CZ309819B6 - Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití - Google Patents

Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití Download PDF

Info

Publication number
CZ309819B6
CZ309819B6 CZ2020-579A CZ2020579A CZ309819B6 CZ 309819 B6 CZ309819 B6 CZ 309819B6 CZ 2020579 A CZ2020579 A CZ 2020579A CZ 309819 B6 CZ309819 B6 CZ 309819B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
hydroxy
cholan
dihydroxy
cholestan
ethyl
Prior art date
Application number
CZ2020-579A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2020579A3 (cs
Inventor
Miroslav KVASNICA
Kvasnica Miroslav RNDr., Ph.D.
Gabriel Gonzalez
Gabriel Mgr. Gonzalez
Veronika GÓROVÁ
Veronika Bc. Górová
Miroslav Strnad
CSc. DSc. Strnad Miroslav prof. Ing.
Original Assignee
Univerzita Palackého v Olomouci
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univerzita Palackého v Olomouci filed Critical Univerzita Palackého v Olomouci
Priority to CZ2020-579A priority Critical patent/CZ309819B6/cs
Priority to US18/030,846 priority patent/US20230365616A1/en
Priority to EP21882212.0A priority patent/EP4232457A4/en
Priority to PCT/CZ2021/050116 priority patent/WO2022083809A1/en
Publication of CZ2020579A3 publication Critical patent/CZ2020579A3/cs
Publication of CZ309819B6 publication Critical patent/CZ309819B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1611—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1617—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1641—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2013—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
    • A61K9/2054—Cellulose; Cellulose derivatives, e.g. hydroxypropyl methylcellulose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/4816—Wall or shell material
    • A61K9/4825—Proteins, e.g. gelatin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J11/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 3
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J71/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton is condensed with a heterocyclic ring
    • C07J71/0005—Oxygen-containing hetero ring
    • C07J71/0026—Oxygen-containing hetero ring cyclic ketals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Neurosterolové deriváty obecného vzorce I odvozené od brassinosteroidů, jejich použití pro léčbu neurodegenerativních chorob, zejména při léčbě a profylaxi Parkinsonovy choroby a Alzheimerovy choroby, a farmaceutické přípravky obsahující tyto deriváty.

Description

Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití
Oblast techniky
Vynález se týká nových sterolových derivátů odvozených od rostlinných hormonů brasinosteroidů, jejich použití při ochraně proti buněčnému poškození a buněčné toxicitě, a přípravků obsahujících tyto deriváty.
Dosavadní stav techniky
Parkinsonova choroba (PD) je druhé nejčastější a motoricky související neurodegenerativní onemocnění, s předpokládaným nárůstem v diagnostikovaných případech dosahujícím až 12 milionů pacientů do roku 2040 (Dorsey et al. J. Parkinson's Dis. 2018, 8, S3). PD je charakterizována motorickými příznaky spojenými se specifickou degenerací a ztrátou přibližně 30 až 70 % dopaminergních neuronů v substantia nigra pars compacta a jejich projekcemi na striatum (Rizek et al. CMAJ 2016, 188, 1157). Mezi mnoho molekulárních znaků PD patří zvýšený oxidační a nitrosativní stres (OS a NS), dysfunkce mitochondrií, excitotoxicita, dysfunkce ubikvitin/proteazomálního systému (UPS) a neurozánět (Dantuma a Bott, Front. Mol. Neurosci 2014, 7; Cookson a Bandmann, Human Mol Gen 2010, 19, R21). Vzhledem k nedostatku účinné a nejen symptomatické léčby PD je vývoj léčiv zaměřen na látky s účinným léčebným účinkem na degenerativní procesy PD. Jedním ze zdrojů jsou přírodní sloučeniny, které mají tendenci vykazovat méně vedlejších účinků.
Bioaktivní molekuly spojené s Parkinsonovou chorobou, zejména panaxatriolové saponiny z Panax notoginseng, vykazovaly dostatečnou neuroprotekci proti 1-methyl-4-fenyl-1,2,3,6tetrahydropyridinem (MPTP) indukované smrti PD neuronů a zhoršení chování in vivo (Luo a kol., J. Ethnopharmacol. 2011, 133, 448). Dalším příkladem jsou ginsenosidy, steroidní sloučeniny, které vykazovaly neuroprotektivní aktivitu v MPTP modelu PD. Také zvyšovaly hladiny DA ve striatu a substantia nigra modulací exprese několika genů (Bcl -2, Bcl, Bax, kaspáza 3 a tyrosinhydroxyláza) (Wang et al., Neurochem. Int. 2009, 54, 43). Zatímco kurkumin je jedním ze silných koření, které má široké spektrum antioxidačních a neuroprotektivních aktivit zodpovědných za anti-PD aktivity, jeho syntetický derivát kurkumin glukosid byl ještě účinnější, protože byl schopen inhibovat agregaci a toxicitu α-synukleinu způsobem závislým na dávce, bylo prokázáno snížení apoptózy (kaspáza 3 a 9), oxidačního stresu a mitochondriální dysfunkce v buňkách A53T α-synuklein PC12 (Liu a kol., Pharmacol. Res. 2011, 63, 439). Dalším zdrojem terapie modifikující PD na bázi rostlin je Mucuna pruriens, rostlinný druh bohatý na antioxidanty přírodního původu, jako je koenzym Q-10 (Co-Q10) a L-DOPA. Aplikace přirozené formy LDOPA ve formě semen Mucuna pruriens prokázala účinnost při zlepšování symptomů PD, ale s lepším farmakokinetickým profilem než tradiční forma L-DOPA (Bega a Zadikoff, J. Mov. Dis. 2014, 7, 57). Konečně Co-Q10 a kreatin byly jedněmi z nejvíce studovaných přírodních sloučenin pro léčbu PD. Co-Q10 vykazoval širokou neuroprotektivní aktivitu v modelech PD založených na paraqatu, rotenonu, 1-methyl-4-fenylpyridiniu (MPP+) a MPTP. Bylo také zjištěno, že zlepšují symptomy PD v preklinické studii na primátech a v několika klinických studiích (Shults a kol., Arch. Neur. 2002, 59, 1541; Exp. Neurol. 2004, 188, 491).
Předmětem předkládaného vynálezu je proto poskytnout novou generaci derivátů neurosterolů, které vykazují silné a selektivní ochranné vlastnosti na neuronálních buňkách a tkáních a mohou být použity při léčbě a profylaxi neurodegenerativních chorob, zejména Parkinsonovy choroby.
- 1 CZ 309819 B6
Podstata vynálezu
Předmětem tohoto vynálezu jsou neurosterolové deriváty obecného vzorce I,
ve kterém
RI, R2 jsou nezávisle vybrány z vodíku nebo hydroxylové skupiny;
R3 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující vodík, lineární a rozvětvený C1-C5 alkyl a C3C6 cykloalkyl, přičemž cykloalkyl může být popřípadě substituován alespoň jedním substituentem, kterým je C1-C5 alkyl;
R4 je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, methylu a ethylu;
nebo R3 a R4 společně tvoří bivalentní skupinu C2-C5 α,ω-alkylenu, a kde následující sloučeniny jsou vyloučeny z obecného vzorce I:
2a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-cholestan-6on, 3a-hydroxy-5a-campestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-campestan-6-on.
S výhodou nejsou R3 a R4 zároveň vodík, tedy alespoň jeden z R3 a R4 je odlišný od vodíku.
V některých provedeních vynálezu nesou sloučeniny obecného vzorce I jako substituent R3 lineární C1-C5 alkyl, s výhodou vybraný ze skupiny zahrnující methylovou, ethylovou, npropylovou, n-butylovou a n-pentylovou skupinu.
V některých provedeních vynálezu nesou sloučeniny obecného vzorce I jako substituent R3 rozvětvený C3-C5 alkyl, s výhodou vybraný ze skupiny, kterou tvoří isopropyl, isobutyl, sekbutyl, terc-butyl, 2-methylbut-2-yl, 2,2-dimethylpropyl, 3-methylbut-l-yl, pent-2-yl, pent-3-yl, 3methylbut-2-yl a 2-methylbutyl.
V ještě některých provedeních vynálezu nesou sloučeniny obecného vzorce I jako substituent R3 cykloalkylovou skupinu, s výhodou vybranou ze skupiny zahrnující cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cyklopropylmethyl, cyklobutylmethyl, cyklopentylmethyl, cyklohexylmethyl, které mohou být popřípadě substituovány lineárním C1-C5 alkylem, s výhodou C1-C3 lineárním alkylem.
S výhodou je jeden z R3 nebo R4 atom vodíku, a druhý z nich není atom vodíku.
-2CZ 309819 B6
V některých provedeních vynálezu nesou sloučeniny obecného vzorce I jako substituenty R3 a R4 alkylenovou skupinu, která je vybrána ze skupiny zahrnující 1,2-ethylen, 1,3-trimethylen, l,4-tetramethylen a 1,5-pentamethylen.
V některých provedeních vynálezu nesou sloučeniny obecného vzorce I v poloze R3 substituent mající chirální centrum, kde je absolutní konfigurace buď R, nebo S.
V některých provedeních vynálezu mají sloučeniny obecného vzorce I na uhlíku C-23 chirální centrum, kde je absolutní konfigurace buď R, nebo S.
Jednotlivé sloučeniny popsané v příkladech představují jednotlivá výhodná provedení předloženého vynálezu. Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou sterolové deriváty následujících vzorců, kde jeden nebo oba z RI, R2 jsou hydroxy substituenty:
2a-hydroxy-24-nor-5a-cholan-6-on, a-hydroxy-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-24-nor-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-cholan-6-on:
2a-hydroxy-23-methyl-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-23-methyl-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-23-methyl-5a-cholan-6-on;
-3CZ 309819 B6
2a-hydroxy-26,27-dinor-5a-cholestan-6-on, a-hydroxy-26,27-dinor-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-26,27-dinor-5a-cholestan-6-on;
(23Á)-2a-hydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6-on, (23Á)-3a-hydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6-on, (237?)-2a,3a-dihydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6-on;
(23S)-2a-hydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6-on, (23S)-3a-hydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6-on, (23S)-2a,3a-dihydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-27-nor-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-27-nor-5a-cholestan-6-on;
-4CZ 309819 B6
2a-hydroxy-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-cholestan-6-on, a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-26a-homo-27-nor-5a-cholestan-6-on;
2a-hydroxy-24,24,24-trimethyl-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-24,24,24-trimethyl-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-24,24,24-trimethyl-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-27-nor-5a-campestan-6-on, a-hydroxy-27-nor-5a-campestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-27-nor-5a-campestan-6-on;
- 5 CZ 309819 B6
2a-hydroxy-27-nor-5a-ergostan-6-on, 3a-hydroxy-27-nor-5a-ergostan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-27-nor-5a-ergostan-6-on;
2a-hydroxy-26a,26b-dihomo-27-nor-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy-26a,26b-dihomo-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-26a,26b-dihomo-27-nor-5a-cholestan-6-on;
2a-hydroxy-5a-campestan-6-on;
2a-hydroxy-5a-ergostan-6-on, 3a-hydroxy-5a-ergostan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-ergostan-6-on;
-6CZ 309819 B6
2a-hydroxy-24-ethyl-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-24-ethyl-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-24-ethyl-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-25-methyl-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy-25-methyl-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-25-methyl-5a-cholestan-6-on;
2a-hydroxy-27-nor-5a-stigmastan-6-on, a-hydroxy-27-nor-5a-stigmastan-6-on, 2a,3 a-dihydroxy-27-nor-5a-stigmastan-6-on;
(24S)-2a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-campestan-6-on, (24S)-3a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-campestan-6-on, (24S)-2a,3a-dihydroxy-26a-homo-27-nor-5a-campestan-6-on;
-7 CZ 309819 B6
(24R)-2a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-ergostan-6-on, (24R)-3a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-ergostan-6-on, (247?)-2a,3a-dihydroxy-26a-homo-27-nor-5a-ergostan-6-on;
2a-hydroxy-22-cyklopropyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-22-cyklopropyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-22-cyklopropyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-22-cyklobutyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-22-cyklobutyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-22-cyklobutyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-22-cyklopentyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-22-cyklopentyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-22-cyklopentyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on;
-8CZ 309819 B6
2a-hydroxy-22-cyklohexyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-22-cyklohexyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-22-cyklohexyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-23-cyklopropyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-23-cyklopropyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-23-cyklopropyl-24-nor-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-23-cyklobutyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-23-cyklobutyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-23-cyklobutyl-24-nor-5a-cholan-6-on;
2a-hydroxy-23-cyklopentyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-23-cyklopentyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-23-cyklopentyl-24-nor-5a-cholan-6-on;
-9CZ 309819 B6
2a-hydroxy-23-cyklohexyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-23-cyklohexyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-23-cyklohexyl-24-nor-5a-cholan-6-on.
Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou tyto deriváty obecného vzorce I: 2a,3a-dihydroxy24-nor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-26,27-dinor-5acholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-23-methyl-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-23-cyklohexyl-24-nor-5a-cholan6-on, 2a,3a-dihydroxy-23-cyklopentyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-24,24-dimethyl5a-cholan-6-on.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mají širokou škálu biologických aktivit, včetně aktivit při zvyšování životaschopnosti neuronálních buněk, snižování oxidačního stresu, neuroprotektivity a antiapoptotické aktivace, které jsou zvláště užitečné ve farmaceutických aplikacích k léčbě neurodegenerativních chorob a odpovídají spektru účinků požadovaných od léčiv určených pro takovou léčbu.
Předmětem tohoto vynálezu jsou dále neurosterolové deriváty obecného vzorce la,
ve kterém
RI, R2 jsou nezávisle vybrány z vodíku nebo hydroxylové skupiny;
R3 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující vodík, lineární a rozvětvený C1-C5 alkyl a C3C6 cykloalkyl, přičemž cykloalkyl může být popřípadě substituován alespoň jedním substituentem, kterým je C1-C5 alkyl;
R4 je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, methylu a ethylu;
nebo R3 a R4 společně tvoří bivalentní skupinu C2-C5 α,ω-alkylenu, a kde následující sloučeniny jsou vyloučeny z obecného vzorce la:
- 10CZ 309819 B6
2a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-cholestan-6on, pro použití jako léčiva.
Předmětem tohoto vynálezu jsou sterolové deriváty obecného vzorce Ib,
(Ib), ve kterém
RI, R2 jsou nezávisle vybrány z vodíku nebo hydroxylové skupiny;
R3 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující vodík, lineární a rozvětvený C1-C5 alkyl a C3C6 cykloalkyl, přičemž cykloalkyl může být popřípadě substituován alespoň jedním substituentem, kterým je C1-C5 alkyl;
R4 je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, methylu a ethylu;
nebo R3 a R4 společně tvoří bivalentní skupinu C2-C5 α,ω-alkylenu;
pro použití při léčení a/nebo profylaxi neurodegenerativních onemocnění, kde neurodegenerativní onemocnění je s výhodou vybráno ze skupiny zahrnující amyotrofickou laterální sklerózu, Parkinsonovu chorobu, Alzheimerovu chorobu, Huntingtonovu chorobu, progresivní supranukleární paralýzy, kortikobazální degenerace, frontotemporální demence, demence s Lewyho tělísky, atrofie mnohočetného systému, chronické traumatické encefalopatie a spinocerebelární ataxie.
Předmětem tohoto vynálezu jsou ve výhodném provedení sterolové deriváty obecného vzorce Ib pro použití při léčbě a profylaxi Parkinsonovy nemoci.
Tento vynález dále poskytuje farmaceutické kompozice obsahující jeden nebo více sterolových derivátů obecného vzorce I společně s alespoň jedním farmaceuticky akceptovatelným nosičem.
Farmaceutické přípravky
Vhodné cesty pro systémovou aplikaci jsou orální, inhalační, injekční (intravazální, intramuskulární, subkutanní), bukální, sublingualní a nasální. Preferovaný způsob podání závisí na stavu pacienta a místě onemocnění, kromě ostatních ohledů známých klinikovi.
Farmaceutický přípravek obsahuje od 1 do 95 % aktivní látky, přičemž jednorázové dávky obsahují přednostně od 20 do 90 % aktivní látky a při způsobech aplikace, které nejsou jednorázové, obsahují přednostně od 5 do 20 % aktivní látky. Jednotkové dávkové formy jsou např. potahované tablety, tablety, ampule, lahvičky, čípky nebo tobolky. Jiné formy aplikace jsou
- 11 CZ 309819 B6 např. masti, krémy, pasty, pěny, tinktury, rtěnky, kapky, spreje, disperze atd. Příkladem jsou tobolky obsahující od 0,05 g do 1,0 g aktivní látky.
Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu jsou připravovány známým způsobem, např. běžným mícháním, granulací, potahováním, rozpouštěcími nebo lyofilizačními procesy.
Přednostně jsou používány roztoky aktivních látek a dále také suspenze nebo disperze, obzvláště izotonické vodné roztoky, suspenze nebo disperze, které mohou být připraveny před použitím, např. v případě lyofilizovaných preparátů obsahujících aktivní látku samotnou nebo s nosičem jako je manitol. Farmaceutické přípravky mohou být sterilizovány a/nebo obsahují pomocné látky, např. konzervační přípravky, stabilizátory, zvlhčovadla a/nebo emulgátory, rozpouštěcí činidla, soli pro regulaci osmotického tlaku a/nebo pufry. Jsou připravovány známým způsobem, např. běžným rozpouštěním nebo lyofilizací. Zmíněné roztoky nebo suspense mohou obsahovat látky zvyšující viskozitu, jako např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, dextran, polyvinylpyrolidon nebo želatinu.
Olejové suspense obsahují jako olejovou složku rostlinné, syntetické nebo semisyntetické oleje obvyklé pro injekční účely. Oleje, které zde mohou být zmíněny, jsou obzvláště kapalné estery mastných kyselin, které obsahují jako kyselou složku mastnou kyselinu s dlouhým řetězcem majícím 8 až 22, s výhodou pak 12 až 22 uhlíkových atomů, např. kyselinu laurovou, tridekanovou, myristovou, pentadekanovou, palmitovou, margarovou, stearovou, arachidonovou a behenovou, nebo odpovídající nenasycené kyseliny, např. kyselinu olejovou, alaidikovou, eurikovou, brasidovou a linoleovou, případně s přídavkem antioxidantů, např. vitaminu E, betakarotenu nebo 3,5-di-terc-butyl-4-hydroxytoluenu. Alkoholová složka těchto esterů mastných kyselin nemá více než 6 uhlíkových atomů a je mono- nebo polyhydrická, např. mono-, di- nebo trihydrické alkoholy jako metanol, etanol, propanol, butanol nebo pentanol a jejich isomery, ale hlavně glykol a glycerol. Estery mastných kyselin jsou s výhodou např. ethyl oleát, isopropyl myristát, isopropyl palmitát, „Labrafil M 2375“ (polyoxyethylen glycerol trioleát, Gattefoseé, Paříž), „Labrafil M 1944 CS“ (nenasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou oleje z meruňkových jader a složené z glyceridů a esterů polyetylén glykolu; Gattefoseé, Paříž), „Labrasol“ (nasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou TCM a složené z glyceridů a esterů polyetylén glykolu; Gattefoseé, Paříž) a/nebo „Miglyol 812“ (triglycerid nasycených mastných kyselin s délkou řetězce C8 až C12 od Huls AG, Německo) a zvláště rostlinné oleje jako bavlníkový olej, mandlový olej, olivový olej, ricinový olej, sezamový olej, sójový olej a zejména olej z podzemnice olejné.
Příprava injekčního přípravku se provádí za sterilních podmínek obvyklým způsobem, např. plněním do ampulí nebo lahviček a uzavíráním obalů.
Např. farmaceutické přípravky pro orální použití se mohou získat smícháním aktivní látky s jedním nebo více tuhými nosiči, případnou granulací výsledné směsi, a pokud je to požadováno, zpracováním směsi nebo granulí do tablet nebo potahovaných tablet přídavkem dalších neutrálních látek.
Vhodné nosiče jsou obzvláště plnidla jako cukry, např. laktóza, sacharóza, manitol nebo sorbitol, celulosové preparáty a/nebo fosforečnany vápníku, s výhodou fosforečnan vápenatý nebo hydrogen fosforečnan vápenatý, dále pojiva jako škroby, s výhodou kukuřičný, pšeničný, rýžový nebo bramborový škrob, methylcelulosa, hydroxypropylmethylcelulosa, sodná sůl karboxymethylcelulosy a/nebo polyvinylpyrolidin, a/nebo pokud požadováno desintegrátory jako výše zmíněné škroby a dále karboxymethylový škrob, zesítěný polyvinylpyrolidin, alginová kyselina a její soli, s výhodou alginát sodný. Další neutrální látky jsou regulátory toku a lubrikanty, s výhodou kyselina salicylová, talek, kyselina stearová a její soli jako stearát hořečnatý a/nebo vápenatý, polyetylén glykol nebo jeho deriváty.
- 12 CZ 309819 B6
Jádra potahovaných tablet mohou být potažena vhodnými potahy, které mohou být odolné vůči žaludeční šťávě, přičemž používané potahy jsou mezi jinými koncentrované roztoky cukrů, které mohou obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrolidin, polyetylén glykol a/nebo oxid titaničitý, dále potahovací roztoky ve vhodných organických rozpouštědlech nebo směsích rozpouštědel, či pro přípravu potahů odolných vůči žaludeční šťávě roztoky vhodných celulosových preparátů jako acetylcelulosaftalát nebo hydroxypropylmethylcelulosaftalát. Barviva nebo pigmenty jsou přimíchávány do tablet nebo potahovaných tablet např. pro identifikaci nebo charakterizaci různých dávek účinné složky.
Farmaceutické přípravky, které mohou být užívány orálně, jsou také tvrdé tobolky ze želatiny nebo měkké uzavřené tobolky ze želatiny a změkčovadla jako glycerol nebo sorbitol. Tvrdé tobolky mohou obsahovat aktivní látku ve formě granulí, smíchanou např. s plnidly jako je kukuřičný škrob, pojivy nebo lubrikanty jako talek nebo stearát hořečnatý, a se stabilizátory. V měkkých tobolkách je aktivní látka přednostně rozpuštěna nebo suspendována ve vhodných kapalných látkách neutrální povahy jako mazací tuk, parafínový olej nebo kapalný polyetylén glykol či estery mastných kyselin a etylén nebo propylen glykolu, přičemž je také možno přidat stabilizátory a detergenty např. typu esterů polyetylén sorbitanových mastných kyselin.
Další formy orálního podávání jsou např. sirupy připravované běžným způsobem, které obsahují aktivní složku, např. v suspendované formě a v koncentraci okolo 5 až 20 %, přednostně okolo 10 % nebo podobné koncentrace, která umožňuje vhodnou individuální dávku, např. když je měřeno 5 nebo 10 ml. Ostatní formy jsou např. práškové nebo kapalné koncentráty pro přípravu koktejlů, např. v mléce. Takovéto koncentráty mohou být také baleny v množství odpovídajícím jednotkové dávce.
Farmaceutické přípravky, které mohou být používány rektálně, jsou např. čípky, které obsahují kombinaci aktivní látky se základem. Vhodné základy jsou např. přírodní nebo syntetické triglyceridy, parafínové uhlovodíky, polyetylén glykoly nebo vyšší alkoholy.
Přípravky vhodné pro parenterální podání jsou vodné roztoky aktivní složky ve formě rozpustné ve vodě, např. ve vodě rozpustná sůl nebo vodná injekční suspenze, která obsahuje látky zvyšující viskozitu, např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, sorbitol a/nebo dextran, a stabilizátory tam kde je to vhodné. Aktivní látka může být také přítomna ve formě lyofilizátu společně s pomocnými látkami, kde je to vhodné a může být rozpuštěna před parenterální aplikací přidáním vhodných rozpouštědel. Roztoky, které jsou použity pro parenterální aplikaci, mohou být použity např. i pro infuzní roztoky. Preferovaná konzervovadla jsou s výhodou antioxidanty jako kyselina askorbová, nebo mikrobicidy kyselina sorbová či benzoová.
Masti jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují ne více než 70 %, ale přednostně 20 až 50 % vody nebo vodné fáze. Tukovou fázi tvoří zejména uhlovodíky, např. vazelína, parafínový olej nebo tvrdé parafiny, které přednostně obsahují vhodné hydroxysloučeniny jako mastné alkoholy a jejich estery, např. cetylalkohol, nebo alkoholy lanolinu, s výhodou lanolin pro zlepšení kapacity pro vázání vody. Emulgátory jsou odpovídající lipofilní sloučeniny jako sorbitanové estery mastných kyselin (Spany), s výhodou sorbitan oleát nebo sorbitan isostearát. Aditiva k vodné fázi jsou např. smáčedla jako polyalkoholy, např. glycerol, propylenglykol, sorbitol a/nebo polyetylenglykol, nebo konzervační prostředky či příjemně vonicí látky.
Mastné masti jsou nevodné a obsahují jako bázi hlavně uhlovodíky, např. parafin, vazelínu nebo parafínový olej, a dále přírodní nebo semisyntetické tuky, např. hydrogenované kokosové triglyceridy mastných kyselin nebo, s výhodou, hydrogenované oleje, např. hydrogenovaný ricínový olej nebo olej z podzemnice olejné, a dále částečné glycerolové estery mastných kyselin, např. glycerol mono- nebo distearát. Dále obsahují např. mastné alkoholy, emulgátory a/nebo aditiva zmíněná v souvislosti s mastmi, která zvyšují příjem vody.
- 13 CZ 309819 B6
Krémy jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují více než 50 % vody. Používané olejové báze jsou zejména mastné alkoholy, např. lauryl, cetyl nebo staryl alkoholy, mastné kyseliny, například palmitová nebo stearová kyselina, kapalné a pevné vosky, například isopropyl myristát, lanolin nebo včelí vosk, a/nebo uhlovodíky, například vazelína (petrolátum) nebo parafínový olej. Emulgátory jsou povrchově aktivní sloučeniny s převážně hydrofilními vlastnostmi, jako jsou odpovídající neiontové emulgátory, např. estery mastných kyselin polyalkoholů nebo jejich ethylenoxy adukty, např. estery polyglycerických mastných kyselin nebo polyetylén sorbitanové estery (Tween), dále polyoxyethylenové etery mastných alkoholů nebo polyoxyethylenové estery mastných kyselin, nebo odpovídající iontové emulgátory, jako alkalické soli sulfátů mastných alkoholů, s výhodou laurylsulfát sodný, cetylsulfát sodný nebo stearylsulfát sodný, které jsou obvykle používány v přítomnosti mastných alkoholů, např. cetyl stearyl alkoholu nebo stearyl alkoholu. Aditiva k vodné fázi jsou mimo jiné činidla, která chrání krémy před vyschnutím, např. polyalkoholy jako glycerol, sorbitol, propylenglykol a polyetylen glykol, a dále konzervační činidla a příjemně vonicí látky.
Pasty jsou krémy nebo masti obsahující práškové složky absorbující sekreci jako jsou oxidy kovů, např. oxidy titanu nebo oxid zinečnatý, a dále talek či silikáty hliníku, které mají za úkol vázat přítomnou vlhkost nebo sekreci.
Pěny jsou aplikovány z tlakových nádob a jsou to kapalné emulze oleje ve vodě v aerosolové formě, přičemž jako hnací plyny jsou používány halogenované uhlovodíky, jako polyhalogenované alkany, např. dichlorfluormethan a dichlortetrafluorethan, nebo přednostně nehalogenované plynné uhlovodíky, vzduch, N2O či oxid uhličitý. Používané olejové fáze jsou stejné jako pro masti a krémy a také jsou používána aditiva tam zmíněná.
Tinktury a roztoky obvykle obsahují vodně-etanolickou bázi, ke které jsou přimíchána zvlhčovadla pro snížení odpařování, jako jsou polyalkoholy, např. glycerol, glykoly a/nebo polyetylén glykol, dále promazávadla jako estery mastných kyselin a nižších polyetylen glykolů, tj. lipofilní látky rozpustné ve vodné směsi nahrazující tukové látky odstraněné z kůže etanolem, a pokud je to nutné, i ostatní pomocné látky a aditiva.
Vynález se také vztahuje na procesy nebo metody pro léčení nemocí zmíněných výše. Látky mohou být podávány profylakticky nebo terapeuticky jako takové nebo ve formě farmaceutických přípravků, přednostně v množství, které je efektivní proti zmíněným nemocem, přičemž u teplokrevných živočichů, např. člověka, vyžadujícího takovéto ošetření, je látka používána zejména ve formě farmaceutického přípravku. Na tělesnou hmotnost okolo 70 kg je aplikována denní dávka látky okolo 0,01 až 1,0 g, s výhodou 0,05 až 0,5 g.
Objasnění výkresů
Obrázek 1 ukazuje neuroprotektivní účinek nových sloučenin v modelu oxidativního poškození indukovaného glutamátem na dopaminergních neuronových buňkách SH-SY5Y. Sloučeniny podle vynálezu při 0,1, 1 a 10 μΜ spolu s pozitivními kontrolami: kyselina R-lipoová (R-LA, 0,5, 5 a 50 μM) a deferoxamin (DFO, 1, 10 a 100 μΜ) byly použity při současném ošetření se 160 mM glutamátu (Glu) po dobu 24 hodin. Po 24 hodinách byla buněčná smrt kvantifikována barvením propidium jodidem. Buněčná smrt generovaná Glu byla považována za 100%, takže bylo pozorováno snížení buněčné smrti.
Všechny výsledky představují průměrnou hodnotu ± standardní chybu průměru (SEM) v triplikátu (trojnásobné opakování) experimentů (n=3) ve třech různých dnech. ANOVA, Bonferonni post hoc test; *, # P < 0.05; **, ## P < 0.01; ***, ### P < 0.001; * P porovnání s vzorku s Glu 160mM, # P porovnání vzorku se skupinou bez Glu 160mM. Hodnota P < 0.05 je považována za statisticky signifikantní.
- 14 CZ 309819 B6
Obrázek 2 ukazuje glutamátem indukovaný oxidativní stres (OS) a OS-redukující aktivitu sloučenin podle vynálezu a pozitivní kontroly. Sloučeniny podle vynálezu při 0,1, 1 a 10 μΜ spolu s pozitivními kontrolami: kyselina R-lipoová (R-LA; 0,5, 5 a 50 μΜ) a deferoxamin (DFO; 1, 10 a 100 μΜ) byly použity při současném ošetření 160 mM Glu po dobu 4 hodin. Po 4 hodinách byla kvantifikace superoxidových radikálů jako markéru oxidačního stresu kvantifikována barvením dihydroethidiem. Oxidační stres generovaný Glu byl považován za 100%, takže bylo pozorováno snížení buněčné smrti. Všechny výsledky představují průměrnou hodnotu ± standardní chybu průměru (SEM) v triplikátu (trojnásobné opakování) experimentů (n=3) ve třech různých dnech.
Příklady uskutečnění vynálezu
Není-li uvedeno jinak, tak veškerá procenta a množství jsou založena na hmotnosti. Výchozí sloučeniny a činidla mohou být zakoupeny z komerčních zdrojů (Sigma, Aldrich, Fluka atd.) nebo mohou být připraveny, jak je uvedeno níže.
Ή a 13C experimenty byly provedeny na přístroji JEOL JNM-ECA 500 (JEOL, Tokio, Japonsko; 'H, 500 MHz; 13C, 125 MHz) spektrometr vybaveného 5 mm JEOL Royal sondou, s použitím CDCL, jako rozpouštědla (25 °C). Chemické posuny (δ) byly referencovány na signál použitého rozpouštědla (CDCL) a jsou uváděny v částech najeden milion (ppm). Štěpící konstanty (J) jsou uváděny v jednotkách Hertz (Hz). NMR spektra byly procesovány v programu ACD/NMR Processor Academie Edition 12.01 nebo JEOL Delta v5.0.5.1. HRMS analýza byla provedena na spektrometru Synapt G2-Si Mass Spectrometer (Waters, Manchester, UK) s API ionizací. Spektra byla měřena v pozitivním modu v rozmezí 100 až 1000 m/z. Vzorky byly rozpuštěny v CHCL a použity pro přímý nástřik. Průběh reakce byl sledován pomocí TLC Kieselgel 60 F254 desek (Merck) s detekcí postřikem 10% vodným roztokem H2SO4 a zahřátím na 400 °C. Čištění sloučenin bylo provedeno použitím sloupcové chromatografie na silikagelu Silica gel 60 (Merck 7734).
Výchozí steroidní derivát 1 pro olefinační reakci byl připraven z komerčně dostupného stigmasterolu podle literatury (Heterocycles 1982, 17, 301). Všechny sloučeniny popsané v tomto vynálezu byly připraveny podle následujícího schématu:
- 15 CZ 309819 B6
Syntéza nových sterolových derivátů
Příklad 1
2a,3a-(IsopropyIidendioxy)-6,6-(ethyIenedioxy)-24-nor-5a-choI-22-en (sloučenina 2a)
Do roztoku methyltrifenylfosfonium bromidu (48 mg; 0,134 mmol) v bezvodém tetrahydrofůranu (3 ml) byl přidán roztok n-butyllithia v hexanu (1,6 M; 85 μΐ; 0,134 mmol). Reakce byla míchána při 0 °C po dobu 30 minut. Poté byl přidán roztok aldehydu 1 (30 mg; 0,067 mmol) v bezvodém tetrahydrofůranu (3 ml) a reakce byla pomalu ohřívána na teplotu místnosti a míchána další 2 hodiny. Po ukončení reakce byla směs zředěna ethyl-acetátem a extrahována dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (7% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 2a.
Bezbarvý olej, chemický vzorec: C28H44O4, výtěžek: 25 mg, 84 %, 'H NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,69 (s, 3H, CH3); 0,84 (s, 3H, CH3); 1,02 (d, 3H, J = 6,4 Hz, CH3); 1,32 (s, 3H, CH3); 1,47 (s, 3H, CH3); 1,92 (dd, 1H, J = 12,7 a 6,9 Hz); 1,97 (dt, 1H, J = 12,7 a 3,2 Hz); 2,06 (m, 1H); 2,16 (m, 1H); 3,75 (m, 1H, CH2O); 3,88-3,97 (m, 3H, CH2O); 4,10 (m, 1H, Η-2β); 4,27 (m, 1H, Η-3β); 4,81 (dd, 1H, J = 10,2 a 1,9 Hz, H-23a); 4,90 (dd, 1H, J = 17,1 a 1,9 Hz, H-23b); 5,65 (ddd, 1H, J = 17,1, 10,2 a 8,7 Hz, H-22). 13C NMR δ 12,14, 13,35, 20,04, 20,70, 21,94, 24,14, 26,55, 28,30, 28,59, 32,84, 37,98, 39,51, 41,01, 41,19, 42,43, 42,68, 45,47, 52,95, 55,37, 55,90, 64,15, 65,46, 72,82, 72,93, 107,51, 109,65, 111,54, 145,16. HRMS (API): m/z vypočteno pro C28H45O4 [M+H]+ 445,3318, nalezeno 445,3319.
2a
2a,3a-Dihydroxy-24-nor-5a-choI-22-en-6-on (sloučenina 3a)
1M vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0,5 ml) byl přidán do roztoku sloučeniny 2a (20 mg; 0,045 mmol) v tetrahydrofůranu (4 ml) a reakce byla zahřívána na 40 °C 4 hodiny. Poté byla reakce zředěna ethyl-acetátem a vytřepána dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za snížené tlaku a surový produkt bych čištěn
- 16CZ 309819 B6 sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 3a.
Bílý prášek, chemický vzorec: C23H36O3, výtěžek: 15 mg, 93 %, 'HNMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,69 (s, 3H, CH3); 0,76 (s, 3H, CH3); 1,04 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 1,91 (dd, 1H, J = 15,0 a 3,1 Hz); 1,97-2,11 (m, 2H); 2,29 (dd, 1H, J = 13,3 a 4,4 Hz); 2,68 (dd, 1H, J = 12,5 a 2,8 Hz); 3,77 (m, 1H, Η-2β); 4,05 (m, 1H, Η-3β); 4,83 (dd, 1H, J = 10,1 a 1,9 Hz, H-23a); 4,91 (dd, 1H, J= 17,1 a 1,1 Hz, H-23b); 5,65 (ddd, 1H, J = 17,1, 10,1 a 8,6 Hz, H-22). 13C NMR δ 12,17, 13,54, 20,04, 21,14, 23,90, 26,26, 28,15, 37,62, 39,24, 40,13, 41,11, 42,57, 42,88, 46,71, 50,67, 53,68, 55,25, 56,64, 68,24, 68,35, 111,84, 144,85, 212,23. HRMS (API): m/z vypočteno pro C23H37O3 [M+H]+ 361,2743, nalezeno 361,2741.
3a 4a
2a,3a-Dihydroxy-24-nor-5a-choIan-6-on (sloučenina 4a)
Palladium na uhlí (12 mg) bylo přidáno do roztoku sloučeniny 3a (12 mg; 0,033 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) a ethanolu (1 ml). Vzduch z reakční baňky byl evakuován a do reakce byl přidán vodík z balónku. Takto byla reakce míchána 18 hodin. Poté bylo palladium na uhlí odfiltrováno, rozpouštědla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 4a.
Bílý prášek, chemický vzorec: C23H3sO3, výtěžek: 11 mg, 91 %. 'HNMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,66 (s, 3H, CH3); 0,75 (s, 3H, CH3); 0,83 (t, 3H, J = 7,2 Hz, CH3); 0,91 (d, 3H, J = 6,4 Hz, CH3); 1,91 (dd, 1H, J = 15,2 a 3,0 Hz); 1,96-2,08 (m, 2H); 2,30 (dd, 1H, J = 13,3 a 4,5 Hz); 2,68 (dd, 1H, J = 12,5 a 2,7 Hz); 3,76 (m, 1H, Η-2β); 4,05 (m, 1H, Η-3β). 13C NMR δ 10,29, 11,98, 13,53, 17,98, 21,16, 23,92, 26,26, 28,17, 30,27, 36,88, 37,67, 39,35, 40,14, 42,58, 42,86, 46,77, 50,69, 53,69, 55,49, 56,62, 68,27, 68,37, 212,34. HRMS (API): m/z vypočteno pro C23H39O3 [M+H]+ 363,2899, nalezeno 363,2902.
Příklad 2
(22Z)-2a,3a-(IsopropyIidendioxy)-6,6-(ethylenedioxy)- 5a-choI-22-en (sloučenina 2b)
Do roztoku ethyltrifenylfosfonium bromidu (50 mg; 0,134 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) byl přidán roztok /7-butyl lithia v hexanu (1,6 M; 85 μΐ; 0,134 mmol). Reakce byla míchána
- 17CZ 309819 B6 při 0 °C po dobu 30 minut. Poté byl přidán roztok aldehydu 1 (30 mg; 0,067 mmol) vbezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) a reakce byla pomalu ohřívána na teplotu místnosti a míchána další 2 hodiny. Po ukončení reakce byla směs zředěna ethylacetátem a extrahována dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (7% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 2b převážně jako Z izomer (přibližně 5 % E izomeru (2bE) je pozorovatelné v Ή NMR).
Bezbarvý olej, chemický vzorec: C29H46O4, výtěžek: 27 mg, 87 %. 'H NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,71 (s, 3H, CH3); 0,839 (s, 3H, CH3); 0,95 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 1,32 (s, 3H, CH3); 1,47 (s, 3H, CH3); 1,60 (dd, 3H, J = 6,7 a 1,5 Hz, CH3); 1,93 (dd, 1H, J = 12,7 a 6,9 Hz); 1,97 (m, 1H); 2,15 (m, 1H); 2,46 (m, 1H); 3,75 (m, 1H, CH2O); 3,88-3,97 (m, 3H, CH2O); 4,10 (m, 1H, Η-2β); 4,27 (m, 1H, Η-3β); 5,15 (m, 1H, H-22); 5,25 (m, 1H, H-23). 13C NMR δ 12,25, 13,10, 13,37, 20,42, 20,71, 21,95, 24,13, 26,55, 27,88, 28,60, 32,85, 33,70, 38,00, 39,55, 41,03, 42,37, 42,70, 45,48, 53,01, 55,95, 56,16, 64,15, 65,47, 72,84, 72,95, 107,51, 109,67, 120,29, 137,50. HRMS (API): m/z vypočteno pro CAPE-CE [M+H]+ 459,3474, nalezeno 459.3475. Vybrané Ή NMR píky pro 22£-izomer (2bE): δ 0,67 (s, 3H, CH3); 0,833 (s, 3H, CH3); 0,98 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 5,29 (m, 1H).
2bE minoritní
3bE minoritní (22Z)-2a,3a-Dihydroxy-5a-choI-22-en-6-on (sloučenina 3b)
1M vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0,55 ml) byl přidán do roztoku sloučeniny 2b (20 mg; 0,045 mmol) v tetrahydrofuranu (4 ml) a reakce byla zahřívána na 40 °C 4 hodiny. Poté byla reakce zředěna ethylacetátem a vytřepána dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za snížené tlaku a surový produkt bych čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 3b (díky přítomnosti minoritního E-izomeru 2bE ve výchozí sloučenině je v 'H NMR pozorovatelný i izomer 3bE v množství cca 5 %).
Bílý prášek, chemický vzorec: C24H3sO3, výtěžek: 15 mg, 92 %. 'HNMR (CDC13, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,71 (s, 3H, CH3); 0,764 (s, 3H, CH3); 0,97 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 1,60 (dd, 3H, J = 6,7 a 1,5 Hz, CH3); 1,92 (dd, 1H, J = 15,1 a 3,2 Hz); 1,97-2,06 (m, 2H); 2,30 (dd, 1H, J = 13,1 a 4,5 Hz); 2,47 (m, 1H); 2,69 (dd, 1H, J = 12,5 a 2,8 Hz); 3,78 (m, 1H, Η-2β); 4,05 (m, 1H, Η-3β); 5,15 (m, 1H, H-22); 5,28 (m, 1H, H-23). 13C NMR δ 12,28, 13,13, 13,55, 20,40, 21,16, 23,89, 26,26, 27,75, 33,65, 37,65, 39,27, 40,17, 42,60, 42,83, 46,74, 50,68, 53,74, 56,04, 56,68, 68,26, 68,36, 120,58, 137,20, 212,22. HRMS (API): m/z vypočteno pro C24H39O3 [M+H]+ 375,2899, nalezeno 375,2897. Vybrané 'H NMR píky pro 22E-izomcr (3bE): δ 0,67 (s, 3H, CH3); 0,757 (s, 3H, CH3); 1,00 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 5,34 (m, 1H).
- 18 CZ 309819 B6
2a,3a-Dihydroxy-5a-cholan-6-on (sloučenina 4b)
Palladium na uhlí (12 mg) bylo přidáno do roztoku sloučeniny 3b s minoritním izomerem 3bE (12 mg; 0,033 mmol) v tetrahydrofiiranu (3 ml) a ethanolu (1 ml). Vzduch z reakční baňky byl evakuován a do reakce byl přidán vodík z balónku. Takto byla reakce míchána 18 hodin. Poté bylo palladium na uhlí odfiltrováno, rozpouštědla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 4b.
Bílý prášek, chemický vzorec: C24H40O3, výtěžek: 10 mg, 83 %. 'HNMR (CDCh, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,66 (s, 3H, CH3); 0,76 (s, 3H, CH3); 0,87 (t, 3H, J = 7,0 Hz, CH3); 0,91 (d, 3H, J = 6,4 Hz, CH3); 1,92 (dd, 1H, J = 15,2 a 3,3 Hz); 1,97-2,08 (m, 2H); 2,30 (dd, 1H, J = 13,2 a 4,6 Hz); 2,68 (dd, 1H, J = 12,6 a 2,9 Hz); 3,77 (m, 1H, Η-2β); 4,05 (m, 1H, Η-3β). 13C NMR δ 11,98, 13,54, 14,52, 18,56, 19,19, 21,18, 23,93, 26,26, 28,01, 35,49, 37,68, 38,20, 39,38, 40,17, 42,60, 42,92, 46,78, 50,69, 53,70, 56,05, 56,66, 68,29, 68,38, 212,26. HRMS (API): m/z vypočteno pro C24H39O2 [(M-H2O)+H]+ 359,2950, nalezeno 359,2948.
Příklad 3
(22Z)-2a,3a-(Isopropylidendioxy)-6,6-(ethylenedioxy)-26,27-dinor-5a-cholest-22-en (sloučenina 2c)
Do roztoku propyltrifenylfosfonium bromidu (52 mg; 0,135 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) byl přidán roztok /7-butyl lithia v hexanu (1,6 M; 85 μΐ; 0,134 mmol). Reakce byla míchána při 0 °C po dobu 30 minut. Poté byl přidán roztok aldehydu 1 (30 mg; 0,067 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) a reakce byla pomalu ohřívána na teplotu místnosti a míchána další 2 hodiny. Po ukončení reakce byla směs zředěna ethylacetátem a extrahována dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (7% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 2c převážně jako Z izomer (přibližně 7 % E izomeru (2cE) je pozorovatelné v 'H NMR).
Bezbarvý olej, chemický vzorec: C30H48O4, výtěžek: 28 mg, 88 %. 'H NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,70 (s, 3H, CH3); 0,841 (s, 3H, CH3); 0,95 (t, 3H, J = 7,4 Hz, CH3); 0,96 (d, 3H, J =
-19CZ 309819 B6
6,7 Hz, CH3); 1,33 (s, 3H, CH3); 1,48 (s, 3H, CH3); 1,91-1,99 (m, 2H); 2,00-2,09 (m, 2H); 2,16 (m, 1H); 2,42 (m, 1H); 3,75 (m, 1H, CH2O); 3,88-3,97 (m, 3H, CH2O); 4,11 (m, 1H, Η-2β); 4,27 (m, 1H, Η-3β); 5,09 (m, 1H, H-22); 5,18 (m, 1H, H-23). 13C NMR δ 12,26, 13,38, 14,49, 20,71, 20,80, 20,86, 21,96, 24,13, 26,56, 28,06, 28,61, 32,86, 34,15, 38,00, 39,56, 41,03, 42,37, 42,70, 45,48, 53,01, 55,97, 56,02, 64,16, 65,48, 72,84, 72,95, 107,52, 109,68, 128,22, 135,93. HRMS (API): m/z vypočteno pro C3qH49O4 [M+H]+ 473,3631, nalezeno 473,3633. Vybrané 'H NMR píky pro 22E-izomer (2cE): δ 0,67 (s, 3H, CH3); 0,838 (s, 3H, CH3); 0,99 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 5,33 (m, 1H).
(22Z)-2a,3a-Dihydroxy-26,27-dinor-5a-choIest-22-en-6-on (sloučenina 3c)
IM vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0,5 ml) byl přidán do roztoku sloučeniny 2c (20 mg; 0,042 mmol) v tetrahydrofuranu (4 ml) a reakce byla zahřívána na 40 °C 4 hodiny. Poté byla reakce zředěna ethylacetátem a vytřepána dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za snížené tlaku a surový produkt bych čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 3c (díky přítomnosti minoritního E-izomeru 2cE ve výchozí sloučenině je v Ή NMR pozorovatelný i izomer 3cE v množství cca 7 %).
Bílý prášek, chemický vzorec: 023Η4ο03, výtěžek: 15 mg, 91 %. Ή NMR (CDC13, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,70 (s, 3H, CH3); 0,76 (s, 3H, CH3); 0,95 (t, 3H, J = 7,4 Hz, CH3); 0,97 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 1,91 (dd, 1H, J = 15,3 a 3,1 Hz); 1,97-2,07 (m, 2H); 2,29 (dd, 1H, J = 13,1 a 4,6 Hz); 2,43 (m, 1H); 2,68 (dd, 1H, J = 12,5 a 2,8 Hz); 3,77 (m, 1H, Η-2β); 4,05 (m, 1H, Η-3β); 5,09 (m, 1H, H-22); 5,19 (m, 1H, H-23). 13C NMR δ 12,40, 13,68, 14,60, 20,89, 21,00, 21,28, 24,02, 26,40, 28,07, 34,22, 37,78, 39,41, 40,28, 42,73, 42,94, 46,87, 50,80, 53,85, 56,02, 56,82, 68,37, 68,47, 128,61, 135,74, 212,39. HRMS (API): m/z vypočteno pro C25H4iO3 [M+H]+ 389,3056, nalezeno 389,3053. Vybrané Ή NMR píky pro 22E-izomer (3bE): δ 0,67 (s, 3H, CH3); 0,74 (s, 3H, CH3); 1,00 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 5,35 (m, 1H).
2a,3a-Dihydroxy-26,27-dinor-5a-choIestan-6-on (sloučenina 4c)
Palladium na uhlí (12 mg) bylo přidáno do roztoku sloučeniny 3c s minoritním izomerem 3cE (12 mg; 0,031 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) a ethanolu (1 ml). Vzduch z reakční baňky byl evakuován a do reakce byl přidán vodík z balónku. Takto byla reakce míchána 18 hodin. Poté bylo palladium na uhlí odfiltrováno, rozpouštědla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt
-20CZ 309819 B6 čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 4c.
Bílý prášek, chemický vzorec: C25H42O3, výtěžek: 10 mg, 83 %. Ή NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,66 (s, 3H, CH3); 0,75 (s, 3H, CH3); 0,89 (t, 3H, J = 7,0 Hz, CH3); 0,91 (d, 3H, J = 6,4 Hz, CH3); 1,91 (dd, 1H, J = 15,2 a 3,3 Hz); 1,96-2,07 (m, 2H); 2,30 (dd, 1H, J = 13,2 a 4,6 Hz); 2,68 (dd, 1H, J = 12,6 a 3,0 Hz); 3,76 (m, 1H, Η-2β); 4,05 (m, 1H, Η-3β). 13C NMR δ 11,98, 13,53, 14,17, 18,61, 21,17, 23,11, 23,92, 26,26, 27,99, 28,28, 30,28, 35,50, 37,68, 39,37, 40,16, 42,59, 42,90, 46,78, 50,69, 53,70, 55,97, 56,65, 68,28, 68,38, 212,32. HRMS (API): m/z vypočteno pro C25H43O2 [(M-H2O)+H]+ 391,3212, nalezeno 391,3209.
Příklad 4
-CHO
Ή
2dE minoritní (22Z)-2a,3a-(IsopropyIidendioxy)-6,6-(ethyIenedioxy)-27-nor-5a-choIest-22-en (sloučenina 2d)
Do roztoku butyhrifenylfosfonium bromidu (54 mg; 0,135 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) byl přidán roztok n-butyllithia v hexanu (1,6 M; 85 μΐ; 0,134 mmol). Reakce byla míchána při 0 °C po dobu 30 minut. Poté byl přidán roztok aldehydu 1 (30 mg; 0,067 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) a reakce byla pomalu ohřívána na teplotu místnosti a míchána další 2 hodiny. Po ukončení reakce byla směs zředěna ethylacetátem a extrahována dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (7% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 2d převážně jako Z izomer (20 % E izomeru (2dE) je pozorovatelné v Ή NMR).
Bezbarvý olej, chemický vzorec: C31H50O4, výtěžek: 27 mg, 82 %. 'H NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,70 (s, 3H, CH3); 0,84 (s, 3H, CH3); 0,89 (t, 3H, J = 7,0 Hz, CH3); 0,91 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 1,33 (s, 3H, CH3); 1,48 (s, 3H, CH3); 1,89-2,09 (m, 5H); 2,15 (m, 1H); 2,42 (m, 1H); 3,75 (m, 1H, CH2O); 3,88-3,97 (m, 3H, CH2O); 4,10 (m, 1H, Η-2β); 4,28 (m, 1H, Η-3β); 5,11-5,20 (m, 2H H-22, H-23). 13CNMR δ 12,28, 13,39, 13,91, 20,72, 20,74, 21,97, 22,98, 24,14, 26,57, 28,03, 28,61, 29,67, 32,86, 34,19, 38,01, 39,57, 41,03, 42,37, 42,71, 45,49, 53,02, 55,97, 56,10, 64,17, 65,48, 72,84, 72,96, 107,52, 109,68, 126,44, 136,64. HRMS (API): m/z vypočteno pro C31H51O4 [M+H]+ 487,3787, nalezeno 487,3783. Vybrané 'H NMR píky pro 22E-izomcr (2dE): δ 0,68 (s, 3H, CH3); 0,84 (s, 3H, CH3); 0,87 (t, 3H, J = 7,0 Hz, CH3); 1,00 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 5,28 (m, 1H).
-21 CZ 309819 B6
(22Z)-2a,3a-Dihydroxy-27-nor-5a-choIest-22-en-6-on (sloučenina 3d)
1M vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0,5 ml) byl přidán do roztoku sloučeniny 2d (20 mg; 0,041 mmol) v tetrahydrofuranu (4 ml) a reakce byla zahřívána na 40 °C 4 hodiny. Poté byla reakce zředěna ethylacetátem a vytřepána dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za snížené tlaku a surový produkt bych čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána 10 sloučenina 3d (díky přítomnosti minoritního E-izomeru 2dE ve výchozí sloučenině je v 'H NMR pozorovatelný i izomer 3dE v množství 20 %).
Bílý prášek, chemický vzorec: C25H40O3, výtěžek: 15 mg, 91 %. 'HNMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,70 (s, 3H, CH3); 0,764 (s, 3H, CH3); 0,91 (t, 3H, J = 7,4 Hz, CH3); 0,97 (d, 3H, J = 15 6,7 Hz, CH3); 1,92 (m, 1H); 1,96-2,07 (m, 4H); 2,29 (dd, 1H, J = 13,1 a 4,4 Hz); 2,44 (m, 1H);
2,69 (dd, 1H, J = 12,6 a 2,7 Hz); 3,78 (m, 1H, Η-2β); 4,05 (m, 1H, Η-3β); 5,11-5,24 (m, 2H, H22, H-23). 13C NMR δ 12,29, 13,56, 13,91, 20,71, 21,16, 22,96, 23,90, 26,26, 27,91, 29,68, 34,14, 37,66, 39,28, 40,16, 42,60, 42,81, 46,74, 50,67, 53,74, 55,97, 56,69, 68,26, 68,35, 126,72, 136,33, 212,25. HRMS (API): m/z vypočteno pro C26H43O3 [M+H]+ 403,3212, nalezeno 20 403,3211. Vybrané Ή NMR píky pro 22E-izomer (3bE): δ 0,67 (s, 3H, CH3); 0,758 (s, 3H,
CH3); 0,87 (t, 3H, J = 7,0 Hz, CH3); 1,01 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 5,30 (m, 1H).
2a,3a-Dihydroxy-27-nor-5a-choIestan-6-on (sloučenina 4d)
Palladium na uhlí (12 mg) bylo přidáno do roztoku sloučeniny 3d s minoritním izomerem 3dE (12 mg; 0,030 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) a ethanolu (1 ml). Vzduch z reakční baňky byl evakuován a do reakce byl přidán vodík z balónku. Takto byla reakce míchána 18 hodin. Poté 30 bylo palladium na uhlí odfiltrováno, rozpouštědla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 4d.
Bílý prášek, chemický vzorec: C26H44O3, výtěžek: 10 mg, 83 %. 'HNMR (CDCI3, 500 MHz) δ, 35 ppm: δ 0,66 (s, 3H, CH3); 0,76 (s, 3H, CH3); 0,89 (t, 3H, J = 7,0 Hz, CH3); 0,91 (d, 3H, J = 6,4 Hz, CH3); 1,92 (dd, 1H, J = 15,2 a 3,3 Hz); 1,96-2,07 (m, 2H); 2,30 (dd, 1H, J = 13,2 a 4,6 Hz); 2,68 (dd, 1H, J = 12,6 a 3,0 Hz); 3,77 (m, 1H, Η-2β); 4,05 (m, 1H, Η-3β). 13C NMR δ 11,98, 13,54, 14,13, 18,61, 21,17, 22,73, 23,93, 25,70, 26,26, 27,99, 30,28, 35,64, 35,77, 37,68, 39,37, 40,16, 42,59, 42,91, 46,78, 50,69, 53,70, 55,98, 56,65, 68,29, 68,38, 212,27. HRMS (API): 40 m/z vypočteno pro C26H43O2 [(M-H2O)+H]+ 387,3263, nalezeno 387,3260.
-22 CZ 309819 B6
2a,3a-(IsopropyIidendioxy)-6,6-(ethyIenedioxy)-23-methyI-5a-choI-22-en (compound 2e)
Do roztoku isopropyltrifenylfosfonium bromidu (52 mg; 0,135 mmol) v bezvodém tetrahydrofůranu (3 ml) byl přidán roztok n-butyllithia v hexanu (1,6 M; 85 μΐ; 0,134 mmol). Reakce byla míchána při 0 °C po dobu 30 minut. Poté byl přidán roztok aldehydu 1 (30 mg; 0,067 mmol) v bezvodém tetrahydrofůranu (3 ml) a reakce byla pomalu ohřívána na teplotu místnosti a míchána další 2 hodiny. Po ukončení reakce byla směs zředěna ethylacetátem a extrahována dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (7% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 2e.
Bezbarvý olej, chemický vzorec: C30H48O4, výtěžek: 25 mg, 79 %. 'H NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,70 (s, 3H, CH3); 0,84 (s, 3H, CH3); 0,93 (d, 3H, J = 6,4 Hz, CH3); 1,33 (s, 3H, CH3); 1,48 (s, 3H, CH3); 1,60 (d, 3H, J = 0,9 Hz, CH3); 1,64 (d, 3H, J = 0,7 Hz, CH3); 1,91-1,99 (m, 2H); 2,15 (m, 1H); 2,31 (m, 1H); 3,74 (m, 1H, CH2O); 3,88-3,98 (m, 3H, CH2O); 4,10 (m, 1H, Η-2β); 4,27 (m, 1H, Η-3β); 4,89 (d, 1H, J = 9,6 Hz, H-22). 13C NMR δ 12,25, 13,38, 18,08, 20,63, 20,73, 21,96, 24,10, 25,75, 26,57, 27,93, 28,62, 32,86, 35,01, 38,01, 39,56, 41,04, 42,32, 42,71, 45,49, 53,03, 55,99, 56,67, 64,16, 65,48, 72,85, 72,97, 107,53, 109,70, 127,57, 131,90. HRMS (API): m/z vypočteno pro C30H49O4 [M+H]+ 473,3631, nalezeno 473,3629.
2e 3e
2a,3a-Dihydroxy-23-methyl-5a-choI-22-en-6-on (sloučenina 3e)
1M vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0,5 ml) byl přidán do roztoku sloučeniny 2e (20 mg; 0,042 mmol) v tetrahydrofůranu (4 ml) a reakce byla zahřívána na 40 °C 4 hodiny. Poté byla reakce zředěna ethylacetátem a vytřepána dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za snížené tlaku a surový produkt bych čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 3e.
-23 CZ 309819 B6
Bílý prášek, chemický vzorec: C25H40O3, výtěžek: 13 mg, 79 %. 'HNMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,69 (s, 3H, CH3); 0,75 (s, 3H, CH3); 0,93 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 1,59 (s, 3H, CH3); 1,65 (s, 3H, CH3); 1,87-2,04 (m, 4H); 2,20-2,36 (m, 3H); 2,68 (dd, 1H, J = 12,5 and 2,7 Hz); 3,77 (m, 1H, Η-2β); 4,04 (m, 1H, Η-3β); 4,88 (d, 1H, J = 9,6 Hz, H-22). 13C NMR δ 12,26, 13,55, 18,08, 20,62, 21,16, 23,85, 25,74, 27,76, 29,67, 34,92, 37,67, 39,27, 40,13, 42,61, 42,76, 46,75, 50,69, 53,74, 56,53, 56,70, 68,23, 68,33, 127,87, 131,57, 212,39. HRMS (API): m/z vypočteno pro C25H41O3 [M+H]+ 389,3056, nalezeno 389,3059.
2a,3a-Dihydroxy-23-methyl-5a-choIan-6-on (sloučenina 4e)
Palladium na uhlí (12 mg) bylo přidáno do roztoku sloučeniny 3e (12 mg; 0,031 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) a ethanolu (1 ml). Vzduch z reakční baňky byl evakuován a do reakce byl přidán vodík z balónku. Takto byla reakce míchána 48 hodin. Poté bylo palladium na uhlí odfiltrováno, rozpouštědla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 4e.
Bílý prášek, chemický vzorec: C25H40O3, výtěžek: 11 mg, 91 %. 'HNMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,68 (s, 3H, CH3); 0,76 (s, 3H, CH3); 0,81 (d, 3H, J = 6,4 Hz, CH3); 0,87 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 0,89 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 1,84-1,93 (m, 2H); 2,00 (t, 1H, J = 2,7 Hz); 2,07 (m, 1H); 2,30 (dd, 1H, J = 13,1 and 4,6 Hz); 2,68 (bd, 1H, J = 12,2 Hz); 3,80 (vbs, 1H, Η-2β); 4,05 (bs, 1H, Η-3β). 13CNMR δ 12,01, 13,55, 18,53, 21,17, 21,32, 23,92, 24,54, 24,85, 28,25, 33,79, 37,66, 39,43, 40,15, 42,59, 43,00, 45,64, 46,76, 50,66, 53,69, 56,69, 56,95, 68,20 68,29, 212,26. HRMS (API): m/z vypočteno pro C25H41O3 [M+H]+ 389,3056, nalezeno 389,3059.
Příklad 6
-CHO
Ή
2fE minor (22Z)-23-CykIohexyI-2a,3a-(IsopropyIidendioxy)-6,6-(ethyIenedioxy)-24-nor-5a-choI-22-en (sloučenina 2f)
Do roztoku (cyklohexyl)methyltrifenylfosfonium bromidu (59 mg; 0,134 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) byl přidán roztok w-butyllithia v hexanu (1.6 M; 85 μΐ; 0,134 mmol). Reakce byla míchána při 0 °C po dobu 30 minut. Poté byl přidán roztok aldehydu 1 (30 mg; 0,067 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (3 ml) a reakce byla pomalu ohřívána na teplotu
-24 CZ 309819 B6 místnosti a míchána další 2 hodiny. Po ukončení reakce byla směs zředěna ethylacetátem a extrahována dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (7% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 2f převážně jako Z izomer (přibližně 5 % E izomeru (2fE) je pozorovatelné v 'H NMR).
Bezbarvý olej, chemický vzorec: C34H54O4, výtěžek: 28 mg, 79 %. Ή NMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,71 (s, 3H, CH3); 0,85 (s, 3H, CH3); 0,96 (t, 3H, J = 6,9 Hz, CH3); 1,33 (s, 3H, CH3); 1,48 (s, 3H, CH3); 1,91-2,00 (m, 2H); 2,12-2,29 (m, 2H); 2,40 (m, 1H); 3,75 (m, 1H, CH2O); 3,89-3,98 (m, 3H, CH2O); 4,10 (m, 1H, Η-2β); 4,27 (m, 1H, Η-3β); 4,97-5,05 (m, 2H, H-22, H23). 13C NMR δ 12,32, 13,41, 20,74, 21,27, 21,97, 24,16, 25,95, 26,06, 26,57, 26,87, 28,26, 28,62, 29,69, 32,87, 33,26, 33,71, 34,62, 36,57, 38,02, 39,60, 41,03, 42,37, 42,72, 45,50, 53,03, 56,01, 64,18, 65,49, 72,86, 72,97, 107,54, 109,70, 132,75, 134,59. HRMS (API): m/z vypočteno pro C34H55O4 [M+H]+ 527,4100, nalezeno 527,4098. Vybrané Ή NMR píky pro 22E-izomcr (2fE): δ 0,67 (s, 3H, CH3); 0,84 (s, 3H, CH3); 1,00 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 5,35 (m, 1H).
(22Z)-23-CyklohexyI-2a,3a-dihydroxy-24-nor-5a-choI-22-en-6-on (sloučenina 3f)
1M vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0,5 ml) byl přidán do roztoku sloučeniny 2f (20 mg; 0,038 mmol) v tetrahydrofuranu (4 ml) a reakce byla zahřívána na 40 °C 4 hodiny. Poté byla reakce zředěna ethyl-acetátem a vytřepána dvakrát vodou. Organická fáze byla vysušena chloridem vápenatým. Rozpouštědla byla odpařena za snížené tlaku a surový produkt bych čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 3f (díky přítomnosti minoritního E-izomeru 2fE ve výchozí sloučenině je v 'H NMR pozorovatelný i izomer 3fE v množství 5 %).
Bílý prášek, chemický vzorec: C29H4eO3, výtěžek: 12 mg, 71 %. 'HNMR (CDCI3, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,71 (s, 3H, CH3); 0,76 (s, 3H, CH3); 0,98 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 1,91 (m, 1H); 1,962,07 (m, 3H); 2,22 (m, 1H), 2,28 (dd, 1H, J = 13,1 and 4,5 Hz); 2,41 (m, 1H); 2,68 (dd, 1H, J = 12,7 and 2,6 Hz); 3,78 (m, 1H, Η-2β); 4,05 (m, 1H, Η-3β); 4,98-5,05 (m, 2H, H-22, H-23). 13C NMR δ 12,31, 13,56, 21,16, 21,21, 23,91, 25,91, 26,02, 28,17, 29,67, 30,27, 33,22, 33,68, 34,59, 36,59, 37,66, 39,30, 40,15, 42,61, 42,79, 46,74, 50,69, 53,73, 55,85, 56,72, 68,25, 68,32, 132,98, 134,27, 212,30. HRMS (API): m/z vypočteno pro C29H4?O3 [M+H]+ 443,3525, nalezeno 443,3522. Vybrané Ή NMR píky pro 22£-izomer (3fE): δ 0,67 (s, 3H, CH3); 0,75 (s, 3H, CH3); 1,00 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 5,35 (m, 1H).
-25 CZ 309819 B6
23-Cyklohexyl-2α,3α-dihydroxy-24-nor-5α-cholan-6-on (sloučenina 4f)
Palladium na uhlí (12 mg) bylo přidáno do roztoku sloučeniny 3f s minoritním izomerem 3df (12 mg; 0,027 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) a ethanolu (1 ml). Vzduch z reakční baňky byl evakuován a do reakce byl přidán vodík z balonku. Takto byla reakce míchána 18 hodin. Poté bylo palladium na uhlí odfiltrováno, rozpouštědla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (60% ethylacetát v cyklohexanu). Byla získána sloučenina 4f.
Bílý prášek, chemický vzorec: C29H48O3, výtěžek: 11 mg, 91 %. 1H NMR (CDCh, 500 MHz) δ, ppm: δ 0,66 (s, 3H, CH3); 0,76 (s, 3H, CH3); 0,91 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH3); 1,91 (m 1H); 1,972,07 (m, 2H); 2,30 (dd, 1H, J = 13,1 a 4,6 Hz); 2,68 (bd, 1H, J = 12,4 Hz); 3,79 (m, 1H, H-2β); 4,06 (m, 1H, H-3β).
13C NMR δ 11,99, 13,55, 18,65, 21,18, 23,94, 25,59, 26,42, 26,47, 26,77, 27,97, 32,92, 33,19, 33,71, 33,88, 35,80, 37,68, 38,06, 39,37, 40,16, 42,59, 42,91, 46,78, 50,68, 53,72, 55,89, 56,64, 68,27, 68,36, 212,22. HRMS (API): m/z vypočteno pro C29H49O3 [M+H]+ 445,3682, nalezeno 445,3680.
Tabulka 1. Sterolové deriváty vzorce I připravené analogicky na základě výše uvedených postupů
substituenty CH analýza MS analýza
R1 R2 R3 R4 [%C, %H] [vypoč./nalezeno] [M+H]+
4 H OH H H 79,71/79,68, 11,05/11,08 347
5 OH H H H 79,71/79,69, 11,05/11,06 347
6 OH OH H H 76,20/76,18, 10,56/10,59 363
13 H OH methyl H 79,94/79,91, 11,18/11,21 361
14 OH H methyl H 79,94/79,93, 11,18/11,20 361
15 OH OH methyl H 76,55/76,51, 10,71/10,74 377
19 H OH methyl methyl 80,16/80,14, 11,30/11,33 375
20 OH H methyl methyl 80,16/80,13, 11,30/11,33 375
21 OH OH methyl methyl 76,87/76,85, 10,84/10,88 391
28 H OH ethyl H 80,16/80,14, 11,30/11,33 375
29 OH H ethyl H 80,16/80,15, 11,30/11,34 375
30 OH OH ethyl H 76,87/76,85, 10,84/10,86 391
34 H OH ethyl ethyl 80,54/80,53, 11,51/11,52 403
35 OH H ethyl ethyl 80,54/80,52, 11,51/11,51 403
36 OH OH ethyl ethyl 77,46/77,44, 11,07/11,09 419
43 H OH ethyl (23R )-methyl 80,35/80,31, 11,41/11,46 389
44 OH H ethyl (23R )-methyl 80,35/80,30, 11,41/11,46 389
45 OH OH ethyl (23R )-methyl 77,18/77,15, 10,96/10,99 405
46 H OH ethyl (23S)-methyl 80,35/80,30, 11,41/11,47 389
47 OH H ethyl (23S)-methyl 80,35/80,30, 11,41/11,47 389
48 OH OH ethyl (23S)-methyl 77,18/77,14, 10,96/11,01 405
55 H OH n-propyl H 80,35/80,31, 11,41/11,45 389
- 26 CZ 309819 B6
56 OH H n-propyl H 80,35/80,32, 11,41/11,43 389
57 OH OH n-propyl H 77,18/77,16, 10,96/11,00 405
64 H OH isopropyl H 80,35/80,33, 11,41/11,43 389
65 OH H isopropyl H 80,35/80,33, 11,41/11,45 389
66 OH OH isopropyl H 77,18/77,15, 10,96/10,99 405
73 H OH n-butyl H 80,54/80,52, 11,51/11,54 403
74 OH H n-butyl H 80,54/80,53, 11,51/11,52 403
75 OH OH n-butyl H 77,46/77,44, 11,07/11,09 419
82 H OH (R )-but-2-yl H 80,54/80,53, 11,51/11,52 403
83 OH H (R )-but-2-yl H 80,54/80,51, 11,51/11,55 403
84 OH OH (R )-but-2-yl H 77,46/77,45, 11,07/11,08 419
91 H OH (S)-but-2-yl H 80,54/80,52, 11,51/11,53 403
92 OH H (S)-but-2-yl H 80,54/80,52, 11,51/11,54 403
93 OH OH (S)-but-2-yl H 77,46/77,45, 11,07/11,09 419
100 H OH terc-butyl H 80,54/80,52, 11,51/11,54 403
101 OH H terc-butyl H 80,54/80,53, 11,51/11,54 403
102 OH OH terc-butyl H 77,46/77,45, 11,07/11,08 419
109 H OH isobutyl H 80,54/80,51, 11,51/11,55 403
110 OH H isobutyl H 80,54/80,53, 11,51/11,53 403
111 OH OH isobutyl H 77,46/77,44, 11,07/11,10 419
118 H OH n-pentyl H 80,71/80,68, 11,61/11,65 417
119 OH H n-pentyl H 80,71/80,67, 11,61/11,66 417
120 OH OH n-pentyl H 77,72/77,70, 11,18/11,21 433
127 H OH 3 -methylbut-1 -yl H 80,71/80,69, 11,61/11,64 417
128 OH H 3 -methylbut-1 -yl H 80,71/80,68, 11,61/11,65 417
129 OH OH 3 -methylbut-1 -yl H 77,72/77,70, 11,18/11,20 433
136 H OH (R )-2-methyl-but-1 -yl H 80,71/80,68, 11,61/11,64 417
137 OH H (R )-2-methyl-but-1 -yl H 80,71/80,69, 11,61/11,63 417
138 OH OH (R )-2-methyl-but-1 -yl H 77,72/77,69, 11,18/11,21 433
145 H OH (S)-2-methyl-but-1 -yl H 80,71/80,68, 11,61/11,64 417
146 OH H (S)-2-methyl-but-1 -yl H 80,71/80,68, 11,61/11,63 417
147 OH OH (S)-2-methyl-but-1 -yl H 77,72/77,69, 11,18/11,22 433
154 H OH (R )-3-methyl-but-2-yl H 80,71/80,67, 11,61/11,65 417
155 OH H (R )-3-methyl-but-2-yl H 80,71/80,68, 11,61/11,64 417
156 OH OH (R )-3-methyl-but-2-yl H 77,72/77,70, 11,18/11,20 433
163 H OH (S)-3-methyl-but-2-yl H 80,71/80,69, 11,61/11,64 417
164 OH H (S)-3-methyl-but-2-yl H 80,71/80,70, 11,61/11,63 417
165 OH OH (S)-3-methyl-but-2-yl H 77,72/77,69, 11,18/11,23 433
172 H OH (R )-pent-2-yl H 80,71/80,69, 11,61/11,64 417
173 OH H (R )-pent-2-yl H 80,71/80,68, 11,61/11,64 417
174 OH OH (R )-pent-2-yl H 77,72/77,70, 11,18/11,22 433
- 27 CZ 309819 B6
181 H OH (S)-pent-2-yl H 80,71/80,69, 11,61/11,65 417
182 OH H (S)-pent-2-yl H 80,71/80,67, 11,61/11,66 417
183 OH OH (S)-pent-2-yl H 77,72/77,68, 11,18/11,23 433
190 H OH pent-3-yl H 80,71/80,67, 11,61/11,66 417
191 OH H pent-3-yl H 80,71/80,67, 11,61/11,65 417
192 OH OH pent-3-yl H 77,72/77,70, 11,18/11,22 433
196 H OH 1,2-ethylen 80,59/80,55, 10,82/10,83 373
197 OH H 1,2-ethylen 80,59/80,54, 10,82/10,79 373
198 OH OH 1,2-ethylen 77,27/77,30, 10,38/10,40 389
202 H OH trimethylen 80,77/80,74, 10,95/10,96 387
203 OH H trimethylen 80,77/80,75, 10,95/10,98 387
204 OH OH trimethylen 77,56/77,52, 10,51/10,53 403
208 H OH tetramethylen 80,94/80,92, 11,07/11,10 401
209 OH H tetramethylen 80,94/80,93, 11,07/11,09 401
210 OH OH tetramethylen 77,83/77,81, 10,64/10,66 417
214 H OH pentamethylen 81,10/81,08, 11,18/11,20 415
215 OH H pentamethylen 81,10/81,06, 11,18/11,22 415
216 OH OH pentamethylen 78,09/78,05, 10,77/10,79 431
223 H OH cyklopropyl H 80,77/80,74, 10,95/11,00 387
224 OH H cyklopropyl H 80,77/80,73, 10,95/11,02 387
225 OH OH cyklopropyl H 77,56/77,51, 10,51/10,56 403
232 H OH cyklobutyl H 80,94/80,92, 11,07/11,10 401
233 OH H cyklobutyl H 80,94/80,90, 11,07/11,11 401
234 OH OH cyklobutyl H 77,83/77,80, 10,64/10,67 417
241 H OH cyklopentyl H 81,10/81,04, 11,18/11,23 415
242 OH H cyklopentyl H 81,10/81,06, 11,18/11,21 415
243 OH OH cyklopentyl H 78,09/78,06, 10,77/10,81 431
250 H OH cyklohexyl H 81,25/81,20, 11,29/11,34 429
251 OH H cyklohexyl H 81,25/81,19, 11,29/11,35 429
252 OH OH cyklohexyl H 78,33/78,28, 10,88/10,92 445
Příklad 6 - Test životaschoponosti na neuronům podobných lidských buňkách SH-SY5Y
Lidská neuroblastomová linie SH-SY5Y (ATCC® CRL-2266), získána z ECACC (The European 5 Collection of Authenticated Cell Cultures) byla kultivována v Eaglově médiu modifikovaném podle Dulbecca a Hamově F12 Nutrient mixu (Dulbecco’s modified Eagle’s Medium and Ham's F12 Nutrient Mixture (DMEM:F-12, 1:1) s 1% penicilin/streptomycin mixu v inkubátoru při 37 °C v 5% CO2, 95% vzduch a humifikované atmosféře, Test byl proveden v 96-jamkové desce se 7000 buňkami SH-SY5Y na jamku, Další den SH-SY5Y buňky podstoupily diferenciační proceduru pomocí all-trans retinové kyseliny (ATRA) po dobu 48 h (ATRA 10 μΜ), Po 48 h, bylo staré DMEM/F12 médium zaměněno čerstvým médiem obsahujícím testované látky v koncentracích 0,1, 1 a 10 μΜ po dobu 24 h, Testované látky byly rozpuštěny v DMSO a přidány do média, Maximální koncentrace DMSO v médiu byla udržována pod 0,1 % (v/v), Viabilita byla měřena pomocí Calcein AM (1mg/ml, ThermoFisher) viabilitního testu, Roztok
Calcein AM v PBS (0,75 μΜ) byl napipetován k buňkám a inkubován po dobu 50 min, Poté byla
- 28 CZ 309819 B6 měřen fluorescence při 488/517 nm (excitace/emise) pomocí mikrodestičkového readeru Infinite M200 (TECAN), Calcein AM test viability je založen na štěpení nefluoreskujícího barviva (Calcein-AM) pomocí intracelulárních esteráz živých buněk na fluoreskující barvivo (Calcein), zatímco umírající buňky tuto schopnost ztrácí, Hodnoty v tabulce 2 ukazují % viability (životaschopnosti), vztažené ke kontrole pro všechny testované sloučeniny, Kontrola (médium s DMSO, <0,1 % (obj,/obj,)) byla postulována jako 100% viability (viz první řádek tabulky), Jak je uvedeno v tabulce 2, bylo prokázáno, že žádné deriváty neindukují snížení viability,
Tabulka 2. Účinek nových sloučenin na viabilitu lidské neuroblastomové linii SH-SY5Y (neuronům-podobný fenotyp) po 24 hodinách aplikace, Data jsou vyjádřena jako procenta DMSO kontroly jako průměr ±SEM dvou nezávislých experimentů v triplikátu,
Viabilita (% DMSO kontroly)
DMSO kontrola průměr: 100 SEM ±: 0,95
Sloučenina 0,1 μΜ SEM ± 1 μΜ SEM ± 10 μΜ SEM ±
57 105,90 2,86 108,90 3,93 117,10 3,31
30 99,41 3,13 102,30 4,14 104,70 3,13
15 98,20 2,53 106,40 1,82 120,60 2,26
111 106,90 4,19 107,80 3,02 109,90 1,37
6 101,30 3,94 104,80 4,84 122,10 4,86
R-LA 0,5 μΜ SEM ± 5 μΜ SEM ± 50 μΜ SEM ±
96,12 2,68 96,93 3,59 101,2 2,09
DFO 1 μΜ SEM ± 10 μΜ SEM ± 100 μΜ SEM ±
105,7 8,48 105,5 8,49 109,5 5,92
*DMSO - dimethylsulfoxid; R-LA - kyselina R-lipoová; DFO - deferoxamin, Látky byly testovány v neuroprotektivně aktivních koncentracích,
Příklad 17 Neuroprotektivní efekt látek na glutamátem-indukovaném oxidativním poškození lidských neuronálních SH-SY5Y buňkách
Podobně jako v předchozím testu byl test proveden v 96-jamkových mikrodestičkách s 20 000 buňkami na jamku, Den po vysetí buněk, SH-SY5Y byly podrobeny 48-hodinové diferenciaci pomocí all trans retinové kyseliny (ATRA) (ATRA 10 μΜ), Po 48 hodinách bylo staré médium DMEM / F12 zaměněno čerstvým médiem obsahujícím 160 mM glutamátu (Glu) bez nebo s testovanými sloučeninami v koncentracích 0,1, 1 a 10 μM, Jako pozitivní kontroly byla použity kyselina R-lipoová (R-LA) při 0,5, 5, 50 μM a deferoxamin (DFO) při 1, 10 a 100 μM, Po 24 hodinách byla buněčná smrt kvantifikována barvením propidium jodidem (PI) podle literatury (Stone et al,, BMC Cell Biol, 2003, 4, 1) s modifikacemi.
Obecně je barvení PI spojeno s poškozenou buněčnou membránou nebo přítomností umírajících buněk (Stone et al,, BMC Cell Biol, 2003, 4, 1), Kvůli ztrátě adherence byly poškozené nebo mrtvé buňky barveny roztokem PI přímo v médiu v konečné koncentraci 1,5 μM a inkubovány při pokojové teplotě po dobu 15 až 25 minut při pokojové teplotě, Buňky barvené PI byly kvantifikovány při 535/617 nm (excitace/emise) pomocí čtečky mikrodestiček Infinite M200 Pro (Tecan), Buněčná smrt generovaná 160 mM Glu byla považována za 100 % buněčné smrti (tj, kontrola, se kterou je srovnáváno v tabulce 3), takže bylo pozorováno snížení buněčné smrti (neuroprotektivní účinek), Aplikace 160 mM Glu vedlo k přibližně 5-krát vyšší buněčné smrti ve srovnání s kontrolou DMSO, Jak je vidět z tabulky 3 a obr, 1, všechny testované sloučeniny při 10 μM prokázaly srovnatelný nebo vyšší neuroprotektivní účinek než pozitivní kontroly, Konkrétně byl nejvyšší účinek pozorován v případě sloučenin 15 a 6 při 10 μM s dvojnásobným
- 29 CZ 309819 B6 neuroprotektivním účinkem než R-LA, Dále sloučeniny vykazovaly vyšší účinnost než pozitivní kontroly kvůli skutečnosti, že neuroprotektivního účinku bylo dosaženo při řádově nižších koncentracích (5 až 10krát),
Tabulka 3. Neuroprotektivní účinek nových sloučenin na lidské neuroblastomové linii SHSY5Y (neuronálnífenotyp)
Sloučenina Neuroprotektivní efekt (% snížení buněčné smrti oproti kontrole) p hodnota
0,5 μΜ 5 μΜ 50 μΜ
R-LA N/A N/A 13,49 >0,001
1 μΜ 10 μΜ 100 μΜ
DFO N/A 19,94 23,55 >0,001
0,1 μΜ 1 μΜ 10 μΜ
57 N/A 15,99 24,88 >0,001
30 N/A N/A 23,17 >0,001
15 N/A N/A 30,08 >0,001
111 N/A N/A 26,52 >0,001
6 N/A 15,00 33,70 >0,001
N/A = žádná protekce; Data jsou vyjádřena jako rozdíl mezi průměry skupin 160mM Glu a cotreamentu (sloučeniny), se statistickou významností (ANOVA, Tukey post hoc test),
Příklad 18 Měření oxidačního stresu na buněčné linii lidského neuroblastomu SH-SY5Y - model PD indukovaný glutamátem
Podobně jako v předchozím testu, buňky rostoucí na 96-jamkových mikrodestičkách v denzitě 20000 buňkami na jamku podstoupily diferenciaci a testovací proceduru pro glutamátový model, Po 4 hodinách společného ošetření s glutamátem byla kvantifikována tvorba superoxidových radikálů jakožto marker oxidativního stresu (dle Kim et al, 2017, J, Med, Food, 20, 140-151 s drobnými modifikacemi), Stručně, neuronům-podobné SH-SY5Y buňky byly centrifugovány při 500 g po dobu 5 minut a 30 sekund, poté bylo médium vyměněno za roztok 10 μΜ dihydroethidia (DHE) v fosfátovém pufru (PBS) a ponecháno při pokojové teplotě po dobu 30 minut, Po 30 minutách bylo DHE měřeno při 500 nm/580 nm (excitace/emise) pomocí Infinite M200 Pro (Tecan) mikrodestičkového readeru,
DHE je barvivo propustné pro buňky, které je selektivní vůči detekci superoxidových radikálů, Celkový oxidační stres dosažený 160 mM Glu byl považován za 100%, takže bylo pozorováno snížení oxidačního stresu (OS redukční efekt), Jak je uvedeno v tabulce 4 a na obr, 2, 160 mM Glu vyvolalo 2,6-násobné zvýšení tvorby superoxidových radikálů, Co je důležitější, že všechny příklady při 10 μΜ prokázaly srovnatelný nebo mírně lepší účinek snížení oxidativního stresu než antioxidant R-LA, zatímco úplně překonaly DFO, Dohromady všechny příklady ukázaly vyšší účinnost než pozitivní kontroly z hlediska koncentrací odpovědných za aktivitu snižující OS (5 až 10krát účinnější než pozitivní kontroly),
- 30 CZ 309819 B6
Tabulka 4, Oxidativní stress indukovaný glutamátem a aktivita nových sloučenin ve snížení oxidativního stresu, testováno na neuronálních SH-SY5Y buňkách,
Tvorba superoxidových radikálů (oxidativní stres), % kontroly (Glu 160 mM)
Průměr ±SEM
DMSO negativní kontrola 38,18 0,74
Glu 160 mM kontrola 100 1,52
Sloučeniny 1 μΜ ±SEM 10 μΜ ±SEM
57 93,34 3,83 83,99 5,33
30 84,54 3,88 81,08 3,25
15 98,27 4,65 85,61 3,28
111 89,17 4,8 80,21 3,31
6 85,36 3,38 80,19 2,95
R-LA 5 μΜ ±SEM 50 μΜ ±SEM
86,72 5,07 83,91 4,33
DFO 10 μΜ ±SEM 100 μΜ ±SEM
87,06 2,39 92,61 2,2
Data představují procenta 160 mM Glu kontroly, průměr ± SEM tří nezávislých experimentů,
Příklad 19 - Farmaceutické přípravky
Farmaceutické přípravky pro obvykle obsahují 0,1 až 99 % z hmotnosti, obzvláště 0,1 až 95 % hmotnosti, účinných látek obsahujících sterolový derivát podle tohoto vynálezu, 1 až 99,9 % hmotnosti alespoň jednoho pevného nebo kapalné pomocné látky, a od 0 do 25 % hmotnosti, obzvláště 0,1 až 25 % hmotnosti, povrchově aktivního činidla, Tyto prostředky mohou také obsahovat další přísady, jako jsou stabilizátory, například rostlinné oleje nebo epoxidované rostlinné oleje, činidla proti pěnění, například silikonový olej, konzervační látky, regulátory viskozity, pojidla, látky způsobující lepivost a nebo jiné aktivní složky, Výhodné formulace mají zejména následující složení: (% = hmotnostní procenta):
F1: Suché kapsle
5000 Tobolek, z nichž každá obsahuje 0,25 g sterolového derivátu, se připraví následujícím způsobem:
Složení: Léčivá látka: 1250 g; Talek 180 g; Pšeničný škrob: 120 g; Stearát hořečnatý: 80 g; Laktóza 20 g,
Postup přípravy: Rozetřené látky jsou tlačeny přes síto s velikostí ok 0,6 mm, Dávka 0,33 g směsi je přenesena do želatinové tobolky pomocí stroje na plnění tobolek,
F2: Měkké tobolky
5000 měkkých želatinových tobolek, z nichž každá obsahuje 0,05 g neurosterolového derivátu jako účinnou látku, se připraví následujícím způsobem:
- 31 CZ 309819 B6
Složení: 250 g Účinná látka + 2l g Lauroglycol
Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v Lauroglykol® (propylenglykol laurát, Gattefossé SA, Saint Priest, Francie) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm, Dávka o velikosti 0,419 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek,
F3: Měkké tobolky
5000 měkkých želatinových tobolek, z nichž každá obsahuje 0,05 g neurosterolového derivátu jako účinnou látku, se připraví následujícím způsobem:
Složení: 250 g účinné složky v 1 l PEG 400, 1 litr Tween 80,
Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v PEG 400 (polyethylenglykol o mh mezi 380 a 420, Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a Tween 80 (polyoxyethylen sorbitan monolaurát, Atlas Chem Inc, Inc, USA, dodává Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm, Dávka o velikosti 0,43 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek,
Příklad 20 - Formulace tablety s řízeným uvolňováním
Jedna tableta obsahuje například 300 až 350 mg neurosterolového derivátu jako účinnou látku, Pomocná látka se známým účinkem: Jedna tableta obsahuje 150 až 200 mg retardující složky (Methocel, Parteck® SRP 80, Kollidon® SR, Kollidon 25, chitosan, alginát), dále lubrikantu (stearát hořečnatý), účinné látky (VH), pojiva (Prosolv SMCC 90),
Lékovou formou je tableta s řízeným uvolňováním,
Příprava tabletoviny: Tablety jsou připraveny přímým lisováním, Nejprve je naváženo vypočtené množství retardující složky (Methocel, Parteck® SRP 80, Kollidon® SR, Kollidon 25, chitosan, alginát), dále lubrikantu (stearát hořečnatý), účinné látky (VH), pojiva (Prosolv SMCC 90), Následně je vzniklá směs homogenizována v homogenizátoru (Retsch MM200 - Retsch GmbH, Haan), Homogenizaci se doporučuje provádět ve třech frekvencích: 10 kmitů/s, 13 a 15 kmitů/s vždy po dobu 1 minuty, Tabletovina je poté převedena do ručního lisu, Tablety jsou lisovány při zatížení 8 kN po dobu 5 minut, Zatížení je zvoleno s ohledem na požadovanou pevnost tablet 0,8 až 0,8 MPa, Hmotnost tablet činí 500 ±5 mg,
Hydrofilní matricové tablety s hypromelosou
Tablety jsou připraveny metodou přímého lisování dle postupu uvedeného výše,
Hmotnost tablet byla 500 ±5 mg, Složení hydrofilních tablet s hypromelosou v %:
Formulace A1 A2 A3
Prosolv SMCC 90 49 % 49 % 49 %
Methocel K4M - 30 % -
Methocel K15M 30 % - -
Methocel K100M - - 30 %
Účinná látka 20 % 20 % 20 %
Stearát hořečnatý 1 % 1 % 1 %
Hydrofilní matricové tablety s retardující složkou Kollidon 25, Kollidon® SR, Parteck® SRP 80
Tablety jsou připraveny metodou přímého lisování dle postupu uvedeného výše,
- 32 CZ 309819 B6
Hmotnost tablet byla 500 ±5 mg, Složení hydrofilních tablet v %:
Formulace F1 F2 F3 F4 F5
Prosolv® SMCC 90 49 % 49 % 49 % 49 % 49 %
Kollidon 25 30 % 20 % 10 % - -
Kollidon® SR - - - 30 % -
Parteck® SRP 80 - - - - 30 %
Účinná látka 20 % 30 % 40 % 20 % 20 %
Stearát hořečnatý 1 % 1 % 1 % 1 % 1 %
Hydroflní matricové tablety obsahující LubriTose™MCC, Methocel K15Mnebo Methocel K4M 5
Tablety jsou připraveny metodou přímého lisování dle postupu uvedeného výše,
Hmotnost tablet byla 500 ±5 mg, Složení hydrofilních tablet v %:
Formulace A1 A2
LubriTose™ MCC 50 % 50 %
Methocel K15M 30 % -
Methocel K4M - 30 %
Účinná látka 20 % 20 %

Claims (11)

1. Neurosterolový derivát obecného vzorce I, ve kterém
RI, R2 jsou nezávisle vybrány z vodíku nebo hydroxylové skupiny;
R3 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující vodík, lineární a rozvětvený C1-C5 alkyl a C3-C6 cykloalkyl, přičemž cykloalkyl může být popřípadě substituován alespoň jedním substituentem, kterým je C1-C5 alkyl;
R4 je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, methylu a ethylu;
nebo R3 a R4 společně tvoří bivalentní skupinu C2-C5 α,ω-alkylenu, a kde následující sloučeniny jsou vyloučeny z obecného vzorce I:
2a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-cholestan-6on, 3a-hydroxy-5a-campestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-campestan-6-on.
2. Neurosterolový derivát podle nároku 1, kde substituentem R3 je lineární C1-C5 alkyl, s výhodou vybraný ze skupiny zahrnující methylovou, ethylovou, n-propylovou, n-butylovou a n-pentylovou skupinu.
3. Neurosterolový derivát podle nároku 1, kde substituentem R3 je rozvětvený C3-C5 alkyl, s výhodou vybraný ze skupiny, kterou tvoří isopropyl, isobutyl, seUbutyl, terc-butyl, 2-metiiylbut2-yl, 2,2-dimethylpropyl, 3-methylbut-l-yl, pent-2-yl, pent-3-yl, 3-methylbut-2-yl a 2-methylbutyl.
4. Neurosterolový derivát podle nároku 1, kde substituentem R3 je cykloalkylová skupina, s výhodou vybraná ze skupiny zahrnující cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cyklopropylmethyl, cyklobutylmethyl, cyklopentylmethyl, cyklohexylmethyl, které mohou být popřípadě substituovány lineárním C1-C5 alkylem, s výhodou C1-C3 lineárním alkylem.
5. Neurosterolový derivát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, kde substituenty R3 a R4 dohromady tvoří alkylenovou skupinu, která je vybrána ze skupiny zahrnující 1,2-ethylen, 1,3-trimethylen, 1,4tetramethylen a 1,5-pentamethylen.
6. Neurosterolový derivát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, kde v poloze R3 a/nebo na uhlíku C-23 je chirální centrum.
-34CZ 309819 B6
7. Neurosterolový derivát podle nároku 1, vybraný ze skupiny zahrnující 2a-hydroxy-24-nor-5acholan-6-on, 3a-hydroxy-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-24-nor-5a-cholan-6-on, 2αhydroxy-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-cholan-6-on, 2αhydroxy-23-methyl-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-23-methyl-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-23methyl-5a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-26,27-dinor-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy-26,27-dinor-5acholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-26,27-dinor-5a-cholestan-6-on, (23/?)-2a-hydroxy-23-cthyl-5acholan-6-on, (237?)-3a-hydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6-on, (237?)-2a,3a-dihydroxy-23-ethyl-5acholan-6-on, (23S)-2a-hydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6-on, (23S)-3a-hydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6on, (23S)-2a,3a-dihydroxy-23-ethyl-5a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-27-nor-5a-cholestan-6-on, 3 αhydroxy-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2a-hydroxy24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy26a-homo-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-26a-homo-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2αhydroxy-24,24,24-trimethyl-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-24,24,24-trimethyl-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-24,24,24-trimethyl-5a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-27-nor-5a-campestan-6-on, 3 αhydroxy-27-nor-5a-campestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-27-nor-5a-campestan-6-on, 2a-hydroxy-27nor-5a-ergostan-6-on, 3a-hydroxy-27-nor-5a-ergostan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-27-nor-5a-ergostan6-on; 2a-hydroxy-26a,26b-dihomo-27-nor-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy-26a,26b-dihomo-27nor-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-26a,26b-dihomo-27-nor-5a-cholestan-6-on, 2a-hydroxy5a-campestan-6-on, 2a-hydroxy-5a-ergostan-6-on, 3a-hydroxy-5a-ergostan-6-on, 2α,3αdihydroxy-5a-ergostan-6-on, 2a-hydroxy-24-ethyl-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy24-ethyl-24,24-dimethyl-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-24-ethyl-24,24-dimethyl-5a-cholan-6on, 2a-hydroxy-25-methyl-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy-25-methyl-5a-cholestan-6-on, 2α,3αdihydroxy-25-methyl-5a-cholestan-6-on, 2a-hydroxy-27-nor-5a-stigmastan-6-on, 3a-hydroxy-27nor-5a-stigmastan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-27-nor-5a-stigmastan-6-on, (24S)-2a-hydroxy-26ahomo-27-nor-5a-campestan-6-on, (24S)-3a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-campestan-6-on, (24S)2a,3a-dihydroxy-26a-homo-27-nor-5a-campestan-6-on, (247?)-2a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5aergostan-6-on, (247?)-3a-hydroxy-26a-homo-27-nor-5a-ergostan-6-on, (247?)-2a,3a-dihydroxy26a-homo-27-nor-5a-ergostan-6-on, 2a-hydroxy-22-cyklopropyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 3 αhydroxy-22-cyklopropyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-22-cyklopropyl-23,24dinor-5a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-22-cyklobutyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-22cyklobutyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-22-cyklobutyl-23,24-dinor-5a-cholan-6on, 2a-hydroxy-22-cyklopentyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-22-cyklopentyl-23,24dinor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-22-cyklopentyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 2a-hydroxy22-cyklohexyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-22-cyklohexyl-23,24-dinor-5a-cholan-6on, 2a,3a-dihydroxy-22-cyklohexyl-23,24-dinor-5a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-23-cyklopropyl-24nor-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-23-cyklopropyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-23cyklopropyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-23-cyklobutyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 3 αhydroxy-23-cyklobutyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-23-cyklobutyl-24-nor-5a-cholan6-on, 2a-hydroxy-23-cyklopentyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 3a-hydroxy-23-cyklopentyl-24-nor-5acholan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-23-cyklopentyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a-hydroxy-23-cyklohexyl 24-nor-5a-cholan-6-on, 3 a-hydroxy-23 -cyklohexyl-24-nor-5a-cholan-6-on, 2a,3 a-dihydroxy-23 cyklohexyl-24-nor-5a-cholan-6-on.
8. Neurosterolový derivát obecného vzorce la,
-35CZ 309819 B6 (la), ve kterém
RI, R2 jsou nezávisle vybrány z vodíku nebo hydroxylové skupiny;
R3 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující vodík, lineární a rozvětvený C1-C5 alkyl a C3-C6 cykloalkyl, přičemž cykloalkyl může být popřípadě substituován alespoň jedním substituentem, kterým je C1-C5 alkyl;
R4 je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, methylu a ethylu;
nebo R3 a R4 společně tvoří bivalentní skupinu C2-C5 α,ω-alkylenu, a kde následující sloučeniny jsou vyloučeny z obecného vzorce la:
2a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 3a-hydroxy-5a-cholestan-6-on, 2a,3a-dihydroxy-5a-cholestan-6on, pro použití jako léčiva.
9. Neurosterolový derivát obecného vzorce Ib, (Ib), ve kterém
RI, R2 jsou nezávisle vybrány z vodíku nebo hydroxylové skupiny;
R3 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující vodík, lineární a rozvětvený C1-C5 alkyl a C3-C6 cykloalkyl, přičemž cykloalkyl může být popřípadě substituován alespoň jedním substituentem, kterým je C1-C5 alkyl;
R4 je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, methylu a ethylu;
nebo R3 a R4 společně tvoří bivalentní skupinu C2-C5 α,ω-alkylenu;
pro použití při léčení a/nebo profylaxi neurodegenerativních onemocnění.
10. Neurosterolový derivát pro použití podle nároku 9, kde neurodegenerativní onemocnění je vybráno ze skupiny zahrnující amyotrofickou laterální sklerózu, Parkinsonovu chorobu, Alzheimerovu chorobu, Huntingtonovu chorobu, progresivní supranukleární paralýzy,
-36CZ 309819 B6 kortikobazální degenerace, frontotemporální demence, demence s Lewyho tělísky, atrofie mnohočetného systému, chronické traumatické encefalopatie a spinocerebelární ataxie.
11. Farmaceutická kompozice, vyznačená tím, že obsahuje jeden nebo více neurosterolových derivátů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 a alespoň jeden farmaceuticky akceptovatelný nosič.
CZ2020-579A 2020-10-23 2020-10-23 Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití CZ309819B6 (cs)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2020-579A CZ309819B6 (cs) 2020-10-23 2020-10-23 Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití
US18/030,846 US20230365616A1 (en) 2020-10-23 2021-10-22 Cholestane derivatives, preparations containing these derivatives and use thereof
EP21882212.0A EP4232457A4 (en) 2020-10-23 2021-10-22 CHOLESTAN DERIVATIVES, PREPARATIONS CONTAINING THESE DERIVATIVES AND THEIR USE
PCT/CZ2021/050116 WO2022083809A1 (en) 2020-10-23 2021-10-22 Cholestane derivatives, preparations containing these derivatives and use thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2020-579A CZ309819B6 (cs) 2020-10-23 2020-10-23 Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2020579A3 CZ2020579A3 (cs) 2022-05-04
CZ309819B6 true CZ309819B6 (cs) 2023-11-08

Family

ID=81291668

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2020-579A CZ309819B6 (cs) 2020-10-23 2020-10-23 Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20230365616A1 (cs)
EP (1) EP4232457A4 (cs)
CZ (1) CZ309819B6 (cs)
WO (1) WO2022083809A1 (cs)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009024103A2 (en) * 2007-08-22 2009-02-26 Ustav Organicke Chemie A Biochemie Akademie Ved Ceske Republiky, V.V.I. Natural brassinosteroids for use for treating hyperproliferation, treating proliferative diseases and reducing adverse effects of steroid dysfunction in mammals, pharmaceutical composition and its use
WO2013036835A1 (en) * 2011-09-08 2013-03-14 Sage Therapeutics, Inc. Neuroactive steroids, compositions, and uses thereof

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ303171B6 (cs) * 2009-11-04 2012-05-09 Ústav organické chemie a biochemie Akademie ved Ceské republiky, v. v. i. Použití cholestanových derivátu k výrobe léciva pro lécbu nádorového bujení a s ním spojené angiogeneze
CN103333216A (zh) * 2013-06-04 2013-10-02 苏州大学 5α-6-酮-胆甾烷类似物及其应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009024103A2 (en) * 2007-08-22 2009-02-26 Ustav Organicke Chemie A Biochemie Akademie Ved Ceske Republiky, V.V.I. Natural brassinosteroids for use for treating hyperproliferation, treating proliferative diseases and reducing adverse effects of steroid dysfunction in mammals, pharmaceutical composition and its use
WO2013036835A1 (en) * 2011-09-08 2013-03-14 Sage Therapeutics, Inc. Neuroactive steroids, compositions, and uses thereof

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ISMAILI, Jihane, a kol. Brassinosteroids and analogs as neuroprotectors: Synthesis and structure–activity relationships. Steroids, 2012, 77.1-2: 91-99, ISSN: 0039-128X *
YANG, Ya-Xi, a kol. Synthesis of 5α-cholestan-6-one derivatives and their inhibitory activities of NO production in activated microglia: Discovery of a novel neuroinflammation inhibitor. Bioorganic & medicinal chemistry letters, 2014, 24.4: 1222-1227, ISSN: 0960-894X *

Also Published As

Publication number Publication date
EP4232457A4 (en) 2024-11-20
CZ2020579A3 (cs) 2022-05-04
WO2022083809A1 (en) 2022-04-28
US20230365616A1 (en) 2023-11-16
EP4232457A1 (en) 2023-08-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9987320B2 (en) Traditional chinese medicine composition, and preparation and application thereof
EP3020408A1 (en) Traditional chinese medicine composition, and preparation and application thereof
JPS63277691A (ja) サポニンとりん脂質との複合体及びそれらを含有する薬学的及び化粧用の組成物
EP4321508A1 (en) Guaiane sesquiterpene derivatives and pharmaceutical use thereof
EP2346518A1 (en) Process for extracting cardiac glycosides and compositions
EP3873459A1 (en) Solid compositions of cocrystals of cannabinoids
CZ302293B6 (cs) Prirozené brassinosteroidy pro použití pri lécení hyperproliferace, lécení proliferativních onemocnení a redukci nepríznivých úcinku steroidních dysfunkcí u savcu, farmaceutické prostredky je obsahující a jejich použití
US6264928B1 (en) Use of shogaols and gingerols for preparing deodorant compositions
US6656510B2 (en) Hyperforin derivatives, use thereof and formulations containing them
CZ309819B6 (cs) Sterolové deriváty, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití
KR101821440B1 (ko) 비타민 d의 14-에피-유사체의 새로운 제제
CN117551161A (zh) 一类五环三萜类化合物在治疗神经退行性疾病中的用途
US20020132019A1 (en) Sterol fractions of Nigella sativa L. seeds
JP2008044897A (ja) アルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピン類似化合物、およびこれを含有する育毛・養毛用組成物、美白化粧料用組成物、ならびに抗癌剤、消炎鎮痛剤、解熱剤または抗アレルギー剤としての医薬および色素性皮膚病変治療用医薬
US20230414645A1 (en) Terpenoid derivatives, pharmaceutical preparations containing these derivatives and their use in neuroprotection
US9138433B2 (en) Indole alkaloid compounds as melanogenesis promoters and uses thereof
CN101708179B (zh) 一种安全性高的桂哌齐特药用组合物及其制备方法和其应用
AU716389B2 (en) Cytostatic sterols
US6313099B1 (en) Use of stereoisomers of calendula gylcosides for the treatment of psoriasis
JPH0482837A (ja) ネオリグナン誘導体と燐脂質との複合体、その使用法及び該複合体を含む製薬学的及び化粧品的製剤
WO2011050481A1 (en) New eremophilane sesquiterpene lactones from senecio jacobaea
WO2014089646A1 (pt) Uso de produtos de paullinia cupana na prevenção ou tratamento de fogacho
CZ202244A3 (cs) Heterocyklické purinové deriváty cytokininů, jejich použití při hojení ran a farmaceutické kompozice obsahující tyto deriváty
JPS58208229A (ja) 抗腫瘍剤
JPS58208230A (ja) 抗腫瘍剤

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20241023