk hladkého svalu v koronárních artériích.

Žádným způsobem však nebylo popsáno, že Tranilast potlačuje proliferaci a chemotaxi buněk mikrovaskulárního endotelu a vytváření vlásečnic z buněk mikrovaskulárního endotelu, a není nijak známo, že je Tranilast použitelný jako inhibitor neovaskularizace.

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká inhibitoru neovaskularizace, který obsahuje jako aktivní přísadu kyselinu N-(3,4-dimetoxy cinnamoyl) antranilovou podle vzorce

CH₃O.

ch₃oCONH·

HOOC (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli.

• · ·· <· ·· ftft ·· · · · · « ···· ··» ···· · · ftt ···· · · 9 9 9 9 ···· ·

9 9 9 9 9 9 9 9

999 9 99 99 99 99

Předložený vynález se týká způsobu prevence nebo léčení nemocí spojených s neovaskularizací, který zahrnuje podávání kyseliny N-(3,4-dimetoxy cinnamoyl) antranilové podle výše uvedeného vzorce (I) nebo jejích farmaceuticky akceptovatelných solí.

Předložený vynález se týká použití kyseliny N-(3,4-dimetoxy cinnamoyl) antranilové podle výše uvedeného vzorce (I) nebo jejích farmaceuticky akceptovatelných solí pro výrobu farmaceutické kompozice pro prevenci a léčení nemocí spojených s neovaskularizací.

Dále se předložený vynález týká použití kyseliny N-(3,4-dimetoxy cinnamoyl) antranilové podle výše uvedeného vzorce (I) nebo jejích farmaceuticky akceptovatelných solí jako inhibitoru neovaskularizace.

Přehled obrázků na výkresech

Obr. 1 je graf ilustrující inhibiční efekt Tranilastu na proliferaci lidských buněk mikrovaskulárního endotelu. Osy souřadnic znázorňují počet lidských buněk mikrovaskulárního endotelu (x 10⁴ buněk), a osy úseků znázorňují koncentrace Tranilastu (pig/ml) . Symboly * a ** v grafu znázorňují významný rozdíl při p<0,05 resp. p<0,01.

Obr. 2 je graf znázorňující inhibiční efekt Tranilastu na chemotaxi lidských buněk mikrovaskulárního endotelu. Osy souřadnic znázorňují počet migrujících lidských buněk mikrovaskulárního endotelu (buňky/zorné pole), a osy úseků znázorňují koncentrace Tranilastu (^g/ml). Symbol ** v grafu znázorňuje významný rozdíl při p<0,01.

Obr. 3 je graf znázorňující inhibiční efekt Tranilastu na tvorbu vlásečnic z lidských buňek mikrovaskulárního • · φφφφ φφφφ φφφ φφφφ φφφφ φφφ φφφφ φφφφ φ φφφφ φ · φ φ φ φ φφφ φ φ φ φ φφφφ φφφ φφφ φ φφ φφ φφ φφ endotelu. Osy souřadnic znázorňují číslo sítě vytvořených vlásečnic a osy úseků znázorňují koncentrace Tranilastu (^g/ml). Symbol ** v grafu znázorňuje významný rozdíl při p<0,01.

Obr. 4 je graf znázorňující inhibiční efekt Tranilastu na tvorbu vlásečnic z lidskch buněk mikrovaskulárního endotelu. Osy souřadnic znázorňují střední délku vytvořené struktury vlásečnic (mm) a osy úseků znázorňují koncentrace Tranilastu (/xg/ml) . Symboly * a ** v grafu znázorňují významný rozdíl při p<0,05 resp. p<0,01.

Příklady provedení

Vynálezci provedli rozsáhlé výzkumy pro nalezení sloučenin majících inhibiční aktivitu proti neovaskularizaci. Bylo zjištěno, že kyselina N-(3,4-dimetoxy cinnamoyl) antranilová (generický název Tranilast) podle vzorce (I) má značný inhibiční efekt na proliteraci lidských buněk mikrovaskulárního endotelu, chemotaxi lidských buněk mikrovaskulárního endotelu, a vytváření vlásečnic z lidských buněk mikrovaskulárního endotelu, a je tedy mimořádně použitelná jako inhibitor neovaskularizace, což tvoří základ předloženého vynálezu.

V souladu s tím vynálezci potvrdili, že Tranilast významně potlačuje proliferaci lidských buněk mikrovaskulárního endotelu v in vitro testu inhibiční aktivity proliferace buněk za použití lidských buněk mikrovaskulárního endotelu.

Vynálezci také potvrdili, že Tranilast významně potlačuje chemotaxi lidských buněk mikrovaskulárního endotelu v in vitro testu inhibiční aktivity pro chemotaxi buněk za použití lidských buněk mikrovaskulárního endotelu.

φφ φφ φφ φφφ φφφφ φφφφ

ΦΦΦ · φφφ · ··· • φφφφ φ φ · φ φ φ φφφ φ φ • φ φφφφ φφφ φφφ φ φφ φφ φφ φφ

Dále vynálezci také potvrdili, že Tranilast významně potlačuje vytváření vlásečnic z lidských buněk mikrovaskulárního endotelu v in vitro testu inhibiční aktivity vytváření vlásečnic z buněk za použití lidských buněk mikrovaskulárního endotelu.

V důsledku toho má Tranilast vynikající inhibiční efekt na proliferaci a chemotaxi v lidských buňkách mikrovaskulárního endotelu, a je tedy sloučeninou použitelnou jako inhibitor neovaskularizace. Tranilast má dále vynikající inhibiční efekt na vytváření vlásečnic z lidských buněk mikrovaskulárního endotelu, a je tedy sloučeninou mimořádně použitelnou jako účinná látka pro prevenci a léčení nemocí spojených s neovaskularizací.

Také je možné připravit farmaceutické kompozice, použitelné jako účinná látka pro prevenci a léčení nemocí spojených s neovaskularizací, které obsahují jako aktivní přísadu tranilast nebo jeho farmaceuticky akceptovatelné soli.

Jsou známy různé způsoby výroby Tranilastu a jeho farmaceuticky akceptovatelných solí «(Japonská patentová přihláška (Kokoku) Sho. 56-40710, Sho. 57-36905, Sho. 58-17186, Sho.58-48545, Sho. 58-5513Š, Sho. 58-55139, Hei.01-28013, Hei. 01-50219, Hei. 03-37539 atd.). Tranilast a jeho farmaceuticky akceptovatelné soli se mohou připravovat reakcí funkčního derivátu, jako například halogenidu a anhydridů kyseliny 3,4-dimetoxyskořicové vzorce — 7 — · · ···»··♦· ··· ···· « · · · • · · ···· «··· • ·«·· · · · · · · ···* φ • * φφφφ φφφ φ·· » ·φ φφ φφ φφ ch₃o.

COOH (II) . CH₃O' s kyselinou antranilovou podle vzorce:

/^NH₂ (III)

COOH obvyklým způsobem, a pokud je třeba, konverzí výsledné sloučeniny na sůl.

Jako příklady farmaceuticky akceptovatelných solí Tranilastu lze uvést soli s anorganickými zásadami jako sodnou sůl a draselnou sůl, soli tvořené s organickými aminy jako morfolin, piperazin a pyrolidin a soli tvořené s aminokyselinami.

Při použití farmaceutických kompozic podle předloženého vynálezu v praktickém léčení může být použito různých lékových forem farmaceutických kompozic v závislosti na použití. Jako příklady takovýchto lékových forem lze uvést prášky, granule, jemné granule, suché sirupy, tablety, tobolky, masti, injekce, oční kapky a poHobně.

Tyto farmaceutické kompozice mohou být formulovány přimíšením, zředěním nebo rozpuštěním vhodných aditiv jako excipienty, dezintegrátory, pojivá, lubrikanty, ředidla, pufry, izotonizující látky, antiseptika, zvlhčující látky, emulgátory, dispergační činidla, stabilizační činidla, přísady usnadňující rozpouštění, jako u konvenčních způsobů

- 8 - · · ·*·*···· ·· · ·«»* · c · · • · · Β · ·· · « ·· • ·«·· · · · · · · ·»· · · • · » · · · · · · ·«· · Β· ♦· ·· tB a formulací, obvyklým způsobem v závislosti na lékové formě.

Například prášky mohou být formulovány důkladným smísením Tranilastu podle vzorce (I) nebo jeho farmaceuticky akceptovatelné soli s vhodnými excipienty, lubrikanty a podobně.

Tablety mohou být formulovány smísením Tranilastu nebo farmaceuticky akceptovatelné soli s vhodnými excipienty, dezintegrátory, pojivý, lubrikanty a podobně, a lisováním směsi obvyklým způsobem. Tablety se také mohou povlékat pro vytvoření tablet povlečených fólií, tablet povlečených cukrem, střevních povlečených tablet a podobně.

Tobolky mohou být formulovány přimíšením vhodných excipientů lubrikantů a podobně a naplněním směsi do tobolek. Tobolky také mohou být formulovány vytvarováním granulí nebo jemných granulí obvyklým způsobem, a naplněním granulí nebo jemných granulí do tobolek.

Masti mohou být použity jako oční masti.

Injekce se mohou vstřikovat přímo do nemocných tkání, jako je rohovka a sklivec nebo s nimi sousedící tkáně pomocí jemné jehly, a nebo nitrooční perfuzí.

Farmaceutické kompozice podle předloženého vynálezu mohou být podávány jako preparáty s postupným uvolňováním. Preparát s Tranilastem se naapříklad zabuduje do pelet nebo mikrokapsulí polymeru s postupným uvolňováním jako preparát s postupným uvolňováním, a peleta nebo mikrokapsule se chirurgicky umístí do léčené tkáně. Jako příklady polymerů s postupným uvolňováním je možno uvést kopolymer

- 9 - · · ········ ··· · · · · ···· • t · · · ·· ···· • ···* · · · · · · ··· · fe • · fe··· ··· ··· · ·· ·· fefe fefe etylen-vinylacetát, polyhydrometakrylát, polyakrylamid, polyvinylpyrrolidon, metylcelulózu, plymer kyseliny mléčné, kopolymer kyseliny méčné a kyseliny glykolové a podobně, s výhodou je možno uvést biodegradovatelný polymer jako polymer kyseliny mléčné a kopolymer kyseliny méčné a kyseliny glykolové.

Při použití předloženého vynálezu Tranilastu nebo jeho jako aktivní přísady farmaceutických kompozicí podle v praktickém léčení se dávkování farmaceuticky akceptovatelných solí stanovuje v závislosti na tělesné hmotnosti, věku, pohlaví, závažnosti symptomů a podobně u každého léčeného pacienta a je přibližně v rozmezí 100 až 1000 mg denně pro dospělého člověka při orálním podávání, a přibližně v rozmezí 20 μg až 300 mg denně pro dospělého člověka při parenterálním podávání.

Dávka Tranilastu nebo jeho farmaceuticky akceptovatelné soli se může příslušně zvyšovat a snižovat podle typu nemoci, závažnosti symptomů léčeného pacienta a podle terapeutického významu.

Příklady

Předložený vynález je dále detailněji ilustrován na následujících příkladech.

Studie pro ověření inhibičního vlivu na neovaskularizaci

Příklad 1

Inhibice proliferace lidských buněk mikrovaskulárního endotelu • · ···· (1) Kultura lidských buněk mikrovaskulárniho endotelu

Normální lidské buňky kožního mikrovaskulárniho endotelu (Cell Systems Corporation) byly kultivovány v médiu (MVE médium, Cell Systems Corporation) pro kultury endotelových buněk a byly použity pro výzkumy. Ve fázi logaritmického růstu bylo médium aspirováno a buňky byly promyty solným roztokem pufrovaným fosforečnanem (PBS(-)), který byl opatrně přidán. Poté byl PBS(-) aspirován a k podložce s kulturou bylo přidáno alikvotni množství 0,25% roztoku trypsinu obsahujícího 0,02 % EDTA, a fázově kontrastní mikroskopií byla pozorována morfologie buněk. Když se buňky zaoblily, bylo k roztoku trypsinu přidáno ekvivalentní množství MVE média pro zastavení činnosti trypsinu. Získané buňky byly sebrány s podložky pipetováním média tenkou pipetou na pastovité látky. K suspenzi buněk bylo přidáno médium, suspenze buněk byla asi 20 x intenzivně zamíchána pipetováním pipetou na pastovité látky a odstředěna při 100 až 110 g po dobu 1 minuty. Po odstranění vrstvy plovoucí na povrchu bylo ke sraženině přidáno čerstvé médium a pipetováním pomocí pipety na pastovité látky byla připravena suspenze buněk. Počet živých buněk v alikvotním množství suspenze byl počítán pomocí fázově kontrastní mikroskopie pomocí hemocytometru. Koncentrace buněk byla nastavena na 2 χ Ϊ0⁴ buněk/ml.

(2) Příprava testovacího léku

Tranilast byl přidán do 1% vodného roztoku hydrouhličitanu sodného pro přípravu 0,55% roztoku a byl rozpuštěn zahříváním na 70 °C. Roztok byl sterilizován pomocí mikroporézniho filtru a zředěn MVE nédiem na konečnou • ·· ·· ·· ·· • ···· ···* • · · ··· · · · · ···· · · · · · · ··· · * ··· · ·* předepsanou koncentraci.

(3) Experimentální metoda

Suspenze buněk (1 ml) byla dána na kolagenem povlečenou 6-místnou podložku (Toyobo Engineering Co., Ltd.) a kultivována při 37 °C pod vlhčenou atmosférou sestávající z 5 % C0₂ ve vzduchu. Po jednom dni bylo médium aspirováno, buňky byly promyty PBS(-), a na podložku bylo přidáno 0,1 ml čerstvého média a 0,1 ml roztoků Tranilastu s různými koncentracemi, a podložka byla inkubována další dva dny. Po inkubaci bylo médium aspirováno, buňky byly promyty PBS(-), a na. podložku byl přidán 1 ml 0,25% roztoku trypsinu, obsahujícího 0.02% EDTA. Po sebrání buněk z podložky pipetováním pomocí pipety na pastovité látky byl spočten počet živých buněk pomoci hernocytometru.

(4) Vyhodnocení účinku

Byly vypočteny střední hodnoty a standardní odchylky pro každou skupinu. Byly provedeny statistické anylýzy významnosti jednostrannou analýzou odchylek a byla ověřena statistická významnost. Poté byla provedena analýza významnosti mezi skupinami pomocí Dunnettova násobného testu.

(5) Výsledky

Jak je znázorněno na obr. l, Tranilast významně potlačuje proliferaci lidských buněk mikrovaskulárního endotelu v závislosti na koncentraci.

• · • · · · • · > « » <

• ·

Příklad 2

Inhibice chemotaxe lidských buněk mikrovaskulárního endotelu (1) Kultura lidských buněk mikrovaskulárního endotelu

V souladu se způsobem podle Příkladu 1 (1) byly kultivovány lidské buňky mikrovaskulárního endotelu pro vytvoření suspenze buněk. Počet živých buněk byl počítán pomocí fázově hemocytometru, a 2 x 10⁴ buněk/ml.

kontrasní mikroskopie koncentrace buněk byla za použití nastavena na (2) Příprava testovacího léku

Tranilast byl přidán do 1% vodného roztoku hydrouhličitanu sodného pro přípravu 0,55% roztoku a byl rozpuštěn zahříváním na 70 °C. Roztok byl sterilizován pomocí mikroporézního filtru a zředěn DMEM + Ham (1 : 1) nédiem na konečnou předepsanou koncentraci.

(3) Experimentální metoda

Chemotaxe lidských buněk kožního mikrovaskulárního endotelu (připravených podle (1)) k růstovému faktoru vaskulárního endotelu (VEGF, vascular endothelial growth factor) byla zkoumána za použití 96-ip£stné komůrky pro chemotaxi (Neuro Probe Inc.). Alikvotni množství (32 μΐ) DMEM + Ham (1 : 1) média obsahujícího 100 ng/ml VEGF, 0,1 % hovězího séra a různé koncentrace Tranilastu bylo dáno do spodní dutiny komůrky pro chemotaxi. Alikvotni množství (50 μΐ) média obsahujícího suspenzi buněk a Tranilast bylo dáno do horní dutiny komůrky. Jako membrána pro chemotaxi

byl použit polykarbonátový filtr (10 /zm tlouštíky o velikosti pórů 8 μτη, Neuro Probe lne. ) povlečený kolagenem typu 1. Komůrka pro chemotaxi byla inkubována při 37 °C po dobu 5 hodin pod vlhčenou atmosférou sestávající z 5 % CO₂ ve vzduchu. Buňky migrující ke spodní straně filtru byly fixovány 90% etanolem a obarveny pomocí Diff-Quick (Baxter Diagnostics lne.). Počet migrujících buněk byl počítán v 5 náhodných polích ve 400 násobném zvětšení pomocí fázově kontrastní mikroskopie a byl vypočten počet buněk, vykazujících chemotaxi.

(4) Vyhodnocení účinku

Byly vypočteny střední hodnoty a standardní odchylky pro každou skupinu. Byly provedeny statistické anylýzy významnosti jednostrannou analýzou odchylek a byla ověřena statistická významnost. Poté byla provedena analýza významnosti mezi skupinami pomocí Dunnettova násobného testu.

(5) Výsledky

Jak je znázorněno na obr. 2, Tranilast významně potlačuje chemotaxi lidských buněk mikrovaskulárního endotelu v závislosti na koncentraci.

Příklad 3 v·

Vytváření vlásečnic lidskými buňkami mikrovaskulárního endotelu (1) Kultura lidských buněk mikrovaskulárního endotelu

V souladu se způsobem podle Příkladu 1 (1) byly kultivovány lidské vytvoření suspenze pomocí fázově hemocytometru, a 2 x 10⁴ buněk/ml.

buňky mikrovaskulárního endotelu pro buněk. Počet živých buněk byl počítán kontrasní koncentrace mikroskopie buněk byla za použiti nastavena na (2) Příprava testovacího léku

Tranilast byl přidán do 1% vodného roztoku hydrouhličitanu sodného pro přípravu 0,5% roztoku a byl rozpuštěn zahříváním na 70 °C. Roztok byl sterilizován pomocí mikroporézního filtru a zředěn MVE nédiem na konečnou předepsanou koncentraci.

(3) Experimentální metoda

Alikvotní množství (0,25 ml) matečného gelu (10 mg/ml, Becton Dickinson Labware) bylo dáno do 24-místné kultivační podložky (Corning) a pak bylo ponecháno ztuhnout při inkubaci při 37 °C po dobu 1 hodiny. Na gel byla přidána suspenze (0,25 ml) lidských buněk mikrovaskulárního endotelu (4 x 10⁴ buněk) a MVE médium (0,25 ml) obsahující různé koncentrace Tranilastu. Po 18 hodinách inkubace při 37 °C bylo pozorováno 5 náhodných polí ve 100 násobném zvětšení pomocí fázově kontrastní mikroskopie a bylo spočteno číslo vytvořené sítě.

(4) Výsledky

Jak je znázorněno na obr. 3, číslo vytvořené sítě bylo významně sníženo v závislosti na koncentraci.

Příklad 4 • · W W w ^w · * ·· · · · · · · · · ···· « · · · · · ··· · * • » · · · ··· * · ·· ·· ·· ··

Vytvářeni vlásečnic lidskými buňkami mikrovaskulárního endotelu (1) Kultura lidských buněk mikrovaskulárního endotelu

V souladu se kultivovány lidské vytvoření suspenze pomocí fázově hemocytometru, a 2 x 10⁴ buněk/ml.

způsobem podle Příkladu 1 (1) byly buňky mikrovaskulárního endotelu pro buněk. Počet živých buněk byl počítán kontrasní mikroskopie za použití koncentrace buněk byla nastavena na (2) .Příprava testovacího léku

Tranilast byl přidán do 1% vodného roztoku hydrouhličitanu sodného pro přípravu 1,0% roztoku a byl rozpuštěn zahříváním na 70 °C. Roztok byl sterilizován pomocí mikroporézního filtru a zředěn MVE nédiem na konečnou předepsanou koncentraci.

(3) Experimentální metoda

Alikvotní množství (0,25 ml) matečného gelu (10 mg/ml, Becton Dickinson Labware) bylo dáno do 24-místné kultivační podložky (Corning) a pak bylo ponecháno ztuhnout při inkubaci při 37 °C po dobu 1 hodiny. Na gel byla přidána suspenze (0,25 ml) lidských buněk mikrovaskulárního endotelu (4 x 10⁴ buněk) a MVE médium (0,25 ml) obsahující různé koncentrace Tranilastu. Po 18 hodinách inkubace při 37 °C bylo pozorováno 5 náhodných polí z jednoho místa bylo fotografováno ve 40 násobném zvětšení pomocí fázově kontrastní mikroskopie. Byly měřeny délky vytvořených struktur vlásečnic a byly spočteny střední hodnoty.

φφ φφ • φ φ φ φ · Φ· φ φ φ φ φ φ · φφφφ φφ Φ· • φ φ · φ φ ·♦ φφφφ φ (4) Výsledky

Jak je znázorněno na obr. 3, délka vlásečnicové struktury byla významně snížena v závislosti na koncentraci.

Průmyslová využitelnost

Farmaceutická kompozice obsahující jako aktivní přísadu Tranilast má značný inhibiční efekt na proliferaci a chemotaxi lidských buněk mikrovaskulárního endotelu a vytváření vlásečnic z lidských buněk mikrovaskulárního endotelu, a je tedy mimořádně účinná jako inhibitor neovaskularizace.

• »· ·· ·· ·· • ···· · · * * • · · · ·· · · ·· 9999 9 9 9 9 9 9 999 9 · • ···· · · · • ·· · · ·· ··

PATENTOVÉ

Claims (6)

1. NÁROKY

   1. Inhibitor neovaskularizace obsahující jako aktivní přísadu kyselinu N-(3,4-dimetoxy cinnamoyl) antranilovou podle vzorce ch₃0^^^ ^conh.

   ch₃o

   HOOC nebo její farmaceuticky přijatelné soli.
2. 2. Inhibitor neovaskularizace podle nároku 1, vyznačující se tím, že nemoc, která se léčí, je diabetická retinopatie.
3. 3. Inhibitor neovaskularizace podle nároku 1, vyznačující se tím, že nemoc, která se léčí, je senilní diskoidní makulární degenerace.
4. 4. Způsob prevence a léčení nemocí spojených s neovaskularizaci, zahrnující podávání kyseliny N-(3,4-dimetoxy cinnamoyl) antranilové podle vzorce

   HOOC^L/ nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí cinnamoyl) * · «* ·· »· ·· *·· 0 0 0 0 0 · · · ··· · · ·· 0 · ·· • 0000 0 0 0 0 0 * 000 · * • · »··· · · · ·»· · ·· ·· ·· ··
5. 5. Použití kyseliny antranilové podle vzorce

   N- (3,4-dimetoxy ^CH3°YY^^o°n^hY^·

   HOOcAY nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí pro výrobu farmaceutických kompozic pro prevenci a léčení nemocí spojených s neovaskularizací.
6. 6. Použití kyseliny antranilové podle vzorce

   N-(3,4-dimetoxy cinnamoyl) ^0Η3°Χ^γ^0ΟΝΗ_χ^.

   HOOC^-A nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí jako inhibitoru neovaskularizace.

   3>'\í • ·· ·· · · · · · · · · ····

   4 4 · ·· · ··· ·····« · · · · · · · · · • 4··· . 4 · ·

   4 · 4 ·· « · · ·

   Figuře 1

   Figuře 2 ,Λ-4 s

   U -i n (L;

   , Ί ^i;

   ‘ d O • r-i '—i ijj

   O 'U

   U f.J --1 • r-Ί ,- ;Ί

   O ;; &.

   ·· Η ’ r~· <· .,£(

   -1 £ :···ι :: h

   Tj 1 n •H 2' =J ~ i

   50_

   4030

   20.

   10.

   .... ;

   'šli ie iii «1«

   1.25 25 50 100

   Loticel·: z r?.í-e Tranilastu (/óg/al)

   TM • · 9 9 « · · a

   9 9 9

   9 · a

   Figuře 3

   t.uíiuentrůce Iranílastu ií/gz^j, ,

   Figuře 4