JPH05163222A - コラーゲン過剰合成疾患治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 コラーゲン過剰合成に起因する疾患の治療剤として有用
な医薬品組成物を提供する。 【構成】 【化１】で表わされるトラニラストまたはその薬理学的
に許容される塩を有効成分として含有することを特徴と
するコラーゲン過剰合成に起因する疾患治療剤。 【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はコラーゲン過剰合成に起
因する疾患の治療剤として有用な医薬品組成物に関する
ものである。

【０００２】さらに詳しく述べれば本発明は、式

【化２】

【０００３】で表される２−（３，４−ジメトキシシン
ナモイル）アミノ安息香酸またはその薬理学的に許容さ
れる塩を活性成分として含有することを特徴とするコラ
ーゲン過剰合成疾患治療剤に関するものである。

【０００４】

【従来の技術】本発明の式（Ｉ）で表される２−（３，
４−ジメトキシシンナモイル）アミノ安息香酸（一般
名：トラニラスト）及びその薬理学的に許容される塩は
アレルギー反応に起因するケミカルメディエーター（Ｃ
ｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｄｉａｔｏｒ）の遊離を抑制する
作用を有し、アレルギー性疾患の治療剤としてきわめて
有用な化合物である。

【０００５】本発明の式（Ｉ）で表されるトラニラスト
またはその塩を有効成分として含有する医薬品組成物は
アレルギー性気管支炎、瑞息等の治療剤として既に用い
られている。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らはこのよう
にアレルギー性疾患治療剤として有用なトラニラストの
新しい効能及びその利用方法を見出すべく研究した結
果、トラニラストが線維芽細胞のコラーゲン過剰合成に
対して顕著な抑制効果を有し、線維芽細胞の異常増殖に
対しても抑制作用を示し、コラーゲンの過剰合成に起因
する疾患、例えばケロイド、肥厚性瘢痕などの治療剤と
してきわめて有用であることを見出し、本発明を成すに
至った。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは式（Ｉ）の
トラニラストがカラゲニン（Ｃａｒｒａｇｅｅｎｉｎ）
誘発肉芽形成モデルにおいて経口投与により有意かつ用
量依存的に肉芽組織重量およびヒドロキシプロリン量を
減少させることを見出した。

【０００８】さらに、本発明者らはトラニラストがヒト
ケロイド由来線維芽細胞培養系において、線維芽細胞の
コラーゲンの過剰合成に対して用量依存的に抑制し、線
維芽細胞の異常増殖を有意に抑制すること、しかもトラ
ニラストは正常皮膚由来線維芽細胞のコラーゲン合成に
対しては抑制作用を示さず、さらに創傷モデルにおいて
治癒日数に全く影響を及ぼさないことを見出した。

【０００９】さらにまた、本発明者らはヒトケロイド組
織移植モデルにおいてトラニスラト経口投与によりケロ
イド組織重量を減少させることも見出した。

【００１０】線維芽細胞の増殖能及びコラーゲン合成に
対してある種のステロイド剤が抑制作用を示すことは既
に知られている。例えばトリアムシノロン（ｔｒｉａｍ
ｃｉｎｏｌｏｎｅ）はヒトケロイド由来線維芽細胞培養
系において線維芽細胞の異常増殖を抑制し、コラーゲン
過剰合成に対して抑制効果を示す。しかしながらトリア
ムシノロンはヒト正常皮膚由来線維芽細胞の線維芽細胞
増殖及びコラーゲン合成に対しても抑制作用を示し、し
かも創傷モデルにおいて治癒日数を遅延させることな
ど、ケロイド、肥厚性瘢痕の治療剤としては好ましくな
い。

【００１１】また、トラニラストと同様にケミカルメデ
ィエーターの遊離を抑制し、アレルギー性疾患の治療薬
として用いられているＤＳＣＧ（Ｄｉｓｏｄｉｕｍ ｃ
ｒｏｍｏｇｌｙｃａｔｅ）は、ヒトケロイド由来線維芽
細胞培養系において線維芽細胞のコラーゲン過剰合成に
対する抑制効果を示さない。

【００１２】トラニラストが正常線維芽細胞のコラーゲ
ン合成に対しては全く作用せずヒトケロイド由来線維芽
細胞のような線維芽細胞異常増殖及びコラーゲン過剰合
成をきたしている組織のコラーゲン過剰合成及び線維芽
細胞異常増殖に対して特異的に抑制効果を示すことはこ
れまで全く知られていないことであり、きわめて驚くべ
きことである。

【００１３】このようにトラニラストはコラーゲンの過
剰生産に対して特異的に抑制する作用を有しており、コ
ラーゲンの過剰合成に起因する疾患、例えばケロイド、
肥厚性瘢痕等の治療剤としてきわめて有用である。

【００１４】従って、トラニラストを有効成分として用
いることにより、コラーゲン過剰合成に起因する疾患の
治療剤として有用な医薬品組成物を製造することができ
る。

【００１５】本発明の医薬品組成物を実際の治療に用い
る場合、用法に応じ種々の剤型のものが使用される。こ
のような剤型としては散剤、顆粒剤、細粒剤、ドライシ
ロップ剤、錠剤、カプセル剤などのような内用剤、軟
膏、硬膏、リニメント剤、ローション剤などのような外
用剤あるいは注射剤、座剤などを挙げることができる。

【００１６】これらの医薬品組成物は、その剤型に応じ
調剤学上使用される手法により適当な賦形剤、崩壊剤、
結合剤、滑沢剤などの医薬品添加物と適宜混合し、常法
に従い調剤することにより製造することができる。

【００１７】例えば、散剤は式（Ｉ）で表されるトラニ
ラストまたはその塩に必要に応じ、適当な賦形剤、滑沢
剤等を加えよく混和して散剤とする。錠剤は、トラニラ
ストまたはその塩に必要に応じ適当な賦形剤、崩壊剤、
結合剤、滑沢剤等を加え常法に従い打錠して錠剤とす
る。錠剤はまた必要に応じ、コーティングを施し、フィ
ルムコート錠、糖衣錠、腸溶性皮錠等にすることができ
る。

【００１８】カプセル剤は、例えば必要に応じ適当な賦
形剤、滑沢剤等を加えよく混和した後、適当なカプセル
に充填してカプセル剤とする。さらに常法により顆粒あ
るいは細粒とした後充填してもよい。

【００１９】本発明の医薬品組成物を実際の治療に用い
る場合その活性成分であるトラニラストまたはその薬理
学的に許容される塩の投与量は患者の体重、年齢、性
別、疾患の程度等により適宜決定されるが概ね経口投与
の場合成人１日当たり１００ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲
で、非経口投与の場合成人１日当たり３０ｍｇ〜３００
ｍｇの範囲で投与される。

【００２０】

【実施例】本発明の内容を以下の実施例によりさらに詳
細に説明する。

【００２１】実施例 １ カラゲニン誘発肉芽形成モデル実験 カラゲニン誘発肉芽形成モデルにおいて以下の試験によ
りトラニラストのコラーゲン合成抑制作用を確認した。 （１）肉芽組織重量測定試験 １群５〜７匹のウィスター（ｗｉｓｔａｒ）系ラットを
使用した。０．５％κ−カラゲニン溶液をミニ浸透圧ポ
ンプ（Ａｌｚｅｔ，Ｍｏｄｅｌ ２００２，Ａｌｚａ）
に注入し、エーテル麻酔下で動物の背部皮下に埋め込ん
だ。翌日より被験薬物を１４日間経口投与し、肉芽組織
をグランスタイン（Ｇｒａｎｓｔｅｉｎ）らの方法に従
って採取して組織重量を測定した。

【００２２】〔実験結果〕０．５％κ−カラゲニン溶液
の１４日間持続投与後、対照群では３７１．０ｍｇの肉
芽組織の形成が観察された。表１に示されるようにトラ
ニラストは５０〜２００ｍｇ／ｋｇの経口投与で対照群
に比し有意かつ用量依存的に肉芽組織重量を減少させ
た。

【００２３】

【表１】

【００２４】（２）肉芽組織中ヒドロキシプロリン量測
定試験 上記試験と同様にして、採取した肉芽組織中のヒドロキ
シプロリン量を永谷らの方法に準じて測定した。

【００２５】〔実験結果〕表２に示されるようにトラニ
ラストは用量依存的にヒドロキシプロリン量を減少させ
た。さらに、トラニラスト１００および２００ｍｇ／ｋ
ｇ投与では対照群に比し有意にヒドロキシプロリン量を
減少させた。

【００２６】

【表２】

【００２７】実施例 ２ 創傷モデル実験 創傷治癒日数に対するトラニラストの影響を下記創傷モ
デルで確認した。１群１０匹のウィスター系ラットを使
用した。エーテル麻酔下でラット背部を剪毛し、ハサミ
で直径１５ｍｍの皮膚を切除し、皮膚欠損傷を作製し
た。翌日より被験薬物を連続経口投与し、また感染防止
のためペニシリン（５０００ｕｎｉｔ／ｂｏｄｙ）を欠
損傷作製日も含め４日間筋肉内投与した。欠損傷が上皮
形成を完了して治癒するまでに要した日数を治癒日数と
した。

【００２８】〔実験結果〕表３に示されるようにトラニ
ラストは１００および２００ｍｇ／ｋｇで、欠損傷治癒
日数に影響を及ぼさなかったが、トリアムシノロンは５
および１０ｍｇ／ｋｇで欠損傷治癒日数を著明に延長し
た。

【００２９】

【表３】

【００３０】実施例 ３ ヒトケロイド組織移植モデル実験 ヒトケロイド組織移植モデルを用い以下の試験により、
トラニラストのコラーゲン過剰合成に対する抑制作用を
確認した。

【００３１】（１）組織重量測定試験 実験には１群７〜２５匹のヌードマウスを使用した。手
術によって得られたヒトケロイド組織を無菌下で１００
ｍｇ前後の切片として切り出し、エーテル麻酔下でヌー
ドマウス背部皮下に移植した。移植７日後より１ヶ月間
被験薬物を経口投与した後移植片を摘出し、組織重量変
化を以下の式により算出した。

【００３２】

【数１】

【００３３】〔実験結果〕表４に示されるようにトラニ
ラストは５０ｍｇ／ｋｇから対照群に比し組織重量を有
意に減少させた。

【００３４】

【表４】

【００３５】（２）ヒドロキシプロリン量の変化 上記試験と同様に手術によって得られたケロイド組織
（非移植組織）の組織片および移植後摘出した移植組織
片のヒドロキシプロリン量を１群１２〜１３匹のヌード
マウスを用いて永谷らの方法に準じて以下のごとく測定
した。まず、組織片を１１０℃にて乾燥後６Ｎ−水酸化
カリウム水溶液にて中和し、蒸留水で希釈した。０．５
Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ８．２）に希釈液および塩化カリ
ウムを入れ、室温、氷中に１５分間ずつ放置した後、
０．２Ｍクロラミン−Ｔ（Ｃｈｌｏｒａｍｉｎｅ Ｔ）
液を加え０℃にて２時間放置した。３．６Ｍチオ硫酸ナ
トリウム水溶液を加えた後密栓し、３０分間沸騰水浴中
で加熱した。冷却後トルエンにて抽出し、これにエーリ
ッヒ試薬を加え室温にて３０分間放置した。ヒドロキシ
プロリン量は波長５６０ｎｍおよび６５０ｎｍにおける
吸光度差を測定し、移植前後のヒドロキシプロリン量の
変化は以下の式により算出した。

【００３６】

【数２】

【００３７】〔実験結果〕表５に示されるようにトラニ
ラストは２００ｍｇ／ｋｇで対照群に比し有意にヒドロ
キシプロリン量を減少させた。

【００３８】

【表５】

【００３９】実施例 ４ 培養線維芽細胞のコラーゲン蛋白の測定 ４×１０５個の６〜７継代目のケロイドあるいは正常皮
膚由来線維芽細胞を２５ｃｍ^２の培養フラスコ（Ｃｏｓ
ｔａｒ）に播種し、１０％ＦＢＳ（ｆｅｔａｌｂｏｖｉ
ｎｅ ｓｅｒｕｍ）を含むＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃ
ｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｅａｇｌｅ ｍｅｄｉｕ
ｍ）にて６日間培養した。コンフルエントに達した後、
ＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ ｓａｌｉ
ｎｅ）で３回洗浄し、コラーゲン蛋白の測定に用いた。

【００４０】コラーゲン蛋白測定 線維芽細胞に５０μｇ／ｍｌのＬ−アスコルビン酸を含
むＤＭＥＭを添加し、３７℃にて１時間反応した。その
後１００μｇ／ｍｌのβ−アミノプロピオニトリルおよ
び３７ＫＢｑ／ｍｌの３Ｈ−プロリンを含むＤＭＥＭに
交換し、さらに６時間反応した。

【００４１】被験薬物の効果は７時間の処置で検討し
た。反応終了後、培養上清および細胞ホモジネート中の
コラーゲン及び非コラーゲン性蛋白をペーターコフスキ
ー（Ｐｅｔｅｒｋｏｆｓｋｙ）とデイゲルマン（Ｄｉｅ
ｇｅｌｍａｎｎ）の細菌性コラーゲナーゼ消化法により
以下のごとく測定した。まず、細胞上清および細胞のホ
モジネートに等量の１０％トリクロロ酢酸−０．５％タ
ンニン酸とＦＢＳを添加し、１０分間放置した。４℃で
遠心分離（２０００ ｘ ｇ，５分）後沈澱を５％トリ
クロロ酢酸−０．２５％タンニン酸および氷冷したアセ
トンで２回ずつ洗浄し、沈澱を乾燥した。これを０．１
Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液に溶解し、中和後２５ｍＭ
Ｎ−エチルマレイミドおよび５０ｍＭ塩化カルシウム存
在下にコラーゲナーゼ（１４ＢＴＣ ｕｎｉｔ／ｍｌ）
と３７℃にて９０分間反応した。反応終了後、等量の１
０％トリクロロ酢酸−０．５％タンニン酸とＦＢＳを加
え遠心分離（２０００ ｘ ｇ，５分）し、上清中の放
射活性をコラーゲン性蛋白として測定した。また沈澱に
は０．５％ドデシル硫酸ナトリウム−５ｍＭジチオトレ
イトールを加え、１００℃で５分間加熱後、非コラーゲ
ン性蛋白の放射活性を測定した。なお、コラーゲンおよ
び非コラーゲン性蛋白の放射活性は細胞の全蛋白当たり
に換算した。また、全蛋白の合成量に対するコラーゲン
性蛋白の合成量は以下の式により算出した。

【００４２】

【数３】

【００４３】〔実験結果〕対照群において、ケロイド由
来線維芽細胞のコラーゲン合成は、正常皮膚由来線維芽
細胞に比し約４倍の活性を示した。トラニラストは表６
に示されるように３〜３００μＭでケロイド由来線維芽
細胞のコラーゲン合成を用量依存的に抑制したが、表７
に示されるように正常皮膚由来線維芽細胞のコラーゲン
合成に対しては、いずれの用量でも抑制しなかった。ま
た、表６および表７に示されるように非コラーゲン性蛋
白合成に対しては両細胞において全く影響を及ぼさなか
った。

【００４４】トリアムシノロンは１および１０μＭでケ
ロイドおよび正常皮膚由来線維芽細胞双方のコラーゲン
合成および相対合成活性に対し、抑制あるいは抑制傾向
を示した。一方、ＤＳＣＧは１００μＭにおいても線維
芽細胞のコラーゲン合成に何ら影響を及ぼさなかった。

【００４５】

【表６】

【００４６】

【表７】

【００４７】実施例 ５ 製 剤 以下のような処方に従い、各種製剤を製する。なお、剤
型の種類および処方は調剤例として挙げたものに限るも
のではない。

【００４８】（Ａ） 散 剤 トラニラスト１００ｇと乳糖９００ｇ（全量１０００
ｇ）をよく混和し、散剤を製する。

【００４９】（Ｂ） 散 剤 トラニラスト５０ｇと乳糖５０ｇ（全量１００ｇ）をよ
く混和し、散剤を製する。

【００５０】（Ｃ） 錠 剤 トラニラスト１００ｇ、乳糖４６０ｇ、６％ＨＰＣ乳糖
３６０ｇ、バレイショデンプン６５ｇおよびステアリン
酸タルク１５ｇ（全量１０００ｇ）をよく混和して打錠
し、錠剤１０００個を製する。

【００５１】（Ｄ） カプセル剤 トラニラスト１００ｇ、乳糖７２０ｇ、バレイショデン
プン１６５ｇおよびステアリン酸タルク１５ｇ（全量１
０００ｇ）をよく混和し、硬カプセルに充填し、カプセ
ル剤１０００カプセルを製する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 市川 潔 長野県松本市大字島内4055−３ ホワイト フラッツ 302号 (72)発明者 荒井 伸彦 長野県南安曇郡穂高町大字柏原3324−７

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式 【化１】 で表される２−（３，４−ジメトキシシンナモイル）ア
   ミノ安息香酸またはその薬理学的に許容される塩を有効
   成分として含有することを特徴とするコラーゲン過剰合
   成に起因する疾患治療剤。