CZ216398A3

CZ216398A3 - Sloučenina mající aktivitu agonisty PPAR-alfa a PPAR-gama, takový agonista a jeho použití, farmaceutický prostředek s jeho obsahem a způsob detekce

Info

Publication number: CZ216398A3
Application number: CZ982163A
Authority: CZ
Inventors: Stephen Alistair Smith
Original assignee: Smithkline Beecham P. L. C.
Priority date: 1996-01-09
Filing date: 1997-01-07
Publication date: 1999-02-17
Also published as: PL327731A1; AU1439797A; EA199800626A1; WO1997025042A1; JP2000503643A; SK92598A3; AP9801272A0; OA10710A; BG102668A; MX9805539A; NO983147L; HUP9900560A3; TR199801315T2; CA2242632A1; HUP9900560A2; EP0879053A1; ZA97171B; NZ502966A; BR9706968A; US6166049A

Description

Sloučenina mající aktivitu agonisty PPAR-alfa a PPAR-gama, takový agonista a jeho použití, farmaceutický prostředek s jeho obsahem a způsob detekce

Oblast techniky:

Vynález se týká použití agonisty PPAR-α a PPAR-γ nebo jeho farmaceuticky přijatelného derivátu pro výrobu farmaceutického prostředku k léčení a/nebo prevenci syndromu X, agonisty PPAR-α a PPAR-γ a sloučeniny s takovou aktivitou, farmaceutického prostředku obsahujícího agonistu PPAR-oc a PPAR-γ a farmaceuticky přijatelný nosič, jakož i způsobu detekce sloučeniny mající obě aktivity agonisty, PPAR-α a PPAR-γ.

Dosavadní stav techniky:

Je známo, že γ-isoforma peroxisomálním proliferátorem aktivovaného receptoru (dále označovaná PPAR-γ) je členem nadrodiny jaderných receptorů, která zahrnuje receptory steroidních, thyroidních a retinoidních hormonů (Evans, Science, 240, 889-895 (1988)). Rovněž je známo od Chawla a kol., že PPAR-γ je exprimován brzy během diferenciace adipocytů (Endocrinology 135, 798-800 (1994)) .

· ·«

*. »· » « « ·• · · ♦ 9 · · ·· «· • · · e • · ♦

• <

la

Spiegelman a kol. uvádějí v Cell (83, 803-812 (1995)), že signály, které modulují aktivitu PPAR-γ, mohou mít primární úlohu v homeostázách regulujících energii. Předpokládají (tamtéž, 810), že „screening možných PPAR-γ agonistů a antagonistů znamená logicky a potenciálně zrychlený přístup k rozvoji nových terapeutických látek pro NIDDM, resp. obezitu.

Je známo, že α-isoforma peroxisomálním proliferátorem aktivovaného receptoru (dále označovaná jako PPAR-α) působí » · * a

při stimulaci peroxisomální proliferace v játrech hlodavců, což vede ke zvýšení oxidace tuků těmito orgány (Keller a Wahki, Trends Endocrin. Metab., 4, 291-296 (1993)). Hypolipidemické látky mají schopnost stimulovat PPAR-cc, a zajištění stimulace peroxisomální proliferace, a v důsledku toho oxidace mastné kyseliny, se může brát v úvahu při redukci mastných kyselin plasmy (Macdonald a Lané: Current Biology, 5, 618-621 (1995)).

Syndrom X je syndrom charakterizovaný počáteční stavem rezistence na inzulín, tvořením hyperinzulinemie, dyslipidemie, a omezenou glukozovou tolerancí, která se může vyvinout v diabetes mellitus nezávislý na inzulínu (typ II diabetes), charakterizovaný hyperglykemií, a který se může dále rozvinout do diabetických komplikací.

Nyní jsme zjistili, že výsledkem zahrnutí účinků PPARoc v PPARy antihyperglykemickém činidle je činidlo, které má zvýšenou terapeutickou schopnost v etiologii syndromu X díky zvýšenému hypolipidemickému účinku.

Mezinárodní patentová přihláška PCT/EP95/03038 popisuje některé sloučeniny vzorce (A):

co₂h

OCH₂R^b (A) nebo jejich farmaceuticky přijatelnou sůl a/nebo jejich farmaceuticky přijatelný solvát, kde

R^a znamená 2-benzoxazolyl nebo 2-pyridyl a R^l? znamená CH₂OCH₃ nebo CF₃.

• · · · • « ♦ β · · · · · • · · · · · · « · · · * « • 9 9 9 9 9 9

9 99 9 9 9 9 9 9

Sloučeniny vzorce (A) jsou uvedeny jako možné pro použití při léčení a/nebo prevenci hyperglykemie, zejména diabetes typu II, hyperlipidemie, hypertenze, kardiovaskulární nemoci, zejména atherosklerozy, a ledvinových nemocí spojených s rozvojem diabetes typu II včetně diabetické nefropatie, glomerulonefritidy, glomerulární sklerózy, nefrotického syndromu, hypertenzní nefrosklerozy a konečného stupně ledvinové nemoci, a pro prevenci, zvrat, stabilizaci nebo zpomalení postupu mikroalbuminurie na albuminurii.

Nyní bylo zjištěno, že sloučeniny vzorce (A) vykazují aktivitu agonisty u obou, PPAR-α a PPAR-γ, a že stejně, jako jsou zvláště účinné při léčení a/nebo prevenci hyperglykemie, jsou nyní také považovány za velice účinné při léčení a/nebo prevenci predíabetického syndromu rezistence vůči inzulínu a z něj vyplývajících komplikací. Jsou tudíž považovány za vhodné pro léčení a/nebo prevenci rezistence vůči inzulínu, cukrovky, dyslipidemie, atherosklerozy, hypertenze, kardiovaskulárních onemocnění a obezity.

Podstata vynálezu:

Prvním předmětem vynálezu je způsob léčení a/nebo prevence syndromu X u lidí nebo jiných savců, kdy tento způsob zahrnuje podávání účinného netoxického a farmaceuticky účinného množství agonisty PPAR-α a PPAR-γ nebo jejich farmaceuticky přijatelného derivátu lidem nebo jinému než humánnímu savci, který potřebuje takové léčení.

Jedním předmětem vynálezu je tedy léčení syndromu X.

Dalším předmětem vynálezu je prevence syndromu X.

Konkrétně je poskytnut způsob léčení a/nebo prevence hyperglykemie.

9 «9 • 9 ·

9 9

9 9 9

Konkrétně je poskytnut způsob léčení prediabetického syndromu rezistence vůči inzulínu a z něj vyplývajících komplikací.

Prediabetický syndrom rezistence vůči inzulínu zahrnuje hyperinzulinemii a zhoršenou glukozovou toleranci.

Z dalšího hlediska je poskytnut způsob léčení a/nebo prevence syndromu X, včetně hyperglykemie a/nebo prediabetického syndromu rezistence vůči inzulínu a z nich vyplývajících komplikací, u lidí nebo jiných než humánních savců, kdy tento způsob zahrnuje podávání účinného netoxického a farmaceuticky účinného množství agonisty PPAR-α a PPAR-γ nebo jejich farmaceuticky přijatelného derivátu, lidem nebo jinému než humánnímu savci, který potřebuje takové léčení, s tou podmínkou, že postup nezahrnuje podávání:

(S) —3—[4—[2—[N— (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2methoxyethoxy)propanové kyseliny; nebo (S) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2(2,2,2-trifluorethoxy)propanové kyseliny;

pro léčení a/nebo prevenci hyperglykemie, zejména diabetes typu II, hyperlipidemie, hypertenze, kardiovaskulárního onemocnění, zejména atherosklerozy a onemocnění ledvin, zejména chorob ledvin spojených s rozvojem diabetes typu II včetně diabetické nefropatie, glomerulonefritidy, glomerulární sklerózy, nefrotického syndromu, hypertenzní nefrosklerozy a konečného stavu ledvinové nemoci, a pro prevenci, zvrat, stabilizaci nebo zpomalení postupu mikroalbuminurie na albuminurii.

Bylo zjištěno, že ve své výhodné formě je agonistou PPAR-a a PPAR-γ jednotlivá sloučenina (taková sloučenina je zde označována jako „ PPAR-α a -γ agonista)/ ale v rozsahu tohoto vynálezu je, že agonista PPAR-α a PPAR-γ je poskytnut kombinací sloučeniny agonisty PPAR-α a sloučeniny agonisty PPAR-γ.

• · · · ·· ·« • 9 9 9

9 999 » · · · 99 9 9 · • · ·

9 9 9

Kombinovaným PPAR-α. a PPAR-γ agonistou je sloučenina vzorce (I):

^H OCHjR¹ (i:

nebo její farmaceuticky přijatelná sůl a/nebo farmaceuticky přijatelný solvát, kde

R° znamená 2-benzoxazolyl nebo 2-pyridyl a

R¹ znamená CH₂OCH₃ nebo CF₃.

Výhodně R'^;' znamená 2-benzoxazolyl.

Účelně R^: znamená CH₂OCH₃.

Výhodně R¹ znamená CF₃.

Sloučeniny vzorce (I), a jejich farmaceuticky přijatelné soli, mohou existovat v jedné z řady tautomerních forem, z nichž všechny jsou zahrnuty do předloženého vynálezu jako individuální tautomerní formy nebo jako jejich směsi.

Farmaceuticky přijatelné deriváty zahrnují farmaceuticky

přijatelné soli a solváty.	přijatelné	soli	zahrnují soli
Vhodné	farmaceuticky
karboxyskupin	a adiční soli s	kyselinou.
Výhodné	farmaceuticky	přijatelné	soli	karboxyskupin

zahrnují kovové soli, jako například hliníku, soli alkalických kovů, jako je lithium, sodík nebo draslík, soli kovů alkalických zemin, jako je vápník nebo hořčík, a amonné nebo substituované amonné soli, například soli s nižšími alkylaminy, jako je triethylamin, hydroxyalkylaminy, jako je 2hydroxyethylamin, bis-(2-hydroxyethyl)amin .nebo tri-(2• · hydroxyethyl)amin, cykloalkylaminy, jako je bicyklohexylamin, nebo s prokainem, dibenzylpiperidinem, N-benzyl-βfenethylaminem, dehydroabietylaminem, N,N'-bisdehydroabietylaminem, glukaminem, N-methylglukaminem nebe bázemi pyridinového typu, jako je pyridin, kollidin, chinin nebo chinolin.

Vhodné adiční soli s kyselinou zahrnují farmaceuticky přijatelné anorganické soli, jako je sulfát, nitrát, fosfát, borát, hydrochlorid a hydrobromid, a kde je to proveditelné, farmaceuticky přijatelné adiční soli s organickou kyselinou, jako je acetat, tartrat, maleat, citrát, sukcinat, benzoat, askorbat, methansulfonat, α-ketoglutarat a ct-glycerofosfat.

Účelně farmaceuticky přijatelné solváty zahrnují hydráty.

Farmaceuticky přijatelné deriváty, jako jsou soli a/nebo solváty sloučenin vzorce (I), mohou být připraveny a izolovány běžnými postupy; například sodné soli mohou být připraveny použitím methoxidu sodného v methanolu.

Sloučenina vzorce (I), nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, a/nebo její farmaceuticky přijatelný hydrát, mohou být připraveny hydrolýzou sloučeniny vzorce (II):

kde R° a R¹ jsou stejné, jako jsou definovány u vzorce (I) a

I? znamená hydrolyzovatelnou skupinu;

a potom, pokud je to požadováno, přípravou farmaceuticky přijatelné soli sloučeniny vzorce (I) a/nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu.

Λ » • · ·· ·· ·« • · · · · * *♦ • · · · · · « · * * « • · · » · · « » « » Μ « ·

Vhodnou hydrolyzovatelnou skupinou L¹ je skupina vzorce ;a) nebo její epimer:

\

Ph

OH

Vhodnou hydrolyzovatelnou skupinou L¹ je Evansova pomocná chirální skupina, například skupina vzorce (b) nebo její epimer:

\^Λο <·'

CH₂Ph (b)

Vhodnou hydrolyzovatelnou skupinou L¹ je Ci-₆alkoxyskupina ,

Hydrolýza sloučeniny vzorce (II) se provádí použitím vhodných podmínek vybraných pro hydrolýzu konkrétní skupiny L¹, například pokud je L¹ skupina vzorce (a) nebo Ci_₆alkoxyskupina, hydrolýza se vhodně provádí za kyselých podmínek, například použitím zředěné kyseliny sírové, běžně ve směsi voda/dioxan, například směsi v poměru 1:1, při jakékoliv teplotě, která umožňuje výhodnou rychlost tvorby požadovaného produktu, obecně při zvýšené teplotě, jako je v rozmezí od 50 °C do 120 °C, například 90 °C;

nebo pokud L¹ je skupina vzorce (b), provádí se hydrolýza obvykle s použitím hydroperoxidu lithia ve vodném rozpouštědle, jako je vodný tetrahyrofuran, při libovolné teplotě, která umožňuje dostatečnou rychlost tvorby požadovaného produktu, • « · « · · · · ···· ··· «· ·· *· obvykle při snížené teplotě, jako je teplota v rozmezí od -10 °C do 0 °C, například 0 °C.

Obdobně, pokud L¹ je skupina vzorce (b) , může probíhat hydrolýza za zásaditých podmínek, použitím například vodného hydroxidu sodného, ve vhodném rozpouštědle, jako je vodný tetrahydrofuran, obvykle při teplotě místnosti.

Sloučenina vzorce (II), kde L¹ je část výše definovaného vzorce (a) nebo (b), může být připravena ze sloučeniny vzorce (III):

kde R° a R¹ jsou stejné, jako jsou definovány u vzorce (I) a

L² označuje odstupující skupinu;

(i) u sloučenin vzorce (II), kde L¹ je část výše definovaného vzorce (a), reakcí s (S)-fenylglycinolem; nebo (ii) u sloučenin vzorce (II), kde I? je část výše definovaného vzorce (b) , reakcí s (S)-4-benzyloxazolidin-2onem, výhodně jeho aktivovanou formou; a potom oddělením požadovaného isomerů z připravené směsi diastereoisomerů.

Vhodnou odstupující skupinou L² je halogenový atom, například atom chloru.

Reakce mezi sloučeninami vzorce (III) a (S)-fenylglycinolem může probíhat za běžných podmínek amidace, například v inertním rozpouštědle, jako je dichlormethan, při teplotě, která umožňuje dostatečnou rychlost tvorby požadovaného ,, · ·· «♦ ·· «· . · · · · · · » · · · · • · »·»♦ ♦*·· . · · · ····· »· · ♦ · « « »·« ··· «··· ··· ·· ·· ·· ·· produktu, výhodně při teplotě místnosti, a výhodně za přítomnosti báze, jako je triethylamin.

Vhodnou aktivovanou formou (S)-4-benzyloxazolidin-2-onu je forma soli, například forma soli alkalického kovu, výhodně lithné soli.

Aktivovaná forma (S)-4-benzyloxazolidin-2-onu může být připravena příslušným běžným postupem. Pokud je tedy aktivovanou formou lithná sůl, může být připravena zpracováním (S)-4-benzyloxazolídin-2-onu se zdrojem lithných iontů za přítomnosti báze, výhodně zajištěné n-butyllithiem, v aprotickém rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, obvykle při nízké teplotě, například v rozmezí od -78 °C do 0 °C.

Reakce mezi sloučeninou vzorce (III) a aktivovanou formou (S)-4-benzyloxazolidin-2-onu se může provádět v aprotickém rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, při teplotě, která umožňuje dostatečnou rychlost tvorby požadovaného produktu, obvykle ponecháním reakční směsi, aby se pomalu ohřála z -78 C na 0 ^c'C.

Výhodně se aktivovaná forma (S)-4-benzyloxazolidin-2-onu připraví a potom reaguje in šitu se sloučeninou vzorce (III) .

Sloučenina vzorce (III) může být připravena hydrolýzou esteru karboxylu vzorce COOR² sloučeniny vzorce (IV) :

ch₃

R-N

.CO.OR² och₂r’ (IV) kde R^ÍJ a R¹ jsou stejné, jako jsou definovány u vzorce (I), a R² označuje alkylskupinu, « ·

	·· 9 *· ♦» ·· • · t · · · »	« · • 99
10	* · ·· · · · · · · · 9 · · 9 9 9 9 9 9 9 9 9999 999 99 99 ·* ·»
a potom konverzí takto vytvořené vzorce CO.L².	karboxylové skupiny	na část
Výhodnou alkylskupinou R² methylskupina.	je Ci-_Salkylskupina,	zejména
Hydrolýza esteru karboxylu může být zajištěna jakéhokoliv obvyklého hydrolyzačního činidla, jako je	použitím hydroxid

alkalického kovu, například hydroxid sodný.

Hydrolýza sloučeniny vzorce (IV) se může provádět ve vhodném rozpouštědle, jako je směs methanol/voda, běžně směs v poměru 1:1, při teplotě, která umožňuje vhodnou rychlost tvorby požadovaného produktu, výhodně při zvýšené teplotě a běžně při refluxní teplotě rozpouštědla.

Konverze karboxylové skupiny kyseliny na část CO.L² se může provádět vhodným běžný postupem v závislosti na konkrétní povaze vybrané L² skupiny. Pokud L² je halogen, zahrnuje vhodný postup zpracování karboxylové kyseliny s oxalylhalogenidem, například oxalylchloridem, jestliže L² je chlor.

Reakční podmínky konverze karboxylové skupiny kyseliny na část CO.L² budou stanoveny konkrétní povahou zvolené L² a zdroje L², například pokud L² je halogen a zdrojem L² je oxalylchlorid, potom se reakce může provádět v inertním rozpouštědle, jako je dichlormethan nebo benzen při teplotě, která umožňuje vhodnou rychlost tvorby požadovaného produktu, výhodně při teplotě místnosti nebo při zvýšené teplotě, jako je refluxní teplota rozpouštědla.

Je zřejmé, že příprava a separace sloučeniny vzorce (II) , kde L¹ je epimer výše definované části (a) nebo (b) , a její následná hydrolýza k získání sloučeniny vzorce (I), může být dosažena použitím analogických postupů k výše popsaným postupům přípravy, separace a hydrolýzy sloučeniny vzorce (II), kde L¹ znamená výše definovanou část (aF nebo (b) .

• « · · ·· • · ·

9

9999 9 9 9

9 9

99

Sloučenina vzorce (II), kde být také připravena dehydroxylací

L¹ je část vzorce (b) , sloučeniny vzorce (V):

může

kde R° a R¹ jsou stejné, jako jsou definovány u vzorce (I) a

X je část výše definovaného vzorce (b).

Dehydroxylace sloučeniny vzorce (V) se běžně provádí zpracováním s trialkylsilanem, například triethylsilanem, výhodně za přítomnosti kyseliny trifluoroctové a běžně používáním kyseliny trifluoroctové jako rozpouštědla, při teplotě, která umožňuje vhodnou rychlost tvorby požadovaného produktu, například při teplotě v rozmezí od 0 °C do teploty místnosti.

Je zřejmé, že sloučenina vzorce (II), kde L¹ je část vzorce (bj, by mohla být získána také dehydroxylací sloučeniny vzorce (V) , v níž je stereocentrum nesoucí hydroxyskupinu epimerizováno.

Sloučenina vzorce sloučeniny vzorce (VIA):

(V)

může být připravena reakcí .CHO (VIA) kde R° je definováno jako u vzorce se sloučeninou vzorce (VIB):

(VIB)

9 99 99 99 ·9

9 9 9 9 9 9 9 * 44 9

4 · 4 4 · 44 44 » · «4 4 4 44 4 4 · 4 4 9.

4 44 4 444

4444 444 44 44 44 44 kde R¹ je definováno jako u vzorce (I);

a potom oddělením požadovaného isomeru ze směsi vyrobených diastereoisomerů.

Vhodně je ve výše uvedené reakci sloučenina vzorce (VIB) v aktivované formě, která je přednostně získána zpracováním sloučeniny vzorce (VIB) s alkylbor-trifluormethansulfonatem, například dibutylbor-trifluormethansulfonatem, výhodně za přítomnosti aminové báze, jako je triethylamin.

Aktivovaná forma sloučeniny vzorce (VIB) může být připravena vhodným běžným postupem v závislosti na konkrétní povaze vybrané aktivované formy; například sloučenina vzorce (VIB) reaguje s dibutylbor-trifluormethansulfonatem a triethylaminem v inertním rozpouštědle, jako je dichlormethan, při teplotě v rozmezí od -78 °C do 0 °C.

Reakce mezi sloučeninami vzorce (VIA) a (VIB) se může provádět v inertním rozpouštědle, jako je dichlormethan, při teplotě, která poskytuje dostatečnou rychlost tvorby požadovaného produktu, obvykle ponecháním reakční směsi, aby se pomalu ohřála z -78 °C na 0 °C.

Přednostně je aktivovaná forma sloučeniny vzorce (VIB) připravena a potom reaguje in šitu se sloučeninou vzorce (VIA).

U sloučenin vzorce (I), kde R° znamená 2-benzoxazolyl, je vhodnou sloučeninou vzorce (VIA) 4-[2-[N-(2-benzoxazolyl)-Nmethylamino]ethoxy]benzaldehyd.

Vhodnými způsoby separace libovolného požadovaného jediného isomeru ze směsi diastereoisomerů jsou chromatografie, jako je preparativní vysokotlaká kapalinová chromatografie nebo kolonová chromatografie na silikagelu.

• · · • · · • »··

99

9 · 9

9 ·9 ·· » · * « · 9 9

99 99

Jedním běžným postupem přípravy sloučeniny vzorce (II), kde L¹ je Ci-₆alkoxyskupina, je alkoholýza sloučeniny vzorce (II), kde L¹ je část o vzorci (fc>) , za bázických podmínek.

Vhodnou bází je alkoxid alkalického kovu, například pokud L¹ je methoxyskupina, je sloučenina vzorce (II), kde L¹ je část (b) , zpracována s methoxidem sodným v methanolu.

Sloučenina vzorce (I) může být také připravena štěpením na enantiomery racemické sloučeniny vzorce (VII):

kde R° a R¹ jsou stejné, jako jsou definovány u vzorce (I);

Štěpení sloučeniny vzorce (VII) se může provádět použitím známých resolučních postupů, například reakcí sloučeniny vzorce (VII) s resolvujícím činidlem, jako je opticky aktivní kyselina nebo báze, k vytvoření směsi diastereoisomerních solí, které potom mohou být odděleny frakční krystalizací a potom může být sloučenina vzorce (I) regenerována z oddělené diastereoisomerní soli běžnými postupy, jako je hydrolýza.

Je zřejmé, že sloučeniny vzorce (VII) obsahují sloučeniny vzorce (I) smísené s jinými optickými isomery. Sloučenina vzorce (VII) nebo její farmaceuticky přijatelná sůl a/nebo její farmaceuticky přijatelný solvát, tvoří další předmět předloženého vynálezu. Oddělené isomery sloučenin vzorce (VII), spolu se sloučeninami vzorce (I), nebo jejich farmaceuticky • 4

4 · • 444

4 4 4 4

4444 444 44 44

4 ·

44

4 4 4 4

4 4

44 přijatelnými solemi a/nebo jejich farmaceuticky přijatelnými solváty, také zahrnuje předložený vynález.

Vhodné kyseliny nebo báze pro štěpeni sloučenin vzorce (VII) jsou popsány v Enantiomers, Racemates and Resolution, J. Jaques a kol., Wiley Interscience (1981), zejména na str. 255 a 256. Vhodné postupy štěpeni na enantiomery také posal Jaques a kol.

Sloučeniny vzorce (IV) a (VIA), například 4—[2—[N—(2— benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]benzaldehyd, jsou známými sloučeninami, nebo mohou být připraveny postupy analogickými s těmi postupy, které se používají při přípravě známých sloučenin, například popsaných v mezinárodní patentové přihlášce zveřejněné pod číslem W094/01420.

Sloučeniny vzorce (VIB) jsou známými sloučeninami, nebo mohou být připraveny postupy analogickými s těmi postupy, které se používají při přípravě známých sloučenin, například popsaných v Organic Synthesis, 68, 83 (1990) red. J. D. White, nebo postupy k nim analogickými, v kombinaci s běžnými metodami přípravy chloridů kyselin.

Je zřejmé, že v kterékoliv z výše zmíněných reakcí může být jakákoliv reaktivní skupina v substrátu molekuly chráněna, v souladu s běžnou chemickou praxí. Vhodné chránící skupiny v libovolných výše zmíněných reakcích jsou ty, které se běžně používají ve stavu techniky. Postupy tvorby a odebírání takových chránících skupin jsou běžné postupy, odpovídající molekule, která má být chráněna.

Je zřejmé, že výše zmíněná příprava sloučenin vzorce (i;

nebo její farmaceuticky přijatelné farmaceuticky přijatelného solvátu, že sloučenina vzorce soli a/nebo jejího je stereoselektivním (I) je jednotlivý postupem, a stereoisomer.

Výhodně je sloučenina vzorce (I) přítomna ve směsi s méně než 50 % hmotn./hmotn. svého racemického isomeru, « 00 00 ·· ··

00·· 0000 0000

0 0000 00 00 0 0 00 0 0000 00 0 0 0 < 0 0 00 0 000

0000 000 0* 0· ·· ·· to znamená, že je více než z 50 % opticky čistá, vhodně z 80 až 100 %, a výhodně z 90 až 100 %, jako je 90 až 95%, výhodněji 95 až 100%, například 95%, 96%, 97%, 98%, 99% nebo 99,9% opticky čistá.

Přednostně je sloučenina vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelná sůl a/nebo její farmaceuticky přijatelný solvát, v opticky čisté formě.

Absolutní stereochemii sloučenin lze stanovit běžnými postupy, jako je rentgenová (strukturní) krystalografie.

Pokud je PPAR-α a PPAR-γ agonista poskytnut kombinací sloučeniny PPAR-α agonisty a sloučeniny PPAR-γ agonisty, je vhodná sloučenina PPAR-γ agonisty vybrána z EP 0 306 228 a WO94/05659, jejichž obsah je zde zahrnut jako odkaz.

Účelně jsou vhodnými a preferovanými PPAR-γ agonisty ty výhodné, vhodné a preferované sloučeniny, které jsou popsané v EP 0 306 228 a WO94/05659.

Nejvýhodnějším PPAR-γ agonistou z EP 0 306 228 a

WO94/05659 je 5—[4—[2— (N-methyl- (2-pyridyl) amino) ethoxy]benzyl]thiazolidin-2,4-dion nebo jeho tautomerní forma a/nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, zejména sůl kyseliny maleinové, a/nebo jeho farmaceuticky přijatelný solvát.

Další PPAR-γ agonisty zahrnují thiazolidindiony popsané v evropských patentových přihláškách zveřejněných pod čísly

008	203,	139	421,	032	128, 0 428	312,	0 489	663,
155	845,	257	781,	208	420, 0 177	353,	0 319	189,
332	331,	332	332,	528	734 a 0 508	740;	a z	mezinárodních

patentových přihlášek, zveřejněných pod čísly 92/18501, 93/02079, 93/22445, a z US patentu č. 5 104 888, přičemž obsah těchto publikací je zde rovněž zahrnut jako odkaz.

• · · · ·

Pokud je PPAR-α a PPAR-γ agonista poskytnut kombinací sloučeniny PPAR-α agonisty a sloučeniny PPAR-γ agonisty, jsou vhodnou sloučeninou PPAR-α agonisty fibraty, jako clofibrat, ciprofibrat, Wy 14643 a BR-931 (Lalwani a kol., Biochemical and Biophysical Research Commun., 116, 388-393 (1983)),· obsahy těchto publikací jsou zde zahrnuty jako odkaz. Uvedené fibraty jsou známými sloučeninami připravenými použitím známé metodiky nebo metodami analogickými, které se používají při přípravě známých analogických sloučenin, například postup ďAtri a kol., J. Med. Chem., 27., 1621-1629 (1984) je obecně použitelný na každý ze zmíněných fibratů.

Do postupu podle vynálezu jsou konkrétně zahrnuty zvláštní příklady popsané ve výše zmíněných publikacích, včetně patentových přihlášek.

Účinné sloučeniny popsané ve výše zmíněných zveřejněných patentových dokumentech, včetně konkrétních příkladů, které jsou v nich popsány, jsou připravovány běžnými postupy popsanými v uvedených patentových dokumentech. Například PPAR-γ agonista vybraný z EP 0 306 228 nebo WO94/05659 může být připraven použitím postupu popsaného v EP 0 306 228 nebo

WO94/05659.

Pokud se zde používá „syndrom X, pak zahrnuje prediabetický syndrom rezistence vůči inzulínu a z něj vyplývající komplikace, rezistenci vůči inzulínu, cukrovku nezávislou na inzulinu, dyslipidemii, hyperglykemii, obezitu a komplikace spojené s cukrovkou; způsoby a léčení zde zmíněná včetně výše uvedených, pokud není konkrétně uvedeno jinak.

Aby se zabránilo nejistotě, zahrnují metody a léčení z tohoto vynálezu také léčení a/nebo prevenci kteréhokoliv nebo kterékoliv kombinace z dále uvedeného seznamu: prediabetický inzulinu, syndrom rezistence vůči komplikace, rezistenci vůči inzulinu, z něj vyplývající diabetes nezávislý na ··

• · · · inzulínu, dyslipidemii, hyperglykemii, obezitu a komplikace spojené s diabetem.

i

Komplikace spojené s diabetes zahrnují kardiovaskulární onemocnění, zejména atherosklerozu, retinopatii, neuropatii a nemoci ledvin včetně diabetické nefropatie, glomerulonefritidy, glomerulární sklerózy, nefrotického syndromu, hypertenzní nefrosklerozy a konečného stádia choroby ledvin.

Pokud se zde použije termín „PPAR-α agonista, označuje agonistu peroxisomálním proliferátorem aktivovaného receptoru, výhodně lidského receptoru, subtypu alfa.

Pokud se zde použije termín tt

PPAR-γ agonista, označuje agonistu peroxisomálním proliferátorem aktivovaného receptoru, výhodně lidského receptoru, subtypu gama.

Aktivita PPAR-α agonisty a PPAR-γ agonisty se může testovat použitím metod, nebo podobných metod, jako popsal Lehmann a kol., Journal of Biological Chem., 270, 12953-12956 (1995) .

Z jednoho hlediska jsou sloučeninami PPAR-α agonisty ty sloučeniny, které stimulují PPAR alfa chimérický receptor sestávající z rozpoznávacího místa PPAR alfa ligandu spojeného s konstruktem vhodného reporterového genu, jako je luciferaza nebo chloramfenikol acetyltransferaza (CAT). Aktivitu lze stanovit postupy popsanými Lehmannem a kol., cit. tamtéž.

Z jednoho hlediska jsou sloučeninami PPAR-γ agonisty ty sloučeniny, které stimulují PPAR gama chimérický receptor obsahující rozpoznávací místo PPAR gama ligandu spojeného s konstruktem vhodného reporterového genu, jako je luciferaza nebo chloramfenikol acetyltransferaza (CAT). Aktivitu lze stanovit postupy popsanými Lehmannem a kol., cit. tamtéž.

Agonisty mohou být proteiny nebo látky jiné než proteiny.

• »· · · ·· ·· ·· ·· « · · · · · · · • · · · · · · · • · · «·· « 999 9 ·

9 9 9 9 9

99 99 99

Vhodnými agonisty jsou. neproteinové sloučeniny s malou molekulovou hmotností.

Do předloženého vynálezu je rovněž zahrnut způsob detekce sloučeniny mající obě aktivity, PPAR-α a PPAR-γ.

Vhodné postupy detekce zahrnují stanovení:

(a) aktivity PPAR-α agonisty zjištěním stimulace PPAR alfa chimérického receptoru sestávajícího z rozpoznávacího místa PPAR alfa ligandu spojeného s konstruktem vhodného reporterového genu; a (b) aktivity PPAR-γ agonisty zjištěním stimulace PPAR gama chimérického receptoru sestávajícího z rozpoznávacího místa PPAR gama ligandu spojeného s konstruktem vhodného reporterového genu, jako je luciferaza nabo chloramfenikol acetyltransferaza (CAT).

Vhodný PPAR-α chimérický receptor obsahuje aminokyseliny vazebné domény ligandu, například aminokyseliny 281-468 lidského PPAR-α, fúzované na aminokyseliny 1-147 (DNA vazebná doména) trankripčního faktoru 1-P-D-galaktoza-l-fosfátu 4 kvasinek.

Vhodný PPAR-γ chimérický receptor obsahuje aminokyseliny vazebné domény ligandu, například aminokyseliny 173-476 lidského PPAR-γ receptoru, fúzované na aminokyseliny 1-147 (DNA vazebná doména) trankripčního faktoru 1-P-D-galaktoza-l-fosfátu 4 kvasinek.

Vhodným konstruktem reporterového genu je luciferaza nebo chloramfenikol acetyltransferaza (CAT).

Vhodný konstrukt reporterového genu luciferazy obsahuje 1-P-D-galaktoza-l-fosfát 4 DNA vazebné elementy v HEK-293 buňkách.

· • · • ·· · «· ·· ·· ·· • · · · · · 9

9 9 9 9 99 ··· · ··· · · ' · 9 9 9 9

99 99 99

Vhodná metodika uvedených postupů detekce je stejná, jako je uvedeno výše.

Předložený vynález také poskytuje agonistů PPAR-α. a PPARγ, pro léčení a/nebo prevenci syndromu X.

Konkrétním ošetřením je prevence před hyperglykemií.

Konkrétním ošetřením je léčení prediabetického syndromu rezistence vůči inzulínu a z něj vyplývající komplikace.

Zahrnuje také léčení a/nebo prevenci hyperglykemie a/nebo prediabetického syndromu rezistence vůči inzulínu a z nich vyplývající komplikace/ s tou podmínkou, že uvedené ošetření nezahrnuje podávání:

(S) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2methoxyethoxy)propanové kyseliny; nebo (S) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2(2,2,2-trifluorethoxy)propanové kyseliny;

pro léčení a/nebo prevenci hyperglykemie, zejména diabetes typu II, hyperlipidemie, hypertenze, kardiovaskulárního onemocnění, zejména atherosklerozy a onemocnění ledvin, zejména chorob ledvin spojených s rozvojem diabetes typu II včetně diabetické nefropatie, glomerulonefritidy, glomerulární sklerózy, nefrotického syndromu, hypertenzní nefrosklerozy a konečného stadia nemoci ledvin, a pro prevenci, zvrat, stabilizaci nebo zpomalení postupu mikroalbuminurie na albuminurii.

Předložený vynález také poskytuje agonistů PPAR-α a PPAR-γ pro použití při výrobě léčiva pro léčení a/nebo prevenci syndromu X, konkrétně pro léčení a/nebo prevenci hyperglykemie a/nebo prediabetického syndromu rezistence vůči inzulínu a z něj vyplývajících komplikací; s tím, že uvedené ošetření nezahrnuje podání:

444 4 • 4

4*»

4

4 « » 44 *4 • 4 • · 4 < · ··

4 • · ·

44·* 444

4 4 * 4

444 4 4 · (S) — 3—[4—[2—[N— (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2(2-methoxyethoxy)propanové kyseliny; nebo (S) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2(2,2,2-trifluorethoxy)propanové kyseliny;

Toto je považováno za první indikaci sloučeniny, která má aktivitu agonisty obou, PPAR-α a PPAR-γ. Jiné sloučeniny, které mají tuto dvojí aktivitu, by mohly být také konkrétně použity pro léčení a/nebo prevenci syndromu X, včetně hyperglykemie a prediabetického syndromu rezistence vůči inzulínu a z něj vyplývajících komplikací.

Proto je dalším předmětem tohoto vynálezu sloučenina, která má aktivitu agonisty jak PPAR-α, tak PPAR-γ.

Vhodné sloučeniny jsou jedinečné v tom, že nejsou známé, že mají aktivitu agonisty obou PPAR-α a PPAR-γ , nebo jsou novými sloučeninami samy o sobě.

Z jednoho hlediska uvedené sloučeniny mající aktivitu agonisty obou PPAR-α a PPAR-γ nezahrnují:

(S) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2methoxyethoxy)propanovou kyselinu; nebo (S) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2(2,2, 2-trifluorethoxy)propanovou kyselinu.

• 9 « ·

9 ··

9 9 9 • · 99

9 9 9 • 9 9

9 ··

Vynález také poskytuje sloučeninu pro použití jako agonista obou PPAR-α a PPAR-γ.

Vynález dále poskytuje sloučeninu mající aktivitu agonisty obou PPAR-α a PPAR-γ pro použití jako účinná terapeutická látka; vhodně s tím, že sloučenina nezahrnuje:

(S) —3—[4—[2—[N— (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2methoxyethoxy)propanovou kyselinu; nebo (S) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2(2,2,2-trifluorethoxy)propanovou kyselinu.

Ve výše zmíněných léčení se účinná sloučenina podává jako taková nebo přednostně jako farmaceutický prostředek obsahující také farmaceuticky přijatelný nosič.

Proto předložený vynález také poskytuje farmaceutický prostředek obsahující agonistu PPAR-α a PPAR-γ a jeho farmaceuticky přijatelný nosič; vhodně s tím, že uvedený agonista nezahrnuje (S) — 3—[4—[2—[N— (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2methoxyethoxy)propanovou kyselinu; nebo (S) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2(2,2,2-trifluorethoxy)propanovou kyselinu.

Dále je poskytnut způsob léčení stavů způsobených požadavkem na agonistu obou PPAR-α a PPAR-γ u lidí nebo jiných savců než lidí, kdy tento způsob zahrnuje podání účinného, farmaceuticky přijatelného netoxického množství agonisty obou PPAR-α a PPAR-γ .

Termín „farmaceuticky přijatelný, jak se zde používá, zahrnuje sloučeniny, prostředky a přísady pro lidské i veterinární použití; například termín „farmaceuticky přijatelná sůl zahrnuje veterinárně přijatelnou sůl.

• 4 • ·

<4 44

4 4 4

4 4

4 4 4

Prostředky mohou být, pokud je to požadováno, ve formě balení opatřeného psaným nebo tištěným návodem na použití.

Obvykle jsou farmaceutické prostředky z předloženého vynálezu uzpůsobeny pro orální podání, ačkoliv je možné si představit prostředky pro podání jinými cestami, jako injekčně nebo perkutánní absorpcí.

Zejména výhodnými prostředky pro orální podání jsou jednotkové dávkové formy, jako jsou tablety a kapsle.

Rovněž mohou být použity jiné pevné jednotkové dávkové formy, jako prášková forma v sáčcích.

V souladu s běžnou farmaceutickou praxí může nosič obsahovat ředidlo, plnivo, dezintegrační prostředek, zvlhčovadlo, mazadlo, barvivo, ochucovadlo a další běžné přísady.

Typický nosič zahrnuje například mikrokrystalickou celulózu, škrob, natriumglykolát škrobu, polyvinylpyrrolidon, polyvinylpolypyrrolidon, stearat hořečnatý, laurylsulfat sodný nebo sacharozu.

Nejvýhodněji jsou prostředky v jednotkové dávkové formě. Taková jednotková dávka obsahuje normálně množství účinné složky v rozmezí od 0,1 do 1000 mg, obvykle od 0,1 do 500 mg a především od 0,1 do 250 mg.

Vhodně může být účinná složka podávána jako farmaceutický prostředek definovaný výše, a ten tvoří zvláštní předmět předloženého vynálezu.

Ve výše zmíněném léčení jsou účinné sloučeniny vhodně užívány v dávkách popsaných výše, jednou až šestkrát denně takovým způsobem, že celková denní dávka bude obvykle u dospělého jedince o hmotnosti 70 kg v rozmezí od 0,1 do 6000 mg, a běžněji asi od 1 do 1500 mg, obvykle asi od 0,5 do 10 mg, to znamená v rozmezí od 1,429 χ 10^-3 až do 85,714 mg/kg za den, • · · « > ft ·· • · · · ft • · · •« ·· běžněji asi od 1,429 x 10² do 21, 429 mg/kg za den, obvykle asi od 7,143 x 10~³ do 0, 1429 mg/kg za den.

Neočekává se žádné toxikologické působení při podávání sloučeniny podle výše zmíněného vynálezu.

Účinky předložených sloučenin mohou být demonstrovány použitím postupů popsaných dále. Následující přípravy dokládají přípravu sloučenin vzorce (I) .

Příklady provedení vynálezu

Příprava sloučenin vzorce (I)

Příprava 1

Způsob přípravy (S) -3-[4-[2-[N- (2-Benzoxazolyl) -Nmethylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2-methoxyethoxy)propanové kyseliny

Roztok [2S,N(1S)]—3—[4—[2—[N— (2-benzoxazolyl) -Nmethylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2-methoxyethoxy) -N- (2-hydroxy-lfenethyl)propanamidu (1,846 g) ve směsi s ÍM kyselinou sírovou (45 ml) a. dioxanem/vodou (1:1, 150 ml) se hřeje na 90 °C po dobu 56 hodin a potom se upraví pH směsi na 3 přidáváním vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Směs se extrahuje ethylacetátem a organické extrakty se promyjí vodou, roztokem chloridu sodného, suší se (MgSOJ a odpaří se za vzniku oleje. Purifikací chromatografii na silikagelu s použitím gradientu 1 až 5% methanolu v dichlormethanu jako eluens se získá pěna s nadbytkem enantiomeru (dále e.e. = enantiomeric excess) 88 % • 9

99 99 ·* ···· · · · · 9 · · · 9 9 99

9 9999 9999 9

9 9 9 9 9

9 9 99 9 9 (stanoveno pomocí HPLC). Produkt reaguje s (S)-amethylbenzylaminem· v acetonu a získaná sůl se rekrystalizuje několikrát z ethylacetátu a hexanu předtím, než je rozpuštěna ve vodě, okyselaná zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a extrahována ethylacetátem, který se suší MgSO₄. Odpaření ethylacetatového roztoku poskytne enantiomerně obohacenou sloučeninu uvedenou v názvu.

[a]_D ²⁵ -28 ⁰ (c = 0, 625, CHC1₃); e.e. 94% (HPLC) ;

Nalezeno M⁺ 414,1791. C₂2H26N₂O₆ vyžaduje M⁺ 414,1791;

^XH NMR spektrum je identické se spektrem popsaným v příkladu 5.

Příprava 2

Způsob přípravy (S) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]f enyl]-2- (2,2,2-trifluorethoxy)propanové kyseliny hydrolýzou amidu

och₂cf₃ [2S,N (1S) ]—3—[4—[2—[N— (2-Benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2-(2,2,2-trifluorethoxy)-N-(2-hydroxy-lfenylethyl)propanamid (z postupu 3) se hydrolyzuje postupem analogickým k postupu, který je popsán v přípravě 1. Purifikace chromatografií na silikagelu s použitím gradientu 0 až 5 % methanolu v dichlormethanu jako eluens poskytne sloučeninu uvedenou v názvu, t.t. 116 až 117 °C, po rozetření s diethylether-hexanem;

[ct]_D ²⁵ -24, 6 ° (c = 0,24, CHC1₃); e.e. 95% (HPLC);

Nalezeno: G, 57,9; H,. 4,7; N, 6,8 %; M⁺ 438,1403. C₂iH₂i F₃N₂O₅vyžaduje: C, 57,5; H, 4,8; N, 6,4 %; M⁺ 438,1403;

5_H(DMSO-d₆) 2,96 (2H, m) , 3,22 (3H, s), 3,88 (2H, m) , 3,95-4,18 (2H, m) , 4,27 (3H, m) , 6,8-7,37 (8H, m) a 12,9 (IH, široký s, výměny s D₂0) .

Příprava 3

Způsob přípravy (S) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2,2,2-trifluorethoxy) propanové kyseliny přímou hydrolýzou imidu

Vodný roztok hydroxidu sodného (2,5 M, 65 ml, 0,163 mol, 2,3 ekv.) se přidá do míchaného roztoku [3 (2S) , 4S]—3—[3—[4—[2— [N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2,2,2trif Iuorethoxy) propanoyl]-4-benzyloxazolidin-2-onu (z postupu 10) (42,5 g, 0,071 mol) v THF (500 ml) a vodě (125 ml). Směs se míchá po dobu 20 minut, reakční směs se zředí vodou (1 litr) a extrahuje dichlormethanem (3 x 700 ml). Získané dichlormethanové roztoky se odpaří a odparek se purifikuje chromatografií na silikagelu s použitím 5% methanolu v dichlormethanu jako eiuens a získá se (S)-4-benzyloxazolidin-2on. Původní vodný roztok se okyselí na pH 3,5 zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a opět se extrahuje dichlormethanem (3 x 700 ml). Dichlormethanové roztoky z extrakce kyselinou se suší (MgSO₄) a odpaří se za vzniku pevné látky. Tato látka se rekrystalizuje z dichlormethanu a diethyletheru za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, t.t. 119,5-120,5 °C.

• · t 1 • · · · * · · · • · · « · · · • 9 · · [a]_D ²⁵ -31 ° (c = 2,50, CHC1₃) ; e.e. 99,6% (HPLC);

Nalezeno: C, 57,7; H, 4,7; N, 6,25 %; M⁺ (El) 438,1412;

C21H21 F₃N₂O₅ vyžaduje: C, 57,5; H, 4,8; N, 6,4 %; M⁺ 438,1403,

5h (CDC1₃)	3,05 (IH,	dd) , 3,13 (lH,dd)	, 3,31	(3H, s),	3,72 (IH,
m) , 3,89	(2H, m), 4	,04-4,14 (3H, m) ,	4,21 (	IH, dd) ,	6,78 (2H,
d) , 7,03	-7,40 (6H,	m) a 11,20 (IH,	široký	signál,	výměny s
D₂O) ; 5_f (	DMSO-dg) =	-72,7 (3F, t, ³J_Hf	9,3 Hz,	CF₃) .

Příprava 4

Způsob přípravy (S) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2,2,2-trifluorethoxy) propanové kyseliny hydrolýzou jejího methylesteru

H OCH₂CF₃

Směs (S)-methyl 3-[4-[2-[N-(2-benzoxazolyl)-N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2, 2,2-trifluorethoxy) propanoatu (1,256 g, 2,8 x 10~³ mol), vodné kyseliny chlorovodíkové (2,0M, 50 ml) a dioxanu se ohřívá při refluxu 7 hodin, ochladí se a odpaří ve vakuu. Odparek se suspenduje v roztoku chloridu sodného (200 ml) a extrahuje ethylacetátem (3 x 300 ml) . Spojené ethylacetatové roztoky se suší (MgSO₄) a odpaří se za vzniku voskovité pevné látky. Tato pevná látky se rozetře s hexanem, filtruje se a suší pod vakuem při 65 °C a získá se požadovaný produkt, t.t. 113-115°C.

[a]_D ²⁵ = - 32 ⁰ (c = 1,02, CHC1₃); e.e. 99,4% (HPLC);

Nalezeno: C, 57,25; H, 4,8; N, 6,3 %;

C1H21 F₃N₂O₅ vyžaduje: C, 57,5; H, 4,8; N, 6,4 • · v · · · · · · · • · · · · · · « · 9 9 99

9 · · ·

99 9 999 9 9 9 9

9 9 9 9 ·

Spektrum ¹H NMR tohoto materiálu bylo identické se spektrem sloučeniny vyrobené v příkladu 3.

Příprava 5

Způsob přípravy (S) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2-methoxyethoxy) propanové kyseliny

H OCHjCHjOMe (S) -Methyl-3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2-(2-methoxyethoxy) propanoat se hydrolyzuje podobným způsobem, jako je.popsán v příkladu 4. Surová reakční směs se chromatografuje na silikagelu s použitím 5% methanolu v dichlormethanu jako eluens a získá se sloučenina uvedená v názvu, jako gumovitá látka.

[ot]_D ²⁵ “ -27 ° (c = 0,73, CHC1₃) ; e.e. 99,8% (HPLC);

Nalezeno: M⁺ (El) 414,1779;

C22H26 F₃N₂O₆ vyžaduje: M⁺ 414,1791;

δ_Η (CDCIs) 2,90 (IH, dd) , 3,15 (lH,dd), 3,33 (3H, s) , 3,37 (3H,

s) , 3,40-3, 70 (4H, m) , 3,93 (2H, t) , 4,05 (IH, dd) , 4,21 (2H,

t) , 6,81 (2H, d) a 6,95-7,40 (6H, m) .

Příprava 6

Způsob přípravy (+)-3-[4-[2-[N-(2-benzoxazolyl)-N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2-methoxyethoxy)propanové kyseliny * · • « • · ·

COjH

O

OCH₃

Směs methyl-3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2-(2-methoxyethoxy) propanoatu (1, 08 g, mezinárodní patentová přihláška zveřejněná jako WO 94/01420} a hydroxidu sodného (253 mg) v methanolu:vodě (1:1, 10 ml) se zahřívá pod refluxem 2 hodiny. Po odpaření získané směsi ve vakuu se zbytek zředí vodou, okyselí se na pH 5 přidáním 2M kyseliny chlorovodíkové a potom se extrahuje ethylacetátem. Promytím ethylacetátových extraktů vodou, sušením (MgSO₄) a odpařením se získá sloučenina uvedená v názvu jako olej, který krystaluje po rozetření s diethyletherem/hexanem.

Nalezeno: C, 63,8; H, 6,5; N, 7,0 %; M⁺ 414,1791,

C₂₂H₂₆ N₂O₆ vyžaduje: C, 63,8; H, 6,3; N, 6,8 %; M⁺ 414,1791;

δ_Η (CDCls) 2,91 (IH, dd) , 3,15 (IH, dd) , 3,34 (3H, s), 3,38 (3H,s), 3,41-3,69 (4H, m) , 3,93 (2H, t) , 4,05 (IH, dd) , 4,21 (2H, t) , 6,80 (2H, d) a 6, 83-7, 38 (6H, m) .

Postup 2

Příprava 7

Způsob přípravy (±)-3-[4-[2-[N-(2-benzoxazolyl)-N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2-methoxyethoxy) propanoylchloridu

O

COCI

« · * « • · « «· ·· • · · ·

Oxalylchlorid (92 mg) se přidá ke (±) -3-[4-[2-[N- (2benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2-methoxyethoxy) propanové kyselině (100 mg) v dichlormethanu (2 ml) . Směs se míchá při teplotě místnosti po 16 hodin a odpaří se do sucha za vzniku sloučeniny uvedené v názvu jako gumovité látky, která se použije bez dalšího čištění.

Příprava 8

Způsob přípravy [2S,N(lS)]-3-[4-[2-[N-(2-benzoxazolyl)-Nmethylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2-methoxyethoxy) -N- (2-hydroxy-lfenethyl)propanamidu

(±) -3-[4-[2-[N- (2-Benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2(2-methoxyethoxy)propanoylchlorid se rozpustí v dichlormethanu (2 ml) a směsi (S)-2-fenylglycinolu (33 mg) a přidá se suchý triethylamin (37 g) v dichlormethanu (1 ml). Po míchání během 5 minut se přidá voda a směs se extrahuje dichlormethanem. Organické extrakty se promyjí vodou, roztokem chloridu sodného, suší se (MgSO₄) a odpaří. Odparek se chromatografuj e na silikagelu s použitím gradientu 10 až 50% acetonu v hexanu jako eluens, a získá se nejprve [2R,N (1S) ]—3—[4—[2—[N— (2benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2-methoxyethoxy) -N(2-hydroxy-l-fenylethyl)propanamid, jenž následuje požadovaná ·· ·· 44 ♦· • · 4 4 · · · • 4 4 · 4 4 4 « 444· 4444 · • 4 4 4 4 • 4 4 4 ·· ·* [2S,N(lS)]-propanamidová sloučenina uvedená v názvu, který je ve formě pěny.

[a]_D ²⁵ = -33 (c = 1,1, CHC1₃) ; 92,6% d.e. (stanoveno pomocí

HPLC);

Nalezeno: M⁺ 533,2526;

C30 H35N3O5 vyžaduje: M⁺ 533,2526;

Óh (CDCI3) 2,81	(IH, dd), 3,07	(IH,	dd) , 3,35	(3H, s),	3,36 (3H,
s), 3,48-3,58	(2H, m), 3,52-3	,62	(2H, m) , 3	,71 (IH,	dd) ,	3, 82
(IH, dd) , 3,94	(IH, dd), 3,93	(2H,	t), 4,22	(3H, t),	5, 05	(IH,

dt), 6,75-7,35 (13H, komplex), 7,54 (IH, široký signál, výměna s D₂O) .

Postup 4

Příprava 9

Způsob přípravy (±) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]f enyl]-2- (2,2,2-trifluorethoxy) propanové kyseliny

.CO,H

OCH₂CF₃

Methyl-3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2,2,2-trifluorethoxy) propanoat {mezinárodni patentová přihláška, zveřejněná pod WO 94/01420) byl hydrolyzován postupem, který je analogický k postupu popsanému v přípravě 5 za vzniku sloučeniny uvedené v názvu jako pevné látky, t.t. 116-117 °C;

Nalezeno: C, 57,4; H, 4,9; N,. 6,4 %;

• · · ·

t· ··

C21H21F3N2O5	vyžaduje:	C, 57,5;	H, 4,8; N,	6,4	%;
δ_Η (CDC1₃)	3,03-3,17	(2H, m),	3,29 (3H,	s) ,	3,73-3,83	(IH, m) ,
3,85 (2H,	m) , 4,02	(2H, m),	4,04-4,30	(2H,	m) a	6, 74-7,40

(8H, m) .

Postup 5

Příprava 10

Způsob přípravy (±) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2,2,2-trifluorethoxy) propanoylchloridu

CH,

.COCI och_zcf₃

Oxalylchlorid (1,1 ml) se přidá do roztoku (±) —3—[4—[2— [N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2,2,2trifluorethoxy)propanové kyseliny (1,72 g) v suchém benzenu (30 ml). Směs se zahřívá pod refluxem 2 hodiny, ochladí se a odpaří do sucha za vzniku sloučeniny uvedené v názvu jako gumovité látky, která se používá bez dalšího čištění.

Postup 6

Příprava 11

Způsob přípravy [2S,N(lS)]-3-[4-[2-[N-(2-benzoxazolyl)-Nmethylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2,2,2-trifluorethoxy) -N- (2-hydroxy1-fenylethyl)propanamidu

• · • 0 · * « • · <

«· ·· (±) -3-[4-[2-[N- (2-Benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]2- (2,2,2-trifluorethoxy)propanoylchlorid reaguje s (S)—2 — fen.ylglycin.olem analogickým postupem, jako je popsán v postupu 3. Chromatografií na silikagelu použitím gradientu 10 až 70% ethylacetátu v hexanu jako eluens se získá nejprve [2R,N(1S)]3— [4—[2—£N— (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2,2,2trifluorethoxy)-N-(2-hydroxy-l-fenylethyl)propanamid, jenž následuje požadovaná [2S,N (1S) j-propanamidová sloučenina uvedená v názvu, který je ve formě pěny.

[cc]_D ²⁵ = +14 ° (c = 0,5, MeOH); 99% d.e. (HPLC);

Nalezeno:	M⁺ 557,2136;
C29H30F3N3O5 vyžaduje: M^d	’ 557,2138;
δ_Η (CDCla)	2,35 (IH, široký signál, výměna	s D₂O), 2,91	(IH,
dd) , 3,13	(IH, dd), 3,36	(3H, s), 3,70-3,87	(2H, m) , 3,84	(2H,
d) , 3,95	(2H, t), 4,12 (	IH, dd) , 4,22 (2,	t), 5,01 (IH,	m) ,
6,75 (2H,	d) , 6,97 (IH,	široký s, výměna	s D₂O) a 7,01 —	•7, 36

(11H, komplex).

Příprava 12

Způsob přípravy (2,2,2-trifluorethoxy)ethanoylchloridu

COCI

OCH₂CF₃

Roztok oxalylchloridu (20 ml, 0,23 mol, 1,15 ekv.) v suchém dichlormethanu (50 ml) se přidává po kapkách při teplotě místnosti za míchání do roztoku (2,2,2-trifluorethoxy)ethanové kyseliny [mezinárodní patentová přihláška zveřejněná jako WO • 0 00

0 0 *

0 00 · 0 ·

0 · • · • 0

87/07270, 31,6 g, 0,2 mol) a N,N-dimethylformamidu (5 kapek) v suchém dichlormethanu (400 ml). Směs se míchá po další hodinu, potom se zahřívá pod refluxem 2 hodiny, ochladí se a převážná část rozpouštědla se odpaří destilací (t.v. 40 až 45 °C/760 mm Hg, tj. asi 100 kPa). Odparek se přenese do Claisenovy destilační baňky a zbývající rozpouštědlo a oxalylchlorid se odstraní destilací (t.v. 45-60 °C/760 mm Hg, tj. asi 100 kPa) . Vakuovou destilací se potom získá produkt, t.v. 50-55 °C/22-32 mm Hg. ťj. 3325 až 4256 Pa.

δ_Η (CDC1₃) 4,00 (2H, q, ³J_HF 8,3) a 4,57 (2H, s) .

Postup 8

Příprava 13

Způsob přípravy (4S) -4-benzyl-3-[2- (2,2,2-trifluorethoxy) ethanoyl]oxazolidin-2-onu

(S)-4-Benzyloxazolidin-2-on (5,21 g, 0/029 mol) se rozpustí v suchém THF (60 ml) a ochladí se na -70 °C pod argonem. Přidává se n-butyllithium (18,4 ml, 1,6M roztok v hexanu, 1,1 ekv.) během 10 minut a získaná směs se míchá při -70 °C po 20 minut. Po dobu 10 minut se přidává roztok (2,2,2trifluorethoxy)ethanoylchloridu (5,19 g, 1 ekv.) v suchém THF (60 ml), směs se míchá při -70 °C po dalších 30 minut a potom se ponechá ohřát na teplotu místnosti přes noc. Reakce se přeruší přidáním roztoku chloridu sodného (20 ml) a odpaří ve vakuu. Odparek se zředí roztokem chloridu sodného (300 ml) a

• · · • · · ·· · · · • · · • · «· ·· • · « • · ··· · ·· extrahuje se ethylacetátem (3 x 300 ml) . Spojené organické extrakty se suší (MgSO₄), odpaří se a odparek se chromatografuje na silikagelu s dichlormethanem jako eluens za vzniku produktu jako oleje.

[a]_D ²⁵ “ +48 ⁰ (c = 2,25, CHC1₃); e.e. 100% (HPLC);

Nalezeno (Cl, amoniak): MH⁺ 318,0934;

Ch H14NO4F3 vyžaduje: MH⁺ 318, 0953;

δ_Η (CDC1₃) 2,82 (IH, dd), 3,34 (IH, dd) , 4,02 (2H,q, ³J_Hf 8,6),

4,30 (2H, m) , 4,69 (IH, m) , 4,84 (2H, s) , a 7,15-7,40 (5H, m) ; 5_f (CDC1₃) = -74,8 (3F, t, ³J_HF 8,6, CF₃) .

Postup 9

Příprava 14

Způsob přípravy [3 (2S,3R) , 4S]-3-[3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -Nmethylamino]ethoxy]f enyl]-3-hydroxy-2- (2,2,2-tri fluore thoxy) propanoyl]-4 -benzyloxazolidin-2-onu

(4S) -4-Benzyl-3-[2- (2,2,2-trifluorethoxy) ethanoyl]oxazolidin-2-on (31,7 g, 0,1 mol) se rozpustí v suchém dichlormethanu (300 ml) pod argonem a ochladí se na -78 °C (vnitřní teplota roztoku), použitím kapalného dusíku/acetonu jako chladicího media. Přidá se triethylamin (16,72 ml, 1,2 ekv.), následuje pomalé přidávání, během přibližně 10 minut, di-nbutylbor-trifluormethansulfonatu (Aldrich Chemical Company, l,0M roztok v dichlormethanu, 110 ml, 1,1 ekv.) tak, že se • ··· ···· · reakční teplota udržuje pod -70 °C. Směs se míchá při -78 °C po dobu. 50 minut, potom se chladicí lázeň nahradí ledovou lázní a směs se míchá při 0 °C po dalších 50 minut předtím, než se opětovně ochladí na -78 °C. Roztok 4-[2-[N-(2-benzoxazolyl)-Nmethylamino]ethoxy]benzaldehydu (29,6 g, 1,0 ekv.) v suchém dichlormethanu (220 ml), předem ochlazený na -50 °C, se přidává během asi 12 minut tak, že se reakční teplota udržuje pod -7 0 ’C. Získaná směs se míchá při -78 °C po 30 minut, potom se ohřívá z -7 8 °C na 0 °C po dobu 60 minut lineárním vzestupem (rychlost ohřívání přibližně 1,3 ^oC.min^_:L) a míchá se při 0 ’C po dalších 75 minut. Reakční směs se nalije do zchlazeného roztoku methanolu (500 m), fosfátového pufru s pH 7 (250 ml) a peroxidu vodíku (27,5% hmotn./obj., 110 ml) a intenzivně se míchá 30 minut. Přidá se voda (4 litry), vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 χ 1 litr). Dichlormethanové roztoky se spojí s původní dichlormethanovou vrstvou z reakční směsi a tento organický roztok se potom promyje vodou (2 litry) a roztoku chloridu sodného (2 litry), suší se (MgSO₄) a odpaří se za vzniku pěny. ^XH NMR této surové reakční směsi svědčí o směsi požadovaného aldolového produktu (3 diastereoisomery, obsahující 95 % majoritního diastereoisomeru) a výchozích materiálů. Surová směs se chromatografuje na silikagelu s použitím elučního gradientu s obsahem původně 15% ethylacetátu v dichlormethanu (dokud se nezačne požadovaný produkt vymývat) a zvýšením na 50 % ethylacetátu v dichlormethanu do skončení eluce požadovaného produktu. Nezreagovaný imid a aldehyd se regenerují z prvních frakcí, následuje zhodnocení nečistého produktu a potom sloučeniny uvedené v názvu (obsahující 2 diastereoisomery, poměr 97,8 : 2,2 stanoveno NMR).

Md²⁵ + 45 ° (c = 2,82, CHC1₃) ;

·· ·· ·· ·« • · · · · · · • · · · · · · • ··· · ··· · · • · · · · ·· ·· ·· ·>·

ft ·

Nalezeno: (El) M⁺ 613,2042; C31H30F3N3O7 vyžaduje: M⁺ 613, 2036;

δ_Η (CDC1₃., je zaznamenán pouze majoritní diastereoisomer) 2,75 (IH, dd) , 2,90 (lH,d, výměna s D₂O) , 3,25 (IH, dd) , 3,34 (3H, s), 3,80-4,00 (5H, m) , 4,07 (IH, dd) , 4,24 (2H, t) , 4,45 (IH, m) , 4,99 (IH, zřejmý t) , 5,48 (IH, d) , 6,82 (2H, d) a 6,957,40 (11H, m);

5_F(CDC1₃)

-74,7 (3F, t,

Minoritní diastereoisomer v čistém produktu byl identifikován jako [3 (2S, 3S) , 4S]-diastereoisomer.

Postup 10

Příprava 15 způsob přípravy [3(2S), 4S]-3-[3-[4-[2-[N-(2-benzoxazolyl)-Nmethylamino]ethoxy]fenyl]-3-hydroxy-2- (2,2,2-trif luorethoxy) propanoyl]-4 -benzyloxazolidin-2-onu dehydratací

Triethylsilan (120 ml, 0,75 mol) se přidává po dobu 5 minut do míchaného ledově chladného roztoku [3(2S,3R), 4S]— 3-[3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-3hydroxy-2- (2,2,2-trifluorethoxy) propanoyl]-4-benzyloxazolidin2-onu (46, 23 g, 7,5 x 10² mol) v kyselině trifluoroctové (650 ml) . Směs se míchá při 0 °C po 1 hodinu, potom při teplotě místnosti po dobu dalších 60 hodin. Větší část rozpouštědla a zbytkový triethylsilan se odpaří na rotační odparce, nejprve při tlaku 5320 Pa .(40 mm Hg) a nakonec při tlaku asi 665 Pa (5 • 9 · ·

9 9 9

9 99 • •9 9 9

9 9

99 • · 9 ·

9 9 9

9 9 9 • · 9 99 9

9 9 • 9 99

9 99 • 9 • · · • 9

999» 999 mm Hg) . Odparek se rozpustí v dichlormethanu (800 ml) a vodě (800 ml), potom se intenzivně míchá během opatrného přidávání pevného hydrogenuhličitanu sodného (asi 29 g) (pění!) až je pH vodné vrstvy 7. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (800 ml) . Spojené dichlormethanové vrstvy se promyjí vodou (600 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se. Odparek se rozetře s horkým hexanem a získaná pevná látka se zachytí filtrací. Rekrystalizace z diethyletheru a hexanu poskytne sloučeninu uvedenou v názvu, t.t. 107-109 °C, jediný diastereoisomer stanoven ^XH NMR spektroskopií.

[a]_D ^{25 =} +38 ⁰ (c = 1,51 CHC1₃) ;

Nalezeno: C,62,l; H,4,9; N,7,2 %; M⁺ (El) 597,2089;

C₃iH₃oN₃06F3	vyžaduj e:	C,62,3; H, 5,1; N, 7,0 %;	M⁺	597,2087;
δ_Η (CDC1₃)	2, 82	(IH,	dd), 2,96 (IH, dd), 3,	04	(IH, dd) , 3,32
(1Ή, dd),	3,34	(3H,	s); 3,70 (IH, m) , 3,88	(IH.	, m), 3,94 (2H,
t), 4,12	(IH,	m) , 4	, 18 (IH, m) , 4,25 (2H,	t) ,	4,57 (IH, m) ,
5,34 (IH,	dd) ,	6, 82	(2H, d) a 7,00-7,35 (11H,	m)	Z

5_f(CDC1₃) =.-74,8 (3F, t, ³J_HF8,6, CF₃) .

Postup 11

Příprava 16

Způsob přípravy [3(2S),4S]-3-[3-[4-[2-[N-(2-benzoxazolyl)-Nmethylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2,2,2-trif luorethoxy) propanoyl]-4benzyloxazolidin-2-onu diastereoisomerní separací

N CH, o

• ·

(S)-4-Benzyloxazolidin-2-on (0,291 g, 1,64 x 10³ mol) se rozpustí v suchém THF (10 ml) a získaný roztok se ochladí na teplotu -70 °C pod argonem. Přidá se n-butyllithium (1,6M v hexanu, 1,03 ml, 1,64 x 10^-3 mol) a směs se míchá při -70 °C po dobu 10 minut před přidáním roztoku (±) -3-[4-[2-[N- (2benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]f enyl]-2- (2,2,2-trifluorethoxy)propanoylchloridu (připravený z 0,36 g kyseliny výše uvedeného postupu 5) v suchém THF (15 ml) . Reakční směs se míchá a ponechá se'ohřát na teplotu místnosti přes noc předtím, než se zředí vodou (200 ml) a extrahuje ethylacetátem (2 x 200 ml). Spojené ethylacětátové vrstvy se promyjí vodou (200 ml) a roztokem chloridu sodného (200 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se za vzniku hnědé látky charakteru gumy. Tato se chromatografuje na silikagelu použitím gradientu z 35 na 50 % ethylacetátu v hexanu jako eluens a získá se nejprve (R,S)-diastereoisomer, následovaný sloučeninou uvedenou v názvu ve formě pěny. Tento materiál je spektroskopicky identický s materiálem připraveným cestou aldolu (postup 10).

Postup 12

Příprava 17

Způsob přípravy (S)-methyl [3-[4-[2-[N-(2-benzoxazolyl)-Nmethylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2,2,2-trif luore thoxy) propanoatu

Roztok methoxidu sodného [připravený z natriumhydridu (60% disperze v minerálním oleji, 138 mg, 3,41. χ 10'³ mol) rozpuštěného v suchém methanolu (3,5 ml)] se přidá do ledem ochlazené a míchané suspenze [3 (2S) , 4S]-3-[3*-[4-[2-[N-(2benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2,2, 2-trif luorethoxy) propanoyl]-4-benzyloxazolidin-2-onu (1, 879 g, 3,1 x 10 ”³mol) v suchém methanolu (100 ml) . Směs se míchá při 0 °C celkově po dobu 20 minut, potom se reakční směs zchladí přídavkem zředěné vodné chlorovodíkové kyseliny (2,0M, 1,75 ml) a odpaří se ve vakuu. Odparek se suspenduje ve vodě (100 ml), extrahuje ethylacetátem (3 x 200 ml) a spojené ethylacetátové roztoky se promyjí roztokem chloridu sodného (500 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří. Výsledná gumovitá látka se chromatografuje na silikagelu s použitím 4% ethylacetátu v dichlormethanu jako eluens a získá se produkt jako čirá gumovitá látka.

[a]_D ²⁵ = -17 ° (c = 1,24, CHC1₃) ;

Nalezeno: (El) M⁺ 452,1561;

C22H23N2O5F3 vyžaduje: M⁺ 452, 1559; e.e. 100% (HPLC);

δ_Η (CDC1₃)	3, 02	(2H,	m) ,	3,34	(3H, s), 3,65	(IH,	m)	, 3,72	(3H,
s) , 3,94	(2H,	t) ,	4,00	(IH,	m) , 4,13 (IH,	dd) ,	4,	24 (2H,	t) ,
6,80 (2H,	d) a	6, 96·	-7, 40	(6H,	m) .

Postup 13

Příprava 18

Způsob přípravy (4S) -4-Benzyl-3-[2-{2-methoxyethoxy) ethanoyl]oxazolidin-2-on

MeO

··· · · · · · · · · • » · · · · · · · · • ·· · · · · · ···· · • · · · · · · • · ·· ·· ·· ·· ··

Sloučenina uvedená v názvu se připraví z 2-(2-methoxyethoxy) ethanoylchloridu postupem analogickým s postupem popsaným v postupu 8, Chromatografií na silikagelu s použitím gradientu 70 až 80% diethyletheru v hexanu jako eluens se získá produkt ve formě gumovité látky.

[ct]_D ²⁵ = +54 ° (c = 2,70 CHC1₃) ;

Nalezeno: (El) M⁺ 293, 1263;

C15H19NO5 vyžaduje: M⁺ 293,1264;

δ_Η (CDCls) 2,81 (IH, dd) , 3,33 (IH, dd) , 3,41 (3H, s) , 3,63 (2H, t) , 3,78 (2H, t) , 4,25 (2H, m) , 4,70 (IH, m), 4,74 (IH, d) , 4,76 (IH, d) a 7,10-7,40 (5H, m) .

Postup 14

Příprava 19

Způsob přípravy [3(2S,3R),4S]-3-[3-[4-[2-[N-(2-benzoxazolyl)-Nmethylaniino]ethoxy]fenyl]-3-hYdroxy-2- (2-methoxyethoxy) propanoyl] - 4 -benzyl oxazol idin-2 -onu

Sloučenina uvedená v názvu se připraví z (4S)-4-benzyl-3[2-(2-methoxyethoxy) ethanoyl]oxazolidin-2-onu postupem analogickým s postupem popsaným v postupu 9. Surová reakční směs se chromatografuje na silikagelu s použitím gradientu 15 až 40 % ethylacetátu v dichlormethanu a získá se produkt jako gumovitá • · ··

I · · I látka (obsahující 2 diastereoisomery, poměr >99:1, stanoveno pomocí ¹H NMR) .

[ot]_D ²⁵ = +49 ° (c = 1,14, CHC1₃);

Nalezeno: (FAB, NOBA/Na) MH⁺ 590,2472;

C32H35N3O8 vyžaduje: MH⁺ 590,2502;

δ_Η (CDC1₃, je zaznamenán pouze majoritní diastereoisomer) 2,71 (IH, dd) , 3,25 (IH, dd), 3,31 (3H, s) , 3,35 (3H, s) , 3,56 (2H, m) , 3,72 (2H, m) , 3,78 (IH, d, výměna s D₂O) , 3, 85-4,00 (4H, m) , 4,22 (2H, t) , 4,31 (IH, m) , 4,89 (IH, dd) , 5,42 (IH, d) , 6,83 (2H, d) a 6, 95-7, 40 (11H, m) .

Minoritní diastereoisomer v čistém produktu byl identifikován jako [3 (2S, 3S), 4S]-diastereoisomer.

Postup 15

Příprava 20

Způsob přípravy [3 (2S) ,4S]-3-[3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -Nmethylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2-methoxyethoxy) propanoyl]-4benzyloxazolidin-2-onu

[3 (2S, 3R) , 4S]-3-[3-[4-[2-[N- (2-Benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-3-hydroxy-2- (2-methoxyethoxy) propanoyl]-4benzyloxazolidin-2-on (0,561 g) reaguje s triethylsilanem po dobu 6,25 hodin způsobem, který je podobný způsobu popsanému pro postup 10. Reakční směs se zředí vodou (200 ml) a dichlormethanem (200 ml) a opatrně se přidává pevný hydrogenuhličitan sodný, až má vodná vrstva pH 6,5. Vrstvy se oddělí, vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 300 ml) a spojené dichlormethanové roztoky se promyjí roztokem chloridu sodného (400 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří. Odparek se chromatografuje na silikagelu s použitím 35 % ethylacetátu v dichlormethanu jako eluens za vzniku sloučeniny uvedené v názvu ve formě gumovité látky, jako jediného diastereoisomeru, stanoveno pomocí ¹H NMR.

[a]_D ²⁵ = +45 ° (c = 1,39, CHC1₃) ;

Nalezeno: M⁺ (El) 573,2473;

C32H35N3O7 vyžaduje: M⁺ 573,2475;

δ_Η (CDCI3) 2,76 (IH, dd) , 2,94 (2H, m) , 3,30 (3H, s) , 3,33 (4H, m) , 3, 40-3,70 (4H, m) , 3,93 (2H, t) , 4,00 (IH, dd) , 4,12 (IH, dd) , 4,22 (2H, t) , 4,52 (IH, m) , 5,31 (IH, dd) , 6,79 (2H, d) a

6, 90-7,40 (11H, m) .

Postup 16

Příprava 21

Způsob přípravy (S)-methyl-[3-[4-[2-[N-(2-benzoxazolyl)-Nmethylamino]ethoxy]f enyl]-2- (2-methoxyethoxy) propanoatu [3 (2S) , 4S]-3-[3-[4-[2-[N- (2-Benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2- (2-methoxyethoxy) propanoyl]-4-benzyloxazolidin2-on reaguje s methoxidem sodným postupem analogickým k postupu popsanému v postupu 12. Surová reakční směs se • · · · * · · · ·· · · · · · · · · · · • · · · · · • · · · · ♦ · · chromatografuje na silikagelu s použitím 20% isohexanu v diethyletheru jako eluens a získá se sloučenina uvedená v názvu jako látka charakteru gumy.

[cc]_D ²⁵ = -12 ° (c = 1,26, CHC1₃);

Nalezeno: M⁺ (El) 428,1974;

C23H28N2O6 vyžaduje: M⁺ 428,1948; e.e. >99,8% (pomocí HPLC);

δ_Η (CDC1₃) 2,95 (2H, m) , 3,29 (3H, s) , 3,34 (3H, s) , 3,35 (3H, m) , 3,69 (4H, m) , 3,93 (2H, t) , 4,05 (IH, dd) , 4,23 (2H, t) a 6,75-7,40 (8H, m).

Doložení účinnosti sloučenin

1) Stanovení aktivity hPPAR-α a hPPAR-γ agonisty

Účinky sloučenin agonistů na lidský PPAR-α a PPAR-γ byly testovány použitím testu transaktivačního reporterového genu, založeném na testu, který popsal Lehman a kol. v J. Biol. Chem., 220, 12953-12956 (1995).

Výsledky

Účinky (S) — 3—[4—[2—[N— (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2-(2,2,2-trifluorethoxy)propanové kyseliny na hPPAR-α a . hPPAR-γ

EC₅o pro aktivaci lidského PPAR-α je = 2500 nM;

EC₅₀ pro aktivaci lidského PPAR-γ je = 70 nM.

2) Stanovení účinnosti sloučeniny na krevní glukóze a lipidech plasmy v C57 Bl/KsJ db/db myši

Geneticky diabetická C57 Bl/KsJ db/db myš vykazuje řadu forem na inzulínu nezávislého diabetes mellitus v tom, že rozvíjí těžkou hyperglykemii ve věku asi 8 -týdnů. To je

doprovázeno glykosurií a polyurií s kompenzačním zvýšením příjmu vody. Cirkulující triglyceridy a volné mastné kyseliny v seru jsou také zvýšeny.

Sloučeniny jsou podávány v dietní směsi (prášková dieta RM3) po 14 dní a měří se krevní glukóza ve vzorcích odebraných při vědomí z ocasní vény nepostících se myší v příslušných intervalech v průběhu ošetřování. Po 14-denním období ošetřování jsou myši usmrceny cervikální dislokací a získá se krev z oddělených hrdelních vén. Ve vzorcích sera získaných odstředěním se měří triglyceridy a neesterifikované mastné kyseliny. ^**

Účinnost (S) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]f enyl]-2- (2,2,2-trifluorethoxy) propanové kyseliny na krevní glukózu diabetické myši

		Kontrolní vzorek	Ošetřený vzorek
Exp. I	Krev. glukóza(mmol/1) před dávkou	15,5 ± 3,7	15,6 ± 4,0
	po dávce (13 dní)	34,0 ± 7,9	***11,0 ±3,6
	Krev.glukóza (mmol/1) před dávkou	16,5 ± 2,9	16,2 ± 4,3
	Den 1	17,2 ± 3,7	14,1 ± 3,7
Exp.11.	Den 2	19,9 ± 2,7	**15,0 ±3,4
	Den 3	20,2 ± 3,9	***12,2 ±5,1
	Den 5	21,2 ± 1,9	***11,3 ±3,6
	Den 7	23,4 ± 2,0	***11,7 ±3,7

Výsledky jsou průměry ± směrodatná odchylka (n = 9 až 10 na skupinu), **p <0,01;· *** p <0,001 oproti kontrolnímu vzorku.

Účinek (S) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]-2-(2,2,2-trif Iuorethoxy) propanové kyseliny na sérové lipidy geneticky diabetické myši

Parametr	Kontrolní vzorek	Ošetřený vzorek (0,3 μιηοΐ/kg tělesné hmotnosti)
Sérum neesterifikovaných mastných kyselin (mmol/kg)	2,58 ± 0,45	***1,28 ±0,15
Sérum triglyceridů (mmol/1)	3,78 ± 1,34	***2,58 ± 0,45

Parametry byly měřeny u vzorků odebraných po 14 dnech ošetřováni (dietní směs) . Hodnotami jsou průměry ± směrodatná odchylka (n = 9) .

***p < 0,001 oproti kontrolním vzorkům.

Claims

PATENTOVÉ

NÁROKY

1. Použití agonisty PPAR-a farmaceuticky přijatelného farmaceutického prostředku k a PPAR-γ nebo derivátu pro léčení a/nebo j eho výrobu prevenci syndromu X u lidí nebo savců odlišných od člověka.
2. Použití agonisty PPAR-α a PPAR-γ nebo jeho farmaceuticky přijatelného derivátu podle nároku 1, pro výrobu farmaceutického prostředku k léčení a/nebo prevenci syndromu X u lidí nebo savců odlišných od člověka, kde agonistou PPAR-α a PPAR-γ je stejná sloučenina.
3. Použití agonisty PPAR-α a PPAR-γ nebo jeho farmaceuticky přijatelného derivátu podle nároku 1 nebo 2, pro výrobu farmaceutického prostředku k léčení a/nebo prevenci hyperglykemie.
4. Použití agonisty PPAR-α a PPAR-γ nebo jeho farmaceuticky přijatelného derivátu podle nároků 1 až 3, pro výrobu farmaceutického prostředku k léčení prediabetického syndromu odolnosti vůči inzulinu a z něj vyplývajících komplikací.

·· ·· ··

4 4 4 · · ·

4 · ♦ ·« « t 444 4 <

• · · < «««44 4 · · ·

44 4444 a PPAR-γ derivátu nebo pro j eho výrobu léčení a/nebo prevenci
5. Použití agonisty PPAR-a. farmaceuticky přijatelného farmaceutického prostředku k hyperglykemie a/nebo prediabetického syndromu rezistence vůči inzulínu a z nich vyplývajících komplikací u lidí nebo savců odlišných od člověka, s tou podmínkou, že není zahrnuto použití:

(S) —3—[4—[2—[N— (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]2-(2-methoxyethoxy)propanové kyseliny; nebo (S) -3-[4-[2-[N- (2-benzoxazolyl) -N-methylamino]ethoxy]fenyl]2-(2,2,2-trifluorethoxy)propanové kyseliny;

pro výrobu farmaceutického prostředku k léčení a/nebo prevenci hyperglykemie, zejména diabetes typu II, hyperlipidemie, hypertenze, kardiovaskulárního onemocnění, zejména atherosklerozy a onemocnění ledvin, zejména chorob ledvin spojených s rozvojem diabetes typu II včetně diabetické nefropatie, glomerulonefritidy, glomerulární sklerózy, nefrotického syndromu, hypertenzní nefrosklerozy a konečného stadia nemoci ledvin, a k prevenci, zvratu, stabilizaci nebo zpomalení postupu mikroalbuminurie na albuminurii.
6. Použití agonisty PPAR-α a PPAR-γ nebo jeho farmaceuticky přijatelného derivátu podle některého z nároků 1 až 5, pro výrobu farmaceutického prostředku k

44 44

44 4 4 4 4 4 4444

444 4 444 44

4 44 « 4 444444 4

444 44 444

44 4 444 4444 44 ·· léčení a/nebo prevenci syndromu X u lidí nebo savců odlišných od člověka, kde agonistou PPAR-α a PPAR-γ je sloučenina vzorce (I) (I) ve kterém

R° znamená 2-benzoxazolyl nebo 2-pyridyl a R¹ znamená CH₂OCH₃ nebo CF₃, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl a/nebo farmaceuticky přijatelný solvát.
7. Použití agonisty PPAR-cc a PPAR-γ nebo jeho farmaceuticky přijatelného derivátu podle nároku 5, pro výrobu farmaceutického prostředku k léčení a/nebo prevenci syndromu X u lidí nebo savců odlišných od člověka, kde agonistou PPAR-cc a PPAR-γ je sloučenina vzorce (I), ve kterém R° znamená 2-benzoxazolyl a R¹ znamená CH₂OCH₃ nebo CF₃.
8. Agonista PPAR-α a PPAR-γ pro použití při léčení a/nebo prevenci syndromu X.
9. Agonista PPAR-ct a PPAR-γ pro použití při výrobě léčiva pro léčení a/nebo prevenci syndromu X.
10. Sloučenina mající aktivitu agonisty jak PPAR-α, tak

PPAR-γ.
11. Sloučenina mající aktivitu agonisty jak PPAR-α, tak

PPAR-γ pro použití jako aktivní terapeutická látka.
12. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že obsahuje agonistu PPAR-α a PPAR-γ a farmaceuticky přijatelný nosič.
13. Způsob detekce sloučeniny mající obě aktivity agonisty, PPAR-α a PPAR-γ, vyznačující se tím, že zahrnuje stanovení:

(a) aktivity PPAR-α agonisty zjištěním stimulace PPAR alfa chimérického receptorů sestávajícího z rozpoznávacího místa PPAR alfa ligandu spojeného s konstruktem vhodného reporterového genu; a (b) aktivity PPAR-γ agonisty zjištěním stimulace PPAR gama chimérického receptorů obsahujícího rozpoznávací místo PPAR gama ligandu spojeného s konstruktem vhodného reporterového genu.