CZ2001253A3

CZ2001253A3 - Peptidové analogy PACAP

Info

Publication number: CZ2001253A3
Application number: CZ2001253A
Authority: CZ
Inventors: Zheng X. Dong
Original assignee: Societe De Conseils De Recherches Et D'application
Priority date: 1998-07-20
Filing date: 1999-04-30
Publication date: 2001-11-14
Also published as: EP1098906A1; HUP0104934A2; DK1098906T3; JP2002521390A; ATE449789T1; NO20010284L; HUP0104934A3; DE69941708D1; JP2010189398A; EP1098906B1; CA2335341A1; TWI221845B; EP2161282A1; NO20010284D0; ES2335827T3; AU3826899A; AR019131A1; PL345583A1; WO2000005260A1

Description

(57) Anotace:

Analogy PACAP (hypofyzální aktivační polypeptid adenylát cykláza), jež se váží na PACAP receptory a jejich farmaceutické přípravky jsou použitelné při léčbě cerebrovaskulámí ischemie, mužské impotence, neuromotorických chorob, neuropatie, bolesti, deprese, poruchy pocitu úzkosti, mozkových traumat, zhoršení paměti, demence, poruchy vědomí, nemoci centrální nervové soustavy (Parkinsonova a Alzheimerova nemoc), migrény, neurodegenerativních nemocí, srdeční ischemie, srdečního infarktu, fibrosy, restenosy, cukrovky, svalových nemocí, žaludečních vředů, mozkových příhod, arteriosklerózy, hypertense, septického šoku, trombosy, nemoci sítnice, kardiovaskulárních nemocí, selhání ledvin nebo srdce a prevence neuronální smrti buněk savců.

CM

O O CM

N o (13) Druh dokumentu: A3 (51) Int. Cl.⁷;

C07K 14/575 A61K 38/22 A61P 7/00 A61P 9/00 A61P 15/00 A61P 25/00

Peptidové analogy PACAP fl/

Oblast techniky

Vynález se týká nových analogů PACAP (hypofyzální aktivační polypeptid adenylát cykláza) a jejich použití k léčení stavů anebo nemocí zde popsaných.

Dosavadní stav techniky

Přehled o PACAP a jeho fyziologických funkcí je shrnut v Christope, J., Biochimica et Biophysica Acta, 1154,183-199 (1993) následovně:

PACAP je členem nadrodiny, která zahrnuje několik regulačních peptidů, např. VIP, PHI, PHV, sekretin, helodermin, helospektin I a II, glukagon, GIP a GRF. Tento biologicky aktivní neuropeptid se vyskytuje ve dvou formách amidů: PACAP(l-38)-NH2 (PACAP-38) a PACAP(l-27)-NH2 (PACAP-27). Předpokládaná sekvence aminokyselin lidské a krysí PACAP-38 (Kimura, C. a spol., Biochem. Biophys. Res. Commun., 166, 81-89, (1990); Ogi,

K. a spol., Biochem.Biophys. Res. Commun., 173, 1271-1279, (1990)) je identická sPACAP38 isolovanou z ovcí.

U savčích kultur a buněčných linií jsou popsány nejméně dvě třídy receptorů PACAP: typ I jsou receptory jež upřednostňují PACAP a typ II jsou receptory jež váží PACAP-27, PACAP-38 a VTP (vasoaktivní střevní peptid) (Cauvin, A., a spol., Peptides, 11, 773-777 (1990) a Shivers, B.D., a spol., Endocrinology, 128, 3055-3065 (1991)). Mimo to, první typ je schopen vytvořit dva podtypy, druhý typ může být předběžně rozdělen do tří podtypů.

Typ I je vysoce selektivní vtom, že mnohem účinněji rozpoznává PACAP-27 a PACAP-38 než VIP. PACAP-27 a PACAP-38 pak mohou aktivovat adenylát cyklázu se stejně vysokou účinností a efektivností. Receptory typu I mohou být přítomny ve dvou koexistujících podtypech (nebo stavech) v závislosti na vazbě radioligandu. V membránách *9 ·♦ 9·Λ· 999

999 99 9 9999

999 999999

999 9 999 99

999 9 9 9 9 999

999 99 99 99 99999 krysích mozků (Cauvin, A. a spol., Regul. Pept. 35, 161-173, (1991)) podtyp PACAP-A neukazuje téměř žádné preference pro P ACAP-3 8 před PACAP-27, zatímco podtyp PACAP-B rozpoznává PACAP-3 8 s vysokou afinitou a PACAP-27 s nízkou afinitou.

Receptory typu II jsou klasické VIP receptory. Vzhledem k vazebné afinitě a aktivaci adenylát cyklázy se nyní ukazuje, že receptor typu II je neselektivní, protože vykazuje podobnou afinitu k PACAP-27, PACAP-38 a VIP.

Pro fyziologickou úlohu PACAP byla prokázána relativně komplexní škála farmakologických aktivit.

V případě hypotalamo-hypofyzální osy PACAP redukuje u myší příjem potravy a u krys zvyšuje plasmatický arginin vasopresin, pravděpodobně pomocí neuronů PACAP-ir (ir = imunoreaktivní) v paraventrikuárních a supraoptických jádrech vystupujících do neurohypofyzy. Pomocí portálních váčků může být PACAP vznikající v hypotalamu rovněž přenášen do ventrální hypofyzy. Údaje o přední hypofyze poukazují na úlohu v reprodukci a růstu. PACAP stimuluje adenylát cyklázu a zvyšuje [Ca²⁺] v gonadotropních, somatotropních a hvězdicových buňkách. To zvyšuje sekreci α-MSH zmelanotropů a interleukinu-6 z hypofyzálních hvězdicových folikulárních buněk. PACAP znásobuje účinek LHRH (nebo GnRH, hormonu uvolňujícího gonadotropin) na LH (lutenizační hormon) a sekreci FSH. Pravděpodobně jasněji po 1-2 dnech zvyšuje PACAP syntézu LH, GH (růstový hormon), PRL (prolaktin) a ACTH. V lidské patologii PACAP-27 a PACAP-3 8 stimulují z nulové hodnoty aktivitu adenylát cyklázy v membráně, gonadotropin-, GH- a ACTH-produkující adenom hypofyzy.

V mozku a vně hypotalamu stimuluje PACAP syntézu melatoninu z pinealocytů a může hrát roli v interakci příjmu vidění a paměti. Široké rozšíření receptorů PACAP specifického typu I kontrastuje s více specifickou lokalizací VIP-PACAP receptorů typu II. V oku králíka mohou receptory typu I přispět fyziologii sítnice a cévnatky. Obecně neuronální zvýšení cAMP a Ca²⁺ může přispívat k časnému rozvoji mozku, opravě a modifikaci systému za pomoci neurotropických faktorů z hvězdicovitých neurogliálních buněk, které jsou také stimulovány PACAP.

• 9 9 · 9 9 · », 9··

9 9 9 9 · · 9· • 9 9 ·· 99«

999 9 9 9 9 99 ·· 9 · · 9· 9 · ··9

V krysích játrech představují receptory typu I v porovnání s receptory typu II minoritu (20%). PACAP přímo uvolňuje pohyb trávicího traktu aktivací K⁺ kanálů, jež jsou apamin-sensitivní kalcium-aktivované a je anion sekreční neuropeptid u krysích lačníkových sliznic, pravděpodobně pomocí podslizničních neuronů. U psů při vědomí PACAP stahuje žlučník pregangliovým mechanismem. In vivo zvyšuje sekreci amylasy cholinergickým mechanismem u psů a u myší uvolnění glukagonu.

PACAP způsobuje hypersekreci a syntézu katecholaminů z krysích nadledvinek a usnadňuje mitózu, vznik neuritů a přežití kultur krysích sympatických neuroblastů. Jednorázová dávka PACAP podaná nitrožilně indukuje dvoufázovou změnu krevního tlaku (pokles následovaný zvýšením), který je provázen dvoufázovou změnou v systemické cévní rezistenci. Odpovídající zužování cév souvisí s uvolněním katecholaminů z adrenalinových žláz. Uvolňující působení PACAP v isolovaných králičích předstažených cévních prstencích je 100 krát silnější než VIP, překvapivě trvanlivé a nezávislé na endotelu. PACAP je také účinný mikrovazodilátor v lidské kůži a zde je jeho účinek rovněž dlouhotrvající. PACAP-38 způsobuje zvýšení frekvence pulsů v neonatálních srdečních buňkách a stimuluje adenylát cyklázu v purifikovaných buněčných membránách svalových vláken z prasečích a psích srdečních komor. PACAP uvolňuje vzduchové cesty a vaskulární hladké svalstvo guinejského prasete, krysy a plic kočky. PACAP-ir je hojný ve varlatech krysy a receptory typu I ve spermiích mohou hrát úlohu v pohyblivosti spermie.

PACAP může zasáhnout v ontogenetických procesech v nervovém systému a měnit mitogenezi a diferenciaci (např. výrůstky nervů) v několika buněčných liniích, kde zhoubné bujení je někdy v počátku výskytu receptoru typu I.

Proto je značný zájem o nalezení analogů PACAP, které jsou aktivnější než PACAP- 27 a/nebo PACAP-38 a/nebo které mají v pacientovi delší poločas.

Patent Spojených států amerických číslo 5,208,320 objevil určitý peptid, který vykazuje c-AMP aktivitu. Robberecht, P., a spol., Molecular Pharmacology 42:347-355, (1992) objevil řadu PACAP-27 a PACAP-38 analogů. PCT publikace číslo WO 96/09064 objevila řadu PACAP analogů k použití v prevenci nebo ošetření poškození mozku.

Podstata vynálezu

Vynález se týká peptidu vzorce I

(I) nebo farmaceuticky přijatelné sole, kde

A* je His nebo Pal;

A² je Ser, Thr nebo hSer;

A³ je Asp nebo Glu;

A⁴ je Gly, //-Ala, Gaba, Ava, Aib, Acc nebo HN-(CH₂)_m-C(O);

A⁵ je Ile, Leu, Cha, Nle, Val, Tle, Abu, Aib, Acc nebo Nva;

A⁶ je Phe, p-X-Phe, //-Nal, Cha, Tyr, Trp, Acc nebo Aib;

A⁷ je Thr, Ser nebo Val;

A⁸ je Asp nebo Glu;

A⁹ je Ser, Thr nebo hSer;

A¹⁰ je Tyr, p-X-Phe, Phe, Amp, //-Nal, Trp nebo Acc;

A¹¹ je Ser, Thr nebo hSer;

A¹², A¹⁴ a A¹⁵ jsou každý nezávisle vybraný ze skupiny skládající se z Arg, Lys, Orn, hArg a HN-CH((CH₂)„-NH-R⁴)-C(O);

A¹³ je Tyr, p-X-Phe, Phe, Amp, /7-Nal, Trp nebo Acc;

A¹⁶ je Gin, Glu, Asp nebo Asn;

A¹⁷ je Met, Leu, Nle, Abu, Tle, Val, Ile, Cha, Ala, Aib, Acc nebo Nva;

A¹⁸ je Ala, Aib nebo Acc;

A¹⁹ je Val, Leu, Ile, Ala, Abu, Tle, Cha, Aib, Acc, Nle nebo Nva;

A²⁰, A²¹, A²⁹, A³⁰, A³², A³⁴, A³⁶ a A³⁸ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny skládající se z Lys, Arg, Orn, hArg a HN-CH((CH₂)_n-NH-R⁴)-C(O) nebojsou vynechány;

A²² je Tyr, p-X-Phe, Phe, Amp, /7-Nal, Trp, Acc neboje vynechán;

A²³ je Leu, Ile, Nle, Tle, Met, Val, Ala, Aib, Acc, Cha, Phe, p-X-Phe, Abu, Nva • · «··· nebo je vynechán;

A²⁴je Ala, Aib, Val, Abu, Acc, Ile, Leu, Nle, Tle, Nva neboje vynechán;

A²⁵ je Ale, Glu, Aib, Val, Abu, Acc, Ile, Leu, Nle, Nva, Tle nebo vynechán;

A²⁶ je Val, Leu, Ile, Ala, Abu, Tle, Cha, Aib, Acc, Nva, Nle neboje vynechán;

A²⁷ je Leu, Ile, Nle, Tle, Met, Val, Ala, Aib, Acc, Nva, Cha, Phe, p-X-Phe, Abu nebo je vynechán;

A²⁸ je Gly, Aib, Acc, /AAla, Gaba, Ava, HN-(CH2)_m-C(0) nebo je vynechán;

A³¹ je Tyr, p-X-Phe, Phe, Amp, //-Nal, Trp, Acc nebo je vynechán;

A³³ je Gin, Asn, Glu, Asp, nebo je vynechán;

A³⁵ je Val, Leu, Ile, Ala, Abu, Tle, Cha, Aib, Nva, Acc, Nle nebo je vynechán;

A³⁷ je Asn, Gin, Asp, Glu, Ala, Aib, Acc nebo je vynechán;

R¹ a R² jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny skládající se z H, (C1-C30) alkyl, (C₂-C₃₀) alkenyl, phenyl-(Ci-C₃o)alkyl, naphtyl-(Ci-C₃o)alkyl, hydroxy-(Ci-C₃o)alkyl, hydroxy-(C2-C₃o)alkenyl, hydroxy-phenyl-(Ci-C₃o)alkyl nebo hydroxy-naphthyl-(CiC₃₀)alkyl;

nebo jeden z R¹ a R² je COX² kde X²je (C]-C₃o)alkyl, (C2-C30) alkenyl, phenyl-(Ci'C₃o)alkyl, naphtyl-(Ci-C₃o)alkyl, hydroxy-(Ci-C₃o)alkyl, hydroxy-(C2-C₃o)alkenyl, hydroxy-phenyl-(Ci-C₃o)alkyl nebo hydroxy-naphthyl-(Ci-C₃o)alkyl;

R³ je OH, NH₂, (Ci-C₃₀)alkoxy nebo NH-Y-CH₂-Z, kde Y je (Ci-C₃₀)uhlovodíková skupina a Z je CO2H nebo CONH2;

kde X je v každém případě nezávisle vybráno ze skupiny skládající se z OH, OCH₃, F, Cl, Br a CH₃;

m je v každém případě nezávisle celé číslo od 5 do 10;

n je v každém případě nezávisle celé číslo od 1 do 5; a

R⁴ je v každém případě nezávislý (Ci-C₃o)alkyl, (Ci-C₃o)acyl nebo -C((NH)(NH2)).

Upřednostňovaná skupina peptidů vzorce I, označená jako skupina A, jsou ty peptidy, kde aspoň jedno z A⁵, A¹⁷, A¹⁸, A¹⁹, A²³, A²⁷, A²⁸ a A³⁵ je Acc nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.

Upřednostňovaná skupina peptidů ze skupiny A, označená jako skupina B, jsou ty peptidy, kde aspoň jedno z A⁵, A¹⁷, A¹⁸, A¹⁹, A²³, A²⁷, A²⁸ a A³⁵ je A6c nebo A5c nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.

Upřednostňovaná skupina peptidů ze Skupiny B, označená jako skupina C, jsou ty peptidy, kde aspoň jedno z A⁵, A¹⁸, a A¹⁹ je A5c nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.

• ·«	9 9	9999		··
• 9	•	9 9	9	9	• ·
• ··*	•	9 9	•	9
• · ·	• 9	9 9	» ·	•
99 99	99	99			• ·

Upřednostňovaná skupina peptidů ze Skupiny B, označená jako skupina D, jsou ty peptidy, kde aspoň jedno z A , A , A , A , A a A je A6c nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.

Upřednostňovaná skupina peptidů vzorce I, označená jako skupina E, jsou peptidy, kde aspoň jedno z A⁴ a A²⁸ je //-Ala, Gaba nebo Ava nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.

Upřednostňovaná skupina peptidů ze skupiny E, označená jako skupina F, jsou ty peptidy, kde aspoň jedno A⁴ a A²⁸ je //-Ala nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

Upřednostňovaná skupina peptidů ze skupiny E, označená jako skupina G, jsou ty peptidy, kde A²⁸ je Gaba nebo Ava nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

Upřednostňovaná skupina peptidů vzorce I, označená jako skupina H, jsou peptidy, kde aspoň jedno z A¹⁸, A²⁴, A²⁵ a A³⁷ je Aib nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.

Upřednostňovaná skupina peptidů vzorce I, označená jako skupina I, jsou peptidy, kde aspoň jedno z A¹⁶, A²⁵ a A³³ je Glu nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.

Upřednostňovaná skupina peptidů vzorce I, označená jako skupina J, jsou peptidy, kde A³⁸ je Lys-N-e-oktadekanoyl.

Upřednostňovaná skupina peptidů skupiny C, označená jako skupina K jsou [A5c⁵] hPACAP(l-38)NH2, [A5¹⁹] hPACAP(l-38)NH2, [Leu¹⁷, A5c¹⁹] hPACAP(l-38)NH2, [Nle¹⁷, A5c¹⁹] hPACAP(l-38)NH2, [Ν-α-oktadekanoyol-His¹, A5c¹⁹] hPACAP(l-38)NH2, [A5c¹⁹, (Lys-N-e-oktadekanoyol)³⁸] hPACAP(l-38)NH2 a [A5c¹⁸] hPACAP(l-38)NH₂.

Upřednostňovaná skupina peptidů skupiny D, označená jako skupina Ljsou [A6c^23,27] hPACAP(l-38)NH2, [A6c¹⁷] hPACAP(l-38)NH2, [A6c¹⁹’²³] hPACAP(l-38)NH2, [A6c²³] hPACAP(l-38)NH2, [A6²⁸] hPACAP(l-38)NH2, [A6c³⁵] hPACAP(l-38)NH2 a [A6c¹⁹] hPACAP(l-38)NH₂.

Upřednostňovaná skupina peptidů skupiny F, označená jako skupina Mjsou [//-Ala²⁸] hPACAP(l-38)NH2, [A5c¹⁹, //-Ala²⁸] hPACAP(l-38)NH2, a [//-Ala⁴] hPACAP(l-38)NH₂.

Upřednostňovaná skupina peptidů skupiny G, označená jako skupina Njsou [Gaba ] hPACAP(l-38)NH₂ a [Ava²⁸] hPACAP(l-38)NH₂.

Upřednostňovaná skupina peptidů skupiny H, označená jako skupina O jsou [Aib³⁷] hPACAP(l-38)NH2, [Aib²⁴, A6c²⁷] hPACAP(l-38)NH2, [Aib¹⁸, A6c²³] hPACAP(l-38)NH2, [Aib¹⁸’²⁵, A6c²³] hPACAP(l-38)NH2 a [A6c²³, Aib²⁵] hPACAP(l-38)NH₂.

Upřednostňovaná skupina peptidů skupiny I, označená jako skupina Pjsou [Glu¹⁶] hPACAP(l-38)NH2, [Glu³³] hPACAP(l-38)NH2, [Aib²⁴,Glu²⁵] hPACAP(l-38)NH2 a [Glu³³, A6c³⁵] hPACAP(l-38)NH2.

• ·· ·· ···· 99 9 ·· 9 9 9 9 · 9 99

999 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 _ 999 9999 99 9 γ 999 99 ·· 99 *9 999

Z jiného aspektu se tento vynález týká farmaceutického přípravku obsahující účinné množství peptidu vzorce I, jak popsáno výše nebo jeho farmaceuticky přijatelné sole a farmaceuticky přijatelného nosiče.

Dále se tento vynález týká způsobu ošetření cerebrovaskulární ischemie, mužské impotence, neuromotorických chorob, neuropatie, bolesti, deprese, poruchy pocitu úzkosti, mozkových traumat, zhoršení paměti, demence, poruchy vědomí, nemoci centrální nervové soustavy, migrény, neurodegenerativních nemocí, srdeční ischemie, srdečního infarktu, fibrosy, restenosy, cukrovky, svalových nemocí, žaludečních vředů, mozkových příhod, arteriosklerózy, hypertense, septického šoku, trombosy, nemoci sítnice, kardiovaskulárních nemocí, selhání ledvin nebo srdce nebo prevence neuronální smrti buněk savce, což zahrnuje podání od určitého až pro savce účinného množství peptidu vzorce I nebo farmaceuticky přijatelné sole, jak zde bylo výše uvedeno.

Preferovaný způsob bezprostředně uvedeného způsobu je tam, kde jsou léčeny nemoci centrální nervové soustavy jako je Parkinsonova nebo Alzheimerova nemoc.

Z jiného pohledu, vynález poskytuje způsob vazby receptorů PACAP u savců, což zahrnuje podání od určitého až pro savce účinného množství peptidu vzorce I nebo farmaceuticky přijatelné sole, jak zde bylo výše uvedeno.

Z dalšího pohledu, vynález poskytuje způsob vyvolávající protichůdný účinek receptorů PACAP u savců, což zahrnuje podání od určitého do pro savce účinného množství peptidu vzorce I nebo farmaceuticky přijatelné sole, jak zde bylo výše uvedeno.

• · · · · · ··· ·· · ·· • · · · · · · · ·

Podrobný popis vynálezu

S výjimkou N-konce aminokyselin, všechny zkratky (např. Ala pro Ai) aminokyselin v tomto objevu platí pro strukturu -NH-CH(R)-CO-, kde R v bezprostředně následujícím vzorci je boční řetězec aminokyselin (např. CH3 pro Ala). Pro N-koncovou aminokyselinu zkratka platí pro strukturu (R¹R²)-N- CH(R)-CO-, kde R je boční řetězec aminokyselin a R¹ a R² jak definováno dříve.

Následující jsou zkratky určitých «-aminokyselin: /7-Nal = /?-(2-naphthyl)alanin; Nle = norleucin; Cha - cyklohexylalanin;, Nva = norvalin; Amp = 4-amino-phenylalanin; Pal = β~(3-pyridinyl)alanin; Aib = «-aminoisobutyrová kyselina; hSer = homoserine; //-Ala = β-alanin; Gaba = y-aminobutyrová kyselina, Ava = 5-aminovalerová kyselina a Abu = «-

- aminobutyrová kyselina.

Označením Acc se míní obvyklá zkratka pro cykloalkylovou aminokyselinu, což zahrnuje, ale není limitováno: 1-amino-1-cykopropankarboxylová kyselina (A3c); 1-amino~ cykobutankarboxylová kyselina (A4c); 1-amino-cykopentakarboxylová kyselina (A5c); 1-

- amino-cykohexankarboxylová kyelina (A6c); 1-amino-1-cykoheptankarboxylová kyselina (A7c); 1-amino-1-cykooctankarboxylová kyselina (A8c) a 1-amino-1-cykononankarboxylová kyselina (A9c). Názvy hydroxyalkyl, hydroxyphenylalkyl a hydroxynaphthylalkyl se míní tak, že tam může být jedna nebo více hydroxy substituentů na alkylové skupině a anebo phenylová a naphthylová skupina. COX² je pro -(C=O)X², například -(C=O)X² je acetyl a phenylpropionyl. Označením (Ci - C30) hydrokarbonový podíl se míní alkylová, alkenylová nebo alkynylová skupina, kde například alkenylová nebo alkynylová skupina se rozumí tak, že musí být přítomny minimálně dva uhlíky.

Peptid tohoto vynálezu se zde také udává v jiném tvaru, např. [/?-Ala²⁶]hPACAP(l-38)NH2 se substituovanými aminokyselinami z přirozené sekvence nacházející se mezi závorkami (např. /?-Ala²⁸ za Gly²⁸ v hPACAP). Zkratka hPACAP značí lidský PACAP. Čísla mezi závorkami odpovídají počtu aminokyselin přítomných vpeptidu (např. hPACAP(l-38) jsou aminokyseliny od 1 do 38 peptidové sekvence lidského PACAP). Sekvence hPACAP(l* 38) je uvedena v Christope, J., a spol., Biochimica et Biophysica Acta, 1154, 183-199, (1993).

• · ··· ·· · ··« ···· · · · · · • · · · · · · · · · • · · · · · ♦ ·· ····· ♦ · · · · ♦ «

Označení NH2 v PACAP(1-38)NH2 ukazuje, že C-konec peptidu je amid. Označení PACAP(l-38) ukazuje volný kyselý C-konec.

Peptidy tohoto vynálezu se mohou poskytnout ve formě farmaceuticky přijatelných solí. Příklady těchto solí zahrnují, ale nejsou limitovány, těmi, jež jsou tvořeny s organickými kyselinami (např. octová, mléčná, maleinová, citrónová, jablečná, askorbová, jantarová, benzoová, methansulfonová, toluensulfonová nebo l,l'-niethylene-bis[2-hydroxy-3-naphthoic acid]), anorganickými kyselinami (kyselina chlorovodíková, sírová nebo fosforečná) a polymerové kyseliny (např. kyselina tříslová, karboxymethyl celulosa, polymléčná, polyglykolová nebo kopolymery polymléčných-glykolových kyselin).

Jak je dobře známo těm, kdo jsou znalí oboru, známé a potencionální použití PACAP je různé a nesčetné [viz Arimura, A., Regulátory Peptides, 37, (1992), 287-303; Christophe, J., Biochemica et Biophysica Acta, 1154, (1993), 183-199; Arimura, A., a Shioda, S., Frontiers in Neuroendocrinology, 16, 53-88 (1995)]. Proto dávkování přípravku, jež je předmětem vynálezu, za účelem vyvolání protichůdného účinku může mít stejný účinek a použití jako samotné PACAP. Tato různorodá použití PACAP se mohou shrnout následovně: cerebrovaskulární ischemie, Alzheimerova nemoc, můžská impotence, motoricko neuronová nemoc, bolest, deprese, poruchy strachu, mozkové trauma, zhoršení paměti, demence, poruchy vědomí, nemoci centrální nervové soustavy (jako Parkinsonova nemoc, Alzheimerova nemoc), migréna, nerodegenerativní nemoci, prevence neuronální smrti buněk, ischemické poruchy srdeční, infarkt myokardu, fibrosy, restenósy, cukrovka, svalové nemoci, žaludeční vředy, mrtvice, ateroskleróza, vysoký krevní tlak, septický šok, trombóza, nemoci sítnice, kardiovaskulární nemoc, selhání ledvin a srdce.

Podle toho presentovaný vynález zahrnuje ve svém rámci farmaceutický přípravek obsahující jako aktivní složku, nejméně jednu ze sloučenin vzorce I ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem.

Dávkování aktivní složky v přípravku tohoto vynálezu může být různé, je nutné, aby množství aktivní složky bylo takové, že se z něho získá vhodná dávka. Zvolená dávka závisí na očekávaném terapeutickém účinku, způsobu vedení a trvání léčby. Obecně účinná dávka pro působení tohoto vynálezu je v rozmezí od 0,00001 do 200 mg/kg/den, nejlépe od 0,001 do 100 mg/kg/den, což se může podat jako jedna dávka nebo rozdělit do několika dávek.

• · ·· ···· ·· • · · · · · ··· ·· 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9

Přípravek vynálezu se může podat orálně, mimostřevně (např. nitrosvalově, nitropobřišnicově, nitrožilně nebo podkožní injekcí nebo implantátem), nazálně, vaginálně, konečníkem, sublingválně nebo lokálně a může se vytvořit s farmaceuticky přijatelnými nosiči k umožnění vhodného způsobu dávkování pro každý způsob podání.

Pevné dávkovači formy pro orální podání zahrnují kapsle, tablety, pilulky, prášek a granule. V této pevné dávkové formě se aktivní složka míchá s nejméně jedním farmaceuticky přijatelným nosičem jako je sacharóza, laktóza nebo škrob. Takové dávky mohou také obsahovat, jak je běžná praxe, přidané látky jiné než inertní ředidlo, např. mazací činidla jako je stearát magnesia. V případě kapslí, tablet a pilulek, může dávkovači forma rovněž obsahovat pufrovací činidlo. Tablety a pilulky se mohou navíc připravit s enterickým potahem.

Tekutá dávková forma pro orální podání zahrnuje farmaceuticky přijatelné emulse, roztoky, suspenze, sirupy, elixíry obsahující rozpouštědla obecně užívané v těchto případech, jako voda. Vedle těchto inertních rozpouštědel může přípravek také obsahovat pomocné látky, jako zvlhčující činidlo, emulgující a suspendující činidlo, sladidlo, ochucovadlo a parfemovací činidlo.

Přípravky podle tohoto vynálezu k mimostřevnímu podání obsahují sterilní vodné nebo nevodné roztoky, suspense nebo emulse. Příkladem nevodného rozpouštědla je propylen glykol, polyethylen glykol, rostlinné oleje, jako například olivový a kukuřičný olej, želatinu a organické estery vhodné pro injekce, jako například ethyl oleát. Tyto dávkovači formy mohou obsahovat pomocné látky, jako například konservující, zvlhčující a disperzní činidla. Mohou se sterilizovat například filtrací filtrem, jenž zadržuje bakterie, zavedením sterilizačního činidla do přípravku, ozářením nebo zahřáním přípravku. Rovněž se mohou vyrobit ve formě sterilních pevných přípravků, jež se mohou rozpustit ve sterilní vodě nebo jiném sterilním mediu, jež se může použit k injekcím těsně před použitím.

Složení pro rektální nebo vaginální podání jsou přednostně čípky, které mohou obsahovat vedle účinné složky inertní substance k přenosu léčebné látky, jako máslo koka nebo čípkový vosk.

Složení pro nasální nebo sublingvální podání se také připraví se standardními inertními substancemi k přenosu léčebné látky dobře známými v tomto oboru.

Dále, přípravek jež je předmětem tohoto vynálezu se může podat ve složení, jež umožní postupné uvolňování, tak jak je popsáno v následujících patentech a patentových přihláškách. U.S. patent číslo 5,672,659 ukazuje složení obsahující bioaktivní složku a polyester, jež umožní postupné uvolňování. U.S. patent číslo 5,595,760 ukazuje složení obsahující bioaktivní složku v rosolovité formě, jež umožní postupné uvolňování. U.S. žádost číslo 08/929,363 vyplněná 9. září 1997, ukazuje složení polymeru obsahující bioaktivní složku a chitosan, jež umožní postupné uvolňování. U.S. žádost číslo 08/740,778 vyplněná 1. listopadu 1996 ukazuje složení obsahující bioaktivní složku a cyklodextrin, jež umožní postupné uvolňování. U.S. žádost číslo 09/015,394 vyplněná 29. ledna 1998 ukazuje absorbovatelné složení obsahující bioaktivní složku, jež umožní postupné uvolňování. Poučení z předchozích patentů a žádostí je zahrnuto zde v tomto dokumentu jako reference.

Pokud není definováno jinde, všechny technické a vědecké termíny užité v tomto dokumentu mají stejný význam tak, jak je jim obecně rozuměno v obvyklých oblastech oboru do kterého tento vynález patří. Rovněž, všechny publikace, patentové přihlášky, patenty a jiné reference zde uvedené jsou zahrnuty v referencích.

In vitro stanovení: Přípravek bezprostředního vynálezu se může testovat pro svoji schopnost vázat receptory PACAP typu I a II podle následujícího postupu.

Buněčná kultura: Buňky krysího pankreasu AR42J (ATCC, Rockville, MD), přepisující receptor PACAP-Ι se kultivují vDulbeccem modifikovaném Eaglesově mediu (DMEM) obsahujícím 10% telecí plodové sérum, a udržují se při 37 °C ve zvlhčené atmosféře 5% CO₂/95% vzduch.

Zvířata: Krysí samci (Taconic, Germantown, NY) se obětují useknutím hlavy a získají se játra, jež se použijí jako zdroj receptoru PACAP-II.

Vazba radioligandu: Pro studium vazby radioligandu se připraví membrány homogenizací buněk AR42J (pro receptor PACAP-I) nebo krysích jater (pro receptor • ·· · · ······ • · · · · ·· · · • ΦΦΦ · · · ·· • φ φ φ φ φφφφφ φφφ φφφφΦ· •ΦΦΦΦ φφ ···· ·

PACAP-II) ve 20 ml ledově chladného 50mM Tris-HCl v Brinkmanově polytronu (Brinkman, Westbury, NY) (nastavení 6, 15 s). Homogenizáty se dvakrát promyjí centrifugací (39 OOOg/lOmin) a konečný pelet se resuspenduje v 50mM Tris-HCl obsahující 2,5 mM MgCh, 0,1 mg/ml bacitracin (Sigma Chemicals, St. Lous, MO) a 0,1% BSA. Pro stanovení se inkubují alikvoty (0,4 ml) s 0,05 nM [¹²⁵I]PACAP-27 (2200Ci/mmol, New England Nuclear, Boston, MA) s přidáním a bez přidání 0,05 ml neznačené kompetující sloučeniny. Po 40 min inkubace (25 °C) se oddělí vázané [¹²⁵I]PACAP-27 od volného [¹²⁵I]PACAP-27 rychlou filtrací přes GF/B filtry (Brandel, Gaithersburg, MD), jež byl předtím namočen v 0,3% polyethyleniminu. Filtry se potom třikrát promyjí vždy 5 ml ledově chladného 50 mM Tris-HCl, a vázaná radioaktivita zachycená na filtrech se proměří gama spektrometrem (Wallac, LKB, Gaithersburg, MD). Specifická vazba k receptoru typu lak receptoru typu II se definuje jako celková [¹²⁵I]PACAP-27 vazba minus ta, která se váže v přítomnosti 1000 nM PACAP-27 (Bachem, Torrence, CA).

Příklady provedení vynálezu

Syntéza

Peptidy tohoto vynálezu se mohou připravit standardní syntézou pevné fáze. Viz například Stewart, J.M. a spol., Solid Phase Synthesis (Pierce Chemical Co., 2 vydání, 1984). Následuje popis jak byl připraven [/?-Ala²⁸]hPACAP(l-38)NH₂. Další peptidy tohoto vynálezu se mohou připravit obdobným způsobem osobou s běžnou praxí v oboru podle návodu zde uvedeného.

Příprava farmaceuticky přijatelné sole peptidu tohoto vynálezu je dobře známa těm, kdo mají běžnou zručnost v oboru. Například HC1 sůl peptidu se může připravit rozpuštěním peptidu ve vodě a přidáním vhodného slabého vodného roztoku HC1 a poté lyofilizací roztoku. Jiné sole se mohou získat podobným nebo jiným způsobem, jako je výměna solí, jež je znám těm, kdo jsou zkušení v oboru.

Φ ·· ·· ···· ·· • · · · · ···· • ··· · · φ · · ·· φ · · · φ φ φ φ φφφ φφφφ φφ • φ φ φ· φφ φφ φφ ·

Příklad 1 [/?-Ala²⁸]hPACAP(l -3 8)ΝΗ₂

Uvedený peptid byl syntetizován na peptidovém syntetizátoru Applid Biosystems (Foster City, CA), modelu 430A, jež byl modifikován pro urychlenou Boc-chemickopu syntézu peptidu v pevné fázi. Viz Schnoize a spol., Int. J. Peptide Protein Res., 90:180 (1992). Byla použita pryskyřice 4-methylbenzhydrylamin (MBHA) (Peninsula, Belmont, CA) s náhradou 0,93 mmol/g. Byly použity Boc aminokysliny (Bachem, CA, Torrance, CA; Nova Biochem., LaJolla, CA) s následující ochranou bočních řetězců: Boc-Ala-OH, Boc-Arg(Tos)OH, Boc-Asp(OcHex)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-His(DNP)-OH, Boc-Val-OH, Boc-LeuOH, Boc-Gly-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, BocSer(Bzl)-OH; Boh-Phe-OH, Boc-Met-OH a Boc-/?-Ala-OH. Syntéza byla provedena v měřítku 0,14 mmol. Skupiny Boc byly odstraněny působením 100% TFA po dobu 2 krát 1 min. Boc aminokyseliny (2,5 mmol) byly předaktivovány HBTU (2,0 mmol) a DIEA (1,0 ml) ve 4 ml DMF a byly spojeny bez předchozí neutralizace sole peptid-pryskyřice TFA.

Na konci kompletace peptidového řetězce bylo na pryskyřici působeno dvakrát po dobu 30 minut 20% roztokem merkaptoetahnolu/10%DIEA v DMF k odstranění DNP skupiny na His postraním řetězci. N-koncová Boc skupina byla potom odstraněna působením 100% TFA po dobu 2 krát 2 minuty. Částečně nechráněná peptid-pryskyřice byla promyta DMF a DCM a sušena pod sníženým tlakem. Konečné štěpení bylo provedeno mícháním peptid-pryskyřice v 10 ml HF obsahujícího 1 ml anisolu a dithiothreitolu (24 mg) při 0°C po dobu 75 minut. HF byl odstraněn proudem dusíku. Zbytek byl promyt etherem (6x 10 ml) a extrahován 4N HOAc (6x 10 ml).

Peptidová směs ve vodném roztoku byla purifíkována pomocí fázové reversní vysokotlaké kapalné chromatografie (HPLC) použitím reversní fáze Vydac™ Cis kolony (Nést Group, Southborough, MA). Kolona byla promývána lineárním gradientem (10% až 45% roztokem B po dobu 130 min) při průtoku 10 ml/min (roztok A = voda obsahující 0,1% TFA; roztok B = acetonitril obsahující 0,1% TFA). Frakce byly sbírány a kontrolovány na analytickém HPCL. Ty, které obsahovaly čistý produkt byly spojeny a do sucha lyofilizovány. Bylo získáno 286 mg bílé pevné látky. Analytická HPLC prokázala >99% čistotu. Electro• ·· ·· ···· ·· • · · ·· ···· ···· ·· · · · ·· ··· · ··· · spray hmotová spektrofotometrická analysa ukázala molekulární hmotnost 4548,5 (v souladu s vypočítanou molekulovou váhou 4548,4).

Syntézy dalších analogů tohoto vynálezu byly provedeny stejným způsobem, jenž je zde popsán pro syntézu [^-Ala²⁸]hPACAP(l-38)NH2, ale s použitím vhodných chráněných aminokyselin.

Chráněná aminokyselina 1 -[N-tert-butoxykarbonyl-amino]-1 -cyklohexankarboxylová kyselina (Boc-A6c-OH) byla syntetizována následovně. 19,1 g (0,133 mol) 1-amino-l’ cyklohexankarboxylová kyselina (Acros Organics, Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) byla rozpuštěna ve 200 ml dioxanu a 100 ml vody. K tomu bylo přidáno 67 ml 2N NaOH. Roztok byl chlazen v ledově studené lázni. Do roztoku bylo přidáno 32,0 g (0,147 mol) ditert-butyl-

- dikarbonátu. Reakční směs byla míchána asi 12 hodin při teplotě 22 °C. Potom byl pod sníženým tlakem odstraněn dioxan. Do zbylého vodného roztoku bylo přidáno 200 ml ethyl acetátu. Směs byla chlazena v ledově studené lázni. Přídavkem 4N HC1 bylo upraveno pH vodné vrstvy na hodnotu kolem 3. Organická vrstva byla oddělena. Vodná vrstva byla extrahována pomocí ethyl acetátu (1 x 100 ml). Dvě organické vrstvy byly spojeny a promyty vodou (2 x 150 ml), vysušeny nad bezvodým MgSO₄, filtrovány a zkoncentrovány do sucha pod sníženým tlakem. Zbytek byl překrystalován z ethyl acetát/hexanů. Bylo získáno 9,2 g čistého produktu, 29% výtěžnost.

Boc-A5c-OH byla syntetizována obdobným způsobem jako Boc-A6c-OH. Další chráněné Acc aminokyseliny se mohou připravit podle tohoto popisu obdobným způsobem pracovníkem, který má zručnost v oboru.

Při syntéze analogu PACAP tohoto vynálezu, jež obsahuje A5cm A6c a/nebo Aib byl pro tato rezidua a bezprostředně následující čas kopulace 2 hod.

Celé názvy pro zkratky použité výše jsou následující: Boc je t-butyloxykarbonyl, HF je fluorovodík, Fm je formyl, Xan je xanthyl, Bzl je benzyl, Tos je tosyl, DNP je 2,4-

- dinitrofenyl, DMF je dimethylformamid, DCM je dichlormethan, HBTU je 2-(lH-Benzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetramethyl uronium hexafluorofosfát, DIEA je diisopropylethylamin, HOAc je kyselina octová, TFA je azid kyseliny trifluorooctové, 2CIZ • ··

je 2-chlorobenzyloxykarbonyl, 2BrZ je 2-bromobenzyloxykarbonyl a OcHex je O- cyklohexyl.

Substituenty R¹ a R² výše uvedených obecných vzorců mohou být připojeny k volným aminům na N-konci aminokyseliny standardními způsoby známými v oboru. Například alkylové skupiny, jako (C1-C30) alkyl, mohou být připojeny použitím redukční alkylace. Hydroxyalkylové skupiny, jako Ci-nhydroxyalkyl, mohou být připojeny redukční alkylací, kde volná hydroxy skupina je chráněna t-butyl esterem. Acylové skupiny, jako COX¹ mohou být připojeny kopulací volné kyseliny, např. Χ'ϋΟΟΗ, k volnému aminu N-konce aminokyseliny smícháním kompletované pryskyřice s 3 molárními ekvivalenty obou volných kyselin a diisopropylkarbodiimidu v methylenchloridu po dobu přibližně jedné hodiny. Jestliže volné kyseliny obsahují volnou hydroxy skupinu, např. p-hydroxyfenylpropionová kyselinu, pak by kopulace měla být provedena s přidáním 3 molárních ekvivalentů HOBT.

Příklad 2-29

Příklady 2-30 byly syntetizovány podle způsobu popsaného v Příkladu 1, za použití vhodných chráněných aminokyselin.

Příklad	Vzorec	Specifická hmotnost*	Vypočtená molekulová váha
2	[A6c^23,27]hPACAP(l-3 8)NH₂	4559,2	4558,7
3	[Aib³⁷]hP ACAP( 1 -3 8)NH₂	4505,5	4505,4
4	[A6c¹⁷hPACAP(l-38)NH₂	4527,8	4528,3
5	[A6c^19,23] hPACAP(l-38)NH₂	4571,1	4572,4
6	[A6c²³] hPACAP(l-38)NH₂	4546,4	4546,4
7	[Aib¹⁸, A6c²³] hPACAP(l-38)NH₂	4560,3	4560,4
8	[Aib¹⁸’²⁵, A6c²³] hPACAP(l-38)NH₂	4574,8	4574,4
9	[Aib²⁴, A6c²⁷] hPACAP(l-38)NH₂	4560,7	4560,4
10	[A6c²³, Aib²⁵] hPACAP(l-38)NH₂	4560,7	4560,4
11	[A6c²⁷] hPACAP(l-38)NH₂	4547,0	4546,4
12	[Glu¹⁶] hPACAP(l-38)NH₂	4535,2	4535,3
13	[Glu³³] hPACAP(l-38)NH₂	4535,2	4535,3
14	[Aib²⁴ Glu²⁵] hPACAP(l-38)NH₂	4605,6	4606,4
15	[Glu³³, A6c³⁵] hPACAP(l-38)NH₂	4561,9	4561,4
16	[A6c³⁵] hPACAP(l-38)NH₂	4560,4	4560,4
17	[A6c²⁸] hPACAP(l-38)NH₂	4602,1	4602,5
18	[A5c⁵] hPACAP(l-38)NH₂	4532,3	4532,3
19	[A5c¹⁹] hPACAP(l-38)NH₂	4546,4	4546,4
20	[A5c¹⁹, ^Ala²⁸] hPACAP(l-38)NH₂	4559,8	4560,4
21	[GABA²⁸] hPACAP(l-38)NH₂	4562,3	4562,4
22	[Leu¹⁷, A5c¹⁹] hPACAP(l-38)NH₂	4528,0	4528,3
23	[Nle¹⁷ A5c¹⁹] hPACAP(l-38)NH₂	4527,2	4528,3
24	[A5c¹⁸] hPACAP(l-38)NH₂	4573,9	4574,4
25	[/7-Ala⁴] hPACAP(l-38)NH₂	4547,3	4548,4
26	[A6c¹⁹] hPACAP(l-38)NH₂	4559,3	4560,4

• ·

27	[Ava²⁸] hPACAP(l-38)NH₂	4575,3	4576,4
28	[(Ν-α-octadekanoyl-His)¹, A5c¹⁹]	4812,1	4812,8
	hPACAP(l-38)NH₂
29	[A5c¹⁹, (Lys-N-s-octadekanoyl)³⁸]	4812,2	4812,8

hPACAP(l-38)NH₂

Specifická hmotnost byla naměřena na Finnigan Mat SSQ 7000, Electrospray Ionizačním hmotovém spektrometru.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Peptid vzorce I, (I) nebo farmaceuticky přijatelné sole, kde

A¹ je His nebo Pal;

A² je Ser, Thr nebo hSer;

A³ je Asp nebo Glu;

A⁴ je Gly, //-Ala, Gaba, Ava, Aib, Acc nebo HN-(CH₂)_m-C(O);

A⁵ je Ile, Leu, Cha, Nle, Val, Tle, Abu, Aib, Acc nebo Nva;

A⁶ je Phe, p-X-Phe, //-Nal, Cha, Tyr, Trp, Acc nebo Aib;

A⁷ je Thr, Ser nebo Val;

A⁸ je Asp nebo Glu;

A⁹ je Ser, Thr nebo hSer;

A¹⁰ je Tyr, p-X-Phe, Phe, Amp, //-Nal, Trp nebo Acc;

A¹¹ je Ser, Thr nebo hSer;

A¹², A¹⁴ a A¹⁵ jsou každý nezávisle vybraný ze skupiny skládající se z Arg, Lys, Orn, hArg a HN-CH((CH₂)_n-NH-R⁴)-C(O);

A¹³ je Tyr, p-X-Phe, Phe, Amp, //-Nal, Trp nebo Acc;

A¹⁶ je Gin, Glu, Asp nebo Asn;

A¹⁷ je Met, Leu, Nle, Abu, Tle, Val, Ile, Cha, Ala, Aib, Acc nebo Nva;

A¹⁸ je Ala, Aib nebo Acc;

A¹⁹ je Val, Leu, Ile, Ala, Abu, Tle, Cha, Aib, Acc, Nle nebo Nva;

A²⁰, A²¹, A²⁹, A³⁰, A³², A³⁴, A³⁶ a A³⁸ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny skládající se z Lys, Arg, Orn, hArg a HN-CH((CH₂)_n-NH-R⁴)-C(O) nebojsou vynechány;

A²² je Tyr, p-X-Phe, Phe, Amp, //-Nal, Trp, Acc nebo je vynechán;

A²³ je Leu, Ile, Nle, Tle, Met, Val, Ala, Aib, Acc, Cha, Phe, p-X-Phe, Abu, Nva nebo je vynechán;

A²⁴je Ala, Aib, Val, Abu, Acc, Ile, Leu, Nle, Tle, Nva nebo je vynechán;

A²⁵ je Ale, Glu, Aib, Val, Abu, Acc, Ile, Leu, Nle, Nva, Tle nebo vynechán;

A²⁶ je Val, Leu, Ile, Ala, Abu, Tle, Cha, Aib, Acc, Nva, Nle nebo je vynechán;

A²⁷ je Leu, Ile, Nle, Tle, Met, Val, Ala, Aib, Acc, Nva, Cha, Phe, p-X-Phe, Abu nebo je vynechán;

A²⁸ je Gly, Aib, Acc, /7-Ala, Gaba, Ava, HN-(CH2)_m-C(0) neboje vynechán;

A³¹ je Tyr, p-X-Phe, Phe, Amp, /7-Nal, Trp, Acc neboje vynechán;

A³³ je Gin, Asn, Glu, Asp, neboje vynechán;

A³⁵ je Val, Leu, Ile, Ala, Abu, Tle, Cha, Aib, Nva, Acc, Nle nebo je vynechán;

A³⁷ je Asn, Gin, Asp, Glu, Ala, Aib, Acc nebo je vynechán;

R¹ a R² jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny skládající se z H, (C1-C30) alkyl, (C2-C30) alkenyl, phenyl-(Ci-C₃o)alkyl, naphtyl-(Ci-C₃₀)alkyl, hydroxy-(Ci-C₃₀)alkyl, hydroxy-(C2-C3o)alkenyl, hydroxy-phenyl-(Ci-C₃o)alkyl nebo hydroxy-naphthyl-(Ci-C₃₀)alkyl;

nebo jeden z R¹ a R² je COX² kde X²je (Ci-C₃o)alkyl, (C2-C30) alkenyl, phenyl-(CiC₃o)alkyl, naphtyl-(Ci-C₃o)alkyl, hydroxy-(Ci-C₃₀)alkyl, hydroxy-(C₂-C₃₀)alkenyl, hydroxy-phenyl-(Ci-C₃o)alkyl nebo hydroxy-naphthyl-(Ci-C₃o)alkyl;

R³ je OH, NH2, (Ci-C₃o)alkoxy nebo NH-Y-CH₂-Z, kde Y je (Ci-C₃o)uhlovodíková skupina a Z je CO2H nebo CONH2;

kde X je v každém případě nezávisle vybráno ze skupiny skládající se z OH, OCH₃, F, Cl, Br a CH₃;

m je v každém případě nezávisle celé číslo od 5 do 10;

n je v každém případě nezávisle celé číslo od 1 do 5; a

R⁴ je v každém případě nezávislý (Ci-C₃o)alkyl, (Ci-C₃o)acyl nebo -C((NH)(NH2)).
2. Peptid podle nároku 1, kde aspoň jedno z A⁵, A¹⁷, A¹⁸, A¹⁹, A²³, A²⁷, A²⁸ a A³⁵ je Acc nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.
3. Peptid podle nároku 2, kde aspoň jedno z A⁵, A¹⁷, A¹⁸, A¹⁹, A²³, A²⁷, A²⁸ a A³⁵ je A6c nebo A5c, nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.

99 99 999999

9 9 9 9 99

999 99 999
4. Peptid podle nároku 3, kde aspoň jedno z A⁵, A¹⁸, a A¹⁹ je A5c nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.
5. Peptid podle nároku 3, kde aspoň jedno z A¹⁷, A¹⁹, A²³, A²⁷, A²⁸ a A³⁵ je A6c, nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.
6. Peptid podle nároku 1, kde aspoň jedno z A⁴ a A²⁸ je /?-Ala, Gaba nebo Ava, nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.
7. Peptid podle nároku 6, kde aspoň jedno z A⁴ a A²⁸ je //-Ala nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.
8. Peptid podle nároku 6, kde A²⁸ je Gaba nebo Ava nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.

18 24 25 37
9. Peptid podle nároku 1, kde aspoň jedno z A , A , A a A je Aib, nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.
10. Peptid podle nároku 1, kde aspoň jedno z A¹⁶, A²⁵ a A³³ je Glu, nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.
11. Peptid podle nároku 1, kde A³⁸ je Lys-N-e-octadekanoyl.
12. Peptid podle nároku 4, kde jmenovaný peptid je [A5c⁵] hPACAP(l-38)NH2, [A5¹⁹J hPACAP(l-38)NH2, [Leu¹⁷, A5c¹⁹] hPACAP(l-38)NH₂, [Nle¹⁷, A5c¹⁹] hPACAP(l-

- 38)NH₂, [Ν-α-octadekanoyol-His¹, A5c¹⁹] hPACAP(l-38)NH₂, [A5c¹⁹, (Lys-N-ε-

- octadekanoyol)³⁸] hPACAP(l-38)NH2 a [A5c¹⁸] hPACAP(l-38)NH2. ^{13 * * *}
13. Peptid podle nároku 5, kde jmenovaný peptid je [A6c²³’²⁷] hPACAP(l-38)NH₂, [A6c¹⁷] hPACAP(l-38)NH2, [A6c¹⁹’²³] hPACAP(l-38)NH2, [A6c²³] hPACAP(l-38)NH2, [A6²⁸] hPACAP(l-38)NH2, [A6c³⁵] hPACAP(l-38)NH₂ a [A6c¹⁹] hPACAP(l-38)NH₂.

·· · · ···· ·· • · · · · ♦ · • «« * · · ·· • · · · · · · · ·
14. Peptid podle nároku 7, kde jmenovaný peptid je [/ř-Ala²⁸] hPACAP(l-38)NH2, [A5c¹⁹, β-Ala²⁸] hPACAP(l-38)NH2, a [β-Ala⁴] hPACAP(l-38)NH₂.
15. Peptid podle nároku 8, kde jmenovaný peptid je [Gaba²⁸] hPACAP(l-38)NH2 a [Ava²⁸] hPACAP(l-38)NH2.
16. Peptid podle nároku 9, kde jmenovaný peptid je [Aib³⁷] hPACAP(l-38)NH₂, [Aib²⁴,

A6c²⁷] hPACAP(l-38)NH2, [Aib¹⁸, A6c^{21 * 23}] hPACAP(l-38)NH2, [Aib¹⁸’²⁵, A6c²³] hPACAP(l-38)NH₂ a [A6c²³, Aib²⁵] hPACAP(l-38)NH₂.
17. Peptid podle nároku 10, kde jmenovaný peptid je [Glu¹⁶] hPACAP(l-38)NH2, [Glu³³] hPACAP(l-38)NH2, [Aib²⁴,Glu²⁵] hPACAP(l-38)NH₂ a [Glu³³, A6c³⁵] hPACAP(l-

-38)NH₂.
18. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje účinné množství peptidu podle patentového nároku 1 nebo farmaceuticky přijatelnou sůl a farmaceuticky přijatelný nosič.
19. Způsob ošetření cerebrovaskulární ischemie, mužské impotence, neuromotorických chorob, neuropatie, bolesti, deprese, poruchy pocitu úzkosti, mozkových traumat, zhoršení paměti, demence, poruchy vědomí, nemoci centrální nervové soustavy, migrény, neurodegenerativních nemocí, srdeční ischemie, srdečního infarktu, fibrosy, restenosy, cukrovky, svalových nemocí, žaludečních vředů, mozkových příhod, arteriosklerózy, hypertense, septického šoku, trombosy, nemoci sítnice, kardiovaskulárních nemocí, selhání ledvin nebo srdce nebo prevence neuronální smrti buněk savce, vyznačující se tím, že se podá od určitého až po savci účinného množství peptidu podle patentového nároku 1 nebo farmaceuticky přijatelné sole.
20. Způsob podle patentového nároku 19, vyznačující se tím, že nemoci centrálního nervového systému jsou Parkinsonova nemoc nebo Alzheimerova nemoc.
21. Způsob vazby receptoru PACAP u potřebných savců, vyznačující se tím, že se podá účinné množství peptidu podle patentového nároku 1 nebo farmaceuticky přijatelných solí.

9 tt »9 999 »99

99 9 9 9 9 9 99

9999 9 9 9·· • · · 9 9 9 9 9 9«

99 Λ 9 9 99 99 99 999
22. Způsob vyvolání opačného účinku receptoru PACAP u savců, vyznačující se tím, že se podá účinné množství peptidu podle patentového nároku 1 nebo farmaceuticky přijatelných solí.