CZ15098A3

CZ15098A3 - Způsob optického štěpení 2-(difenylmethyl)-N-[[2-methaxy-5-(1-methylethyl)fenyl] methyl-1-azabicyklo[2.2.2]oktan-3-aminu

Info

Publication number: CZ15098A3
Application number: CZ98150A
Authority: CZ
Inventors: Derek L. Tickner; Morgan Meltz
Original assignee: Pfizer Inc.
Priority date: 1995-07-17
Filing date: 1996-07-04
Publication date: 1999-02-17
Also published as: NZ310539A; PL324610A1; ATE250600T1; NO980211D0; HUP9900238A2; WO1997003984A1; CA2227194A1; DE69630123D1; IL122655A0; DE69630123T2; HUP9900238A3; ES2205039T3; PL184261B1; AU697553B2; KR19990029058A; EP0840735A1; JP3043074B2; JPH10511102A; MX9800538A; US6008357A

Description

Oblast techniky

Vynález se týká způsobu optického štěpení 2(dif eny lmethy 1) — N— £ [ 2-methoxy-5-( 1-methylethyl) fenyljmethyl ]-1-azabicyklo[2.2.2]oktan-3-aminu.

Dosavadní stav techniky

Výše uvedená sloučenina (zde označovaná také jako racemát) a (2S,3S)-enantiomer této sloučeniny (zde také označovaný jako ”(2S,3S)-enantiomer”) jsou antagonisty receptoru látky P, užitečné pro léčbu a prevenci široké palety poruch centrálního nervového systému a gastrointestinálních, zánětlivých a jiných chorob. Racemát a (2S,3S)enantiomer, jakož i způsoby, jimiž je možno tyto sloučeniny připravovat, jsou uvedeny v US patentové přihlášce č. 08/211 120, podané 23. května 1994, jako národní fáze mezinárodní patentové přihlášky PCT/US92/03317, podané 28. dubna 1992. Výše uvedené sloučeniny i způsoby, jimiž lze tyto sloučeniny připravovat, jsou genericky popsány v US patentu č. 5 .162 339 vydaném 10. listopadu 1992. Tyto dokumenty jsou zde citovány náhradou za přenesení celého jejich obsahu do tohoto textu.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je způsob optického štěpení 2-(difenylmethyl)-N- [ [ 2-methoxy-5- (1-methylethyl) f enyl ] methyl]-1-azabicyklo[2.2.2]oktan-3-aminu, jehož podstata spočívá v tom, že se 2-(difenylmethyl)-N-[[2-methoxy-5............- (i-methy le thy 1) f enyl ] methyl ] -l-azabicyklo[2.2.2loktan'** . i. ..u ^—..3-amin-nechá reagovat s IR-(-)rlOrkafrsulfonoyou kyselinou ve vhodném rozpouštědle za vzniku soli této kafrsulfonové kyseliny s (2S,3S)-2-(difenylmethyl)-N-[[2-methoxy-5-(lmethylethyl)fenyl]methyl]-l-azabicyklo[2.2,2]-oktan-3aminu, která se poté popřípadě hydrolyzuje, čímž se získá volná báze (2S,3S)-enantiomeru.

Jako rozpouštědla pro výše popsané štěpení je možno použít jakéhokoliv rozpouštědla schopného rozpouštět jak racemát tak štěpící činidlo, kafrsulionovou kyselinu a schopné selektivně, vzhledem k (2S,3S)-enantiomeru, roz- pouštět-kafrsulfoňátovou súl odpovídajícího (2R,3R)-enantiomeru. Jako příklady takových rozpouštědel je možno uvést acetonitril, aceton a ethanol. Přednost se dává acetonitrilu.

Kafrsulfoňátovou sůl (2S,3S)-enantiomeru získanou výše popsaným způsobem optického štěpení je možno za účelem zvýšení optické čistoty produktu popřípadě resuspendovat, jak je to například uvedeno v část B odstavci 2 příkladu.

Následuje podrobnější popis vynálezu.

V následujícím schématu 1 je znázorněn postup, kterým je možno připravovat racemát. V následujícím schématu ;2 je znázorněno optické-štěpení racemátu za vzniku kafrsulfonátové soli (2S,3S)-enantiomeru. Ve schématu 3 je znázorněno štěpení kafrsulfonátové soli (2S,3S)-enantiomeru za vzniku opticky aktivní volné báze tohoto enantiomeru.

• · · ·*·*

Schéma 1

(III)

- 4 -h*

schéma 2

• · « · t · •·· ···♦ (III)

(IV) • »

Schéma 3 « « · » 4 • »· ··»#

(V)

Při postupu podle schématu 1 je racemát možno připravovat následujícím dvoustupňovým postupem. První stupeň zahrnuje dehydrataci sloučeniny vzorce I reakcí se sloučeninou vzorce II za přítomnosti katalytického množství kafrsulfonové kyseliny a za použití sušicího činidla nebo zařízení určeného pro azeotropické odstraňování vznikající vody (například molekulárního síta nebo Dean Stárková odlučovače) za vzniku iminového meziproduktu vzorce VIII

(VIII)

Jako vhodná rozpouštědla pro tuto reakci je možno uvést toluen, dičhlormethan, benzen a xyleny. Jako vhodný systém sušicí činidlo/rozpouštédlo je možno uvést síran horečnatý, chlorid titaničitý/dichlormethan, titaniumisopropoxid/di chlormethan a molekulární síto/tetrahydrofuřan. Přednost se dává síranu horečnatému. Pokud se použije Dean-Starkova odlučovače, je přednostním rozpouštědlem toluen. Uvedená reakce se může provádět při teplotách od asi 25“C do asi 110°C. Přednost se dává teplotě zpětného toku použitého rozpouštědla.

Jako příklady jiných katalyzátorů, kterých lze použit namísto kafrsulfonové kyseliny, je možno uvést methansulfonovou kyselinu a p-toluensulfonovou kyselinu.

* ·

Iminový meziprodukt je možno nechat reagovat in • situ~(-jak je to popsáno v příkladu), nebo po^izolaci, .s.redukčním činidlem, jako triacetoxyborhydridem sodným, kyanborhvdridem sodným, tetrahydroboritanem sodným nebo vodíkem za přítomnosti katalyzátoru obsahujícího kov, zinkem v prostředí kyseliny chlorovodíkové, boran-dimethylsulfidovým komplexem nebo kyselinou mravenčí, za vzniku racemátu. Jako vhodná rozpouštědla inertní vůči této reakci je možno uvést neketonová rozpouštědla. Takovými rozpouštědly jsou například nižší alkoholy (například methanol, ethanol a isopropylalkohol), kyselina octová, chloroform, isopropylether, methylenchlorid, tetrahydrofuran (THF) a kombinace výše uvedených rozpouštědel, jako je například kyselina octová v tetrahydrofuranu nebo kyselina octová v methylenchloridu. Uvedená reakce se obvykle provádí při teplotě od asi 0 do asi 30°C, přednostně od asi 0 do asi 10°C. Pokud je redukčním činidlem triacetoxyborhydrid sodný, použije se přednostně jiného rozpouštědla, než je nižší alkohol.

V přednostním provedení je redukčním činidlem triacetoxyborhydrid sodný a rozpouštědlem kyselina octová v tetrahydrofuranu.

Stupeň optického štěpení, znázorněný ve schématu 2, zahrnuje reakci 2-(difenylmethyl)-N-[[2-methoxy-5-(1methylethyl)fenyl]methyl]-l-azabicyklo[2.2.2]oktan-3-aminu s lR-(-)-10-kafrsulfonovou kyselinou v rozpouštědle schopném rozpouštět obě reakční činidla a selektivně (tj. přednostně) vzhledem k (2S,3S)-enantiomeru rozpouštět kafrsulfonátovou sůl odpovídajícího (2R,3R)-enantiomeru a míchání směsi za vzniku opticky aktivní kafrsulfonátové soli (2S,3S)-2-(difenylmethyl)-N-[[2-methoxy-5-(1-methylethyl)fenyl]methyl]- l-azabicyklo[2.2.2]oktan-3-aminu. Tuto sůl je možno následně izolovat za použití obvyklých podstupů (například podle části B odstavce 1 příkladu tak, že se

• *	•	9 > 9 »
« ·	• ·	« · · 4«·· ·
» 9	9	b · · · ·
• »	9	··· ««·· ·· ··

reakční směs několik hodin míchá, sraženina se odfiltruje, filtrační koláč se promyje a vysuší za vakua). ~

Výše popsané optické štěpení se přednostně provádí pod atmosférou dusíku. Reakční teplota může ležet v rozmezí od asi 10 do asi 50°C. Vyšších teplot z tohoto rozmezí se použije, dává-li se přednost optické čistotě nad výtěžkem, a teplot z dolní hranice tohoto rozmezí se použije, pokud se upřednostňuje výtěžek nad optickou čistotou.

Kafrsulfonátovou sůl (2S,3S)-enantiomeru získanou výše popsaným postupem optického štěpení je popřípadě možno resuspendovat, jak je to například uvedeno v části B odstavci 2 příkladu, aby se zvýšila optická čistota produktu.

Kafrsulfonátovou sůl (2S,3S)-2-(difenylmethyl)-N[[2-methoxy-5-(l-methylethyl)fenyl]methyl]-l-azabicyklo[2.2.2]oktan-3-aminu je také popřípadě možno hydrolyzovat postupem znázorněným ve schématu 3, za vzniku volné báze (2S_t3S)-enantiomeru. Tuto hydrolýzu lze provádět tak, že se vzniklá sůl nechá reagovat s vhodným alkalickým činidlem za použití postupů dobře známých odborníkům v tomto oboru. Tak je například možno opticky aktivní sraženinu rozdělit mezi dichlormethan a vodnou bázi, jako je hydroxid sodný nebo draselný nebo uhličitan draselný. Alternativně je možno alkoholický roztok sraženiny míchat s bázickou ionexovou pryskyřicí. Volnou bázi získanou ve.formě roztoku,_je poté možno izolovat nebo v roztoku převést na odpovídající hydrochloridovou sůl nebo jinou požadovanou adiční sůl s kyselinou.

Racemát je možno připravovat také jiným postupem, jehož popis následuje. (Tohoto postupu je také možno použít pro přípravu (2S,3S)- nebo (2R,3R)~enantiomeru.)

kde X přestavuje atom vodíku nebo methoxyskupinu; vykazující stejnou absolutní stereochemii jako požadovaný produkt, hydrolyticky odstraní benzylskupina nebo methoxybenzylskupina za vzniku odpovídající sloučeniny vzorce VI

(VI) která vykazuje stejnou požadovanou stereochemii, načež se takto připravená sloučenina nechá reagovat s aldehydem vzorce VII

(VII) za přítomnosti redukčního činidla.

i * ♦ · Φ *	• •	«	« · ·· · ♦ * « * · * ♦
• »	4		····«·« · · ··

Hydrolytické odstraňování benzylskupiny nebo methoxybenzylskupiny se obvykle provádí za použití silné, .minerální kyseliny, jako kyseliny chlorovodíkové, bromovodíkové nebo jodovodíkové, přibližně při teplotě místnosti až teplotě zpětného toku kyseliny. Tato reakce se přednostně provádí v kyseliny bromovodíkové při teplotě zpětného toku. Obvyklá reakční doba je asi 2 hodiny.

Namísto výše popsaného hydrolytického odstraňování benzylskupiny nebo methoxybenzylskupiny je možno použít hydrogenolytického odstraňování těchto skupin. Hydrogenolytické odstraňování se obvykle provádí za použití vodíku za přítomnosti katalyzátoru obsahujícího kov, jako je platina nebo palladium. Tato reakce se obvykle provádí v rozpouštědle inertním vůči reakci, jako je kyselina octová nebo nižší alkohol, při teplotě od asi 0°C do asi 50’C. Alternativně lze benzylskupinu nebo methoxybenzylskupinu také odstraňovat tak, že se sloučenina vzorce II nechá reagovat s rozpouštějícím se kovem, jako lithiem nebo sodíkem v amoniaku při teplotě asi -30 až asi 78^qC, nebo s formiátovou solí za přítomnosti palladia, nebo s cyklohexanem za přítomnosti palladia.

Benzylskupina nebo methoxybenzylskupina se přednostně odstraňuje tak, že se sloučenina vzorce XI nechá reagovat s vodíkem za přítomnosti hydroxidu palladnatého na uhlíku v methanolu obsahujícím kyselinu chlorovodíkovou při teplotě asi 25’C.

Výslednou sloučeninu vzorce VI je možno převést na požadovaný racemát (nebo enantiomer) reakcí s aldehydem vzorce VII za přítomnosti redukčního činidla. Tato reakce se obvykle provádí za použití redukčního činidla, jako natriumkyanborhydridu, triacetoxyborhydridu sodného, tetrahydroboritanu sodného, vodíku za přítomnosti katalyzátoru obsahují11

•	*		·« · ♦ ♦ ♦	•	•
*		•	• * a ·
a		• ♦	Φ · * ···	a	•
• .	á	•	». · ·	•	•
a	•		• »· a··· ··	··

čího kov, zinku a kyseliny chlorovodíkové, borandimethylsulfidového komplexu nebo kyseliny mravenčí při teplotě od asi -60’C do asi 50 °C. Jako vhodná rozpouštědla inertní vůči této reakci je možno uvést neketonová rozpouštědla, jako a isopropylalkohol), kyselinu octovou, methylenchlorid, tetrahydrofuran (THF) a kombinace výše uvedených rozpouštědel . V přednostním provedení se reakce provádí v methylenchloridu, jako rozpouštědle, při teplotě asi 25 °C za použití triacetoxyborhydridu sodného, jako redukčního činidla.

Alternativně je reakci sloučeniny vzorce VI se sloučeninou vzorce VII možno provádět za přítomnosti sušicího činidla nebo zařízení určeného pro azeotropické odstraňování vznikající vody, za vzniku iminu vzorce VIII

(VIII) který se dále nechá reagovat s výše uvedeným redukčním činidlem, přednostně triacetoxyborhydridem sodným při teplotě místnosti. Imin se obvykle připravuje v rozpouštědle inertním vůči reakci, jako benzenu, xylenech nebo toluenu, přednostně v toluenu, při teplotě od asi 25 do asi 110’C, přednostně při teplotě zpětného toku použitého rozpouštědla. Jako vhodné systémy sušicí činidlo/rozpouštědlo je možno uvést chlorid titaničitý/dichlormethan, titaniumisopropo- 12 -

i · *	• · · ·	•
» b «	• ♦	*
• · ♦ *	• ♦ *	• Φ
• » B	> ♦
•» ·	« · * · · · ·	• e

·· · xid/dichlormethan a molekulární síto/tetrahydrofuran. Přednost se dává systému chlorid titaničitý/dichlormethan.

Racemát (a oba enantiomery) je také možno připravovat ze sloučeniny vzorce VI se stejnou stereochemií reakcí se sloučeninou obecného vzorce IX

kde L představuje vhodnou odstupující skupinu (například chlor, brom, jod nebo methansulfonátovou skupinu). Tato reakce se obvykle provádí v inertním rozpouštědle, jako dichlormethanu nebo tetrahydrofuranu, přednostně dichlormethanu, při teplotě od asi 0 do asi 60°C, přednostně při asi 25°C.

Racemát (a oba enantiomery) je také možno připravovat ze sloučeniny vzorce VI se stejnou stereochemií tak, že se sloučenina vzorce VI nechá reagovat se sloučeninou obecného vzorce X

(X) kde L má výše uvedený význam nebo představuje imidazolovou skupinu, a výsledný amid se poté redukuje. Tato reakce se obvykle provádí v inertním rozpouštědle, jako tetrahydro-

* · * · • · ·

«. « ··· ·♦·· furanu nebo dichlormethanu při teplotě od asi -20 do asi 60°C, přednostně v dichlormethanu při asi 0^ec. Výsledný amid se redukuje působením redukčního činidla, jako boran-dimethylsulfidového komplexu, lithiumaluminiumhydridu nebo diisobutylaluminiumhydridu, v inertním rozpouštědle, jako ethyletheru nebo tetrahydrofuranu. Reakční teplota leží v rozmezí od asi 0*0 do asi teploty zpětného toku použitého rozpouštědla. V přednostním provedení se redukce provádí za použití boran-dimethylsulfidového komplexu v tetrahydrofuranu při asi 60‘C.

Racemát a (2S,3S)-enantiomer mají bázickou povahu, a jsou tedy schopny tvořit řadu různých solí s anorganickými a organickými kyselinami. Přestože tyto.soli musí být pro podávání živočichům farmaceuticky vhodné, často je v praxi.

žádoucí izolovat účinnou sloučeninu z reakční směsi nejprve ve formě farmaceuticky nevhodné soli, potom tuto nevhodnou' sůl převést na volnou bázi zpracováním alkalickým činidlem a nakonec převést vzniklou volnou bázi na farmaceuticky vhodnou adiční sůl s kyselinou. Adiční soli racemátu a (2S,3S)-enantiomeru s kyselinami se snadno vyrábějí tak, že se na bázickou sloučeninu působí v podstatě ekvivalentním množstvím zvolené minerální nebo organické kyseliny ve vodném rozpouštědlovém prostředí nebo ve vhodném organickém rozpouštědle, jako je methanol nebo ethanol. Požadovanou pevnou sůl je pak možno získat po šetrném odpaření rozpouštědla.

Racemát a (2S,3S)-enantiomer a jejich farmaceuticky vhodné soli (dále označované také jako účinné sloučeniny) vykazuji vazebnou aktivitu vůči receptoru látky P, a proto jsou cenné při léčení nebo prevenci klinických stavů nebo poruch u savců, včetně člověka, kde je toto léčení nebo prevenci možno uskutečnit nebo usnadnit snížením neurotransmise zprostředkované látkou P. Takovými stavy jsou choroby

• · • · ·

« « * • »4 zvolené ze souboru zahrnujícího zánětlivé choroby (například arthritis, psoriasis, asthma a zánětlivou chorobu střev), úzkost, depresi a dysthymické poruchy, kolitis, emesis, psychosu, bolest, alergie, jako jsou ekzémy a rhinitis, chronické obstrukce dýchacích cest, poruchy z přecitlivělosti, jako například poruchy způsobené jedem břečťanu, hypertensi, vasospastické choroby, jako je angina, migréna a Raynaudova choroba, fibrosní a kolagenosní choroby, jako je scleroderma a eosinofilní fascioliasis, reflexní sympatická dystrofie, jako je syndrom rameno/ruka, narkomanie, jako alkoholismus, somatické poruchy spojené se stresem, periferní neuropathie, neuralgie, neuropatologické poruchy, jako je Alzheimerova choroba, demence spojená s AIDS, diabetická neuropathie a roztroušená sklerosa, spáleniny od slunce, mrtvice, oční prouchy, poruchy spojené se zvýšením, nebo potlačením imunity, jako je systemický lupus eřythematosus stavy zapříčiněné nebo zprostředkované angiogenesí nebo zahrnující angiogenesi jako symptom, a rheumatické choroby, jako je fibrositis.

Účinné sloučeniny je možno podávat orální, parenterální nebo topickou cestou. Obvykle se tyto sloučeniny nej vhodně ji podávají v dávkách v rozmezí od asi 0,5 mg do asi 500 mg za den, přestože se samozřejmě budou vyskytovat kolísání těchto dávek v závislosti na hmotnosti a stavu léčeného pacienta a konkrétně zvolené cestě podávání. Nicméně mohou existovat i variace těchto dávek v závislosti na druhu ošetřovaného živočicha a jeho individuální odpovědi na podávání léčiva, jakož i na typu zvoleného farmaceutického prostředku a období a intervalu, v němž se toto podávání provádí. V některých případech může být výhodnější nižší úroveň dávkování, než je výše uvedená spodní hranice, zatímco v jiných případech může být vhodnější použít i dávek přesahujících výše uvedenou horní hranici, aniž by to vyvolalo nějaké škodlivé vedlejší účinky, za předpokladu, * ···♦ že takové vyšší dávky se nejprve rozdělí do několika menších dílčích dávek, jejichž podání se rozloží v průběhu dne.

Účinné sloučeniny se mohou podávat samotné nebo v kombinaci s farmaceuticky vhodnými nosiči nebo ředidly některou ze tří výše uvedených cest, přičemž se může podávat jedna nebo více dávek. Tyto sloučeniny je možno podávat ve formě nejrůznějších dávkovačích forem, tj. farmaceutických prostředků, v nichž jsou smí seny s různými farmaceuticky vhodnými inertními nosiči a zpracovány do podoby tablet, tobolek, pastilek, tvrdých bonbonů, prášků, sprejů, krémů, salves, čípků, želé, gelů, past, lotionů, mastí, vodných suspenzí, injekčních roztoků, elixírů, sirupů apod. Takové nosiče zahrnuji pevná ředidla nebo plniva, sterilní vodná, média a různá netoxická organická rozpouštědla atd. Farmaceutické prostředky pro orální podáváni mohou kromě toho přídavně obsahovat sladidla a/nebo aromatizačni přísady. Účinné sloučeniny nebo jejich farmaceuticky vhodné soli jsou v takových dávkovačích formách zpravidla přítomny v koncentraci v rozmezí od asi 5,0 do asi 70 % hmotnostních.

Pro orální podávání se může použít tablet obsahujících různé excipienty, jako je mikrokrystalická celulosa, citran sodný, uhličitan vápenatý, dikalciumfosfát a glycin, spolu s různými rozvolňovadly, jako je škrob (přednostně kukuřičný, bramborový nebo tapiokový škrob), kyselina alginová a určité komplexní silikáty a gránulačními pojivá, jako je polyvinylpyrrolidon, sacharosa, želatina a klovatina. Pro tabletovací účely mohou být přídavně přítomna lubrikační činidla, jako je stearan horečnatý, natriumlaurylsulfát a mastek. Pevné prostředky podobného typu mohou být také přítomny jako náplně v želatinových tobolkách. V tomto případě obsahují použité prostředky přednostně také laktosu nebo vysokomolekulární polyethylenglykoly. Při výrobě vodných suspenzí a/nebo elixírů, které se hodí pro orální

• · • » • · ··«

podávání, se může účinná přísada mísit s různými sladidly nebo aromatizačními látkami, barvicími přísadami či barvivý a - pokud je to zapotřebí - emulgátory a/nebo suspenzními činidly a dále také takovými ředidly, jako je voda, ethanol, propylenglykol, glycerol a jejich různé kombinace.

Pro parenterální podávání se může použít roztoků terapeuticky užitečných sloučenin podle vynálezu bud v sezamovém nebo arašídovém oleji, nebo ve vodném propylenglykolu. Vodné roztoky by měly být účelně pufrovány (přednostně na pH vyšší než 8), pokud je to nutné a kapalné ředidlo by mělo být nejprve isotonizováno. Takové vodné roztoky se hodí pro intravenosní injekční podávání, olejoví té roztoky se hodí pro intraartikulární, intramuskulární a subkutánní injekční podávání. Výroba všech takových roztoků za sterilních podmínek se snadno provádí standardními farmaceutickými technologiemi, které jsou dobře známy odborníkům v tomto oboru.

Účinné sloučeniny je také možno podávat topicky při léčbě zánětlivých chorob kůže, a to se může přednostně? provádět za použití krémů, želé, gelů, past, mastí apod., které se vyrábějí podle standardních farmaceutických technologií.

Účinnost účinných sloučenin, jako antagonistů receptoru látky P, je možno stanovit na základě jejich schopnosti inhibovat vazbu látky P v místě jejích receptorů v kaudátové tkáni hovězího dobytka za použití radioaktivních ligandů pro vizualizaci receptorů tachykininu při autoradiografii. Antagonistickou účinnost účinných sloučenin vzhledem k látce P je možno vyhodnotit za použití standardního zkušebního postupu popsaného v M. A. Cascieri et al., Journal of Biological Chemistry, sv. 258, str. 5158 (1983). Tato metoda je v podstatě založena na stanovení koncentrace


		• ·	• · » »	•	•
• ·	•	•	♦ * ·	··
• «	1 9	•	« « ·♦·	•	•
• ·	•	•	• »	•	•
·«	•		···♦ ··	• ·

účinné sloučeniny podle vynálezu, které je zapotřebí pro 50% snížení množství radioizotopem značených ligandů látky P v místech jejích receptorů v izolované hovězí tkáni. Tak se získají charakteristické hodnoty IC₅₀ pro zkoušenou sloučeninu.

Při tomto postupu se hovězí kaudátová tkáň vyjme z mrazáku, kde se udržuje teplota -70'C, a homogenizuje se v ledově chladném 50mM Tris [tj. trimethaminhydrochloridovém (2-amino-2-hydroxymethyl-l,3-propandiolhydrochloridovém) ] pufru o pH 7,7 v poměru 1 hmotnostní díl tkáně na 50 objemových dílů pufru (kde hmotnostní díly a objemové díly se mají k sobě stejnými způsobem jako gram a mililitr). Homogenát se centrifuguje při 30 000 x g po dobu 2Ó minut. Vzniklá peleta se resuspenduje v 50 objemových dílech Tris pufru, rehomogenizuje a znovu centrifuguje dalších 20 minut při 30 000 x g. Získaná peleta se resuspenduje ve 40 objemových dílech ledově chladného 50mM Tris pufru (pH 7,7) s obsahem chloridu vápenatého (2mM), chloridu horečnatého (2mM), bacitracinu (40 g/ml), leupeptinu (4 ^g/ml), chymostatinu (2 μg) a hovězího sérového albuminu (200 g/ml). Tímto stupněm je zakončena výroba tkáňového přípravku.

Potom se provede vazba radioligandu za použití následujícího postupu: reakce se zahájí přídavkem 100 μΐ ΙμΜ přípravku zkoušené sloučeniny s následným přidáním 100 μΐ 0,5mM přípravku radioaktivního ligandu a nakonec přidáním 800 μΐ tkáňového přípravku vyrobeného výše uvedeným způsobem. Celkový objem je tedy 1,0 ml a reakční směs se promísí vířením a inkubuje při teplotě místnosti (asi 20^ec) po dobu 20 minut, obsah zkumavek se přefiltruje za použití zařízení pro sklizeň buněk a skleněné vláknité filtry (Whatman GF/B) se 4 x promyjí 50mM Tris pufrem (pH 7,7), přičemž před filtračním postupem se filtry předběžně 2 hodiny máčí. Radioaktivita se

• · •· * * •♦ •· « ···· •« · « •· ·· ··· φ· • ·· • · ·· stanoví v počítači Beta (účinnost počítání 53 %) a hodnoty ICgQ se vypočítají standardními statistickými metodami.

Antipsychotická účinnost účinných sloučenin jako neuroleptických činidel pro regulaci různých psychotických poruch je možno stanovit především pomocí studie jejich schopnosti potlačit hypermotilitu morčete indukovanou látkou P nebo agonistou látky P. Tato studie se provádí tak, že se morčatům nejprve podá kontrolní sloučenina nebo vhodná zkušební sloučenina podle vynálezu a potom se morčatům injekčně podá intracerebrální kanylou látka P nebo agonista látky P, načež se měří individuální lokomotorická odpověď na tento stimul.

Vynález je blíže objasněn v následujícím příkladu provedení. Tento příklad má výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezuje.

Příklad provedení vynálezu

Příklad

A. 2-(Difenylmethyl)-N-[[2-methoxy-5-(l-methylethyl)fenyl]methyl]-l-azabicyklo[2.2.2]oktan-3-amin

Do 125ml tříhrdlé baňky vybavené mechanickým míchadlem, přívodem dusíku, Dean-Stárkovým odlučovačem a zpětným chladičem se předloží 10 g 2-difenylmethyl-lazabicyklo[2.2.2]oktan-3-oxidu (34,3 mmol, 1 ekvivalent), 6,89 g l-methoxy-2-aminomethyl-4-isopropylbenzenu (38,43 mmol, 1,12 ekvivalentu), 16 mg lR-(-)-10-kafrsulfonové kyseliny (0,069 mmol, 0,002 ekvivalentu) a 45 ml toluenu. Výsledná suspenze se v olejové lázni zahřívá ke zpětnému toku (11O°C). Po 3hodinovém refluxování se zjistí, že v Dean-Starkově odlučovači se shromáždilo asi 0,6 ml vody.

4 ·	4	• 4*4	4 4	4	•
«	♦	•	• 4	« 4	• 4
• ·	• ·	• 4	• ···	4	•
•	•	•	4 4	4	•	•
··	•	+··«·«·	«4	4«

Reakční směs se nechá zchladnout na teplotu okolí, 14 hodin míchá, převede do jednohrdlé nádoby a odpaří v rotačním odpařováku na objem asi 24 ml. Zkoncentrovaná směs se přikape do 200ml tříhrdlé baňky vybavené mechanickým míchadlem, teploměrem a přívodem dusíku, která obsahuje 18,18 g (85,77 mmol, 2,5 ekvivalentu) triacetoxyborhydridu sodného a 10,3 g (171,55 mmol, 5 ekvivalentů) kyseliny octové v 60 ml tetrahydrofuranu předem ochlazené v lázni z ledu a vody na 0°C. Přídavek toluenového koncentrátu je dokončen po 7 minutách a vnitřní teplota se zvýší na +10°C. Ledová lázeň se odstaví a výsledná heterogenní reakční směs se nechá zahřát na teplotu okolí (24°C), 14 hodin míchá. Reakce se sleduje chromatografií na tenké vrstvě za použití 100% ethylacetátu a směsi ethylacetátu a methanolu v poměru 2:1, jako elučního činidla.

Poté se reakční směs odpaří v rotačním odpařováku na objem asi 40 ml a zředí 150 ml dichlormethanu. Dichlormethanová směs se za míchání magnetickým míchadlem přidá ke 200 ml vody. Výsledná směs se 15 minut míchá a postupným přídavkem 25% roztoku hydroxidu sodného se její pH zvýší ze počátečních 4,0 na 11,0. Organická á vodná fáze se oddělí. Alkalická vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (1 x 70 ml). Spojené organické vrstvy se 1 hodinu suší bezvodým síranem hořečnatým. Sušicí činidlo se odfiltruje a filtrát se zkoncentruje v rotačním odpařováku na objem asi 100 ml. K výslednému koncentrátu sé přidá 160 ml 2-propanolu a propanolická směs se znovu zkoncentruje v rotačním odpařováku na objem asi 100 ml. Konečný koncentrát se magneticky míchá při teplotě okolí a po 15 minutách se vyloučí bílá sraženina. Vzniklá suspenze se 2 hodiny nechá granulovat a bílá pevná látka se oddělí filtrací. Filtrační koláč se promyje 2-propanolem a vysuší za vakua. Získá se 7,68 g (výtěžek 49 %) sloučeniny uvedené v nadpisu o teplotě tání 111 až 115°C.

« · • ·

* · · 9 • 9 99

9 *

♦ ·*♦·

Zkouška pevné látky pomocí HPLC se provede na zařízení Hewlett Packard (kapalinové chromatogramy série 2) za použití sloupce Zorbax CN, UV detektoru (230 nm) a směsi 55 % acetonítrilu a 45 % vody (s obsahem 0,1 % kyseliny orthofosforečné + 0,2 % triethylaminu (TEA)), jako mobilní fáze, při rychlosti eluce 1 ml/min. Analýza ukáže přítomnost pouze transdiastereomeru v 90 % čistotě.

B. (lR)-(-)-10-Kafrsulfonátová sůl (2S,3S)-2-(difenylmethyl)N-[[2-methoxy-5-(1-methylethyl)fenyllmethy1]-1-azabicyklo[2.2.2]oktan-3-aminu

Do 125ml tříhrdle baňky vybavené magnetickým míchadlem á přívodem dusíku se uvede 5,11 g 2-(difenylmethyl)N-[[2-methoxy-5-(l-methylethyl)fenyl]methyl]-l-azabicyklo[2.2.2]oktan-3-aminu (11,24 mmol, 1 ekvivalent) a 51 ml acetonitrilu. K výsledné částečné suspenzi se v jedné dávce přidá 2,61 g (lR)-(-)-10-kafrsulfonové kyseliny (11,24 mmol, 1 ekvivalent). Reakční směs se stane homogenní. Po pětiminutovém míchání při teplotě okolí se vyloučí sraženina a k reakční směsi se přidá dalších 5 ml acetonitrilu.

Vzniklá směs se 4 hodiny míchá, načež se z ní filtrací oddělí pevná látka a filtrační koláč se promyje (2x6 ml) acetonitrilem a vysuší za vakua. Získá se bílá pevná látka (2,97 g, celkový výtěžek 38,5 %, výtěžek požadované enantiomerní soli 77 %) o teplotě tání 177 až 182°C.

Surová sůl (2,97 g) se podrobí zkoušce pomocí HPLC na sloupci Chrom Těch Chiral-AGP, za použití směsi 0,01M dihydrogenfosforečnanu draselného (pH = 5,5) a acetonitrilu v poměru 85 : 15 (objemově), jako mobilní fáze. Detekce se provádí UV světlem o vlnové délce 229 nm, při rychlosti eluce 1 ml/min a vstřikovaném objemu 20 μΐ. Zkouška ukáže přítomnost 95,7 % požadovaného enantiomeru a 4,3 % nežádoucího enantiomeru.

« · 9 9

9 99

999 * · • 9 9 ·

·· 9 ·

«9 •9 *99····

Do 35ml baňky vybavené magnetickým míchadlem se uvede 2,87 g surové soli získané výše popsaným postupem a 20 ml acetonitrilu. Výsledná suspenze se 5 hodin míchá při teplotě okolí. Pevná látka se odfiltruje, promyje acetonitrilem (2 x 3 ml) a vysuší za vakua, získá se 2,8 g (97 % hmotnostních teorie) bílé pevné látky o teplotě tání 180 až 185°C.

Resuspendovaná sůl (2,8 g) se podrobí zkoušce pomocí HPLC na sloupci Chrom Těch Chiral-AGP, za použití Směsi 0,01M dihydrogenfosforečnanu draselného (pH = 5,5) a acetonitrilu v poměru 85 : 15 (objemově), jako mobilní fáze. Detekce se provádí UV světlem o vlnové délce 229 nm, při rychlosti eluce 1 ml/min a vstřikovaném objemu 20 μ,Ι. - Zkouška ukáže přítomnost 96,6 % požadovaného enantiomeru a 3,4 % nežádoucího enantiomeru.

Optická rotace resuspendované soli se stanoví na polarimetru Perkin Elmer 241 za použití zdroje sodíkového světla (589). Resuspendovaná sůl (44,9 mg) se rozpustí v 10 ml methanolu a vzniklého roztoku se použije k naplnění 5ml. 10cm kyvety.

[a]²⁵ _D = -26,06°

C. (2S,3S)-2-(Difenylmethyl)-N-[(2-methoxy-5-(l-methylethyl)fenyl]methyl]-l-azabicyklo[2.2.2]oktan-3-amin

Do lOOml Erlenmayerovy baňky vybavené magnetickým míchadlem se uvede 2,63 g (3,83 mmol) resuspendované soli ze stupně B, 32 ml dichlormethanu a 16 ml vody, čímž se získá homogenní dvoufázový roztok. Vodná vrstva o pH 4,0 se přikapáním 25% roztoku hydroxidu sodného zalkalizuje na pH 11,00. Poté se obě vrstvy 15 minut míchají. Vrstvy se oddělí? organická vrstva se promyje vodou (1 x 16 ml), oddělí se vrstvy a organická vrstva se 1 hodinu suší bezvodým síranem

		— ««		wv
*	•	•	• 4 4 4	4 ·	9	4
Λ 4	•	• ·	• 4	• 4
•	•	• 4	• 4	• 44·	4	4
A	•	•	4 4	4	•	4
• 4	•	»4» ····	• 4	44

sodným, načež se sušicí činidlo odfiltruje. Poté se organická vrstva odpaří za vzniku směsi pěny a oleje, která během dvoudenního stání při teplotě okolí vykrystaluje.

Získá se požadovaný produkt (1,659 g, výtěžek 95,3 %) o teplotě tání 100 až 103°C.

Zkouška pomocí chirální HPLC na sloupci Chrom Těch Chiral-AGP (100 mm x 4,0 mm, 5 μιη) se provádí za použití směsi 0,01M dihydrogenfosforečnanu draselného (pH = 5,5) a acetonitrilu v poměru 85 15 (objemově), jako mobilní fáze. Detekce se provádí UV světlem o vlnové délce 229 nm, při rychlosti eluce 1 ml/min a vstřikovaném objemu 20 μΐ. Zkouška ukáže přítomnost 99,5 % požadovaného enantiomeru a 0,5 % nežádoucího enantiomeru..

Čistota se stanoví pomocí HPLC za použití sloupce Zorbax Rx C-8 (15 cm x 4,6 mm (vnitřní průměr)) a směsi acetonitrilu, vody, triethylaminu a kyseliny fosforečné v objemovém poměru 650 : 350 *. 3 : 1, jako mobilní fáze. Detekce se provádí UV světlem o vlnové délce 229 nm, průtok je 2,0 ml/min a vstřikovaný objem je 20 μΐ. Touto zkouškou se zjistí, že produkt vykazuje 99,5% čistotu.

Optická rotace opticky aktivního konečného produktu ve formě volné báze se stanoví na polarimetru Perkin Elmer 241 za použití zdroje sodíkového světla (589). Získaná sloučenina (52,4 mg) se rozpustí v 10 ml methanolu a vzniklého roztoku se použije k naplněni 5ml lOcm kyvety. [a]²⁵ _D = -9,27’

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY (±)1. Způsob optického štěpení racemického (2R,3Ri 2S,3S)-2-(difenylmethyl)-N-[[2-methoxy-5-(1-methylethyl)fenyl]methyl]-l-azabicyklo[2.2.2]oktan-3-aminu obecného strukturního vzorce III

1) uvedený racemát nechá kafrsulfonovou kyselinou obecného reagovat s lR-(-)-10strukturního vzorce

2-(difenylmethyl)-N-[[2-methoxy-5-(l-methylethyl)fenyl]methyl]-lazabicyklo[2.2.2]oktan-3-aminu obecného strukturního vzorce V '3 (V) vyznačující se tím, že se

A) racemický (+)-(2S,2R)-2-difenylmethyl-l-azabicyklo[2.2.2]oktan-3-oxid obecného strukturního vzorce I ’N (I) nechá reagovat s l-methoxy-2-aminomethyl-4-isopropylbenzenem obecného strukturního vzorce II (II) za vzniku racemického (+)-(2S,3R; 2S,3S)-2-(difenylmethyl)N-[ [ 2-methoxy-5-(1-methylethyl)fenylJmethyl ]-1-azabicyklo[2.2.2]oktan-3-aminu obecného strukturního vzorce III (III)

B) uvedený racemát získaný v předchozím stupni se opticky štěpí reakcí s lR-(-)-10-kafrsulfonovou kyselinou obecného strukturního vzorce v rozpouštědlovém systému schopném rozpouštět uvedené reakční složky zahrnující racemát a kyselinu kafrsulfonovou za selektivního rozpouštění v podstatě pouze výsledné soli opticky aktivní kafrsulfonové kyseliny (2R,3R)-enantiomerní složky uvedeného racemátu, zatímco izolace uvedené ·· · • ♦ ·

- 27 (2S,3S)-enantiomerní složky uvedeného racemátu se provádí vysrážením a oddělením v podobě soli opticky aktivní kafrsulfonové kyseliny obecného strukturního vzorce IV (IV)

C) opticky aktivní sůl, která se vysráží z roztoku, se dále hydrolyzuje na volnou bázi (2S,3Š) enantiomeru obecného strukturního vzorce V (V)

2. Způsob podle nároku 7, vyznačující se t í i , že uvedená opticky aktivní sůl, která se vysrážela z roztoku, hydrolyzuje za vzniku (2S,3S) enantiomeru ve formě volné báze obecného strukturního vzorce V (V)

2) získá 2S,3S enantiomer s

vysrážením a oddělením jeho soli obecného strukturního vzorce IV v podstatě selektivním kyselinou kafrsulfonovou

- 24 * ♦ · • ·♦ • ·· • ·· »· ·

3. Způsob podle nároku 7, vyznačující, se t í m , že jako rozpouštědla použije acetonitrilu.

4. Způsob podle nároku 7, vyznačující se t í m , že jako rozpouštědla použije acetonu.

5. Způsob podle nároku 7, vyznačující se t í m , že se jako rozpouštědla použije ethanolu.

6. Způsob podle nároku 7, vyznačující se t í m , že se dále opticky aktivní sůl, která se vysráží z roztoku, hydrolyzuje na volnou bázi (2S,3S) enantiomeru.

7. Způsob podle nároku 1, vyznačující se t í m , že v podstatě selektivní vysrážení a oddělení uvedené soli s kyselinou kafrsulfonovou se provádí v rozpouštédlovém systému schopném rozpouštět uvedené reakční složky zahrnující racemát a kyselinu kafrsulfonovou za selektivního rozpouštění v podstatě pouze výsledné soli opticky aktivní kafrsulfonové kyseliny (2R,3R)-enantiomerní složky uvedeného racemátu, zatímco izolace uvedené (2S,3S)-enantiomerní složky uvedeného racemátu se provádí vysrážením a oddělením.

8. Způsob podle nároku 2, vyznačující se t i m , že po izolaci vysrážením a oddělením Se uvedený (2S,3S) enantiomer dále čistí až do dosažení alespoň 99,5% čistoty.

s e až do

9. Způsob podle nároku 8, tím, že se uvedený (2S,3S) dosažení alespoň 99,99% čistoty.

V enantiomer č u j í c í dále čistí

10. Způsob výroby (2S,3S) enantiomeru

11. Způsob podle nároku 10, vyznačující s e t í m , že se po izolaci vysrážením a oddělením a před hydrolýzou na volnou bázi uvedený (2S,3S) eňantiomer dále čistí až do dosažení alespoň 99,5% čistoty.

12. Způsob podle nároku 11, vyznačující se t í m , že se uvedený (2S,3S) enantiomer dále čistí po hydrolýze na svou volnou bázi.

13. Způsob podle nároku 10, vyznačující se t í m , že se po izolaci vysrážením a oddělením a před hydrolýzou na volnou bázi uvedený (2S,3S) enantiomer dále čistí až do dosažení alespoň 99,99% čistoty.

14. Způsob podle nároku 13, vyznačující se t í m , že se uvedený (2S,3S) enantiomer dále čistí po hydrolýze na svou volnou bázi.