CZ20022466A3

CZ20022466A3 - Pseudopolymorfní forma (-)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dihydroxy-8[4R-(3S-hydroxy-1-methyl)piperidinyl]-4H-1-benzopyran-4-on-hydrochloridu, způsob její přípravy a farmaceutická kompozice, která ji obsahuje

Info

Publication number: CZ20022466A3
Application number: CZ20022466A
Authority: CZ
Inventors: Gary L. Bafus; Christine M. Harrison-Bowman; Gary L. Silvey
Original assignee: Aventis Pharmaceuticals Inc.
Priority date: 2000-01-18
Filing date: 2001-01-08
Publication date: 2002-11-13
Also published as: NO20023386L; CA2397593C; NZ520280A; PL356165A1; CA2397593A1; EA200200775A1; CN1395576A; TR200402036T4; EA005247B1; EP1259507A1; JP2003520797A; DK1259507T3; SI1259507T1; MXPA02007005A; IL150638A0; AU2001226346A1; PL200696B1; WO2001053293A1; HUP0204126A2; ATE273303T1

Description

(57) Anotace:

. Pseudopolymorfní forma (-)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7| dihydroxy-8[4R-(3S-hydroxy-lmethyl)piperidinyl]-4H-lbenzopyran-4-on-hydrochloridu, tedy flavopiridolu, způsob 1 její přípravy spočívající v tom, že (a) se smíchá dostatečné množství formy II s dodtatečným množstvím vhodného azeotropního rozpouštědla, a tak se vytvoří azeotropní směs; (b) se azeotropní směs podrobí azeotropní destilaci dostatečné k vytvoření formy I; a (c) se z této případně izoluje forma I, farmaceutická kompozice, která ji obsahuje, a způsob jejího použití, zejména při léčbě rakoviny.

CZ 2002 - 2466 A3 ’ρν *Loo2 • ·* ·· 9999 ·· ♦· ·· r 9 '* · · # · * *99 -9 9 9 · · · • · · 9 · 9 99 9

999 09 99 9 99 9999

180772/KB

Pseudopolymorfní forma (-)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dihydroxy-8[4R-(3S-hydroxy-l-methyl)piperidinyl]-4H-l-benzopyran-4-on— hydrochloridu, způsob její přípravy a farmaceutická kompozice, která ji obsahuje

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká pseudopolymorfní formy (-)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dihydroxy-8[4R-(3S-hydroxy-l-methyl)piperidinyl]-4H-l-benzopyran-4-on—hydrochloridu, způsobu její přípravy, farmaceutické kompozice, která ji obsahuje a způsobu jejího použití.

Dosavadní stav techniky

Sloučenina (-)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dihydroxy-8[4R-(3S-hydroxy-l-methyl)piperidinyl]-4H-l-benzopyran-4-on nebo jedna z jejích farmaceuticky přijatelných solí, známé jako „flavopiridol, je imunomodulátor a protizánětlivé činidlo (US patent č. 4,900,727), a inhibitor onkogenem kódované kinázy nebo tyrozin-kinázy receptoru růstového faktoru (US patent č. 5,284,856). Flavopiridol je silný inhibitor cyklin-dependentních kináz (CDK), včetně CDK1, CDK2, CDK4, CDK6 a CDK7, (cdkl/cyklin B; cdk2/cyklin A; cdk2/cyklin E; cdk4/cyklin D; cdk6/cyklin D; cdk7/cyklin H) s potenciálem způsobit inhibici pokračování buněčného cyklu ve fázi G_x a G₂ mnohočetným mechanismem, který lze přisoudit inhibici cdk (viz International Journal of Oncology 9: str. 1143 až 1168, 1996). Ukázalo se také, že flavopiridol inhibuje rodinu EGF receptorů, kinázy rodiny receptorů spojených s SRC, kinázy převádějící signál. In vitro a in vivo pokusy ukázaly, že je flavopiridol schopný inhibovat široké typové rozmezí lidských nádorů, leukémií a lymfomů.

(-) -cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dihydroxy-8[4R-(3S-hydroxy-l-methyl)piperidinyl]-4H-l-benzopyran-4-on nebo jeho farmaceu·>

9 9 '9 '9'

999

9 ·♦·* ·· 9»

9 9 9 9 9 9'

9 9 9 9 9

999 999 999 • 9 *· 99 9 99 9999 ticky přijatelná sůl krystalizuje do podoby mnoha solvátů z rozpouštědel, jako jsou ethanol, dimethylsulfoxid (DMSO), methanol, acetonitril/isopropanol, ethanol/isopropanol, a isopropanol, a solváto-hydrátů, jako ze směsi ethanolu a vody, a isopropanolu a vody.. Výhodnou formou je forma ethanolovodného solvátu hydrochloridu flavopiridolu, dále označovaná jako „forma II.

Ačkoliv forma II vyhovuje farmaceutickým standardům, má tendenci, pokud není zabalena v obalu nepropouštějícím vodu, absorbovat vodu, což zvyšuje náklady na výrobu. Je také žádoucí, aby měla krystalická struktura tak vysokou stabilitu, jak jen je možné, a to, z důvodů manipulace, a také z důvodů schvalovacího procesu rozličnými farmaceutickými regulačními orgány na celém světě.

Předmětem předkládaného vynálezu je poskytnutí podoby flavopiridolu jako formy I, která má lepší fyzikální vlastnosti pro použití jako farmaceutické kompozice.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález se týká pseudopolymorfní formy I, jak je definováno pomocí rentgenové práškové difrakce (x-ray powder diffraction). Výhodně je forma I v podstatě prostá formy II nebo/a jiných forem flavopiridolu. Je použitelná ve farmaceutické kompozici obsahující účinné množství formy I a farmaceuticky přijatelný nosič. Forma I je použitelná jako inhibitor proteinkinázy, inhibitor cyklin dependentní kinázy, a k léčení rozličných forem rakoviny.

Forma I je dále charakterizována její schopností býti méně hydroskopickou než forma II, např. vykazuje menši hmotnostní přírůstek způsobený srovnatelnou relativní vlhkostí.

40 ·· 44·4 ·· *· '9 4 4 0 4 4' * φ 044 · 4 4 4 4 · • •••••4 « 4 * 0 '4 · 4 4 4 0 0 4

4 4· 44 4 ·* 4444

Forma I se připraví smícháním dostatečného množství formy II s dostatečným množstvím vhodného azeotropního rozpouštědla, čímž se vytvoří azeottopní směs, podrobením této azeotropní směsi azeotropní destilaci dostatečné pro vznik formy I, a popřípadě izolací formy I. Popis vyobrazení

Obr. 1: Odhadnutý limit detekce formy II ve formě I pomocí rentgenové práškové difrakce (XRPD)

K odhadnutí limitu detekce formy II ve formě I byla různá množství formy II přesně zvážena a pečlivě smíchána (nemletá) s formou I. Tato směs byla celá přenesena na platinový držák vzorků a srovnána pomocí mikroskopového sklíčka. Všechny vzorky byly skenovány při 2°/min z 12° - 16° 2_Ω. Minimálně bylo provedeno dvojí stanovení u každé hladiny impulsů, difrakční obrazce získané pomocí XRPD byly zprůměrovány, a výška vrcholu při -13,8° 2θ byla stanovena na nejbližší 0,1 mm. Odhadnutý limit detekce formy II ve formě I je ~3 %.

Detailní popis předkládaného vynálezu „Forma I znamená hydrochlorid (-)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dihydroxy-8[4R-(3S-hydroxy-l-methyl)piperidinyl]-4H-1-benzopyran-4-onu. Tato obsahuje shodnou účinnou složku jako flavopiridol, avšak liší se od známých krystalů flavopiridolu v tom, že je bezvodá nebo/a solvátu prostá, tj . pseudopolymorfní forma známých forem flavopiridolu.

Forma I se identifikuje pomocí rentgenových difrakčních obrazců vyjádřených v hodnotách „d, získaných pomocí Cu K-alfa radiace, následovně:

• '· * 9 · 9 9 9 9 9 « · · 999 9 9 9 • 9 9 99 99 · '99 ··*« hodnota D-Á 12,708 4,323 5,594 5,349 3,590 a výhodněji:

hodnota D-Á 12,708 4,323 5,594 5,349 3,590 3,3 66 4,209 3,395 3,438 4,839

Forma I se také identifikuje pomocí rentgenových difrakčních obrazců vyjádřených v hodnotách „d, získaných pomocí Cu K-alfa radiace, a jejich relativních intenzit:

Hodnota D-Á	Relativní intenzita
12,708	silná
4,323	silná
5, 594	silná
5,349	střední
3,590	střední
3, 366	' střední
4,209	střední
3,395	střední
3,438	střední
4,839	střední
Výhodněji se forma I	identifikuje pomocí rentgenových
difrakčních obrazců vyjádřených v hodnotách „d, získaných

• <4 ·· · • ,···	·· • ·	44 4 4 4 4	»4 4 4 • 4	44 4 4 4
i · ·	4 ·	4	4 4	4
i··· ··	··	•	44	··♦«

pomocí Cu K-alfa radiace, a procent jejich relativních intenzit (RI):

Hodnota D-Á	Relativní intenzita
12,708	100,0
4,323	75, 9
5,594	58,5
5,349	49,5
3,590	46, 6
3,366	42,0
4,209	40,7
3,395	39, 5
3,438	38,8
4,839	37,1.

Rentgenová prášková difrakce formy I je výstižněji popsána v tabulce 1.

Tabulka 1

Úhel 2 theta (°)	Hodnota D-Á	Relativní intenzita	Relativní intenzita (%)
6, 950	12,708	silná	100,0
20,529	4,323	silná	75,9
15,830	5, 594	silná	58,5
16,560	5,349	střední	49,5
24,778	3,590	střední	46, 6
26,457	3,366	střední	42,0
21,091	4,209	střední	40,7
26,226	3,395	střední	39,5
25,898	3,438	střední	38,8
18,320	4,839	střední	37,1
8,308	10,634	střední	35,7
23,748	3,744	střední	33,4
13,010	6,799	střední	32,4
30,520	2,927	střední	31,0
27,106	3,287	slabá	26,2
31,153	2,869	slabá	22,4
29, 043	3,072	slabá	23,7
14,600	6,062	slabá	22,4
19,033	4,659	slabá	20,6

·'·· · · · 9 9

9 9 9 9 ί« · « · 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 <···' >· »» · ·»··

Forma I je v podstatě prostá formy II nebo/a jiných forem flavopiridolu. Termín „v podstatě prostá formy II nebo/a jiných forem flavopiridolu znamená, že forma II nebo/a jiné formy flavopiridolu jsou přítomné v množství činícím méně než 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 % a 3 %, jak ukazuje rentgenová prášková difrakce nebo nukleárně magnetická resonance (NMR).

„Jiné formy flavopiridolu zahrnují bazické a solné formy, jak je vhodné, včetně hydrátů, solvátů nebo solvátohydrátů, avšak nezahrnují formu I nebo formu II.

„Forma II znamená solvátohydrát ze směsi ethanol/voda hydrochloridu (-)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dihydroxy-8[4R-(3S-hydroxy-l-methyl)piperidinyl]-4H-l-benzopyran-4-onu, jak je popsán pomocí rentgenové práškové difrakce v tabulce 2, jejíž data byla získána pomocí Cu K-alfa radiace.

Tabulka 2

Úhel 2 theta <°>	Hodnota D-Á	Relativní intenzita (%)
6,920	12,763	100,0
13,850	6,389	35,7
27,908	3, 194	22,2
6, 669	13,244	18,0
20,838	4,259	13,8
7,339	12,036	13,8
31,660	2,824	9,5
10,208	8,659	8,3
14,722	6,012	7,2
16, 413	5,397	6, 9
25,829	3,447	6, 5

Výhodně se forma I připraví smícháním dostatečného množství formy II s dostatečným množstvím vhodného azeotropního rozpouštědla za vzniku azeotropní směsi, podrobením této azeotropní směsi azeotropní destilaci dostatečné ke vzniku formy I, a popřípadě izolací formy I.

a e ·« 9Ϊ »·♦· ♦· * '9 ♦ c · • *·* · * · · » t • t· * .· » '1« · ·': # · » • '· · * · · » » » '999 99 (99 9 99 9999

Termín „dostatečné množství formy II znamená množství potřebné ke vzniku krystalů formy I v reakční směsi, které lze izolovat. Odborník v oboru toto množství může experimentálně stanovit.

Termín „dostatečné množství vhodného rozpouštědla znamená dostatek vhodného rozpouštědla k alespoň částečnému rozpuštění formy II, a tak vytvoření reakční směsi,, a odborník v oboru ho může stanovit experimentálně. Pokusy popsané níže předkládají příklady množství, které lze použít.

„Vhodné podmínky z velké části, závisejí na zvoleném vhodném rozpouštědle. Například, pokud vhodné podmínky zahrnují azeotropní destilaci, bude zvoleno vhodné azeotropní rozpouštědlo.

„Vhodné rozpouštědlo je rozpouštědlo, které alespoň částečně rozpouští formu II, a umožňuje tvorbu krystalů formy I. Vhodným rozpouštědlem může být „vhodné azeotropní rozpouštědlo nebo jak je zde jinak popsáno, ...

Termín „azeotropní směs označuje kapalnou směs dvou nebo více látek, která se chová jako jediná látka, u níž má pára vytvořená při částečném odpaření kapaliny stejné složení jako kapalina. Neměně se vařící směs vykazuje buď maximální nebo minimální teplotu varu, ve srovnání s jinými směsmi stejné látky.

Termín „azeotropní destilace označuje typ destilace, při níž se ke směsi, která se má rozdělit, přidává látka za účelem vytvoření azeotropní směsi s jednou či více složkami původní směsi. Obvykle se azeotropní směs zahřívá na teplotu, při níž odchází solvát/voda z formy II. Azeotropy takto vytvořené budou mít teplotu varu odlišnou od teplot varu původní směsi.

φ φφ φφ. ΦΦΦΦ φφ' φφ

ΦΦ Φ ·· ι» ' « « · β.

Q Φ ΦΦΦ Φ 'Φ Φ Φ φ

Ο φ 'Φ Φφφ Φ Φ * ' » φ φ

Φ Φ · -Φ -· Φ Φ Φ « '

ΦΦΦ «Φ ΦΦ Φ ΦΦ ΦΦΦ·

ΦΦ „Vhodné(á) azeotropní rozpouštědlo(a) zahrnují ketonová rozpouštědla, jako jsou aceton, methyl-ethyl-keton apod.; alifatická esterová rozpouštědla, jako jsou ethylacetát, methylacetát, methylformiát, ethylformiát, isopropylacetát apod.; směsi ketonových rozpouštědel a alifatických esterových rozpouštědel; alifatická rozpouštědla obsahující 5 až 8 uhlíkových atomů jako jsou pentan, hexan apod.; alifatické nitrily, jako je acetonitril; benzen, toluen, pyridin, atd. Viz například publikaci Practical Organic Chemistry, 3. vydání, John Wiley & Sons., 1956 např., str. 10 až 11, která je zde zahrnuta zmínkou.

Pokud je zde použit, označuje termín „vhodná teplota teplotu, která umožňuje krystalizaci formy I bez podstatného poškození formy I, takto tvořené. Při azeotropní destilaci to bude teplota varu, při níž solvát nebo/a voda odchází.

Při této teplotě je forma I ve formě krystalu, která precipitovala a kterou lze získat izolací krystalu. Obvykle toho lze dosáhnout filtrací krystalu nebo evaporací rozpouštědla nebo jiným odstraněním rozpouštědla z krystalu, nebo krystalu z rozpouštědla. Také vysoušení rozpouštědla, např. evaporace při pokojové teplotě nebo při zahřívání, může být vhodné.

Důležitou vlastností formy I oproti formě II je schopnost formy I neabsorbovat snadno vodu z atmosféry. Předkládaný vynález poskytuje formu flavopiridolu, která vykazuje hmotnostní přírůstek způsobený vodou, který činí méně než 5 %, včetně 4 %, 3 %, 2 %, 1 % a méně než 1 % ve frakcích (obvykle přibližně 1 až 2 %) při relativní vlhkosti přibližně 75 % a dokonce až relativní vlhkosti přibližně 90 % (hmotnostní přírůstek přibližně 3,5 %). Forma II, jako solvátohydrát, vykazuje pomalý, avšak nepřetržitý, hmotnostní přírůstek činící přibližně 4 % až do přibližně 60% relativní vlhkosti.

9 99 ♦ · ·'< 9 999	99 9 ' 1,9 9 \|9	·»·· 9	99 9 9 . '* *	99 • 9 9
				9
• · ·	9 '9	9	9 9	9
<.99 9 9 9	9 9	9	99	99 9 9

Při vyšší relativní vlhkosti než 60% vykazuje forma II hmotnostní přírůstek přibližně 15 až 20 %.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava formy I flavopiridolu

Přibližně 6 g formy II flavopiridolu bylo vloženo do kádinky o objemu 600 ml. Pomalu, za míchání, bylo přidáváno 300 ml methyl-ethyl-ketonu (MEK) za vzniku suspenze. Roztok byl zahříván při 50° C dokud byl kalný. Poté byla, za míchání a přidávání 100 ml rozpouštědla, teplota zvýšena na 75° C. Jak byl roztok přiveden k silnému varu, započala precipitace a usazovaní u dna. Teplota byla zvýšena na 80° C (teplota varu MEK) a monitorována, na několik málo minut, k získání dalšího precipitátu. Poté následovalo odstranění a ponechání vychladnout na přibližně 55° C. Konečný objem 325 ml roztoku vyžadoval , filtraci přes BuchnerovU nálevku, za vakua, s použitím filtračního papíru Whatman #1, do sucha; za vzniku hutného žlutého vločkovitého prášku podobného hroudě. Struktura byla potvrzena hmotovou spektrometrií, nukleárně magnetickou resonancí, Fourierovou transformační infračervenou analýzou, a rentgenovou práškovou difrakcí, prováděnými na vzorku.

Příklad 2

Metodologie rentgenové práškové difrakce

Obrazce z rentgenové práškové difrakce (XRPD) byly získány rta difraktometru Scintag XDS 2000 θ/θ pracujícího s Cu radiací při 45 kV a 40 mA, s použitím chlazeného silikonového detektoru Kevex Psi Peltier. Pro shromáždění dat byly použity zdrojové štěrbiny o 2 a 4 mm a detektorové štěrbiny o 0,5 a •řiů.-.

* ««				··
99 ·	• t*	•	• <	• *
• »··	• >·	•	» ·	*
				«
• · ·	• ·	9	• ·	•
··· ··	(·*	•	··	9 9·

0,3 mm. Získaný vzorek byl jemně rozmělňován pomocí achátové třecí misky a tloučku po dobu přibližně jedné minuty, vložen do platinového držáku vzorků a srovnán pomocí mikroskopového sklíčka. Obrazce z práškové difrakce vzorků byly získány od 2° do 42° 2q při l°/min. Kalibrace XDS 2000 byla ročně ověřována pomocí silikonového práškového standardu.

Příklad 3

Screening hygroskopicity - srovnání formy I a formy II

Byla provedena analýza dynamické sorpce páry (DVS), jako srovnání formy I a formy II.

Analýza dynamické sorpce vodní páry

Forma II byla zkoumána při 25° C pomocí povrchového měřícího systémového analyzátoru dynamické sorpce páry DVS-1. Vzorek o hmotnosti , přibližně 14,8 mg byl při počáteční vlhkosti okolního prostředí nastavené na přibližně 48% relativní vlhkost (RH) vložen do držáku krystalových vzorků o zjištěné hmotnosti. Během zkoušky byla použita celková rychlost toku vlhkého/suchého dusíku činící 200 cm³/min. Byl spuštěn následující plně cyklický program: 30 minut při počáteční relativní vlhkosti okolního prostředí, následovaných upravením relativní vlhkosti na 0, 20, 40, 60, 80, 90, 95 a %, přičemž doba expozice při každé z těchto relativních vlhkostí byla závislá na hodnotě dm/dt, která měla být nižší než 0,001% po dobu 60 minut. Maximální doba dosažená u libovolné z těchto relativních vlhkostí činila 24 hodin. Shromáždění dat pro celý cyklus trvalo 4 dny. Po dokončení celého cyklu byly vzorky uchovávány při stejné relativní vlhkosti, jako činila relativní vlhkost počáteční.

Forma I byla zkoumána při 25° C a 40° C pomocí DVS-1 analyzátoru. Data byla shromažďována po dobu dvou celých • 99 9 <9 9 19 9 · 9

cyklů. Vzorky o hmotnosti 10,4 a 16,7 mg byly při počáteční vlhkosti okolního prostředí nastavené na 46%, respektive 33%, relativní vlhkost vloženy do příslušných držáků krystalových vzorků o zjištěné hmotnosti. Při této zkoušce bylo navíc použito nastavení na 75% relativní vlhkost. Shromáždění dat pro dva celé cykly trvalo při 25° C 7 dní a při 40° C 17 dní. Po dokončení každé dvoucyklové zkoušky, byly vzorky uchovávány při stejné relativní vlhkosti, jako činila relativní vlhkost počáteční.

Obrazce z rentgenové práškové difrakce (XRPD) byly získány na difraktometru Scintag XDS 2000 θ/θ pracujícího s Cu radiací při 45 kV a 40 mA, s použitím chlazeného silikonového detektoru Kevex Psi Peltier. Pro shromáždění dat byly použity zdrojové štěrbiny o 2 a 4 mm a detektorové štěrbiny o 0,5 a 0,3 mm. Vzorky formy II byly jemně rozmělňovány pomocí achátové třecí misky a tloučku po dobu přibližně jedné minuty, vloženy do platinového držáku vzorků a srovnány pomocí mikroskopového sklíčka. Vzorky odebrané během nebo po zkoušce hygroskopicity nebyly, kvůli omezenému dostupnému množství vzorku, rozmělňovány. V každém případě ny.'i y obrazce., z. práškové difrakce skenovány od 2° do 42° 2θ při l°/min. Kalibrace XDS 2000 byla ověřena pomocí silikonového prášku.

Pro pokusy s různou relativní vlhkostí byl použit povrchový měřící systémový analyzátor dynamické sorpce páry DVS-2 s vyšší kapacitou. Pomocí rychlosti toku činící 500 cm³/min byla forma II udržována na požadovaných nastavených relativních vlhkostech a byly periodicky odebírány vzorky pro analýzu XRPD. Nerozmělněný materiál byl vložen do platinového držáku vzorku a srovnán pomocí mikroskopového sklíčka, a poté podroben analýze za výše uvedených podmínek.

Forma II vykazovala pomalý, avšak nepřetržitý, hmotnostní přírůstek, který při přibližně 60% relativní vlhkosti činil přibližně 4 %, a při relativní vlhkosti vyšší než 60 % byl

- 12 -	A ·« 99 * • 9AA	•A AAA·	• A 99 • 9 9 · 9 * A
• >9 9 ·	• •
	í 9 9	• ·	9	• 99
	,9 9 9 9 9	• 9	.9	«« 9 9# 9

pozorován další 15 až 20% hmotnostní přírůstek. Oproti tomu, forma I vykazovala přibližný hmotnostní přírůstek ve výši 1 až 2 % při 75% relativní vlhkosti, plus další předpokládaný 3,5% hmotnostní přírůstek při přibližně 90% relativní vlhkosti. Při relativní vlhkosti vyšší než 90 % byl pozorován přibližně 30% hmotnostní přírůstek. Proto lze formu II považovat za hygroskopickou, zatímco formu I lze považovat za hygroskopickou při vyšší než 75% relativní vlhkosti.

Rentgenová prášková difrakce s rozdílnými vlhkostmi ukázala, že, pokud byla vlhkost vyšší, docházelo u formy II ke zjevnému poklesu krystaličnosti, a významným změnám obrazců získaných pomocí XRPD, které byly pravděpodobně způsobeny úbytkem ethanolu. Oproti tomu forma I zjevně udržovala svoji krystaličnost až do . dosažení extrémně vysoké relativní vlhkosti, tj . vyšší než 98 %), při níž ztrácela krystaličnost a stávala se amorfní.

Na základě těchto výsledků lze konstatovat, že forma I má, pro použití jako farmaceutická kompozice, lepší fyzikální vlastnosti než forma II. ............

Příklad 4

Forma II

Reaktor byl za dusíkové atmosféry naplněn (-)-cis-l-methyl-4R-(2,4,6-trimethoxyfenyl)-3S-piperidinolem a acetanhydridem. Během míchání a ochlazování výsledného roztoku na 8 až 20° C byl při konstantní rychlosti přidáván bortrifluoridetherát. Po dokončení přidávání byla výsledná směs míchána při 20 až 30° C po dobu 3 až 5 hodin. Reakční směs byla vychlazena na 8 až 12° C a během míchání byla přidána ledová voda, což bylo následováno přidáváním vodného roztoku hydroxidu sodného až do dosažení pH 10 až 11. Směs byla extrahována ethylacetátem. Ethylacetátové extrakty byly sdruženy a

• «V		··	9999	99	99
• «	•	'·	9	9 ·	•
• ·*·	•	•	«	6	•
• · ·		•	•	*	•	•
<·· ··		• a	•	99.	999

koncentrovány ve vakuu. Zbytek byl zpracován v methanolu a vodě. Poté byl přidán hydroxid sodný (přibližně 50% vodný roztok) . Reakční směs byla míchána při 20 až 30° C po dobu 2 až 3 hodin. Směs byla odpařována za sníženého tlaku při < 80° C. Výparek byl ochlazen na 15 až 20° C a jeho pH bylo upraveno na 8,5 až 8,5 pomocí koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Pevné sraženiny byly shromážděny pomocí filtrace, promyty demineralizovanou vodou a sušeny za sníženého tlaku za vzniku (-)-cis-l-methyl-4-(3-acetyl-4,6-dimethoxy-2-hydroxy)fenyl-3-piperidinolu.

Poté byl (-)-cis-l-methyl-4-(3-acetyl-4,6-dimethoxy-2-hydroxy)fenyl-3-piperidinol po částech přidán k míchané suspenzi terč.butoxidu draselného v suchém N,N-dimethylformamidu tak rychle, že teplota nepřekročila 20° C. Po dokončení přidávání byla výsledná směs míchána po dobu 1 hodiny při < 30 °C. Poté byl přidán methyl-2-chlorbenzoát, a to takovou rychlostí, že teplota nepřekročila 30° C. Výsledná směs byla míchána při 20 až 30° C po dobu 4 až 6 hodin. Byla přidána demineralizovaná voda, což bylo následováno koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou až do dosažení pH směsi činícího 6 až 8. Směs. byla dvakrát extrahována pomocí chloroformu. Chloroformové extrakty byly sdruženy a koncentrovány za sníženého tlaku.

Po ochlazení zbylého oleje na teplotu < 40° C byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková. Poté byla směs míchána při teplotě < 40° C po dobu < 2 hodiny či po celou noc, pokud to bylo nutné. Po ochlazení reakční směsi na 15 až 30° C byla přidána voda a chloroform. Výsledná směs byla bazífikována na hodnotu pH 8,5 až 10,5 pomocí 50% roztoku hydroxidu sodného. Fáze byly odděleny. Vodná vrstva byla poté extrahována chloroformem. Smíchané organické extrakty byly odpařeny za sníženého tlaku za vzniku (-)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dimethoxy-8-[4R-(3S-hydroxy-l-methyl)piperidinyl]-4H-l-benzopyran-4-onu v podobě oleje, který byl přímo bez purifikace použit v dalším stupni.

444»

4 4 4 ' 4

4

4444 ’ 4 4

4

44

4 4 4

4 4

4444

K (-)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dimethoxy-8-[4R-(3S-hydroxy-l-methyl)piperidinyl]-4H-l-benzopyran-4-onu byl přidán chinolin a pyridinhydrochlorid. Výsledná směs byla za míchání ohřátá na 160 až 190° C. V míchání bylo pokračováno po dobu 2 hodin, při nichž byla udržována teplota 160 až 190° C. Po ochlazení reakční směsi na 90 až 110° C byla přidána voda. Výsledná směs byla bazifikována na hodnotu pH 7,5 až 8,5 pomocí nasyceného roztoku uhličitanu sodného. Směs byla dvakrát podrobena působení směsi ethanolu a chloroformu. Smíchané extrakty byly odpařeny do sucha za vzniku surového (+)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dihydroxy-8-[4R-(3S-hydroxy-l-methyl)piperidinyl]-4H-l-benzopýran-4-onu v podobě hnědé· gumy, který byl purifikován způsobem uvedeným níže.

K surovému (+)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dihydroxy-8-[4R-(3S-hydroxy-l-methyl)piperidinyl]-4H-l-benzopyran-4-onu byl přidán aceton. Výsledná směs byla míchána při 55 až 60° C po dobu 30 až 60 minut, poté byla ochlazena na 15 až 20° C a míchána po dobu dalších 1 až 2 hodin. Vysrážené pevné látky byly izolovány filtrací, dvakrát promyty acetonem... a., .sušeny- ...za sníženého tlaku za vzniku (+)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dihydroxy-8-[4R-(3S-hydroxy-l-methyl)piperidinyl]-4H-l-benzopyran-4-onu v čisté formě.

Volná báze z předchozího stupně byla suspendována v ethanolu a okyselena pomocí koncentrované kyseliny chlorovodíkové takovou rychlostí, že teplota nepřekročila 30° C. Během tohoto procesu byly nejprve všechny pevné látky rozpuštěny a poté byl vysrážen hydrochlorid. Suspenze byla vychlazena na 0 až 10° C a míchána po dobu 1 hodiny, při čemž byla udržována teplota. Krystaly byly izolovány pomocí filtrace a promyty studeným ethanolem za zisku surového hydrochoridu (-)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dihydroxy-8-[4R-(3S-hydroxy-l-methyl)piperidinyl]-4H-l-benzopyran-4-onu.

·· .·· .··. *·η

• ·

4444

Κ surovému hydrochloridu (-)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dihydroxy-8-[4R-(3S-hydroxy-l-methyl)piperidinyl]-4H-l-benzopyran-4-onu byl přidán ethanol. Výsledná směs byla zahřívána na až 79° C, míchána po dobu jedné hodiny při udržování teploty, a ještě horká filtrována. Filtr byl promyt horkým ethanolem. Filtrát byl koncentrován atmosférickou destilací, dokud nebylo odstraněno 60 až 80 % těkavých látek. Zbylá suspenze poté byla ochlazena na 0 až 10° C, zatímco byla izolována pomocí filtrace a sušena za sníženého tlaku za vzniku čistého hydrochloridu (-)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dihydroxy-8-[4R-(3S-hydroxy-1-methyl)piperidinyl]-4H-l-benzopyran-4-onu v podobě žluté pevné látky.

Poté, co se získá forma I, lze připravit farmaceutickou kompozici. Termín „farmaceutická kompozice, pokud je zde použit, znamená terapeuticky účinné množství formy I s farmaceuticky přijatelným nosičem.

„Farmaceuticky přijatelný nosič je činidlo, které je netoxické, neovlivňuje terapeutický profil formy I a je vhodné pro danou formu podávání.___Forma_____I______se____výhodně.....podává-intravenózní cestou po časový úsek vhodný pro rakovinnou chemoterapii. Výhodně se forma I smíchá s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými nosiči. Formu I lze například k injekčnímu intravenóznímu podávání pacientovi smíchat s kapalinou, která je isoosmotická a má regulované pH, jako je voda, směs dextrózy a vody nebo směs fyziologického roztoku a vody.

Termín „účinné množství zahrnuje „terapeuticky účinné množství, „množství účinné k inhibici proteinkináz, „množství účinné k inhibici cyklin dependentních kináz a množství formy I účinné k inhibici nádoru a může se lišit, v závislosti na jednotlivci, doprovodné terapii, chorobě a jiných variabilních faktorech. Účinná množství formy I jsou

přibližně stejná jako u formy II. Obvykle se dávka formy I pohybuje v rozmezí 0,001 mg/kg až 100 mg/kg za den.

Flavopiridol je použitelný k léčení mnoha stavů a chorob spojených, s inhibici proteinkináz, a zejména cyklin dependentních kináz, jak je zde výše popsáno. Očekává se, že je flavopiridol použitelný k léčení širokého spektra rakovin, například leukémie, mesotheliomu a karcinomů plic (velkobuněčných, malobuněčných a nemalobuněčných), kolorektálních karcinomů, karcinomů prsu, karcinomů vaječníku, karcinomů prostaty, melanomů, renálních karcinomů, karcinomů dělohy a karcinomů centrálního nervového systému.

Všechny články a patenty zde citované jsou zde tímto zahrnuty zmínkou.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Pseudopolymorfní forma I, vyznačující se tím, že její obrazec získaný rentgenovou práškovou difrakcí, vyjádřený v hodnotách „d, je:

hodnota D-Á

12,708

4,323.

5,594

5,349

3,590.
2. Pseudopolymorfní forma I, vyznačující se tím, že její obrazec získaný rentgenovou práškovou difrakcí, vyjádřený, v hodnotách, „d a jeho relativních intenzitách, je:

Hodnota D-Á

12,708

4,323 —5,594

5,349 3,590 3,366 4,209 3,395 3,438 4,839

Relativní intenzita silná silná silná střední střední střední střední střední střední střední

Pseudopolymorfní forma I, vyzn tím, že její obrazec získaný difrakcí, vyjádřený _Ύν hodnotách „d relativních intenzit je:

ačující se rentgenovou práškovou , a procentech jeho
3.

Hodnota D-Á

12,708
4,323 5,594
5,349 3,590 3,366 4,209 3,395 3, 438 4,839

Pseudopolymorfní forma I, tím, že její obrazec difrakcí, je definován v tabulce 1:

Relativní intenzita %

100, o 75,9 58,5 49, 5 46,
6 42,0

40.

7 39, 5

38.8 37,1 vy značuj ící se získaný rentgenovou práškovou

Tabulka 1

Úhel 2 (^c theta ) Hodnota D-Á Relativní intenzita Relativní intenzita (%) 6, 950 12,708 silná 100, 0 20, 529 4,323 silná 75, 9 15, 830 5, 594 silná _______58, 5 - ---------------1-6-, -5 60- -.....-..... --------------₅--_3Tg střední 49,5 24, 778 3,590 střední 4 6,6 26, 457 3,366 střední 42, 0 21, 091 4,209 střední 40, 7 26, 226 3,395 střední 39, 5 25, 898 3, 438 střední 38,8 18, 320 4,839 střední 37,1 θ, 308 10,634 střední 35,7 23, 748 3,744 střední 33, 4 13, 010 6,799 střední 32,4 30, 520 2,927 střední 31,0 27, 106 3, 287 slabá 26, 2 31, 153 2,869 slabá 22,4 29, 043 3,072 slabá 23,7 14, 600 6, 062 slabá 22,4 19, 033 4,659 slabá 20, 6

5. Forma I podle nároku 1, 2, 3 že tato forma nebo 4, vyznačuj podstatě prostá ící formy s e II. t i m , I je v 6. Forma I podle nároku 1, 2, 3 nebo 4, vyznačuj ící s e t í m , že tato forma I je v podstatě prostá formy II a jiných forem flavopiridolu. 7 . Forma I podle nároku 1, 2, 3 nebo 4, vyznačuj ící

se ť í m , že obsah formy II a jiných forem f lavopiridolu činí méně než 4 %.

8. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství formy I podle nároku 1, 2, 3 nebo 4 a farmaceuticky přijatelný nosič.
9. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství formy I podle nároku 1, 2, 3 nebo 4, která je v podstatě prostá formy II, a farmaceuticky _při jatelný. nos.ič. —----------------------
10. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství formy I podle nároku 1, 2, 3 nebo 4, která je v podstatě prostá formy II a jiných forem flavopiridolu, a farmaceuticky přijatelný nosič.
11. Způsob léčení pacienta pro rakovinu, vyznačuj ící se t i m , že se při něm pacientovi podává terapeuticky účinné množství formy I podle nároku 1, 2, 3 nebo 4.
12. Způsob podle nároku 11, vyznačující se tím, že forma I je v podstatě prostá formy II nebo jiných forem flavopiridolu.
13. Způsob inhibice proteinkináz u pacienta, vyznačující se t í m. , že se při něm pacientovi, který to vyžaduje, podává množství formy I podle nároku 1, 2, 3 nebo 4 účinné pro inhibici proteinkináz.
14. Způsob podle nároku 13, vyznačující se tím, že forma I je v podstatě prostá formy II nebo jiných forem flavopiridolu.
15. Způsob inhibice cyklin dependentních kináz u pacienta, vyznačující se tím, že se při něm pacientovi, který to vyžaduje, podává množství formy I podle nároku 1, 2, 3 nebo 4 účinné pro inhibici cyklin dependentních kináz.
16. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že forma I je v podstatě prostá formy II nebo jiných forem flavopiridolu.
17. Způsob přípravy formy I podle nároku 1, 2, 3 nebo 4, v y z n a č u jí c í s e _ t _ó^_m__,___ že__________________________________________ (a) se smíchá dostatečné množství formy II s dostatečným množstvím vhodného azeotropního rozpouštědla, a tak se vytvoří azeotropní směs;

(b) se azeotropní směs podrobí azeotropní destilaci dostatečné k vytvoření formy I; a (c) . se z tohoto popřípadě izoluje forma I.
18. Způsob podle nároku 17, vyznačující se tím, že rozpouštědlem je ketonové rozpouštědlo.
19. Způsob podle nároku 17, vyznačující se tím, že rozpouštědlem je methylethylketon.
20. Způsob podle nároku 17, vyznačující se tím, že krystalická forma I se získá filtrací formy I.
21. Způsob podle nároku 17, vyznačující se tím, že teplota azeotropní směsi činí přibližně 73° C až přibližně 80° C.
22. Forma (-)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dihydroxy-8[4R-(3S-hydroxy-l-methyl)piperidinyl]-4H-l-benzopyran-4-onu nebo jedné z jeho farmaceuticky přijatelných solí, vyznačující se tím, že vykazuje hmotnostní přírůstek způsobený vodou při přibližně 75% relativní vlhkosti méně než 5 procent.
23. Forma hydrochloridu (-)-cis-2-(2-chlorfenyl)-5,7-dihydroxy-8[4R-(3S-hydroxy-1-methyl)piperidinyl]-4H-l-benzopyran-4-onu, vyznačující se tím, že vykazuje hmotnostní přírůstek způsobený vodou činí při přibližně 75% relativní vlhkosti méně než 5 procent.
24. Forma podle nároku 1, 2, 3 nebo 4,_ _v y z_ n a_č ují c_í_____ se t í m , že se používá jako farmaceuticky účinná sloučenina.