CZ150398A3

CZ150398A3 - Nové meziprodukty a jejich použití pro přípravu N,N´- můstkových bisindolylmaleimidů

Info

Publication number: CZ150398A3
Application number: CZ981503A
Authority: CZ
Inventors: Margaret Mary Faul; Christine Ann Krumrich; Leonard Larry Winneroski Jr.
Original assignee: Eli Lilly And Company
Priority date: 1995-11-20
Filing date: 1996-11-18
Publication date: 1998-12-16
Also published as: IL124415A; MY118946A; AR004719A1; HUP9901975A3; YU61096A; CN1066734C; MX9803791A; YU49316B; WO1997019080A1; TW371661B; PE17998A1; JP4100708B2; EP0776899B1; KR100342142B1; PT776899E; AR004718A1; PL326753A1; EP0776899A1; NO982105D0; HU225716B1

Description

Všudypřítomná povaha isozymů proteinkinasy C a jejich významná úloha ve fyziologii poskytuje důvody k přípravě vysoce selektivních inhibitorů PKC. Podaný důkaz představující spojení určitých isozymů s chorobnými stavy je přiměřený k předpokladu, že sloučeniny s inhibičními účinky selektivními k jednomu nebo dvěma isozymům proteinkinasy C vzhledem k ostatním isozymům PKC a dalším proteinkinasam budou výhodnými terapeutickými přípravky. Takové sloučeniny vykazují větší účinnost a nižší toxicitu díky jejich specif ičnosti.

Dosavadní stav techniky

Skupina PKC isozym-selektivních N,N'-přemostěných bisindolylmaleinimidů byla zveřejněna v práci autorů Haeth a sp. (EP 0 657 458), publikované 14.června 1995. Výhodné sloučeniny v této skupině N,N'-přemostěných sloučenin zahrnují sloučeninu obecného vzorce I:

R (I)

- 2 • · ·· •· · * «e · •· « · • ·· ·· ·«·· kde

R znamená aminoskupinu, alkylaminoskupinu nebo dialkylaminoskupinu.

Heath a sp. ukázali na příkladech mnoho těchto aminosubstituovaných N,N'-přemostěných bisindolylmaleinimidů, připravených následovně:

Bohužel, O-mesylatová funkční skupina použitá k přípravě aminosubstituovaných N,N' přemostěných bisindolylmaleinimidů se ukázala být toxická a v připravených N,Ν'-přemostěných bisindoylmaleinimidech se vyskytuje jako nežádoucí nečistota. Pro odstranění tohoto O-mesylatového meziproduktu z finálního produktu je nutné použít nákladné čistící způsoby.

Podstata vynálezu

Vynález poskytuje klíčový meziprodukt v syntéze aminosubstituovaných N,N'-přemostěných bisindolylmaleinimidů. Tento nový meziprodukt je snadno převeditelný na aminosubstituované N,N'-přemostěné bisindolylmaleinimidy bez použití způsobu přes O-mesylatový meziprodukt. Tento

• · «ο · · meziprodukt je rovněž výrazně reaktivnější. Uvedený meziprodukt se výhodně použije k přípravě aminosubstituovaných N,Ν'-přemostěných bisindolylmaleinimidů při nižších teplotách a při kratší době reakce a vede k vyššímu výtěžku a menšímu obsahu vedlejších produktů. Tento meziprodukt je tedy vhodný pro přípravu N,N'- přemostěných bisindolylmaleinimidů ve vysokém výtěžku bez nežádoucích toxických nečistot.

Kromě toho jsou sloučeniny podle vynálezu vhodné jako isozym-selektivní inhibitory PKC. Tyto sloučeniny jsou tedy vhodné pro léčení stavů spojených diabetes mellitus a jeho komplikacemi, ischemií, zánětem, chorobami centrálního nervového systému, kardiovaskulární chorobou, dermatologickým onemocněním a rakovinou.

Vynález poskytuje sloučeninu obecného vzorce II:

H N.

N

N kde

R^ znamená Br, I, nebo O-tosyl

Vynález dále poskytuje farmaceutický přípravek

- 4 obsahující sloučeninu obecného vzorce II a jeden nebo více farmaceuticky přijatelných nosičů, ředidel nebo přísad.

Jeden z dalších aspektů vynálezu je způsob použití sloučeniny obecného vzorce II při přípravě aminosubstituovaných N,N'- přemostěných bisindolylmaleinimidů obecného vzorce I, který zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce II s aminem v nereaktivním polárním rozpouštědle.

Pro účely tohoto vynálezu, v popise i v patentových nárocích jsou použity následující výrazy a zkratky definované níže.

Výraz C₁-C₄alkyl znamená alkylovou skupinu s cyklickým, přímým nebo rozvětveným řetězcem, mající jeden až čtyři atomy uhlíku, zahrnující methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, cyklopropyl, n-butyl, isobutyl, sek.butyl, terc.butyl a podobně.

Výraz aryl znamená substituovanou nebo nesubstituovanou skupinu zahrnující benzyl, fenyl nebo naftyl.

Výraz amin použitý zde se vztahuje k znamená -N(CF₃)CH₃, -NH(CF₃) nebo -NR₃R₄, kde R₃ a R₄ nezávisle znamenají skupinu zahrnující vodík, C₁-C₄alkyl, fenyl, benzyl nebo se spojí s atomem dusíku, ke kterému se naváží, za tvorby nasyceného nebo nenasyceného 5- nebo 6-členného kruhu.

Jak je uvedeno výše, vynález poskytuje sloučeninu obecného vzorce II:

Zjistilo se, že mohou existovat různé stereoisomerní formy sloučenin obecného vzorce II. Výhodné sloučeniny podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce Ha a obecného vzorce lib:

(lib).

- 6 Nicméně součástí vynálezu enantiomery a jejich směsi.

jsou i racematy a jednotlivé

Sloučeniny podle vynálezu sloučeniny vzorce III:

se nejsnadněji připraví ze

Tento hydroxysubstituovaný N,N'-přemostěný bisindolylmaleinimid, sloučenina vzorce III, se připraví způsoby jak popsal Heath a sp., (EP 0 657 458), publikováno 14.června 1995, která je do tohoto popisu včleněna odkazem.

Sloučeniny podle vynálezu se připraví následujícím způsobem:

- 7 í- «· · · · ♦

β · « · 99 ·

W · · * «· · ·* • · ·· β · ··· · * · ·<99

R^ má význam definovaný výše. Výhodně R-^ znamená Br nebo I, nejvýhodněji znamená R^ Br. Sloučeniny podle vynálezu ve formě tosylatu (p-toluensulfonylu) se připraví reakcí alkoholu s anhydridem kyseliny p-toluensulfonové v přítomnosti baze jako je pyridin v THF, etheru, dichlormethanu nebo jiném nereaktívním organickém rozpouštědle. Obecně se reakce provede v atmosféře dusíku při teplotách od teploty místnosti do teploty zpětného toku reakční směsi.

Sloučeniny podle vynálezu ve formě halogenidů se připraví reakcí alkoholu se zdrojem bromidu nebo jodidu. Zdroji bromidu nebo jodidu může být mnoho činidel známých v oboru, které zahrnuji: HI, HBr, LiBr, CaBr₂, PBr₃, R₅PBr₂, N-bromsukcinimid, CBr₄, allyl-Br, benzyl-Br a SOBr₂; kde R₅znamená skupinu zahrnující fenyl, fenyloxyskuppinu, alkyl nebo aryl. Pracovníci v oboru znají, že k reakční směsi se mohou přidávat různé aktivační prostředky, jako je

1,1'-karbonyldiimidazol. Konverzi hydroxysloučeniny (vzorce III) na halogenid (obecného vzorce II) lze provést způsoby známými v oboru uvedenými v práci Richard C.Larock, A Guide to Functional Group Preparations, VCH Publishers, str. 356-63 (1989), která je do tohoto popisu včleněna odkazem. Výhodné podmínky zahrnují bromid nebo jodid v přítomnosti fosfor-halogenidového činidla, jako je PX₃, (fenyl)₃PX₂ nebo • 9

- 8 (fenoxy)₃PX₂, kde X znamená brom nebo jod. Reakce se výhodně provede v THF, acetonitrilu, methylenchloridu nebo jiném nereaktivním rozpouštědle známém v oboru. Také lze použít DMF nebo jiná rozpouštědla a to díky tvorbě činidel Vilsmeierova typu, jako popsal Barlueng J., Synthesis, str. 426 (1985) a Hodosi G., Carbohydrate Reserch, 230, 327-342 (1992).

Sloučeniny obecného vzorce II se převedou na aminosubstituované N,N'-přemostěné bisindolylmalenimidy obecného vzorce IV následujícím způsobem:

kde

R₃ znamená Br, I, nebo O-tosyl a

R₂ znamená -N(CF₃)CH₃), -NH(CF₃) nebo -NR₃R₄, kde R₃ a R₄ nezávisle znamenají skupinu vybranou ze skupiny zahrnující vodík, C₁-C₄alkyl, fenyl, benzyl, nebo se mohou připojit k dusíku a navázat se za tvorby nasyceného nebo nenasyceného 5- nebo 6- členného kruhu.

Výhodně R₂ znamená N(CH₃).

- 9 Způsob použití sloučeniny obecného vzorce II k přípravě sloučeniny obecného vzorce IV zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce II s aminem obecného vzorce HN(CF₃)CH₃, HNH(CF₃) nebo HNR₃R₄, kde R₃ a R₄ nezávisle znamenají skupinu zahrnující vodík, C₁-C₄alkyl, fenyl, benzyl nebo jsou připojeny k atomu dusíku, ke kterému se váží za tvorby 5nebo 6-členného nasyceného nebo nenasyceného kruhu, v nereaktivním polárním aprotickém rozpouštědle. Reakce se výhodně provede v roztoku DMF, THF:vodě nebo dimethylacetamidu při teplotě v rozmezí od 0 °C do teploty zpětného toku reakční směsi. Reakce obecně úplně proběhne za asi 1 až 20 hodin. Výhodně se reakce provede při teplotě od teploty místnosti do 50 °C. Sloučenina IV se může přečistit z reakční směsi standardními způsoby, ale výhodné je ji přímo z reakční směsi krystalizovat.

Nanejvýš nečekaně bylo zjištěno, že použití meziproduktu podle vynálezu k přípravě aminosubstituovaného N,N'-bisindolylmaleinimidu vede k vyššímu výtěžku a vyhýbá se toxickým nečistotám. Meziprodukt podle vynálezu je překvapivě více reaktivní než známý mesylatový meziprodukt. Reaktivita různých odštěpítelných skupin vůči HN(CH₃)₂ je uvedena v tabulce I. Předpokládanou reakční reaktivitu lze stanovit podle práce Carey a Sundberg, část A, 3.vydání, str. 291 (1990).

• 9

- 10 Tabulka I: Reakční rychlosti s HN (0:113)2 skupina ^Krel (rychlost reakce odštěpitelných skupin s HN(CH₃)₂)

p-toluensulfonat	2,2	X	10“²
MsO“	5,5	X	10“³
Cl“	9,8	X	10“⁴
I“	2,0	X	10“¹
Br“	2,2	X	10“²

Z údajů uvedených v tabulce I vyplývá, že tosyl, bromid a jodid jsou nečekaně reaktivní, zejména bromid a jodid, které jsou 8x až 36x reaktivnější než známý mesylatový meziprodukt. Tato zvýšená reaktivita ve srovnání s MsO byla také zjištěna se skupinami H₂NCH₃, H₂N(benzyl). Z této vyšší reaktivity vyplývá nižší teplota při reakci a ukončení reakce v kratší době. Použití meziproduktu podle vynálezu také vede k méně nečistotám obsaženým v produktu. Použití známého O-mesyl-meziproduktu v reakci pro přípravu aminosubstituovaného N,N'-bisindolylmaleinimidu vede k hladině nečistot od 15 do 30 %, které tvoří vedlejší produkty vzniklé reakcí na karbonylové skupině maleinimidu. Použití meziproduktu podle vynálezu vede k hladině nečistot menší než 5 % znamenající významné zlepšení.

Jak je uvedeno výše, bylo zjištěno, že O-mesylatová funkční skupina použitá k přípravě aminosubstituovaných N,N'-přemostěných bisindolylmaleinimidů je toxickou a nežádoucí nečistotou v připravených aminosubstituovaných N,N'-přemostěných bisindolylmaleinimidech. K odstranění O-mesylatového meziproduktu z konečného produktu je nutné použít nákladné čistící způsoby. Proto další výhodou meziproduktů podle vynálezu a způsobu přípravy aminosubstituovaných N,N¹-přemostěných bisindolylmaleinimidů s použitím meziproduktů podle vynálezu je vypuštění obtížných přečišťovacích stupňů k odstranění toxických nečistot.

Výhodné sloučeniny, připravené s použitím meziproduktů podle vynálezu jsou: (S)-13-[(dimethylamino)methyl]10,11,14,15-tetrahydro-4,9:16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo-[3,4-H][1,4,13]-oxadiazacyklohexadecin-1,3(2H)-dion, zejména ve formě mesylatové soli; (S)—13—[(monomethylamino)methyl]-10,11,14,15-tetrahydro-4,9:16,21-dimetheno-1H, 13-dibenzo[E,K]pyrrolo-[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyklohexadecin1,3(2H)-dion; (S)-13-[(pyrrolidino)methyl]-10,11,14,15tetrahydro-4,9:16,21-dimetheno-lH,13-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyklohexadecin-1,3(2H)-dionmonohydrochlorid; a (S)-13-[benzylaminomethyl]-10,11,14,15tetrahydro-4,9:16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyklohexadecin-1,3(2H)-dion.

Výhodné monosubstituované aminy obecného vzorce IV lze připravit přímo ze sloučenin podle vynálezu. Tento způsob dosahující vysokých výtěžků není možný s mesylatovým me z iproduktem.

Sloučeniny obecného vzorce IV se připraví ve formě volné baze a výhodně se převedou na farmaceuticky přijatelnou sůl způsoby známými v oboru. Výhodné soli zahrnují hydrochloridovou a mesylatovou sůl.

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady a přípravy jsou určeny pouze pro • · · φ · φ·· · φ 9 · ·· Φ ····« · · · · φ Φ · · • « · 9 Φ · · · ··· ·· • Φ Φ 9 9· · ·· •» «··* Φ Φ Φ ♦ ♦ ♦··· další objasnění vynálezu. Rozsah vynálezu není nijak omezen pouze uváděnými následujícími příklady. V následujících příkladech a přípravách, teplota tání, spektra nukleární magnetické rezonance, hmotnostní spektra, vysokoúčinná kapalinová chromatografie na silikagelu, N,N-dimethylformamid, tetrahydrofuran a ethylacetat jsou v příslušném pořadí někdy zkracovány na t.t., NMR, MS, HPLC, DMF, THF a EtOAc. Výrazy NMR a MS znamenají, že spektrum odpovídá požadované struktuře.

Příprava 1

3-(2-[(Methylsulfony1)oxy]ethoxy]-4-(trifenylmethoxy)-1-butanol-methansulfonat

V 500 ml CH₂C1₂ se v atmosféře N₂ rozpustí tritylchlorid (175,2 g, 0,616 mol). Přidá se triethylamin (71,9 g, 100 ml, 0,710 mol) a pak R,S-glycidol (50,0 g, 0,648 mol) a reakční směs se zahřívá za mírného refluxování (42 °C) 4 hodiny. Pak se reakční směs ochladí na teplotu místnosti a extrahuje se dvakrát 250 ml vodného nasyceného roztoku chloridu amonného a potom 250 ml solného roztoku. Vodné vrstvy se reextrahují 100 ml CH₂C1₂, organická vrstva se vysuší (MgSO₄) a odpařením ve vakuu se získá trityl-glycidol ve formě oleje, ze kterého se rekrystalizací z ethanolu získá 104,4 g (54 %) tritylglycidolu ve formě pevné látky.

Roztok vinylmagnesiumbromidu, 1M v THF (50 ml, 50 mmol, 2,0 ekv.) se v atmosféře N₂ ochladí na -20 °C a přidá se k němu katalytické množství jodidu mědi (0,24 g, 1,26 mmol, 0,05 ekv.). Vzniklá směs se míchá při -20 °C 5 minut a pak se po kapkách, během 15 minut při -20 °C přidá trityl-glycidol (7,91 g, 25,0 mmol) v 40 ml suchého THF. Tato reakční směs se míchá 3 hodiny při -20 °C, pak se nechá ohřát na teplotu

• 9	9 9	• 9 9	44	9 ·
9	9	• 9	9 9 9 9	9 9	•		9
•	9	9	• 9 ·	9 4		• ·
9	9	9 ·	« 9 ·	• 9 9 4	9		9
9 9	•	• 9-9	9	4		•
* 9	9999	• 99 9 9	9 9		9«

místnosti a míchá se ještě 15 minut. Reakce se pak rychle přeruší ochlazením reakční směsi na -30 °C a pomalým přídavkem 125 ml vodného nasyceného roztoku chloridu amonného. Výsledná směs se extrahuje 200 ml ethylacetatu. Organická vrstva se extrahuje vodným roztokem 0,93 g (2,50 mmol, 0,1 ekv.) dihydrátu dvojsodné soli kyseliny ethylendiamintetraoctové (EDTA) ve 125 ml deionizované vody pro odstranění kovů. Vodné vrstvy se pak reextrahují 50 ml ethylacetatu, spojené organické vrstvy se promyjí 100 ml solného roztoku, vysuší se (MgSO₄) a odpařením ve vakuu se získá olej, který se zfiltruje přes oxid křemičitý (76 g) s použitím 1,2 1 hexanů/ethylacetatu 3/1. Filtrát se odpaří ve vakuu a získá se 9,07 g l-(trifenylmethoxyl)-4-penten-2-olu ve formě světle žlutě zbarveného oleje (100 %).

Při teplotě místnosti se přidá 60% suspenze hydridu sodného v minerálním olej (6,13 g, 0,153 mol, 1,5 ekv.) suspendovaná v 175 ml suchého THF. Vzniklá směs se míchá 1,5 hodiny při teplotě 45 °C a pak se přidá injekční stříkačkou

17,7 ml (0,204 mmol, 2 ekv.) čerstvě předestilovaného allylbromidu. Reakční směs se zahřívá 1 hodinu při 45 °C. Průběh reakce se může sledovat TLC nebo HPLC. Pak se reakční směs ochladí na 0 °C a pomalu se přidá 400 ml vodného nasyceného roztoku chloridu amonného k odstranění přebytku baze. Získaná směs se extrahuje 800 ml ethylacetatu a organická vrstva se promyje 500 ml vody. Vodné vrstvy se reextrahují 100 ml ethylacetatu a spojené organické vrstvy se promyjí 200 ml solného roztoku, vysuší se (MgSO₄) a odpařením ve vakuu se získá 41,5 g (>100 %) 1,1',1''-[[[2-(2-propenyloxy)-4-pentenyl]oxyJmethylidin]tris[benzenu] ve formě žlutého oleje.

1,1',!-[[[2-(2-Propenyloxy)-4-pentenyl]oxy]- 14 • to ·· to · · « · toto · ···· • toto ·· ···· · • toto • to ·· • · · · to • · t · · to · · · · · · • · ♦ · ·· ·· methylidin]tris[benzen] (39,3 g, 0,102 mol) se rozpustí v roztoku 390 ml bezvodého methylalkoholu a 60 ml CH₂C1₂a ochladí se na -50 °C až -40 °C za probublávání viskozní reakční směsi dusíkem. Pak se reakční směsí při -50 až -40 °C probublává 80 minut ozon, dokud se reakční směs nezbarví do světlemodra. Výsledná reakční směs se nechá ohřát v atmosféře dusíku na 0 °C a pomalu se k přerušení reakce přidá roztok borhydridu sodného (23,15 g, 0,612 mol, 6 ekv.) v 85 ml ethanolu/85 ml vody přičemž se teplota udržuje pod 10 °C. Pak se reakční směs míchá 30 minut v ledové lázni, dále se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Teplota se pak zvýší zahřátím na 31 °C. Reakční směs se zředí 400 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a extrahuje se 800 ml ethylacetátu. Organická vrstva se promyje 400 ml vody a vodné vrstvy se reextrahují 150 ml ethylacetátu. Spojené organické vrstvy se promyjí 200 ml solného roztoku, vysuší se (MgSO₄) a odpařením ve vakuu se získá kalný olej. Rekrystalizací tohoto oleje z hexanů/ethylacetatu 2/1 se ve třech podílech získá 28,9 g 3-(2-hydroxyethoxy)-4-(trifenylmethoxy )-1-butanolu (72 %).

3-(2-Hydroxyethoxy)-4-(trifenylmethoxy)-l-butanol (14,0 g, 35,7 mmol) se rozpustí ve 140 ml CH₂C1₂, ochladí se v atmosféře N₂ na O °C a přidá se triethylamin (10,8 g, 14,9 ml, 0,107 mol, 3,0 ekv.). Pak se po kapkách při <5 °C přidá methansulfonylchlorid (11,0 g, 7,46 ml, 96,4 mmol, 2,7 ekv.). Získaná reakční směs se pak zředí dalším CH₂C1₂ (300 ml) a promyje 200 ml vody a 200 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného. Vodné vrstvy se reextrahují 50 ml CH₂C1₂a spojené organické vrstvy se promyjí 100 ml solného roztoku, vysuší se (MgSO₄) a odpařením ve vakuu se získá 18,4 g (94 %) 3-(2-[(methylsulfonyl)oxy]ethoxy]-4-(trifenylmethoxy)-l-butanol-methansulfonatu ve formě bílé pevné látky.

• · • * · · * » · · • · · · • · · · · * · ·· ·· *· • « * · « « • · · · · · « .. ···· · • · · » · • «» ·« ··

Příprava 2 (S)-Trityl-glycidol

V 7 1 CH₂C1₂ se v atmosféře dusíku rozpustí tritylchlorid (2866 g, 10,3 mol). Přidá se triethylamin (1189 g, 1638 ml, 11,8 mol) a pak (R)-(+)-glycidol (795,0 g, 10,6 mol) za použití 1 1 CH₂C1₂ k promytí. Tento reakčni roztok se zahřívá za mírného refluxování (42 °C) 3 až 4 hodiny. Pak se reakčni směs ochladí na teplotu místnosti a přidají se 3 1 solného roztoku. Organická vrstva se vysuší (600 g Na₂SO₄) a odpařením ve vakuu se získá titulní sloučenina ve formě oleje, ze kterého se rekrystalizací z ethanolu získá 2354 g (70 %) titulní sloučeniny ve formě pevné látky.

Příprava 3 (S)-3-[2-[(Methylsulfonyl)oxy]ethoxy]-4-(trifenylmethoxy)1-butanol-methansulfonat

M roztok vinylmagnesiumbromidu (5,76 1, 5,76 mol, 1,96 ekv.) v THF se v atmosféře dusíku ochladí na -20 °C a přidá katalytické množství jodidu mědi (28,2 g, 0,148 mol, 0,05 ekv.). Výsledná směs se míchá při -20 °C 5 minut a pak se po kapkách, během 1,5 hodiny při -20 °C přidá roztok (S)-trityl-glycidolu (929,0 g, 2,94 mol) v 3,2 1 suchého THF. Reakčni směs se pak míchá 1 hodinu při -20 °C. Reakce se ukončí ochlazením reakčni směsi na -30 °C a pomalým přidáním 5 1 nasyceného roztoku chloridu amonného. Organická vrstva se pak dvakrát extrahuje 1 1 10% hmotn./obj. roztoku dihydratu dvojsodné soli kyseliny ethyldiamintetraoctové (EDTA) k odstranění přítomných kovů. Organická vrstva se promyje 2 1 solného roztoku, vysuší se (MgSO₄) a odpařením ve vakuu

Φ ·	« ·	• · ·	• ·	• «
• ·	• *	·· ·			• ·	9		*
Φ	•	♦	• ·		•	• ·		• ·
•	•	Φ *	• ·		*	• ·· ·	♦		•
φ ·	•	• «		•	•	Φ	• ·	•
		• · ·	··		• ·

se získá 1061 g (96 %) (S)-1-O-trifenylmethyl-4-hydroxypentanolu ve formě oleje.

60% suspenze hydridu sodného v minerálním oleji (268,9 g, 6,72 mol, 1,5 ekv.) se suspenduje v atmosféře dusíku v 2,8 1 THF a při teplotě místnosti se přidá roztok (S)-1-O-trifenyl- methyl-4-hydroxypentanolu (1543 g, 4,48 mol) v 5,6 1 suchého THF. Získaná reakční směs se míchá 1,5 hodiny při teplotě místnosti a pak se přidá během 20 minut 770 ml (8,89 mol, 2 ekv.) čerstvě předestilovaného allylbromidu. Reakční směs zahřívá 1 až 2 hodiny při 45 °C. Pak se reakční směs ochladí na 15 až 20 °C a pomalu se přidají 2 1 nasyceného vodného roztoku chloridu amonného k odstranění přebytku baze. Výsledná směs se zředí 1 1 ethylacetatu a 1 1 vody a oddělí se organická vrstva. Vodná vrstva se reextrahuje 500 ml ethylacetatu, spojené organické vrstvy se vysuší (MgS0₄) a odpařením ve vakuu se získá 1867 g (98 %) (S)-l,l',1''-[[[2-(2-propenyloxy)-4-pentenyl]oxy]methylidin]tris[benzenu] ve formě žlutého oleje.

(S)-l,1',1''-[[[2-(2-Propenyloxy)-4-pentenyl]oxy]methylidin]tris[benzen] (1281 g, 3,33 mol) se rozpustí v roztoku 4 1 bezvodého methanolu a 3,6 1 CH₂C1₂ a ochladí se na -50 °C až -40 °C přičemž viskozní reakční roztok se probublává dusíkem. K reakční směsi se přidá indikátor, sudan III, a reakční směsí se probublává při -50 °C až -40 °C ozon po dobu 13 hodin, dokud se barva roztoku nezmění z tmavorůžové na světle zelenou/žlutou. Získaná reakční směs se nechá ohřát na 0 °C v atmosféře dusíku a pak se pomalu přidá během 40 minut roztok borhydridu sodného (754 g, 19,9 mol, 6 ekv.) v 2,5 1 ethanolu/2,5 1 vody, přičemž teplota reakční směsi se udržuje pod 30 °C. Pak se reakční směs míchá přes noc při teplotě místnosti. Průběh reakce se může sledovat

HPLC. Reakční směs se pak ochladí na 10 až 15 °C a pomalu se přidá ke 4 1 nasyceného vodného roztoku chloridu amonného při <20 °C. Reakční směs po ukončení popsané reakce se pak zfiltruje a pevné látky se pak promyjí 3 1 CH₂C1₂· Organická vrstva se oddělí a promyje se 3 1 nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a vodné vrstvy se reextrahují 1 1 CH₂C1₂. Spojené organické vrstvy se vysuší (MgSO₄) a odpařením ve vakuu se získá 1361 g (>100 %) (S)-3-(2-hydroxyethoxy)-4-(trifenylmethoxy)-l-butanolu ve formě oleje.

(S)-3-(2-Hydroxyethoxy)-4-(trifenylmethoxy)-1-butanol (500 g, 1,27 mol) se rozpustí v 4,8 1 CH₂C1₂, ochladí se v atmosféře N₂ na 0 °C a přidá se triethylamin (386,4 g, 532 ml, 3,81 mol, 3,0 ekv.). Pak se po kapkách během 30 minut při <5 °C přidá methansulfonylchlorid (396,3 g, 268 ml, 3,46 mol,

2,7 ekv). Výsledná reakční směs se míchá při O °C až 5 °C 1-2 hodiny a průběh reakce se sleduje HPLC. Pak se reakční směs zředí dalším CH₂C1₂, promyje se dvakrát 2 1 vody a 2 1 nasyceného vodného roztoku chloridu amonného. Vodné vrstvy se reextrahují 1 1 CH₂C1₂ a spojené organické vrstvy se vysuší (MgSO₄) a odpařením ve vakuu se získá surová pevná látka, ze které se rekrystalizací z heptanu/ethylacetatu 1/1 získá 615 g (88 %) (S)-3-[2-[(methylsulfonyl)oxyJethoxy]-4-(trifenylmethoxy)-l-butanol-methansulfonatu ve třech postupných podílech ve formě pevné látky. NMR. MS.

Příprava 4 (S)-10,ll,14,15-Tetrahydro-13-(hydroxymethy1)4,9:16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyklohexadecin-l,3-(2H)-dion

2,3-bis-(lH-Indol-3-yl)-N-methylmaleinamid (114,7 g, 0,336 mol) a (S)-3-[2-[(methylsulfonyl)oxyJethoxy]-4

9 (trifenylmethoxy)-l-butanol-methansulfonat (220,0 g, 0,401 mol, 1,2 ekv.) se rozpustí v 4,3 1 DMF. Tento roztok reakčních činidel se pak pomalu přidá, během 70 hodin (rychlostí přibližně 1 ml/min) ke kaši uhličitanu česného (437,8 g, 1,34 mol, 4,0 ekv.) v 7 1 DMF při teplotě 50 °C. Po 70 až 72 hodinách se reakční směs ochladí a zfiltruje, a odpařením DMF ve vakuu se získá zbytek, který se rozpustí v 4,6 1 CH₂C1₂· Organická vrstva se extrahuje 1,15 1 vodné 1N HC1 a pak 4,6 1 solného roztoku. Spojené vodné vrstvy se pak reextrahují 1,1 1 CH₂C1₂. Spojené organické vrstvy se vysuší (Na₂SO₄) a zfiltrují. Většina rozpouštědla se odpaří ve vakuu a výsledný roztok se zfiltruje přes 2 kg silikagelu s použitím 15,1 až 18,9 litrů dalšího podílu CH₂C1₂k odstranění základních složek. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získaná purpurově zbarvená pevná látka po trituraci v 7 objemech acetonitrilu (vztaženo na hmotnost surového (S)-10,11,14,15-tetrahydro-2-methyl-13-[(trifenylmethoxy)methyl]-4,9:16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyklohexadecin-l,3(2H)dionu) poskytne

150,2 g (57 %) (S)-10,11,14,15-tetrahydro-2-methyl-13-[(trifenylmethoxy ) methyl ]-4,9:16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyklohexadecin-l,3(2H)dionu po vysušení (čistota stanovená HPLC vůči standardu je 89 %).

(S)-10,11,14,15-Tetrahydro-2-methyl-13-[(trifenylmethoxy )methyl]-4,9:16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyklohexadecin-l,3(2H)dion (32,7 g, 46,9 mmol) se suspenduje v 1,6 1 ethanolu a 1,6 1 vodného 10 N KOH. Vzniklá směs se zahřívá za mírného refluxování (78 °C) 19 hodin. Většina pevných složek se rozpustí při dosažení teploty zpětného toku. Reakční roztok se ochladí na 10 ⁰ až 15 °C a pomalu se přidá vodná 10 N HC1 (1,2 1) při <15 °C k úpravě acidity na pH = 1. Při okyselení vznikne červená kaše.

φ φ

- 19 φφφ

Reakční směs se zředí 500 ml CH₂C12, míchá se 20 minut a zfiltruje se k odstranění většiny solí. Soli se promyjí dalším podílem CH₂C1₂ (1,5 1) a fitrát se extrahuje dvakrát 1 1 vody. Spojené vodné vrstvy se reextrahují 1 1 CH₂C1₂ a organická vrstva se vysuší (MgSO₄). Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a získá se 36,0 g (>100 %) (S)-10,11,14,15-tetrahydro-13[(trifenylmethoxy)methyl]-4,9:16,21-dimetheno-13H-dibenzo[E,K]furo[3,4-H][1,4,13]-oxadiazacyklohexadecin-1,3-dionu ve formě purpurové pevné látky (80% čistota v plošném zastoupení HPLC).

(S)-10,11,14,15-Tetrahydro-13-[(trifenylmethoxy)methyl]4,9:16,21-dimetheno-13H-dibenzo[E,K]furo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyklohexadecin-1,3-dion (36,0 g, představující 46,9 mmol) se rozpustí v atmosféře dusíku v 320 ml suchého DMF a zpracuje se s předem připraveným roztokem 1,1,1,3,3,3hexamethyldisilazanu (99 ml, 75,7 g, 0,469 mol, 10 ekv.) a methanolu (9,5 ml, 7,51 g, 0,235 mol, 5 ekv.). Získaný roztok se zahřívá 7 hodin při 45 °C. Průběh reakce se sleduje HPLC. Většina DMF se odpaří ve vakuu, výsledný zbytek se extrahuje do 200 ml ethylacetatu a promyje se 200 ml vody a dvakrát vždy 100 ml vodného 5% roztoku LiCl. Vodné vrstvy se reextrahují 100 ml ethylacetatu. Spojené organické vrstvy se promyjí 200 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného. Spojené organické vrstvy se vysuší (MgSO₄) a odpařením ve vakuu se získá 35,9 g (>100%) surového (S)-10,ll,14,15-tetrahydro-13-[(trifenylmethoxy)methyl]-4,9: 16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyklohexadecin-1,3(2H)-dionu ve formě purpurové pevné látky.

(S)-10,11,14,15-Tetrahydro-13-[(trifenylmethoxy)methyl]-4,9:16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyklohexadecin-1,3(2H)-dion (34,0

představujících 46,8 mmol) se rozpustí v 350 ml CH₂C1₂a ochladí se v atmosféře dusíku na -25 °C. Reakčním roztokem se probublává bezvodý plynný HC1 po dobu asi 1 až 2 minut při <0 °C. Získaná kaše se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 1 hodinu. Průběh reakce lze sledovat HPLC. Kaše se filtruje a pevné látky se promyjí 200 ml CH₂C1₂. Pevná látka se vysuší ve vakuové sušárně při 50 °C a získá se 18,6 g (90 %) (S)-10,11,14,15-tetrahydro-13-(hydroxymethyl)-4,9:16,21-dimetheno-ΙΗ,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyklohexadecin-l,3(2H)-dionu ve formě purpurové pevné látky (93% čistoty z plošného zastoupení při HPLC).

Příklad 1 (S)-10,11,14-15-Tetrahydro-13-[brom(methyl)]-4,9:16,21dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyklohexadecin-1,3(2H)-dion

Do methylenchloridu (10 obj.) se vnese brom (2 ekv.) a pyridin (0,1 ekv) a roztok se ochladí na -5 °C. Brom se titruje trifenylfosfitem (2,0 ekv). Po spotřebování bromu se žlutý roztok odbarví na roztok čirý. Do druhé reakčni nádoby se vnese (S)-10,11,14,15-tetrahydro-13-[hydroxy(methyl)]-4,9: 16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyklohexadecin-l,3(2H)-dion (1,0 ekv.) v methylenchloridu (10 obj.). Kaše se ochladí na -5 °C. Pak se k pyrrolodionové kaši přidá roztok trifenylfosfit-dibromidu, reakčni směs se ohřeje na teplotu místnosti a míchá se 12 až 16 hodin, dokud reakce úplně neproběhne (<0,4 % sloučeniny III, metodou HPLC). Kaše se zahušťuje 2 hodiny ve vakuu při teplotě místnosti a pak se reakce přeruší nalitím 1 objemu deionisované vody a míchá se 15 minut. Pro vysrážení produktu se do reakčni kaše vnese toluen (40 obj.). Po 1 hodině míchání při 10 °C se produkt izoluje odfiltrováním, promyje • ·

- 21 se dvakrát toluenem (5 obj.) deionisovanou vodou (5 obj.) a nakonec se promyje 5 objemy toluenu. Titulní bromid se vysuší ve vakuové sušárně při 50 °C. Výtěžek je 85 až 90 % (nečistoty 1 až 2 %).

K dalšímu snížení hladiny nečistot se produkt znovu uvede do kašovitého stavu soustavou rozpouštědel jako je aceton:voda, methanol:voda, isopropanol:voda nebo ethylacetat. Výhodné se uvede do kašovitého stavu soustavou THF:voda v poměru od 1:1 do 5:1 (THF:voda).

Příklad 2 (S)-13-[(Dimethylamino)methyl]-10,11,14,15-tetrahydro4,9:16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][l,4,13]oxadiazacyklohexadecin-1,3(2H)-dion

K roztoku (S)-10,11,14,15-tetrahydro-13-[brom(methyl)ΙΑ ,9:16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-HΙΕ 1 , 4 , 13 ]oxadiazacyklohexadecin-l , 3 ( 2H) -dionu (1,0 ekv.) v N,N-dimethylfořmamidu (17 obj.) se přidá dimethylamin (10,73 kg, 12 ekv.). Reakční nádoba se dobře uzavře a zahřívá se 9 hodin při 45 °C. Pak se reakční směs ochladí na teplotu místnosti a míchá se 12 až 16 hodin. K reakční směsi se přidá NaOH (12 N, 1,1 ekv.), aby se vytvořila volná baze. Pak se roztok míchá další 2 hodiny. Po odstranění N,N-dimethylformamidu ve vakuu na 5 až 7 obj. se k reakční směsi o teplotě 60 °C přidá během 1 hodiny MeOH (30 obj.) o teplotě 60 °C. Reakční směs se pak ochladí na teplotu místnosti, míchá se přes noc a pak se ochladí na 0 až 10 °C. Produkt se odfiltruje a promyje se MeOH (3 obj.). Pak se produkt suší ve vakuové sušárně při 50 °C do konstantní hmotnosti. Výtěžek je 85 až 92 %. Dalšími rozpouštědly, které lze použít pro tuto reakci jsou THF/voda a dimethylacetamid, reakce by se měla • ·

- 22 provádět v polárním aprotickém rozpouštědle vzhledem k nízkým rozpustnostem výchozí složky a produktů. K uvolnění HBr soli in šitu byly zkoušeny i další baze (viz dále), ale jako nejúčinnější baze se ukazaly 6 N NaOH, 12 N NaOH a K₂CO₃.

Příklad 3 (S)-10,11,14-15-Tetrahydro-13-[jod(methyl))-4,9:16,21dimetheno-lH, 13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[ 3 ,4-H][1,4,13]oxadiazacyklohexadecin-1,3(2H)-dion (S)-10,11,14-15-Tetrahydro-13-[methansulfonyloxy]4,9:16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H]- [1,4,13]-oxadiazacyklohexadecin-1,3(2H)-dion (1,0 g, 1,94 mmol) se vyjme do 20 ml suchého Ν,Ν-dimethylformamidu (obj). K tomuto roztoku se přidá jodid sodný (3,0 g, 19,4 mmol, 10,0 ekv.) a reakční směs se míchá a zahřívá 36 hodin při 50 °C. Po ochlazení na teplotu místnosti se produkt izoluje přídavkem vody (50 ml, 50 obj.). Produkt se vysráží ve formě purpurové pevné látky, ze které se rekrystalizací z THF/H₂O 5/1 získá 0,87 g (81 %) titulní sloučeniny.

Příklad 4 (S)-10,11,14-15-Tetrahydro-13-[p-toluensulfonyloxy(methyl)]4,9:16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H]- [1,4,13]-oxadiazacyklohexadecin-1,3(2H)-dion (S)-10,ll,14-l5-Tetrahydro-13-[hydroxymethy1]4,9:16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4HΙΕ 1,4,13]-oxadiazacyklohexadecin-1,3(2H)-dion (1,0 g, 2,27 mmol) se vyjme do 20 ml dichlormethanu (20 obj.). K tomuto roztoku se přidá anhydrid kyseliny toluensulfonové (2,22 g, 6,80 mmol), 3,0 ekv.) a pyridin (0,72 g, 9,08 mmol, 4,0 ekv.) a reakční směs míchá a zahřívá 2 hodiny při zpětném toku za •· · » •· · •· · · • ·· «· ··*· • *» *· ·· ·· · · · ·· · • · · ♦· ·♦ • · 4 4 444 4* • ·· ·

444 «· ··♦· teploty 42 °C. Pak se reakční směs ochladí na teplotu místnosti a zředí se 40 ml dichlormethanu. Organická fáze se promyje 50 ml 1 N kyseliny chlorovodíkové a 50 ml solného roztoku. Vodné vrstvy se reextrahují 30 ml dichlormethanu a ve spojených organických výtřepcích se vymění rozpouštědlo, methylenchlorid se vymění za ethanol. Produkt se vysráží ve formě purpurové pevné látky a filtrací se získá 1,25 g (93 %) titulní sloučeniny.

Příklad 5 (S)-13-[(Monomethylamino)methyl]-10,11,14-15-tetrahydro4,9:16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4H][1,4,13]oxadiazacyklohexadecin-1,3(2H)-dion

V 600 ml Ν,Ν-dimethylacetamidu se rozpustí methylamin (37,1 g, 1,19 mol, 20 ekv.) a směs se udržuje při teplotě pod 23 °C. K tomuto roztoku se přidá sloučenina z příkladu 1 (30 g, 0,0595 mol). Reakční směs se míchá 24 hodin v dobře uzavřené nádobě při teplotě místnosti. K zachycení HBr vzniklého při reakci se přidá triethylamin (8,3 ml, 0,0595 mol, 1 ekv.), reakční směs se míchá dalších 30 minut, pak se ochladí na 4 °C a pomalu se přidá voda (450 ml), přičemž teplota se udržuje pod 25 °C. Během přídavku vody vzniká kaše, která se míchá 1 hodinu a pak se zfiltruje s použitím 200 ml další vody pro promytí filtrované pevné látky. Tato pevná látka se vysuší ve vakuové sušárně při 50 °C a získá se 25,03 g (93 %) titulní sloučeniny.

Příklad 6 (S)-13-[(Pyrrolidino)methyl]-10,ll,14-15-tetrahydro4,9:16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][l,4,13]oxadiazacyklohexadecin-1,3(2H)-dion-monohydrochlorid • ·

- 24 Sloučenina podle příkladu 1 (1,0 g, 1,0 ekv.) se vyjme do 5 ml Ν,Ν-dimethylacetamidu a přidá se pyrrolidin (1,6 ml, 10 ekv.). Reakčni směs se zahřívá 9 hodin při 45 °C a pak se ochladí na teplotu místnosti. K červené kaši se přidá 12 N NaOH (0,17 ml, 1,0 ekv.) a směs se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti k tvorbě červeného roztoku. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu, olej se zředí methylenchloridem (100 ml) a promyje se nasyceným chloridem amonným (100 ml) a 5% roztokem LiCl (2 x 100 ml). Odstraněním methylenchloridu ve vakuu se získá olej, ze kterého se titulní sloučenina vysráží ve formě červené pevné látky po přídavku methyl-terc.butyletheru. Tato pevná látka se odfiltruje a vysušením ve vakuové sušárně přes noc při 50 °C se získá 0,8 g (81 %) produktu.

Příklad 7 (S)-13-[Benzylaminomethyl]-10,11,14-15-tetrahydro4,9:16,21-dimetheno-lH,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H]- [1,4,13]-oxadiazacyklohexadecin-1,3(2H)-dion

Sloučenina podle příkladu 1 se vyjme do 20 obj. Ν,Ν-dimethylacetamidu a a v jedné dávce se přidá benzylamin (6,0 ekv.). Reakčni směs se míchá a zahřívá v dobře uzavřené nádobě při 80 °C 24 hodin. Pak se reakčni směs ochladí na teplotu místnosti a přidá se triethylamin (1 ekv.) pro zachycení HBr a reakčni směs se míchá dalších 30 minut. Přidá se ethylacetat a organická vrstva se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného. Provede se výměna rozpouštědla z ethylacetátu na ethanol za tvorby červené kaše, ze které se filtrací získá titulní sloučenina ve formě červené pevné látky v 79% výtěžku.

• ·

- 25 Příklad 8

Kinetická studie

I	(sloučenina	A)	R = NHCH₃ (sloučenina	F)
Br	(sloučenina	B)	R = N(CH₃)₂ (sloučenina	G)
Cl	(sloučenina	c)	R = NHBn (sloučenina	H)
OMs	(sloučenina	D)
OTs	(sloučenina	E)

Pro použití v kinetických studiích se připraví

2-molární roztok dimethylaminu v Ν,Ν-dimethylacetamidu (DMA). Každá ze sloučenin A (0,25 g, 0,45 mmol), B (0,229 g, 0,45 mmol), C (0,209 g, 0,45 mmol), D (0,236 g, 0,45 mmol), a E (0,271 g, 0,45 mmol) se rozpustí v DMA (asi 20 ml/g, 4 až 6 ml) a ke každé reagující látce se přidá roztok dimethylaminu v DMA (4,5 ml, 9,0 mmol, 20 ekv.). Reakční roztoky se uzavřou víčkem, míchají se při 23 °C a vzorkují se pro analýzu HPLC v závislosti na čase. Ke stanovení se použije kolona 4,6 mm x 25 cm Zorbax SB-CN s isokratickou elucí 50/50 THF/0,1 % vodnou kyselinou trifluoroctovou pufrovanou mobilní fází při průtoku 1 ml/min a detekcí UV detektorem při 233 nm (R_t sloučeniny A = 10,4 min, R_tsloučeniny B = 9,3 min, R_t sloučeniny C - 9,0 min, R_t

- 26 sloučeniny D = 6,2 min, Rj- sloučeniny E = 10,6 min). Hodnoty koncentrací v reakční směsi se stanoví z odezvového faktoru, který se získá pro každou sloučeninu z tříbodové kalibrační křivky (s použitím koncentrací 0,1 mg/ml, 0,05 mg/ml, a 0,025 mg/ml vůči odpovídajícím plochám). Před HPLC analýzou se vzorky z reakční směsi (0,1 ml) zředí v odměrné baňce na 25 ml, a koncentrace (mg/ml) se převedou na molární koncentrace (mmol/ml). Vynese se závislost přirozeného logaritmu koncentrace dimethylaminu dělená koncentrací sloučeniny A, B, C, D nebo E vůči času. Strmost křivky získaná od každého záznamu se dělí rozdílem počáteční koncentrace aminu minus počáteční koncentrace sloučeniny a získají se tak rychlostní konstanty druhého řádu (v jednotkách l.M^-1.h^-1). Výsledky jsou uvedeny v tabulce I.

Příklad 9

Kompetitivní studie rychlosti reakce mesylatu ve srovnání s bromidem s dimethylaminem, methylaminem a benzylaminem

Pro použití v kinetických studiích še připraví 2-molární roztok methylaminu a dimethylaminu v N,N-dimethylacetamidu (DMA). Sloučenina D (1,03 g, 1,98 mmol) a B (1,00 g, 1,98 mmol) se spojí v N,N-dimethylacetamidu (20 ml/g pro reakce s methylaminem a dimethylaminem a 36 ml/g pro reakci s benzylaminem) a přidá se 2 molární roztok methylaminu v DMA (19,8 ml, 39,7 mmol, 20 ekv.) nebo 2 molární roztok dimethylaminu v DMA (19,8 ml, 39,7 mmol, 20 ekv.) nebo benzylaminu (4,25 g, 39,7 mmol, 20 ekv.). Reakční roztoky se uzavřou víčkem, míchají se při 23 °C a vzorkují se pro analýzu HPLC v závislosti na čase. Ke stanovení se použije kolona 4,6 mm x 25 cm Zorbax SB-CN s isokratickou elucí 45/55 THF/0,1 % vodnou kyselinou trifluoroctovou pufrovanou mobilní fází při průtoku 1 ml/min a detekcí UV detektorem při • 4

- 27 233 run (R^. sloučeniny D = 11,4 min, sloučeniny B = 19,9 min). Hodnoty koncentrací v reakční směsi se stanoví z odezvového faktoru, který se získá pro sloučeninu

B a D z tříbodové kalibrační křivky (s použitím koncentrací 0,1 mg/ml, 0,05 mg/ml, a 0,025 mg/ml vůči odpovídajícím plochám). Před HPLC analýzou se vzorky z reakční směsi (0,1 ml) zředí v odměrné baňce na 25 ml, a koncentrace (mg/ml) se převedou na molární koncentrace ( mmol/ml). Vynesou se závislosti přirozených logaritmů koncentrací aminů dělených koncentrací sloučeniny vůči času. Strmost křivky získaná z každého záznamu se dělí rozdílem počáteční koncentrace aminu minus počáteční koncentrace sloučeniny a získají se tak rychlostní konstanty druhého řádu (v jednotkách l.M^_1.h^-1). Methylamino- a benzylaminoderiváty se připraví přímo z bromidového meziproduktu, který je předmětem vynálezu, ve vysokém výtěžku. Z mesylatového meziproduktu tento methylaminový a benzylaminový derivát nelze přímo připravit ve vysokém výtěžku.

Jak již bylo uvedeno, sloučeniny podle vynálezů jsou navíc aktivní jako selektivní inhibitor proteinkinasy C. Tato aktivita sloučenin byla stanovena v testech Calcium Calmodulin Dependent Protein Kinase Assay, Casein Protein Kinase II Assay, cAMP-Dependent Protein Kinase Catalytic Subunit Assay a Protein-Tyrosin Kinase Assay, popsaných v práci Heath a sp., EP 0 657 458, publikované 14.června 1995, která je včleněna do tohoto textu odkazem. Při těchto testech bylo zjištěno, že sloučeniny podle vynálezu jsou účinné a isozym-selektivní při hodnotách IC₅₀ menších než 10 μΜ.

Sloučeniny s takto prokázanou farmakologickou účinností jsou vhodné pro léčení stavů, ve kterých je prokázána

9 9 · 6 ·· 9 99 9 • ·· · ·· · · ···· • · 9 · · · 9 99 9 • 9 9 9 99 9* ··· ·· • 99 999999

9999 999 99 «««9 patologická úloha proteinkinasy C a tyto stavy, známé v oboru, zahrnují: diabetes mellitus a jeho komplikace (zejména mikrovaskulární diabetické komplikace, retinopatii, nefropatii a neuropatii), ischemii, zánět, poruchy centrálního nervového systému, kardiovaskulární chorobu, Alzheimerovu chorobu, dermatologické onemocnění a rakovinu.

Výhodné je sloučeniny podle vynálezu před podáváním zpracovat do formy přípravků. Dalším provedením podle vynálezu je tedy farmaceutický přípravek obsahující sloučeninu obecného vzorce II a jeden nebo více farmaceuticky přijatelných nosičů, ředidel nebo přísad.

Tyto farmaceutické přípravky se připraví známými postupy s použitím velmi dobře známých a snadno dostupných složek.

Při přípravě kompozic podle vynálezu se účinná složka obvykle smísí s nosičem nebo se zředí s nosičem nebo se obklopí nosičem, který může být ve formě tobolky, sáčku, papíru nebo jiného obalu. Jestliže nosič má funkci ředidla, může být pevný, polotuhý nebo tekutý, a může působit jako vehikulum, přísada nebo médium pro účinnou složku. Tyto kompozice pak mohou být ve formě tablet, pilulek, prášků, pastilek, sáčků, oplatek, tinktur, suspenzí, emulzí, roztoků, sirupů, aerosolů (v pevném stavu nebo v tekutém médiu), měkkých nebo tvrdých želatinových tobolek, čípků, sterilních injekčních roztoků a sterilních rozplněných prášků.

Dále jsou uvedeny některé příklady vhodných nosičů, přísad a ředidel zahrnujících laktosu, dextrosu, sacharosu, sorbitol, manitol, škroby, arabskou gumu, fosforečnan vápenatý, alginaty, tragant, želatinu, křemičitan vápenatý, mikrokrystalickou celulosu, polyvinylpyrrolidon, celulosu, sirup na bázi vody, methylcelulosu, methyl• ·

- 29 a propylhydroxybenzoat, stearan vápenatý a minerální olej. Tyto přípravky mohou navíc obsahovat kluzné prostředky, smáčecí prostředky, emulgační a suspendační prostředky, konzervační prostředky, sladidla a čichová a chuťová korigencia. Kompozice podle vynálezu lze také formulovat tak, aby umožňovaly rychlé, řízené nebo prodloužené uvolňování účinné složky po podání pacientovi.

Farmaceuticky účinné množství sloučeniny znamená množství sloučeniny schopné inhibovat PKC aktivitu u savců. Obvyklá denní dávka obsahuje od asi 0,01 mg/kg do asi 20 mg/kg účinné sloučeniny. Výhodné dávky jsou asi 0,01 až asi 10 mg/kg. Tyto kompozice jsou výhodně zpracovány do jednotkové dávkové formy, kde každá dávka obsahuje od asi 1 do asi 500 mg, obvykleji asi 5 až asi 300 mg účinné složky. Nicméně je nutné si uvědomit, že podávanou terapeutickou dávku určí lékař na základě důležitých okolností vztahujících se ke stavu určenému k léčení, k výběru sloučeniny určené k podávání, k zvolenému způsobu podání, a proto výše uvedená rozmezí dávek rozsah vynálezu nijak neomezují. Výraz jednotková dávková forma se týká fyzikálně oddělených jednotek, vhodných pro jednotné dávkování lidským subjektům a dalším savcům, kde každá jednotka obsahuje předem stanovené množství účinné složky vypočtené pro dosažení požadovaného terapeutického účinku ve spojení s farmaceuticky vhodným nosičem.

Následující příklady těchto formulací jsou určeny pouze pro názornost a rozsah vynálezu tím nijak neomezují.

Formulace 1 • ·

- 30 Tvrdé želatinové tobolky se připraví s použitím následujících složek:

účinná složka škrob, sušený stearan hořečnatý celkem množství (mg/tobolka)

185

200 mg

Výše uvedené složky se smísí a rozplní se po 200 mg množstvích do tvrdých želatinových tobolek.

Formulace 2

Tableta se připraví s použitím následujících složek:

množství

	(mg/tobolka)
účinná složka	20
celulosa mikrokrystalická	400
oxid křemičitý, koloidní	10
kyselina stearová	5

celkem

435 mg

Složky se smísí a slisují do tvaru tablet o hmotnosti každé z nich 435 mg.

Formulace 3

Tablety, z nichž každá obsahuje 10 mg účinné látky připraví následujícím způsobem:
účinná složka	množství (mg/tobolka) 10 mg
škrob	45 mg
celulosa mikrokrystalická	35 mg
polyvinylpyrrolidon (10% roztok ve vodě)	4 mg
sodná sůl karboxymethylškrobu	4,5 mg
stearan hořečnatý	0,5 mg
talek	1 mg
celkem	100 mg

Účinná složka, škrob a celulosa se prošijí přes síto č.

mesh U.S. (rozměr částice 0,300 mm) a důkladně se promísí. Se získaným práškem se smísí roztok polyvinylpyrrolidonu a pak se práškovitá směs prošije přes síto č. 14 mesh U.S. (rozměr částice 1,168 mm). Tyto granule se pak suší při 50 °C a prošijí se přes síto č. 18 mesh U.S. (rozměr částice 0,900 mm). Ke granulím se pak přidá sodná sůl karboxymethylškrobu, stearan hořečnatý a talek, které byly předem prosety sítem č.

mesh U.S. (rozměr částice 0,246 mm), promísí se a směs se slisuje na tabletovacím lisu a získají se tablety o hmotnosti každé tablety 100 mg.

Formulace 4

Tobolky s obsahem 40 mg léčiva v jedné tobolce se připraví následujícícm způsobem:

• ·

	množství (mg/tobolka)
účinná složka	40 mg
škrob	59 mg
celulosa mikrokrystalická	59 mg
stearan hořečnatý	2 mg

celkem 200 mg

Účinná složka, celulosa, škrob a stearan horečnatý se smísí, prošijí se sítem č.45 mesh U.S. (rozměr částice 0,300 mm) a rozplní se po 200 mg do tvrdých želatinových tobolek.

Principy, výhodná provedení a způsoby provedení podle vynálezu jsou uvedeny v předcházejícím popisu. Není však myšleno, aby tento vynález určený k patentové ochraně byl omezen jen na tyto zvláštní formy, které je nutné pokládat spíše za ilustrativní než za restriktivní. Pracovníci v oboru mohou provádět variace a změny aniž by se odchýlili od podstaty vynálezu.

Claims

1. Sloučenina obecného vzorce:

kde

R·^ znamená Br, I nebo O-tosyl.

2. Sloučenina podle nároku 1, obecného vzorce:

3. Sloučenina podle nároku 1 nebo 2, kde R₁ znamená Br nebo I.

4. Farmaceutický přípravek, vyznačuj ící

9 9 9 «9 9999 • 9 999999··

9 9999999

9 9 99 99 99999

9 9 9 9 9 99

9999 999 *9 9999 tím, že obsahuje sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až

3 a jeden nebo více farmaceuticky přijatelných nosičů, ředidel nebo přísad.

5. Způsob přípravy aminosubstituovaného N,N'-přemostěného bisindolylmaleinimidu obecného vzorce:

kde

R₂ znamená -(CF₃)CH₃), -NH(CF₃), nebo -NR₃R₄, kde R₃ a R₄ nezávisle znamenají atom vodíku, C₁-C₄alkýl, fenyl, benzyl nebo se spojí s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, za vzniku nasyceného nebo nenasyceného 5- nebo 6-členného kruhu;

vyznačuj ícísetím , že zahrnuje reakci sloučeniny podle kteréhokoli z nároků 1 až 3 s aminem v nereaktivním polárním rozpouštědle.

6. Způsob podle nároku 5,vyznačuj ící se tím, že touto sloučeninou je • 4 ··

Ν'

N • ·· · ·· · ··· • · · • 4 • · · · a znamená Br nebo I.

7. Způsob podle nároku 6,vyznačující se tím, že uvedeným aminem je HN(CH₃)₂ nebo H₂N(CH₃).

8. Způsob přípravy N,N¹-přemostěného bisindolylmaleinimidu obecného vzorce V:

H N,

Ν'

Ν' vyznačující se sloučeniny obecného vzorce:

tím, že zahrnuje reakci

11. Způsob podle nároku 10,vyznačující se tím, že tento způsob se provede v přítomnosti (fenoxy)₃PBr₂.

12. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce V:

vyznačující se tím že zahrnuje:

(a) reakci sloučeniny vzorce lila:

OH (lila);

·· ·· · ·· ·· ·· • · · · ···· ···· • · · ··· ···· • · · · · · · · ··· · · • · ♦ ··· · · · ·· ···· «·· ·· ·· ·· s PX₃, (fenyl)₃PX₂, nebo (fenoxy)₃PX₂, kde X znamená brom nebo jod; za vzniku sloučeniny obecného vzorce Ha: (Ha) kde znamená Br nebo I; a (b) reakci sloučeniny obecného vzorce Ha s HN(CH₃)₂v nereaktivním polárním rozpouštědle.

13. Způsob podle nároku 12, vyznačující se tím, že R-l znamená Br.

14. Způsob podle nároku 13, vyznačující se tím, že dále zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce V s ch₃so₃h.

15. Ν,Ν'-Přemostěný bisindolylmaleinimid, kdykoli je připraven způsobem podle kteréhokoli z nároků 5 až 8 a 12 až 14.

16. Sloučenina kde

R-L znamená Br, která je připravena způsobem podle kteréhokoli z nároků

9 až 11.

17. Způsob přípravy N,N'-přemostěného bisindolylmaleinimidů, vyznačující se tím, že jev podstatě výše popsán v kterémkoli z příkladů.

18. N,N'-Přemostěný bisindolylmaleinimid jak je výše popsán v kterémkoli z příkladů.