CZ2020579A3 - Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití - Google Patents

Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití Download PDF

Info

Publication number
CZ2020579A3
CZ2020579A3 CZ2020-579A CZ2020579A CZ2020579A3 CZ 2020579 A3 CZ2020579 A3 CZ 2020579A3 CZ 2020579 A CZ2020579 A CZ 2020579A CZ 2020579 A3 CZ2020579 A3 CZ 2020579A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
hydroxy
cholan
dihydroxy
cholestan
double
Prior art date
Application number
CZ2020-579A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ309819B6 (cs
Inventor
Miroslav KVASNICA
Miroslav RNDr Kvasnica
Gabriel Gonzalez
Gabriel Mgr. Gonzalez
Veronika GÓROVÁ
Veronika Bc. Górová
Miroslav Strnad
Miroslav prof. Ing. Strnad
Original Assignee
Univerzita Palackého v Olomouci
Univerzita Palackého v Olomouci
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univerzita PalackĂ©ho v Olomouci, Univerzita Palackého v Olomouci filed Critical Univerzita PalackĂ©ho v Olomouci
Priority to CZ2020-579A priority Critical patent/CZ309819B6/cs
Priority to US18/030,846 priority patent/US20230365616A1/en
Priority to EP21882212.0A priority patent/EP4232457A4/en
Priority to PCT/CZ2021/050116 priority patent/WO2022083809A1/en
Publication of CZ2020579A3 publication Critical patent/CZ2020579A3/cs
Publication of CZ309819B6 publication Critical patent/CZ309819B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1611—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1617—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1641—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2013—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
    • A61K9/2054—Cellulose; Cellulose derivatives, e.g. hydroxypropyl methylcellulose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/4816—Wall or shell material
    • A61K9/4825—Proteins, e.g. gelatin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J11/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 3
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J71/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton is condensed with a heterocyclic ring
    • C07J71/0005—Oxygen-containing hetero ring
    • C07J71/0026—Oxygen-containing hetero ring cyclic ketals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Vynález se týká sterolových derivátů odvozených od brassinosteroidů, jejich použití pro léčbu neurodegenerativních chorob, a farmaceutických přípravků obsahujících tyto deriváty. Sloučeniny jsou vhodné zejména pro použití při léčbě a profylaxi Parkinsonovy choroby.

Description

Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití
Oblast techniky
Vynález se týká nových sterolových derivátů odvozených od rostlinných hormonů brasinosteroidů, jejich použití při ochraně proti buněčnému poškození a buněčné toxicitě, a přípravků obsahujících tyto deriváty.
Dosavadní stav techniky
Parkinsonova choroba (PD) je druhé nejčastější a motoricky související neurodegenerativní onemocnění, s předpokládaným nárůstem v diagnostikovaných případech dosahujícím až 12 milionů pacientů do roku 2040 (Dorsey et al. J. Parkinson's Dis. 2018, 8, S3). PD je charakterizována motorickými příznaky spojenými se specifickou degenerací a ztrátou přibližně 30 až 70 % dopaminergních neuronů v substantia nigra pars compacta a jejich projekcemi na striatum (Rizek et al. CMAJ 2016, 188, 1157). Mezi mnoho molekulárních znaků PD patří zvýšený oxidační a nitrosativní stres (OS a NS), dysfunkce mitochondrií, excitotoxicita, dysfunkce ubikvitin/proteazomálního systému (UPS) a neuro zánět (Dantuma a Bott, Front. Mol. Neurosci 2014, 7; Cookson a Bandmann, Human Mol Gen 2010, 19, R21). Vzhledem k nedostatku účinné a nejen symptomatické léčby PD je vývoj léčiv zaměřen na látky s účinným léčebným účinkem na degenerativní procesy PD. Jedním ze zdrojů jsou přírodní sloučeniny, které mají tendenci vykazovat méně vedlejších účinků.
Bioaktivní molekuly spojené s Parkinsonovou chorobou, zejména panaxatriolové saponiny z Panax notoginseng, vykazovaly dostatečnou neuroprotekci proti 1 -methyl-4-fenyl-1,2,3,6tetrahydropyridinem (MPTP) indukované smrti PD neuronů a zhoršení chování in vivo (Uuo a kol., J. Ethnopharmacol. 2011, 133, 448). Dalším příkladem jsou ginsenosidy, steroidní sloučeniny, které vykazovaly neuroprotektivní aktivitu v MPTP modelu PD. Také zvyšovaly hladiny DA ve striatu a substantia nigra modulací exprese několika genů (Bcl-2, Bel, Bax, kaspáza 3 a tyrosinhydroxyláza) (Wang et al., Neurochem. Int. 2009, 54, 43). Zatímco kurkumin je jedním ze silných koření, které má široké spektrum antioxidačních a neuroprotektivních aktivit zodpovědných za anti-PD aktivity, jeho syntetický derivát kurkumin glukosid byl ještě účinnější, protože byl schopen inhibovat agregaci a toxicitu α-synukleinu způsobem závislým na dávce, bylo prokázáno snížení apoptózy (kaspáza 3 a 9), oxidačního stresu a mitochondriální dysfunkce v buňkách A53T α-synuklein PC12 (Liu a kol., Pharmacol. Res. 2011, 63, 439). Dalším zdrojem terapie modifikující PD na bázi rostlin je Mucuna pruriens, rostlinný druh bohatý na antioxidanty přírodního původu, jako je koenzym Q-10 (Co-QlO) a L-DOPA. Aplikace přirozené formy LDOPA ve formě semen Mucuna pruriens prokázala účinnost při zlepšování symptomů PD, ale s lepším farmakokinetickým profilem než tradiční forma L-DOPA (Bega a Zadikoff, J. Mov. Dis. 2014, 7, 57). Konečně Co-QlO a kreatin byly jedněmi z nejvíce studovaných přírodních sloučenin pro léčbu PD. Co-QlO vykazoval širokou neuroprotektivní aktivitu v modelech PD založených na paraqatu, rotenonu, 1-methyl-4-fenylpyridiniu (MPP +) a MPTP. Bylo také zjištěno, že zlepšují symptomy PD v preklinické studii na primátech a v několika klinických studiích (Shults a kol., Arch. Neur. 2002, 59, 1541; Exp. Neurol. 2004, 188, 491).
Předmětem předkládaného vynálezu je proto poskytnout novou generaci derivátů neurosterolů, které vykazují silné a selektivní ochranné vlastnosti na neuronálních buňkách a tkáních a mohou být použity při léčbě a profylaxi neurodegenerativních chorob, zejména Parkinsonovy choroby.
Podstata vynálezu
Předmětem tohoto vynálezu jsou neurosterolové deriváty obecného vzorce I,
- 1 CZ 2020 - 579 A3
ve kterém, a je jednoduchá nebo dvojná vazba; dvojná vazba je nezávisle vybrána z E nebo Z konfigurace;
RI, R2 jsou nezávisle vybrány z vodíku nebo hydroxylové skupiny;
R3 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující vodík, lineární a rozvětvený C1-C5 alkyl a C3C6 cykloalkyl, přičemž cykloalkyl může být popřípadě substituován alespoň jedním substituentem, kterým je C1-C5 alkyl;
R4 je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, methylu a ethylu;
nebo R3 a R4 společně tvoří bivalentní skupinu C2-C5 α,ω-alkylenu, a kde následující sloučeniny jsou vyloučeny z obecného vzorce I:
2a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-cholestan-6on, (22£)-2a,3a-dihydroxy-5a-cholest-22-en-6-on, 3a-hydroxy-5a-campestan-6-on, 2α, 3αdihydroxy-5a-campestan-6-on, (22£)-3a-hydroxy-5a-campest-22-en-6-on, (22Λ)-2α.3αdihydroxy-5a-campest-22-en-6-on, (22£)-2a-hydroxy-5a-ergost-22-en-6-on, (22£)-3a-hydroxy5 a-ergost-22-en-6-on, (22Z)-3 a-hydroxy-5 a-ergost-22-en-6-on, (22£)-2a,3 a-dihydroxy-5 aergost-22-en-6-on, 3a-hydroxy-24-nor-5a-chol-22-en-6-on, 2a,3a-dihydroxy-24-nor-5a-chol-22en-6-on.
S výhodou nejsou R3 a R4 zároveň vodík, tedy alespoň jeden z R3 a R4 je odlišný od vodíku.
V některých provedeních vynálezu nesou sloučeniny obecného vzorce I jako substituent R3 lineární C1-C5 alkyl, s výhodou vybraný ze skupiny zahrnující methylovou, ethylovou, n-propylovou, nbutylovou a n-pentylovou skupinu.
V některých provedeních vynálezu nesou sloučeniny obecného vzorce I jako substituent R3 rozvětvený C3-C5 alkyl, s výhodou vybraný ze skupiny, kterou tvoří isopropyl, isobutyl, sek-butyl, terč-butyl, 2-methylbut-2-yl, 2,2-dimethylpropyl, 3-methylbut-l-yl, pent-2-yl, pent-3-yl, 3methylbut-2-yl a 2-methylbutyl.
V ještě některých provedeních vynálezu nesou sloučeniny obecného vzorce I jako substituent R3 cykloalkylovou skupinu, s výhodou vybranou ze skupiny zahrnující cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cyklopropylmethyl, cyklobutylmethyl, cyklopentylmethyl, cyklohexylmethyl, které mohou být popřípadě substituovány lineárním C1-C5 alkylem, s výhodou C1-C3 lineárním alkylem.
S výhodou je jeden z R3 nebo R4 atom vodíku, a druhý z nich není atom vodíku.
-2CZ 2020 - 579 A3
V některých provedeních vynálezu nesou sloučeniny obecného vzorce I jako substituenty R3 a R4 alkylenovou skupinu, která je vybrána ze skupiny zahrnující 1,2-ethylen, 1,3-trimethylen, 1,4tetramethylen a 1,5-pentamethylen.
V některých provedeních vynálezu nesou sloučeniny obecného vzorce I v poloze R3 substituent mající chirální centrum, kde je absolutní konfigurace buď R, nebo S.
V některých provedeních vynálezu mají sloučeniny obecného vzorce I na uhlíku C-23 chirální centrum, kde je absolutní konfigurace buď R, nebo S.
Jednotlivé sloučeniny popsané v příkladech představují jednotlivá výhodná provedení předloženého vynálezu. Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou sterolové deriváty následujících vzorců, kde jeden nebo oba z RI, R2 jsou hydroxy substituenty:
2a-hydroxy-24-nor-5a-cholan-6-on, a-hydroxy-24-nor-5 a-cholan-6-on,
2α,3 a-dihydroxy-24-nor-5 a-cholan-6-on;
-3 CZ 2020 - 579 A3
2a-hydroxy-5a-cholan-6-on, a-hydroxy-5 a-cholan-6-on,
2a,3 a-dihydroxy-5 a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-23-methyl-5 a-cholan-6-on, a-hydroxy-23 -methyl-5 a-cholan-6-on,
2a,3a-dihydroxy-23-methyl-5 a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-26,27-dinor-5a-cholestan-6-on, a-hydroxy-26,27-dinor-5 a-cholestan-6-on,
2a,3a-dihydroxy-26,27-dinor-5a-cholestan-6-on;
(237?)-2a-hydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6-on, (23R)-3 a-hydroxy-23 -ethyl-5 a-cholan-6-on, (237?)-2a,3a-dihydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6-on;
-4CZ 2020 - 579 A3
(23S)-2a-hydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6-on, (23S)-3 a-hydroxy-23 -ethyl-5 a-cholan-6-on, (23S)-2a,3a-dihydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-27-nor-5 a-cholestan-6-on, a-hydroxy-27-nor-5 a-cholestan-6-on,
2a,3 a-dihydroxy-27-nor-5 a-cholestan-6-on;
2a-hydroxy-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-cholestan-6-on, a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5 a-cholestan-6-on,
-5CZ 2020 - 579 A3
2a,3a-dihydroxy-26a-homo-27-nor-5a-cholestan-6-on;
2a-hydroxy-24,24,24-trimethyl-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-24,24,24-trimethyl-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-24,24,24-trimethyl-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-27-nor-5 a-campestan-6-on, a-hydroxy-27-nor-5 a-campestan-6-on,
2a,3 a-dihydroxy-27-nor-5 a-campestan-6-on;
2a-hydroxy-27-nor-5 a-ergostan-6-on, a-hydroxy-27-nor-5 a-ergostan-6-on,
2a,3a-dihydroxy-27-nor-5a-ergostan-6-on;
2a-hydroxy-26a,26b-dihomo-27-nor-5a-cholestan-6-on,
-6CZ 2020 - 579 A3
3a-hydroxy-26a,26b-dihomo-27-nor-5a-cholestan-6-on,
2a,3a-dihydroxy-26a,26b-dihomo-27-nor-5a-cholestan-6-on;
2a-hydroxy-5 a-campestan-6-on;
2a-hydroxy-5 a-ergostan-6-on, a-hydroxy-5 a-ergostan-6-on,
2a,3a-dihydroxy-5a-ergostan-6-on;
2a-hydroxy-24-ethyl-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on,
3a-hydroxy-24-ethyl-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on,
2a,3a-dihydroxy-24-ethyl-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-25-methyl-5 a-cholestan-6-on, a-hydroxy-25 -methyl-5 a-cholestan-6-on,
2a,3a-dihydroxy-25-methyl-5a-cholestan-6-on;
-7 CZ 2020 - 579 A3
2a-hydroxy-27-nor-5 a-stigmastan-6-on, a-hydroxy-27-nor-5 a-stigmastan-6-on,
2a,3 a-dihydroxy-27-nor-5 a-stigmastan-6-on;
(24S)-2a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-campestan-6-on, (24S)-3a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-campestan-6-on, (24S)-2a,3a-dihydroxy-26a-homo-27-nor-5a-campestan-6-on;
(24R)-2a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-ergostan-6-on, (24R)-3a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-ergostan-6-on, (24R)-2a,3a-dihydroxy-26a-homo-27-nor-5a-ergostan-6-on;
2a-hydroxy-22-cyklopropyl-23,24-dinor-5 a-cholan-6-on, a-hydroxy-22-cyklopropyl-23,24-dinor-5 a-cholan-6-on,
2a,3 a-dihydroxy-22-cyklopropyl-23,24-dinor-5 a-cholan-6-on;
-8CZ 2020 - 579 A3
2a-hydroxy-22-cyklobutyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on,
3a-hydroxy-22-cyklobutyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on,
2a,3a-dihydroxy-22-cyklobutyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-22-cyklopentyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on,
3a-hydroxy-22-cyklopentyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on,
2a,3a-dihydroxy-22-cyklopentyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-22-cyklohexyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on,
3a-hydroxy-22-cyklohexyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on,
2a,3 a-dihydroxy-22-cyklohexyl-23,24-dinor-5 a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-23-cyklopropyl-24-nor-5a-cholan-6-on, a-hydroxy-23 -cyklopropyl-24-nor-5 a-cholan-6-on,
2a,3 a-dihydroxy-23 -cyklopropyl-24-nor-5 a-cholan-6-on;
-9CZ 2020 - 579 A3
2a-hydroxy-23-cyklobutyl-24-nor-5a-cholan-6-on, a-hydroxy-23-cyklobutyl-24-nor-5 a-cholan-6-on,
2a,3 a-dihydroxy-23-cyklobutyl-24-nor-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-23-cyklopentyl-24-nor-5a-cholan-6-on, a-hydroxy-23-cyklopentyl-24-nor-5a-cholan-6-on,
2a,3 a-dihydroxy-23-cyklopentyl-24-nor-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-23-cyklohexyl-24-nor-5a-cholan-6-on, a-hydroxy-23-cyklohexyl-24-nor-5a-cholan-6-on,
2a,3 a-dihydroxy-23 -cyklohexyl-24-nor-5 a-cholan-6-on.
Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou tyto deriváty obecného vzorce I: 2a,3a-dihydroxy24-nor-5 a-cholan-6-on, 2α,3 a-dihydroxy-5 a-cholan-6-on, 2a, 3 a-dihydroxy-26,27-dinor-5 acholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-cholestan-6-on, 2a,3 a-dihydroxy-23 -methyl-5 a-cholan-6-on, 2a, 3 a-dihydroxy-23 -cyklohexyl-24-nor-5 a-cholan6-on, 2a,3 a-dihydroxy-23-cyklopentyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-24,24-dimethyl5a-cholan-6-on.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mají širokou škálu biologických aktivit, včetně aktivit při zvyšování životaschopnosti neuronálních buněk, snižování oxidačního stresu, neuroprotektivity a antiapoptotické aktivace, které jsou zvláště užitečné ve farmaceutických aplikacích k léčbě neurodegenerativních chorob a odpovídají spektru účinků požadovaných od léčiv určených pro takovou léčbu.
-10 CZ 2020 - 579 A3
Předmětem tohoto vynálezu jsou dále neurosterolové deriváty obecného vzorce la, ve kterém, a je jednoduchá nebo dvojná vazba; dvojná vazba je nezávisle vybrána z E nebo Z konfigurace;
RI, R2 jsou nezávisle vybrány z vodíku nebo hydroxylové skupiny;
R3 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující vodík, lineární a rozvětvený C1-C5 alkyl a C3C6 cykloalkyl, přičemž cykloalkyl může být popřípadě substituován alespoň jedním substituentem, kterým je C1-C5 alkyl;
R4 je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, methylu a ethylu;
nebo R3 a R4 společně tvoří bivalentní skupinu C2-C5 α,ω-alkylenu, a kde následující sloučeniny jsou vyloučeny z obecného vzorce la:
2a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-cholestan-6on, pro použití jako léčiva.
Předmětem tohoto vynálezu jsou sterolové deriváty obecného vzorce Ib (Ib) ve kterém, a je jednoduchá nebo dvojná vazba; dvojná vazba je nezávisle vybrána z E nebo Z konfigurace;
RI, R2 jsou nezávisle vybrány z vodíku nebo hydroxylové skupiny;
-11 CZ 2020 - 579 A3
R3 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující vodík, lineární a rozvětvený C1-C5 alkyl a C3C6 cykloalkyl, přičemž cykloalkyl může být popřípadě substituován alespoň jedním substituentem, kterým je C1-C5 alkyl;
R4 je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, methylu a ethylu;
nebo R3 a R4 společně tvoří bivalentní skupinu C2-C5 α,ω-alkylenu;
pro použití při léčení a/nebo profylaxi neurodegenerativních onemocnění, kde neurodegenerativní onemocnění je s výhodou vybráno ze skupiny zahrnující amyotrofíckou laterální sklerózu, Parkinsonovu chorobu, Alzheimerovu chorobu, Huntingtonovu chorobu, progresivní supranukleámí paralýzy, kortikobazální degenerace, frontotemporální demence, demence s Lewyho tělísky, atrofíe mnohočetného systému, chronické traumatické encefalopatie a spinocerebelámí ataxie.
Předmětem tohoto vynálezu jsou ve výhodném provedení sterolové deriváty obecného vzorce Ib pro použití při léčbě a profylaxi Parkinsonovy nemoci.
Tento vynález dále poskytuje farmaceutické kompozice obsahující jeden nebo více sterolových derivátů obecného vzorce I společně s alespoňjedním farmaceuticky akceptovatelným nosičem.
Farmaceutické přípravky
Vhodné cesty pro systémovou aplikaci jsou orální, inhalační, injekční (intravazální, intramuskulámí, subkutanní), bukální, sublingualní anasální. Preferovaný způsob podání závisí na stavu pacienta a místě onemocnění, kromě ostatních ohledů známých klinikovi.
Farmaceutický přípravek obsahuje od 1 do 95 % aktivní látky, přičemž jednorázové dávky obsahují přednostně od 20 do 90 % aktivní látky a při způsobech aplikace, které nejsou jednorázové, obsahují přednostně od 5 do 20 % aktivní látky. Jednotkové dávkové formy jsou např. potahované tablety, tablety, ampule, lahvičky, čípky nebo tobolky. Jiné formy aplikace jsou např. masti, krémy, pasty, pěny, tinktury, rtěnky, kapky, spreje, disperze atd. Příkladem jsou tobolky obsahující od 0,05 g do 1,0 g aktivní látky.
Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu jsou připravovány známým způsobem, např. běžným mícháním, granulací, potahováním, rozpouštěcími nebo lyofilizačními procesy.
Přednostně jsou používány roztoky aktivních látek a dále také suspenze nebo disperze, obzvláště izotonické vodné roztoky, suspenze nebo disperze, které mohou být připraveny před použitím, např. v případě lyofilizovaných preparátů obsahujících aktivní látku samotnou nebo s nosičem jako je manitol. Farmaceutické přípravky mohou být sterilizovány a/nebo obsahují pomocné látky, např. konzervační přípravky, stabilizátory, zvlhčovadla a/nebo emulgátory, rozpouštěcí činidla, soli pro regulaci osmotického tlaku a/nebo pufiry. Jsou připravovány známým způsobem, např. běžným rozpouštěním nebo lyofilizací. Zmíněné roztoky nebo suspense mohou obsahovat látky zvyšující viskozitu, jako např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, dextran, polyvinylpyrolidon nebo želatinu.
Olejové suspense obsahují jako olejovou složku rostlinné, syntetické nebo semisyntetické oleje obvyklé pro injekční účely. Oleje, které zde mohou být zmíněny, jsou obzvláště kapalné estery mastných kyselin, které obsahují jako kyselou složku mastnou kyselinu s dlouhým řetězcem majícím 8-22, s výhodou pak 12-22 uhlíkových atomů, např. kyselinu laurovou, tridekanovou, myristovou, pentadekanovou, palmitovou, margarovou, stearovou, arachidonovou a behenovou, nebo odpovídající nenasycené kyseliny, např. kyselinu olejovou, alaidikovou, eurikovou, brasidovou a linoleovou, případně s přídavkem antioxidantů, např. vitaminu E, beta-karotenu nebo 3,5-di-tert-butyl-4-hydroxytoluenu. Alkoholová složka těchto esterů mastných kyselin nemá více
-12 CZ 2020 - 579 A3 než 6 uhlíkových atomů a je mono- nebo polyhydrická, např. mono-, di- nebo trihydrické alkoholy jako metanol, etanol, propanol, butanol nebo pentanol a jejich isomery, ale hlavně glykol a glycerol. Estery mastných kyselin jsou s výhodou např. ethyl oleát, isopropyl myristát, isopropyl palmitát, „Labrafil M 2375“ (polyoxyethylen glycerol trioleát, Gattefoseé, Paříž), „Labrafil M 1944 CS“ (nenasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou oleje z meruňkových jader a složené z glyceridů a esterů polyetylén glykolu; Gattefoseé, Paříž), „Labrasol“ (nasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou TCM a složené z glyceridů a esterů polyetylén glykolu; Gattefoseé, Paříž) a/nebo „Miglyol 812“ (triglycerid nasycených mastných kyselin s délkou řetězce Cx až C12 od Hůls AG, Německo) a zvláště rostlinné oleje jako bavlníkový olej, mandlový olej, olivový olej, ricinový olej, sezamový olej, sójový olej a zejména olej z podzemnice olejně.
Příprava injekčního přípravku se provádí za sterilních podmínek obvyklým způsobem, např. plněním do ampulí nebo lahviček a uzavíráním obalů.
Např. farmaceutické přípravky pro orální použití se mohou získat smícháním aktivní látky s jedním nebo více tuhými nosiči, případnou granulací výsledné směsi, a pokud je to požadováno, zpracováním směsi nebo granulí do tablet nebo potahovaných tablet přídavkem dalších neutrálních látek.
Vhodné nosiče jsou obzvláště plnidlajako cukry, např. laktóza, sacharóza, manitol nebo sorbitol, celulosové preparáty a/nebo fosforečnany vápníku, s výhodou fosforečnan vápenatý nebo hydrogen fosforečnan vápenatý, dále pojivá jako škroby, s výhodou kukuřičný, pšeničný, rýžový nebo bramborový škrob, methylcelulosa, hydroxypropylmethylcelulosa, sodná sůl karboxymethylcelulosy a/nebo polyvinylpyrolidin, a/nebo pokud požadováno desintegrátory jako výše zmíněné škroby a dále karboxymethylový škrob, zesítěný polyvinylpyrolidin, alginová kyselina a její soli, s výhodou alginát sodný. Další neutrální látky jsou regulátory toku a lubrikanty, s výhodou kyselina salicylová, talek, kyselina stearová a její soli jako stearát hořečnatý a/nebo vápenatý, polyetylén glykol nebo jeho deriváty.
Jádra potahovaných tablet mohou být potažena vhodnými potahy, které mohou být odolné vůči žaludeční šťávě, přičemž používané potahy jsou mezi jinými koncentrované roztoky cukrů, které mohou obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrolidin, polyetylén glykol a/nebo oxid titaničitý, dále potahovací roztoky ve vhodných organických rozpouštědlech nebo směsích rozpouštědel, či pro přípravu potahů odolných vůči žaludeční šťávě roztoky vhodných celulosových preparátů jako acetylcelulosaftalát nebo hydroxypropylmethylcelulosaftalát. Barviva nebo pigmenty jsou přimíchávány do tablet nebo potahovaných tablet např. pro identifikaci nebo charakterizaci různých dávek účinné složky.
Farmaceutické přípravky, které mohou být užívány orálně, j sou také tvrdé tobolky ze želatiny nebo měkké uzavřené tobolky ze želatiny a změkčovadla jako glycerol nebo sorbitol. Tvrdé tobolky mohou obsahovat aktivní látku ve formě granulí, smíchanou např. s plnidly jako je kukuřičný škrob, pojivý nebo lubrikanty jako talek nebo stearát hořečnatý, a se stabilizátory. V měkkých tobolkách je aktivní látka přednostně rozpuštěna nebo suspendována ve vhodných kapalných látkách neutrální povahy jako mazací tuk, parafínový olej nebo kapalný polyetylén glykol či estery mastných kyselin a etylén nebo propylen glykolu, přičemž je také možno přidat stabilizátory a detergenty např. typu esterů polyetylén sorbitanových mastných kyselin.
Další formy orálního podávání jsou např. sirupy připravované běžným způsobem, které obsahují aktivní složku např. v suspendované formě a v koncentraci okolo 5 až 20 %, přednostně okolo 10 % nebo podobné koncentrace, která umožňuje vhodnou individuální dávku, např. když je měřeno 5 nebo 10 ml. Ostatní formy jsou např. práškové nebo kapalné koncentráty pro přípravu koktejlů, např. v mléce. Takovéto koncentráty mohou být také baleny v množství odpovídajícím jednotkové dávce.
-13 CZ 2020 - 579 A3
Farmaceutické přípravky, které mohou být používány rektálně, jsou např. čípky, které obsahují kombinaci aktivní látky se základem. Vhodné základy jsou např. přírodní nebo syntetické triglyceridy, parafínové uhlovodíky, polyetylén glykoly nebo vyšší alkoholy.
Přípravky vhodné pro parenterální podání jsou vodné roztoky aktivní složky ve formě rozpustné ve vodě, např. ve vodě rozpustná sůl nebo vodná injekční suspenze, která obsahuje látky zvyšující viskozitu, např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, sorbitol a/nebo dextran, a stabilizátory tam kde je to vhodné. Aktivní látka může být také přítomna ve formě lyofílizátu společně s pomocnými látkami, kde je to vhodné a může být rozpuštěna před parenterální aplikací přidáním vhodných rozpouštědel. Roztoky, které jsou použity pro parenterální aplikaci, mohou být použity např. i pro infůzní roztoky. Preferovaná konzervo vadla jsou s výhodou antioxidanty jako kyselina askorbová, nebo mikrobicidy kyselina sorbová či benzoová.
Masti jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují ne více než 70 %, ale přednostně 20 až 50 % vody nebo vodné fáze. Tukovou fázi tvoří zejména uhlovodíky, např. vazelína, parafínový olej nebo tvrdé parafíny, které přednostně obsahují vhodné hydroxy sloučeniny jako mastné alkoholy a jejich estery, např. cetyl alkohol, nebo alkoholy lanolinu, s výhodou lanolin pro zlepšení kapacity pro vázání vody. Emulgátory jsou odpovídající lipofílní sloučeniny jako sorbitanové estery mastných kyselin (Spaný), s výhodou sorbitan oleát nebo sorbitan isostearát. Aditiva k vodné fázi jsou např. smáčedla jako polyalkoholy, např. glycerol, propylen glykol, sorbitol a/nebo polyetylén glykol, nebo konzervační prostředky či příjemně vonící látky.
Mastné masti jsou nevodné a obsahují jako bázi hlavně uhlovodíky, např. parafín, vazelínu nebo parafínový olej, a dále přírodní nebo semisyntetické tuky, např. hydrogenované kokosové triglyceridy mastných kyselin nebo, s výhodou, hydrogenované oleje, např. hydrogenovaný ricínový olej nebo olej z podzemnice olejně, a dále částečné glycerolové estery mastných kyselin, např. glycerol mono- nebo distearát. Dále obsahují např. mastné alkoholy, emulgátory a/nebo aditiva zmíněná v souvislosti s mastmi, která zvyšují příjem vody.
Krémy jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují více než 50 % vody. Používané olejové báze jsou zejména mastné alkoholy, např. lauryl, cetyl nebo staryl alkoholy, mastné kyseliny, například palmitová nebo stearová kyselina, kapalné a pevné vosky, například isopropyl myristát, lanolin nebo včelí vosk, a/nebo uhlovodíky, například vazelína (petrolátum) nebo parafínový olej. Emulgátory jsou povrchově aktivní sloučeniny s převážně hydrofílními vlastnostmi, jako jsou odpovídající neiontové emulgátory, např. estery mastných kyselin polyalkoholů nebo jejich ethylenoxy adukty, např. estery polyglycerických mastných kyselin nebo polyetylén sorbitanové estery (Tween), dále polyoxyethylenové etery mastných alkoholů nebo polyoxyethylenové estery mastných kyselin, nebo odpovídající iontové emulgátory, jako alkalické soli sulfátů mastných alkoholů, s výhodou laurylsulfát sodný, cetylsulfát sodný nebo stearylsulfát sodný, které jsou obvykle používány v přítomnosti mastných alkoholů, např. cetyl stearyl alkoholu nebo stearyl alkoholu. Aditiva k vodné fázi jsou mimo jiné činidla, která chrání krémy před vyschnutím, např. polyalkoholy jako glycerol, sorbitol, propylen glykol a polyetylén glykol, a dále konzervační činidla a příjemně vonící látky.
Pasty jsou krémy nebo masti obsahující práškové složky absorbující sekreci jako jsou oxidy kovů, např. oxidy titanu nebo oxid zinečnatý, a dále talek či silikáty hliníku, které mají za úkol vázat přítomnou vlhkost nebo sekreci.
Pěny jsou aplikovány z tlakových nádob ajsou to kapalné emulze oleje ve vodě v aerosolové formě, přičemž jako hnací plyny jsou používány halogenované uhlovodíky, jako polyhalogenované alkany, např. dichlorfluormethan a dichlortetrafluorethan, nebo přednostně nehalogenované plynné uhlovodíky, vzduch, N2O či oxid uhličitý. Používané olejové fáze jsou stejné jako pro masti a krémy a také jsou používána aditiva tam zmíněná.
-14 CZ 2020 - 579 A3
Tinktury a roztoky obvykle obsahují vodně-etanolickou bázi, ke které jsou přimíchána zvlhčovadla pro snížení odpařování, jako jsou polyalkoholy, např. glycerol, glykoly a/nebo polyetylén glykol, dále promazávadla jako estery mastných kyselin a nižších polyetylén glykolů, tj. lipofilní látky rozpustné ve vodné směsi nahrazující tukové látky odstraněné z kůže etanolem, a pokud je to nutné, i ostatní pomocné látky a aditiva.
Vynález se také vztahuje na procesy nebo metody pro léčení nemocí zmíněných výše. Látky mohou být podávány profýlakticky nebo terapeuticky jako takové nebo ve formě farmaceutických přípravků, přednostně v množství, které je efektivní proti zmíněným nemocem, přičemž u teplokrevných živočichů, např. člověka, vyžadujícího takovéto ošetření, je látka používána zejména ve formě farmaceutického přípravku. Na tělesnou hmotnost okolo 70 kg je aplikována denní dávka látky okolo 0,01 až 1,0 g, s výhodou 0,05 až 0,5 g.
Objasnění výkresů
Obrázek 1 ukazuje neuroprotektivní účinek nových sloučenin v modelu oxidativního poškození indukovaného glutamátem na dopaminergních neuronových buňkách SH-SY5Y. Sloučeniny podle vynálezu při 0,1, 1 a 10 μΜ spolu s pozitivními kontrolami: kyselina R-lipoová (R-LA, 0,5, 5 a 50 μΜ) a deferoxamin (DFO, 1, 10 a 100 pM) byly použity při současném ošetření se 160 mM glutamátu (Glu) po dobu 24 hodin. Po 24 hodinách byla buněčná smrt kvantifikována barvením propidium jodidem. Buněčná smrt generovaná Glu byla považována za 100%, takže bylo pozorováno snížení buněčné smrti.
Všechny výsledky představují průměrnou hodnotu ± standardní chybu průměru (SEM) v triplikátu (trojnásobné opakování) experimentů (n=3) ve třech různých dnech. ANOVA, Bonferonni post hoc test;
*, # P < 0.05; **, ## P < 0.01; ***, ### P < 0.001; * P porovnání s vzorku s Glu 160mM, # P porovnání vzorku se skupinou bez Glu 160mM. Hodnota P < 0.05 je považována za statisticky signifikantní.
Obrázek 2 ukazuje glutamátem indukovaný oxidativní stres (OS) a OS-redukující aktivitu sloučenin podle vynálezu a pozitivní kontroly. Sloučeniny podle vynálezu při 0,1, 1 a 10 μΜ spolu s pozitivními kontrolami: kyselina R-lipoová (R-LA; 0,5, 5 a 50 μΜ) a deferoxamin (DFO; 1, 10 a 100 pM) byly použity při současném ošetření 160 mM Glu po dobu 4 hodin. Po 4 hodinách byla kvantifikace superoxidových radikálů jako markéru oxidačního stresu kvantifikována barvením dihydroethidiem. Oxidační stres generovaný Glu byl považován za 100%, takže bylo pozorováno snížení buněčné smrti. Všechny výsledky představují průměrnou hodnotu ± standardní chybu průměru (SEM) v triplikátu (trojnásobné opakování) experimentů (n=3) ve třech různých dnech.
Příklady uskutečnění vynálezu
Není-li uvedeno jinak, tak veškerá procenta a množství jsou založena na hmotnosti. Výchozí sloučeniny a činidla mohou být zakoupeny z komerčních zdrojů (Sigma, Aldrich, Fluka atd.) nebo mohou být připraveny, jak je uvedeno níže.
Ή a 13C experimenty byly provedeny na přístroji JEOL JNM-ECA 500 (JEOL, Tokio, Japonsko; Ή. 500 MHz; 13C, 125 MHz) spektrometr vybaveného 5 mm JEOL Royal sondou, s použitím CDCL, jako rozpouštědla (25 °C). Chemické posuny (δ) byly referencovány na signál použitého rozpouštědla (CDCL) a jsou uváděny v částech najeden milion (ppm). Štěpící konstanty (J) jsou uváděny v jednotkách Hertz (Hz). NMR spektra byly procesovány v programu ACD/NMR Processor Academie Edition 12.01 nebo JEOL Delta v5.0.5.1. HRMS analýza byla provedena na spektrometru Synapt G2-Si Mass Spectrometer (Waters, Manchester, UK) s API ionizací. Spektra
-15 CZ 2020 - 579 A3 byla měřena v pozitivním modu v rozmezí 100 - 1000 m/z. Vzorky byly rozpuštěny v CHCE a použity pro přímý nástřik. Průběh reakce byl sledován pomocí TLC Kieselgel 60 F254 desek (Merck) s detekcí postřikem 10% vodným roztokem H2SO4 a zahřátím na 400 °C. Čištění sloučenin bylo provedeno použitím sloupcové chromatografie na silikagelu Silica gel 60 (Merck 7734).
Výchozí steroidní derivát 1 pro olefmační reakci byl připraven z komerčně dostupného stigmasterolu podle literatury (Heterocycles 1982, 17, 301). Všechny sloučeniny popsané v tomto vynálezu byly připraveny podle následujícího schématu:
Syntéza nových sterolových derivátů
2a,3a-(Isopropylidendioxy)-6,6-(ethylenedioxy)-24-nor-5a-chol-22-en (sloučenina 2a)
Do roztoku methyltrifenylfosfonium bromidu (48 mg; 0.134 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) byl přidán roztok n-butyllithia v hexanu (1.6 M; 85 pl; 0.134 mmol). Reakce byla míchána při 0 °C po dobu 30 minut. Poté byl přidán roztok aldehydu 1 (30 mg; 0.067 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) a reakce byla pomalu ohřívána na laboratorní teplotu a míchána další 2 hodiny. Po ukončení reakce byla směs zředěna ethyl-acetátem a extrahována dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografri (7% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 2a.
-16 CZ 2020 - 579 A3
Bezbarvý olej, chemický vzorec: C28H44O4, výtěžek: 25 mg, 84 %. Ή NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.69 (s, 3H, CH3); 0.84 (s, 3H, CH3); 1.02 (d, 3H, J = 6.4 Hz, CH3); 1.32 (s, 3H, CH3); 1.47 (s, 3H, CH3); 1.92 (dd, 1H, J = 12.7 a 6.9 Hz); 1.97 (dt, 1H, J = 12.7 a 3.2 Hz); 2.06 (m, 1H); 2.16 (m, 1H); 3.75 (m, 1H, CH20); 3.88-3.97 (m, 3H, CH20); 4.10 (m, 1H, Η-2β); 4.27 (m, 1H, Η-3β); 4.81 (dd, 1H, J = 10.2 a 1.9 Hz, H-23a); 4.90 (dd, 1H, J = 17.1 a 1.9 Hz, H-23b); 5.65 (ddd, 1H, J = 17.1, 10.2 a 8.7 Hz, H-22). 13C NMR δ 12.14, 13.35, 20.04, 20.70, 21.94, 24.14, 26.55, 28.30, 28.59, 32.84, 37.98, 39.51, 41.01, 41.19, 42.43, 42.68, 45.47, 52.95, 55.37, 55.90, 64.15, 65.46, 72.82, 72.93, 107.51, 109.65, 111.54, 145.16. HRMS (API): m/z vypočteno pro C28H45O4 [M+H]+ 445.3318, nalezeno 445.3319.
2a,3a-Dihydroxy-24-nor-5a-chol-22-en-6-on (sloučenina 3a)
1M vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0.5 ml) byl přidán do roztoku sloučeniny 2a (20 mg; 0.045 mmol) v tetrahydrofuranu (4 ml) a reakce byla zahřívána na 40 °C 4 hodiny. Poté byla reakce zředěna ethyl-acetátem a vytřepána dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za snížené tlaku a surový produkt bych čištěn sloupcovou chromatografri na silikagelu (60% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 3a.
Bílý prášek, chemický vzorec: C23H3eO3, výtěžek: 15 mg, 93 %. 'HNMR (CDC13, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.69 (s, 3H, CH3); 0.76 (s, 3H, CH3); 1.04 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 1.91 (dd, 1H, J = 15.0 a 3.1 Hz); 1.97-2.11 (m, 2H); 2.29 (dd, 1H, J = 13.3 a 4.4 Hz); 2.68 (dd, 1H, J = 12.5 a 2.8 Hz); 3.77 (m, 1H, Η-2β); 4.05 (m, 1H, Η-3β); 4.83 (dd, 1H, J = 10.1 a 1.9 Hz, H-23a); 4.91 (dd, 1H, J = 17.1 a 1.1 Hz, H-23b); 5.65 (ddd, 1H, J = 17.1, 10.1 a 8.6 Hz, H-22). 13C NMR δ 12.17, 13.54, 20.04, 21.14, 23.90, 26.26, 28.15, 37.62, 39.24, 40.13, 41.11, 42.57, 42.88, 46.71, 50.67, 53.68, 55.25, 56.64, 68.24, 68.35, 111.84, 144.85, 212.23. HRMS (API): m/z vypočteno pro C23H37O3 [M+H]+ 361.2743, nalezeno 361.2741.
2a,3a-Dihydroxy-24-nor-5a-cholan-6-on (sloučenina 4a)
Palladium na uhlí (12 mg) bylo přidáno do roztoku sloučeniny 3a (12 mg; 0.033 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) a ethanolu (1 ml). Vzduch z reakční baňky byl evakuován a do reakce byl přidán vodík z balónku. Takto byla reakce míchána 18 hodin. Poté bylo palladium na uhlí odfiltrováno, rozpouštědla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografri na silikagelu (60% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 4a.
Bílý prášek, chemický vzorec: C23H38O3, výtěžek: 11 mg, 91 %. 'HNMR (CDC13, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.66 (s, 3H, CH3); 0.75 (s, 3H, CH3); 0.83 (t, 3H, J = 7.2 Hz, CH3); 0.91 (d, 3H, J = 6.4 Hz, CH3); 1.91 (dd, 1H, J = 15.2 a 3.0 Hz); 1.96-2.08 (m, 2H); 2.30 (dd, 1H, J = 13.3 a 4.5 Hz); 2.68 (dd, 1H, J = 12.5 a 2.7 Hz); 3.76 (m, 1H, Η-2β); 4.05 (m, 1H, Η-3β). 13C NMR δ 10.29, 11.98, 13.53, 17.98, 21.16, 23.92, 26.26, 28.17, 30.27, 36.88, 37.67, 39.35, 40.14, 42.58, 42.86, 46.77,
- 17 CZ 2020 - 579 A3
0.69, 53.69, 55.49, 56.62, 68.27, 68.37, 212.34. HRMS (API): m/z vypočteno pro C23H39O3 [M+H]+ 363.2899, nalezeno 363.2902.
Příklad 2 (22Z)-2a,3a-(Isopropylidendioxy)-6,6-(ethylenedioxy)- 5a-chol-22-en (sloučenina 2b)
Do roztoku ethyltrifenylfosfonium bromidu (50 mg; 0.134 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) byl přidán roztok n-butyllithia v hexanu (1.6 M; 85 μΐ; 0.134 mmol). Reakce byla míchána pň 0 °C po dobu 30 minut. Poté byl přidán roztok aldehydu 1 (30 mg; 0.067 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) a reakce byla pomalu ohřívána na laboratorní teplotu a míchána další 2 hodiny. Po ukončení reakce byla směs zředěna ethyl-acetátem a extrahována dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografri (7% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 2b převážně jako Z izomer (přibližně 5 % A izomeru (2bE) je pozorovatelné v Ή NMR).
Bezbarvý olej, chemický vzorec: C29H46O4, výtěžek: 27 mg, 87 %. Ή NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.71 (s, 3H, CH3); 0.839 (s, 3H, CH3); 0.95 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 1.32 (s, 3H, CH3); 1.47 (s, 3H, CH3); 1.60 (dd, 3H, J = 6.7 a 1.5 Hz, CH3); 1.93 (dd, 1H, J = 12.7 a 6.9 Hz); 1.97 (m, 1H); 2.15 (m, 1H); 2.46 (m, 1H); 3.75 (m, 1H, CH2O); 3.88-3.97 (m, 3H, CH2O); 4.10 (m, 1H, H2β); 4.27 (m, 1H, Η-3β);5.15 (m, 1H, H-22); 5.25 (m, lH,H-23). 13CNMRd 12.25, 13.10, 13.37, 20.42, 20.71, 21.95, 24.13, 26.55, 27.88, 28.60, 32.85, 33.70, 38.00, 39.55, 41.03, 42.37, 42.70, 45.48, 53.01, 55.95, 56.16, 64.15, 65.47, 72.84, 72.95, 107.51, 109.67, 120.29, 137.50. HRMS (API): m/z vypočteno pro C29H47O4 [M+H]+ 459.3474, nalezeno 459.3475. Vybrané Ή NMR píky pro 22A-izomer (2bE): δ 0.67 (s, 3H, CH3); 0.833 (s, 3H, CH3); 0.98 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 5.29 (m, 1H).
(22Z)-2a,3a-Dihydroxy-5a-chol-22-en-6-on (sloučenina 3b)
1M vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0.5 ml) byl přidán do roztoku sloučeniny 2b (20 mg; 0.045 mmol) v tetrahydrofuranu (4 ml) a reakce byla zahřívána na 40 °C 4 hodiny. Poté byla reakce zředěna ethyl-acetátem a vytřepána dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za snížené tlaku a surový produkt bych čištěn sloupcovou chromatografri na silikagelu (60% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 3b (díky přítomnosti minoritního E-izomeru 2bE ve výchozí sloučenině je v Ή NMR pozorovatelný i izomer 3bE v množství cca 5 %).
-18 CZ 2020 - 579 A3
Bílý prášek, chemický vzorec: C24H38O3, výtěžek: 15 mg, 92 %. 'HNMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.71 (s, 3H, CH3); 0.764 (s, 3H, CH3); 0.97 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 1.60 (dd, 3H, J = 6.7 a 1.5 Hz, CH3); 1.92 (dd, 1H, J = 15.1 a 3.2 Hz); 1.97-2.06 (m, 2H); 2.30 (dd, 1H, J = 13.1 a 4.5 Hz); 2.47 (m, 1H); 2.69 (dd, 1H, J = 12.5 a 2.8 Hz); 3.78 (m, 1H, Η-2β); 4.05 (m, 1H, Η-3β);5.15 (m, 1H, H-22); 5.28 (m, 1H, H-23). 13C NMR δ 12.28, 13.13, 13.55, 20.40, 21.16, 23.89, 26.26, 27.75, 33.65, 37.65, 39.27, 40.17, 42.60, 42.83, 46.74, 50.68, 53.74, 56.04, 56.68, 68.26, 68.36, 120.58, 137.20, 212.22. HRMS (API): m/z vypočteno pro C24H39O3 [M+H]+ 375.2899, nalezeno 375.2897. Vybrané Ή NMR píky pro 22E-izomer (3bE): δ 0.67 (s, 3H, CH3); 0.757 (s, 3H, CH3); 1.00 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 5.34 (m, 1H).
2a,3a-Dihydroxy-5a-cholan-6-on (sloučenina 4b)
Palladium na uhlí (12 mg) bylo přidáno do roztoku sloučeniny 3b s minoritním izomerem 3bE (12 mg; 0.033 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) a ethanolu (1 ml). Vzduch z reakční baňky byl evakuován a do reakce byl přidán vodík z balónku. Takto byla reakce míchána 18 hodin. Poté bylo palladium na uhlí odfiltrováno, rozpouštědla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 4b.
Bílý prášek, chemický vzorec: C24H40O3, výtěžek: 10 mg, 83 %. 'HNMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.66 (s, 3H, CH3); 0.76 (s, 3H, CH3); 0.87 (t, 3H, J = 7.0 Hz, CH3); 0.91 (d, 3H, J = 6.4 Hz, CH3); 1.92 (dd, 1H, J = 15.2 a 3.3 Hz); 1.97-2.08 (m, 2H); 2.30 (dd, 1H, J = 13.2 a 4.6 Hz); 2.68 (dd, 1H, J = 12.6 a 2.9 Hz); 3.77 (m, 1H, Η-2β); 4.05 (m, 1H, Η-3β). 13C NMR δ 11.98, 13.54, 14.52, 18.56, 19.19, 21.18, 23.93, 26.26, 28.01, 35.49, 37.68, 38.20, 39.38, 40.17, 42.60, 42.92, 46.78, 50.69, 53.70, 56.05, 56.66, 68.29, 68.38, 212.26. HRMS (API): m/z vypočteno pro C24H39O2 [(M-H20)+H]+ 359.2950, nalezeno 359.2948.
Příklad 3 (22Z)-2a,3a-(Isopropylidendioxy)-6,6-(ethylenedioxy)-26,27-dinor-5a-cholest-22-en (sloučenina 2c)
Do roztoku propyltrifenylfosfonium bromidu (52 mg; 0.135 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) byl přidán roztok n-butyllithia v hexanu (1.6 M; 85 pl; 0.134 mmol). Reakce byla míchána
-19 CZ 2020 - 579 A3 při 0 °C po dobu 30 minut. Poté byl přidán roztok aldehydu 1 (30 mg; 0.067 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) a reakce byla pomalu ohřívána na laboratorní teplotu a míchána další 2 hodiny. Po ukončení reakce byla směs zředěna ethyl-acetátem a extrahována dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografri (7% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 2c převážně jako Z izomer (přibližně 7 % A izomeru (2cE) je pozorovatelné v Ή NMR).
Bezbarvý olej, chemický vzorec: C30H48O4, výtěžek: 28 mg, 88 %. Ή NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.70 (s, 3H, CH3); 0.841 (s, 3H, CH3); 0.95 (t, 3H, J = 7.4 Hz, CH3); 0.96 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 1.33 (s, 3H, CH3); 1.48 (s, 3H, CH3); 1.91-1.99 (m, 2H); 2.00-2.09 (m, 2H); 2.16 (m, 1H); 2.42 (m, 1H); 3.75 (m, 1H, CH2O); 3.88-3.97 (m, 3H, CH2O); 4.11 (m, 1H, Η-2β); 4.27 (m, 1H, Η-3β); 5.09 (m, 1H, H-22); 5.18 (m, 1H, H-23). 13C NMR δ 12.26, 13.38, 14.49, 20.71, 20.80, 20.86, 21.96, 24.13, 26.56, 28.06, 28.61, 32.86, 34.15, 38.00, 39.56, 41.03, 42.37, 42.70, 45.48, 53.01, 55.97, 56.02, 64.16, 65.48, 72.84, 72.95, 107.52, 109.68, 128.22, 135.93. HRMS (API): m/z vypočteno pro C30H49O4 [M+H]+ 473.3631, nalezeno 473.3633. Vybrané Ή NMR píky pro 22Eizomer (2cE): δ 0.67 (s, 3H, CH3); 0.838 (s, 3H, CH3); 0.99 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 5.33 (m, 1H).
(22Z)-2a,3a-Dihydroxy-26,27-dinor-5a-cholest-22-en-6-on (sloučenina 3c)
1M vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0.5 ml) byl přidán do roztoku sloučeniny 2c (20 mg; 0.042 mmol) v tetrahydrofuranu (4 ml) a reakce byla zahřívána na 40 °C 4 hodiny. Poté byla reakce zředěna ethyl-acetátem a vytřepána dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za snížené tlaku a surový produkt bych čištěn sloupcovou chromatografri na silikagelu (60% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 3c (díky přítomnosti minoritního E-izomeru 2cE ve výchozí sloučenině je v Ή NMR pozorovatelný i izomer 3cE v množství cca 7 %).
Bílý prášek, chemický vzorec: Cm^oCE, výtěžek: 15 mg, 91 %. Ή NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.70 (s, 3H, CH3); 0.76 (s, 3H, CH3); 0.95 (t, 3H, J = 7.4 Hz, CH3); 0.97 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 1.91 (dd, 1H, J = 15.3 a 3.1 Hz); 1.97-2.07 (m, 2H); 2.29 (dd, 1H, J = 13.1 a 4.6 Hz); 2.43 (m, 1H); 2.68 (dd, 1H, J = 12.5 a 2.8 Hz); 3.77 (m, 1H, Η-2β); 4.05 (m, 1H, Η-3β); 5.09 (m, 1H, H-22); 5.19 (m, 1H, H-23). 13C NMR δ 12.40, 13.68, 14.60, 20.89, 21.00, 21.28, 24.02, 26.40, 28.07, 34.22, 37.78, 39.41, 40.28, 42.73, 42.94, 46.87, 50.80, 53.85, 56.02, 56.82, 68.37, 68.47, 128.61, 135.74, 212.39. HRMS (API): m/z vypočteno pro Q5H41O3 [M+H]+ 389.3056, nalezeno 389.3053. Vybrané Ή NMR píky pro 22A-izomer (3bE): δ 0.67 (s, 3H, CH3); 0.74 (s, 3H, CH3); 1.00 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 5.35 (m, 1H).
-20 CZ 2020 - 579 A3
2a,3a-Dihydroxy-26,27-dinor-5a-cholestan-6-on (sloučenina 4c)
Palladium na uhlí (12 mg) bylo přidáno do roztoku sloučeniny 3c s minoritním izomerem 3cE (12 mg; 0.031 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) a ethanolu (1 ml). Vzduch z reakční baňky byl evakuován a do reakce byl přidán vodík z balónku. Takto byla reakce míchána 18 hodin. Poté bylo palladium na uhlí odfiltrováno, rozpouštědla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 4c.
Bílý prášek, chemický vzorec: C25H42O3, výtěžek: 10 mg, 83 %. Ή NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.66 (s, 3H, CH3); 0.75 (s, 3H, CH3); 0.89 (t, 3H, J = 7.0 Hz, CH3); 0.91 (d, 3H, J = 6.4 Hz, CH3); 1.91 (dd, 1H, J = 15.2 a 3.3 Hz); 1.96-2.07 (m, 2H); 2.30 (dd, 1H, J = 13.2 a 4.6 Hz); 2.68 (dd, 1H, J = 12.6 a 3.0 Hz); 3.76 (m, 1H, Η-2β); 4.05 (m, 1H, Η-3β). 13C NMR δ 11.98, 13.53, 14.17, 18.61, 21.17, 23.11, 23.92, 26.26, 27.99, 28.28, 30.28, 35.50, 37.68, 39.37, 40.16, 42.59, 42.90, 46.78, 50.69, 53.70, 55.97, 56.65, 68.28, 68.38, 212.32. HRMS (API): m/z vypočteno pro C25H43O2 [(M-H20)+H]+ 391.3212, nalezeno 391.3209.
Příklad 4 (22Z)-2a,3a-(Isopropylidendioxy)-6,6-(ethylenedioxy)-27-nor-5a-cholest-22-en (sloučenina 2d)
Do roztoku butyltrifenylfosfonium bromidu (54 mg; 0.135 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) byl přidán roztok n-butyllithia v hexanu (1.6 M; 85 pl; 0.134 mmol). Reakce byla míchána při 0 °C po dobu 30 minut. Poté byl přidán roztok aldehydu 1 (30 mg; 0.067 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) a reakce byla pomalu ohřívána na laboratorní teplotu a míchána další 2 hodiny. Po ukončení reakce byla směs zředěna ethyl-acetátem a extrahována dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (7% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 2d převážně j ako Z izomer (20 % E izomeru (2dE) j e pozorovatelné v Ή NMR).
Bezbarvý olej, chemický vzorec: C31H50O4, výtěžek: 27 mg, 82 %. Ή NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.70 (s, 3H, CH3); 0.84 (s, 3H, CH3); 0.89 (t, 3H, J = 7.0 Hz, CH3); 0.91 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 1.33 (s, 3H, CH3); 1.48 (s, 3H, CH3); 1.89-2.09 (m, 5H); 2.15 (m, 1H); 2.42 (m, 1H); 3.75 (m, 1H, CH2O); 3.88-3.97 (m, 3H, CH2O); 4.10 (m, 1H, Η-2β); 4.28 (m, 1H, Η-3β); 5.11-5.20 (m, 2H H-22, H-23). 13C NMR δ 12.28, 13.39, 13.91, 20.72, 20.74, 21.97, 22.98, 24.14, 26.57, 28.03, 28.61, 29.67, 32.86, 34.19, 38.01, 39.57, 41.03, 42.37, 42.71, 45.49, 53.02, 55.97, 56.10, 64.17, 65.48, 72.84, 72.96, 107.52, 109.68, 126.44, 136.64. HRMS (API): m/z vypočteno pro C31H51O4 [M+H]+ 487.3787, nalezeno 487.3783. Vybrané Ή NMR píky pro 22E-izomer (2dE): δ 0.68 (s, 3H, CH3); 0.84 (s, 3H, CH3); 0.87 (t, 3H, J = 7.0 Hz, CH3); 1.00 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 5.28 (m, 1H).
-21 CZ 2020 - 579 A3
(22Z)-2a,3a-Dihydroxy-27-nor-5a-cholest-22-en-6-on (sloučenina 3d)
1M vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0.5 ml) byl přidán do roztoku sloučeniny 2d (20 mg; 0.041 mmol) v tetrahydrofuranu (4 ml) a reakce byla zahřívána na 40 °C 4 hodiny. Poté byla reakce zředěna ethyl-acetátem a vytřepána dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za snížené tlaku a surový produkt bych čištěn sloupcovou chromatografri na silikagelu (60% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 3d (díky ίο přítomnosti minoritního E-izomeru 2dE ve výchozí sloučenině je v Ή NMR pozorovatelný i izomer 3dE v množství 20 %).
Bílý prášek, chemický vzorec: C25H40O3, výtěžek: 15 mg, 91 %. 'HNMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.70 (s, 3H, CH3); 0.764 (s, 3H, CH3); 0.91 (t, 3H, J = 7.4 Hz, CH3); 0.97 (d, 3H, J = 6.7 15 Hz, CH3); 1.92 (m, 1H); 1.96-2.07 (m, 4H); 2.29 (dd, 1H, J = 13.1 a 4.4 Hz); 2.44 (m, 1H); 2.69 (dd, 1H, J = 12.6 a 2.7 Hz); 3.78 (m, 1H, Η-2β); 4.05 (m, 1H, Η-3β); 5.11-5.24 (m, 2H, H-22, H23). 13CNMR δ 12.29, 13.56, 13.91, 20.71, 21.16, 22.96, 23.90, 26.26, 27.91, 29.68, 34.14, 37.66, 39.28, 40.16, 42.60, 42.81, 46.74, 50.67, 53.74, 55.97, 56.69, 68.26, 68.35, 126.72, 136.33,212.25. HRMS (API): m/z vypočteno pro C26H43O3 [M+H]+ 403.3212, nalezeno 403.3211. Vybrané Ή 20 NMR píky pro 22E-izomer (3bE): δ 0.67 (s, 3H, CH3); 0.758 (s, 3H, CH3); 0.87 (t, 3H, J = 7.0 Hz, CH3); 1.01 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 5.30 (m, 1H).
2a,3a-Dihydroxy-27-nor-5a-cholestan-6-on (sloučenina 4d)
Palladium na uhlí (12 mg) bylo přidáno do roztoku sloučeniny 3d s minoritním izomerem 3dE (12 mg; 0.030 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) a ethanolu (1 ml). Vzduch z reakční baňky byl evakuován a do reakce byl přidán vodík z balónku. Takto byla reakce míchána 18 hodin. Poté bylo 30 palladium na uhlí odfiltrováno, rozpouštědla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografri na silikagelu (60% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 4d.
Bílý prášek, chemický vzorec: C26H44O3, výtěžek: 10 mg, 83 %. Ή NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, 35 ppm: δ 0.66 (s, 3H, CH3); 0.76 (s, 3H, CH3); 0.89 (t, 3H, J = 7.0 Hz, CH3); 0.91 (d, 3H, J = 6.4 Hz, CH3); 1.92 (dd, 1H, J = 15.2 a 3.3 Hz); 1.96-2.07 (m, 2H); 2.30 (dd, 1H, J = 13.2 a 4.6 Hz); 2.68 (dd, 1H, J = 12.6 a 3.0 Hz); 3.77 (m, 1H, Η-2β); 4.05 (m, 1H, Η-3β). 13C NMR δ 11.98, 13.54, 14.13, 18.61, 21.17, 22.73, 23.93, 25.70, 26.26, 27.99, 30.28, 35.64, 35.77, 37.68, 39.37, 40.16, 42.59, 42.91, 46.78, 50.69, 53.70, 55.98, 56.65, 68.29, 68.38, 212.27. HRMS (API): Wzvypočteno 40 pro C26H43O2 [(M-H20)+H]+ 387.3263, nalezeno 387.3260.
Příklad 5
-22 CZ 2020 - 579 A3
2a,3a-(Isopropylidendioxy)-6,6-(ethylenedioxy)-23-methyl-5a-chol-22-en (compound 2e)
Do roztoku isopropyltrifenylfosfonium bromidu (52 mg; 0.135 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) byl přidán roztok n-butyllithia v hexanu (1.6 M; 85 pl; 0.134 mmol). Reakce byla míchána při 0 °C po dobu 30 minut. Poté byl přidán roztok aldehydu 1 (30 mg; 0.067 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) a reakce byla pomalu ohřívána na laboratorní teplotu a míchána další 2 hodiny. Po ukončení reakce byla směs zředěna ethyl-acetátem a extrahována dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (7% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 2e.
Bezbarvý olej, chemický vzorec: C30H48O4, výtěžek: 25 mg, 79 %. Ή NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.70 (s, 3H, CH3); 0.84 (s, 3H, CH3); 0.93 (d, 3H, J = 6.4 Hz, CH3); 1.33 (s, 3H, CH3); 1.48 (s, 3H, CH3); 1.60 (d, 3H, J = 0.9 Hz, CH3); 1.64 (d, 3H, J = 0.7 Hz, CH3); 1.91-1.99 (m, 2H); 2.15 (m, 1H); 2.31 (m, 1H); 3.74 (m, 1H, CH2O); 3.88-3.98 (m, 3H, CH2O); 4.10 (m, 1H, Η-2β); 4.27 (m, 1H, Η-3β); 4.89 (d, 1H, J = 9.6Hz, H-22). 13CNMRd 12.25, 13.38, 18.08,20.63,20.73,21.96, 24.10, 25.75, 26.57, 27.93, 28.62, 32.86, 35.01, 38.01, 39.56, 41.04, 42.32, 42.71, 45.49, 53.03, 55.99, 56.67, 64.16, 65.48, 72.85, 72.97, 107.53, 109.70, 127.57, 131.90. HRMS (API): m/z vypočteno pro C30H49O4 [M+H]+ 473.3631, nalezeno 473.3629.
2a,3a-Dihydroxy-23-methyl-5a-chol-22-en-6-on (sloučenina 3e)
1M vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0.5 ml) byl přidán do roztoku sloučeniny 2e (20 mg; 0.042 mmol) v tetrahydrofuranu (4 ml) a reakce byla zahřívána na 40 °C 4 hodiny. Poté byla reakce zředěna ethyl-acetátem a vytřepána dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za snížené tlaku a surový produkt bych čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 3e.
Bílý prášek, chemický vzorec: C25H4o03, výtěžek: 13 mg, 79 %. Ή NMR (CDCh, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.69 (s, 3H, CH3); 0.75 (s, 3H, CH3); 0.93 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 1.59 (s, 3H, CH3); 1.65 (s, 3H, CH3); 1.87-2.04 (m, 4H); 2.20-2.36 (m, 3H); 2.68 (dd, 1H, J = 12.5 and 2.7 Hz); 3.77 (m, 1H, Η-2β); 4.04 (m, 1H, Η-3β); 4.88 (d, 1H, J = 9.6 Hz, H-22). 13C NMR δ 12.26, 13.55, 18.08,
-23 CZ 2020 - 579 A3
20.62, 21.16, 23.85, 25.74, 27.76, 29.67, 34.92, 37.67, 39.27, 40.13, 42.61, 42.76, 46.75, 50.69, 53.74, 56.53, 56.70, 68.23, 68.33, 127.87, 131.57, 212.39. HRMS (API): m/z vypočteno pro C25H41O3 [M+H]+ 389.3056, nalezeno 389.3059.
2a,3a-Dihydroxy-23-methyl-5a-cholan-6-on (sloučenina 4e)
Palladium na uhlí (12 mg) bylo přidáno do roztoku sloučeniny 3e (12 mg; 0.031 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) a ethanolu (1 ml). Vzduch z reakční baňky byl evakuován a do reakce byl přidán vodík z balónku. Takto byla reakce míchána 48 hodin. Poté bylo palladium na uhlí odfiltrováno, rozpouštědla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 4e.
Bílý prášek, chemický vzorec: C25H40O3, výtěžek: 11 mg, 91 %. 'HNMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.68 (s, 3H, CH3); 0.76 (s, 3H, CH3); 0.81 (d, 3H, J = 6.4 Hz, CH3); 0.87 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 0.89 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 1.84-1.93 (m, 2H); 2.00 (t, 1H, J = 2.7 Hz); 2.07 (m, 1H); 2.30 (dd, 1H, J = 13.1 and 4.6 Hz); 2.68 (bd, 1H, J = 12.2 Hz); 3.80 (vbs, 1H, Η-2β); 4.05 (bs, 1H, H3β). 13CNMR δ 12.01, 13.55, 18.53, 21.17, 21.32, 23.92, 24.54, 24.85, 28.25, 33.79, 37.66, 39.43, 40.15, 42.59, 43.00, 45.64, 46.76, 50.66, 53.69, 56.69, 56.95, 68.20 68.29, 212.26. HRMS (API): m/z vypočteno pro C25H41O3 [M+H]+ 389.3056, nalezeno 389.3059.
Příklad 6
(22Z)-23-Cyklohexyl-2a,3a-(Isopropylidendioxy)-6,6-(ethylenedioxy)-24-nor-5a-chol-22-en (sloučenina 2f)
Do roztoku (cyklohexyl)methyltrifenylfosfonium bromidu (59 mg; 0.134 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) byl přidán roztok n-butyllithia v hexanu (1.6 M; 85 pl; 0.134 mmol). Reakce byla míchána při 0 °C po dobu 30 minut. Poté byl přidán roztok aldehydu 1 (30 mg; 0.067 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) a reakce byla pomalu ohřívána na laboratorní teplotu a míchána další 2 hodiny. Po ukončení reakce byla směs zředěna ethyl-acetátem a extrahována dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (7% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 2f převážně jako Z izomer (přibližně 5 % E izomeru (2fE) je pozorovatelné v ’HNMR).
-24 CZ 2020 - 579 A3
Bezbarvý olej, chemický vzorec: C34H54O4, výtěžek: 28 mg, 79 %. Ή NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.71 (s, 3H, CH3); 0.85 (s, 3H, CH3); 0.96 (t, 3H, J = 6.9 Hz, CH3); 1.33 (s, 3H, CH3); 1.48 (s, 3H, CH3); 1.91-2.00 (m, 2H); 2.12-2.29 (m, 2H); 2.40 (m, 1H); 3.75 (m, 1H, CH20); 3.89-3.98 (m, 3H, CH2O); 4.10 (m, 1H, Η-2β); 4.27 (m, 1H, Η-3β); 4.97-5.05 (m, 2H, H-22, H-23). 13CNMR δ 12.32, 13.41, 20.74, 21.27, 21.97, 24.16, 25.95, 26.06, 26.57, 26.87, 28.26, 28.62, 29.69, 32.87, 33.26, 33.71, 34.62, 36.57, 38.02, 39.60, 41.03, 42.37, 42.72, 45.50, 53.03, 56.01, 64.18, 65.49, 72.86, 72.97, 107.54, 109.70, 132.75, 134.59. HRMS (API): m/z vypočteno pro C34H55O4 [M+H]+ 527.4100, nalezeno 527.4098. Vybrané Ή NMR píky pro 22E-izomer (2fE): δ 0.67 (s, 3H, CH3); 0.84 (s, 3H, CH3); 1.00 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 5.35 (m, 1H).
(22Z)-23-Cyklohexyl-2a,3a-dihydroxy-24-nor-5a-chol-22-en-6-on (sloučenina 3f)
1M vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0.5 ml) byl přidán do roztoku sloučeniny 2f (20 mg; 0.038 mmol) v tetrahydrofuranu (4 ml) a reakce byla zahřívána na 40 °C 4 hodiny. Poté byla reakce zředěna ethyl-acetátem a vytřepána dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za snížené tlaku a surový produkt bych čištěn sloupcovou chromatografri na silikagelu (60% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 3f (díky přítomnosti minoritního E-izomeru 2fE ve výchozí sloučenině j c v 1H NMR pozorovatelný i izomer 3fE v množství 5 %).
Bílý prášek, chemický vzorec: C29H46O3, výtěžek: 12 mg, 71 %. Ή NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.71 (s, 3H, CH3); 0.76 (s, 3H, CH3); 0.98 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 1.91 (m, 1H); 1.962.07 (m, 3H); 2.22 (m, 1H), 2.28 (dd, 1H, J = 13.1 and 4.5 Hz); 2.41 (m, 1H); 2.68 (dd, 1H, J = 12.7 and 2.6 Hz); 3.78 (m, 1H, Η-2β); 4.05 (m, 1H, Η-3β); 4.98-5.05 (m, 2H, H-22, H-23). 13C NMR δ 12.31, 13.56, 21.16, 21.21, 23.91, 25.91, 26.02, 28.17, 29.67, 30.27, 33.22, 33.68, 34.59, 36.59, 37.66, 39.30, 40.15, 42.61, 42.79, 46.74, 50.69, 53.73, 55.85, 56.72, 68.25, 68.32, 132.98, 134.27, 212.30. HRMS (API): m/z vypočteno pro C29H47O3 [M+H]+443.3525, nalezeno 443.3522. Vybrané Ή NMR píky pro 22E-izomer (3fE): δ 0.67 (s, 3H, CH3); 0.75 (s, 3H, CH3); 1.00 (d, 3H, J = 6.7Hz, CH3); 5.35 (m, 1H).
-Cyklohexyl-2a,3 a-dihydroxy-24-nor-5 a-cholan-6-on (sloučenina 4f)
Palladium na uhlí (12 mg) bylo přidáno do roztoku sloučeniny 3f s minoritním izomerem 3df (12 mg; 0.027 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) a ethanolu (1 ml). Vzduch z reakční baňky byl evakuován a do reakce byl přidán vodík z balónku. Takto byla reakce míchána 18 hodin. Poté bylo palladium na uhlí odfiltrováno, rozpouštědla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografri na silikagelu (60% ethyl-acetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 4f.
-25 CZ 2020 - 579 A3
Bílý prášek, chemický vzorec: C29H48O3, výtěžek: 11 mg, 91 %. 'HNMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0.66 (s, 3H, CH3); 0.76 (s, 3H, CH3); 0.91 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CH3); 1.91 (m 1H); 1.97-2.07 (m, 2H); 2.30 (dd, 1H, J = 13.1 and 4.6 Hz); 2.68 (bd, 1H, J = 12.4 Hz); 3.79 (m, 1H, Η-2β); 4.06 (m, 1H, Η-3β).
13C NMR δ 11.99, 13.55, 18.65, 21.18, 23.94, 25.59, 26.42, 26.47, 26.77, 27.97, 32.92, 33.19,
33.71, 33.88, 35.80, 37.68, 38.06, 39.37, 40.16, 42.59, 42.91, 46.78, 50.68, 53.72, 55.89, 56.64, 68.27, 68.36, 212.22. HRMS (API): m/z vypočteno pro C29H49O3 [M+H]+ 445.3682, nalezeno 445.3680.
Tabulka 1. Sterolové deriváty vzorce I připravené analogicky na základě výše uvedených postupů
substituenty CH analýza MS analýza
R1 R2 R3 R4 a [%C, %H] [vypoč./nalezeno] [M+H]+
1 H OH H H dvojná 80.18/80.16, 10.53/10.54 345
2 OH H H H dvojná 80.18/80.16, 10.53/10.55 345
3 OH OH H H dvojná 76.62/76.60, 10.06/10.09 361
4 H OH H H jednoduchá 79.71/79.68, 11.05/11.08 347
5 OH H H H jednoduchá 79.71/79.69, 11.05/11.06 347
6 OH OH H H jednoduchá 76.20/76.18, 10.56/10.59 363
7 H OH methyl H dvojná 80.39/80.38, 10.68/10.70 359
8 OH H methyl H dvojná 80.39/80.38, 10.68/10.72 359
9 OH OH methyl H dvojná 76.96/76.94, 10.23/10.25 375
10 H OH H methyl dvojná 80.39/80.40, 10.68/10.70 359
11 OH H H methyl dvojná 80.39/80.39, 10.68/10.71 359
12 OH OH H methyl dvojná 76.96/76.93, 10.23/10.27 375
13 H OH methyl H jednoduchá 79.94/79.91, 11.18/11.21 361
14 OH H methyl H jednoduchá 79.94/79.93, 11.18/11.20 361
15 OH OH methyl H jednoduchá 76.55/76.51, 10.71/10.74 377
16 H OH methyl methyl dvojná 80.59/80.56, 10.82/10.85 373
17 OH H methyl methyl dvojná 80.59/80.58, 10.82/10.83 373
18 OH OH methyl methyl dvojná ΊΊ2ΊΠΊ25, 10.38/10.40 389
19 H OH methyl methyl jednoduchá 80.16/80.14, 11.30/11.33 375
20 OH H methyl methyl jednoduchá 80.16/80.13, 11.30/11.33 375
21 OH OH methyl methyl jednoduchá 76.87/76.85, 10.84/10.88 391
22 H OH ethyl H dvojná 80.59/80.57, 10.82/10.85 373
23 OH H ethyl H dvojná 80.59/80.56, 10.82/10.86 373
24 OH OH ethyl H dvojná ΊΊ2ΊΠΊ25, 10.38/10.40 389
25 H OH H ethyl dvojná 80.59/80.57, 10.82/10.84 373
26 OH H H ethyl dvojná 80.59/80.58, 10.82/10.83 373
27 OH OH H ethyl dvojná 77.27/77.26, 10.38/10.40 389
28 H OH ethyl H jednoduchá 80.16/80.14, 11.30/11.33 375
29 OH H ethyl H jednoduchá 80.16/80.15, 11.30/11.34 375
30 OH OH ethyl H jednoduchá 76.87/76.85, 10.84/10.86 391
-26 CZ 2020 - 579 A3
31 Η OH ethyl ethyl dvojná 80.94/80.91, 11.07/11.10 401
32 OH H ethyl ethyl dvojná 80.94/80.92, 11.07/11.08 401
33 OH OH ethyl ethyl dvojná 77.83/77.81, 10.64/10.66 417
34 H OH ethyl ethyl jednoduchá 80.54/80.53, 11.51/11.52 403
35 OH H ethyl ethyl jednoduchá 80.54/80.52, 11.51/11.51 403
36 OH OH ethyl ethyl jednoduchá 77.46/77.44, 11.07/11.09 419
37 H OH methyl ethyl dvojná 80.77/80.72, 10.95/11.01 387
38 OH H methyl ethyl dvojná 80.77/80.73, 10.95/11.00 387
39 OH OH methyl ethyl dvojná 77.56/77.52, 10.51/10.55 403
40 H OH ethyl methyl dvojná 80.77/80.74, 10.95/10.99 387
41 OH H ethyl methyl dvojná 80.77/80.73, 10.95/11.01 387
42 OH OH ethyl methyl dvojná 77.56/77.51, 10.51/10.55 403
43 H OH ethyl (23A)-methyl jednoduchá 80.35/80.31, 11.41/11.46 389
44 OH H ethyl (2311} -methyl jednoduchá 80.35/80.30, 11.41/11.46 389
45 OH OH ethyl (23R) -methyl jednoduchá 77.18/77.15, 10.96/10.99 405
46 H OH ethyl (23S)-methyl jednoduchá 80.35/80.30, 11.41/11.47 389
47 OH H ethyl (23S)-methyl jednoduchá 80.35/80.30, 11.41/11.47 389
48 OH OH ethyl (23S)-methyl jednoduchá 77.18/77.14, 10.96/11.01 405
49 H OH n-propyl H dvojná 80.77/80.76, 10.95/10.98 387
50 OH H n-propyl H dvojná 80.77/80.76, 10.95/10.99 387
51 OH OH n-propyl H dvojná 77.56/77.54, 10.51/10.53 403
52 H OH H n-propyl dvojná 80.77/80.75, 10.95/10.97 387
53 OH H H n-propyl dvojná 80.77/80.76, 10.95/10.98 387
54 OH OH H n-propyl dvojná 77.56/77.53, 10.51/10.54 403
55 H OH n-propyl H jednoduchá 80.35/80.31, 11.41/11.45 389
56 OH H n-propyl H jednoduchá 80.35/80.32, 11.41/11.43 389
57 OH OH n-propyl H jednoduchá 77.18/77.16, 10.96/11.00 405
58 H OH isopropyl H dvojná 80.77/80.75, 10.95/10.98 387
59 OH H isopropyl H dvojná 80.77/80.78, 10.95/10.99 387
60 OH OH isopropyl H dvojná 77.56/77.53, 10.51/10.53 403
61 H OH H isopropyl dvojná 80.77/80.76, 10.95/10.98 387
62 OH H H isopropyl dvojná 80.77/80.74, 10.95/10.99 387
63 OH OH H isopropyl dvojná 77.56/77.53, 10.51/10.55 403
64 H OH isopropyl H jednoduchá 80.35/80.33, 11.41/11.43 389
65 OH H isopropyl H jednoduchá 80.35/80.33, 11.41/11.45 389
66 OH OH isopropyl H jednoduchá 77.18/77.15, 10.96/10.99 405
67 H OH n-butyl H dvojná 80.94/80.92, 11.07/11.09 401
68 OH H n-butyl H dvojná 80.94/80.93, 11.07/11.10 401
69 OH OH n-butyl H dvojná 77.83/77.80, 10.64/10.67 417
70 H OH H n-butyl dvojná 80.94/80.92, 11.07/11.08 401
71 OH H H n-butyl dvojná 80.94/80.91, 11.07/11.11 401
-27 CZ 2020 - 579 A3
72 OH OH H n-butyl dvojná 77.83/77.81, 10.64/10.66 417
73 H OH n-butyl H jednoduchá 80.54/80.52, 11.51/11.54 403
74 OH H n-butyl H jednoduchá 80.54/80.53, 11.51/11.52 403
75 OH OH n-butyl H jednoduchá 77.46/77.44, 11.07/11.09 419
76 H OH (R)-but-2-yl H dvojná 80.94/80.92, 11.07/11.10 401
77 OH H (R)-but-2-yl H dvojná 80.94/80.91, 11.07/11.11 401
78 OH OH (R)-but-2-yl H dvojná 77.83/77.82, 10.64/10.65 417
79 H OH H (R)-but-2-yl dvojná 80.94/80.91, 11.07/11.09 401
80 OH H H (R)-but-2-yl dvojná 80.94/80.91, 11.07/11.10 401
81 OH OH H (R)-but-2-yl dvojná 77.83/77.81, 10.64/10.65 417
82 H OH (R)-but-2-yl H jednoduchá 80.54/80.53, 11.51/11.52 403
83 OH H (7?)-but-2-yl H jednoduchá 80.54/80.51, 11.51/11.55 403
84 OH OH (7?)-but-2-yl H jednoduchá 77.46/77.45, 11.07/11.08 419
85 H OH (S)-but-2-yl H dvojná 80.94/80.92, 11.07/11.08 401
86 OH H (S)-but-2-yl H dvojná 80.94/80.93, 11.07/11.09 401
87 OH OH (S)-but-2-yl H dvojná 77.83/77.80, 10.64/10.68 417
88 H OH H (S)-but-2-yl dvojná 80.94/80.93, 11.07/11.10 401
89 OH H H (S)-but-2-yl dvojná 80.94/80.91, 11.07/11.11 401
90 OH OH H (S)-but-2-yl dvojná 77.83/77.81, 10.64/10.67 417
91 H OH (S)-but-2-yl H jednoduchá 80.54/80.52, 11.51/11.53 403
92 OH H (S)-but-2-yl H jednoduchá 80.54/80.52, 11.51/11.54 403
93 OH OH (S)-but-2-yl H jednoduchá 77.46/77.45, 11.07/11.09 419
94 H OH terc-butyl H dvojná 80.94/80.93, 11.07/11.08 401
95 OH H terc-butyl H dvojná 80.94/80.92, 11.07/11.09 401
96 OH OH terc-butyl H dvojná 77.83/77.81, 10.64/10.66 417
97 H OH H terc-butyl dvojná 80.94/80.91, 11.07/11.11 401
98 OH H H terc-butyl dvojná 80.94/80.92, 11.07/11.10 401
99 OH OH H terc-butyl dvojná 77.83/77.82, 10.64/10.65 417
100 H OH terc-butyl H jednoduchá 80.54/80.52, 11.51/11.54 403
101 OH H terc-butyl H jednoduchá 80.54/80.53, 11.51/11.54 403
102 OH OH terc-butyl H jednoduchá 77.46/77.45, 11.07/11.08 419
103 H OH isobutyl H dvojná 80.94/80.92, 11.07/11.11 401
104 OH H isobutyl H dvojná 80.94/80.91, 11.07/11.11 401
105 OH OH isobutyl H dvojná 77.83/77.82, 10.64/10.65 417
106 H OH H isobutyl dvojná 80.94/80.93, 11.07/11.08 401
107 OH H H isobutyl dvojná 80.94/80.91, 11.07/11.09 401
108 OH OH H isobutyl dvojná 77.83/77.81, 10.64/10.67 417
109 H OH isobutyl H jednoduchá 80.54/80.51, 11.51/11.55 403
110 OH H isobutyl H jednoduchá 80.54/80.53, 11.51/11.53 403
111 OH OH isobutyl H jednoduchá 77.46/77.44, 11.07/11.10 419
112 H OH n-pentyl H dvojná 81.10/81.07, 11.18/11.20 415
-28 CZ 2020 - 579 A3
113 OH H n-pentyl H dvojná 81.10/81.08, 11.18/11.20 415
114 OH OH n-pentyl H dvojná 78.09/78.06, 10.77/10.79 431
115 H OH H n-pentyl dvojná 81.10/81.06, 11.18/11.21 415
116 OH H H n-pentyl dvojná 81.10/81.07, 11.18/11.19 415
117 OH OH H n-pentyl dvojná 78.09/78.06, 10.77/10.80 431
118 H OH n-pentyl H jednoduchá 80.71/80.68, 11.61/11.65 417
119 OH H n-pentyl H jednoduchá 80.71/80.67, 11.61/11.66 417
120 OH OH n-pentyl H jednoduchá 77.72/77.70, 11.18/11.21 433
121 H OH 3-methylbut1-yl H dvojná 81.10/81.07, 11.18/11.20 415
122 OH H 3-methylbut1-yl H dvojná 81.10/81.08, 11.18/11.19 415
123 OH OH 3-methylbut1-yl H dvojná 78.09/78.08, 10.77/10.78 431
124 H OH H 3-methylbut-lyi dvojná 81.10/81.08, 11.18/11.19 415
125 OH H H 3-methylbut-lyi dvojná 81.10/81.08, 11.18/11.20 415
126 OH OH H 3-methylbut-lyi dvojná 78.09/78.08, 10.77/10.78 431
127 H OH 3-methylbut1-yl H jednoduchá 80.71/80.69, 11.61/11.64 417
128 OH H 3-methylbut1-yl H jednoduchá 80.71/80.68, 11.61/11.65 417
129 OH OH 3-methylbut1-yl H jednoduchá 77.72/77.70, 11.18/11.20 433
130 H OH (^)-2methylbut-1yi H dvojná 81.10/81.08, 11.18/11.20 415
131 OH H (^)-2methylbut-1yi H dvojná 81.10/81.09, 11.18/11.19 415
132 OH OH (^)-2methylbut-1yi H dvojná 78.09/78.07, 10.77/10.79 431
133 H OH H (R)-2-methylbut-l-yl dvojná 81.10/81.06, 11.18/11.22 415
134 OH H H (R)-2-methylbut-l-yl dvojná 81.10/81.07, 11.18/11.21 415
135 OH OH H (R)-2-methylbut-l-yl dvojná 78.09/78.08, 10.77/10.78 431
136 H OH (^)-2methyl-buti-yi H jednoduchá 80.71/80.68, 11.61/11.64 417
137 OH H (^)-2methyl-but1-yl H jednoduchá 80.71/80.69, 11.61/11.63 417
138 OH OH (^)-2methyl-but1-yl H jednoduchá 77.72/77.69, 11.18/11.21 433
-29 CZ 2020 - 579 A3
139 Η OH (S)-2methyl-but1-yl H dvojná 81.10/81.08, 11.18/11.19 415
140 OH H (S)-2methyl-but1-yl H dvojná 81.10/81.08, 11.18/11.20 415
141 OH OH (S)-2methyl-but1-yl H dvojná 78.09/78.07, 10.77/10.79 431
142 H OH H (S)-2methylbut-l-yl dvojná 81.10/81.07, 11.18/11.21 415
143 OH H H (^)-2methylbut-l-yl dvojná 81.10/81.09, 11.18/11.20 415
144 OH OH H (^)-2methylbut-l-yl dvojná 78.09/78.08, 10.77/10.78 431
145 H OH (S)-2methyl-but1-yl H jednoduchá 80.71/80.68, 11.61/11.64 417
146 OH H (S)-2methyl-but1-yl H jednoduchá 80.71/80.68, 11.61/11.63 417
147 OH OH (S)-2methyl-but1-yl H jednoduchá 77.72/77.69, 11.18/11.22 433
148 H OH (Λ)-3methyl-but2-yl H dvojná 81.10/81.08, 11.18/11.19 415
149 OH H (Λ)-3methyl-but2-yl H dvojná 81.10/81.09, 11.18/11.19 415
150 OH OH (Λ)-3methyl-but2-yl H dvojná 78.09/78.06, 10.77/10.79 431
151 H OH H (//)-3-methyl but-2-yl dvojná 81.10/81.08, 11.18/11.19 415
152 OH H H (//)-3-methyl but-2-yl dvojná 81.10/81.07, 11.18/11.21 415
153 OH OH H (//)-3-methyl but-2-yl dvojná 78.09/78.07, 10.77/10.79 431
154 H OH (Λ)-3methyl-but2-yl H jednoduchá 80.71/80.67, 11.61/11.65 417
155 OH H (Λ)-3methyl-but2-yl H jednoduchá 80.71/80.68, 11.61/11.64 417
156 OH OH (Λ)-3methyl-but2-yl H jednoduchá 77.72/77.70, 11.18/11.20 433
157 H OH (S)-3methyl-but2-yl H dvojná 81.10/81.09, 11.18/11.19 415
-30 CZ 2020 - 579 A3
158 OH H (S)-3methyl-but2-yl H dvojná 81.10/81.09, 11.18/11.20 415
159 OH OH (S)-3methyl-but2-yl H dvojná 78.09/78.05, 10.77/10.80 431
160 H OH H (S)-3-methylbut-2-yl dvojná 81.10/81.08, 11.18/11.20 415
161 OH H H (S)-3-methylbut-2-yl dvojná 81.10/81.09, 11.18/11.21 415
162 OH OH H (S)-3-methylbut-2-yl dvojná 78.09/78.06, 10.77/10.80 431
163 H OH (S)-3methyl-but2-yl H jednoduchá 80.71/80.69, 11.61/11.64 417
164 OH H (S)-3methyl-but2-yl H jednoduchá 80.71/80.70, 11.61/11.63 417
165 OH OH (S)-3methyl-but2-yl H jednoduchá 77.72/77.69, 11.18/11.23 433
166 H OH (R)-pent-2yi H dvojná 81.10/81.07, 11.18/11.20 415
167 OH H (R)-pent-2yi H dvojná 81.10/81.08, 11.18/11.20 415
168 OH OH (R)-pent-2yi H dvojná 78.09/78.07, 10.77/10.78 431
169 H OH H (R)-pent-2-yl dvojná 81.10/81.08, 11.18/11.20 415
170 OH H H (R)-pent-2-yl dvojná 81.10/81.07, 11.18/11.21 415
171 OH OH H (R)-pent-2-yl dvojná 78.09/78.05, 10.77/10.80 431
172 H OH (R)-pent-2yi H jednoduchá 80.71/80.69, 11.61/11.64 417
173 OH H (R)-pent-2yi H jednoduchá 80.71/80.68, 11.61/11.64 417
174 OH OH (R)-pent-2yi H jednoduchá 77.72/77.70, 11.18/11.22 433
175 H OH (S)-pent-2-yl H dvojná 81.10/81.06, 11.18/11.22 415
176 OH H (S)-pent-2-yl H dvojná 81.10/81.07, 11.18/11.21 415
177 OH OH (S)-pent-2-yl H dvojná 78.09/78.06, 10.77/10.80 431
178 H OH H (S)-pent-2-yl dvojná 81.10/81.07, 11.18/11.21 415
179 OH H H (S)-pent-2-yl dvojná 81.10/81.08, 11.18/11.20 415
180 OH OH H (S)-pent-2-yl dvojná 78.09/78.07, 10.77/10.78 431
181 H OH (S)-pent-2-yl H jednoduchá 80.71/80.69, 11.61/11.65 417
182 OH H (S)-pent-2-yl H jednoduchá 80.71/80.67, 11.61/11.66 417
183 OH OH (S)-pent-2-yl H jednoduchá 77.72/77.68, 11.18/11.23 433
184 H OH pent-3-yl H dvojná 81.10/81.06, 11.18/11.22 415
185 OH H pent-3-yl H dvojná 81.10/81.07, 11.18/11.21 415
186 OH OH pent-3-yl H dvojná 78.09/78.05, 10.77/10.79 431
187 H OH H pent-3-yl dvojná 81.10/81.08, 11.18/11.19 415
-31 CZ 2020 - 579 A3
188 OH H H pent-3-yl dvojná 81.10/81.08, 11.18/11.20 415
189 OH OH H pent-3-yl dvojná 78.09/78.07, 10.77/10.80 431
190 H OH pent-3-yl H jednoduchá 80.71/80.67, 11.61/11.66 417
191 OH H pent-3-yl H jednoduchá 80.71/80.67, 11.61/11.65 417
192 OH OH pent-3-yl H jednoduchá 77.72/77.70, 11.18/11.22 433
193 H OH 1,2-ethylen dvojná 81.03/81.05, 10.34/10.38 371
194 OH H 1,2-ethylen dvojná 81.03/81.07, 10.34/10.35 371
195 OH OH 1,2-ethylen dvojná 77.68/77.65, 9.91/9.96 387
196 H OH 1,2-ethylen jednoduchá 80.59/80.55, 10.82/10.83 373
197 OH H 1,2-ethylen jednoduchá 80.59/80.54, 10.82/10.79 373
198 OH OH 1,2-ethylen jednoduchá 77.27/77.30, 10.38/10.40 389
199 H OH trimethylen dvojná 81.20/81.18, 10.48/10.50 385
200 OH H trimethylen dvojná 81.20/81.17, 10.48/10.52 385
201 OH OH trimethylen dvojná 77.95/77.91, 10.06/10.10 401
202 H OH trimethylen jednoduchá 80.77/80.74, 10.95/10.96 387
203 OH H trimethylen jednoduchá 80.77/80.75, 10.95/10.98 387
204 OH OH trimethylen jednoduchá 77.56/77.52, 10.51/10.53 403
205 H OH tetramethylen dvojná 81.35/81.31, 10.62/10.63 399
206 OH H tetramethylen dvojná 81.35/81.33, 10.62/10.63 399
207 OH OH tetramethylen dvojná 78.21/78.18, 10.21/10.25 415
208 H OH tetramethylen jednoduchá 80.94/80.92, 11.07/11.10 401
209 OH H tetramethylen jednoduchá 80.94/80.93, 11.07/11.09 401
210 OH OH tetramethylen jednoduchá 77.83/77.81, 10.64/10.66 417
211 H OH pentamethylen dvojná 81.50/81.47, 10.75/10.77 413
212 OH H pentamethylen dvojná 81.50/81.49, 10.75/10.76 413
213 OH OH pentamethylen dvojná 78.46/78.44, 10.35/10.38 429
214 H OH pentamethylen jednoduchá 81.10/81.08, 11.18/11.20 415
215 OH H pentamethylen jednoduchá 81.10/81.06, 11.18/11.22 415
216 OH OH pentamethylen jednoduchá 78.09/78.05, 10.77/10.79 431
217 H OH cyklopropyl H dvojná 81.20/81.18, 10.48/10.52 385
218 OH H cyklopropyl H dvojná 81.20/81.17, 10.48/10.52 385
219 OH OH cyklopropyl H dvojná 77.95/77.90, 10.06/10.09 401
220 H OH H cyklopropyl dvojná 81.20/81.17, 10.48/10.54 385
221 OH H H cyklopropyl dvojná 81.20/81.18, 10.48/10.54 385
222 OH OH H cyklopropyl dvojná 77.95/77.91, 10.06/10.09 401
223 H OH cyklopropyl H jednoduchá 80.77/80.74, 10.95/11.00 387
224 OH H cyklopropyl H jednoduchá 80.77/80.73, 10.95/11.02 387
225 OH OH cyklopropyl H jednoduchá 77.56/77.51, 10.51/10.56 403
226 H OH cyklobutyl H dvojná 81.35/81.29, 10.62/10.66 399
227 OH H cyklobutyl H dvojná 81.35/81.31, 10.62/10.65 399
228 OH OH cyklobutyl H dvojná 78.21/78.17, 10.21/10.26 415
-32 CZ 2020 - 579 A3
229 H OH H cyklobutyl dvojná 81.35/81.29, 10.62/10.67 399
230 OH H H cyklobutyl dvojná 81.35/81.28, 10.62/10.67 399
231 OH OH H cyklobutyl dvojná 78.21/78.18, 10.21/10.24 415
232 H OH cyklobutyl H jednoduchá 80.94/80.92, 11.07/11.10 401
233 OH H cyklobutyl H jednoduchá 80.94/80.90, 11.07/11.11 401
234 OH OH cyklobutyl H jednoduchá 77.83/77.80, 10.64/10.67 417
235 H OH cyklopentyl H dvojná 81.50/81.45, 10.75/10.79 413
236 OH H cyklopentyl H dvojná 81.50/81.46, 10.75/10.79 413
237 OH OH cyklopentyl H dvojná 78.46/78.41, 10.35/10.40 429
238 H OH H cyklopentyl dvojná 81.50/81.44, 10.75/10.80 413
239 OH H H cyklopentyl dvojná 81.50/81.44, 10.75/10.79 413
240 OH OH H cyklopentyl dvojná 78.46/78.43, 10.35/10.38 429
241 H OH cyklopentyl H jednoduchá 81.10/81.04, 11.18/11.23 415
242 OH H cyklopentyl H jednoduchá 81.10/81.06, 11.18/11.21 415
243 OH OH cyklopentyl H jednoduchá 78.09/78.06, 10.77/10.81 431
244 H OH cyklohexyl H dvojná 81.63/81.59, 10.87/10.91 427
245 OH H cyklohexyl H dvojná 81.63/81.58, 10.87/10.92 427
246 OH OH cyklohexyl H dvojná 78.68/78.64, 10.47/10.50 443
247 H OH H cyklohexyl dvojná 81.63/81.59, 10.87/10.92 427
248 OH H H cyklohexyl dvojná 81.63/81.60, 10.87/10.90 427
249 OH OH H cyklohexyl dvojná 78.68/78.63, 10.47/10.52 443
250 H OH cyklohexyl H jednoduchá 81.25/81.20, 11.29/11.34 429
251 OH H cyklohexyl H jednoduchá 81.25/81.19, 11.29/11.35 429
252 OH OH cyklohexyl H jednoduchá 78.33/78.28, 10.88/10.92 445
Příklad 6 - Test životaschoponosti na neuronům podobných lidských buňkách SH-SY5Y
Lidská neuroblastomová linie SH-SY5Y (ATCC® CRL-2266), získána z ECACC (The European Collection of Authenticated Cell Cultures) byla kultivována v Eaglově médiu modifikovaném podle Dulbecca a Hamově F12 Nutrient mixu (Dulbecco’s modified Eagle’s Medium and Ham's F12 Nutrient Mixture (DMEM:F-12, 1:1) s 1% penicilin/streptomycin mixu v inkubátoru při 37°C v 5% CO2, 95% vzduch a humifikované atmosféře. Test byl proveden v 96-jamkové desce se 7000 buňkami SH-SY5Y na jamku. Další den SH-SY5Y buňky podstoupily diferenciační proceduru pomocí all-trans retinové kyseliny (ATRA) po dobu 48hod (ATRA 10 μΜ). Po 48 hod. bylo staré DMEM/F12 médium zaměněno čerstvým médiem obsahujícím testované látky v koncentracích 0,1, 1 and 10 μΜ po dobu 24 h. Testované látky byly rozpuštěny v DMSO a přidány do média. Maximální koncentrace DMSO v médiu byla udržována pod 0,1% (v/v). Viabilita byla měřena pomocí Calcein AM (lmg/ml, ThermoFisher) viabilitního testu. Roztok Calcein AM v PBS (0.75 μΜ) byl napipetován k buňkám a inkubován po dobu 50 min. Poté byla měřen fluorescence při 488/517nm (excitace/emise) pomocí mikrodestičkového readeru Infinite M200 (TECAN). Calcein AM test viability je založen na štěpení nefluoreskujícího barviva (Calcein-AM) pomocí intracelulámích esteráz živých buněk na fluoreskující barvivo (Calcein), zatímco umírající buňky tuto schopnost ztrácí. Hodnoty v tabulce 2 ukazují % viability (životaschopnosti), vztažené ke kontrole pro všechny testované sloučeniny. Kontrola (médium s DMSO, <0,1% (obj ./obj.)) byla postulována jako 100% viability (viz první řádek tabulky). Jak je uvedeno v tabulce 2, bylo prokázáno, že žádné deriváty neindukují snížení viability.
-33 CZ 2020 - 579 A3
Tabulka 2. Účinek nových sloučenin na viabilitu lidské neuroblastomové linii SH-SY5Y (neuronům-podobný fenotyp) po 24 hodinách aplikace. Data jsou vyjádřena jako procenta DMSO kontroly jako průměr ± SEM dvou nezávislých experimentů v triplikátu.
Viabilita (% DMSO kontroly)
DMSO kontrola průměr: 100 SEM±: 0.95
Sloučenina 0.1 pM SEM± 1 pM SEM± 10 pM SEM ±
57 105,90 2,86 108,90 3,93 117,10 3,31
30 99,41 3,13 102,30 4,14 104,70 3,13
15 98,20 2,53 106,40 1,82 120,60 2,26
111 106,90 4,19 107,80 3,02 109,90 1,37
6 101,30 3,94 104,80 4,84 122,10 4,86
R-LA 0.5 pM SEM± 5 pM SEM± 50 pM SEM ±
96,12 2,68 96,93 3,59 101,2 2,09
DFO 1 pM SEM± 10 pM SEM± 100 pM SEM ±
105,7 8,48 105,5 8,49 109,5 5,92
*DMSO - dimethylsulfoxid; R-LA - kyselina R-lipoová; DFO - deferoxamin. Látky byly testovány v neuroprotektivně aktivních koncentracích.
Příklad 17 Neuroprotektivní efekt látek na glutamátem-indukovaném oxidativním poškození lidských neuronálních SH-SY5Y buňkách
Podobně jako v předchozím testu byl test proveden v 96-jamkových mikrodestičkách s 20000 buňkami na jamku. Den po vysetí buněk, SH-SY5Y byly podrobeny 48-hodinové diferenciaci pomocí all trans retinové kyseliny (ATRA) (ATRA 10 μΜ). Po 48 hodinách bylo staré médium DMEM / F12 zaměněno čerstvým médiem obsahujícím 160 mM glutamátu (Glu) bez nebo s testovanými sloučeninami v koncentracích 0,1, 1 a 10 μΜ. Jako pozitivní kontroly byla použity kyselina R-lipoová (R-LA) při 0,5, 5, 50 pM a deferoxamin (DFO) při 1, 10 a 100 pM. Po 24 hodinách byla buněčná smrt kvantifikována barvením propidium jodidem (PI) podle literatury (Stone et al., BMC Cell Biol. 2003, 4, 1) s modifikacemi.
Obecně je barvení PI spojeno s poškozenou buněčnou membránou nebo přítomností umírajících buněk (Stone et al., BMC Cell Biol. 2003,4, 1). Kvůli ztrátě adherence byly poškozené nebo mrtvé buňky barveny roztokem PI přímo v médiu v konečné koncentraci 1,5 pM a inkubovány pň pokojové teplotě po dobu 15 až 25 minut při pokojové teplotě. Buňky barvené PI byly kvantifikovány při 535/617 nm (excitace/emise) pomocí čtečky mikrodestiček Infinite M200 Pro (Tecan). Buněčná smrt generovaná 160 mM Glu byla považována za 100% buněčné smrti (tj. kontrola, se kterou je srovnáváno v tabulce 3), takže bylo pozorováno snížení buněčné smrti (neuroprotektivní účinek). Aplikace 160 mM Glu vedlo k přibližně 5-krát vyšší buněčné smrti ve srovnání s kontrolou DMSO. Jak je vidět z tabulky 3 a obr. 1, všechny testované sloučeniny při 10 pM prokázaly srovnatelný nebo vyšší neuroprotektivní účinek než pozitivní kontroly. Konkrétně byl nejvyšší účinek pozorován v případě sloučenin 15 a 6 při 10 pM s dvojnásobným neuroprotektivním účinkem než R-LA. Dále sloučeniny vykazovaly vyšší účinnost než pozitivní kontroly kvůli skutečnosti, že neuroprotektivního účinku bylo dosaženo při řádově nižších koncentracích (5 - 1 Okřát).
Tabulka 3. Neuroprotektivní účinek nových sloučenin na lidské neuroblastomové linii SH-SY5Y (neuronálnífenotyp)
-34 CZ 2020 - 579 A3
Sloučenina Neuroprotektivní efekt (% snížení buněčné smrti oproti kontrole) p hodnota
0.5 pM 5 pM 50 pM
R-LA N/A N/A 13,49 >0,001
1 pM 10 pM 100 pM
DFO N/A 19,94 23,55 >0,001
0.1 pM 1 pM 10 pM
57 N/A 15,99 24,88 >0,001
30 N/A N/A 23,17 >0,001
15 N/A N/A 30,08 >0,001
111 N/A N/A 26,52 >0,001
6 N/A 15,00 33,70 >0,001
N/A = žádná protekce; Data jsou vyjádřena jako rozdíl mezi průměry skupin 160mM Glu a cotreamentu (sloučeniny), se statistickou významností (ANOVA, Tukey post hoc test).
Příklad 18 Měření oxidačního stresu na buněčné linii lidského neuroblastomu SH-SY5Y - model PD indukovaný glutamátem
Podobně jako v předchozím testu, buňky rostoucí na 96-jamkových mikrodestičkách v denzitě 20000 buňkami na jamku podstoupily diferenciaci a testovací proceduru pro glutamátový model. Po 4 hodinách společného ošetření s glutamátem byla kvantifikována tvorba superoxidových radikálů jakožto marker oxidativního stresu (dle Kim et al. 2017, J. Med. Food, 20, 140-151 s drobnými modifikacemi). Stručně, neuronům-podobné SH-SY5Y buňky byly centrifůgovány při 500 g po dobu 5 minut a 30 sekund, poté bylo médium vyměněno za roztok 10 μΜ dihydroethidia (DHE) v fosfátovém pufru (PBS) a ponecháno při pokojové teplotě po dobu 30 minut. Po 30 minutách bylo DHE měřeno při 500 nm/580 nm (excitace/emise) pomocí Infinite M200 Pro (Tecan) mikrodestičkového readeru.
DHE je barvivo propustné pro buňky, které je selektivní vůči detekci superoxidových radikálů. Celkový oxidační stres dosažený 160 mM Glu byl považován za 100%, takže bylo pozorováno snížení oxidačního stresu (OS redukční efekt). Jak je uvedeno v tabulce 4 a na obr. 2, 160 mM Glu vyvolalo 2,6-násobné zvýšení tvorby superoxidových radikálů. Co je důležitější, že všechny příklady při 10 pM prokázaly srovnatelný nebo mírně lepší účinek snížení oxidativního stresu než antioxidant R-LA, zatímco úplně překonaly DFO. Dohromady všechny příklady ukázaly vyšší účinnost než pozitivní kontroly z hlediska koncentrací odpovědných za aktivitu snižující OS (51 Okřát účinnější než pozitivní kontroly).
Tabulka 4. Oxidativní stress indukovaný glutamátem a aktivita nových sloučenin ve snížení oxidativního stresu, testováno na neuronálních SH-SY5Y buňkách.
-35 CZ 2020 - 579 A3
Tvorba superoxidových radikálů (oxidativní stres), % kontroly (Glu 160 mM)
Průměr ±SEM
DMSO negativní kontrola 38,18 0,74
Glu 160 mM kontrola 100 1,52
Sloučeniny 1 pM ±SEM 10 pM ±SEM
57 93,34 3,83 83,99 5,33
30 84,54 3,88 81,08 3,25
15 98,27 4,65 85,61 3,28
111 89,17 4,8 80,21 3,31
6 85,36 3,38 80,19 2,95
R-LA 5 pM ±SEM 50 pM ±SEM
86,72 5,07 83,91 4,33
DFO 10 pM ±SEM 100 pM ±SEM
87,06 2,39 92,61 2,2
Data představují procenta 160 mM Glu kontroly, průměr ± SEM tří nezávislých experimentů.
Příklad 19 - Farmaceutické přípravky
Farmaceutické přípravky pro obvykle obsahují 0,1 až 99 % z hmotnosti, obzvláště 0,1 až 95 % hmotnosti, účinných látek obsahujících sterolový derivát podle tohoto vynálezu, 1 až 99,9 % hmotnosti alespoň jednoho pevného nebo kapalné pomocné látky, a od 0 do 25 % hmotnosti, obzvláště 0,1 až 25 % hmotnosti, povrchově aktivního činidla. Tyto prostředky mohou také obsahovat další přísady, jako jsou stabilizátory, například rostlinné oleje nebo epoxidované rostlinné oleje, činidla proti pěnění, například silikonový olej, konzervační látky, regulátory viskozity, pojidla, látky způsobující lepivost a nebo jiné aktivní složky. Výhodné formulace mají zejména následující složení: (% = hmotnostní procenta):
Fl: Suché kapsle
5000 Tobolek, z nichž každá obsahuje 0,25 g sterolového derivátu, se připraví následujícím způsobem:
Složení: Léčivá látka: 1250 g; Talek 180 g; Pšeničný škrob: 120 g; Stearát hořečnatý: 80 g; Laktóza 20 g.
Postup přípravy: Rozetřené látky jsou tlačeny přes síto s velikostí ok 0,6 mm. Dávka 0,33 g směsi je přenesena do želatinové tobolky pomocí stroje na plnění tobolek.
F2: Měkké tobolky
5000 měkkých želatinových tobolek, z nichž každá obsahuje 0,05 g neurosterolového derivátu jako účinnou látku, se připraví následujícím způsobem:
Složení: 250 g Účinná látka + 21 g Lauroglycol
-36 CZ 2020 - 579 A3
Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v Lauroglykol® (propylenglykol laurát, Gattefossé SA, Saint Priest, Francie) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,419 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.
F3: Měkké tobolky
5000 měkkých želatinových tobolek, z nichž každá obsahuje 0,05 g neurosterolového derivátu jako účinnou látku, se připraví následujícím způsobem:
Složení: 250 g účinné složky v 1 1 PEG 400, 1 litr Tween 80.
Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v PEG 400 (polyethylenglykol o mh mezi 380 a 420, Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a Tween 80 (polyoxyethylen sorbitan monolaurát, Atlas Chem lne., Inc., USA. , dodává Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,43 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.
Příklad 20 - Formulace tablety s řízeným uvolňováním
Jedna tableta obsahuje například 300-350 mg neurosterolového derivátu jako účinnou látku. Pomocná látka se známým účinkem: Jedna tableta obsahuje 150 až 200 mg retardující složky (Methocel, Parteck® SRP 80, Kollidon® SR, Kollidon 25, chitosan, alginát), dále lubrikantu (stearát hořečnatý), účinné látky (VH), pojivá (Prosolv SMCC 90).
Lékovou formou je tableta s řízeným uvolňováním.
Příprava tableto viny: Tablety jsou připraveny přímým lisováním. Nejprve je naváženo vypočtené množství retardující složky (Methocel, Parteck® SRP 80, Kollidon® SR, Kollidon 25, chitosan, alginát), dále lubrikantu (stearát hořečnatý), účinné látky (VH), pojivá (Prosolv SMCC 90). Následně je vzniklá směs homogenizována v homogenizátoru (Retsch MM200- Retsch GmbH, Haan). Homogenizaci se doporučuje provádět ve třech frekvencích: 10 kmitů/s, 13 a 15 kmitů/s vždy po dobu 1 minuty. Tabletovina je poté převedena do ručního lisu. Tablety jsou lisovány při zatížení 8 kN po dobu 5 minut. Zatížení je zvoleno s ohledem na požadovanou pevnost tablet 0,8 až 0,8 MPa. Hmotnost tablet činí 500 ± 5 mg.
Hydrofilní matricové tablety s hypromelosou
Tablety jsou připraveny metodou přímého lisování dle postupu uvedeného výše.
Hmotnost tablet byla 500 ± 5 mg. Složení hydrofilních tablet s hypromelosou v %:
Formulace Al A2 A3
Prosolv SMCC 90 49% 49% 49%
Methocel K4M - 30% -
Methocel K15M 30% - -
Methocel K100M - - 30%
Účinná látka 20% 20% 20%
Stearát hořečnatý 1% 1% 1%
Hydrofilní matricové tablety s retardující složkou Kollidon 25, Kollidon® SR, Parteck® SRP 80 Tablety jsou připraveny metodou přímého lisování dle postupu uvedeného výše.
Hmotnost tablet byla 500 ± 5 mg. Složení hydrofilních tablet v %:
-37 CZ 2020 - 579 A3
Formulace F1 F2 F3 F4 F5
Prosolv® SMCC 90 49% 49% 49% 49% 49%
Kollidon 25 30% 20% 10% - -
Kollidon® SR - - - 30% -
Parteck® SRP 80 - - - - 30%
Účinná látka 20% 30% 40% 20% 20%
Stearát hořečnatý 1% 1% 1% 1% 1%
Hydrofilní matricové tablety obsahující LubriTose™ MCC, Methocel K15M nebo Methocel K4M
Tablety jsou připraveny metodou přímého lisování dle postupu uvedeného výše.
Hmotnost tablet byla 500 ± 5 mg. Složení hydrofilních tablet v %:
Formulace AI A2
LubriTose™ MCC 50% 50%
Methocel K15M 30% -
Methocel K4M - 30%
Účinná látka 20% 20%

Claims (10)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Neurosterolový derivát obecného vzorce I, ve kterém, a je jednoduchá nebo dvojná vazba; dvojná vazba je nezávisle vybrána z E nebo Z konfigurace; RI, R2 jsou nezávisle vybrány z vodíku nebo hydroxylové skupiny; R3 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující vodík, lineární a rozvětvený C1-C5 alkyl a C3-C6 cykloalkyl, přičemž cykloalkyl může být popřípadě substituován alespoň jedním substituentem, kterým je C1-C5 alkyl;
    R4 je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, methylu a ethylu;
    nebo R3 a R4 společně tvoří bivalentní skupinu C2-C5 α,ω-alkylenu, a kde následující sloučeniny jsou vyloučeny z obecného vzorce I:
    2a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-cholestan-6on, (22£)-2a,3a-dihydroxy-5a-cholest-22-en-6-on, 3a-hydroxy-5a-campestan-6-on, 2α, 3αdihydroxy-5a-campestan-6-on, (22£)-3a-hydroxy-5a-campest-22-en-6-on, (22Λ)-2α.3αdihydroxy-5a-campest-22-en-6-on, (22£)-2a-hydroxy-5a-ergost-22-en-6-on, (22£)-3a-hydroxy5a-ergost-22-en-6-on, (22Z)-3a-hydroxy-5a-ergost-22-en-6-on, (22£)-2a,3a-dihydroxy-5a-ergost22-en-6-on, 3 a-hydroxy-24-nor-5 a-chol-22-en-6-on, 2α,3 a-dihydroxy-24-nor-5 a-chol-22-en-6-on.
  2. 2. Neurosterolový derivát podle nároku 1, kde substituentem R3 j e lineární C1-C5 alkyl, s výhodou vybraný ze skupiny zahrnující methylovou, ethylovou, n-propylovou, n-butylovou a n-pentylovou skupinu.
  3. 3. Neurosterolový derivát podle nároku 1, kde substituentem R3 je rozvětvený C3-C5 alkyl, s výhodou vybraný ze skupiny, kterou tvoří isopropyl, isobutyl, sek-butyl, terc-butyl, 2-methylbut2-yl, 2,2-dimethylpropyl, 3-methylbut-l-yl, pent-2-yl, pent-3-yl, 3-methylbut-2-yl a2-methylbutyl.
  4. 4. Neurosterolový derivát podle nároku 1, kde substituentem R3 je cykloalkylová skupina, s výhodou vybraná ze skupiny zahrnující cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cyklopropylmethyl, cyklobutylmethyl, cyklopentylmethyl, cyklohexylmethyl, které mohou být popřípadě substituovány lineárním C1-C5 alkylem, s výhodou C1-C3 lineárním alkylem.
  5. 5. Neurosterolový derivát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, kde substituenty R3 a R4 dohromady tvoří alkylenovou skupinu, která je vybrána ze skupiny zahrnující 1,2-ethylen, 1,3-trimethylen, 1,4tetramethylen a 1,5-pentamethylen.
  6. 6. Neurosterolový derivát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, kde v poloze R3 a/nebo na uhlíku C-23 je chirální centrum.
  7. 7. Neurosterolový derivát podle nároku 1, vybraný ze skupiny zahrnující 2a-hydroxy-24-nor-5acholan-6-on, 3a-hydroxy-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-24-nor-5a-cholan-6-on, 2αhydroxy-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-cholan-6-on, 2αhydroxy-23-methyl-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-23-methyl-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-23methyl-5 a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-26,27-dinor-5 a-cholestan-6-on, 3 a-hydroxy-26,27-dinor-5 acholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-26,27-dinor-5a-cholestan-6-on, (23R)-2a-hydroxy-23-ethyl-5acholan-6-on, (23R)-3 a-hydroxy-23 -ethyl-5 a-cholan-6-on, (23R)-2a,3 a-dihydroxy-23 -ethyl-5 acholan-6-on, (23S)-2a-hydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6-on, (23S)-3a-hydroxy-23-ethyl-5a-cholan6-on, (23S)-2a,3a-dihydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-27-nor-5a-cholestan-6-on, 3ahydroxy-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2a-hydroxy24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy
    -39 CZ 2020 - 579 A3
    24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy26a-homo-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-26a-homo-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2ahydroxy-24,24,24-trimethyl-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-24,24,24-trimethyl-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-24,24,24-trimethyl-5a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-27-nor-5a-campestan-6-on, 3 αhydroxy-27-nor-5a-campestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-27-nor-5a-campestan-6-on, 2a-hydroxy27-nor-5a-ergostan-6-on, 3a-hydroxy-27-nor-5a-ergostan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-27-nor-5aergostan-6-on; 2a-hydroxy-26a,26b-dihomo-27-nor-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy-26a,26bdihomo-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-26a,26b-dihomo-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2a-hydroxy-5a-campestan-6-on, 2a-hydroxy-5a-ergostan-6-on, 3a-hydroxy-5a-ergostan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-ergostan-6-on, 2a-hydroxy-24-ethyl-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 3 ahydroxy-24-ethyl-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-24-ethyl-24,24-dimethyl-5acholan-6-on, 2a-hydroxy-25-methyl-5a-cholestan-6-on„3a-hydroxy-25-methyl-5a-cholestan-6on, 2a,3a-dihydroxy-25-methyl-5a-cholestan-6-on, 2a-hydroxy-27-nor-5a-stigmastan-6-on, 3αhydroxy-27-nor-5a-stigmastan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-27-nor-5a-stigmastan-6-on, (24S)-2ahydroxy-26a-homo-27-nor-5 a-campestan-6-on, (248)-3 a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5 acampestan-6-on, (24S)-2a,3a-dihydroxy-26a-homo-27-nor-5a-campestan-6-on, (24R)-2ahydroxy-26a-homo-27-nor-5a-ergostan-6-on, (27/?)-3a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-crgostan-6on, (247?)-2a,3a-dihydroxy-26a-homo-27-nor-5a-ergostan-6-on, 2a-hydroxy-22-cyklopropyl23,24-dinor-5 a-cholan-6-on, 3 a-hydroxy-22-cyklopropyl-23,24-dinor-5 a-cholan-6-on, 2a,3 adihydroxy-22-cyklopropyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-22-cyklobutyl-23,24-dinor5 a-cholan-6-on, 3 a-hydroxy-22-cyklobutyl-23,24-dinor-5 a-cholan-6-on, 2a,3 a-dihydroxy-22cyklobutyl-23,24-dinor-5 a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-22-cyklopentyl-23,24-dinor-5 a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-22-cyklopentyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-22-cyklopentyl-23,24dinor-5 a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-22-cyklohexyl-23,24-dinor-5 a-cholan-6-on, 3 a-hydroxy-22cyklohexyl-23,24-dinor-5 a-cholan-6-on, 2a,3 a-dihydroxy-22-cyklohexyl-23,24-dinor-5 a-cholan6-on, 2a-hydroxy-23-cyklopropyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 3 a-hydroxy-23 -cyklopropyl-24-nor-5acholan-6-on, 2a, 3 a-dihydroxy-23 -cyklopropyl-24-nor-5 a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-23 cyklobutyl-24-nor-5 a-cholan-6-on, 3 a-hydroxy-23 -cyklobutyl-24-nor-5 a-cholan-6-on, 2a,3adihydroxy-23-cyklobutyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-23-cyklopentyl-24-nor-5a-cholan6-on, 3a-hydroxy-23-cyklopentyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-23-cyklopentyl-24nor-5 a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-23 -cyklohexyl-24-nor-5 a-cholan-6-on, 3 a-hydroxy-23 cyklohexyl-24-nor-5 a-cholan-6-on, 2a,3 a-dihydroxy-23 -cyklohexyl-24-nor-5 a-cholan-6-on.
  8. 8. Neurosterolový derivát obecného vzorce la, ve kterém, a je jednoduchá nebo dvojná vazba; dvojná vazba je nezávisle vybrána z E nebo Z konfigurace; RI, R2 jsou nezávisle vybrány z vodíku nebo hydroxylové skupiny; R3 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující vodík, lineární a rozvětvený C1-C5 alkyl a C3-C6 cykloalkyl, přičemž cykloalkyl může být popřípadě substituován alespoň jedním substituentem, kterým je C1-C5 alkyl;
    R4 je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, methylu a ethylu; nebo R3 a R4 společně tvoří bivalentní skupinu C2-C5 α,ω-alkylenu, a kde následující sloučeniny jsou vyloučeny z obecného vzorce la:
    2a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-cholestan-6on, pro použití jako léčiva.
  9. 9. Neurosterolový derivát obecného vzorce Ib ve kterém,
    -40 CZ 2020 - 579 A3 a je jednoduchá nebo dvojná vazba; dvojná vazba je nezávisle vybrána z E nebo Z konfigurace;
    RI, R2 jsou nezávisle vybrány z vodíku nebo hydroxylové skupiny; R3 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující vodík, lineární a rozvětvený C1-C5 alkyl a C3-C6 cykloalkyl, přičemž cykloalkyl může být popřípadě substituován alespoň jedním substituentem, 5 kterým je C1-C5 alkyl;
    R4 je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, methylu a ethylu; nebo R3 a R4 společně tvoří bivalentní skupinu C2-C5 α,ω-alkylenu; pro použití pň léčení a/nebo profýlaxi neurodegenerativních onemocnění.
    lO .Neurosterolový derivát pro použití podle nároku 9, kde neurodegenerativní onemocnění je ίο vybráno ze skupiny zahrnující amyotrofickou laterální sklerózu, Parkinsonovu chorobu, Alzheimerovu chorobu, Huntingtonovu chorobu, progresivní supranukleámí paralýzy, kortikobazální degenerace, frontotemporální demence, demence s Lewyho tělísky, atrofie mnohočetného systému, chronické traumatické encefalopatie a spinocerebelámí ataxie.
  10. 11 . Farmaceutická kompozice, vyznačená tím, že obsahuje jeden nebo více neurosterolových 15 derivátů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 a alespoň jeden farmaceuticky akceptovatelný nosič.
CZ2020-579A 2020-10-23 2020-10-23 Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití CZ309819B6 (cs)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2020-579A CZ309819B6 (cs) 2020-10-23 2020-10-23 Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití
US18/030,846 US20230365616A1 (en) 2020-10-23 2021-10-22 Cholestane derivatives, preparations containing these derivatives and use thereof
EP21882212.0A EP4232457A4 (en) 2020-10-23 2021-10-22 CHOLESTAN DERIVATIVES, PREPARATIONS CONTAINING THESE DERIVATIVES AND THEIR USE
PCT/CZ2021/050116 WO2022083809A1 (en) 2020-10-23 2021-10-22 Cholestane derivatives, preparations containing these derivatives and use thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2020-579A CZ309819B6 (cs) 2020-10-23 2020-10-23 Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2020579A3 true CZ2020579A3 (cs) 2022-05-04
CZ309819B6 CZ309819B6 (cs) 2023-11-08

Family

ID=81291668

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2020-579A CZ309819B6 (cs) 2020-10-23 2020-10-23 Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20230365616A1 (cs)
EP (1) EP4232457A4 (cs)
CZ (1) CZ309819B6 (cs)
WO (1) WO2022083809A1 (cs)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ302293B6 (cs) * 2007-08-22 2011-02-09 Ústav organické chemie a biochemie Akademie ved CR, v. v. i. Prirozené brassinosteroidy pro použití pri lécení hyperproliferace, lécení proliferativních onemocnení a redukci nepríznivých úcinku steroidních dysfunkcí u savcu, farmaceutické prostredky je obsahující a jejich použití
CZ303171B6 (cs) * 2009-11-04 2012-05-09 Ústav organické chemie a biochemie Akademie ved Ceské republiky, v. v. i. Použití cholestanových derivátu k výrobe léciva pro lécbu nádorového bujení a s ním spojené angiogeneze
EP4245369A3 (en) * 2011-09-08 2023-11-22 Sage Therapeutics, Inc. Neuroactive steroids, compositions, and uses thereof
CN103333216A (zh) * 2013-06-04 2013-10-02 苏州大学 5α-6-酮-胆甾烷类似物及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP4232457A4 (en) 2024-11-20
WO2022083809A1 (en) 2022-04-28
CZ309819B6 (cs) 2023-11-08
US20230365616A1 (en) 2023-11-16
EP4232457A1 (en) 2023-08-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11993563B2 (en) Solid compositions of cocrystals of cannabinoids
JPWO2003011267A1 (ja) 抗肥満剤およびその原料
KR20230159466A (ko) 구아이안계 세스퀴테르펜 유도체 및 이의 제약 용도
US20100040568A1 (en) Steroidal compounds as melanogenesis modifiers and uses thereof
CZ19498A3 (cs) Použití glykosidů z měsíčku (Calendula) pro léčbu psoriasy
CZ302293B6 (cs) Prirozené brassinosteroidy pro použití pri lécení hyperproliferace, lécení proliferativních onemocnení a redukci nepríznivých úcinku steroidních dysfunkcí u savcu, farmaceutické prostredky je obsahující a jejich použití
CN102137673A (zh) 作为黑素生成调节剂的甾族化合物及其用途
US9822125B2 (en) Benzopyran compounds as melanogenesis modifiers and uses thereof
KR101821441B1 (ko) 비타민 d의 14-에피-유사체의 새로운 제제
CZ2020579A3 (cs) Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití
US8772252B2 (en) Coumarin compounds as melanogenesis modifiers and uses thereof
US20090304615A1 (en) Tricyclic compounds as melanogenesis modifiers and uses thereof
JP2008044897A (ja) アルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピン類似化合物、およびこれを含有する育毛・養毛用組成物、美白化粧料用組成物、ならびに抗癌剤、消炎鎮痛剤、解熱剤または抗アレルギー剤としての医薬および色素性皮膚病変治療用医薬
JP6300436B2 (ja) テストステロン−５α−リダクターゼ阻害剤
KR102757367B1 (ko) 미토콘드리아에 표적기능을 가지며 미토콘드리아의 활성을 증진하는 화합물 및 이의 용도
US12378247B2 (en) Mesylate salt of para-topolin, compositions containing said salt and use thereof
US20230414645A1 (en) Terpenoid derivatives, pharmaceutical preparations containing these derivatives and their use in neuroprotection
US9138433B2 (en) Indole alkaloid compounds as melanogenesis promoters and uses thereof
JP5542145B2 (ja) イワヤツデ抽出物およびそれから分離した活性成分を含む抗菌性薬学組成物
CN112752764A (zh) 新的锌络合物、其产生及用途
JP2007145807A (ja) 美白剤
CZ202244A3 (cs) Heterocyklické purinové deriváty cytokininů, jejich použití při hojení ran a farmaceutické kompozice obsahující tyto deriváty
HK40042871A (en) Novel zinc complex, production and use of same
DE10307105A1 (de) Antitumor wirksame 2-substituierte 18a-Homoestra-1,3,5(10)-trien-3-yl sulfamate
JPS58208229A (ja) 抗腫瘍剤

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20241023