CZ2001990A3 - Geny biosyntetické cesty 1-desoxy-D-xylulosy - Google Patents

Geny biosyntetické cesty 1-desoxy-D-xylulosy Download PDF

Info

Publication number
CZ2001990A3
CZ2001990A3 CZ2001990A CZ2001990A CZ2001990A3 CZ 2001990 A3 CZ2001990 A3 CZ 2001990A3 CZ 2001990 A CZ2001990 A CZ 2001990A CZ 2001990 A CZ2001990 A CZ 2001990A CZ 2001990 A3 CZ2001990 A3 CZ 2001990A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
asn
ile
lys
leu
aat
Prior art date
Application number
CZ2001990A
Other languages
English (en)
Inventor
Hassan Jomaa
Original Assignee
Jomaa Pharmaka Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE19923567A external-priority patent/DE19923567A1/de
Application filed by Jomaa Pharmaka Gmbh filed Critical Jomaa Pharmaka Gmbh
Publication of CZ2001990A3 publication Critical patent/CZ2001990A3/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/711—Natural deoxyribonucleic acids, i.e. containing only 2'-deoxyriboses attached to adenine, guanine, cytosine or thymine and having 3'-5' phosphodiester links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0093—Oxidoreductases (1.) acting on CH or CH2 groups (1.17)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1022—Transferases (2.) transferring aldehyde or ketonic groups (2.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
    • C12Y101/01—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.1.1)
    • C12Y101/01267—1-Deoxy-D-xylulose-5-phosphate reductoisomerase (1.1.1.267)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y117/00—Oxidoreductases acting on CH or CH2 groups (1.17)
    • C12Y117/07—Oxidoreductases acting on CH or CH2 groups (1.17) with an iron-sulfur protein as acceptor (1.17.7)
    • C12Y117/07001—(E)-4-Hydroxy-3-methylbut-2-enyl-diphosphate synthase (1.17.7.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y202/00—Transferases transferring aldehyde or ketonic groups (2.2)
    • C12Y202/01—Transketolases and transaldolases (2.2.1)
    • C12Y202/01007—1-Deoxy-D-xylulose-5-phosphate synthase (2.2.1.7)

Description

Oblast techniky
Předložený vynález se týká DNA-sekvencí, které při integraci do genomu virů, eukaryontů a prokaryontů mění biosyntézu isoprenoidů, jakož i gen-technologického způsobu získání těchto transgenních virů, eukaryontů a prokaryontů. Vedle toho se týká způsobu identifikace látek s herbicidním, antimikrobiálním, antiparazitárním, antivirálním, fungicidním, baktericidním účinkem u rostlin a antimikrobiálním, antiparazitárním, antimykotickým, antibakteriálním a antivirálním účinkem u člověka a zvířete.
Dosavadní stav techniky
Biosyntetické cesta tvorby isoprenoidů přes klasickou cestu acetát / mevalonát a alternativní, na mevalonátu nezávislá biosyntetické cesta, cesta desoxy-D-xylulosa-fosfátová, jsou již známy [Rohmer M., Knani M., Simonin P., Sutter B. a Sahm H.: Biochem. J. 295, 517-524 (1993)].
Není ale známo jak a jakými cestami může být u virů, eukaryontů a prokaryontů dosažena změna koncentrace isoprenoidů cestou desoxy-D-xylulosafosfátu. Na obr. 1 je cesta této biosyntézy znázorněna.
Proto jsou k disposici DNA-sekvence, které kódují 1-desoxy-D-xylulosa-5fosfát-syntázu (DOXP-syntázu),: 1 -desoxy-D-xylulosa-5-fosfát-reduktoisomerázu (DOXP-reduktoisomerázu) nebo gcpE-protein. Všechny tři geny a enzymy jsou zúčastněny na biosyntéze isoprenoidů.
gcpE-Protein má funkci kinázy a katalysuje fosforylaci cukru nebo fosforylcukru anebo předstupně biosyntézy isoprenoidů, zejména fosforylaci 2-Cmethyl-D-erythritolu, 2-C-methyl-D-erythritol-fosfátu, obzvláště 2-C-methyl-Derythritol-4-fosfátu, 2-C-methyl-D-erythrosy, 2-C-methyl-D-erythrosa-fosfátu, zvláště 2-C-methyl-D-erythrosa-4-fosfátu. V předstupni syntézy isoprenoidů katalyzuje gcpE protein zvláště fosforylaci následujících substancí:
CH2(OH)-C(CH3)=C(OH)-CH2-O-PO(OH)2,
CH2(OH)-C(CH3)-CO-CH2-O-PO(OH)2,
CH2=C(CH3)-CO-CH2-O-PO(OH)2,
CH2(OH)-C(CH3)=C(OH)-CH2-OH,
CH2(OH)-C(CH3)-CO-CH2-OH,
CH2=C(CH3)-CO-CH2-OH,
CH2=C(CH3)-CH(OH)-CH2-O-PO(OH)2,
CH2(OH)-C(=CH2)-C(OH)-CH2-O-PO(OH)2,
CHO-C(CH3)-CH(OH)-CH2-O-PO(OH)2,
CH2(OH)-C(OH)(CH3)-CH=CH-O-PO(OH)2,
CH(OH)=C(CH3)-CH(OH)-CH2-O-PO(OH)2, (CH3)2CH-CO-CH2-O-PO(OH)2, (CH3)2CH-CH(OH)-CH2-O-PO(OH)2>
CH2=C(CH3)-CH(OH)-CH2-OH,
CH2(OH)-C(=CH2)-C(OH)-CH2-OH,
CHO-C(CH3)-CH(OH)-CH2-OH,
CH2(OH)-C(OH)(CH3)-CH=CH-OH,
CH(OH)=C(CH3)-CH(OH)-CH2-OH, (CH3)2CH-CO-CH2-OH, (CH3)2CH-CH(OH)-CH2-OH.
DOXP-syntáza katalyzuje kondenzaci pyruvátu a glyceraldehyd-3-fosfátu na
1-deoxy-D-xylulosa-5-fosfát a DOXP-reduktoisomeráza katalyzuje přeměnu 1-deoxyD-xylulosa-5-fosfátu na 2-C-methyl-D-erythritol-4-fosfát.
Podstata vynálezu
Vynález se týká následujících DNA-sekvencí:
DNA-sekvencí, které kódují polypeptid se sekvencí aminokyselin znázorněnou v SEQ ID NO: 2 nebo analog nebo derivát polypeptidu podle SEQ ID NO: 2, v níž jedna nebo více aminokyselin je vynecháno, připojeno nebo nahrazeno jinými aminokyselinami, přičemž enzymatický účinek polypeptidu zůstává zachován, a které pocházejí z parazitů, přičemž variace sekvencí, které se vyskytuji v rámci přirozené variability kmene, jsou do toho zahrnuty,
DNA-sekvencí, které kódují polypeptid se sekvencí aminokyselin znázorněnou v SEQ ID NO: 4 nebo analog nebo derivát polypeptidu podle SEQ ID NO: 4, v níž jedna nebo více aminokyselin je vynecháno, připojeno nebo nahrazeno jinými aminokyselinami, přičemž enzymatický účinek polypeptidu zůstává zachován, a které pocházejí z parazitů, přičemž variace sekvencí, které se vyskytují v rámci přirozené variability kmene, jsou do toho zahrnuty, jakož i DNA-sekvencí, které kódují polypeptid se sekvencí aminokyselin znázorněnou v SEQ ID NO: 6 nebo analog nebo derivát polypeptidu podle SEQ ID NO: 6, v níž jedna nebo více aminokyselin je vynecháno, připojeno nebo nahrazeno jinými aminokyselinami, přičemž katalytická funkce polypeptidu zůstává zachována.
Geny a jejich genové produkty (polypeptidy) jsou uvedeny v sekvenčním protokolu ve své primární struktuře a mají následující přiřazení:
SEQ ID NO:1 : gen 1-desoxy-D-xylulosa-5-fosfát-reduktoisomerázy,
SEQ ID NO:2 : 1-desoxy-D-xyluiosa-5-fosfát-reduktoisomeráza,
SEQ ID N0:3 : gen 1-desoxy-D-xylulosa-5-fosfát-syntázy,
SEQ ID N0:4 : 1-desoxy-D-xylulosa-5-fosfát-syntáza,
SEQ ID N0:5 : gcpE-gen,
SEQ ID N0:6 : gcpE-proteiny.
Všechny DNA-sekvence pocházejí z Plasmodium falciparum.
Vedle DNA-sekvencí vyjmenovaných v sekvenčním protokolu jsou vhodné i takové, které mají v důsledku degenerace genetického kódu jinou DNA-sekvenci, avšak kódují stejný polypeptid nebo analog či derivát polypeptidu, v němž jedna nebo více aminokyselin je vynecháno, připojeno nebo nehrazeno jinými aminokyselinami.
Sekvence podle vynálezu se hodí pro expresi genů ve virech, eukaryontech a prokaryontech, které jsou zodpovědné za biosyntézu isoprenoidů cestou 1-desoxy-Dxylulosy.
Podle vynálezu náleží k eukaryontům nebo eukaryontním buňkám zvířecí buňky, rostlinné buňky, řasy, kvasinky, houby a k prokaryontům nebo prokaryontním bakteriím archaebakterie a eubakterie.
Při integraci DNA-sekvence do genomu, na níž je lokalisována jedna z nahoře uvedených sekvencí, je umožněna exprese shora popsaných genů ve virech, eukaryontech a prokaryontech. Podle vynálezu transformované viry, eukaryonty a prokaryonty se pěstují o sobě známým způsobem a během toho vytvořený isoprenoid se isoluje a případně vyčistí. Všechny isoprenoidy nemusí být isolovány, protože isoprenoidy jsou v některých případech uvolňovány přímo do vzdušného prostoru.
Vynález se dále týká způsobu získání transgenních virů, eukaryontů a prokaryontů pro změnu obsahu isoprenoidů, který obsahuje následující kroky.
a) Získání DNA-sekvence s následujícími částečnými sekvencemi
I) promotor, který je aktivní ve virech, eukaryontech a prokaryontech a zajišťuje tvorbu RNA ve vybrané cílové tkáni nebo cílových buňkách,
II) DNA-sekvence, která kóduje polypeptid se sekvencí aminokyselin představovanou v SEQ ID NO: 2, 4 nebo 6, nebo analog či derivát polypeptidu podle SEQ ID NO: 2, 4 nebo 6,
III) 5'- a 3'- netranslatované sekvence, které ve virech, eukaryontech a prokaryontech umožňují nebo zlepšují expresi označených genů,
b) transfer a vestavba DNA-sekvence do genomu virů, prokaryontních a eukaryontních buněk za nebo bez použití vektoru (např. plasmidu, virální DNA).
f(/ ??&
7. rostlinných buněk tímto způsobem transformovaných, mohou být regenerovány celé intaktní rostliny.
Předmětem vynálezu jsou dále expresivní vektory, které obsahují jednu nebo více DNA-sekvencí podle vynálezu. Takové expresivní vektory se získají, když se DNA-sekvence podle vynálezu opatří vhodnými funkčními regulačními signály. Takovými regulačními signály jsou DNA-sekvence, které jsou zodpovědné za expresi, na příklad promotory, operátory, enhancery, ribosomální vazebná místa a ty, které jsou hostitelským organismem rozeznatelné.
Součástí expresivního vektoru mohou být případně i další regulační signály, které řídí na příklad replikaci nebo rekombinaci rekombinantní DNA v hostitelském organismu.
K předmětu vynálezu právě tak patří hostitelské organismy transformované DNA-sekvencemi nebo expresivními vektory podle vynálezu.
Pro expresi enzymů podle vynálezu se hodí zejména hostitelské buňky a organismy, které nevykazují žádné vnitřní enzymy s funkcí DOXP-syntázy, DOXPreduktoisomerázy nebo gcpE-proteinu. To se shoduje s archaebakteriemi, zvířaty, houbami, plísněmi a některými eubakteriemi. Chyběním těchto vnitřních enzymových aktivit je podstatně usnadněna detekce a vyčistění rekombinantních enzymů. Tím je teprve také možné měřit s malým nákladem aktivitu a zejména inhibici aktivity rekombinantních enzymů podle vynálezu různými chemikáliemi a farmaky v surových extraktech hostitelských buněk.
Isolace proteinu z hostitelské buňky nebo přezrálé kultury hostitelské buňky může probíhat postupy, které jsou odborníkovi známé. Může být žádoucí také reaktivace enzymů in vitro.
Pro usnadnění vyčistění mohou být enzymy nebo částečné sekvence podle vynálezu exprimovány jako protein spojený s různými peptidovými řetězci. K tomu se hodí zvláště oligo-histidinové sekvence a sekvence, které jsou odvozeny od glutathion-S-transferázy, thioredoxinu nebo kalmodulin vázajících peptidů.
Dále mohou být enzymy nebo částečné sekvence enzymů podle vynálezu exprimovány jako fúzovaný protein s takovými, odborníkovi známými peptidovými řetězci, že rekombinantní enzymy jsou transportovány do extracelulárního milieu nebo do určitých úseků hostitelských buněk. Tím může být usnadněno jak vyčistění tak vyšetření biologické aktivity enzymů.
• J · ♦ · · 9 ♦ · ·
4··*·*·» «· ·· ·· * · ·
Při expresi enzymů podle vynálezu se jako účelné může ukázat změnit jednotlivé kodony. Aby se zajistila optimální syntéza proteinu, je při tom také smysluplná cílená výměna basí v kódující oblasti, když použité kodony v parazitech jsou odlišné od užití kodonů v heterologickém systému exprese.
Enzymy podle vynálezu mohou být dále získávány za standardisovaných podmínek translací in vitro, technikami odborníkovi známými. Pro to vhodné systémy jsou extrakty králičích retikulocytů a pšeničných klíčků a lyzáty bakterií. Transkribovaná mRNA může být také translatována in vitro v Xenopus-oocytech.
Chemickou syntézou mohou být připraveny oligo- a polypeptidy, jejichž sekvence jsou odvozeny z peptidové sekvence enzymů podle vynálezu. Při vhodné volbě sekvencí mají peptidy tohoto druhu vlastnosti, které jsou pro enzymy podle vynálezu charakteristické. Takové peptidy mohou být připraveny ve velkých množstvích a hodí se zvláště pro studie kinetiky enzymové aktivity, regulaci enzymové aktivity, trojdimensionální strukturu enzymů, inhibici enzymové aktivity různými chemikáliemi a farmaky a geometrii vazby a afinitu vazby různých ligandů.
K přípravě enzymů podle vynálezu se používá obzvláště DNA s nukleotidy ze sekvencí SEQ ID NO: 1, 3 a 5.
Vynález proto vedle toho zahrnuje způsob sceeningu sloučenin, které inhibují cestu látkové výměny desoxy-D-xylulosa-fosfátu. Podle tohoto postupu se připraví hostitelský organismus, který obsahuje rekombinantní vektor exprese, při čemž vektor vykazuje alespoň jednu část oligonukloetidové sekvence podle SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 nebo SEQ ID NO: 5 anebo jejich varianty či homology a mimo to sloučeninu, o které se předpokládá, že má antimikrobiální, antiparazitární, antibakteriální, antivirální a antimykotický účinek u člověka a zvířete a antimikrobiální, antivirální, batericidní, herbicidní nebo fungicidní účinek u rostlin. Následně se uvede hostitelský organismus do kontaktu se sloučeninou a stanoví se účinnost sloučeniny.
Dalším předmětem tohoto vynálezu jsou metody ke stanovení enzymatické aktivity gcpE-proteinu. Ta může být stanovena podle známých postupů. Deteguje se při tom fosforylace cukru nebo fosforylovaného cukru, nebo předstupeň biosyntézy isoprenoidu, zejména fosforylace 2-C-methyl-D-erythritolu, 2-C-methyl-D-erythritolfosfátu, obzvláště 2-C-methyl-D-erythritol-4-fosfátu, 2-C-methyl-D-erythrosy, 2-Cmethyl-D-erythrosa-fosfátu, zvláště 2-C-methyl-D-erythrosa-4-fosfátu. Dalším předmětem tohoto vynálezu je použití tohoto měřícího postupu pro zjišťování látek, které inhibují aktivitu příslušných enzymů.
• · · ♦ « ·· ·· ··· • · * ♦ · *· · · • 6 · ♦ · · ··· · ··«» ···* << .· »· »·
Enzymatická aktivita DOXP-syntázy a DOXP-reduktoisomerázy může být detegována v jediném kroku tak, že se stanoví přeměna glyceraldehyd-3-fosfátu na
2-C-methylerythritol-4-fosfát.
Analogicky probíhá stanovení aktivit DOXP-syntázy a DOXPreduktoisomerázy. Pro stanovení aktivity DOXP-syntázy se hodí také fluorometrický postup, jak byl popsán Querol-em a spol. (Querol a spol., Abstracts 4th european symposium on plant isoprenoids, Barcelona 21-23 April, 1999).
Příklady provedení vynálezu
Proteiny kódující sekvence s nukleotidovými sledy Seq ID NO: 1, Seq ID NO: 3 a Seq ID NO: 5 mohou být v určitých orgánech nebo buňkách opatřeny transkripci zajišťujícím promotorem, který je napojen podle smyslu orientace (3'-konec promotoru k 5'-konci kódované sekvence) na sekvenci, která kóduje protein, jenž se má vytvořit. Na 3'-konci kódující sekvence se navěsí terminační signál určující ukončení syntézy mRNA . Aby se exprimující protein nasměroval do určitých subcelulárních úseků, jako chloroplastů, amyloplastů, mitochondrií, vakuol, cytosol nebo intercelulárních prostor, může být mezi promotor a kódující sekvenci vložena ještě sekvence kódující tak zvanou signální sekvenci nebo transitní peptid. V některých případech je žádoucí vložit sekvence, které kódují signální sekvenci na COOH-konci proteinu. Sekvence musí být ve stejném rámci pro přečtení jako kódující sekvence proteinu. Pro předpřípravu zavedení DNA-sekvencí podle vynálezu do vyšších rostlin je k disposici veliký počet klonovacích vektorů, které v sobě obsahují replikační signál pro E. coli a buněčný znak, který dovolí selekci transformovaných buněk. Podle metody zavádění žádaných genů do rostliny mohou být potřebné další DNA-sekvence. Jsou-li například pro transformaci rostlinné buňky použity Ti- nebo Ri-plasmid, musí být vloženo alespoň pravé ohraničení, často však pravé a levé ohraničení Ti- a Ri-plasmid T-DNA jako boční rozsah pro zaváděné geny. Používání T-DNA pro transformaci rostlinných buněk je intensivně zkoumáno a dostatečně se popisuje v EP 120516; v Hoekama: The Binary Plant Vector Systém, Offset-drukkerij Kanters B. V. Alblasserdam (1985), kapitola V; v Fraley a spol., Crit. Rev. Plant Sci. 4, 1-46 a v An a spol., EMBO J. 4, 277-287 (1985). Jestliže je vložená DNA integrována jednou do genomu, potom je zpravidla stabilní a zůstává zachována u potomků původně transformovaných buněk. Získává obvykle selektivní ·· ·« • 4 · ·
Φ* ·· • · ·
Φ · ··
• ·
II ·· buněčný znak, který transformovaným rostlinným buňkám uděluje resistenci vůči biocidu nebo antibiotiku jako kanamycinu, G 418, bleomycinu, hygromycinu nebo fosfinotricinu aj. Individuálně použitý buněčný znak by měl tudíž dovolit selekci transformovaných buněk naproti buňkám, kterým vložená DNA chybí.
Pro zavedení DNA do rostliny je k disposici mnoho technik. Tyto techniky zahrnují transformaci pomocí agrobakterií, např. Agrobacterium tumefaciens, fúzi protoplastů, mikroinjekci DNA, elektroporaci jakož i balistické methody a virovou infekci. Z transformovaného rostlinného materiálu mohou být potom regenerovány celé rostliny ve vhodném mediu, které obsahuje antibiotika nebo biocidy pro selekci. Při injekci a elektroporaci se na plasmidy nekladou žádné o sobě specifické požadavky. Mají-li ale být z tímto způsobem transformovaných buněk regenerovány celé rostliny, je nutná přítomnost selektovatelného značkujícího genu. Transformované buňky rostou v rostlinách obvyklým způsobem [McCormick a spol., Plant Cell Reports 5, 81-84 (1986)]. Rostliny mohou být pěstovány normálně a kříženy s rostlinami, které mají stejný transformovaný dědičný základ nebo jiné dědičné vlohy. Individua z toho vzniklá mají odpovídající fenotypické vlastnosti.
Exprese enzymů podle vynálezu probíhá výhodněji pak v eukaryontních buňkách, když mají být dosaženy posttranslatorní modifikace a nativní skládání polypeptidového řetězce. Vedle toho se při expresi genomických DNA-sekvencí v závislosti na systému exprese dosáhne, že se splétáním DNA odstraní introny a jsou produkovány enzymy v polypeptidové sekvenci charakteristické pro parazity. Sekvence kódující introny mohou být z exprimujících DNA-sekvencí odstraněny také rekombinantní DNA-technologií nebo vloženy experimentálně.
?(/W - 479

Claims (4)

PATENTOVÉ NÁROKY
1. DNA-sekvence, které kódují polypeptid se sekvencí aminokyselin znázorněnou v SEQ ID NO: 2 nebo analog nebo derivát polypeptidů podle SEQ ID NO: 2, v níž jedna nebo více aminokyselin je vynecháno, připojeno nebo nahrazeno jinými aminokyselinami, přičemž enzymatický účinek polypeptidů zůstává zachován, a které pocházejí z parazitů, přičemž variace sekvencí, které se vyskytují v rámci přirozené variability kmene, jsou do toho zahrnuty.
2-8
300
PCT/EP99/07055
Glu 305 Asn Asn Phe . yr Asn 310 Leu Val Phe Ser Met 315 Lys Ala Ser Asn Ala 320 Tur <' a 1 Met Ile Pln Ser Tvr Arg Leu Leu v a 1 Ser Lys Gin Tyr Glu 325 330 335 Arg Asn Plet Met 25 he Pro Ile His Leu Gly v a L Thr Glu Ala Gly Phe v 345 350 Gly As c Asn 31’.· Arg Ile L v s Ser Tyr Leu c-iy 7 Ί o Gly Ser Leu Leu 1 c z 360 365
2. DNA-sekvence, které kódují polypeptid se sekvencí aminokyselin znázorněnou v SEQ ID NO: 4 nebo analog nebo derivát polypeptidů podle SEQ ID NO: 4, v níž jedna nebo více aminokyselin je vynecháno, připojeno nebo nahrazeno jinými aminokyselinami, přičemž enzymatický účinek polypeptidů zůstává zachován, a které pocházejí z parazitů, přičemž variace sekvencí, které se vyskytují v rámci přirozené variability kmene, jsou do toho zahrnuty.
3 ±_e y Asp Thr 375 Ile Arg Ile Leu 380 Thr Glu Asp Pro Tro Glu Glu Leu Thr Pro Cys Lys Lys Leu v a i Glu Asn Leu Lys Lvs 3S5 390 Λ Q 400
Aru *’e Phe Tvr Asn Glu Asn Phe Lys Glu Asp A.sn Glu Leu Lys Asn 4 05 410 415 Asn Glu Met Asp Thr Lys A.sn Leu Leu Asn Phe Glu Glu Asn Tyr Arg 4 22 425 430 Asn Phe A.sn Asn ~'e Lvs Lvs Arg Asn Val Glu Lvs Asn Asn Asn Val 440 445
Leu His Glu Glu lvs Thr Ile Gly Asn Val Val Thr Ile Lys Glu Leu
Glu
Phe
Lys Asp Leu Asn Leu Glu Val Asp
Ser
65
470
480
Asn Gly Asn Leu Lys Lys Gly Ala Lys Thr Τ'·-, v- Asp Met Val Ile Ile 490 495 A.sn Asp Phe His As n Ile Thr Asn Leu Gly Lys Lys Thr Val Asp Lys 50C 505 510 Leu Met Gin Val 21v Ile Asn Ile Val Val Gin Tvr Glu Pro His Asn.
3. DNA-sekvence, které kódují polypeptid se sekvencí aminokyselin znázorněnou v SEQ ID NO: 6 nebo analog nebo derivát polypeptidů podle SEQ ID NO: 6, v níž jedna nebo více aminokyselin je vynecháno, připojeno nebo nahrazeno jinými aminokyselinami, přičemž katalytická funkce polypeptidů zůstává zachována.
4. DNA-sekvence podle některého z nároků 1 až 3, která mimoto vykazuje funkční regulační signály, zejména promotory, operátory, enhancery, ribosomální vazebná místa.
5. DNA-sekvence s následujícími částečnými sekvencemi
I) promotor, který je aktivní ve virech, eukaryontech a prokaryontech a zajišťuje tvorbu RNA ve vybrané cílové tkáni nebo cílových buňkách,
II) DNA-sekvence podle některého z nároků 1 až 3,
III) 3'-netranslatovaná sekvence, která ve virech, eukaryontech a prokaryontech vede k adici poly-A zbytků na 3'-konec RNA.
6. Způsob získávání transgenních virů, eukaryontů a prokaryontů pro změnu obsahu isoprenoidu vyznačený tím, že do genomu virů, eukaryontních a ·· · · ···· · · • · · · · · ··· · · · ·· prokaryontních buněk je transferována a vestavěna DNA-sekvence podle nároku 4 nebo 5, buď za použití nebo bez použití vektoru.
7. Transgenní systémy, zejména rostliny a rostlinné buňky, které obsahují jednu nebo více DNA-sekvencí podle nároků 1 až 5 jako cizí nebo dodatečnou DNA, jež jsou exprimovány.
8. Expresivní vektor obsahující jednu nebo více DNA-sekvencí podle nároku 1 až 5.
9. Protein, který je zúčastněn na cestě látkové výměny 1-deoxy-D-xylulosa-5fosfátu a a) je kódován DNA-sekvencemi SEQ ID NO: 1, 3 nebo 5 nebo b) je kódován DNA sekvencemi, které hybridisují s DNA-sekvencemi SEQ ID NO: 1, 3, 5 nebo fragmenty těchto DNA-sekvencí v DNA-rozsahu, který kóduje zralý protein.
10. Protein podle nároku 9, získatelný z kultur parazitů nebo vnímavých parazitů a vyčistěním chromatografickými a elektroforetickými metodami.
11. Protein podle některého z nároků 9 a 10, který a) je produktem virální, prokaryontní nebo eukaryontní exprese exogenní DNA, b) je kódován DNAsekvencemi SEQ ID NO: 1, 3 nebo 5 nebo je kódován DNA sekvencemi, které hybridisují s DNA-sekvencemi SEQ ID NO: 1, 3 nebo 5 anebo fragmenty těchto DNA-sekvencí v DNA-rozsahu, který kóduje zralý protein nebo c) je kódován DNAsekvencemi, které bez degenerace genetického kódu by hybridisovaly se sekvencemi definovanými sub b) a kódují polypeptid s odpovídající sekvencí aminokyselin.
12. Protein podle některého z předešlých nároků, který vykazuje sekvenci aminokyselin SEQ ID NO: 2, 4 nebo 6.
13. Způsob stanovení enzymatické aktivity gcpE-proteinu vyznačený tím, že je detegována fosforylace cukru nebo fosforylovaného cukru, nebo předstupeň biosyntézy isoprenoidu, zejména fosforylace 2-C-methyl-D-erythritolu, 2C-methyl-D-erythritol-fosfátu, obzvláště 2-C-methyl-D-erythritol-4-fosfátu, 2-C-methyl10
D-erythrosy, 2-C-methyl-D-erythrosa-fosfátu, zvláště 2-C-methyl-D-erythrosa-4fosfátu a fosfátové a alkoholové předstupně.
14. Způsob podle nároku 13 vyznačený tím, že je detegována fosforylace následujících fosfátů nebo alkoholů:
CH2(OH)-C(CH3)=C(OH)-CH2-O-PO(OH)2,
CH2(OH)-C(CH3)-CO-CH2-O-PO(OH)2,
CH2=C(CH3)-CO-CH2-O-PO(OH)2,
CH2=C(CH3)-CH(OH)-CH2-O-PO(OH)2,
CH2(OH)-C(=CH2)-C(OH)-CH2-O-PO(OH)2,
CHO-C(CH3)-CH(OH)-CH2-O-PO(OH)2,
CH2(OH)-C(OH)(CH3)-CH=CH-O-PO(OH)2i
CH(OH)=C(CH3)-CH(OH)-CH2-O-PO(OH)2, (CH3)2CH-CO-CH2-O-PO(OH)2, (CH3)2CH-CH(OH)-CH2-O-PO(OH)2,
CH2(OH)-C(CH3)=C(OH)-CH2-OH,
CH2(OH)-C(CH3)-CO-CH2-OH, CH2=C(CH3)-CO-CH2-OH, CH2=C(CH3)-CH(OH)-CH2-OH,
CH2(OH)-C(=CH2)-C(OH)-CH2-OH,
CHO-C(CH3)-CH(OH)-CH2-OH,
CH2(OH)-C(OH)(CH3)-CH=CH-OH,
CH(OH)=C(CH3)-CH(OH)-CH2-OH, (CH3)2CH-CO-CH2-OH, (CH3)2CH-CH(OH)-CH2-OH.
15. Způsob spojeného stanovení enzymatické aktivity DOXP-syntázy a DOXPreduktoisomerázy podle některého z nároků 9 až 12 vy značený tím, že je detegována přeměna glyceraldehyd-3-fosfátu na 2-C-methylerythritol-4-fosfát.
16. Způsob screeningu sloučeniny pro terapii infekčních procesů u člověka a zvířete vyznačený tím, že zahrnuje:
a) přípravu hostitelské buňky, která obsahuje rekombinantní expresivni vektor, přičemž vektor vykazuje alespoň jednu část oligonukloetidové sekvence podle některého z nároků 9 až 12, a mimo to sloučeniny, o které se předpokládá, že má antimykotický, antibiotický, antiparazitární nebo antivirální účinek u člověka a zvířat,
b) uvedení hostitelské buňky do kontaktu se sloučeninou a
c) stanovení ovlivnění aktivity polypeptidů nárokovaných v nárocích 9 až 12.
• 9· · · · · · 9 · · • · · 99 · · · · • · · · · · · ··
17. Způsob screeningu sloučenin pro ošetřování rostlin vyznačený tím, že zahrnuje:
a) přípravu hostitelské buňky, která obsahuje rekombinantní expresivní vektor, přičemž vektor vykazuje alespoň jednu část oligonukloetidové sekvence podle některého z nároků 9 až 12, a mimo to sloučeniny, o které se předpokládá, že má antimikrobiální, antivirální, antiparazitární, baktericidní, fungicidní nebo herbicidní účinek u rostlin
b) uvedení hostitelské buňky do kontaktu se sloučeninou a
c) stanovení ovlivnění aktivity polypeptidů nárokovaných v nárocích 9 až 12.
18. Použití DNA podle některého z nároků 1 až 5, nebo proteinů podle některého z nároků 9 až 12 anebo transgenních systémů podle nároku 7 k profylaxi nebo terapii onemocnění u člověka a zvířat.
• · • ·
WO 00/17233
J £ K V é Mó N / protokol;
PCT/EP99/07055 (Vlétli
Í-J· 24fa<r
<110> Jomaa, Hassan <120> Gene des 1-Desoxy-D-xyluiose-Biosynthesewegs <130> 15696 <140> PCT/EP99 < 14 1> 1999-09-22 < 15 0> 21)19923567.3 - ;ag_05-22 <150> 2119843279.9 1998-09-22
17 0> latentln Ver. 2.1
= smodi·.
falciparum < 2 2 0 >
<221> 223 s- / ”? 7* '» * í 4 r ” ) <220>
<221> gene <222> (1)..(1467) <220>
<22 1> ir.RNA <222> íl) . . (146'1 <400> 1
arg aag aaa tat att tat aca tat ttt ttc ttc atc aca ata act att Met Lys Lys Tyr Ile Tyr Ile Tyr Phe Phe Phe Ile Thr Ile Thr Ile 1 5 10 15
• · · · • ·
WO 00/17233 ··· ·· *· · · ·· ···
PCT/EP99/07055
cit Asn gat Asp tta Leu gta Val 20 ata Ile aat Asn aat Asn aca Thr tea Ser 25 a a a Lys tgt Cys gtt Val tcc Ser att Ile 30 gaa Glu aga Arg čl 33 a a a aat aac gca tat ata aat tat ggt ata gga tat aat gga cca Arg Lys Asn Asn Ala Tyr Ile Asn Tyr Gly Ile Tyr Asn Gly Pro 35 40 45
ca t aat aaa ata aca aag act aga aga tgt a a a aga ata aag tta tgc 192 Asp Asn Lys Ile Thr Lys Se*· Arg Arg Cys Lys Arg Ile Lys Leu Cys 50 55 s U aa a aag c a t tta ata gat act QCx T gca ata aag aaa cca att aat gta 240 b VS Lys Asc Leu Ile Asp Ile Gly Ala Ile Lys Lys Pro Ile Asn Val 65 70 7 80 - aca att ttt gga agt act get agt ata ggt acg aat get cta aat ata 288 —. i a Ile Pne Gly Ser Thr 71 ·.· Ser Ile Gly Thr Asn AI a Leu Asn Ile 35 90 95 ata agg gag tgt aat aaa act gaa aat gtt ttt aat gtt aaa gca ttg 336 _ _ e Arg 31u Cys Asn Lys - _e G1U As n Val Phe Asn Val Lys Ala Leu 100 105 110 t a c gc g aa t aac agt gtg aat caa tta tat gaa caa get aga gaa ttt 384 Tyr Val Asn L vs Ser Val Asn Glu Leu Tyr Glu C_n AI a Arg Glu Phe 120 125 tta cca gaa tat τ-g tgt aca cat gat aaa agt gca tat gaa gaa tta 432 Leu Pro Glu Tyr Leu Cys Ile His Asp Lys Ser Val Tyr Glu Glu Leu 130 135 140 aaa :aa ctg gta aaa aat ata aaa gat tat aaa cat ata ata ttg tgt 480 Lys Glu Leu Val Lys Asn ” ' C> Lys Asp Tyr Lys řro Ile Ile Leu Cys 145 150 155 160 cgt gat gaa ggg atg aaa gaa ata tgt agt agt aac agt ata gat aaa 528 Gly Asp Glu Gly Met Lys Glu Ile Cys Ser Ser ríS Π Ser Ile Asp Lys 165 170 175
ata gtt att agt gat tet ttt caa gga tta tat tet act atg tat
576 • · · ·
Γ
WO 00/17233
PCT/EP99/07055
Ile Val Ile Gly Ile 180 Asp Ser Phe Gin 185 Gly Leu Tyr Ser Thr 190 Met Tyr gca att atg aat aat aaa ata gtt gcg tta gct aat aaa gaa tcc att 624 A - α 1 i 6 Met .Asn Asn Lys Ile Val AI a Leu Ala Asn Lys Glu Ser Ile 195 200 205 gtc uct gct ggt ttc ttt tta aag aaa tta tta aac att cat aaa aac 672 Val Ser Ala Gly Phe Phe Leu Lys Lys Leu Leu Asn Ile His Lys Asn 210 220 3 C ά 3 q O aca ηíξ ccc gtt gat tea caa cat agt gct ata ttt caa tgt 720 Ala Lys Ile Ile Pro Val Asp Ser Glu His 3θr Lis Ile Phe Gin Cys no ς 230 235 240 tta gat 33t aac aag gta cca aaa aca aaa tgt tta caa gac aat ttt 768 Lea Asp Asn Asn Lys Val Leu Lys Thr Lys Cys Leu Gin Asp Asn Phe 245 250 255 ící aaa att aac aat ata aat aaa ata ttt tta tgt tea tet gga ggt 816 Ser Lys Ile Asn Asn Ile Asn Lvs Ile Phe Leu Cys Ser Ser Gly Gly 2 60 265 270 cca c í í caa aat tta a c t atg gac gaa tta aaa aat gta aca tea gaa 864 ?ro Phe Gin Asn Leu Thr Met Asp Glu Leu Lvs Asn Val Thr Ser Glu 7 7 ~ 280 285 aac gct cta aag cac cct aaa tgg aaa atg ggt aag aaa ata act ata 912 Asn Ala Leu Lys His Pro Lys Trp Lvs Met Gly Lys Lys Ile Thr Ile 290 ^95 300 gac ~ct gca acc a to atg aat aaa ggt tta gaq gtt ata gaa acc cac 960 As o Ser Ala Thr Met Met Asn Lys Gly Leu Glu Val Ile G1 u Thr His 2 05 310 315 320 ZZt t t 3 ttt gat gta gat tat aat gat ata gaa gct ata gta cat aaa 1008 Pne Leu Phe Asp Val Asp Tyr Asn Asp Ile Glu Val Ile Val His Lys 325 330 335 gaa cgc att ata cat tet tgt gtt gaa ttt ata qac aaa tea gta ata 1056 Glu Cys Ile Ile His Ser Cys Val Glu Phe Ile Asp Lys Ser Val Ile 340 345 350
WO 00/17233 <
4Γ • · · · · · ·
PCT/EP99/07055
agt Ser caa Gin arg Met 355 tat Tyr tat cca gat Tyr Pro Asp atg Met 360 caa ata Gin Ile ccc ata Pro Ile tta Leu 365 tat Tyr tet Ser tta Leu 1104 sCd cgg cc: gat aga ata aaa aca důí C C 3 aaa cct tta gat ttg get 1152 T.u.r Trp Pro Asp Arg Ile Lys Thr Asn Leu Lys Pro Leu Asp Leu Ala 370 375 380 C3C sec cca act ctt aca ttt cat 3. d 3 C C C c c t cca gaa cat ttc ccg 1200 Gin Val Ser Thr Leu Thr Phe His Lys řrc Ser Leu Glu His Phe Pro 390 395 400 - a l r aaa Lt = get tat c== aca ggt sta aaa g g a aac u ut tat cca 1248 Cys Ire Lys Leu Ala Tyr Gin Ala Gly Ile Lys Gly Asn Phe Tyr Pro 405 410 415 - ά2Σ cca cca aat gca tea aat aaa ata get aac aac tta ttt ttg aac 12 96 Thr V a i Leu Asn Ala Ser Asn Glu Ile Ala Asn .Asn Leu Phe Leu Asn 420 425 430 aac a a a att aaa tat ttt gat GUL tec tet a ua aca tcg caa gtt ctt 1344 rtSH _ys _ i e L v c Tyr Phe Asp Σ le Ser Ser Ile ~1e Ser Gin Val Leu 4 35 440 445 ::: c c c aac tet caa aac gtt ccg gaa aac agt gaa gat tta atg 1392 Glu Ser Phe Asn Ser Gin Lys Val Ser Glu Asn Ser Glu Asp Leu Met 4 50 455 460 aaa caa a c c cca caa ata cat tet c g g c c c aaa gat aaa get acc gat 1440 Lys GI n Ile Leu Gin Ile His Ser Trp Ala Lys Asp Lys Ala Thr Asp 4 o5 470 475 480 ata tac aac aaa cat aat tet tea cag 1467 Ile T vr Asn Lys His Asn Ser Ser
485 <210> 2 <211> 488 <212> PRT <213> Plasmodium falciparum
WO 00/17233
Λ(>
A
PCT/EP99/07055
<400> 2 Tyr Ile 5 Tyr Ile Tyr Phe ťhe 10 Phe Ile Thr Ile Thr 15 Ile Met Lys Lys .Asn Asp Leu val Ile Asn Asn Thr Ser Lys Cys Val Ser Ile Glu Arg 20 25 30 Arg Lys Asn Asn Ala Tyr Ile Asn Tyr Gly Ile Gly Tyr Asn Gly Pro 3 5 4 0 45
Ile Thr Lys Ser Arg Arg Cys
Lys Arg Ile Lys
Leu Cys c c
L vs Lys Asp Leu Ile Asp 70 Ile Gly Ala Ile Lys Lys Pro Ile Asn Val 80 1 a Ile Phe G-lV Ser Thr Gly Ser Ile Gly Thr Asn Ala Leu Asn Ile 85 90 95 Ile Are Glu Cys Asn Lys Ile Glu Asn Val Phe Asn Val Lys Ala Leu 100 105 110 7'/r Asn Lys Ser Val Asn Glu Leu Tyr Glu Gin Ala Arg Glu Phe i -J c; 120 125 _e a Pr: Glu Leu Cys Ile His Asp Lys Ser Val Tyr Glu Glu Leu 15 0 135 140 __s Gis Leu Var Lys Asn Ile Lys Asp Tyr Lys Pro Ile Ile Leu Cys i 4 D 150 155 160 G1 y Asp Glu Gly Met Lys Glu Ile Cys Ser Ser Asn Ser Ile Asp Lys 165 170 175 Ile Val Ile Gly Ile Asp Ser Phe Gin Gly Leu Tyr Ser Thr Met Tyr 130 185 190 Ala Ile Met Asn Asn Lys Ile Val Ala Leu Ala Asn Lys Glu Ser Ile 195 200 205
Ser Ala Gly Phe Phe Leu Lys Lys Leu Leu Asn Ile His Lys Asn
WO 00/17233
PCT/EP99/07055
210
215
220
_ 3 .5 Lys Ile Ile Pro Val 230 Asp Ser ; U Asp Asn Asn Lys Val Leu Lys 245 r* Lys Ile Asn Asn Ile Asn Lys 260
Glu His Ser 235 A1 a Ile Phe Gin Cys 240 Thr Lys Cys Leu Gin Asp Asn Phe 250 255 Ile Phe Leu Cys Ser Ser Gly Gly 265 270
Phe Gin Asn Leu Thr Met Asp Gin Leu Lys Asn
Val
Thr Ser Glu
280
5
’.sn Ais .uč u Lys His Pro Lys Trp Lys Met Gly Lvs Lys Ile Thr Ile 290 295 300 -.sp Ser _L a Thr .'-let Met Asn Lys Gly Leu Glu Val Tle Glu Thr His 310 315 320 ~ o Leu Ή θ Asp Val Asp Tyr Asn Asp Ile Glu Val Ile Val His Lys 325 330 335 21a C v s Ile Ile His Ser Cys Val Glu Phe Ile Asp Lys Ser Val Ile 34 0 345 350 Sar Gin 'Set Tyr Tyr Pro .Asp Met Gin Ile Pro T Leu Tyr Ser Leu 335 360 365 TU Trp ?ro Asp Arg Ile Lys Thr Asn Leu Lys Pro Leu Asp Leu Ala 370 375 380 Gin Val Ser Thr Leu Thr Phe His Lys Pro Ser Leu Glu His Phe Prc 3S5 390 395 400
Cys Ile Lys Leu Ala Tyr 405 Gin Ala Glv Ile 410 Lys Gly Asn Phe Tyr 415 Pro Thr Val Leu Asn Ala Ser Asn Glu Ile Ala Asn Asn Leu Phe Leu Asn 420 425 430
Asn Lys ile Lys Tyr Phe Asp Ile Ser Ser Ile Ile Ser Gin Val Leu
WO 00/17233 iy τ
PCT/EP99/07055
435 440 445 Glu Ser Phe Asn Ser Gin Lys Val Ser Glu Asn Ser Glu Asp Leu Met 450 455 460 Lys Gin T Ί Leu Gin Ile His Ser Trp Ala Lys Asp Lys Ala Thr Asp 4 65 470 475 480
Ile Tyr Asn Lys
His Asn Ser Ser
485 <210> 3 <211> 3872 <212> Di-JA <213> ?lasxodiu.T. falciparum <· o o n
Á z. „
CDS
220>
ggtaatatac grataarata tatataatat attcttacgt atgtatcatt tatgaatcat aataatattc taaatttacc ttccgttttt gctcgatctt cattttcg tttcagcttt
120 tatca atg att ttt aat tat gtg ttt ttt aag aac ttt gta cca gtt gtt 170
Met
Ile Phe Asn
Tyr Val Phe Phe Lys Asn Phe Val Pro Val Val o
cta tac att ctc ctt ata ata tat att aac tta aat ggc atg aat aat 218 Leu Tyr Ile Leu Leu Ile Ile Tyr Ile Asn Leu Asn Gly Met Asn Asn 20 25 30
WO 00/17233
PCT/EP99/07055
aaa aat caa ata aaa aca gaa aaa att tat ata aag aaa ttg aat agg 266 Lys Asn Gin Ile Lys Thr Glu Lys Ile Tyr Ile Lys Lys Leu Asn Arg 3 5 40 45 ttg e c a a o o aaa aat tcg tra tgt agt tet 833 SSt 333 ata gca tgc 314 Leu Ser Arg Lvs Asn Ser Leu Cys Ser Ser Lvs Asn Lys Ile Ala Cys 50 55 60 ttg ttc gat ata gga aat gat gat aat aga 83r 3 cg aca tat ggc tat 362 Len Phe Asp Ile Gly Asn Asp Asp Asn Arg Asn Thr Thr Tyr Gly Tyr 65 ‘0 - 5 aat gtg aat gtt aaa aat gat gat att aat tcc tta cta 333 aat aat 410 Asn Val Asn Val Lys A.sn Asd Asp Ile Asn Ser Leu Leu Lys Asn Asn 80 85 90 95 tat aat aat aaa ttg tac atg gat aag agg aaa aat att 331 aat Qta 458 Tyr Ser Asn Lys Leu Tyr Met Asp Lys Arg Lys Asn Ile Asn Asn Val 100 105 110 ďíí 3QC 3CC 833 ata tet ggg tcc att tea aat att tgt agt aga 506 Zle Ser Thr Asr. Lvs Ile Ser Gly Ser Ile Ser Asn Ile Cys Ser Arg 1 ]_ =. 120 125 33c C33 833 Q38 83C gaa caa 333 aga aat 333 C83 aga tgt tta act 554 Asn Gin Lys Glu Asn Glu G^n Lys Arg Asn Lys Gin Arg Cys Leu Thr 130 135 140 caa tgt cac act tat aat atg tea cat gaa cag gac aaa cta get aat 602 Gin Cys His Thr Tyr Asn Met Ser His Glu Gin Asp Lys Leu Ala Asn 145 150 155 gat aat aat aga aat aat aaa aag aat ttt aat tta tta ttt ata aat 650 Asp Asn Asn Arg Asn Asn Lys Lys Asn Phe Asn Leu Leu Phe Ile Asn 160 165 170 175
tat Tyr ttt Phe aat Asn ttg Leu aaa Lys 180 ega Arg atg Met 333 Lys aat Asn tet Ser 185 ctt Leu cta Leu aat Asn aaa Lys gac Asp 190 aat Asn tcc ttt tac tgt 333 gaa aaa 33a ttg tea ttt ctg cat aag gcc tat
746 • · • r ,fá>
WO 00/17233
X
PCT/EP99/07055
Phe Phe Tyr Cys Lys Glu Lys Lys Leu Ser Phe Leu His Lys AI a Tyr 195 200 205 SS3 333 333 čát tgc act ttt caa aat tat agt tta aaa aga aaa tet 794 Lvs Lys Lys Asn Cys Thr Phe Gin Asn Tyr Ser Leu Lys Arg Lys Ser 210 215 220 aat cgt gat cca cat aaa ttg ttt tet gga gaa ttt gac gat tat aca 842 Asn Arg Asp Ser His Lys Leu Phe Ser Gly Glu Phe Asp Asp Tyr Thr 225 230 235 33 SólC 333 CC3 tta tat gaa tcc gaa aaa aaa gaa tac att aca cta 890 Asn Asn Asn Ala Leu Tyr Glu Ser Glu Lys Lys Glu Tyr Ile Thr Leu 240 245 250 255 άαί ast aat aat aaa aat aat aat aat 336 aat □ 3t gat aat aaa aat 938 Asn Asn Asn Asn Lys Asn Asn Asn Asn Lys Asn Asn Asp Asn Lys Asn 260 265 270 aat cat aat aat gat tat aat aat aat aat agt tgt aat aat tta gga 986 Asn Asp Asn Asn Asp Tyr Asn Asn Asn Asn Ser Cys Asn Asn Leu Gly 275 280 285 cao aca tcc aat cat tat gat aat tat ggt gga gat aat aat aat cca 1034 Glu Arg Ser Asn His Tyr Asp Asn Tyr Gly Gly Asp Asn Asn Asn Pro 2 90 295 300 tgt aat aat aat aat gac 333 tat gat ata gga aaa tat ttc aaa cag 1082 Cys Asn Asn Asn Asn Asp Lys Tyr Asp Ile Gly Lys Tyr Phe Lys Gin 305 310 315 att aat acc ttt att aat att gat gaa tat aaa act ata tat ggt gat 1130 Ile Asn Thr Phe Ile Asn Ile Asp Glu Tyr Lys Thr Ile Tyr Gly Asp 320 325 330 335 gaa ata tac aaa gaa ata tat gaa cta tat gta gaa aga aat att cct 1178 Glu Ile Tyr Lys Glu Ile Tyr Glu Leu Tyr Val Glu Arg Asn Ile Pro 340 345 350 gaa tat tat gaa ega aaa tat ttt tea gaa gat att aaa aag agt gtc 1226 Glu Tyr Tyr Glu Arg Lys Tyr Phe Ser Glu Asp Ile Lys Lys Ser Val 355 360 365
WO 00/17233
PCT/EP99/07055
L· L 3 Leu ttt gat ata Phe Asp ile 370 gat Asp aaa Lys tat Tyr aat Asn 375 gat Asp gtc Val gaa ttt Glu Phe gaa Glu 380 aaa Lys get Ala ata Ile 1274 5g3 gaa gaa ttt ata aat aat gga gtt tat 3tt aat aat ata gat aat 1322 Lys Glu Glu Phe Ile Asn Asn Gly Val Tyr Ile Asn Asn Ile Asp Asn 385 390 395 3 0 3 0 3u rer 3 3 3 aaa gaa aat att tta ata atg aaa aag aca tta cat 137 0 Thr Tyr Tyr Lys Lys Glu A.sn Ile Leu Ile Met Lys Lys Ile Leu His <1 op· 405 410 415 Z 5 c ::: coa ~oa t ta aaa tta att aat aat cca tca gat tta 3 33 aag 1418 T . , Phe Pro Leu Leu Lys Leu Ile Asn Asn Pro Ser Asp Leu Lys Lys 420 425 430 ” ~ 3 333 aaa caa tat tta cct tta tta gca cat gaa tta 333 ata ttt 14 66 Leu Lys Lys Gin Tyr Leu Pro Leu Leu Ala His Glu Leu Lys Ile Phe 4 35 440 445 í e ~ z r zří ar o gta aat ata aca gga ggt cat ttt tcc tet gtt tta 1514 _eu r n e r n e _ _ e v 31 Asn Ile Thr Gly Gly His Phe Ser Ser Val Leu 4 50 455 460 i J c zzz ::a aaa a^ caa tta tta tta ttg tat att ttt aat caa cca 1562 Ser Ser Leu Glu Ile Gin Leu Leu Leu Leu Tyr Ile Phe Asn Gin Pro -c: 470 475 T 3 0 par aat gtt ata tat gat ata gga cat C33 QC3 tat gta cat aag 1610 T y r Asp Asn Val Zle Tyr Asp Ile Gly His Gin Ala Tyr Val His Lys 480 485 4 90 495 3 u 3 tta acc gga aga aaa cta tta ttt cta tca tta aga aat 333 aaa 1658 Σ ie Leu Thr Gly Arg Lys Leu Leu Phe Leu Ser Leu Arg Asn Lys Lys 500 505 510 ggc att agt gga ttC cta aat att ttt gaa agt att tat gat aaa ttt 1706 Gly Ile Ser Gly Phe Leu Asn Ile Phe Glu Ser Ile Tyr Asp Lys Phe 515 520 525
agg gct ggt
VO 00/17233 PCT/EP99/07055
Η
G1 I _a Gly 530 His Ser Ser Thr Ser 535 Leu Ser Ala Ile Gin 540 Gly Tyr Tyr aa C 2C gaq rgg :aa gtg aag aat aaa gaa aaa tat gga aat gga gat 1802 G1 r i a Glu Trp Gin Val Lys Asn Lys /-1,. uiU Lys Tyr Gly Asn Gly Asp 1 - 550 555 ar aa a“ a agr gat aac gca aat are aca aat aat gaa agg ata ttt 1850 12 iu Ile Ser Asp Asn Ala Asn Val Thr Asn Asn Glu Arg Ile Phe - 565 570 575 C 1 ia c a a ata :ac aat gat aat eeo att aac aat att aat aat 1898 3_. . /S 3 3 v Ile His Asn Asp Asn Asn Ile Asn Asn Asn Ile Asn Asn 580 585 590 Ξ ;dt -=t are aat cct tea gat gtg gta gga aga gaa aat acg aat 1946 A . ’.sn Tyr Ile Asn Pro Ser Asp Val Val Gly Arg Glu Asn Thr Asn 595 600 605 — a cca aar gta ega aat gat aac cat aac gtg gat aaa gta cac att 1994 7- - ? *O Asn Val Arg Asn Asp Asn His Asn Val Asp Lys Val His Ile ·: i U 615 620 V X acc a ~ a gga gat ggt ggt tta aca ggt gga atg gca tta gaa gcg 2042 i Ile Zle Gly Asp Gly Gly Leu Thr Gly Gly Met Ala Leu Glu Ala 6 2 Ξ 630 635 aac 33 att tea ttc ttg aat tet aaa att tta att att tat aat 2090 - Asn Tyr Ile Ser Phe Leu Asn Ser Lys Ile Leu Ile Ile Tyr Asn 4 645 650 655 -. aac yga caa gtt tet tta cca aca aat gcc gta agt ata tea ggt 2138 Asn Gly Gin Val Ser Leu Pro Thr Asn Ala Val Ser Ile Ser Gly 660 665 670 3 aga ccc ata ggt tet ata tea gat cat tta cat tat ttt gtt tet 2186 O —I Arg Pro Ile Gly Ser Ile Ser Asp His Leu His Tyr Phe Val Ser 675 680 685 - O — ata gaa gca aat get ggt gat aat aaa tta tcg aaa aat gca aaa 2234 ‘.5 1 Ile Glu Ala Asn Ala Gly Asp Asn Lys Leu Ser Lys Asn Ala Lys
690 695 700
WO 00/17233
PCT/EP99/07055
gag ááE 3SC a. t t t1 C gaa aat ttg aat tat gat tat att ggt gtt gtg 2282 Glu Asn Asn Ile Phe Glu Asn Leu Asn Tyr Asp Tyr Ile Gly Val Val 705 710 715 a a t ggt aat aat aca gaa gag ctc ttt aaa gta tta aat aat ata 333 2330 Asn Gly Asn Asn Thr Glu Glu Leu Phe Lys Val Leu Asn Asn Ile Lys 720 725 '30 735 ga a aaa aaa aaa aaa aga get act gtt ctt cat gta cgt aca a 3.3 333 2378 Glu Asn lys Leu Lys Arg AI a Thr Val Leu His Arg Thr Lvs Lys ^40 ^45 750 zcg aaa aaa aaa aca aat tea aag agt cca aca agt ata ttg cac tet 2426 £5 r Asn Asp Phe Ile Asn Ser Lys Ser Pro Ile Ser Ile Leu His Ser '55 760 765 a a a aaa aaa aaa aag att ttc cct ttc gat acc act ata tta aat gga 2474 Ile Lys Lys Asn Glu Ile Phe Pro Phe Asp Thr Thr Ile Leu Asn Gly 70 775 780 a a a att cat aag gaa aac aag at 3 gaa gaa gag aaa aat gtg tet tea 2522 Asn Ile His Lys Glu .Asn Lys Ile Glu Glu Glu Lys Asn Val Ser Ser 78 5 790 795 aaa aca aag tat gat gta a3t aac aag aat aat aaa aat aat gat 3at 2570 S-r Thr Lys Tyr Asp Val Asn Asn Lys Asn Asn Lvs Asn Asn Asp Asn 800 805 810 815 aga aaa are aaa aaa tat gaa gat atg ttt tea aaa gag acg ttc aca 2618 Ser Glu Ile Ile Lys Tyr Glu Asp Met Phe Ser Lys Glu Thr Phe Thr 820 825 830 gat ata tat aca aat gaa atg tta aaa tat tta aag aaa gat aga aat 2666 Asp Ile Tyr Thr Asn Glu Met Leu Lys Tyr Leu Lys Lys Asp Arg Asn 835 840 845 aaa ata ttc cta tet ccc get atg tta gga gga t ca gga ttg gtt aaa 2714 Ile Ile Phe Leu Ser Pro Ala Met Leu Gly Gly Ser Gly Leu Val Lys 850 855 860 aat agt gag cat tat cca aat aat gta tat gat gta ggt ata gca gaa 2762
WO 00/17233
PCT/EP99/0705S • · «·«· ·« • · · · · · • · · · · • · · · · · ·· ·· · · ·
Ile Ser Glu 865 Arg Tyr Pro Asn 870 Asn Val Tyr Asp Val 875 Gly Ile Ala Glu Caa car tet gta act ttc gca gca get atg gca a t g aat aag aaa tta 2810 Gin His Ser Val Thr Phe Ala Ala Ala Met Ala Met Asn Lys Lys Leu 880 885 890 895 aaa ata caa tta tgt ata tat tcg acc ttt tta caa aga gca tat gat 2858 Lys Ile Gin Leu Cys Ile Tyr Ser Thr Phe Leu Gin Arg Ala Tyr Asp 900 905 910 caa a c c a c a c a c. cat ctt aat tta caa aat ata cct tta aag gtt ata 2906 Gin I _ a _ Λ His Asp Leu Asn Leu Gin Asn Ile Pro Leu Lys Val Ile 915 920 925 att gga aga agc ega tta gta gqa gag gat ggg gca aca cat caa ggt 2954 I_e Gly Arg Ser Gly Leu Val Gly Glu Asp Gly A ' -J Thr His Gin Gly “SC 935 940 s w. d c=: =ar tta tet tat ctt ggg aca ctt aac aat gca tat ata ata 3002 Ile Tyr Asp Leu Ser Tyr Leu Gly Thr Leu Asn Asn Ala Tyr Ile Ile 5 950 955 ::: Ξ aac caa gtt gat ttg aaa aga get ctt agg ttt get tat 3050 Ser Ir: Ser Asn Gin Val Asp Leu Lys Arg Ala Leu Arg Phe Ala Tyr 960 965 970 975 t c a cac aac gac cat tet gtg tat ata cgt ata ccc aga atg aac ata 3098 Leu Asp Lys Asc His Ser Val Tyr Ile Arg Ile Pro Arg Met Asn Ile 980 985 990 cca agc gat aac tac atg aaa gga tat ttg aac att cat atg aaa aat 3146 Leu Ser Asp Lys Tyr Met Lys Gly Tyr Leu Asn Ile His Met Lys Asn 995 1000 1005 gag agc aaa aat atc gat gta aac gtg gat ata aac gat gat gta gat 3194 Glu Ser Lys Asn Ile Asp Val Asn Val Asp Ile Asn Asp Asp Val Asp 1010 1015 1020 aaa tat agt gaa gaa tat atg gac gat gat aat ttt ata aaa tcg ttt 3242 Lys Tyr Ser Glu Glu Tyr Met Asp Asp Asp Asn Phe Ile Lys Ser Phe
1030
1025
1035
WO 00/17233
PCT/EP99/07055
aít gga aaa tet aga att att aaa atg gat aat gáa aat aat aat aca 3290 Ile Gly Lys Ser Arg Ile Ile Lys Met Asp Asn Glu Asn Asn Asn Thr 1040 1045 1050 1055 aSL gaa car tat tea age aga gga gat aca cag aca 333 aaa aaa aaa 3338 Asn ulu His Tyr Ser Ser Arg Gly Asp Thr Gin Thr Lys Lys Lys Lys 1060 1065 1070 Ctt tat atc ttt aac atg ggt agt atg ctt ttt GČt gta att aat act 3386 Val Cys Ile Phe Asn Met Gly Ser Met Leu Phe Asn Val· Ile Asn Ala 1075 1080 ] .085 čí c aaa gaa att gaa aaa gaa caa tat att tea cat 331 tat tet ttt 3434 Ile Lys Glu Ile Glu Lys Glu Gin Tyr Ile Ser His Asn Tyr Ser Phe .090 1095 * .100 t Cg att ctt gat atg ata ttt tta aat cct tta gat aaa aat atg ata 3482 Ser Ile Val Asp Met Ile Phe Leu Asn Pro Leu Asp Lys Asn Met Ile 1 105 1110 1115
gat cat 0'3 ata aaa caa aat aaa cat caa tat tta att act tat gaa 3530 ..O o His Val· Ile Lys Gin Asn Lys His Gin Tyr Len Ile Thr Tyr Glu ' · —i n 1125 1130 1135 cat 33 3 3C 3 ata ggt ggt ttt tet aca cat ttc aat aat tat tta ata 3578 Asp As n Thr Ile Gly Gly Phe Ser Thr His Phe Asn Asn Tyr Leu Ile *· .140 1145 1150 033 33 C aat tat att aca aaa cat aac tta tat gtt cat aat att tat 3626 Glu Asn Asn Tyr Ile Thr Lys His Asn Leu Tyr Val His Asn Ile Tyr 1 .155 1160 1165 tta tet aat gag cca att gaa cat gca tet ttt 33^ gat caa caa gaa 3674 Leu Ser Asn Glu Pro Ile Glu His Ala Ser Phe Lys Asp Gin Gin Glu 1170 1175 1180 atc qtc 333 atg gat aaa tgt agt ctt atc aat aga att aaa aat tat 3722 Val Val Lys Met Asp Lys Cys Ser Leu Val Asn Arg Ile Lys Asn Tyr
1185 1190 1195 c:: aaa aat aat cct aca tgatgtaaga taaatatata tttctaaaat
3770
u * ♦· «···«· »f a * ♦ * ·♦ · v a a a ··♦· · * · · ·· «···»· a a a a « • *· ·· ·♦ ·· «· · ·« WO 00/17233 rs PCT/EP99/07055 Leu Lys Asn Asn Pro Thr 1200 1205
tatttttttt ttatacttta atgtgtacaa taaaatatat atctaaatat attttatttg 3830 tacgcttttt tttttttttt tttaattgtt atttttgtat at
3872 <210> 4 <211> 1205 <212> PST <213> Plasmodiu- falciparum <400> 4
i*‘e 1 - Phe Asn Tyr Val Phe Phe Lys Asn Phe Val Pro Val Val Leu 5 10 15 C-.-r Ile Leu Leu Ile Ile Tyr Ile Asn Leu Asn Gly Met Asn Asn Lys 2C 25 30 L ~ ΓΊ Gin 1 l·3 Lvs Thr Glu Lys Ile Tyr Ile Lys Lys Leu Asn Arg Leu 55 40 45 Ser -ys Asn Ser Leu Cys Ser Ser Lys Asn Lys Ile Ala Cys Leu 51 55 60 Phe ~ r “ l o Gly Asn Asp Asp Asn Arg Asn Thr Thr Tyr Gly Tyr Asn 65 70 75 80 ' · - 1 7 G ± Aer. 5 či i. Lys Asn Asp Asp Ile Asn Ser Leu Leu Lys Asn Asn Tyr 85 90 95 Ser Asn Lys Leu Tyr Met Asp Lys Arg Lys Asn Ile Asn Asn Val Ile 100 105 110 Ser Thr Asn Lys Ile Ser Gly Ser Ile Ser Asn Ile Cys Ser Arg Asn 115 120 125 Gin Lys Glu Asn Glu Gin Lys Arg Asn Lys Gin Arg Cys Leu Thr Gin 130 135 140
Cys His Thr Tyr Asn Met Ser His Glu Gin Asp Lys Leu Ala Asn Asp
XV < C '17233
145 150 Asn Asr 7 g Asn Asn 165 Lys Lys Asn Phe Asr eu Lys 180 Arg Met Lys Asn Phe Ty /s 35 Lys Glu Lys Lys Leu 200 Lys L y s n O 1 c. 4. Cys Thr Phe Gin O 1 c Asn Arg 225 Af 61 His Lys Leu 230 Phe Ser Asn A. . -.la Leu Tyr 245 Glu Ser Glu Asn A i Asn Lys 260 Asn Asn Asn Asn Asp r Asn 275 Asp Tyr Asn Asn Asn 280 I >- ,-r . í Asn His Tyr Asp Asn 295 Tyr Asn 305 Asn Asn Asp Lys 310 Tvr Asp Asn h Phe Ile Asn 325 Ile Asp Glu Ile r Lys Glu 340 Zle Tyr Glu Leu Tyr I t Glu 355 Arg Lys Tyr Phe Ser 360
• • · • • • ·· • ··· * 9 » 9 • « · • »* ···· ·» · « · · « ·· • · · · · * · · · ♦ f • · · · < · •FA 9 4 • · · 1 »· ·· «· ··· PCT/EP99/07055 K 155 160 Asn Leu Leu Phe Ile Asn Tyr 170 175 Leu Leu Asn Lys Asp Asn Phe 190 Phe Leu His Lys Ala Tyr Lys 205 Ser Leu Lys Arg Lys Ser Asn 220 Glu Phe Asp Asp Tyr Thr Asn 235 240 Lys Glu Tyr Ile Thr Leu Asn
250 255
Asn Asn Asp Asn Lys Asn Asn
270
Ser Cys Asn Asn 285 Leu Gly Glu Gly Asp Asn 300 Asn Asn Pro Cys Gly Lys 315 Tyr Phe Lys Gin Ile 320 Lys 330 Thr Ile Tyr Gly Asp 335 Glu Val Glu Arg Asn Ile 350 Pro Glu Asp Ile Lys Lys 365 Ser Val Leu
Ph A'p Ile Asp Lys Tyr Asn Asp Val Glu Phe Glu Lys Ala Ile Lys • · · ······ ·· · ··· · · · ···· ···· ·· · » · · • · ·«· · ··· · · • · · · · · · ·· · ··· · · *· ·· ·· ···
PCT/EP99/07055
WO 00/17233
370
375
Μ7
N
380
Glu 385 Glu Phe Ile Asn Asn 390 Gly Val Tyr Ile Asn 395 Asn Ile Asp Asn Thr 400 Tvr Tyr Lys Lys Glu Asn Ile Leu Ile Met Lys Lys Ile Leu His Tyr 405 410 415 Phe Pro Leu Leu Lys Leu Ile Asn Asn Pro Ser Asp Leu Lys Lys Leu 420 425 430 Lys Lys Gin Tyr Leu Pro Leu Leu Ala His Glu Leu Lys Ile Phe Leu -i 3 5 440 445
Phe Phe
Ile Val Asn Ile Thr Gly Gly His
Phe Ser Ser Val
Leu Ser
450
455
460
Ser 4 65 Leu ůiU Ile Gin Leu 470 Leu Leu Leu Tyr x 2. s 475 Phe Asn Gin Pro Tyr 480 Asp Asn v d 1 Ile Tyr Asp Ile a 1 y His Gin Ala Tyr Val His Lys Ile 485 490 495 Leu Thr x y Aru Lys Leu Leu Phe Leu Ser Leu Arg Asn Lys Lys Gly 500 505 510 ] Λ Ser Gly Phe Leu Asn Ile Phe Glu Ser Ile Tyr Asp Lys Phe Gly 515 520 525 AI e Gly His Ser Ser Thr Ser Leu Ser Ala Ile Gin Gly Tyr Tyr Glu 530 535 540 e Glu Trp Gin Val Lys Asn Lys Glu Lys Tyr Gly Asn Gly Asp Ile 14 5 550 555 560 G _ u Ile Ser Asp Asn Ala Asn Val Thr Asn Asn Glu Arg Ile Phe Gin 565 570 575 Lys Gly Ile His Asn Asp Asn Asn Ile Asn Asn Asn Ile Asn Asn Asn 580 585 590
Asn Tyr Ile Asn Pro Ser Asp Val Val Gly Arg Glu Asn Thr Asn Val
WO 00/17233
595
τη ·· ·· ·· ··· PCT/EP99/07055 Γ8 600 605
Asn 610 Val Arg Asn Asp Asn His Asn 615 Val Asp Lys 620 Val His Ile Ala Zle Ile Gly Asp Gly Gly Leu Thr Gly Gly Met Ala Leu Glu Ala Leu 625 630 635 640 Asn Tyr Ile Ser Phe Leu Asn Ser Lys Ile Leu Ile Ile Tyr Asn Asp 64 5 650 655
ASO. Gly Gin Val Ser 6 60 Leu Pro Thr Asn 665 Ala Val Ser Z L e Ser 670 Gly Asn Azr o Pro Ile Gly Ser Ile S 5 r Asp His Leu His Tyr Phe Val Ser Asn 67 5 680 685 Zle Glu A*± a A.sr. Ala Gly Asp Asn Lys Leu Ser Lys Asn Ala Lys Glu 690 695 700 Asn Ile Phe Glu Asn Leu Asn Tyr Asp Tyr Ile Gly Val Val Asn 705 710 715 720 Gly Asn Asn Thr Glu Glu Leu Phe Lys Val Leu Asn Asn Ile Lys Glu 725 730 735 Asn Lys Leu Lys Arg Ala Thr Val Leu His Val Arg Thr Lys Lys Ser 740 745 750 .Asn Asp Phe Ile Asn Ser Lys Ser Pro Ile Ser Ile Leu His Ser Ile 755 760 765 Lys Lys Asn Glu Ile Phe Pro Phe Asp Thr Thr Ile Leu Asn Gly Asn 770 775 780 rle His Lys Glu Asn Lys Ile Glu Glu Glu Lys Asn Val Ser Ser Ser 785 790 795 800 Thr Lys Tyr Asp Val Asn Asn Lys Asn Asn Lys Asn Asn Asp Asn Ser 805 810 815
Glu Ile Ile Lys Tyr Glu Asp Met Phe Ser Lys Glu Thr Phe Thr Asp
WO 00/17233
820
825 ··· ·· ·· ·· «· ···
PCT/EP99/07055
830
Ile Tyr Thr 835 Asn Glu Met Leu Lys 840 Tyr Leu Lys Lys Asp 845 Arg Asn Ile Zle yhe Leu Ser Pro Ala Met Leu Gly Gly Ser Gly Leu Val Lys U_e 350 855 860 Ser Glu Arg Tyr Pro Asn Asn Val Tyr Asp Val Gly Ile Ala Glu Gin £ 6 3 870 875 880
Ser Val T h »“ Phe 885 Ala Ala Ala Met Ala 890 Met Asn Lys Lys Leu 895 Lys Ole ol?. Leu Cys Ile Tyr Ser Thr Phe Leu Gin Arg Ala Tyr Asp Gin 900 905 910 Ole 11- His Asp Leu Asn Leu Gin Asn Ile Pro Leu Lys Val Ile Ile 915 920 925 j. v Arg Ser Gly Leu Val Gly Glu Asp Gly Ala Thr His Gin Gly Ile 930 935 940 Tvr Ásc -cU Ser Tyr Leu Gly Thr Leu Asn Asn Ala Tyr Ile Ile Ser 945 950 955 960 Pro e r Asn Gin Val Asp Leu Lys Arg Ala Leu Arg Phe Ala Tyr Leu 965 970 975 Asp Lys Asp His Ser Val Tyr Ile Arg Ile Pro Arg Met Asn Ile Leu 980 985 990 Ser Asp Lys Tyr Met Lys Gly Tyt Leu Asn Ile His Met Lys Asn Glu
995 1000 1005
Ser Lys 1010 Asn Ile Asp Val Asn 1015 Val Asp Ile Asn Asp 1020 Asp Val Asp Lys Tyr Ser Glu Glu Tyr Met Asp Asp Asp Asn Phe Ile Lys Ser Phe Ile
025 1030 1035 1040
Gly Lys Ser Arg Ile Ile Lys Met Asp Asn Glu Asn Asn Asn Thr Asn
V) • · · ·
WO 00/17233
1045
PCT/EP99/07055
1050
1055
Glu His Tyr Ser Ser Arg Gly Asp Thr Gin Thr Lys Lys Lys Lys Val 1060 1065 1070 Cys Ile Phe Asn Met Gly Ser Met Leu Phe Asn Val Ile Asn Ala Ile 1075 1080 1085 Lys Glu Ile Glu Lys Glu Gin Tyr Ile Ser His Asn Tyr Ser Phe Ser 1090 7 .095 1100 Σ1 θ Val Asp Met Ile Phe Leu Asn Pro Leu Asp Lys Asn Met Ile Asp 105 1110 1 .115 1120 His Val Ile Lys Gin Asn Lys His Gin Tyr Leu Ile Thr Tyr Glu Asp 7 Ί O C 130 i .135
Asn Thr Ile Gly 1140 Gly Phe S a r His 1145 Phe Asn Asn Tyr Leu 1150 Ile Glu .Asn A.sn Tyr Ile Thr Lys His Asn Leu Tyr Val His Asn Ile Tyr Leu 1155 1160 1165 C o v A.s n Glu Prc Ile Glu His Ala Ser Phe Lys Asp Gin Gin Glu Val 117 0 7 175 1180 Val Lys Met Asp Lys Cys Ser Leu Val Asn Arg Ile Lys Asn Tyr Leu
185 1190 1195 1200
1205
<210> 5 < 211 > 3147 <212> DNA <213> Plasmodiu.t falciparum
<220>
<221> CDS <222> (199) . . (2Ó70)
PCT/EP99/07055
WOO< 1 133 <400> 5
tttcatttt : rtttacccac atatatatat atatatatat aatatatata tataatatta 60 tatatrtg. . statgattta aaattgtaac ataaaaaaaa taattatatt aaatatgtgt 120
atacatct ; aacatataaa tattattttt tattattatt tttttttttt tttttcataa 180 tgcctgaa a accacaaa atg aat tát ata aaa aga ctg att ctt ttt atg 231 Met Ser Tyr Ile Lys Arg Leu Ile Leu Phe Met 1 ς 10 11 a c t g t t at zet cat gta aáa att aaa aaa tta ttt att S33 att 279 Leu Leu l : Tyr Ser His Val Lys Ile Lys Lys Leu Phe Ile Lys Ile 15 20 25 w3Σ. ČCL Π a aac ata ttt ttt gca gaa gca aag aaa aat gga aaa aag 327 S θ r Asn Asn Ile Phe Phe Ala Glu Ala Lys Lys Asn Gly Lys Lys 35 40 Úác t Σ C C ctt ttt tta cta aat ata aaa aaa aat age caa cag aaa 375 Qlj ?r.e Ξ Leu Phe Leu Leu Asn Ile Lys Lys Asn Ser Gin Gin Lys - Σ 50 55 3 0Σ L t cat att acc aaa agg aat acc ata aat aaa agt gat ttt 423 l y s T n r r His Ile Thr Lvs Arg Asn Thr Ile Asn Lys Ser Asp Phe 60 65 70 75 Σ Σ 3 Í5ΐ 1 •r tta cta aat gaa gaa ggg aat tet tea aaa aag gaa tat 471 Leu Ty: : ;r Leu Leu Asn Glu Glu Gly Asn Ser Ser Lys Lys Glu Tyr 80 85 90 aaa aa t :a aaa gat gaa gaa aaa tat aat atc ata caa aat ata aaa 519 Lys As 1 ,u Lys Asp Glu Glu Lys Tyr Asn Ile Ile Gin Asn Ile Lys 95 100 105 aaa ta . 3t gaa tgt act aaa aaa tat aaa agg ctc cca aca ega gaa 567 Lys Ty ys Glu Cys Thr Lys Lys Tyr Lys Arg Leu Pro Thr Arg Glu 10 115 120 gta gt tt gga aat gtt aaa att gga gga aat aat aaa ata get att 615 Val Va le Gly Asn Val Lys Ile Gly Gly Asn Asn Lys Ile Ala Ile
Λ . Z} ···· ·· · ·· · 1 ····· ·· ·· ·· ··· WO 00/17233 PCT/EP99/07055 125 130 135
C3ó aCt Glr. Thr 14 0 acg Met ger Ala age Ser tgt Cys 145 gat Asp aca Thr aga Arg aat Asn gta Val 150 gaa Glu gaa Glu tgt Cys gta Val tat Tyr 155 663 caa att aga aaa tgt aaa gat ttg ggt get gac att gta agg ttg act 711 Gin Ile Arg Lys Cys Lys Asp Leu Gly Ala Asp Zle Val Arg Leu Thr 160 165 170 gtt :aa gga get caa gaa gca caa get agt tat cat att aaa gaa aaa 759 Val Gin Gly V a 1 Gin Glu Ala Gin AI a Ser Tyr Η Ί· s Ile Lys Glu Lys 175 180 185 tta tta tet gaa aat gta ααί atc cca tta gta gca gat att cat ttt 807 Leu Leu Ser Glu Asn Val Asn Zle Pro Leu Val .-*1 a Asp Ile His Phe 190 1 95 200 aaí cct 683 aca get tta atg gca get gat gtg tr- gaa aaa att ega 855 Asn Pro Lvs Zle AI a Leu Met a Ala Asp Val pné Glu Lys Ile Arg 205 210 215 gtg aat cca gga aat tat gtt gat gga aga aaa aaa tgg ata gat aaa 903 Val Asn Pro Gly Asn Tyr Val Asp Gly Arg Lys Lys Trp Ile Asp Lys 7 n 225 230 235 att tat 23a act aaa gaa gaa ttt gac gaa ggg aaa tta ttt ata aaa 951 Val Tyr Lys Thr Lys Glu Glu Phe Asp Glu Gly Lys Leu Phe Ile Lys 240 245 250 gaa aaa ttt gta cca tta att gaa aaa tgt 3 33 aga tta aat aga gca 999 Glu Lys Phe Val Pro Leu Ile Glu Lys Cys Lys Arg Leu Asn Arg Ala 255 260 265 ata aga att gga aca aat cat gga tcc ctt tea tet ega gta tta tea 1047 Ile Arg Ile Gly Thr Asn His Gly Ser Leu Ser Ser Arg Val Leu Ser 270 275 280 tat cat gga gat aca cca tta ggt atg gta gaa tcg get ttt gag ttt 1095 Tyr Tyr Gly Asp Thr Pro Leu Gly Met Val Glu Ser Ala Phe Glu Phe
285 290 295 » ····· ·· ·· ·· ··· τγ
WO 00/17233 PCT/EP99/07OSS
Ž5·
tet gat tta tat att gaa aac aat ttt tac aat ctt gtt ttt tet atg 1143 Ser Asp Leu Cys Ile Glu Asn Asn Phe Tyr Asn Leu Val Phe Ser Met 300 305 310 315 aaa get tet aat get tat gtt atg ata caa tet tat aga tta tta gta 1191 Lys Ala Ser Asn Ala Tyr Val Met Ile Gin Ser Tyr Arg Leu Leu Val 320 325 330 teč αα3 caa ta’ gaa aga aat atg atg ttc cct ata cat tta gga gtt 1239 Ser Lys Gin Tyr Glu Arg Asn Met Met Phe Pro Ile His Leu Gly Val 335 340 345 aca gaa gca aga ttt gat gat aat gga aga ata aaa tet tat tta ggt 1287 Thr Glu Ala Gly Phe Gly Asp Asn Gly Arg Ile Lys Ser Tyr Leu Gly 350 355 360 ata gga tet tta tta tat gat ggt ata gga gat acc att cgt ata tcc 1535 lie Gly Ser Leu Leu Tyr Asp Gly Ile Gly Asp Thr Ile Arg Ile Ser 3 65 370 375 tta aca gaa gat cct tgg gaa gag tta act cct tgt aaa aaa tta gtt 1383 Leu Ir.r Glu Asp Pro Trp Glu Glu Leu Thr Pro Cys Lys Lys Leu Val 2SC 385 390 395 gaa aat tta aac aaa aga ata ttt tat aat gaa aat ttt aaa gaa gat 1431 Glu A=r. Leu Lvs Lvs Ara Ile Phe Tyr Asn Glu Asn Phe Lys Glu Asp 400 405 410 a g l - a a - _ a a č š 3 31 3 31 aaa atg gat acc aaa aat cta tta aat ttt 1479 Asn Glu Leu Lys Asn Asn Glu Met Asp Thr Lys Asn Leu Leu Asn Phe 415 420 425 gaa gaa aat tat ega aat ttt aat aat ata aaa aaa aga aat gta gaa 1527 Glu Glu Asn Tyr Arg Asn Phe Asn Asn Ile Lys Lys Arg Asn Val Glu 430 435 440 aaa aat aat aat gta tta cat gaa gag tgc act ata ggt aat gta gta ' 1575 Lys Asn Asn Asn Val Leu His Glu Glu Cys Thr Ile Gly Asn Val Val 445 450 455 acc ata aaa gag tta gaa gat tet ctg caa att ttt aaa gat tta aat 1623 Thr Ile Lys Glu Leu Glu Asp Ser Leu Gin Ile Phe Lys Asp Leu Asn
WO 00/17233
PCT/EP99/07055
460
465 ir
470 475
tta Leu gaa gta gat Glu Val Asp tea Ser 480 aat Asn gga Gly aat Asn ttg Leu aaa Lys 485 aag Lys gga Gly gcc Ala aaa Lys aca Thr 490 act Thr 1671 aat atg gtt att ata aat gat ttt cat aat ata aca aat tta gga aaa 1719 Asp Met Val Ile Ile Asn Asp Phe His Asn Ile Thr Asn Leu Gly Lys 495 500 505 a a a act gtg gat aaa tta atg caa gtg gga att aat ata gta gtt caa 1767 — y s Thr Val Asp Lys Leu Mp £ Gin Val Gly Ile Asn Ile Val Val Gin 510 515 520 tat gaa cca cat aat ata gaa ttt ata gaa aaa atg gaa cca aat aat 1815 T y r Glu Pro His Asn Ile Glu Phe Ile Glu Lys Met Glu Pro Asn Asn : ~ c 530 535 gat aat aat aat aat aat aat aat aat aat ata tta ttt tat gtg gat 1863 Asp Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Ile Leu Phe Tyr Val Asp 540 545 550 555 čta aaa aat att atg agt tea 233 a33 38t att aaa tta agt aat 1911 :ie Lys Asn Ile Met Asn Ser Ser Glu Lys Asn Ile Lys Leu Ser Asn 560 565 570 tet aaa gga tat gga L u3 att tta aac gga aaa gaa gat ata caa acc 1959 o v Lys Gly Tyr Gly Leu Zle Leu Asn Gly Lys Glu Asp Ile Gin Thr 575 580 585 ata aaa aaa ata aaa gaa tta aat cgt cgt cct tta ttc att cta tta 2007 Zle Lys Lys Ile Lys Glu Leu Asn Arg Arg Pro Leu Phe Ile Leu Leu 590 595 600 aaa tea gat aac ata tat gaa cat gta tta ata acc aga aga att aat 2055 Lvs Ser Asp Asn Ile Tyr Glu His Val Leu Ile Thr Arg Arg Ile Asn 605 610 615 gaa ctt tta caa tcc tta aat ata aat ata cct tat ata cat tat gtt 2103 Glu Leu Leu Gin Ser Leu Asn Ile Asn Ile Pro Tyr Ile His Tyr Val 620 625 630 635
WO 00/17233 PCT/EP99/07055
gat att aat tea aac aat tat gat gat ata tta gtt aat tea aca tta 2151 Asp Ile Asn Ser Asn Asn Tyr Asp Asp Ile Leu Val Asn Ser Thr Leu 640 645 650 tat gca gga agt tgt ttg atg gat tta atg ggg gat ggt ctt att gtt 2199 Tyr Ala Gly Ser Cys Leu Met Asp Leu Met Gly Asp Gly Leu Ile Val 655 660 665 aac gta aer aat gat gtt ctt aca aat aaa aaa aag ata gaa aca aaa 2247 Asn Val Thr Asn Asp Val Leu Thr Asn Lys Lys Lys Ile Glu Thr Lys 670 675 680 o 3 l □ a a aaa gaa gaa gta gag aaa gag gga aac aat aaa gat att 2295 Tyr Asp Glu Lys Glu Glu Val Glu Glu Glu Gly Asn Asn Lys Asp Ile 685 690 695 cat aga ctt ttg age aga gtt gca tta aat tea ttt tta aca tta aat 234 3 His Arg Leu Leu Ser Arg Val Ala Leu Asn Ser Phe Leu Thr Leu Asn 700 705 710 715 att tta caa gat aca aga ata cgt tta ttt 333 aca gat tat ata gcc 2391 Ile l.eu Gin Asp Thr Arg Ile Arg Leu Phe Lys Thr Asp Tyr Ile Ala 720 725 730 -gc c:= tet tgt gga aga act tta ttt aat ata caa gaa act act aaa 2439 Cys Pro Ser Cys Gly Arg Thr Leu Phe Asn Ile Gin Glu Thr Thr Lys 735 740 745 333 att arg aaa tta aca ggg cac tta aaa ggc gtt aaa att gca gtc 2487 lys Ile Met Lys Leu Thr Gly His Leu Lys Gly Val Lys Ile Ala Val 750 755 760 atg gga tgt att gtt aat ggt ata gga gaa atg gca gat gca cat ttt 2535 Met Gly Cys Ile Val Asn Gly Ile Gly Glu Met Ala Asp Ala His Phe 765 770 775 ggt tat gtt ggt agt gca cct aaa aaa att gat tta tat tat ggt aaa 2583 Gly Tyr Val Gly Ser Ala Pro Lys Lys Ile Asp Leu Tyr Tyr Gly Lys 780 785 790 795 gag tta gta gaa aga aat ata cct gag gaa gaa get tgt gat aaa ttg 2631 Glu Leu Val Glu Arg Asn Ile Pro Glu Glu Glu Ala Cys Asp Lys Leu
w • 9 9 99*999 · · 9 • * 9 9· 9 9999 •999 · ♦ · · · · 99 ··· * 999 9 * • 99 99 ·♦ ·· ·· ·*· WO 00/172: i PCT/EP99/07055 300 805 21» 810 ata gaa tta a a aaa aaa cat aac aaa tgg aaa gat cca taaattgaat 2680 Ile Glu Leu 2 a Lys Lys His Asn Lys Trp Lys Asp Pro 3 820
atggacaagt a:-t :ttat ttatctacct taratataat atattataaa tttttcgarg 2740 tattttccct t í aattt tatttttttt trattttttt ttttgaagta acatttacaa 2800 rgcacacata a t aaaat gtgtactata taataatatc actttattgt tattttaaaa 2860 cactaacacc a icaart ttttaataat cattcttata acttgttaaa tatatatata 2920 catacacata z' z a 111 a tctacatcta tatttattta tttttggtat ataaaaagta 2980 ědádLaLCa; t taaaag úattcacaaa ataaataata ttatatatct gtttttatat 3040 acatgtcaac ja-aaggag aaaacaaata aataaaacaa acaaaataac atatatatat 3100 atatatatat ct gaatgag aaagaaaaaa aaaagaaaag gatacaa 3147
<210> 6 <211> 824 <212> PRT <213> Plasn. i.um falciparum < 4 O O > 6
‘•‘et 1 C o Ty: a Lvs 5 Arg Leu Ile Leu Phe 10 Met Leu Leu Phe Tyr 15 Ser Lůs Val L v a Lys Lys Leu Phe Ile Lys Ile Ser Asn Val Asn Ile :o 25 30 Phe A L L u Ala Lys Lys Asn Gly Lys Lys Glu Phe Phe Leu Phe 40 45 Leu Leu As ie Lys Lys Asn Ser Gin Gin Lys Lys Thr Tyr His Ile 50 55 60 Tnr Lys A: .sn Thr Ile Asn Lys Ser Asp Phe Leu Tyr Ser Leu Leu
WO 00/17233
PCT/EP99/07055
Asn Glu Glu Gly Asn 85 Ser Ser Lys Lys Glu 90 Tyr Lys Asn Leu Lys 95 Asp Glu Glu Lys i v Σ Asn Ile Ile Gin Asn ile Lys Lys Tyr Cys Glu Cys 100 105 110 Thr Lys Lys Tyr Lys Arg Leu Pro Thr Arg Glu Val Val Ile Gly Asn 115 120 125
Val Lys ile Gly Gly Asn Asn Lys
Ile Ala Ile Gin Thr Met Ala Ser
135
140
ys Asp Λ C i -U Thr Arg Asn Val 150 Glu Glu Cys Val Tyr Gin Ile Arg 155 Lys Cys 160 ys Asp Leu Gly Ala Asp Ile Val Arg Leu Thr Val Gin Gly Val Gin 165 170 175
Glu Ala Gin Ala Ser Tyr His Ile Lys Glu Lys Leu Leu Ser Glu Asn 180 18 5 190 Asn Ile Pro Leu Val Ala Asp Ile His Phe Asn Pro Lys Ile Ala 195 200 205 Leu Met Ala Ala Asp Val Phe Glu Lys Ile Arg Val Asn Pro Gly Asn 210 215 220 T ♦ .· r· Val Asp Gly Arg Lys Lys Trp Ile Asp Lys Val Tyr Lys Thr Lys 225 230 235 240 Glu Glu Phe Asp Glu Gly Lys Leu Phe Ile Lys Glu Lys Phe Val Pro 245 250 255 Leu Ile Glu Lys Cys Lys Arg Leu Asn Arg Ala Ile Arg Ile Gly Thr 260 265 270 Asn His Gly Ser Leu Ser Ser Arg Val Leu Ser Tyr Tyr Gly Asp Thr 275 280 285
Pro Leu Gly Met Val Glu Ser Ala Phe Glu Phe Ser Asp Leu Cys Ile « « 4 · <
* · · r » · · ·· «Μ* · * ··· • « 4 4 9 * ···*
4 4 9 4 · · *· •4949 ·· ·· ···
WO 00/17233
290
295
4 ··<
··· · ♦ • · ·
wf» •« •* *· • 9
WO 00/17233
PCT/EP99/07055
515
520
525
Ile Glu Phe ile Glu Lys Met Glu Pro Asn Asn Asp Asn Asn Asn Asn 530 ε ί ε 54 0 Asn Asn Asn Asn Asn Ile Leu Phe Tyr Val Asp Ile Lys Asn Ile Met 545 550 555 560 Asn Ser Ser Glu Lys Asn τίβ Lys Leu Ser Asn Ser Lys Gly Tyr Gly 5 65 570 575 Leu T 1 _ Leu As n Gly Lys Glu Asp Ile Gin Thr ~ ' Cl Lys Lys Ile Lys 580 585 590
Glu Leu Asn 595 Arg Arg Pro Leu Phe 600 Ile Leu Leu Lys Ser 605 Asp Asn Ile Tyr Glu His Val Leu Ile Thr Arg Arg Ile Asn Glu Leu Leu Gin Ser 610 615 620
Leu Asn Ile Asn Ile
Pro Tvr Ile
His Tyr Val Asp Ile Asn Ser Asn
5
630
635
640
Asn Tyr Asp Asp Tle Leu i' - ; Asn Ser Thr Leu _ vr Ala Gly Ser Cys 64 5 650 655 Leu Met Asp Leu Met Gly ASD Gly Leu Ile Val Asn Val Thr Asn Asp 660 665 670 . 3 - Leu Thr Asn lys Lys Li V S Ile Glu Thr Lys Tyr Asp Glu Lys Glu 675 680 685 Glu Val Glu Glu Glu Gly Asn Asn Lys Asp Ile Eis Arg Leu Leu Ser 690 695 700 Arg Val Ala Leu .-sn Ser Phe Leu Thr Leu Asn Ile Leu Gin Asp Thr 705 710 715 720 Arg Ile Arg Leu Phe Lys Thr Asp Tyr Ile Ala Cys Pro Ser Cys Gly '25 730 735
Arg Thr Leu Phe Asn Ile Gin Glu Thr Thr Lys Lys Ile Met Lys Leu
CZ2001990A 1998-09-22 1999-09-22 Geny biosyntetické cesty 1-desoxy-D-xylulosy CZ2001990A3 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19843279 1998-09-22
DE19923567A DE19923567A1 (de) 1998-09-22 1999-05-21 Gene des 1-Desoxy-D-xylulose-Biosynthesewegs

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ2001990A3 true CZ2001990A3 (cs) 2002-01-16

Family

ID=26048996

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2001990A CZ2001990A3 (cs) 1998-09-22 1999-09-22 Geny biosyntetické cesty 1-desoxy-D-xylulosy

Country Status (23)

Country Link
EP (1) EP1115849B1 (cs)
JP (1) JP2002526061A (cs)
CN (1) CN1319134A (cs)
AP (1) AP2001002104A0 (cs)
AT (1) ATE317007T1 (cs)
AU (1) AU767213B2 (cs)
BG (1) BG105361A (cs)
BR (1) BR9914028A (cs)
CA (1) CA2343919A1 (cs)
CZ (1) CZ2001990A3 (cs)
DE (1) DE59913101D1 (cs)
EE (1) EE200100174A (cs)
HR (1) HRP20010215A2 (cs)
HU (1) HUP0203649A2 (cs)
ID (1) ID29772A (cs)
IL (1) IL141888A0 (cs)
IS (1) IS5872A (cs)
NO (1) NO20011459L (cs)
OA (1) OA11656A (cs)
PL (1) PL348428A1 (cs)
SK (1) SK3922001A3 (cs)
TR (1) TR200100836T2 (cs)
WO (1) WO2000017233A2 (cs)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6806076B1 (en) 1998-04-14 2004-10-19 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing isoprenoid compounds by microorganisms and a method for screening compounds with antibiotic or weeding activity
JP2002541851A (ja) 1999-04-15 2002-12-10 カルジーン エルエルシー イソプレノイド合成に関与するタンパク質の核酸配列
DE19918949A1 (de) * 1999-04-27 2000-11-23 Basf Ag Überexpression einer DNA-Sequenz codierend für eine 1-Desoxy-D-Xylulose-5-Phosphat Reduktoisomerase in Pflanzen
JP2003500073A (ja) * 1999-05-21 2003-01-07 ヨマー、ファルマカ、ゲゼルシャフト、ミット、ベシュレンクテル、ハフツング イソプレノイドの濃度を変更するためのデオキシ−ｄ−キシルロースホスフェート生合成経路の遺伝子の使用
DE60036477T2 (de) 1999-08-04 2008-06-12 Bacher, Adelbert, Prof. Dr.med. Dr.rer.nat. Isoprenoid biosynthese
US6872815B1 (en) 2000-10-14 2005-03-29 Calgene Llc Nucleic acid sequences to proteins involved in tocopherol synthesis
DE10021688A1 (de) * 2000-05-05 2001-11-15 Hassan Jomaa Gene des 1-Desoxy-D-xylulose-Biosynthesewegs
DE10027821A1 (de) * 2000-06-05 2001-12-06 Adelbert Bacher Der Mevalonat-unabhängige Isoprenoidbiosyntheseweg
AU2001290522B2 (en) * 2000-08-07 2006-11-30 Monsanto Technology Llc Methyl-D-erythritol phosphate pathway genes
DE10201458A1 (de) 2001-04-11 2002-10-17 Adelbert Bacher Intermediate und Enzyme des Mevalonat-unabhängigen Isoprenoidbiosyntheseweg
US7161061B2 (en) 2001-05-09 2007-01-09 Monsanto Technology Llc Metabolite transporters
ES2318004T3 (es) 2001-05-09 2009-05-01 Monsanto Technology Llc Genes tyra y usos de los mismos.
PT1408984E (pt) * 2001-07-20 2008-12-26 Bioagency Ag Compostos organofosforosos para activar células t gama/delta
WO2003016482A2 (en) 2001-08-17 2003-02-27 Monsanto Technology Llc Methyltransferase genes and uses thereof
DE60235252D1 (de) 2001-10-25 2010-03-18 Monsanto Technology Llc Aromatische methyltransferasen und ihre verwendung
BR0308740A (pt) 2002-03-19 2007-01-09 Monsanto Technology Llc ácidos nucléicos e polipeptìdeos de homogentisado prenil transferase ("hpt"), e empregos destes
AU2003268083A1 (en) 2002-08-05 2004-02-23 Monsanto Technology, Llc Tocopherol biosynthesis related genes and uses thereof
CN106978425B (zh) * 2017-02-17 2019-10-18 华中农业大学 东方巴贝斯虫1-脱氧-d-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因及其编码的蛋白
JP2021505154A (ja) 2017-12-07 2021-02-18 ザイマージェン インコーポレイテッド 発酵によって（６ｅ）−８−ヒドロキシゲラニオールを生産するための設計された生合成経路
EP3728212A1 (en) 2017-12-21 2020-10-28 Zymergen Inc. Nepetalactol oxidoreductases, nepetalactol synthases, and microbes capable of producing nepetalactone
CN109342634A (zh) * 2018-12-07 2019-02-15 西北大学 一种柱前衍生-hplc测定dxs酶催化活性的方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19752700A1 (de) * 1997-11-28 1999-06-02 Hoechst Schering Agrevo Gmbh 1-Desoxy-D-xylulose-5-phosphat Synthase, Verfahren zur Identifizierung von Effektoren der 1-Desoxy-D-xylulose-5-phosphat Synthase und Effektoren der 1-Desoxy-D-xylulose-5-phosphat Synthase
CA2328157A1 (en) * 1998-04-14 1999-10-21 Jomaa Hassan Method for identifying chemical active agents and active agents for inhibiting the 1-desoxy-d-xylulose-5-phosphate biosynthetic pathway

Also Published As

Publication number Publication date
EP1115849B1 (de) 2006-02-01
IS5872A (is) 2001-02-28
HUP0203649A2 (hu) 2003-02-28
IL141888A0 (en) 2002-03-10
AU6194799A (en) 2000-04-10
CN1319134A (zh) 2001-10-24
TR200100836T2 (tr) 2001-10-22
SK3922001A3 (en) 2001-09-11
DE59913101D1 (de) 2006-04-13
JP2002526061A (ja) 2002-08-20
CA2343919A1 (en) 2000-03-30
NO20011459L (no) 2001-05-22
NO20011459D0 (no) 2001-03-22
WO2000017233A3 (de) 2000-05-25
BR9914028A (pt) 2001-07-03
ID29772A (id) 2001-10-11
HRP20010215A2 (en) 2002-06-30
PL348428A1 (en) 2002-05-20
ATE317007T1 (de) 2006-02-15
AU767213B2 (en) 2003-11-06
AP2001002104A0 (en) 2001-03-31
BG105361A (en) 2001-10-31
OA11656A (en) 2004-12-08
EP1115849A2 (de) 2001-07-18
WO2000017233A2 (de) 2000-03-30
EE200100174A (et) 2002-08-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ2001990A3 (cs) Geny biosyntetické cesty 1-desoxy-D-xylulosy
Anderson et al. Farnesyl diphosphate synthetase: molecular cloning, sequence, and expression of an essential gene from Saccharomyces cerevisiae
Duronio et al. Disruption of the yeast N-myristoyl transferase gene causes recessive lethality
Geelen et al. Disruption of putative anion channel gene AtCLC‐a in Arabidopsis suggests a role in the regulation of nitrate content
Li et al. In planta side-chain glucosinolate modification in Arabidopsis by introduction of dioxygenase Brassica homolog BoGSL-ALK
Isaac et al. The maize cytochrome c oxidase subunit I gene: sequence, expression and rearrangement in cytoplasmic male sterile plants
Sugimoto et al. The rice nuclear gene, VIRESCENT 2, is essential for chloroplast development and encodes a novel type of guanylate kinase targeted to plastids and mitochondria
Wang et al. Overexpression of a putative maize calcineurin B-like protein in Arabidopsis confers salt tolerance
Cunillera et al. Characterization of dehydrodolichyl diphosphate synthase of Arabidopsis thaliana, a key enzyme in dolichol biosynthesis
Gaillard et al. Male sterility associated with APRT deficiency in Arabidopsis thaliana results from a mutation in the gene APT1
Sagar et al. Genomic and expression analysis indicate the involvement of phospholipase C family in abiotic stress signaling in chickpea (Cicer arietinum)
Nitschke et al. Complementation of the cs dis2‐11 cell cycle mutant of Schizosaccharomyces pombe by a protein phosphatase from Arabidopsis thaliana.
Chen et al. The LONELY GUY gene family: From mosses to wheat, the key to the formation of active cytokinins in plants
Dahlkvist et al. Two novel deduced serine/threonine protein kinases from Saccharomyces cerevisiae
JP2003532422A (ja) １−デオキシ−ｄ−キシルロース生合成経路の遺伝子
Choi et al. Three abundant germ line-specific transcripts in Volvox carteri encode photosynthetic proteins
Genschik et al. Cloning and sequence analysis of a cDNA clone from Arabidopsis thaliana homologous to a proteasome α subunit from Drosophila
Wrobel et al. Comparative analysis of BiP gene expression in maize endosperm
Da Costa e Silva et al. The Etched1 gene of Zea mays (L.) encodes a zinc ribbon protein that belongs to the transcriptionally active chromosome (TAC) of plastids and is similar to the transcription factor TFIIS
OA11500A (en) Identification of chemical active agents for inhibiting the 1-desoxy-D-xylulose-5-phosphate biosynthetic pathway in parasites.
JP2003500073A (ja) イソプレノイドの濃度を変更するためのデオキシ−ｄ−キシルロースホスフェート生合成経路の遺伝子の使用
WO1994009139A1 (en) S-locus receptor kinase gene in a self-incompatible brassica napus line
Wang et al. A 2-bp frameshift deletion at GhDR, which encodes a B-BOX protein that co-segregates with the dwarf-red phenotype in Gossypium hirsutums L.
MXPA01002978A (en) Genes of the 1-desoxy-d-xylulose biosynthetic pathway
Yang et al. Sex-specific marker and trans-zeatin ribosidase in female annual Mercury